ZENIT RA Scl-70
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1. Carregamento das amostras Identificar as amostras utilizando o leitor de c digo de barras e introduzi las no analisador na rea respectiva Em caso de falta do c digo de barras na amostra ou em caso de falha de leitura os dados de identifica o da amostra podem ser introduzidos manualmente Seleccionar os par metros requeridos para cada amostra Calibra o O Analisador ZENIT RA utiliza uma curva de calibra o memorizada master curve criada pelo fabricante para cada lote de cartuchos de reagentes Os par metros das master curve juntamente com os valores das concentra es dos calibradores est o memorizados no DATA DISK e s o transferidos para a base de dados do analisador Os calibradores A e B s o utilizados para recalibrar a master curve quer em fun o do analisador utilizado quer dos reagentes a bordo Para executar a recalibra o analisar os dois calibradores A e B em triplicado e realizar uma r plica por cada controlo Os valores de concentra o obtidos com os controlos permitem validar a nova calibra o Assim que a recalibra o da master curve tiver sido aceite e memorizada todas as amostras seguintes poder o ser analisadas sem outra calibra o excepto nos seguintes casos quando estiver carregado a bordo do analisador um cartucho de reagentes com um lote novo quando os valores dos controlos n o estiverem dentro do intervalo de aceitabilidade quando for execu2. Para avaliar as potenciais reac es cruzadas do antig nio utilizado para sensibilizar as part culas magn ticas foi conduzido um estudo com 13 amostras todas com n veis altos de outros auto anticorpos e negativos para anti Scl 70 IgG As amostras utilizadas estavam assim subdivididas dsADN 1 Cenp B 2 Histonas 1 Nucleolares 1 B2 GPI CL IgG 1 Gliadina t TG 3 RF 2 MPO 1 e PR3 1 O estudo n o demonstrou nenhuma reac o cruzada significativa do antig nio em fase s lida com os outros auto anticorpos Efeito de satura o em doses elevadas Alguns m todos imunol gicos empregues para a determina o de amostras que cont m o analito em concentra es extremamente elevadas podem fornecer n veis aparentes de analito que est o subestimados em rela o ao conte do real Efeito hook O m todo utilizado no kit ZENIT RA Scl 70 sendo um m todo com duas incuba es n o sofre esse efeito Uma amostra com concentra o extremamente elevada acima do intervalo de medi o de IgG anti Scl 70 confirmou a aus ncia de efeito hook at concentra o de 3010 UA mL IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 13 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 Sensibilidade e Especificidade Relativas A presen a de anticorpos anti Scl 70 IgG foi determinada utilizando o kit ZENIT RA Scl 70 e um m todo ELISA dispon vel no mercado em 422 amostras 2 amostras deram origem a resultados divergentes
3. 11 1996 7 Subcommittee for Scleroderma Criteria of the American Rheumatism Association Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee Preliminary criteria for the classification of systemic sclerosis scleroderma Arthritis Rheum 1980 23 581 90 IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 14 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 8 HJ Lakomek HH Guldner FA Bautz G Goerz P Kind M Mensing et al Nuclear antibodies as serologic markers in progressive systemic scleroderma Hautarzt 1987 38 63 9 9 CC Bunn CP Denton X Shi Wen C Knight CM Black Anti RNA polymerases and other autoantibody specificities in systemic sclerosis Br J Rheumatol 1998 37 15 20 10 D Vazquez Abad NF Rothfield Autoantibodies in systemic sclerosis Int Rev Immunol 1995 12 145 57 11 EC Le Roy T Krieg C Black TA Jr Medsger R Fleischmajer N Rowell et al Scleroderma Systemic Sclerosis classification subsets and pathogenesis J Rheumatol 1988 15 202 5 12 RL Humbel Auto immunit auto anticorps et maladie auto immunes In Humbel RL ed Autoanticorps et maladies autoimmunes Paris Elsevier 1997 pp 71 3 13 P D Arpa PS Machlin H Ratie NF Rothfield DW Cleveland WC Earnshaw cDNA cloning of human topoisomerase Catalytic activity of a 67 7 kDa carboxyl terminal fragment Proc Natl Acad Sci USA 1988 85 2543 7 14 P D Arpa H White Cooper DW Cleveland NF Rothfield WC Earnshaw Use of molec
4. de realiza o de cada DATA DISK novo Basta conservar o DATA DISK com o n mero de lote mais elevado para manter actualizadas as informa es necess rias para o funcionamento correcto do sistema Materiais e reagentes necess rios mas n o fornecidos no kit ZENIT RA Analyzer C d n 41400 ZENIT RA Cuvette Cube C d n 41402 Embalagem de 960 cuvetes ZENIT RA System Liquid C d n 41409 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 10x ZENIT RA Wash Solution C d n 41407 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 20x ZENIT RA Trigger Set e C d n 41403 1 frasco de 250 mL de Trigger A solu o de pr activa o 1 frasco de 250 mL de Trigger B solu o de pr activa o ZENIT RA D SORB Solution C d n 41436 Embalagem de 2 garrafas de 1 litro de solu o pronta a usar ZENIT RA Cartridge Checking System C d n 41401 ZENIT RA Top Cap Set C d n 41566 300 tampas externas para tapar os tubos dos calibradores ap s a primeira utiliza o O analisador ZENIT RA e os acess rios identificados pelo asterisco s o fabricados por Immunodiagnostic Systems S A Rue E Solvay 101 B 4000 Li ge B lgica e distribu dos por A Menarini Diagnostics Srl Outros Reagentes Aconselhados ZENIT RA ANA CONTROL SET C d n 41448 3 ampolas de 1 5 mL de soro humano negativo e 3 ampolas de 1 5 mL de soro humano positivo para anticorpos anti Scl 70 IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18
5. de refer ncia LIMITES DO ENSAIO Para efeitos de diagn stico os resultados obtidos com o kit ZENIT RA Scl 70 e o sistema ZENIT RA Analyzer devem ser utilizados em conjunto com os outros dados cl nicos e de laborat rio disposi o do m dico A contamina o bacteriana das amostras e a inactiva o por calor podem influenciar o resultado do ensaio Os anticorpos heter filos presentes nas amostras de soro humano podem reagir com os reagentes base de imunoglobulinas provocando interfer ncias nos ensaios imunol gicos in vitro Estas amostras podem dar origem a valores anormais se analisados com o kit ZENIT RA Scl 70 IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 10 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 VALORES PREVISTOS Foram analisadas as amostras de 100 dadores seleccionados casualmente para verificar a presen a de anticorpos IgG anti Scl 70 Todas as amostras analisadas deram resultados negativos com um valor m dio de 1 1 UA mL e um desvio padr o de 0 84 UA mL Com os resultados obtidos foi calculado o Limit of Blank LoB o valor mais elevado que podemos esperar numa s rie de amostras que n o contenham o analito O Limit of Blank determinado como percentil 95 da popula o negativa deu como resultado 3 7 UA mL com o Lote de reagentes 2 1 DESEMPENHO Advert ncia os dados apresentados n o representam as especifica es de funcionamento do kit mas constituem a evid
6. e 8 C ou a bordo da m quina Os calibradores depois de abertos poder o ser utilizados por 60 dias se conservados no frigor fico entre 2 e 8 C e se a perman ncia a bordo da m quina n o ultrapassar as 6 horas por sess o N o congelar os reagentes e os calibradores PREPARA O E CONSERVA O DAS AMOSTRAS O ensaio deve ser executado em amostras humanas de soro e de plasma EDTA Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas e turvas Se o ensaio for executado mais de 8 horas depois da colheita das amostras separar o soro do co gulo ou o plasma dos gl bulos vermelhos transferir o sobrenadante do tubo prim rio para um tubo secund rio seco Antes de serem analisadas as amostras podem ser conservadas no frigor fico entre 2 e 8 C no m ximo por 7 dias Se a dosagem for executada mais de 7 dias depois conservar as amostras congeladas lt 20 C Evitar congelamentos e descongelamentos repetidos PROCEDIMENTO Para obter desempenhos anal ticos v lidos respeitar escrupulosamente as instru es do manual de opera o do instrumento Carregamento dos reagentes Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar Antes de inserir o cartucho de reagentes no sistema o tubo das part culas magn ticas deve ser agitado por rota o horizontal de modo a facilitar a suspens o das part culas Executar a opera o evitando a forma o de espuma IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Jun
7. lgG humana marcado com um derivado do ster de acridina conjugado em tamp o fosfato com prote nas estabilizantes e azida de s dio lt 0 1 como conservante Solu o Diluente de Amostra tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO como conservantes Soro humano com baixa concentra o de anticorpos anti Scl 70 IgG em tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Soro humano com elevada concentra o de anticorpos anti Scl 70 IgG em tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Todos os reagentes est o prontos a usar Os reagentes 1 2 e 3 s o embalados em conjunto constituindo um cartucho de reagentes As concentra es dos calibradores s o indicadas em UA mL Unidades Arbitr rias e calibradas em rela o a um padr o de refer ncia interno Os valores das concentra es s o espec ficos para cada lote de produto e est o registados no DATA DISK inclu do no kit IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 3 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 DATA DISK Mini DVD que cont m as informa es relativas a todos os produtos da Linha ZENIT RA Reagentes Calibradores Soros de controlo actualizados at ao ltimo lote de produ o excep o dos produtos expirados na data
8. polipeptido de 765 AA localizado no nucleoplasma no nucl olo e nos cromossomas Na mol cula foram evidenciados pelo menos 6 ep topos imunodominantes 2 dos quais reconhecidos pela maior parte dos auto anticorpos presentes nos soros dos doentes Os anti Scl70 sao constituidos por IgG de todas as subclasses por IgA e com menos frequ ncia por IgM e est o presentes em 20 a 40 dos doentes com SSc A associa o entre dcSSc presen a de anti Scl70 e DRB1 11 representa um factor de risco elevado pelo esfor o pulmonar na doen a Os doentes com anti Scl70 apresentam um progn stico mais grave da doen a pela frequente associa o com insufici ncia card aca secund ria aos danos pulmonares A especificidade destes auto anticorpos pr xima dos 100 assumindo um papel fundamental no diagn stico de SSc PRINC PIO DO M TODO O kit ZENIT RA Scl 70 para a determina o quantitativa das IgG espec ficas anti Scl 70 utiliza um m todo imunol gico indirecto em dois passos baseado no princ pio da quimioluminesc ncia O antig nio espec fico utilizado para revestir as part culas magn ticas fase s lida e um anticorpo anti IgG humano este marcado com um derivado do ster de acridina conjugado Durante a primeira incuba o os anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores ou nos controlos ligam se fase s lida Durante a segunda incuba o o conjugado reage com os anticorpos a
9. vermelha que se encontra no topo do r tulo ficar coberta Fig 1 Tubo selado e Tubo perfurado Os calibradores e ou os controlos j utilizados dever o ser fechados com uma tampa externa branca de modo que a risca vermelha do r tulo fique coberta S devem ser carregados no instrumento os tubos sem tampa externa tampa branca e com a risca vermelha do r tulo coberta Fig 1 Tubo perfurado Introduzir no analisador os calibradores ou os controlos na rea das amostras depois da leitura do c digo de barras Os dados do c digo de barras tamb m podem ser introduzidos manualmente se o r tulo estiver estragado ou em caso de falha da leitura Os valores da concentra o de anticorpos IgG anti Scl 70 presente nos calibradores ou nos controlos est o registados no DATA DISK e s o transferidos automaticamente para o analisador Em caso de falha de transfer ncia dos dados poss vel introduzi los manualmente No final da sess o os recipientes dos calibradores e dos controlos devem ser fechados com as respectivas tampas externas tampas brancas e conservados entre 2 e 8 C at serem novamente utilizados Fig 1 Tubo fechado Os calibradores s podem ser utilizados ao m ximo quatro vezes IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 7 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 Figura 1 Desenho do tubo Tubo selado Tubo perfurado Tubo fechado I ae El E tY E
10. TADOS C lculo dos resultados A concentra o dos anticorpos IgG anti Scl 70 presentes nas amostras testadas calculada automaticamente pelo sistema Os valores podem ser visualizados no ecr ou impressos As concentra es s o expressas em UA mL O c lculo da concentra o na amostra efectuado atrav s da leitura do resultado obtido para cada amostra numa curva de calibra o elaborada com um sistema de fitting log stico de quatro par metros 4PL Y ponderado corrigida periodicamente em fun o dos resultados obtidos para os calibradores Para mais informa es sobre o sistema de c lculo dos resultados consultar o manual de instru es do sistema Interpreta o dos resultados O intervalo de medi o do ensaio ZENIT RA Scl 70 de 0 0 a 640 UA mL Os valores inferiores a 0 0 UA mL s o valores extrapolados e podem ser indicados como iguais a 0 0 UA mL Os valores superiores a 640 UA mL podem ser indicados como superiores a 640 UA mL ou a amostra deve ser testada novamente ap s dilui o Os resultados das amostras podem ser interpretados do seguinte modo UA mL Interpreta o lt 10 A amostra deve ser considerada Negativa pela presen a de IgG anti Scl 70 210 A amostra deve ser considerada Positiva pela presen a de IgG anti Scl 70 Os valores acima mencionados devem ser considerados como valores indicativos Cada laborat rio deve estabelecer os seus pr prios intervalos
11. ZENIT RA Scl 70 REF 41418 REF 41418 Distribu do por 2ENTT ZENIT RA Scl 70 AMENA a INSTRU ES RA ye CE UTILIZA O a 50 APLICA O O teste ZENIT RA Scl 70 um teste imunol gico quimioluminescente CLIA para a determina o quantitativa com instrumenta o dedicada Analisador ZENIT RA dos anticorpos espec ficos de classe IgG dirigidos contra o antig nio Scl 70 ADN topoisomerase em amostras de soro ou de plasma humano EDTA Este ensaio utilizado como t cnica de diagn stico suplementar na avalia o das doen as auto imunes sist micas reum ticas ATEN O Qualquer decis o m dica n o poder basear se unicamente no resultado deste teste mas dever incluir o conjunto de todos os dados cl nicos e laboratoriais dispon veis SIGNIFICADO CL NICO Os auto anticorpos anti antig nios nucleares extra veis ENA representam uma grande fam lia de auto anticorpos n o rg os e n o esp cies espec ficos cuja detec o de grande import ncia no diagn stico laboratorial das doen as auto imunes sist micas reum ticas 23 As doen as auto imunes sist micas caracterizam se do ponto de vista laboratorial pela presen a de auto anticorpos anti n cleo ANA Os ANA s o o primeiro teste auto anticorpos a pedir para o doente com suspeita de patologia auto imune sist mica Em geral a pesquisa dos ANA executa se com o m todo de imunofluoresc ncia indire
12. cta IFI numa camada nica de c lulas HEp 2 a positividade por ANA em IFI indica a presen a de auto anticorpos dirigidos contra diferentes antig nios nucleares ADN histonas prote nas n o hist nicas antig nios nucleolares etc ou citoplasm ticos A positividade dos ANA a t tulo significativo deve ser aprofundada com a pesquisa dos auto anticorpos anti ENA e anti dsADN A verifica o de positividade dos ANA e de uma ou mais especificidades para anti ENA e ou para anti dsADN extremamente sugestiva de patologias auto imunes sist micas l pus eritematoso sist mico LES s ndroma de Sjogren SS esclerose sist mica progressiva SSp dermatomiosite polimiosite DM PM e doen a mista do tecido conectivo MCTD Os anticorpos anti topoisomerase ou anti Scl70 representam juntamente aos anti centr mero ACA e aos anti RNA polim rase III RNAP os auto anticorpos detectados com maior frequ ncia no soro de doentes com esclerose sist mica SSc A SSc diferencia se em forma localizada e em forma sist mica a forma sist mica pode por sua vez distinguir se em forma limitada IcSSc e em forma difusa dcSSc Os anticorpos anti Scl70 s o os associados com maior frequ ncia com a dcSSc IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 1 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 A topoisomerase uma enzima cuja fun o a de modificar a superstrutura do ADN nativo A topoisomerase um
13. de Junho de 2010 P gina 4 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 ADVERT NCIAS E PRECAU ES Os reagentes fornecidos no kit ZENIT RA Scl 70 s o exclusivamente para uso em diagn stico in vitro e n o para uso in vivo em pessoas ou animais Este produto deve ser usado por utilizadores profissionais respeitando rigorosamente as instru es deste documento A Menarini n o pode ser considerada respons vel por perdas ou danos provocados por uma utiliza o diferente da indicada nas instru es fornecidas Precau es de seguran a Este produto cont m material de origem animal e portanto deve ser manuseado como potenciais agentes infecciosos Este produto cont m componentes de origem humana Todas as unidades de soro ou plasma utilizadas para o fabrico dos componentes deste Kit foram analisadas com m todos aprovados pela FDA e resultaram n o reactivas para HBsAg anti HCV anti HIV1 e anti HIV2 Todavia como nenhum m todo de an lise capaz de garantir a aus ncia de agentes patog nicos todo o material de origem humana deve ser considerado potencialmente infeccioso e manuseado como tal Se a embalagem estiver estragada com derramamento dos reagentes descontaminar a rea afectada com uma solu o dilu da de Hipoclorito de S dio utilizando dispositivos de protec o individual adequados bata luvas culos Eliminar o material utilizado e os res duos da embalagem afectada pelo derramamento de acordo com as no
14. entre o ensaio ZENIT RA e o m todo ELISA dispon vel no mercado Concord ncia relativa 99 5 420 422 Sensibilidade relativa 100 0 23 23 Especificidade relativa 99 5 397 399 Soro de refer ncia A quantidade de anticorpos anti Scl 70 IgG presentes na amostra ANA HUMAN REFERENCE SERUM 9 CDC Cat n 1S2135 Lote n 84 0027 medida com o kit ZENIT RA Scl 70 foi de 405 UA mL BIBLIOGRAFIA 1 CA von M hlen EM Tan Autoantibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases Sem Arthr Rheum 1995 24 323 58 2 RL Humbel Auto immunit auto anticorps et maladie In Humbel RL ed Autoanticorps et maladies autoimmunes Paris France Edition Scientifiques Elsevier 1997 17 20 3 PN Hollingsworth SC Pummer RL Dawkins Antinuclear antibodies In Peter JB Shoenfeld Y eds Autoantibodies Amsterdam The Netherlands Elsevier Science BV 1996 74 90 4 CA Slater RB Davis RH Shmerling Antinuclear antibodies testing A study of clinical utility Arch Int Med 1996 156 1421 5 5 RL Humbel Detection of antinuclear antibodies by immunofluorescence In van Venrooij Maini RN eds Manual of biological markers of disease Dordrecht the Netherlands Kluwer 1993 A2 1 16 6 National Committee for clinical Laboratory Standarditation Quality assurance for the indirect immunofluorescence test for autoantibodies to nuclear antigen IF ANA Approved guideline Wayne PA NCCLS I LA2 A vol 16
15. ho de 2010 P gina 6 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 Colocar o cartucho de reagentes na rea dos reagentes do analisador utilizando as indica es para o efeito e deixar em agita o durante pelo menos 30 minutos antes de usar A coloca o do cartucho de reagentes determina simultaneamente a leitura do c digo de barras de identifica o Se o r tulo do cartucho estiver estragado ou que a leitura falte por qualquer outro motivo os dados de identifica o do cartucho de reagentes podem ser introduzidos manualmente O analisador mant m automaticamente as part culas magn ticas em agita o cont nua Se o cartucho de reagentes for retirado do analisador deve ser conservado na vertical e s escuras entre 2 e 8 C Carregamento dos calibradores e dos controlos Os calibradores e os controlos ZENIT RA est o prontos a usar Deixar os calibradores e os controlos temperatura ambiente durante 10 minutos e agitar cuidadosamente manualmente ou com um vortex evitando a forma o de espuma N o inverter o tubo e n o retirar a tampa perfuradora tampa amarela para os calibradores e tampas verdes ou azuis para os controlos No caso em que os calibradores ou os controlos sejam utilizados pela primeira vez premir a tampa perfuradora para baixo at ao fim Deste modo a membrana que veda o tubo ser perfurada tornando assim poss vel o acesso ao l quido contido no mesmo Se a tampa perfuradora for utilizada correctamente a risca
16. linical and Laboratory Standards Institute CLSI e a f rmula para o c lculo LoD LoB Cg SDs onde LoB representa o valor do Limit of Blank SDs IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 12 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 o desvio padr o previsto para a distribui o da amostra com mais baixa concentra o e Cg deriva do percentil 95 da distribui o padr o de Gauss Foram utilizadas 4 amostras de baixa concentra o de analito determinadas uma s vez com dois Lotes de reagentes diferentes em 30 sess es diferentes O Limite de detec o do kit ZENIT RA Scl 70 foi igual a 5 0 UA mL Os valores do limite de detec o juntamente com as considera es de car cter cl nico e com os resultados de compara o com m todos de refer ncia contribu ram para a defini o do valor de cut off Especificidade Anal tica Interfer ncias Um estudo baseado nas directrizes do documento EP7 A2 do CLSI demonstrou que o desempenho do ensaio n o influenciado pela presen a na amostra de subst ncias potencialmente interferentes indicadas na tabela seguinte at concentra o testada Subst ncias Potencialmente Concentra o m xima testada Interferentes Bilirrubina livre 20 mg dL Bilirrubina conjugada 28 mg dL Hemoglobina 1000 mg dL cidos gordos 3000 mg dL Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas ou turvas Especificidade anal tica Reac es cruzadas
17. ncia experimental em como o kit funciona dentro dessas especifica es no modo previsto pelo fabricante Precis o e Reprodutibilidade A precis o e a reprodutibilidade do kit ZENIT RA Scl 70 foram avaliadas utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP5 A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI A precis o foi calculada analisando os resultados de quatro soros com 20 repeti es cada um negativo e tr s positivos com diferentes concentra es de anti Scl 70 IgG executados com dois lotes de reagentes diferentes na mesma sess o experimental A concentra o do soro anti Scl 70 IgG negativo NC deu um resultado compreendido no intervalo de 0 0 a 0 6 UA mL e de 0 2 a 0 8 UA mL respectivamente com o Lote de reagentes 1e22 Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 3 soros positivos Reagentes Concentra o o Amostra Lote n m dia UA mL SD CV eo T 180 052 29 2 16 4 0 57 3 5 w ls fo T 70 330 t5 2 77 2 7 34 9 5 HP ae Mere A oe 222 2 909 AM 2 231 5 8 00 3 5 A reprodutibilidade foi calculada analisando os resultados da determina o de quatro soros um negativo e tr s positivos com diferentes concentra es de anti Scl 70 IgG executada individualmente com dois lotes de reagentes diferentes em 30 sess es diferentes IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 11 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 A concen
18. nti Scl 70 IgG capturados pela fase s lida Depois de cada incuba o o material n o aderido fase s lida removido por aspira o e subsequente lavagem A quantidade de conjugado marcado que ficou aderido fase s lida avaliada atrav s da reac o de quimioluminesc ncia e da medi o do sinal luminoso O sinal gerado expresso em unidades relativas de luz RLU Relative Light Unit indicativo da concentra o de anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores e nos controlos AUTOMATIZA O O Analisador ZENIT RA executa automaticamente todas as opera es previstas pelo protocolo do ensaio adi o na cuvete de reac o as amostras calibradores controlos part culas magn ticas conjugado e solu es de activa o de quimioluminesc ncia separa o magn tica e lavagem das part culas medi o da luz emitida O sistema calcula os resultados do ensaio para as amostras e para os controlos atrav s da curva de calibra o memorizada e imprime um relat rio que inclui todas as informa es relativas ao ensaio e ao doente IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 2 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 MATERIAIS E REAGENTES Materiais e reagentes fornecidos Part culas magn ticas revestidas com antig nio Scl 70 em tamp o fosfato com prote nas estabilizantes Pro Clin 300 e azida de s dio lt 0 1 como conservantes Anticorpo monoclonal de rato anti
19. ra es As amostras com valores de concentra o mais elevados do limite superior do intervalo de medi o podem ser dilu das e testada novamente O novo valor obtido multiplicado pelo factor de dilui o utilizado para obter o resultado final CONTROLO DE QUALIDADE Para assegurar a validade do ensaio devem ser testados soros de controlo com n veis diferentes de concentra o pelo menos um soro negativo e um soro positivo cada dia em que se executa o ensaio De acordo com as pr ticas de qualidade de cada laborat rio para a verifica o dos resultados do ensaio podem ser realizados mais controlos ou mais frequentemente Siga os procedimentos de qualidade locais Se forem utilizados os soros de controlo ZENIT RA os valores m dios esperados e os limites de aceitabilidade s o os indicados no DATA DISK dados tamb m presentes na embalagem dos controlos Se forem utilizados soros de controlo diferentes necess rio antes da sua utiliza o definir os valores esperados com os reagentes e com o sistema ZENIT RA Se o valor dos controlos n o estiver dentro do intervalo de aceitabilidade especificado os respectivos resultados do ensaio s o inv lidos e essas amostras devem ser analisadas novamente Neste caso necess rio executar uma recalibra o antes da repeti o do ensaio IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 9 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 C LCULO E INTERPRETA O DOS RESUL
20. rmas nacionais para a elimina o de lixos potencialmente infecciosos Alguns reagentes cont m azida de s dio como conservante Como a azida de s dio pode reagir com o chumbo cobre e lat o revestido de chumbo formando azidas explosivas nos canos aconselha se a n o deitar reagentes ou res duos no esgoto mas respeitar as normas nacionais em mat ria de elimina o de lixos potencialmente perigosos Precau es de utiliza o Para assegurar a obten o de resultados v lidos devem ser rigorosamente respeitadas estas instru es de utiliza o e as indica es do manual de opera o do instrumento Os reagentes fornecidos no kit devem ser utilizados exclusivamente com o sistema ZENIT RA Analyzer Os componentes do cartucho de reagentes n o podem ser retirados do cartucho e reagrupados novamente N o usar o kit para al m do prazo de validade IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 5 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 PREPARA O DOS REAGENTES Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Conservar os reagentes fornecidos no kit entre 2 e 8 C em posi o vertical e s escuras Nestas condi es o cartucho de reagente e os calibradores que n o tiverem sido abertos estar o est veis at ao fim do prazo de validade O cartucho de reagentes depois de aberto poder ser utilizado por 60 dias se conservado no frigor fico entre 2
21. tada a opera o de manuten o do analisador quando tiver expirado a validade da master curve recalibrada O prazo de validade da master curve recalibrada para o kit ZENIT RA Scl 70 de 15 dias A gest o da recalibra o accionada automaticamente pelo analisador IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 8 de 15 ZENIT RA Scl 70 REF 41418 Ensaio Premir o bot o de in cio 1 O sistema aspira 80 uL de Diluente de Amostra 40 uL de Part culas Magn ticas 100 uL de Diluente de Amostra e 4 uL de amostra ou controlo para os calibradores o soro positivo fornecido pr diluido com o Diluente de Amostra e o volume aspirado de 104 uL As solu es e a suspens o aspiradas s o distribu das na cuvete de reac o A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos Depois desta fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas S o distribu dos 200 uL de conjugado na cuvete A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos Pak WN Depois desta ltima fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas e a cuvete transferida para a c mara de leitura 7 A quantidade de conjugado aderido fase s lida expressa em RLU directamente proporcional concentra o de IgG anti Scl 70 presente na amostra 8 Os resultados obtidos s o interpolados na curva de calibra o e expressos em concent
22. tra o do soro anti Scl 70 IgG negativo N1 deu um resultado dentro do intervalo de 0 0 a 0 6 UA mL Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 3 soros positivos Amostra OA SD CV LP 17 4 1 06 6 1 MP 77 9 5 57 7 2 HP 211 6 18 44 8 7 Linearidade das Dilui es A linearidade das dilui es do kit ZENIT RA Scl 70 foi avaliada utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP6 A do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Foram testadas dilui es seriadas de 2 soros de concentra o elevada de IgG anti Scl 70 executadas com o Diluente de Amostra Os resultados deste estudo est o resumidos na tabela seguinte Concentra o Concentra o x Factor de 3 Recupera o Amostra dilui o medida prevista o e UA mL UA mL p 1 197 7 100 1 8 22 6 24 7 2 Torna se necess rio sublinhar que nem todos os soros quando medidos em dilui es diferentes podem dar resultados lineares dentro do intervalo de medi o dependendo o resultado n o s da concentra o mas tamb m da afinidade dos anticorpos presentes na amostra Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica do kit ZENIT RA Scl 70 expressa como limite de detec o Limit of Detection LoD ou seja a menor quantidade de analito que o m todo capaz de medir foi determinada utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP17 A do C
23. ular cloning methods to map the distribution of epitopes on topoisomerase Scl 70 recognized by sera of scleroderma patients Arthritis Rheum 1990 33 1501 11 15 C Bona N Rothfield Autoantibodies in scleroderma and tightskin mice Curr Opin immunol 1994 6 931 7 16 D Vazquez Abad CA Russell SM Cusick WC Earnshaw NF Rothfield Longitudinal study of anticentromere and antitopoisomerase isotypes Clin Immunol Immunopathol 1995 74 257 70 17 GC Fanning KI Welsh C Bunn A Du Bois CM Block HLA association in three mutually exclusive autoantibody subgroups in UK systemic sclerosis patients Br J Rheumatl 1998 37 201 7 18 D Basu JD Reveille Anti Scl 70 Autoimmunity 2005 38 65 72 TECHNOGENETICS S r l Viale Casiraghi 471 20099 Sesto San Giovanni MI It lia Distribuido por A Menarini Diagnosticos Lda Quinta da Fonte Edif cio D Manuel 2 B 2770 203 Pago de Arcos Tel 351 210 93 00 00 Fax 351 210 93 00 01 www menarinidiag pt IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 15 de 15
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