QUANTA FlashTM h-tTG IgA - Annar Diagnóstica Import
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1. c Siga las instrucciones de la ventana que se abrir Add Triggers Add Trigger 2 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco Haga clic en Next d Siga las instrucciones de la ventana Add Triggers Add Trigger 1 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo Haga clic en Finish Vuelva a colocar el caj n de residuos y ci rrelo Para sustituir el recipiente de l quido de lavado del sistema haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 en la esquina superior derecha En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Sys Rinse En la ventana que se abrir Add System Rinse Remove bottles haga clic en Next Siga las instrucciones de la nueva ventana que se abrir Add System Rinse Add bottle Una vez aceptado el c digo de barras haga clic en Finish si es necesario Para vaciar el recipiente de residuos l quidos en la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Fluid Waste Extraiga el residuo l quido y elim nelo Haga clic en Next Una vez sustituido el frasco vac o haga clic en Finish M todo Preparaci n del cartucho de reactivos La primera vez que se utilice el cartucho de reactivos deben seguirse los pasos indicados a continuaci n para instalarlo adecuadamente en el instrumento BIO FLASH Nota No utilice el cartucho de reactivos si presenta cualquier signo de da o 1 Coloque e2. 5 1a7 8 1 37 de 0 70 a 2 05 2 80 de 7 08 a 1 49 0 93 6 De 16 0 a 468 0 1 03 de 1 00 a 1 07 12 70 21 90 a 3 50 1 00 7 De 857 0 a 3 407 0 1 23 de 0 98 a 1 48 880 6 de 1 418 2 a 280 0 0 96 QUANTA Flash h tTG IgG 701106 Calibrators Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los calibradores QUANTA Flash h tTG IgG est n destinados a utilizarse con el inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash h tTG IgG en el instrumento BIO FLASH Cada calibrador establece un punto de referencia para la curva de trabajo utilizada en la determinaci n de los valores de las unidades de quimioluminiscencia CU para la medici n de anticuerpos IgG anti h tTG en suero Resumen y principios del procedimiento El CIA QUANTA Flash h tTG IgG emplea una curva maestra predefinida espec fica de cada lote que se guarda en el c digo de barras del cartucho de reactivos Los calibradores QUANTA Flash h tTG IgG est n dise ados para generar una curva de trabajo espec fica para el instrumento a partir de los par metros de la curva maestra con un punto de decisi n basado en las caracter sticas operativas y en la evaluaci n cl nica del CIA QUANTA Flash h tTG IgG Los calibradores se analizan en varios instrumentos con diversos lotes de reactivos antes de efectuar la asignaci n de valores Reactivos 1 Calibrador QUANTA Flash h tTG IgG 1 Dos 2 tubos etiquetados con c digo de barras que contienen 0 3 mL de rea
3. A continuaci n seleccione el material de control apropiado a la derecha TTGGN para el control negativo o bien TTGGP para el control positivo Haga clic en el bot n New QC Lot 3 Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote Introduzca la informaci n de esta hoja de datos en el software Dicha informaci n debe comprender el n mero de lote la caducidad la dosis objetivo y la DE objetivo Si es necesario haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir compruebe que est marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo h tTG IgG en la lista y haga clic en Add Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Se recomienda utilizar los controles QUANTA Flash h tTG IgG una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local Cada control debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los tubos de ambos controles y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en el carrusel de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del contr
4. Flash h tTG IgG 3 No transfiera los reactivos de los controles a otros tubos El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para identificar al control 4 Cada tubo de control una vez abierto es v lido para 15 usos como m ximo y en cada uso puede permanecer una media de 10 minutos cargado en el instrumento hasta un total de 2 5 horas 5 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los controles no abiertos entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado 2 Los controles est n dise ados para 15 usos permaneciendo una media de 10 minutos cargados en el instrumento en cada uso El tiempo total durante el que los tubos del control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas Si los controles cargados en el instrumento se dejan destapados durante m s de 2 5 horas en total deben desecharse 3 Para conseguir una estabilidad ptima retire los controles del sistema inmediatamente despu s de tomar las mue
5. QUANTA Flash h tTG IgG se ha evaluado analizando 7 pacientes seg n el documento EP5 A2 del CLSI la tabla siguiente resume los datos obtenidos Intraensayo Interensayo Interd a Total Muestra N Media CU DE CV DE CV DE CV DE CV PtA 88 781 6 26 9 3 4 21 6 2 8 449 5 7 56 7 7 2 PtB 88 46 7 1 7 3 5 1 5 3 3 2 7 5 9 3 5 7 6 PtC 88 21 0 0 7 3 3 0 8 4 0 1 1 5 1 1 5 7 2 PtD 88 25 0 0 8 3 3 1 0 4 1 1 3 5 3 1 9 7 4 PtE 88 34 0 1 1 3 1 1 8 5 4 2 0 5 9 2 9 8 6 PtF 88 20 6 0 8 3 9 0 6 2 8 1 2 5 7 15 7 4 PtG 88 13 8 0 6 4 1 0 4 2 8 0 6 4 2 0 9 6 6 Rango de medici n anal tica l mites y linealidad El l mite inferior de detecci n de este ensayo determinado seg n el documento EP17 A del CLSI es de 582 RLU que se encuentra muy por debajo del m nimo del AMR 3 8 CU El AMR completo que va de 3 8 CU a 2 560 0 CU es lineal Se ha realizado un estudio de linealidad siguiendo el documento EP6 A del CLSI y los datos obtenidos son los siguientes Muestra Rango anal tico Pendiente Intersecci n en Y CU IC del 95 IC del 95 R2 1 De 8 5 a 286 6 1 02 de 0 97 a 1 07 2 2 de 5 19 a 9 58 0 99 2 De 10 0 a 191 7 1 12 de 1 02 a 1 22 2 63 de 12 05 a 6 80 0 98 3 De 54 5 a 1 624 8 1 05 de 0 99 a 1 10 6 40 de 52 19 a 39 41 0 99 4 De 6 2 a 40 3 1 09 de 0 97 a 1 22 1 25 de 4 14 a 1 63 0 98 5 De
6. celiaqu a y 50 sin celiaqu a 23 muestras cel acas adicionales extra das de la biblioteca de sueros de INOVA y 7 con celiaqu a conocida con deficiencia selectiva de IgA Estas muestras se analizaron mediante el CIA QUANTA Flash h tTG IgG Los resultados del an lisis son los siguientes gt Diagn stico Sensibilidad y especificidad ld Celiaqu a a Total confianza del 95 QUANTA Positivo 24 4 28 Sensibilidad 50 0 35 2 64 8 Flash Negativo 24 316 340 Especificidad 98 4 96 4 99 5 h tTG IgG CIA Total 48 320 368 Tres pacientes proced an de un grupo de donantes de sangre normales dos de ellos tambi n dieron positivo en los ELISA tTG IgA y DGP IgG A El cuarto paciente fue positivo para anticuerpos IgA contra H pylori Doce pacientes fueron tambi n negativos en el ELISA tTG IgG y 1 fue positivo bajo mientras que los 11 pacientes restantes no se analizaron mediante ELISA En la tabla siguiente se muestran los resultados de los 7 pacientes con celiaqu a y deficiencia selectiva de IgA Celiaqu a con deficiencia de Diagn stico alos IgA Sin An lisis aqu confianza del 95 N 7 Celiaqu a celiaqu a tal confianz QUANTA Flash Positivo gt 0 Sensibilidad 85 7 42 1 99 6 htTG igGCIA Negativo o Total 7 0 7 Esta muestra fue positivo bajo en el ELISA lgG tTG Precisi n y reproducibilidad La precisi n del ensayo
7. del tubo y desecharla 4 Retire el adhesivo de la parte superior del cartucho de reactivos para descubrir los otros tres orificios 5 Coloque el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carrusel de reactivos del instrumento BIO FLASH Calibraci n del ensayo il Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Consulte el apartado QUANTA Flash h tTG IgG Calibrators 701106 del presente documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo calibrar el cartucho de reactivos 3 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Programaci n y an lisis de las muestras 1 Pulse el bot n Worklist de la parte superior de la pantalla y seleccione la pesta a Racks de la parte inferior 2 Seleccione la gradilla de muestras que se utilizar marc ndola en la pantalla o escaneando su c digo de barras con el lector manual de c digos de barras Escanee o escriba el nombre de la muestra indique el tipo de muestra elija el tipo de recipiente tubo copa y seleccione h_tTG_lgG en el panel del ensayo Repita estos pasos para todas las muestras 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y coloque la gradilla en el carrusel de muestras del instrumento 4 Cuando todos los materiales ne
8. en la muestra del paciente Los aumentos y disminuciones de la concentraci n de autoanticuerpos de los pacientes se reflejar n en un correspondiente aumento o disminuci n del valor de CU que es proporcional a la cantidad de anticuerpo El rango de medici n anal tica AMR del ensayo determinado por los puntos m nimo y m ximo de la curva maestra va de 3 75 CU a 2 560 0 CU que corresponde al rango lineal del ensayo Si el resultado de un paciente es inferior a 3 75 CU el sistema BIO FLASH indicar lt 3 8 CU Dado que es un valor inferior a 20 CU el resultado se considera negativo Si el resultado de un paciente es superior a 2 560 0 CU el sistema BIO FLASH lo indicar como gt 2 560 0 CU Este valor se considera un resultado positivo El software BIO FLASH dispone de una opci n denominada Auto Rerun rean lisis autom tico Cuando esta opci n est seleccionada el instrumento volver a 6 analizar autom ticamente todas las muestras cuyo resultado sea gt 2 560 0 CU despu s de efectuar una diluci n adicional en un factor de 10 para que el valor medido se encuentre dentro del AMR El software calcular el resultado final teniendo en cuenta el factor de diluci n adicional aplicado Dado que el m ximo valor que puede medirse es 2 560 0 CU el valor m s alto que puede notificarse es 25 600 CU Interpretaci n de los resultados Se aconseja que cada laboratorio verifique el intervalo de referencia indicado
9. h tTG IgG Reactivos 1 Control negativo QUANTA Flash h tTG IgG Dos 2 tubos etiquetados con c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos humanos anti h tTG con estabilizantes y conservantes 2 Control positivo QUANTA Flash h tTG IgG Dos 2 tubos etiquetados con c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos humanos anti h tTG con estabilizantes y conservantes Advertencias 1 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha dado un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos contra el VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los controles QUANTA Flash h tTG IgG deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 2 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 3 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Los controles QUANTA Flash h tTG IgG est n destinados a utilizarse con el ensayo QUANTA
10. muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en el carrusel de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del calibrador e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de uso detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH 3 El instrumento analizar cada calibrador por triplicado Una vez analizados los calibradores el software solicitar la validaci n de la calibraci n En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M V Seleccione Calibration Ctrl F3 En la ventana de calibraci n marque el ensayo deseado y haga clic en Details 4 En la ventana que se abrir Calibration Details seleccione la calibraci n que acaba de efectuar La curva maestra se visualizar como una l nea discontinua y la nueva curva de trabajo como una l nea continua Si los resultados de la calibraci n son v lidos en la parte inferior izquierda de la pantalla aparecer un bot n de validaci n Haga clic en el bot n Validate Calibration 5 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Se recomienda analizar los
11. por el fabricante y si lo considera necesario establezca su propio intervalo normal a partir de sus propios controles y su poblaci n de pacientes de acuerdo con sus procedimientos particulares Es recomendable que los resultados comunicados por el laboratorio incluyan la informaci n siguiente Los siguientes resultados se han obtenido mediante el inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA FLASH h tTG IgG de INOVA Es posible que los valores obtenidos con m todos de ensayo de otros fabricantes no sean intercambiables con dichos resultados Limitaciones del procedimiento 1 No todos los pacientes con celiaqu a o dermatitis herpetiforme presentan un resultado positivo con respecto a los autoanticuerpos IgG anti h tTG Los resultados de este an lisis deben utilizarse junto con datos cl nicos y otras pruebas serol gicas 2 Los resultados de este ensayo deben utilizarse junto con los datos cl nicos y otras pruebas serol gicas 3 Si la resuspensi n de las part culas recubiertas de h tTG no se efect a de un modo adecuado pueden obtenerse resultados inferiores en comparaci n con los an lisis que han tenido una resuspensi n adecuada 4 Las caracter sticas de funcionamiento de este ensayo no se han establecido para matrices de muestras distintas del suero Valores esperados El punto de corte del ensayo se ha determinado analizando 446 muestras caracterizadas cl nicamente extracciones simples en pacientes con un diagn
12. H 1 Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BlO FLASH para obtener instrucciones de uso detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Para obtener m s informaci n o solucionar problemas relativos a este ensayo p ngase en contacto con el servicio t cnico de INOVA Diagnostics Inc en la direcci n o n mero de tel fono indicados al final de estas instrucciones de uso Para vaciar el recipiente de residuos s lidos abra el caj n de residuos Retire el recipiente de residuos s lidos y desh gase apropiadamente de las cubetas usadas Vuelva a colocar el recipiente de residuos s lidos cierre el caj n de residuos y haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Para sustituir los iniciadores haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 de la parte superior derecha a En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Triggers situado a la izquierda Se abrir la ventana Add Triggers Remove old bottles b Abra el caj n de residuos del instrumento BIlO FLASH y extr igalo Tire todas las cubetas del caj n de residuos secos Haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Retire los frascos del iniciador de sus soportes y haga clic en el bot n Next Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustit yalos por nuevos iniciadores Realice la operaci n frasco a frasco y respete el c digo de color de los tapones blanco blanco rojo rojo
13. QUANTA Flash h tTG IgG 701108 Reagents Para uso diagn stico n Vitro Uso previsto El QUANTA Flash h tTG IgG es un inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA para la detecci n semicuantitativa de anticuerpos IgG anti transglutaminasa tisular humana h tTG en suero humano La presencia de anticuerpos IgG anti h tTG en combinaci n con resultados cl nicos y otros an lisis de laboratorio puede servir de ayuda para el diagn stico de la enteropat a de la enfermedad cel aca por sensibilidad al gluten en especial en pacientes con deficiencia selectiva de IgA Resumen y explicaci n de la prueba La celiaqu a CD es una enfermedad cr nica cuyas caracter sticas principales son inflamaci n y un t pico aplanamiento de la mucosa intestinal que provoca un s ndrome de malabsorci n denominado enteropat a por sensibilidad al gluten Aunque la etiolog a exacta de la celiaqu a es a n desconocida la gliadina la fracci n soluble en alcohol del gluten del trigo es claramente el agente t xico Inicialmente se utilizaban una serie de biopsias intestinales para diagnosticar la enfermedad cel aca M s recientemente se ha propuesto el an lisis serol gico de anticuerpos anti gliadina anti endomisio y anti tTG para identificar a los pacientes con posible enteropat a por sensibilidad al gluten y supervisar el cumplimiento de las dietas La Sociedad Europea de Gastroenterolog a Pedi trica y Nutrici n ha recomendado el us
14. a muestra de suero No deben utilizarse muestras que est n contaminadas con microorganismos que hayan recibido un tratamiento a base de calor o que contengan part culas visibles No debe utilizarse suero lip mico ict rico o muy hemolizado Tras la recogida el suero debe separarse del co gulo El documento H18 A4 del CLSI recomienda las siguientes condiciones de almacenamiento de muestras 1 No guarde las muestras a temperatura ambiente durante m s de 8 horas 2 Si el an lisis no se efect a en un plazo de 8 horas refrigere las muestras a una temperatura de2a8 C 3 Si el an lisis no va a realizarse en un plazo de 48 horas o si las muestras deben prepararse para ser enviadas cong lelas a una temperatura de 20 C o inferior Las muestras congeladas deben mezclarse bien despu s de descongelarse y antes del an lisis Procedimiento Materiales suministrados 1 Cartucho de reactivos QUANTA Flash h tTG IgG 1 Tamp n de resuspensi n 1 Pipeta de transferencia Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO FLASH con ordenador para manejarlo L quido de lavado del sistema BlO FLASH n mero de componente 3000 8205 Iniciadores BIO FLASH n mero de componente 3000 8204 Cubetas BIO FLASH n mero de componente 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash h tTG IgG n mero de componente 701106 Controles QUANTA Flash h tTG IgG n mero de componente 701107 Uso del analizador por quimioluminiscencia BlO FLAS
15. anti endomysial antibodies 100 positive predictive value for celiac disease in adults Digestive Diseases and Science 1996 41 83 87 Walker Smith JA Guandalini S Schmitz J Shmerling DH Visakorpi JK Revised criteria for diagnosis of celiac disease Report of working group of European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition ESPGAN Arch Diseases of Childhood 1990 65 909 911 Dieterich W Ehnis T Bauer M Donner P Volta U Riecken EO Schuppan D Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease Nature Medicine 1997 3 797 801 S rdy M Odenthal U K rp ti S Paulsson M Smyth N Recombinant human tissue transglutaminase ELISA for the diagnosis of gluten sensitive enteropathy Clin Chem 1999 45 2142 2149 Sblattero D Berti I Trevisiol C Marzari R Tommasini A Bradbury A Fasano A Ventura A Not T Human recombinant tissue transglutaminase ELISA an innovative diagnostic assay for celiac disease Am J Gastroenterology 2000 95 1253 1257 Villalta D Alessio MG Tampoia M Tonutti E Brusca l Bagnasco M Pesce G Bizzaro N Diagnostic accuracy of IgA anti tissue transglutaminase antibody assays in Celiac disease patients with selective IgA deficiency Ann NY Acad Sci 2007 1109 212 220 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL 5 edici n Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 2007 S mbolos utilizados Producto
16. cesarios est n cargados en el instrumento el icono de inicio pasar a estar disponible en color verde en la parte superior de la pantalla Pulse el icono Start F4 para comenzar el an lisis Control de calidad Los controles QUANTA Flash h tTG IgG vendidos por separado n mero de producto de INOVA 701107 contienen los controles positivos y negativos del h tTG IgG Consulte el apartado QUANTA Flash h tTG IgG Controls 701107 de este documento para obtener instrucciones detalladas sobre c mo introducir en el software todos los datos necesarios de cada control y c mo analizar los controles Se recomienda analizar los controles una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local C lculo de los resultados Para cada nuevo lote del QUANTA Flash h tTG IgG INOVA genera una curva maestra de cinco puntos Los par metros de esta curva se codifican mediante el c digo de barras de cada cartucho de reactivos Durante la calibraci n a partir de la curva maestra se crea una curva de trabajo espec fica del instrumento que se utiliza para convertir las RLU en CU La reactividad del anticuerpo IgG ante la h tTG puede entonces clasificarse seg n la tabla siguiente Reactividad CU Negativa lt 20 Positiva d bil 20 30 Positiva gt 30 La reactividad expresada en CU est directamente relacionada con la valoraci n de los autoanticuerpos presentes
17. controles QUANTA Flash h tTG IgG vendidos por separado n mero de producto 701107 tras calibrar un lote de cartuchos de reactivos Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la medici n de anticuerpos IgG contra la transglutaminasa tisular humana Limitaciones Estos calibradores est n dise ados para realizar 4 calibraciones El tiempo m ximo durante el que los tubos del calibrador pueden permanecer destapados y cargados en el instrumento es de 8 horas Si los calibradores permanecen destapados en el instrumento durante m s de 8 horas deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de calibrador durante m s de 8 horas es posible que la calibraci n del ensayo sea incorrecta lo que puede generar resultados err neos QUANTA Flash h tTG IgG 701107 Controls Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los controles QUANTA Flash h tTG IgG est n destinados al control de calidad de los an lisis efectuados mediante el kit de inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash h tTG IgG en un instrumento BIO FLASH Resumen y principios del procedimiento Los controles QUANTA Flash h tTG IgG est n constituidos por un control negativo y un control positivo Cada uno de ellos contiene una cantidad diferente de anticuerpos IgG anti h tTG El control negativo y el control positivo se emplean para monitorizar el rendimiento anal tico del inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash
18. ctivo prediluido listo para utilizarse Los calibradores contienen anticuerpos humanos anti h tTG con estabilizantes y conservantes 2 Calibrador QUANTA Flash h tTG IgG 2 Dos 2 tubos etiquetados con c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para utilizarse Los calibradores contienen anticuerpos humanos anti h tTG con estabilizantes y conservantes Advertencias 1 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los calibradores para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los calibradores QUANTA Flash h tTG IgG deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 2 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 3 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Los calibradores QUANTA Flash h tTG IgG est n destinados a utilizarse con el ensayo QUANTA Flash h tTG IgG 3 No transfiera los reactivos de los calibradores a otros tubos El instr
19. culas paramagn ticas recubiertas de h tTG conservadas antes del primer uso b Tamp n del ensayo de color rosa que contiene soluci n salina tamponada con Tris Tween 20 estabilizantes de prote nas y conservantes C IgG trazadora anticuerpos anti IgG humana marcados con isoluminol que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservante 2 Tamp n de resuspensi n de color rosa en un vial que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 El tamp n del ensayo contiene una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa que puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza pilas de lavado para eliminar los reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 4 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Este ensayo solo debe uti
20. hable Se combinan en una segunda cubeta y se mezclan peque as cantidades del suero de paciente diluido las part culas de h tTG y el tamp n del ensayo Esta cubeta se incuba a 37 C y despu s las part culas se magnetizan y se lavan varias veces A continuaci n se a ade anticuerpo anti IgG humana conjugado con isoluminol a la cubeta y se incuba a 37 C De nuevo las part culas se magnetizan y se lavan repetidamente El conjugado de isoluminol produce una reacci n luminiscente cuando se a aden a la cubeta los reactivos iniciadores La luz generada por la reacci n se mide como unidades relativas de luz RLU mediante el sistema ptico del BIO FLASH El n mero de RLU es proporcional a la cantidad de conjugado de isoluminol ligado que a su vez es proporcional a la cantidad de anticuerpos IgG anti h tTG unidos a la h tTG de las part culas El ensayo QUANTA Flash h tTG IgG utiliza una curva maestra predefinida espec fica para cada lote que se carga en el instrumento mediante el c digo de barras del cartucho de reactivos A partir de los resultados obtenidos mediante el an lisis de dos calibradores se genera una curva de trabajo espec fica para el instrumento que el software utiliza para calcular las unidades de quimioluminiscencia CU bas ndose en el valor de RLU obtenido para cada muestra Reactivos 1 El cartucho de reactivos del QUANTA Flash h tTG IgG contiene los reactivos siguientes para 50 determinaciones a Part
21. l cartucho de reactivos sobre una superficie s lida Con una mano sostenga el cartucho de reactivos en su lugar Con la otra mano agarre con fuerza la pesta a roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente 2 Mientras pulsa las dos pesta as laterales del tap n de perforaci n parte gris aplique presi n a la parte superior del cartucho de reactivos hasta que descienda y alcance un tope Las pesta as deber an quedar ocultas NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO 3 Resuspenda las micropart culas de h tTG a Destape el vial del tamp n de resuspensi n y recoja l quido con la pipeta de transferencia suministrada Se utilizar todo el contenido del vial b Presione suavemente el lateral estrecho del cartucho de reactivos para deslizar la tapa del cartucho hasta la posici n abierta y mant ngala en esta posici n Transfiera anal ticamente todo el contenido del vial al tubo de reactivo de c i d 11 micropart culas a trav s del orificio nico de la parte superior del cartucho de reactivos c Mezcle el contenido del tubo de reactivo S de micropart culas aspirando y A dispensando el l quido al menos 30 veces Si se observan masas visibles de micropart culas contin e mezclando la soluci n 30 veces m s Si las micropart culas no se resuspenden NO UTILICE EL CARTUCHO d Aseg rese de dispensar todo el l quido antes de retirar la pipeta
22. lizarse con el instrumento BIO FLASH 3 Se recomienda seguir estrictamente el protocolo de resuspensi n indicado 4 No debe utilizarse suero lip mico ict rico o muy hemolizado 5 Una vez abierto el cartucho de reactivos debe almacenarse en el carrusel de reactivos del instrumento La colocaci n por primera vez del cartucho de reactivos en el instrumento debe realizarse con todo cuidado para no derramar reactivos 6 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de conservaci n Guarde los cartuchos de reactivos no abiertos y el tamp n de resuspensi n entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento El software BIO FLASH supervisa la fecha de caducidad del cartucho cargado en uso y la del lote de reactivo periodo de validez del cartucho de reactivos El sistema no permitir utilizar cartuchos que hayan caducado Recogida preparaci n y manejo de las muestras Este procedimiento debe realizarse en un
23. o de anticuerpos como marcadores por ejemplo los anticuerpos anti gliadina y anti endomisio con el fin de reducir el n mero de biopsias intestinales necesarias para obtener un diagn stico El ant geno de endomisio ha sido identificado como la enzima tTG que cataliza la formaci n de uniones covalentes entre prote nas El ant geno h tTG se produce mediante tecnolog a recombinante y puede tener ciertas ventajas frente al ant geno de h gado de cobaya Muchas personas cel acas que poseen suficiente IgA no desarrollan anticuerpos IgG contra la tTG La mayor a de los que presentan deficiencia de IgA desarrollan dichos anticuerpos IgG En una revisi n bibliogr fica se descubri que 106 de 108 pacientes 98 con enfermedad cel aca que presentaban deficiencia selectiva de IgA fueron positivos para IgG anti tTG Principios del procedimiento Se recubren part culas paramagn ticas con ant geno h tTG recombinante purificado y se guardan en el cartucho de reactivos en unas condiciones que mantienen el ant geno en su estado reactivo Cuando el cartucho del ensayo est preparado para el primer uso se a ade una soluci n tamp n al tubo que contiene las part culas y estas se mezclan con el tamp n A continuaci n se coloca el cartucho de reactivos en el instrumento BIO FLASHP Mediante el instrumento se diluye una muestra de suero de paciente en un factor de 1 17 a adiendo de lavado del sistema para a una cubeta de pl stico desec
24. ol e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la medici n de anticuerpos IgG contra la transglutaminasa tisular humana Limitaciones Estos controles est n dise ados para 15 usos La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que pueden marcarse para realizar un seguimiento del n mero de usos El tiempo total durante el que los tubos del control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante m s tiempo deben desecharse Bibliograf a 1 2 JS Celiac Sprue New England Journal of Medicine 1991 325 1709 1719 Strober W Gluten sensitive enterophy A nonallergic immune hypersensitivity of the gastrointestinal tract J Allergy Clin Immunol 1986 78 202 211 McMillan SA Haughton DJ Biggart JD Edgar JD Porter KG McNeill TA Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy BMJ 1991 303 1163 1165 Valdimarsson T Franzen L Grodzinsky E Skogh T Str m M Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and IgA
25. sanitario para diagn stico In Vitro Consulte las instrucciones de uso L mites de temperatura No reutilizar POS ls Riesgos biol gicos O j C digo del lote N mero de cat logo Caducidad Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para lt n gt an lisis Control positivo ONTR Control negativo Calibrador 1 Calibrador 2 Caja de cart n reciclable o page re E Mantener en esta posici n QUANTA Flash es una marca comercial registrada de INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH es una marca comercial registrada de Biokit SA 2013 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos de Am rica Servicio t cnico solo para EE UU y Canad 877 829 4745 Servicio t cnico fuera de EE UU 1 858 805 7950 supportWOinovadx com Representante autorizado en la UE Medical Technology Promedt Consulting GmBH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621105ESP Diciembre de 2013 Revisi n 2
26. stico claro de celiaqu a o ausencia de celiaqu a y que no segu an una dieta sin gluten Estas muestras 117 cl nicamente positivas y 329 cl nicamente negativas se han utilizado para ajustar el punto de corte a 20 CU a fin de optimizar la sensibilidad y especificidad en los valores 49 6 y 97 6 respectivamente en este grupo de preparaci n del an lisis Comparaci n de m todos con un instrumento destinado al mismo fin Las muestras usadas en la comparaci n de m todos fueron las de los estudios de validaci n cl nica pacientes con celiaqu a sin celiaqu a y con dermatitis herpetiforme que se encontraban dentro del rango notificable del ensayo Dichas muestras se analizaron mediante el QUANTA Flash h tTG IgG y tambi n con un ELISA destinado al mismo fin Comparaci n de m todos ELISA h tTG IgG Porcentaje de concordancia N 111 Positivo Negativo Total confianza del 95 e Positivo 37 0 37 Conc positiva 90 2 76 9 97 3 na a Negativo 4 70 74 Conc negativa 100 94 9 100 Total 41 70 111 Conc total 96 4 91 98 6 Tres pacientes 2 con DH y 1 con celiaqu a fueron positivos bajos con el ELISA El cuarto paciente proced a del grupo sin celiaqu a Sensibilidad y especificidad cl nicas El estudio de validaci n cl nica cont con 199 donantes de sangre normales 71 controles sin celiaqu a 68 muestras procedentes de un seminario sobre la tTG 18 controles con
27. stras y almac nelos tapados entre 2 y 8 C en el vial original Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el ensayo h tTG IgG 1 Antes de utilizar los controles QUANTA Flash h tTG IgG por primera vez en el instrumento introduzca en el software el nombre el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo 2 En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M v Seleccione QC Ctrl F2 Haga clic en el bot n New QC Material 3 Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote En primer lugar introduzca el nombre el n mero de lote y la caducidad de esta hoja de datos en el software A continuaci n haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir compruebe que est marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo h tTG IgG en la lista y haga clic en Add Por ltimo introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes 1 Antes de utilizar un nuevo lote de los controles QUANTA Flash h tTG IgG por primera vez introduzca en el software el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo 2 En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M v Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo h_tTG_lgG en la columna de la izquierda
28. umento utiliza los c digos de barras de los tubos para ajustar los calibradores al tipo de an lisis adecuado 4 Los tubos del calibrador una vez abiertos pueden utilizarse durante 8 horas si se mantienen destapados y cargados en el instrumento transcurrido este tiempo el reactivo debe desecharse 5 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado 10 o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de conservaci n 1 Guarde los calibradores no abiertos a una temperatura entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado 2 Los calibradores abiertos deben desecharse al cabo de 8 horas Procedimiento 1 Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Cada calibrador debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los tubos de ambos calibradores y col quelos en una gradilla de
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