Descargue aquí el inserto
Contents
1. 0 1000 ul o pipeta m ltiple ajustable 100 1000ul Dispositivo de lavado de la microplaca pipeta de repetici n o microcanal de 300 ul o sistema automatizado papel absorbente Nuestras pruebas se han dise ado para el uso con agua destilada seg n la definici n de la farmaco pea de los Estados Unidos USP 26 NF 21 y la europea Eur Ph 45 ed 4 Almacenamiento y Caducidad Guarde todos los reactivos y la microplaca a 2 8 C 35 46 F en sus envases originales Una vez prepa radas las soluciones reconstituidas son estables durante 1 mes a 4 C por lo menos Los reactivos y la microplaca deben ser utilizados solamente dentro del margen de caducidad indicado en cada componente Evite la exposici n de la soluci n TMB a la luz intensa Guarde las microplacas en su sobre correspondiente incluyendo el desecante y s llelo bien P gina 2 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 5 Precauciones 5 1 Datos de riesgo para la salud ESTE PRODUCTO Es SOLO PARA EL USO EN DIAGN STICO IN VITRO Por lo tanto solamente el personal formado y especialmente asesorado en los metodos de diagn stico in vitro puede realizar el ensayo Aunque no se considera este producto como particularmente t xico o peligroso en condiciones de uso normales rem tase a lo siguiente para una m xima seguridad Recomendaciones y precauciones Este equipo contiene componentes potencialmente peligrosos Aunque los reactivos del equipo no est n clasificados como irrit2. A Esquema de dispensaci n Se sugiere dispensar los calibradores controles y muestras como sigue Para una interpretaci n cuantitativa utilice calibradores para establecer una curva standard Para una interpretaci n cualitativa utilice el calibradore cut off for quantitative interpretation use cali for qualitative interpretation use cut brators to establish a standard curve off calibrator 3 la je 7 la j9 110 w 12 n R JA cala cae P1 Inc jz J er c ca car p2 fec ps f En AT IE cac pc Ps fre esej sal ww Ji KA G CalD NC P1 E CalA calibrator A CalB calibrator B CalC calibrator C CalD calibrator D CalE calibrator E CalF calibrator F PC positive control NC negative control CC Cut off calibrator P1 patient 1 P2 patient 2 P3 patient 3 P gina 8 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP Anexo B Procedimiento del test Samples 1 101 Controls P gina 9 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP LTLT96 YEL9 6Y XPH OLTIG VELI 64 9UOyg LULUN Z FUNA WNIOJONNIJA WISUSJOPU3M FETSS HAD SOLLSONOVIG AMSAV SWMEN JJLIQOSJOJUN JIMLUBIS Vo nyessdun omyeJoduno unq ed l k QNAU uoneqnau IS9 essy Diagnosi in vitro 4 Pour diagnostic in vitro In Vitro Diagnostikum Para uso Diagn stico in vitro Numero d ordine Reference Catalogue Bestellnummer N mero de cat logo Descriz
3. REF 3166 Manual de Instrucciones Contenido 1 Utilizaci n Aplicaciones clinicas y principio del ensayo Contenido del equipo Almacenamiento y caducidad Precauciones Toma de muestra manipulaci n y almacenamiento Procedimiento del ensayo Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Datos t cnicos Datos de funcionamiento Bibliograf a Esquema de dispensaci n Procedimiento del test 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 1 Utilizaci n AESKULISA CCP es un enzimoinmunoensayo en fase s lida para la detecci n cuantitativa y cualita tiva de anticuerpos IgG contra p ptidos citrulinados c clicos sint ticos El ensayo es una ayuda en el diagn stico de la artritis reumatoide AR 2 Aplicaci n cl nica y principio del ensayo La artritis reumatoide AR es una de las enfermedades autoinmunes m s comunes que afecta aproximadamente al 1 de la poblaci n mundial Es una enfermedad cr nica sist mica e inflamatoria que afecta predominantemente a las membranas sinoviales de m ltiples articulaciones del cuerpo Hasta ahora los factores reumatoides FR han sido los marcadores serol gicos principales para esta enfermedad Los factores reumatoides descritos por vez primera en 1940 como anticuerpos que reaccionaban con gamma globulinas son autoanticuerpos que se dirigen contra la parte C terminal de la regi n constante de la cadena pesada de IgG la IgG Fc Aunque se denominaron as por la enfermedad co
4. VTIBpQOTAJpIO IQKOTT G AVTI PAONG Sample buffer Tamp n Muestras PUBJIIOTIK SidAuya Selyyatwv
5. ancen la temperatura 20 32 C 68 89 6 F antes de utilizarlos Ag telos bien y siga el esquema de incubaci n recomendado para una ptima realizaci n del ensayo Incubaci n se recomienda realizar las pruebas a 30 C 86 F para sistemas automatizados No exponga nunca los componentes a temperaturas m s altas de 37 C 98 6 F Pipetee siempre la soluci n de substrato con puntas nuevas Protega este reactivo de la luz Nunca pipetee el conjugado con puntas previamente utilizadas con otros reactivos Un diagn stico cl nico definitivo no debe estar basado solamente en los resultados del ensayo realizado Debe ser elaborado por el m dico despu s de haber evaluado todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio Es necesario verificar el diagn stico por medio de distintos m todos 6 Toma manipulaci n y almacenamiento de las muestras Utilice preferentemente muestras de suero reci n extra das La extracci n de sangre debe seguir los requerimientos de protocolo de su pa s No utilice muestras ictericas lipemicas hemolizadas o contaminadas por bacterias Los sueros con part culas deben ser purificados por centrifugaci n a baja velocidad lt 1000 x g Las muestras de sangre deben ser recogidas en tubos limpios secos y vac os Despu s de la separaci n las mues tras de suero deben ser utilizadas inmediatamente Pueden guardarse bien cerradas a 2 8 C 35 46 F hasta tres d as o congelarse a 20 C 4 F para per odos m s lar
6. antes de los ojos y la piel recomendamos evitar el contacto de los mismos con los ojos y con la piel y utilizar guantes desechables AVISO Los calibradores controles y agentes contienen zida de sodio NaN como conservante El NaN puede ser t xico si se ingiere o se absorbe por medio de la piel o de los ojos El NaN puede reaccionar con la fontaner a de plomo y de cobre y formar zida met lica muy explosiva Al tirar tirarla deje correr una gran cantidad de agua para evitar que la zida tome consistencia Por favor consulte los procesos de descontaminaci n del CDC u otras directrices locales o nacionales No fume coma o beba mientras manipule el equipo No pipetee con la boca Todo el material de fuente humana utilizado en algunos reactivos de este equipo por ejemplo con troles standards ha sido analizado a trav s de m todos aprobados y ha resultado ser negativo para HbsAg Hepatitis C y HIV 1 No obstante ning n test puede completamente garantizar la ausencia de agentes virales en ese tipo de material Por lo tanto manipule los controles standards y muestras de los pacientes como si se trataran de aut nticos transmisores de enfermedades infecciosas y seg n los requerimientos de manipulaci n de su pa s 5 2 Instrucciones generales para la utilizaci n No mezcle o sustituya reactivos o microplacas de n meros de lote diferentes Esto podr a llevar a una variaci n de los resultados Deje que todos los componentes alc
7. enz Soluc o de paragem Tampone campione Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra For in vitro diagnostic use Para uso diagn stico in vitro In Vitro AlayvwoTIk JEOO Cataloge number Numero de cat logo Ap du g Trapavve iac Lot Lote Xapaktnpioyds Trapridag EC Declaration of Conformity Declaraci n CE de Conformidad Eupwfrraikri oup wvia 96 tests 96 pruebas JETTPOO IOPIOKOI See instructions for use 4 Ver las instrucciones de uso AdBete UTTOWN Tic o nyleg xpP hons Use by Utilizar antes de Xp on p xpl Store at 2 8 C 35 46 F Conservar a 2 8 C uAdooetal 0Toug 2 8 C Manufactured by Fabricado por KataokeudZetal QATTA Cut off Calibrator Calibrador de cut off Opiak c op Avtidpaotnpio Baguov unons 4 Positive Control 4 Control Positivo OETIKOG OP G E EVXOU Negative Control Control Negativo ApvnTIKOG op E EVXOU Calibrator Calibrador Avri paorijpio Baduov nnong Recovery Recuperado Av xtnon Conjugate Conjugado 2 Zeuya Coated microtiter plate Microplaca sensibilizada EmikaAupnevn HIKPOTTA KA Coated pinplate Pinplate sensibilizada EmkaAuunevn TA KA Pin Wash buffer Soluci n de lavado PUBJIIOTIK i upa TTA ONS 4 Substrate buffer Tamp n sustrato PuBpiOTIK DIG AUA UTTOOTPWHATOG 4 Stop solution Soluci n de parada A
8. gos P gina 3 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 7 Procedimiento del ensayo 7 1 Preparativos antes de dispensar Diluya los reactivos concentrados Diluya el tamp n de muestra concentrado a 1 5 con agua destilada p e 20 ml en 80 ml Diluya el tamp n de lavado concentrado a 1 50 con agua destilada p e 20 ml en 980 ml Muestras Diluya las muestras de suero a 1 101 con tamp n de muestra 1x p e 1000 ul tamp n de muestra 1x 10 ul suero Mezcle bien la diluci n Lavado Prepare 20 ml de tamp n de lavado diluido 1x para 8 pocillos o 200 ml para 96 pocillos p e 4 ml de concentrado en 196 ml de agua destilada Lavado autom tico Tenga en cuenta los vol menes de exceso requeridos para purgar el instrumento y el volumen muerto en el dispensador del aparato Lavado manual Descarte el l quido de los pocillos invertiendo la placa Golpee vigorosamente el marco con los micropocillos sobre papel absorbente limpio manteniendo la placa invertida Dispense 300 ul de tamp n de lavado diluido dentro de cada pocillo y espere 20 segundos Repita el procedimiento entero dos veces m s Microplacas Calcule el n mero de pocillos necesarios para el ensayo Saque los pocillos no utlizados del marco p ngalos de nuevo en la bolsa de pl stico suministrada junto con el desecante y s llela bien 2 8 C 35 46 F 7 2 Esquema de trabajo Vea Anexo A para el esquema de dispensaci n vea Anexo B para el procedimiento Recomendamos
9. ial 20 ml concentrado 50x tap n blanco soluci n verde Contiene Tris NaCl Tween 20 azida s dica lt 0 1 conservante Listo para el uso Control Negativo 1 vial 1 5 ml tap n verde soluci n incolora Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Control Positivo 1 vial 1 5 ml tap n rojo soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradore Cut off 1 vial 1 5 ml tap n azul soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradores 6 viales 1 5 ml cada uno 0 3 10 30 100 300 U ml el color aumenta con la concentraci n soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Conjugado 1 vial 15 ml IgG tap n azul soluci n azul Contiene Inmunoglobulinas anti humanas conjugadas con peroxidasa Substrato TMB 1 vial 15 ml tap n negro Contiene TMB H202 estabilizado Soluci n de Paro 1 vial 15 ml tap n blanco soluci n incolora Contiene cido Clorh drico 1M Placa Microtiter 12x8 tiras rompibles de pocillos Revestimiento ver p rrafo 1 Material necesario pero no suministrado Filtro de lectura de 450 nm del lector de tiras microtiter y filtro de referencia opcional de 620 nm 600 690 nm Equipo de cristal cilindro 100 1000ml tubos de ensayo para disoluciones Mezclador espiral pipetas de precisi n 10 100 200 50
10. ione lotto Lot Chargen Bezeichnung Lote Conformit europea Declaration CE de Conformit Europ ische Konformit t Declarac o CE de Conformidade 96 determinazioni 96 tests 96 Bestimmungen 96 Testes Rispettare le istruzioni per l uso Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Ver as instruc es de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de Conservare a 2 8 C Conserver a 2 8 C Lagerung bei 2 8 C Conservar entre 2 8 C Prodotto da Fabrique par 4 Hergestellt von Fabricado por Calibratore cut off Etalon Seuil Grenzwert Kalibrator Calibrador de cut off 4 Controllo positivo 4 Contr le Positif Positiv Kontrolle 4 Controlo positivo 4 Controllo negativo 4 Contr le N gatif Negativ Kontrolle Controlo negativo 4 Calibratore Etalon Kalibrator 4 Calibrador Recupero 4 Corr lation Wiederfindung Recuperac o Coniugato Conjuge Konjugat Conjugad Micropiastra rivestita 4 Microplaque sensibilis e Beschichtete Mikrotiterplatte Microplaca revestida 4 Piastra ad aghi rivestita Pinplate sensibilis e Beschichtete Pinplatte Pinplate revestida Tampone di lavaggio Tampon de Lavage Waschpuffer Soluc o de lavagem Tampone substrato Substrat Substratpu Substrato Reagente bloccante Solution d Arr t Stopreag
11. itivas y las muestras con valores de DO inferiores a este rango se consideran negativas Negativo DO paciente gt 0 8 x OD cut off Indeterminado 0 8 x DOcut ott lt DO patient lt 1 2 x DOcutooff Positivo DO paciente gt 1 2 x DO cut off Pagina 5 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 9 Datos T cnicos Muestra suero Volumen de muestra 10 ul de muestra diluida a 1 101 con tamp n de muestra 1x Tiempo total de incubaci n 90 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Rango de calibraci n 0 300 U ml Sensibilidad analitica 1 0 U ml Almacenamiento a 2 8 C 35 46 F utilice solo los viales originales N mero de determinaciones 96 tests 10 Datos de funcionamiento 10 1 Sensibilidad anal tica La prueba del agente de muestra 30 veces en AESKULISA CCP produjo una sensibilidad anal tica de 1 0 U ml 10 2 Especificidad y sensibilidad La microplaca est revestida con p ptidos citrulinados c clicos sint ticos No se encontraron reactividades cruzadas con otros autoant genos Para la artritis reumatoide el equipo CCP ELISA muestra una sensibilidad del 75 y una especificidad del 99 2 en un grupo control de enferme dades reum ticas solapadas P gina 6 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 10 3 Linealidad Se han analizado con este equipo sueros seleccionados y se encontr que debian diluirse linealmente No obstante debido a la naturaleza heterog nea de los autoanticuerpos humanos pueden haber mue stras que no siga
12. l diagn stico de la AR y es una alternativa a los tests CCP ELISA adecuada y econ mica Los estudios han mostrado una sensibilidad del 68 y una especificidad del 92 en un grupo control de enfermedades reum ticas solapadas Principio del test Las muestras de suero diluidas 1 101 se incuban en la microplaca reve stida con el ant geno espec fico Los anticuerpos de los pacientes si est n presentes en la muestra se unen al ant geno La fracci n no unida es eli minada por el lavado en el paso siguiente Despu s las inmunoglobulinas anti humanas conjudagas con peroxidasa conjugado se incuban y reac cionan con el complejo antigeno anticuerpo de las muestras dentro de la microplaca El conjugado no unido es retirado a trav s del lavado en el paso siguiente La adici n del substrato TMB genera una reacci n colorim trica azul enzim tica que se detiene a trav s de cido diluido el color cambia a amarillo La tasa de formaci n de color por parte del crom geno va en funci n de la cantidad de conjugado unido al complejo antigeno anticuerpo y esto es proporcional a la concentraci n inicial de los respectivos anti cuerpos en la muestra del paciente P gina 1 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 3 Contenido del equipo Para ser reconstituido Tamp n de Muestra 5x 1 vial 20 ml concentrado 5x tap n blanco soluci n amarilla Contiene Tris NaCl BSA azida s dica lt 0 1 conservante Tamp n de Lavado 50x 1 v
13. la medici n de pipeta de las muestras y calibradores por duplicado El Calibrador Cut off es solamente para uso en las pruebas cualitativas Dispense 100 ul de cada suero diluido de paciente dentro del pocillo correspondiente Dispense 100 ul de los calibratores O calibradore cut off y controles positivo y negativo dentro de los pocillos designados Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de conjugado dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de substrato TMB dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente 20 32 C 68 89 6 F protegido de la luz directa Dispense 100 ul de soluci n de paro dentro de cada pocillo siguiendo el mismo orden de pocillos que cuando dispens el substrato Incube un m nimo de 5 minutos Agite la placa cuidadosamente durante 5 segundos Lea la absorbancia a 450 nm opcionalmente a 450 620 nm dentro de los 30 minutos siguientes P gina 4 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP 8 Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Para una interpretaci n cuantitativa establezca la curva standard trazando la densidad ptica DO de cada calibrador eje y con respecto a los correspondientes valores de concentraci n en U mi eje x Para unos mejores resultados recomendamos coordenada
14. n esta regla concentraci n concentraci n medida esperada Recuperaci n U ml U ml 10 4 Precision Para determinar la precisi n del ensayo se valor la variabilidad intra e inter ensayo a trav s del analisis de su reproducibilidad en tres muestras de suero Estas muestras fueron seleccionadas para representar un rango por encima de la curva standard Inter Ensayo Media cv U ml 8 5 10 5 Calibraci n Debido a la no existencia de una calibraci n de referencia internacional este ensayo est calibrado en unidades arbitrarias U ml 11 Bibliograf a 1 Witte T Hartung K Sachse C Matthias T Fricke M Kalden JR Lakomek HJ Peter HH Schmidt RE 2000 Rheumatoid factors in systemic lupus erythematosus Association with clinical and laboratory parameters SLE study group Rheumatol Int 19 107 111 2 Smith JB Haynes MK 2002 Rheumatoid arthritis a molecular understanding Ann Intern Med 136 908 922 3 Schellekens GA Visser H de Jong BAW et al 2000 The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide Arthritis Rheum 43 155 163 4 Schellekens GA de Jong BAW van den Hoogen FHJ van de Putte LBA van Venrooij WJ 1998 Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis specific autoantibodies J Clin Invest 101 273 281 P gina 7 de 9 001 2007 09 18 REF 3166 CCP ANEXO
15. n la que fueron inicialmente asociados los FR se encuentran tambi n en la poblaci n sana y en varias enfermedades Las enfermedades comunmente asociadas con elevadas concentraciones de FR son la artritis reumatoide 50 90 y el s ndrome de Sj gren 75 95 Tambi n se encuentran en el lupus eritematoso sist mico LES 15 35 esclerosis sist mica 20 30 polimiositis dermatomiositis 5 10 crioglobulinemia 40 100 y enfermedades mixtas del tejido conectivo MCTD 50 60 Por lo tanto aunque es un marcador sensible para la AR el factor reumatoide tiene falta de especificidad para la enfermedad Se ha sabido desde hace tiempo que los autoanticuerpos anti perinucleares tambi n llamados anticuerpos anti queratina se encuentran en los pacientes con AR Recientemente se ha descubierto que esos autoanticuerpos se dirigen hacia un epitopo que contiene una forma modificada de la arginina llamada citrulina Los anticuerpos contra los p ptidos citrulinados c clicos sint ticos CCP han sido descritos como marcadores elevadamente espec ficos para la AR con sensibilidades comparables al FR AESKU DIAGNOSTICS ha desarrollado un novedoso equipo ELISA el equipo AESKULISA CCP que detecta sueros de pacientes con artritis reumatoide con sensibilidades y especificidades comparables a los tests CCP ELISA Empleando p ptidos citrulinados c clicos sint ticos el equipo AESKULISA CCP se muestra como un test serol gico elevadamente espec fico para e
16. s log lin y un ajuste a 4 PL Partiendo de la DO de cada muestra lea la correspondiente concentraci n de anticuerpo expresada en U ml Rango Normal Indeterminado Resultados Positivos lt 12 U ml 12 18 U ml gt 18 U ml Ejemplo de curva standard Recomendamos dispensar los calibradores en paralelo para cada tanda Calibradores IgG DO 450 620 nm CV Variaci n 0 U mi 0 038 3 Um 0 165 Ejemplo de c lculo Paciente Replicado DO Media DO Resultado U ml 0 896 0 815 0 842 1 813 1 805 1 809 230 Para conocer los datos especificos de lote consulte el documento adjunto de control de calidad Los laboratorios deberian realizar un Control de Calidad interno utilizando controles propios y o un pool de sueros interno tal y como contemplan las regulaciones de la UE No utilice este ejemplo para interpretar resultados de los pacientes Cada laboratorio deber a establecer su rango normal propio basado en sus propias t cnicas contro les equipamiento y poblaci n seg n sus propios procedimientos establecidos Para la interpretaci n cualitativa lea la densidad ptica del calibrador cut off y la de las muestras de los pacientes Compare las DO de los pacientes con la DO del calibrador cut off Para la interpreta ci n cualitativa recomendamos que establezca un rango del 20 al rededor del valor del cut off como zona indeterminada Todas las muestras que tengan DO superior a este rango se consideran pos
Download Pdf Manuals
Related Search