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Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA

1. 2 Prepare el reactivo de captura seleccionada de trabajo CT wTCR CT a Empareje los frascos apropiados del TCR CT y TCR B b Compruebe los n meros de lote de los reactivos en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados en el kit c Abra el frasco de TCR CT y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia d Abra el frasco de TCR B y vierta todo su contenido en el frasco de TCR CT Es normal que quede una peque a cantidad de l quido en el frasco de TCR B e Tape el frasco de TCR CT y agite con una rotaci n suave la soluci n para mezclar el contenido Evite que se forme espuma durante este paso f Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta g Deseche el frasco y el tap n de TCR B 3 Prepare el reactivo de selecci n a Compruebe que el n mero de lote del frasco de reactivo coincida con el n mero de lote de la hoja de c digos de barras del lote maestro b Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta Nota Mezcle bien todos los reactivos por inversi n suave antes de cargarlos en el sistema Evite que se forme espuma durante inversi n de los reactivos Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 34 502184ES Rev D Sistema PANTHER C Preparaci n de los reactivos para reactivos reconstituidos previamente 1 Losreactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda previamente reconstituid
2. eee 10 Reactivos y materiales suministrados ceee 23 Material necesario que debe adquirirse por separado 12 Material necesario que debe adquirirse por separado 24 Materiales OpciOnaleS ooocinnnnnnnioniconoonocconocicarncnnanino 13 Materiales OpciONAlES ooooconcccconicccconocccconaccconanccnnanncnn 25 Procedimiento de prueba de los sistemas DTS 13 Procedimiento de prueba del TIGRIS DTS System 26 Notas de procediMiento cee eee eeeeeeeeeeeeeneeneees 19 Notas de procedimiento cccccceeeeseeeeeeeteeeeeeneeees 30 DA a PANTHER Sistema PANTHER esis seccceacesencenceceterdaccecceecsntenderenceeane 31 Reactivos y materiales suministrados 0 ceeee 31 Material necesario que debe adquirirse por separado 32 Materiales OpciONal8s ooococinncccnnnncccnnonccccnancccnncancnananas 33 Procedimiento de prueba del sistema PANTHER 33 Notas de procediMiento ooococnnccccnnoccccnccccnconaconanancninnnns 36 502184ES Rev D Informaci n general Informaci n general Uso previsto El ensayo para Chlamydia trachomatis APTIMA es una prueba de sonda de cido nucleico de amplificaci n seleccionada que utiliza captura seleccionada para la detecci n cualitativa in vitro de RNA ribos mico ribosomal RNA rRNA de Chlamydia trachomatis CT para ayudar en el diagn stico de la enfermedad urogenital clamidial utilizando el TIGRIS DTS System o el sistema PANTHER
3. Agua para el TIGRIS DTS System consulte las especificaciones en el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System Guantes desechables Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Tapones penetrables APTIMA 105668 Tapones no penetrables de repuesto 103036A Tapones de repuesto para los kits de 100 pruebas Soluciones de reconstituci n de los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda CL0041 100 tapones TCR y reactivo de selecci n 501604 100 tapones Tapones de repuesto para los 2 kits x 50 pruebas Soluciones de reconstituci n de los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda 501603 100 tapones TCR y reactivo de selecci n 501604 100 tapones Materiales opcionales N de cat logo Kit de controles APTIMA 301110 Potenciador de lej a GEN PROBE 302101 para la limpieza sistem tica de las s uperficies y el equipo Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 25 502184ES Rev D TIGRIS DTS System Procedimiento de prueba del TIGRIS DTS System Nota Consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System para informaci n adicional sobre los procedimientos del TIGRIS DTS System A Preparaci n del rea de trabajo 1 Limpie las superficies de trabajo en las que van a preparar los reactivos y las muestras Limpie las superficies de trabajo con una soluci n de hipoclorito de sodio al 2 5 3 5 0 35 M a 0 5 M Deje que
4. D Protocolo de supervisi n de la contaminaci n en laboratorios para el TIGRIS DTS System Existen numerosos factores espec ficos de los laboratorios que pueden contribuir a la contaminaci n incluido el volumen de la prueba el flujo de trabajo la prevalencia de la enfermedad y otras actividades de laboratorio Estos factores deben tenerse en consideraci n al establecerse la frecuencia con que se supervisar la contaminaci n Los intervalos para la supervisi n de la contaminaci n deben establecerse en funci n de las pr cticas y procedimientos de cada laboratorio Para supervisar la contaminaci n del laboratorio se puede realizar el siguiente procedimiento usando el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina 1 Etiquete los tubos de transporte de torunda con los n meros correspondientes a las reas que se van a analizar 2 Extraiga la torunda para recogida de muestras aplicador azul con impresiones verdes de su envase humedezca la torunda en el medio de transporte de torunda y p sela por el rea designada con un movimiento circular 3 Inserte inmediatamente la torunda en el tubo de transporte 4 Quiebre con cuidado el bastoncillo de la torunda en la l nea con la muesca tenga cuidado de que el contenido no salpique 5 Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de torunda 6 Repita los pasos del 2 al 5 en todas las reas en las que se vaya a apli
5. c Un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina d La ausencia de una torunda en el tubo de transporte de muestras APTIMA con muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 28 502184ES Rev D TIGRIS DTS System 4 Inspeccione los tubos de muestras antes de cargarlos en la gradilla a Siun tubo de muestra contiene burbujas en el espacio entre el l quido y el tap n centrif guelo durante 5 minutos con una RCF de 420 para eliminar las burbujas b Si un tubo de muestra tiene un volumen inferior al que se suele observar cuando se siguen las instrucciones de recogida centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para asegurarse de que no quede l quido en el tap n c Siel nivel de l quido de un tubo de muestra de orina no est entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta la muestra debe rechazarse No perfore un tubo sobrellenado d Si un muestra de orina contiene precipitados caliente la muestra a 37 C durante un m ximo de 5 minutos Si el precipitado no se vuelve a disolver aseg rese visualmente de que ste no obstaculice la entrega de la muestra Nota Una incorrecta realizaci n de los pasos 4a c puede provocar una descarga de l quido del tap n del tubo de muestras Nota Se pueden analizar hasta 3 al cuotas independientes de cada tubo de muestra Los intentos de pipetear m s de 3 al cuotas
6. desde 1 logaritmo por debajo hasta 3 logaritmos por encima de 5 fg rRNA ensayo para CT En la tabla 14 tambi n se indican los porcentajes de concordancia general del estudio de paneles cl nicos entre el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 68 502184ES Rev D Rendimiento analitico del TIGRIS DTS System Tabla 14 Estudio de concordancia del panel clinico enriquecido con rRNA de CT Porcentaje de Muestra del Concentraci n my de de concordancia Muestra fg rRNA R plicas concordancia concordancia general entre pane ensayo TIGRIS DTS TIGRIS y DTS IC 95 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 0 5 30 100 100 Endocervical Baja 5 30 100 100 100 97 2 100 Media 50 30 100 100 Alta 5 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 0 5 30 100 100 Torunda Vaginal Baja 5 30 100 100 100 97 2 100 Media 50 30 100 100 Alta 5 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 0 5 30 100 100 Uretral Baja 5 30 100 100 100 97 2 100 Media 50 30 100 100 Alta 5 000 30 100 100 Sin diana 0 12 91 7 11 12 100 Muy baja 0 5 30 100 100 Hombres Baja 5 30 100 100 99 2 95 9 100 Media 50 30 100 100 Alta 5 000 30 100 100 Orina Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 0 5 30 100 100 Mujeres Baja 5 30 100 100 100 97 2 100 Media 50 30 100 100 Alta 5 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 ee Muy baja 0 5 30 1
7. 96 0 100 para todos los paneles de STM Estudio de reproducibilidad La precisi n del ensayo APTIMA CT se evalu con tres sistemas PANTHER y dos lotes de kit de ensayo APTIMA CT durante un per odo de 24 d as Se crearon paneles a adiendo rRNA de CT en STM a las concentraciones indicadas en la tabla 17 Los usuarios realizaron dos ciclos por d a analizando cada muestra del panel en r plicas de dos por ciclo El c lculo de la concordancia con el resultado esperado y la estimaci n de la precisi n se realizaron de acuerdo con las directrices NCCLS EP5 A2 18 El n mero total de r plicas para cada panel Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 71 502184ES Rev D Rendimiento analitico del sistema PANTHER fue 93 96 La tabla 17 presenta los datos RLU de precisi n en t rminos de media desviaci n est ndar coeficiente de variaci n CV porcentaje de concordancia con los resultados esperados y c lculos de variabilidad entre instrumento entre lote entre ciclo y dentro ciclo Tabla 17 Precisi n del sistema PANTHER para el ensayo APTIMA CT Entre Entre lote Entre ciclo Dentro ciclo Total RLU instrumento CT A Matriz IFU mL N media concor 3D Eb sD p sb x1 000 dancia 9 o 9 9 o x1 000 1 000 CCV x1 000 CCV x1 000 CV x1 000 CY 0 96 2 100 0 38 21 3 0 64 35 8 0 0 1 86 104 6 2 112 3 Sl 0 25 93 7 390 100 221 74 3 264 35 3 6 0 0 180 07 2 4 389 2
8. 96 2 98 8 Todos 1 448 165 26 1 247 10 94 3 89 7 97 2 98 0 97 0 98 7 Recogidas Torunda por la vaginal Asintom tico 629 60 25 543 1 98 4 91 2 100 95 6 93 6 97 1 paciente Sintom tico 811 111 33 663 4 96 5 91 3 99 0 95 3 93 4 96 7 Recogidas Torunda a Lanes vaginal Asintom tico 638 60 32 545 1 98 4 91 2 99 0 94 5 92 3 96 2 Todos 1 449 171 65 1 208 5 97 2 93 5 99 1 94 9 93 5 96 0 AAA 2 DA A A E E TE A SS SS ee PR positivo real PF positivo falso NR negativo real NF negativo falso Resultados para CT del ensayo APTIMA COMBO 2 N de resultados positivos N de pruebas analizadas a 9 23 b 14 20 c 23 43 d 6 14 e 6 17 f 12 31 g 14 28 h 11 22 i 25 50 j 7 13 k 5 13 12 26 m 15 25 n 17 33 o 15 32 p 32 65 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 48 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Estudio clinico de muestras de Pap en medio liquido PreservCyt Se realiz un estudio cl nico multic ntrico prospectivo para evaluar el uso de la soluci n PreservCyt un componente del sistema ThinPrep 2000 como medio alternativo para muestras ginecol gicas para la detecci n de CT por el ensayo APTIMA CT En el estudio cl nico se evaluaron 1 647 mujeres sintom ticas y asintom ticas que asist an a cl nicas de Obstetricia y Ginecolog a de planificaci n familiar de salud p blica de mujeres y de ETS De los 1 647 sujetos disponibles 1 288
9. GEN PROBE APTEMA Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA Para uso diagn stico in vitro Para exportaci n de EE UU solamente Informaci n general a RO ewe 2 USO PreViStO ico adri ad a a A eee a a a i S E 2 Resumen y explicaci n de la prueba ooooccoccccco eee 2 Principios del procedimiento 0 000 eee 3 Advertencias y precauciones o oooooc eee ee 4 Requisitos de almacenamiento y manipulaci n de los reactivos oooocococccoooo 6 Recogida y almacenamiento de muestras ooooccccccoco eae 8 Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente 38 Limitaciones sas ic ii a ened a ee eae eee eee 41 Resultados del estudio C NICO oooooccccocronane eee eee 43 Valores esperados de los sistemas DTS ccc eee eee eee 44 Rendimiento cl nico en sistemas DTS ooooocccconcnnr tee eee 47 Rendimiento anal tico de los sistemas DTS 0 cece eee eee eee eee 60 Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS SysSteM oo oooooommmmo 64 Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System 0ooooococccncr 68 Rendimiento anal tico del sistema PANTHER o ooococcocccc eee eee 71 Bibliograf a o0oocccicoior carr ee eee eae A 73 DTS vi TIGRIS Sistemas DUS vii 10 TIGRIS DTS SySteM ccocccccconoconncnncanencnnnennnnanancnnananans 23 Reactivos y materiales suministrados
10. Manual del usuario del sistema de captura seleccionada Si se usa el ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB 100 11 Cubra las TTU con tarjetas de sellado y sacuda suavemente la gradilla con la mano No agite con mezclador vortex Incube la gradilla a 62 C 1 C en un ba o de agua durante 30 5 minutos 12 Retire la gradilla del ba o de agua y seque los fondos de los tubos sobre un material absorbente 13 Aseg rese de que las tarjetas de sellado est n firmemente asentadas Si es necesario sustit yalas por tarjetas de sellado nuevas y selle bien las TTU 14 Agite la gradilla durante 60 segundos en el mezclador v rtex multitubo Consulte Notas de procedimiento Agitaci n con mezclador v rtex para los detalles Comience la agitaci n con mezclador v rtex antes de transcurridos 2 minutos de haber retirado la gradilla del ba o de agua Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 16 502184ES Rev D Sistemas DTS 15 Sin retirar las tarjetas de sellado incube la gradilla a temperatura ambiente durante 30 5 minutos 16 Coloque la gradilla sobre la base magn tica del TCS durante 5 a 10 minutos 17 Cebe la linea de la bomba de la estaci n de distribuci n bombeando la soluci n de lavado APTIMA a trav s del peine m ltiple de distribuci n Bombee suficiente l quido a trav s del sistema para que no haya burbujas de aire en la l nea y para que las diez boquillas distribuyan un flujo
11. paciente por estado de sintomas y en general para muestras de Pap en medio liquido PreservCyt Resultado de la solucion Sensibilidad Especificidad Muestra PreservCyt ate E E k IC 95 IC 95 APTIMA CT Positivo 29 0 1 3 96 7 29 30 98 8 325 329 Sintomatico Negativo 1 3 3 319 ut Bl 82 8 99 9 96 9 99 7 Total 30 3 4 322 Positivo 57 0 1 13 95 0 57 60 98 9 1 214 1 228 Asintom tico Negativo 3 2 11 1 201 10 9 86 1 99 0 98 1 99 4 Total 60 2 12 1 214 Positivo 86 0 2 16 Todos Negativo 4 5 14 1 520 95 6 86 90 98 8 1 599 1 957 89 0 98 8 98 2 99 3 Total 90 5 16 1 536 APETECE TE Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 50 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 6 Sensibilidad especificidad y valo
12. ster de acridinio La sonda DNA marcada se combina con el amplic n para formar h bridos RNA DNA estables El reactivo de selecci n diferencia la sonda hibridada de la no hibridada eliminando la generaci n de se al de la sonda no hibridada Durante el paso de detecci n la luz emitida Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 3 502184ES Rev D Informaci n general por los h bridos RNA DNA marcados se mide como se ales de fotones en un lumin metro y se notifican como unidades relativas de luz Relative Light Units RLU Advertencias y precauciones A Para uso diagn stico in vitro B Para advertencias precauciones y procedimientos adicionales espec ficos para el control de la contaminaci n del TIGRIS DTS System consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System C Para advertencias precauciones y procedimientos adicionales espec ficos para el control de la contaminaci n del sistema PANTHER consulte el PANTHER System Operator s Manual Manual del usuario del sistema PANTHER Informaci n para los laboratorios D Utilice nicamente el instrumental de laboratorio desechable suministrado o especificado E Tome las precauciones habituales del laboratorio No coma beba ni fume en las reas de trabajo designadas Utilice guantes desechables sin talco protecci n para los ojos y batas de laboratorio al manipular las muestras y los reactivos del kit L vese bien las manos despu
13. 21 Schachter J and M Grossman 1981 chlamydial infections Ann Rev Med 32 45 61 22 Schachter J 1978 Medical progress chlamydial infections third of three parts NEJM 298 540 549 23 Schachter J E C Hill E B King V R Coleman P Jones and K F Meyer 1975 Chlamydial infection in women with cervical dysplasia Am J Obstet Gynecol 123 753 757 24 Stary A E Schuh M Kerschbaumer B Gotz and H Lee 1998 Performance of transcription mediated amplification and Ligase chain reaction assays for detection of chlamydial infection in urogenital samples obtained by invasive and noninvasive methods J Clin Microbiol 36 2666 2670 25 Toye B W Woods M Bobrowska and K Ramotar 1998 Inhibition of PCR in genital and urine specimens submitted for Chlamydia trachomatis testing J Clin Microbiol 36 2356 2358 26 Verkooyen R P A Luijendijk W M Huisman W H F Goessens J A J W Kluytmans J H Rijsoort Vos and H A Verbrugh 1996 Detection of PCR inhibitors in cervical specimens by using the AMPLICOR Chlamydia trachomatis assay J Clin Microbiol 34 3072 3074 27 Vincelette J J Schirm M Bogard A Bourgault D Luijt A Bianchi P C Van Voorst Vader A Butcher and M Rosenstraus 1999 Multicenter evaluation of the fully automated COBAS AMPLICOR PCR test for detection of Chlamydia trachomatis in urogenital specimens J Clin Microbiol 3 74 80 28 Yuan Y Y X Zhang N G W
14. 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa en la que se vayan a preparar los reactivos y las muestras con cubiertas absorbentes con forro de pl stico que est n limpias para mesas de laboratorio B Reconstituci n y preparaci n de reactivos de un nuevo kit Nota La reconstituci n de los reactivos debe llevarse a cabo antes de iniciar cualquier tarea en el sistema PANTHER 1 Para reconstituir los reactivos de amplificaci n CT enzim tico CT y de sonda CT combine los frascos de reactivo liofilizado con la soluci n de reconstituci n Si las soluciones de reconstituci n est n refrigeradas espere a que alcancen la temperatura ambiente antes de usarlas a Empareje cada soluci n de reconstituci n con su reactivo liofilizado Aseg rese de que existe correspondencia de colores en las etiquetas de la soluci n de reconstituci n y del reactivo antes de conectar el collar de reconstituci n b Compruebe los n meros de lote en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados c Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte con firmeza el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial figura 3 paso 1 d Abra la soluci n de reconstituci n corres
15. 5 3 2 5 96 7 478 100 22445 3 249 88 3 3 53 1 0 7 164 57 2 2 377 8 5 1 25 96 7 482 100 222 23 3 233 36 3 1 46 47 0 6 180 29 2 4 372 2 5 0 95 2 100 0 23 12 7 0 38 20 7 0 52 28 5 1 3 71 1 5 81 9 te 0 25 96 6 978 100 27694 4 330 57 4 7 66 36 1 264 73 3 8 5104 7 3 rina 5 95 7 291 100 121 2 1 7 154 63 2 1 73 51 1 148 13 2 2568 3 5 25 95 7 349 100 121 57 1 7 181 34 2 5 66 87 0 9 162 45 2 2 280 2 3 8 0 96 7 97 9 3 36 46 1 0 29 4 0 0 20 52 281 4 20 8 285 3 0 25 96 6 996 100 225 16 3 2 20986 3 0 0 164 87 2 4 349 2 5 PreservCyt 2 5 95 7 079 100 246 89 3 5 172 55 2 4 0 0 151 67 2 1 337 2 4 8 25 96 7 050 100 262 52 3 7 167 79 2 4 0 0 1925 2 7 366 2 5 2 Nota La variabilidad de algunos factores podr a ser num ricamente negativa lo que puede ocurrir si la variabilidad debida a dichos factores es muy peque a Cuando esto sucede SD 0 y CV 0 N mero total de r plicas para cada panel 96 En ciclos seleccionados no se volvieron a analizar r plicas no v lidas individuales Especificidad anal tica La especificidad anal tica no se prob en el instrumento PANTHER Consulte Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System para el Estudio de equivalencia de la especificidad anal tica Estudio de equivalencia de las substancias interferentes La sangre normalmente hallada en muestras genitourinarias podr a interferir en algunos ensayos de amplificaci n Se utiliz sangre completa para establecer el grado de interferencia de la sangre en e
16. 9 3 12 Infectado 3 1 4 Infectado 2 2 4 Infectado 2 0 2 Infectado 4 0 4 Infectado N C 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 1 3 4 Infectado 1 2 3 No infectado 1 2 3 No infectado N C 1 0 1 No infectado 0 2 2 No infectado 12 7 19 No infectado 0 1 1 No infectado 1 0 1 No infectado 4 3 7 No infectado 0 1 1 No infectado 1 1 2 No infectado 1 2 3 No infectado 0 2 2 No infectado 11 9 20 No infectado 5 4 9 No infectado 636 526 1 162 No infectado N C 1 0 1 No infectado N C 2 3 5 No infectado 12 10 22 No infectado 1 1 2 No infectado N C N C 1 1 2 No infectado N C N C 5 4 9 No infectado 1 0 1 No infectado 1 0 1 Total 812 640 1 452 AA SSS SSS Se ESSE SE ICE N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TF torunda endocervical femenina OF orina femenina Sint sintom tica Asint asintom tica Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 55 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 7c Resultados de torundas vaginales recogidas por pacientes asintom ticas de mujeres infe
17. Infectado Positivo Positivo 30 60 No infectado Negativo Negativo 322 1 214 No infectado Negativo Positivo 4 12 No infectado Positivo Negativo 3 2 Total 359 1 288 Distribuci n RLU de controles APTIMA La distribuci n de las RLU para el Control positivo GC Control negativo CT de APTIMA y para el Control positivo CT Control negativo GC de APTIMA de todos los ciclos del ensayo APTIMA CT realizados durante los estudios de muestras cl nicas se presenta en la tabla 8 Tabla 8 Distribuci n de las RLU de los controles APTIMA durante los estudios de muestras cl nicas incluidos estudios de muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina muestras de orina masculina y femenina y Pap en medio l quido PreservCyt RLU x1 000 a Estudio cl nico Estudio cl nico Control Estad sticas de muestras de muestras de Pap de torunda y en medio l quido de orina PreservCyt N 198 209 Media 0 89 1 22 SD 2 94 2 63 a M ximo 26 36 Control positivo GC Control negativo CT 75 percentil 1 1 Mediana 0 1 25 percentil 0 Minimo 0 0 N 198 209 Media 7 007 6 593 SD 776 709 EA M ximo 8 884 10 383 Control positivo CT Control negativo GC 75 percentil 7 440 7 025 Mediana 7 066 6 661 25 percentil 6 621 6 205 M nimo 988 4 419 Estudio de precisi n La precisi n del ensayo APTIMA CT esto es su reproducibilidad se evalu en dos centros cl nicos externos y e
18. N a o No infectado z E alalalni inin ojollni s oln ols ollwlolo lolalojolo R o wo No infectado a z B No infectado 2 E z 614 No infectado 3 N C No infectado E a o o a a a P ojo a wo No infectado z No infectado N C No infectado N C z No infectado Oo O 1NM a N No infectado z No infectado N C No infectado S 2 E No infectado N C E No infectado N C N C No infectado N C E No infectado N C z No infectado z 2 z Total 640 dE A A gt LL o eee eee N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TF torunda endocervical femenina OF orina femenina TVC torunda vaginal recogida por el cl nico Sint sintom tica Asint asintom tica olol lol n o N co 9 mM A N OIO afO a O 00 N P Ol N Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 57 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 7e Resultados del estado de infecci n del paciente en el estudio cl nico de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt para C trachomatis wpe asanibecion Torunda endocervical Estado de sintomas del paciente gust aA renee Sintomatico Asintomatico
19. PEN Figura 1 Proceso de reconstituci n de los sistemas DTS 2 Los reactivos de sonda CT amplificaci n CT y enzim tico previamente reconstituidos deben alcanzar la temperatura ambiente de 15 C a 30 C antes de que se inicie el ensayo Si el reactivo de sonda contiene precipitado que no se disuelve a temperatura ambiente cali ntelo a 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento el reactivo de sonda se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Despu s Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 14 502184ES Rev D Sistemas DTS de la resuspensi n mezcle bien con un movimiento de inversi n suave con cuidado para que no se forme espuma Nota Este paso de inversi n se debe realizar cada vez que el precip itado se vuelva a pasar a la soluci n ya sea mediante calentamiento a 62 C o dej ndolo calentar a la temperatura ambiente 3 Prepare el reactivo de captura seleccionada de trabajo CT wTCR CT a Transfiera 20 mL de TCR CT a un recipiente seco limpio dedicado y del tama o adecuado b Utilizando un micropipeteador a ada 200 uL de TCR B al TCR CT Mezcle bien la soluci n mediante rotaci n Etiquete el recipiente Anote las iniciales del usuario la fecha de preparaci n y los dos n meros de lote Nota Para un n mero m s peque o de reacciones muestras y controles utilice el siguiente m todo para calcular los vol menes de TCR CT y TCR B Volumen de TC
20. S S S _ N oO tT wo RLU x1 000 Figura 4 Frecuencia de la distribuci n de las RLU para el ensayo APTIMA CT Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 45 502184ES Rev D Valores esperados de los sistemas DTS Tabla 3 Distribuci n de las RLU del ensayo APTIMA CT RLU x1 000 100 lt 1 000 lt 2 000 lt 3 000 lt 4 000 lt 5 000 lt 0 lt 10 10 lt 20 20 lt 30 30 lt 40 40 lt 50 50 lt 100 1 000 2 000 3 000 4 000 5 000 6 000 gt 6 000 Total 0 50 22 14 16 18 92 1 035 de positivos Total de positivos 0 43 17 7 11 10 25 126 falsos TVC 0 18 4 1 4 4 6 28 TVP 0 7 5 2 1 2 2 6 TF 0 9 2 3 2 2 5 26 0 3 4 0 1 0 3 32 OF 0 5 2 0 1 0 6 12 OM 0 1 0 1 2 2 3 22 AENA EEN CE Totalde 6293 48 10 8 6 0 negativos Total de negativos 31 1 0 1 0 0 falsos TVC 4 0 0 1 0 0 TVP 1 0 0 0 0 0 TF 3 0 0 0 0 0 4 1 0 0 0 0 OF 10 0 0 0 0 0 OM 9 0 0 0 0 0 E A ESA IA V TVC torunda vaginal recogida por el cl nico TVP torunda vaginal recogida por paciente asintom tica TF torunda endocervical femenina TM torunda uretral masculina OF orina femenina OM orina masculina Una columna sombreada denota una zona equ voca Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 46 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Rendimiento clinico en sistemas DTS Consulte e
21. comunicaron 1 307 893 de casos nuevos 426 0 por cada 100 000 personas de infecciones por CT a los Centros para el control de enfermedades en 2010 5 Chlamydiae es una bacteria intracelular estricta inm vil y gram negativa Las especies CT est n compuestas de quince serotipos A B Ba C D E F G H I J K L1 L2 y L3 que pueden provocar enfermedades en humanos 28 Los serotipos del D al K son la causa principal de infecciones clamidiales genitales en hombres y mujeres 20 C trachomatis puede provocar uretritis no gonoc cica epididimitis proctitis cervicitis salpingitis aguda y enfermedad inflamatoria p lvica 3 13 22 23 Las infecciones por C trachomatis suelen ser asintom ticas tanto en hombres como en mujeres Los ni os nacidos de madres infectadas tienen un riesgo considerablemente mayor de padecer conjuntivitis de inclusi n y neumon a clamidial 1 10 21 Hist ricamente se han utilizado varios m todos para la detecci n de CT en los laboratorios cl nicos incluido el cultivo celular la prueba de inmunofluorescencia directa y el enzimoinmunoensayo Metodolog as m s recientes de detecci n de CT incluyen ensayos de sonda de DNA directa y pruebas de amplificaci n de cido nucleico nucleic acid amplification test NAAT El cultivo celular se consider en su d a el patr n de referencia para la detecci n de CT Los cultivos son muy espec ficos pero publicaciones recientes han demostrado que las NAA
22. de l quido continuo 18 Encienda la bomba de vac o y desconecte el peine m ltiple de aspiraci n en el primer conector entre el peine m ltiple de aspiraci n y el frasco separador Aseg rese de que el vacu metro cumpla la especificaci n de la prueba de fugas Esta lectura puede tardar 15 segundos Vuelva a conectar el peine m ltiple de aspiraci n y aseg rese de que el vacu metro cumple la especificaci n del nivel de vac o Deje encendida la bomba de vac o hasta que hayan finalizado todos los pasos de captura seleccionada y el tubo del peine m ltiple de aspiraci n est seco 19 Conecte firmemente el peine m ltiple de aspiraci n al primer conjunto de puntas Aspire todo el l quido bajando las puntas para introducirlas en la primera TTU hasta que entren brevemente en contacto con los fondos de los tubos No mantenga las puntas en contacto con los fondos de los tubos 20 Una vez completada la aspiraci n expulse las puntas a su TTC original Repita los pasos de aspiraci n para el resto de las TTU usando una punta dedicada para cada muestra 21 Coloque el peine m ltiple de distribuci n sobre cada una de las TTU y usando la bomba de la estaci n de distribuci n dispense 1 0 mL de soluci n de lavado APTIMA en cada uno de los tubos de la TTU 22 Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y retire la gradilla de la base magn tica del TCS Agite la gradilla una vez en el mezclador v rtex multitubo Consulte Notas de procedi
23. del dep sito de vac o Retire el tap n y a ada cuidadosamente 400 mL de soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 Ma 1 0 M al frasco o 1 L si se utiliza una botella de desechos de 10 L Nota Esto se puede llevara cabo en una campana extractora de humos p ara no liberar gases en el laboratorio e Tape la botella de desechos y agite con una rotaci n suave el contenido hasta que est completamente mezclado f Deje que la botella de desechos repose durante 15 minutos y a continuaci n deseche el contenido desecho g Enjuague la botella de desechos con agua para eliminar todo resto de desechos h Tape la botella de desechos vac a y col quela en el alojamiento del dep sito de vac o Conecte el conector de desconexi n r pida a la unidad TCS Deseche los guantes con cuidado 4 Unidad TCS Limpie las superficies de la unidad TCS el peine m ltiple de aspiraci n y las puntas eyectoras del tamp n de lavado con toallas de papel humedecidas con una soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Despu s del paso de hipoclorito de sodio enjuague con agua y luego seque del todo las superficies con toallas de papel 5 Gradillas Sumerja las gradillas en una soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M comprobando que la soluci n las cubra Mantenga las gradillas sumergidas durante 10 minutos Una exposici n m s prolongada puede da arlas Enjuague bien l
24. durante 15 minutos antes de desecharlas El director del laboratorio debe establecer m todos de manipulaci n y eliminaci n adecuados Notas de procedimiento A Controles Para trabajar correctamente con el software del ensayo APTIMA el control negativo para CT que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT debe estar en la primera posici n de la primera TTU El control positivo para CT que est etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC debe estar en la segunda posici n de la primera TTU La colocaci n en la posici n incorrecta provocar el fallo del ciclo Los controles adicionales deben introducirse como muestras de paciente y su validez deber ser supervisada por el usuario El control positivo para GC sirve como control negativo para el ensayo APTIMA CT B Pipeteo de controles y muestras El volumen de control o muestra a adido al tubo de reacci n deber ser de 400 uL 100 uL Se recomienda la inspecci n visual del volumen pipeteado al tubo de reacci n para garantizar que se transfiere el volumen adecuado Se necesita un volumen adecuado de control o de muestra para conseguir resultados exactos Si no se ha pipeteado el volumen correcto vuelva a pipetear el wTCR CT y el control o muestra en un nuevo tubo de reacci n C Reactivos La soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda puede precipitar mientras est almacenada Si esto ocurre caliente la soluci n de reconstituci n de reactiv
25. el control positivo para CT APTIMA que est etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC act an como controles para los pasos de captura seleccionada amplificaci n y detecci n del ensayo En cumplimiento de las directrices o requisitos de las normativas locales regionales y nacionales o de las organizaciones de acreditaci n se pueden incluir controles adicionales para lisis celular y estabilizaci n del RNA El control negativo para CT que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT contiene rRNA de GC no infeccioso Si se desea se pueden solicitar controles adicionales en la forma de kit La preparaci n correcta de las muestras se confirma visualmente por la presencia de una sola torunda de recogida APTIMA en un tubo de transporte de muestras en torunda un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina O la ausencia de una torunda en un tubo de transferencia de muestras APTIMA para muestras de Pap en medio l quido Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 38 502184ES Rev D Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente Los controles positivos deben producir los siguientes resultados de la prueba Resultado Control RLU totales x1 000 de CT Control positivo GC m Control negativo CT O Negativo Control positivo CT gt 100 y lt 12 000 Positivo Control negativo GC Un resultado d
26. en el mezclador v rtex multitubo la velocidad m s baja fije la gradilla y encienda el aparato Aumente lentamente la velocidad hasta que el l quido suba hasta la mitad del tubo Agite durante 10 segundos la cantidad de tiempo indicada o hasta que el color sea uniforme A continuaci n reduzca la velocidad al m nimo antes de apagar el mezclador v rtex multitubo y retirar la gradilla Las mezclas de reacci n nunca deben tocar las tarjetas de sellado G Ba os de agua 1 El nivel de agua en los ba os de agua debe mantenerse con una profundidad entre 3 8 y 5 cm de 1 5 a 2 0 pulgadas medido desde la bandeja de metal de apoyo en el fondo del ba o de agua hasta la superficie del agua Esto garantiza la transferencia de calor adecuada 2 Para evitar la contaminaci n cruzada los ba os de agua deben dedicarse a un paso espec fico del ensayo H Descontaminaci n 1 Superficies y pipeteadores Las superficies de las mesas de trabajo del laboratorio y los pipeteadores se deben descontaminar regularmente con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Las soluciones de cloro pueden picar el equipo y el metal Enjuague a fondo con agua para evitar que se pique 2 Peine m ltiple de aspiraci n del TCS a Coloq
27. la impresi n cl nica puede ser necesario recoger una nueva muestra W Los clientes deber n validar independientemente un proceso de transferencia LIS Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 42 502184ES Rev D Resultados del estudio clinico Resultados del estudio clinico El rendimiento del ensayo APTIMA CT se estableci en dos estudios cl nicos multic ntricos realizados en Norteam rica En la primera investigaci n cl nica se realizaron dos estudios Primero el estudio de muestras cl nicas estableci la sensibilidad la especificidad y los valores predictivos del ensayo APTIMA CT utilizando muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente y muestras de orina masculina y femenina El segundo estudio en la primera investigaci n cl nica evalu la precisi n del ensayo APTIMA CT cuando se realiz de acuerdo con las directrices NCCLS 16 La segunda investigaci n cl nica estableci los valores de la sensibilidad la especificidad y predictivos del ensayo APTIMA CT utilizando soluci n PreservCyt un componente del sistema ThinPrep 2000 Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se evaluaron tambi n para precisi n en laboratorio con el ensayo APTIMA CT Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 43 502184ES Rev D Valores esperados de los sistemas DTS Valores esperados de los sistemas DTS Prevalencia La prevalenc
28. la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa en la que se vayan a preparar los reactivos y las muestras con cubiertas absorbentes con forro de pl stico que est n limpias para mesas de laboratorio B Reconstituci n y preparaci n de reactivos de un nuevo kit Nota La reconstituci n de los reactivos debe realizarse antes de iniciar cualquier tarea en el TIGRIS DTS System 1 Para reconstituir los reactivos de amplificaci n CT enzim tico y de sonda CT para los kits de 100 pruebas y de 50 pruebas combine los frascos de reactivo liofilizado con la soluci n de reconstituci n Si las soluciones de reconstituci n est n refrigeradas espere a que se equilibren a la temperatura ambiente antes de utilizarlas a Empareje cada soluci n de reconstituci n con su reactivo liofilizado Aseg rese de que existe correspondencia de colores en las etiquetas de la soluci n de reconstituci n y del reactivo liofilizado antes de conectar el collar de reconstituci n b Compruebe los n meros de lote en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados c Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte con firmeza el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial figura 2 paso 1 d Abra
29. lo el kit de transferencia de muestras APTIMA S Una vez realizada la perforaci n el l quido puede salirse de los tapones de los tubos de transporte APTIMA bajo determinadas condiciones Siga las instrucciones en el Procedimiento de prueba adecuado para prevenir este caso Informaci n para los ensayos T No se ha evaluado el rendimiento de las muestras de torunda vaginal en mujeres embarazadas U No se ha evaluado el rendimiento de las muestras en torundas endocervicales vaginales o uretrales masculinas las muestras de orina masculina o femenina ni las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt en adolescentes menores de 16 a os Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 5 502184ES Rev D Informaci n general V No utilice este kit despu s de su fecha de caducidad W No intercambie mezcle ni combine reactivos de ensayo de kits con n meros de lotes diferentes Los controles y fluidos de ensayo APTIMA pueden ser de diferentes n meros de lote Informaci n de los sistemas DTS X Se deben utilizar puntas con tapones hidrof bicos Se necesita un m nimo de dos pipetas de repetici n para su uso de forma dedicada con este ensayo una para uso en los pasos de captura seleccionada y amplificaci n y otra para uso en los pasos del HPA Se deben dedicar dos micropipeteadores para su uso de forma dedicada con este ensayo uno para la transferencia de muestras y el otro para la preparaci n de reactivos Todos los pipeteadore
30. muestras de orina utilice s lo el kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras de orina masculina y femenina Para muestras de torunda vaginal recogidas por el cl nico y por la paciente utilice s lo el kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 4 502184ES Rev D Informaci n general K Las fechas de caducidad que figuran en los kits de recogida son v lidas para el centro de recogida y no para el laboratorio de an lisis Las muestras recogidas en cualquier momento antes de la fecha de caducidad del kit de recogida y transportadas y almacenadas de acuerdo con el prospecto son v lidas para el an lisis a n cuando haya pasado la fecha de caducidad en el tubo de recogida L La soluci n PreservCyt se ha validado como medio alternativo para el an lisis con el ensayo APTIMA CT Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt procesadas con el procesador ThinPrep 3000 u otros instrumentos no se han evaluado en pruebas de detecci n de Chlamydia trachomatis usando el ensayo APTIMA CT M Despu s de a adir la orina el nivel de l quido en el tubo de transporte de orina debe estar entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta del tubo De lo contrario la muestra debe rechazarse N Mantenga las condiciones de almacenamiento apropiadas durante el env o de muestras para garantizar la integridad de las mismas No se ha evaluado la estabilidad de las muestras en c
31. positivo de diana alta c TIGRIS DTS System 3 no tuvo ning n resultado positivo CT falso directamente despu s de un positivo de diana alta Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 70 502184ES Rev D Rendimiento analitico del sistema PANTHER Rendimiento analitico del sistema PANTHER Estudio de concordancia de panel clinico enriquecido Las muestras de orina negativas individuales se enriquecieron con serotipo G de CT para crear un panel de 120 muestras CT positivas Muestras de paneles positivos para CT se enriquecieron con organismos a 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL o 25 IFU mL 0 5 fg ensayo 5 fg ensayo o 50 fg ensayo Ademas se recogieron 120 muestras de orina negativas para CT Los paneles positivos y negativos se analizaron en tres sistemas PANTHER y tres TIGRIS DTS Systems El porcentaje de concordancia positiva entre el sistema PANTHER y el TIGRIS DTS System fue del 100 con un l mite inferior para el intervalo de confianza de 95 de 98 9 para CT El porcentaje de concordancia negativa entre el sistema PANTHER y el TIGRIS DTS System fue del 100 con un l mite inferior para el intervalo de confianza de 95 de 98 9 Los resultados del estudio se muestran en la tabla 16 Tabla 16 Estudio de concordancia de panel cl nico enriquecido concordancia con los resultados esperados de CT Concentraci n e TIGRIS PANTHER Muestra del panel R plicas 5 E 5 IFU mL fg ensayo concordancia concordancia Positiva muy
32. resultado positivo conocido pueden servir de controles si se preparan y analizan junto con muestras desconocidas Las muestras utilizadas como controles de preparaci n deben almacenarse manipularse y analizarse conforme a las instrucciones del prospecto Los controles de preparaci n Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 39 502184ES Rev D Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente de muestras deben interpretarse de la misma forma que las muestras de pruebas de pacientes Consulte Interpretaci n de la prueba Result ados de control de calid ad QC y del paciente Resultados de pruebas de pacientes D Resultados de pruebas de pacientes 1 Silos controles de un ciclo no generan los resultados esperados no deben registrarse los resultados de la prueba en muestras de pacientes en ese mismo ciclo 2 Resultados de muestras de torunda de orina y de Pap en medio l quido PreservCyt Consulte Notas m s abajo a Resultados iniciales CT pos Positivo para CT rRNA CT neg Supuestamente negativo para CT rRNA CT equiv La muestra debe volverse a analizar No v lido La muestra debe volverse a analizar b Resultados de la prueba repetida CT pos Positivo para CT rRNA CT neg Supuestamente negativo para CT rRNA CT equiv Indeterminado se debe recoger una nueva muestra No v lido Indeterminado se debe recoger una nueva muestra En esta categor a se i
33. tubo de reacci n 9 El primer tubo de reacci n del ensayo debe contener el control negativo y el segundo tubo de reacci n el control positivo a La etiqueta del control negativo para el ensayo APTIMA CT es azul verdosa El texto de la etiqueta identifica el control negativo como CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT La etiqueta del control positivo para el ensayo APTIMA CT es rosa El texto de la etiqueta identifica el control positivo como CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC b Sostenga el tubo de control negativo tubo con la etiqueta azul verdosa en una mano o mant ngalo en una gradilla Utilice un micropipeteador perfore el tap n con cuidado de que la punta no llegue hasta el fondo del tubo A ada 400 uL de control negativo tubo con la etiqueta azul verdosa al primer tubo de reacci n De la misma forma y utilizando una nueva punta de pipeta a ada 400 uL de control positivo tubo con la etiqueta rosa al segundo tubo de reacci n 10 Contin e con el procedimiento de preparaci n de la gradilla a adiendo 400 uL de cada muestra al resto de los tubos de reacci n Utilice una nueva punta de pipeta para cada muestra y control El volumen aceptable de muestra o de control a adido a un tubo de reacci n es 400 uL 100 uL Consulte Notas de procedimiento Pipeteo de controles y muestras Captura seleccionada El uso del sistema de captura seleccionada GEN PROBE se describe en el Target Capture System Operator s Manual
34. y el vial de vidrio figura 2 paso 8 Advertencia Evite que se forme espuma al reconstituir los reactivos La espuma compromete la detecci n de nivel en el TIGRIS DTS System A E E gr y Ga I E B A NX TW Ne Figura 2 Proceso de reconstitucion del TIGRIS DTS System 2 Prepare el TCR de trabajo CT wTCR CT para el kit de 100 pruebas a b f g Empareje los frascos apropiados del TCR CT y TCR B Compruebe los n meros de lote de los reactivos en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados en el kit Abra el frasco de TCR CT y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia Abra el frasco de TCR B y vierta todo su contenido en el frasco de TCR CT Es normal que quede una peque a cantidad de l quido en el frasco de TCR B Tape el frasco de TCR CT y agite con una rotaci n suave la soluci n para mezclar el contenido Evite que se forme espuma durante este paso Anote en la etiqueta las iniciales del usuario y la fecha actual Deseche el frasco y el tap n de TCR B 3 Prepare el TCR de trabajo CT wTCR CT para el kit de 50 pruebas a b Empareje los frascos apropiados del TCR CT y TCR B Compruebe los n meros de lote de los reactivos en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados en el kit Abra el frasco de TC
35. 0 81 5 100 94 0 100 l 100 95 7 98 2 Sint i 1 i MOS oe 1 22 89 4 100 78 1 99 9 90 4 100 mone 100 100 100 CO Al 0 e 19 91 4 100 82 4 100 94 0 100 100 100 100 PreservCyt Mujeres 81 39 0 0 42 91 0 100 91 6 100 95 5 100 ae 100 100 100 Miele mas xA y o a 91 4 100 88 8 100 95 0 100 pees 100 100 100 Hombres lt 60 23 9 0 a 85 2 100 90 5 100 94 0 100 l 100 100 100 Asint Mujeres 42 23 0 0 19 85 2 100 82 4 100 91 6 100 ai 100 100 100 E o 0 a 83 2 100 90 0 100 93 5 100 PreservCyt Mujeres 35 25 0 0 10 199 100 100 86 3 100 69 2 100 90 0 100 indica un resultado positivo un resultado negativo IC intervalo de confianza Muestras de torundas vaginales y endocervicales combinadas La muestra tuvo un resultado equ voco final en el TIGRIS DTS System Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 65 502184ES Rev D Concordancia de las muestras clinicas del TIGRIS DTS System Tabla 12 Estudio de concordancia de las muestras clinicas concordancias positivas negativas y generales por estado de s ntomas continuaci n de de Sintoma Muestra Sexo N DTS DTS DTS DTS concordancia concordancia concordancia TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva negativa general IC 95 IC 95 IC 95 REEI 99 0 99 0 99 0 Mujeres 205 1 104 1 1 i 94 8 100 946 100 96 5 99 9 SS 100 100 100 BONE en lt
36. 0 para la muestra de orina fue del 100 95 1 100 y para la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt fue del 100 95 1 100 Estudio del panel cl nico enriquecido con rRNA de CT El estudio del panel cl nico enriquecido de rRNA de CT evalu la concordancia entre los dos sistemas el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS utilizando seis paneles cl nicos de CT preparados por Gen Probe enriquecidos con 0 a 5 000 fg rRNA ensayo de CT Los paneles cl nicos de CT se crearon a partir de muestras de torundas endocervicales torundas vaginales torundas uretrales orina masculina orina femenina y Pap en medio l quido PreservCyt que ten an resultados ensayo APTIMA CT negativos en los sistemas DTS cuando se analizaron en Gen Probe Las muestras negativas se mezclaron por tipo de muestra se enriquecieron o no con rRNA de CT y se dividieron en al cuotas como r plicas de cada muestra del panel Las r plicas de cada una de las 6 muestras del panel con diferentes niveles de rRNA enriquecido se combinaron para crear un panel cl nico para cada tipo de muestra Cada panel conten a un total de 132 r plicas La tabla 14 presenta el porcentaje de concordancia para cada nivel de rRNA en los paneles de torunda endocervical torunda vaginal torunda uretral orina masculina orina femenina y Pap en medio l quido PreservCyt respectivamente con los resultados CT esperados para el TIGRIS DTS System y para los sistemas DTS La concentraci n abarc
37. 0 C Todas las muestras dieron positivo para CT en ambas condiciones de almacenamiento B Muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Los datos que apoyan las condiciones de env o y almacenamiento recomendadas para las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se generaron con muestras de Pap en medio l quido procesadas y sin procesar negativas Para las muestras no procesadas se analizaron cuatro mezclas de muestras en soluci n PreservCyt que se hab an conservado en el vial con soluci n PreservCyt Cada mezcla de muestras se enriqueci con 1 a 10 IFU CT ensayo se conserv a 2 C 10 C y 30 C y luego se analiz al inicio del ensayo y en los d as 5 7 8 14 18 21 25 y 36 Todas las muestras enriquecidas fueron positivas para CT en todas las ocasiones y temperaturas Para las muestras procesadas se utilizaron cuatro mezclas de muestras en soluci n PreservCyt para determinar la estabilidad de las muestras procesadas a una temperatura entre 2 C y 30 C Cada mezcla de muestras negativas se enriqueci con 1 a 10 IFU CT ensayo y luego se analiz al inicio del ensayo Antes del procesamiento las muestras en soluci n PreservCyt se almacenaron a 30 C durante siete 7 d as para simular el lapso de tiempo entre la recogida de las muestras el procesamiento de Pap y el env o a un laboratorio de an lisis microbiol gicos Despu s de siete d as a 30 C se transfirieron al cuotas de 1 mL de cada mezcla a un tubo de tran
38. 00 100 Papen medio liquido Baja 5 30 100 100 100 97 2 100 PreservCyt Media 50 30 100 100 Alta 5 000 30 100 100 Estudio de equivalencia de la especificidad analitica Para un ensayo de amplificaci n de cidos nucleicos la especificidad anal tica con respecto a organismos individuales est en gran medida determinada por la qu mica del ensayo por ejemplo las secuencias oligonucle tidas m s que por la plataforma Dado que los reactivos del ensayo APTIMA CT son id nticos entre el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS los experimentos de especificidad anal tica del TIGRIS DTS System se dise aron para centrarse en los aislados de cultivo m s desafiantes Estos organismos inclu an los conocidos por sus reacciones cruzadas en otros ensayos de amplificaci n Se seleccionaron 24 aislados de cultivo del panel de organismos de la tabla 11 incluidos 3 organismos que est n ntimamente relacionados con CT Todos los organismos analizados dieron resultados negativos en el TIGRIS DTS System Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 69 502184ES Rev D Rendimiento analitico del TIGRIS DTS System Estudio de equivalencia de las substancias interferentes Se utiliz sangre completa una sustancia frecuentemente hallada en las muestras urogenitales y que se sabe que interfiere en algunos ensayos de amplificaci n para establecer que el TIGRIS DTS System tolera niveles semejantes de sustancias potencialmente interferentes a los sistemas DTS
39. 00 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 1 IFU CT 5 fg ensayo PGC Control positivo GC Control negativo CT APTIMA 5 x 1 7 mL NCT cido nucleico GC no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC 250 fg ensayo Los equivalentes de rRNA se calcularon a partir del tama o del genoma y de la raz n DNA RNA por c lula estimada de cada organismo Material necesario que debe adquirirse por separado Nota Se indica el n mero de cat logo de los materiales que pueden adquirirse de Gen Probe a menos que se especifique lo con trario N de cat logo Sistema PANTHER 303095 Kit de fluidos del ensayo APTIMA 303014 1 000 pruebas soluci n de lavado APTIMA tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA y reactivo de aceite APT IMA Kit de Auto Detect APTIMA 303013 1 000 pruebas Unidades multitubo Multi tube Unit MTU 104772 02 Juego de bolsas de desechos PANTHER 902731 Cubierta para contenedor de desechos PANTHER 902714 O kit para ciclo PANTHER 303096 5 000 pruebas contiene MTU bolsas de desechos cubiertas para contenedores de desechos fluidos de ensayo y reactivos Auto Detect Puntas conductoras de 1 000 uL detectoras de l quido 10612513 Tecan Kit de transferencia de muestras APTIMA 301154C para utilizar con muestras en soluci n PreservCyt Kit de recogida de muestras de torunda vagina
40. 9 0 96 3 99 9 94 7 100 2 198 52 18 128 0 26 3 100 93 2 100 87 7 81 2 92 5 74 3 100 3 114 9 4 101 0 7 9 100 664 100 96 2 90 5 99 0 69 2 100 4 260 19 11 229 1 77 950 75 1 99 9 95 4 91 9 97 7 63 3 99 6 Torunda 5 199 13 5 181 0 6 5 100 75 3 100 97 3 93 8 99 1 72 2 100 6 294 33 9 252 0 112 100 89 4 100 96 6 93 6 98 4 78 6 100 7 1022 8 0 92 2 98 80 0 44 4 97 5 100 961 100 100 97 9 8 48 3 1 44 O 63 100 292 100 97 8 88 2 99 9 75 0 100 Todos 1 443 173 50 1 217 3 12 2 983 95 1 99 6 96 1 94 8 97 1 77 6 99 8 Mujeres 1 227 34 5 187 1 15 4 97 1 85 1 99 9 97 4 94 0 99 1 87 2 99 5 2 198 51 2 144 1 263 98 1 89 7 100 98 6 95 1 99 8 96 2 99 3 3 113 9 1 103 O 80 100 664 100 99 0 948 100 90 0 100 4 265 18 4 241 2 7 5 90 0 68 3 98 8 98 4 95 9 99 6 81 8 99 2 Orina 5 199 11 4 182 2 65 846 54 6 98 1 97 8 946 994 73 3 98 9 6 295 29 10 252 4 11 2 87 9 71 8 96 6 96 2 93 1 98 2 744 98 4 7 102 10 0 92 0 98 100 69 2 100 100 96 1 100 100 100 0 8 49 3 O 46 6 1 100 29 2 100 100 923 100 100 100 Todos 1 448 165 26 1 247 10 12 1 94 3 89 7 97 2 98 0 97 0 98 7 86 4 99 2 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 51 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 6 Sensibilidad especificidad y valores predictivos del ensayo APTIMA CT en relaci n al estado de infecci n del paciente por centro cl nico y en general continuaci n Mues
41. 93 9 0 27 94 5 100 93 5 100 97 0 100 100 97 6 99 0 i 1 Todos Mujeres 98 56 0 1 41 93 6 100 87 4 99 9 94 4 100 cone 100 100 100 Hombres dtoe ae 9 g 3 94 1 100 93 4 100 96 8 100 100 100 100 PreservCyt Mujeres 116 64 0 0 52 94 4 100 93 2 100 96 9 100 indica un resultado positivo un resultado negativo IC intervalo de confianza Muestras de torundas vaginales y endocervicales combinadas La muestra tuvo un resultado equ voco final en el TIGRIS DTS System Estudio de precisi n El efecto de varios factores en la variabilidad del rendimiento del ensayo APTIMA CT en el TIGRIS DTS System se evalu utilizando paneles de reproducibilidad de ETS de 12 muestras Las muestras del panel conten an de 0 a 5 000 fg rRNA de CT ensayo El panel incluy muestras de panel con concentraciones de CT a la sensibilidad anal tica declarada de 5 fg rRNA de CT ensayo Los paneles se analizaron en 1 centro de an lisis externo y en Gen Probe usando 2 lotes de reactivos de ensayo APTIMA CT En Gen Probe dos usuarios realizan cada uno tres listas de trabajo v lidas por lote de reactivo en dos instrumentos TIGRIS DTS System por separado En el centro de an lisis externo dos usuarios realizaron cada uno tres listas de trabajo v lidas por lote de reactivo en un instrumento TIGRIS DTS System Una lista de trabajo consist a de controles de ciclo y seis paneles de 12 muestras La reproducibilida
42. CF de 420 para asegurarse de que no quede l quido en el tap n c Si el nivel de l quido de un tubo de muestra de orina no est entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta la muestra debe rechazarse No perfore un tubo sobrellenado d Si un muestra de orina contiene precipitados caliente la muestra a 37 C durante un m ximo de 5 minutos Si el precipitado no se vuelve a disolver aseg rese visualmente de que ste no obstaculice la entrega de la muestra Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 15 502184ES Rev D Sistemas DTS Nota Una incorrecta realizaci n de los pasos 4a c puede provocar una descarga de l quido del tap n del tubo de muestras 5 Sise van a analizar muestras con tapones est ndar no penetrables se deben centrifugar durante 5 minutos a una fuerza centr fuga relativa Relative Centrifugal Force RCF de 420 para llevar todo el l quido al fondo del tubo antes de quitar el tap n Evite salpicaduras y todo tipo de contaminaci n cruzada 6 Coloque suficientes TTU en la gradilla para unidades de diez tubos Ten Tube Unit TTU para contener los controles y las muestras 7 Sise desea disponer de una lista de trabajo debe crearla en este momento Para instrucciones sobre c mo crear una lista de trabajo consulte el APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual del usuario del software del ensayo APTIMA 8 Mezcle bien con el wTCR CT Use la pipeta de repetici n para a adir 100 uL en cada
43. CY Neg 0 fg mL 540 0 7 100 0 7 N C 0 5 N C 0 3 N C 0 4 N C 0 N C Baja 12 fg mL 216 7 143 4 100 200 3 2 8 335 6 4 7 207 7 2 9 537 3 7 5 558 8 7 8 Medio 250 fg mL 108 7 084 9 100 162 2 2 3 275 1 3 9 159 5 2 3 546 3 7 7 578 2 8 2 Medio 2 500 fg mL 108 6 991 1 100 150 7 2 2 279 4 4 0 117 8 1 7 532 3 7 6 534 9 7 7 Alta 5 000 5 135 fg mL 324 7 1334 100 229 2 3 2 301 0 4 2 129 0 1 8 531 7 7 5 618 3 8 7 SD desviaci n est ndar CV porcentaje del coeficiente de variaci n concord porcentaje de concordancia Nota La variabilidad de algunos factores podr a ser num ricamente negativa lo que puede ocurrir si la variabilidad debida a dichos factores es muy peque a Cuando esto sucede la variabilidad medida en funci n de la SD y el CV se establece en cero 16 N C no corresponde para el analito negativo La precisi n en laboratorio de muestras PreservCyt con el ensayo APTIMA CT se determin a adiendo a los viales de PreservCyt 20 CT IFU por vial 0 1 IFU por reacci n y 100 CT IFU por vial 0 5 IFU por reacci n Como controles positivos y negativos se analizaron viales con un contenido de 1 000 CT IFU por vial 5 IFU por reacci n y viales de PreservCyt no enriquecidos Se dividieron diez viales enriquecidos a cada nivel IFU y diez viales no enriquecidos entre dos usuarios Los usuarios agitaron con mezclador v rtex los viales y luego transfirieron 14 al cuotas de 1 0 mL cada una por vial a 14 tubos d
44. H Los reactivos de los frascos para 50 pruebas almacenados en el TIGRIS DTS System son estables durante 48 horas en el instrumento Los reactivos de los frascos de 100 pruebas almacenados en el TIGRIS DTS System tienen 96 horas de estabilidad cargados J Los reactivos almacenados en el sistema PANTHER tienen 72 horas de estabilidad cargados K Tanto el reactivo de sonda CT como el reactivo de sonda reconstituido CT son fotosensibles Almacene los reactivos al abrigo de la luz L Una vez calentados a temperatura ambiente algunos tubos de controles pueden aparecer turbios o contener precipitados La turbiedad o la precipitaci n asociadas a los controles no afectan al rendimiento del control Los controles se pueden utilizar est n claros o turbios precipitados Si se desean controles claros se puede acelerar la solubilizaci n incub ndolos en el extremo superior del rango de temperatura ambiente de 15 C a 30 C M No congele los reactivos Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 7 502184ES Rev D Informaci n general Recogida y almacenamiento de muestras El ensayo APTIMA CT est dise ado para detectar la presencia de CT en muestras de torunda endocervicales vaginales y uretrales masculinas recogidas por el cl nico muestras de torundas vaginales recogidas por la paciente muestras de orina masculina y femenina y muestras de Pap en medio l quido PreservCyt No se ha evaluado el rendimiento con muestras distintas a l
45. IGRIS DTS System respectivamente Para todos los sujetos sintomaticos y asintomaticos combinados la concordancia general fue del 99 0 203 205 para torunda femenina torundas endocervicales y vaginales combinadas del 100 120 120 para torunda uretral masculina del 99 0 97 98 para orina femenina del 100 115 115 para orina masculina y del 100 116 116 para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Debido al n mero relativamente m s peque o de muestras procedentes de sujetos asintom ticos es posible que estos hallazgos no puedan generalizarse a las pruebas del ensayo APTIMA CT TIGRIS DTS System con muestras de sujetos asintom ticos Consulte las tablas 4 y 5a para los c lculos estimados de la sensibilidad y la especificidad del ensayo APTIMA CT de pruebas en los sistemas DTS La sensibilidad y la especificidad del ensayo APTIMA CT cuando se utiliza el TIGRIS DTS System es de esperar que sea similar a la vista de los hallazgos de concordancia Tabla 12 Estudio de concordancia de las muestras cl nicas concordancias positivas negativas y generales por estado de s ntomas de de S ntoma Muestra Ss N DTS DTS DTS DTS concordancia concordancia concordancia TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva negativa general IC 95 IC 95 IC 95 o 98 4 98 6 98 5 Mujeres 1392 SS i ee 916 100 92 2 100 94 7 99 8 ae 100 100 100 a 4 9 9 13 916 10
46. MA Reactivo de captura seleccionada B APTIMA Control positivo CT Control negativo GC APTIMA Control positivo GC Control negativo CT APTIMA Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 6 502184ES Rev D Informaci n general B Los siguientes reactivos permanecen estables cuando se almacenan a una temperatura entre 2 C y 30 C Soluci n de reconstituci n de reactivo de amplificaci n CT APTIMA Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico APTIMA Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda CT APTIMA Reactivo de selecci n APTIMA C Los siguientes reactivos permanecen estables cuando se almacenan a una temperatura entre 15 C y 30 C temperatura ambiente Reactivo de captura seleccionada CT APTIMA Soluci n de lavado APTIMA Tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA Reactivo de aceite APTIMA D El reactivo de captura seleccionada de trabajo CT wTCR CT se mantiene estable durante 60 d as cuando se almacena a una temperatura entre 15 C y 30 C No lo refrigere E Despu s de la reconstituci n el reactivo enzim tico el reactivo de amplificaci n para CT y el reactivo de sonda para CT permanecen estables durante 60 d as cuando se almacenan a una temperatura entre 2 C y 8 C F Deseche los reactivos reconstituidos y el wTCR CT sin usar despu s de 60 dias o una vez pasada la fecha de caducidad del lote maestro lo que suceda primero G Los controles son estables hasta la fecha indicada en los viales
47. Manual Manual del usuario del software del ensayo APTIMA Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 18 502184ES Rev D Sistemas DTS c Asegurese de que los volumenes de Auto Detect 1 y 2 alcancen para completar las pruebas d Prepare el lumin metro LEADER HC Para ello coloque una TTU vac a en la posici n para casete numero 1 y realice el protocolo de lavado Wash e Cargue las TTU en el lumin metro f Inicie sesi n en el ordenador Haga clic en Nuevo ciclo New Run seleccione el protocolo del ensayo APTIMA CT e introduzca el n mero de tubos controles y muestras Haga clic en Siguiente Next para iniciar el ciclo Nota El ciclo debe completarse en las 2 horas siguientes a la finalizaci n de la incubaci n del paso de selecci n g Prepare el fluido de desactivaci n mezclando vol menes iguales de soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M y tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA en un recipiente de pl stico con tap n grande Etiquete y escriba la fecha de caducidad en el recipiente de pl stico El fluido de desactivaci n permanece estable durante 4 semanas a temperatura ambiente Deseche el fluido de desactivaci n despu s de 4 semanas o despu s de haberse desactivado 100 muestras procesadas lo que suceda primero h Una vez retiradas del lumin metro las TTU utilizadas coloque las TTU en el contenedor del fluido de desactivaci n Deje que las TTU permanezcan en el contenedor
48. R mL n mero de reacciones 5 reacciones extra x 0 1 mL Volumen de TCR B mL Volumen de TCR mL 100 C Captura seleccionada La pipeta de repetici n utilizada en la captura seleccionada y la amplificaci n debe utilizarse de forma dedicada s lo en estos pasos Consulte Advertencias y precauciones para m s informaci n Preparaci n de las gradillas 1 Deje que los controles y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes del procesamiento 2 No agite las muestras con mezclador v rtex 3 Confirme visualmente que cada tubo de muestras satisface uno de los criterios siguientes a La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA azul en un tubo de transporte de muestras de torunda unisex b La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA rosa en un tubo de transporte de muestras de torunda vaginal c Un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina d La ausencia de una torunda en el tubo de transporte de muestras APTIMA con muestras de Pap en medio l quido PreservCyt 4 Inspeccione los tubos de muestras antes de perforarlos a Siun tubo de muestra contiene burbujas en el espacio entre el l quido y el tap n centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para eliminar las burbujas b Si un tubo de muestra tiene un volumen inferior al que se suele observar cuando se siguen las instrucciones de recogida centrif guelo durante 5 minutos a una R
49. R CT y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia Abra el frasco de TCR B y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia Extraiga la pipeta de transferencia de su envase Transfiera aproximadamente 2 mL de TCR CT al frasco de TCR B No deseche la pipeta de transferencia en este paso Vuelva a tapar el frasco de TCR B y mezcle por inversi n Transfiera el wTCR CT del frasco de TCR B de vuelta al frasco de TCR CT Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 27 502184ES Rev D TIGRIS DTS System i Repita el paso h varias veces hasta que la mezcla en el frasco de TCR B se haya transferido otra vez al frasco de TCR CT j Tape el frasco de TCR CT y agite con una rotaci n suave la soluci n para mezclar el contenido Evite que se forme espuma durante este paso k Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta Anote el n mero de lote del TCR B Deseche el frasco y el tap n de TCR B Deseche la pipeta de transferencia 4 Prepare el reactivo de selecci n a Compruebe que el n mero de lote del frasco de reactivo coincida con el n mero de lote de la hoja de c digos de barras del lote maestro b Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta Nota Mezcle bien mediante inversi n suave todos los reactivos antes de cargarlos en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos C Preparaci n de los reactivos par
50. Se a adi sangre nueva a mezclas de muestras de torundas cl nicas torundas vaginales orina y Pap en medio l quido PreservCyt luego se analizaron para determinar la posible interferencia en el ensayo en ausencia y presencia de CT seleccionado al equivalente de rRNA estimado de una IFU CT ensayo 5 fg ensayo Los equivalentes rRNA se calcularon en funci n del tama o del genoma y de la relaci n DNA RNA c lula estimada de cada organismo Las muestras se analizaron en dos TIGRIS DTS Systems Todas las muestras que conten an cido nucleico seleccionado dieron positivo al analizarse a una concentraci n del 10 de sangre en muestras de torunda muestras de torunda vaginal o muestras de Pap en medio l quido PreservCyt y del 30 de sangre en muestras de orina Todas las muestras que no conten an la diana dieron negativo para CT Estos resultados indican que a los niveles analizados no es probable que la sangre completa afecte al resultado CT en el TIGRIS DTS System Estudios de arrastre para el TIGRIS DTS System Para establecer que el TIGRIS DTS System reduce al m nimo el riesgo de resultados positivos falsos provocados por contaminaci n de arrastre se realiz un estudio utilizando paneles enriquecidos en tres TIGRIS DTS Systems El estudio utiliz un 20 de muestras con una diana alta y con un contenido de 1 x 10 fg rRNA de CT mL que se distribuyeron aleatoriamente entre un 80 de muestras negativas con un contenido de medios de tran
51. T tienen una sensibilidad cl nica m s alta que los cultivos 2 8 14 24 Debido a su menor sensibilidad cl nica y al rendimiento variable entre los distintos laboratorios muchos laboratorios han sustituido el cultivo por sondas de DNA directas y NAAT La primera generaci n de NAAT para CT tiene problemas tecnol gicos que han limitado su rendimiento Estos problemas incluyen el laborioso procesamiento de las muestras y la inhibici n de la muestra lo que puede provocar resultados negativos falsos 6 12 15 19 25 27 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 2 502184ES Rev D Informaci n general El ensayo para Chlamydia trachomatis APTIMA ensayo APTIMA CT es una NAAT de segunda generaci n que utiliza las tecnolog as de captura seleccionada amplificaci n mediada por transcripci n Transcription Mediated Amplification TMA y el ensayo de protecci n de la hibridaci n Hybridization Protection Assay HPA para simplificar el procesamiento de las muestras amplificar el rRNA seleccionado y detectar el amplicon respectivamente Ciertos estudios de comparaci n del rendimiento y la inhibici n de muestras en distintos sistemas de amplificaci n han demostrado los beneficios de las tecnolog as de captura seleccionada TMA y HPA 7 11 De acuerdo con las directrices de cribado de 2002 para Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae los CDC recomiendan una serie de opciones para el seguimiento en una prueba de cribado positi
52. a designada con un movimiento circular 3 Inserte inmediatamente la torunda en el tubo de transporte 4 Quiebre con cuidado el bastoncillo de la torunda en la l nea con la muesca tenga cuidado de que el contenido no salpique 5 Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de torunda 6 Repita los pasos del 2 al 5 en todas las reas en las que se vaya a aplicar la torunda Si los resultados de CT son positivos o ambiguos consulte Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente Para obtener informaci n adicional espec fica para el sistema PANTHER sobre el control de la contaminaci n consulte al servicio t cnico de Gen Probe Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 37 502184ES Rev D Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente A Interpretaci n de la prueba El software del ensayo APTIMA interpreta autom ticamente los resultados de la prueba utilizando el protocolo CT Los resultados de las pruebas pueden ser negativos equ vocos positivos o no v lidos de acuerdo con las RLU totales en el paso de detecci n v ase m s adelante Un resultado de prueba puede ser no v lido por encontrarse algunos valores de RLU fuera de los rangos normales esperados Los resultados iniciales equ vocos o no v lidos de la prueba deben volverse a analizar Int
53. a reactivos reconstituidos previamente 1 Losreactivos de amplificaci n CT enzim tico y de sonda CT previamente reconstituidos deben alcanzar la temperatura ambiente de 15 C a 30 C antes de que se inicie el ensayo 2 Siel reactivo de sonda CT reconstituido contiene precipitado que no se disuelve a temperatura ambiente caliente el frasco tapado a una temperatura que no exceda de 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento el reactivo de sonda CT se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Mezcle el reactivo de sonda CT por inversi n con cuidado de que no se forme espuma antes de cargarlo en el sistema 3 Mezcle bien cada reactivo mediante inversi n suave antes de cargarlo en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos 4 No llene hasta el borde los frascos de reactivos El TIGRIS DTS System reconocer y rechazar los frascos que est n llenos hasta el borde D Manipulaci n de muestras 1 Deje que los controles y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes del procesamiento 2 No agite las muestras en un mezclador v rtex 3 Confirme visualmente que cada tubo de muestras satisface uno de los criterios siguientes a La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA azul en un tubo de transporte de muestras de torunda unisex b La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA rosa en un tubo de transporte de muestras de torunda vaginal
54. a vaginal recogida por la paciente TVC torunda vaginal recogida por el clinico Tabla 1b Prevalencia de C trachomatis por centro clinico y general de acuerdo con los resultados del ensayo APTIMA CT utilizando muestras de Pap en medio liquido PreservCyt Centro N positivas N analizadas 1 17 0 17 100 2 3 2 4 124 3 7 4 35 475 4 4 2 12 287 5 5 4 16 297 6 5 5 20 364 Todos 6 3 104 1 647 Valores predictivos positivos y negativos para tasas de prevalencia hipot ticas en Norteam rica Los valores predictivos positivos y negativos VPP y VPN calculados para diferentes tasas de prevalencia hipot ticas con el ensayo APTIMA CT se muestran en la tabla 2 Estos c lculos se basan en las tasas de prevalencia hipot ticas y en la sensibilidad y la especificidad generales calculadas a partir del estado de infecci n del paciente para tres investigaciones cl nicas multic ntricas La sensibilidad y especificidad generales para CT fueron del 96 7 y del 96 8 respectivamente tabla 2 El VPP y el VPN reales para muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico de torunda vaginal recogidas por la paciente y de orina masculina y femenina se muestran en la tabla 6 para cada centro cl nico y en general El VPP y el VPN reales para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se muestran en la tabla 6a Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 44 502184ES Rev D Val
55. ados de muestras de torunda endocervical y de orina procedentes del ensayo APTIMA COMBO 2 disponible comercialmente y de la otra prueba NAAT disponible comercialmente Los sujetos se consideraron infectados con CT si dos de las cuatro muestras de torunda endocervical y de orina dieron positivo en el ensayo APTIMA COMBO 2 y en la otra prueba NAAT de referencia una muestra con resultado positivo en cada NAAT Los sujetos se consideraron no infectados si menos de dos resultados de NAAT de referencia fueron positivos Se utilizaron un total de 8 406 resultados del ensayo APTIMA CT para calcular la sensibilidad y la especificidad La sensibilidad y la especificidad para CT por sexo tipo de muestra y estado de s ntomas se presentan en la tabla 4 La tabla 6 presenta la sensibilidad la especificidad y los valores predictivos del ensayo APTIMA CT comparados con el estado Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 47 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS de infecci n del paciente para cada centro cl nico y en general Las tablas 7a 7d resumen el n mero de resultados de sujetos sintom ticos y asintom ticos designados como infectados o no infectados con CT de acuerdo con el algoritmo de estado de infecci n del paciente De los 2 787 sujetos inscritos 13 eran sujetos con estado de paciente infectado por CT desconocido Los sujetos se designaron con un estado de infecci n del paciente desconocido si faltaban resultados que hac an i
56. alor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 1 Use la pipeta de repetici n para a adir 75 uL de reactivo de amplificaci n reconstituido CT a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n en la gradilla deben ser ahora rojas Use la pipeta de repetici n para a adir 200 uL de reactivo de aceite a cada tubo de reacci n Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y ag telos en el mezclador v rtex multitubo Incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C 1 C durante 10 5 minutos Transfiera la gradilla al ba o de agua a 42 C 1 C e inc belo durante 5 2 minutos Con la gradilla en el ba o de agua retire con cuidado la tarjeta de sellado y con la pipeta de repetici n a ada 25 uL de reactivo enzim tico reconstituido a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n deben ser ahora naranjas 7 Cubra inmediatamente los tubos con tarjetas de sellado nuevas retire la gradilla del ba o de agua y mezcle los tubos de reacci n agitando suavemente la gradilla con la mano 8 Incube la gradilla en un ba o de agua a 42 C 1 C durante 60 15 minutos oak oN E Ensayo de protecci n de la hibridaci n Hybridization Protection Assay HPA Si se usa el ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 La pipeta de repetici n utilizada en los pasos de hibridaci n y selecci n debe utilizarse de forma dedicada s lo en estos pasos Consulte Advert
57. arse usando el procedimiento para muestras de orina a adiendo 2 0 mL de agua al tubo de transporte de la muestra de orina K Identificaci n y soluci n de problemas 1 Los valores bajos del control positivo pueden deberse a temperaturas incorrectas durante los distintos pasos del ensayo o a un tiempo de selecci n en el paso de selecci n mayor del recomendado 2 Se pueden producir fondos altos si el tiempo de selecci n en el paso de selecci n se acorta la temperatura de selecci n no es correcta o la mezcla es insuficiente despu s de la adici n del reactivo de selecci n 3 Siel control positivo APTIMA para GC que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT es positivo o equ voco para CT consulte Notas de procedimiento Contaminaci n del ensayo para m s informaci n Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 22 502184ES Rev D TIGRIS DTS System TIGRIS DTS System TIGRIS GS Los reactivos para el ensayo APTIMA CT se indican a continuaci n DTS para el TIGRIS DTS System Los s mbolos de identificaci n de los reactivos tambi n se indican junto al nombre del reactivo Reactivos y materiales suministrados Kit para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 100 pruebas 2 cajas y 1 kit de controles N de cat logo 303091 2 x 50 pruebas 2 cajas y 1 kit de controles N de cat logo 302224 Caja refrigerada para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 1 de 2 almacenar entre 2 C y 8 C al re
58. as fueron enriquecidas a 0 1 IFU por reacci n y 30 muestras no fueron enriquecidas Las muestras se almacenaron a 20 C y se analizaron en los d as 0 200 y 400 Todas las muestras enriquecidas cumplieron los criterios de validaci n con una concordancia del 95 con los resultados esperados Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 63 502184ES Rev D Concordancia de las muestras clinicas del TIGRIS DTS System Concordancia de las muestras clinicas del TIGRIS DTS System Concordancia del TIGRIS DTS System La concordancia entre los resultados del ensayo APTIMA CT generados en el TIGRIS DTS System totalmente automatizado y en los sistemas DTS semi automatizados se evalu realizando pruebas en muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina orina femenina y masculina torunda vaginal y Pap en medio l quido PreservCyt Cada una de las muestras cl nicas se analiz individualmente con el ensayo APTIMA CT en los dos tipos de sistema el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS en Gen Probe El orden de la prueba no se aleatoriz Las muestras identificadas para inclusi n se analizaron en el TIGRIS DTS System primero y despu s en los sistemas DTS Estudio de concordancia de las muestras cl nicas muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina orina masculina y femenina torunda vaginal y Pap en medio l quido PreservCyt Hombres y mujeres que asist an a cl nicas de ETS planificaci n familiar y de Obstetricia
59. as gradillas con agua col quelas sobre un pa o limpio absorbente y deje que se sequen completamente al aire Para prolongar la vida til de las gradillas s quelas boca arriba no boca abajo I Contaminaci n del ensayo 1 Sino se toman suficientes precauciones durante el protocolo del ensayo pueden introducirse materiales contaminantes Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 21 502184ES Rev D Sistemas DTS 2 Las TTU deben descontaminarse en fluido de desactivaci n seg n se describe en el apartado Detecci n No vuelva a usar las TTU 3 Lleve a cabo la descontaminaci n regular del equipo y de las superficies de trabajo seg n se describe en Notas de procedimiento Descontaminaci n 4 Como sucede en cualquier sistema de reactivos el exceso de talco en algunos guantes puede ser causa de contaminaci n de los tubos abiertos Se recomienda utilizar guantes sin talco J Protocolo de supervisi n de la contaminaci n en laboratorios para los sistemas DTS Existen numerosos factores espec ficos de los laboratorios que pueden contribuir a la contaminaci n incluido el volumen de la prueba el flujo de trabajo la prevalencia de la enfermedad y otras actividades de laboratorio Estos factores deben tenerse en consideraci n al establecerse la frecuencia con que se supervisar la contaminaci n Los intervalos para la supervisi n de la contaminaci n deben establecerse en funci n de las pr cticas y procedimientos de cada lab
60. as recogidas con los siguientes kits de recogida de muestras e Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina e Kit de recogida de orina APTIMA para muestras de orina masculina y femenina e Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA e Kit de transferencia de muestras APTIMA para uso con muestras ginecol gicas recolectadas en soluci n PreservCyt A Instrucciones de recogida Consulte el prospecto del kit de recogida de muestras pertinente para las instrucciones de recogida B Transporte y almacenamiento de muestras antes de la prueba 1 Muestras de torunda a Una vez recogida la muestra la torunda se debe transportar y almacenar en el tubo de transporte de muestras de torunda a una temperatura entre 2 C y 30 C hasta que se analice Las muestras deben analizarse con el ensayo APTIMA CT en los 60 d as siguientes a su recogida Si fuera necesario ampliar el tiempo de almacenamiento se pueden congelar a una temperatura entre 20 C y 70 C durante un per odo de hasta 12 meses despu s de la recogida consulte Estudios de la estabilidad de las muestras 2 Muestras de orina a Las muestras de orina que todav a se encuentren en el recipiente de recogida principal se deben transportar al laboratorio a una temperatura entre 2 C y 30 C Transfiera la muestra de orina al tubo de transporte de muestras de orina APTIMA en las 24 horas siguientes a s
61. atkins and H D Caldwell 1989 Nucleotide and deduced amino acid sequences for the four variable domains of the major outer membrane proteins of the 15 Chlamydia trachomatis serovars Infect Immun 57 1040 1049 Gen Probe Incorporated San Diego CA 92121 EMERGO EUROPE Informaci n de contacto para EE UU e internacional Molenstraat 15 Atenci n al cliente 1 858 410 8002 2513 BH La H customerservice gen probe com A aya Servicio t cnico 1 858 410 8511 Pa ses Bajos technicalsupport gen probe com Llamadas gratis desde EE UU y Canad Atenci n al cliente 1 800 523 5001 Servicio t cnico 1 888 484 4747 www gen probe com aba C 0843 GEN PROBE GEN PROBE y su dise o APTIMA APTIMA y su dise o APTIMA COMBO 2 DTS LEADER PANTHER SB100 y TIGRIS son marcas comerciales de Gen Probe Incorporated eppendorf estilizado y REPEATER son marcas comerciales de Eppendorf AG PRESERVCYT y THINPREP son marcas comerciales de Hologic Inc KOVA TROL es una marca comercial de Hycor Biomedical Inc RAININ es una marca comercial de Rainin Instrument LLC TECAN y FREEDOM EVO son marcas comerciales de Tecan Group AG Cualquier otro nombre de marca mencionada en este prospecto es propiedad de su correspondiente due o O 2000 2013 Gen Probe Incorporated 502184ES Rev D 2013 04 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 74 502184ES Rev D
62. baja 0 25 0 5 120 100 100 Positiva baja 2 5 5 120 100 100 Positiva media 25 50 120 100 100 Negativo 0 0 360 100 100 Porcentaje de concordancia general positiva entre el TIGRIS DTS System y el sistema PANTHER IC 95 100 98 9 100 Porcentaje de concordancia general negativa entre el TIGRIS DTS System y el sistema PANTHER IC 95 100 98 9 100 Estudio de sensibilidad anal tica La sensibilidad anal tica del ensayo APTIMA CT se prob utilizando tres matrices de muestras representativas Estos fueron orina procesada con medio de transporte de orina Urine Transport Medium UTM soluci n de Pap en medio l quido PreservCyt diluida con medio de transporte de torunda Swab Transport Medium STM y STM Se a adi rRNA de CT a mezclas de estas tres matrices a las concentraciones siguientes 0 5 fg ensayo 5 fg ensayo y 50 fg ensayo equivalentes de rRNA de 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL o 25 IFU mL Los equivalentes rRNA se calcularon en funci n del tama o del genoma y de la relaci n DNA RNA c lula estimada de cada organismo Estos paneles se analizaron en tres sistemas PANTHER utilizando dos lotes de reactivos en r plicas de 96 Se calcul la concordancia positiva con el resultado esperado La concordancia con los resultados esperados fue del 100 IC 95 96 2 100 para todos los paneles de orina del 100 IC 95 96 1 100 para todos los paneles de soluci n Pap en medio l quido PreservCyt y del 100 IC 95
63. by J Sellors and M Chernesky 1998 Urine specimens from pregnant and nonpregnant women inhibitory to amplification of Chlamydia trachomatis nucleic acid by PCR Ligase chain reaction and transcription mediated amplification identification of urinary substances associated with inhibition and removal of inhibitory activity J Clin Microbiol 36 3122 3126 16 National Committee for Clinical Laboratory Standards 1999 NCCLS EP5 A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline Vol 19 No 2 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 73 502184ES Rev D Bibliografia 17 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance Approved Guideline for additional Guidance on Appropriate Internal Quality Control Testing Practices 18 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 NCCLS EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods Approved Guideline 2nd edition Vol 24 No 25 19 Peterson E M V Darrow J Blanding S Aarnaes and L M de La Maza 1997 Reproducibility problems with the AMPLICOR PCR Chlamydia trachomatis test J Clin Microbiol 35 957 959 20 Schachter J 1985 Chlamydiae Psittacosis Lymphogranuloma Venereum Trachoma group p 856 862 In E H Lennette et al ed Manual of Clinical Microbiology 4 ed American Society for Microbiology Washington D C
64. car la torunda Si los resultados de CT son positivos o ambiguos consulte Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente Para obtener informaci n adicional espec fica para el TIGRIS DTS System sobre el control de la contaminaci n consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TI GRIS DTS System Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 30 502184ES Rev D Sistema PANTHER Sistema PANTHER PA R Los reactivos para el ensayo APTIMA CT se indican E a continuaci n para el sistema PANTHER Los s mbolos de identificaci n de los reactivos tambi n se indican junto al nombre del reactivo Reactivos y materiales suministrados Kit para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 100 pruebas 2 cajas y 1 kit de controles N de cat logo 302925 Caja refrigerada para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 1 de 2 almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad A Reactivo de amplificaci n CT APTIMA 1 vial cidos nucleicos no infecciosos secados en soluci n de tamp n con un contenido de agente de volumen lt 5 E Reactivo enzim tico CT APTIMA 1 vial Transcriptasa inversa y RNA polimerasa secadas en soluci n de tamp n HEPES con un contenido de reactivo de volumen lt 10 P Reactivo de sonda CT APTIMA 1 vial Sondas de DNA quimioluminiscentes y no infecciosas secadas en soluci n de tamp n succinato con un contenido d
65. cibirla Cantidad Cantidad 2 x S mbolo Componente kit de 50 pruebas 100 pruebas kit A Reactivo de amplificaci n CT APTIMA 1 vial 2 viales cidos nucleicos no infecciosos secados en soluci n de tamp n con un contenido de agente de volumen lt 5 E Reactivo enzim tico APTIMA 1 vial 2 viales Transcriptasa inversa y RNA polimerasa secadas en soluci n de tamp n HEPES con un contenido de reactivo de volumen lt 10 P Reactivo de sonda CT APTIMA 1 vial 2 viales Sondas de DNA quimioluminiscentes y no infecciosas secadas en soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 TCR B Reactivo de captura seleccionada B APTIMA 1x0 30mL 2x0 143 mL cido nucleico no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Collares de reconstituci n 6 Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla Cantidad Cantidad 2 x S mbolo Componente kit de 50 pruebas 100 pruebas kit AR Soluci n de reconstituci n de reactivo 1x119mL 2x6 4mL de amplificaci n CT APTIMA Soluci n acuosa con conservantes ER Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico 1x63mL 2x3 3mL APTIMA Soluci n de tamp n HEPES con un surfactante y glicerol PR Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda 1x152mL 2x7 7 mL CT APTIMA Soluci n de tamp n succinato con un contenido de dete
66. ctadas o no infectadas con C trachomatis de acuerdo con el estado de infecci n de la paciente NAAT 1 Ensayo Estado de infecci n Ensayo APTIMA NAAT 2 APTIMA CT del paciente COMBO 2 Total TF OF TF OF TVP Infectado Infectado Infectado z Infectado Infectado 4 4 Infectado Infectado No infectado No infectado i i 1 No infectado No infectado z gt 5 No infectado No infectado 3 z No infectado E E E No infectado x E No infectado E 7 No infectado z z No infectado z P ala A al ol ALY Alm rm o N say gt N spa oaj R No infectado gt E gt E a o o No infectado Es B No infectado E No infectado N C No infectado N C No infectado N C No infectado N C N C No infectado E No infectado z 2 E No infectado 2 o No infectado gt E No infectado N C s No infectado N C x No infectado N C z 2 E Total 640 ee ee ee ee eee ee ee ee ee N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TF torunda endocervical femenina OF orina femenina TVC torunda vaginal recogida por el cl nico TVP to
67. ctado 4 6 10 No infectado 1 0 1 No infectado 3 0 3 No infectado 1 0 1 No infectado 0 2 2 No infectado 1 0 1 No infectado 1 0 1 No infectado 2 2 4 No infectado 1 1 2 No infectado 11 5 16 No infectado 4 4 8 No infectado 403 618 1 021 No infectado N C 0 2 2 No infectado N C 1 2 3 No infectado 0 4 4 No infectado 2 0 2 No infectado N C N C 0 1 1 Total 576 746 1 322 NN SS ee a TS N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TM torunda uretral masculina OM orina masculina Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 54 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 7b Resultados de torundas endocervicales y orina femenina de mujeres infectadas o no infectadas con C trachomatis seg n el estado de infecci n de la paciente NAAT 1 Estado de Ensayo APTIMA NAAT 2 Ensayo Estado de s ntomas infecci n del APTIMA CT Total paciente COMBO 2 TF OF TF OF TF OF Sint Asint Infectado 80 43 123 Infectado 1 1 2 Infectado 10 5 15 Infectado 1 0 1 Infectado
68. d se determin calculando la concordancia entre los resultados finales del ensayo y el resultado esperado para cada muestra del panel La reproducibilidad tambi n se evalu calculando la SD y el coeficiente de variaci n CV de la se al con respecto a centros usuarios lotes y listas de trabajo No se calcularon los CV de muestras del panel CT negativas debido a valores de se al bajos que podr an ser te ricamente iguales a cero La tabla 13 presenta los resultados de reproducibilidad Todos los resultados del ensayo APTIMA CT en el TIGRIS DTS System concordaron con los resultados esperados Los valores de CV fueron inferiores o iguales al 3 4 Estos datos indican una reproducibilidad excelente del ensayo APTIMA CT utilizando el TIGRIS DTS System Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 66 502184ES Rev D Concordancia de las muestras clinicas del TIGRIS DTS System Tabla 13 Datos de precisi n del TIGRIS DTS System Conc Media Entre centro Entre usuario Entre lote oe aos fg rRNA N j a D D sD lt p Sp alae da 1 000 anda 4 000 CV xt 000 eV 1 000 Y 1 000 Y x1 000 Y 0 863 2 9 100 1 4 N C 0 3 N C 0 0 N C 0 2 N C 2 2 N C 5 432 7 041 100 32 0 0 5 217 3 1 63 7 0 9 174 2 5 206 2 9 50 433 7 090 100 0 0 0 0 224 3 2 93 1 1 3 168 2 4 189 2 7 500 431 7 130 100 0 0 0 0 240 3 4 96 9 1 4 164 2 3 217 3 0 5 000 432 7 152 100 0 0 0 0 208 2 9 85 7 1 2 179 2 5 211 3 0 Concord Concordancia Conc Concent
69. de la soluci n mediante la reducci n de la temperatura de la reacci n hasta alcanzar la temperatura ambiente Esta reducci n de temperatura permite que se produzca la hibridaci n entre la regi n de la deoxiadenosina del olig mero de captura y las mol culas de polideoxitimidina que est n unidas covalentemente a las part culas magn ticas Las micropart culas incluidas las mol culas diana capturadas unidas a ellas se desplazan al lateral del tubo de reacci n utilizando imanes y se aspira el sobrenadante Las part culas se lavan para eliminar la matriz de muestras residual que puede contener inhibidores de la reacci n de amplificaci n Una vez finalizados los pasos de captura seleccionada las muestras est n listas para la amplificaci n Los ensayos de amplificaci n seleccionada se basan en la capacidad de los cebadores de oligonucle tidos complementarios para anilar de forma espec fica y permitir la amplificaci n enzim tica de las cadenas de cido nucleico seleccionadas La reacci n TMA de Gen Probe replica una regi n espec fica del 16S rRNA de CT a trav s de intermediarios de DNA Se utiliza un solo juego de cebadores para cada mol cula seleccionada La detecci n de las secuencias de producto de amplificaci n de rRNA amplicon se logra mediante la hibridaci n del cido nucleico Una sonda de DNA quimioluminiscente monocatenaria que es complementaria a una regi n del amplic n seleccionado se marca con una mol cula de
70. del tubo de muestras pueden dar lugar a errores por volumen insuficiente E Preparaci n del sistema Configure el sistema y la lista de trabajo de acuerdo con las instrucciones del TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System y las Notas de procedimiento Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 29 502184ES Rev D TIGRIS DTS System Notas de procedimiento A Controles 1 Para trabajar correctamente con el software del ensayo APTIMA del TIGRIS DTS System se requieren controles delantero y de fin El Control positivo CG Control negativo CT debe estar en la primera posici n y en la pen ltima posici n de una lista de trabajo Esta etiqueta de control es azul verdosa El texto de la etiqueta es CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT El Control positivo CT Control negativo GC debe estar en la segunda posici n y en la ltima posici n de una lista de trabajo Esta etiqueta de control es rosa El texto de la etiqueta es CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC 2 Cada tubo de control APTIMA se puede analizar una vez Los intentos de pipetear m s de una vez del tubo pueden dar lugar a errores por volumen insuficiente B Temperatura La temperatura ambiente se define como de 15 C a 30 C C Talco de guantes Como sucede en cualquier sistema de reactivos el exceso de talco en algunos guantes puede ser causa de contaminaci n de los tubos abiertos Se recomienda utilizar guantes sin talco
71. do con las instrucciones del PANTHER System Operator s Manual Manual del usuario del sistema PANTHER y las Notas de procedimiento Aseg rese de que se utilicen las gradillas para reactivos y los adaptadores de TCR del tama o adecuado 2 Cargue las muestras Notas de procedimiento A Controles 1 Para trabajar correctamente con el software del ensayo APTIMA del sistema PANTHER se requiere un par de controles Los tubos de Control positivo CT Control negativo GC y de Control positivo GC Control negativo CT pueden cargarse en cualquier posici n de la gradilla o en cualquier carril de la plataforma de muestras en el sistema PANTHER El pipeteado de la muestra del paciente comenzar cuando se cumpla una de las dos siguientes condiciones a El sistema est procesando actualmente un par de controles b Los resultados v lidos para los controles se registran en el sistema 2 Una vez que los tubos de controles se hayan pipeteado y se est n procesando para un kit de reactivos espec fico las muestras de paciente pueden analizarse con el kit de reactivos de ensayo asociado hasta 24 horas a menos que a Los controles son no v lidos b El kit de reactivos de ensayo asociado se ha retirado del sistema c El kitde reactivos de ensayo asociado ha excedido los l mites de estabilidad 3 Cada tubo de control APTIMA se puede analizar una vez Los intentos de pipetear m s de una vez del tubo pueden dar lugar a errores de procesamien
72. e cero 0 x 1 000 RLU en el informe del ciclo representa un valor entre cero y 999 RLU Los valores de RLU inferiores a 160 en sistemas DTS o a 690 en el TIGRIS DTS System o el sistema PANTHER se notificar n como no v lidos 1 El software del ensayo APTIMA eval a autom ticamente los controles conforme a los criterios anteriores y presenta el estado del ciclo como aprobado PASS si se cumplen los criterios del control del ciclo o como fallido FAIL si los criterios no se cumplen 2 Siel estado del ciclo es FAIL todos los resultados de la prueba en el mismo ciclo son no v lidos y no se deben registrar 3 Cada laboratorio deber poner en pr ctica los procedimientos de control adecuados para satisfacer los requisitos de las normativas CLIA secci n 493 1256 Nota Consulte Identificaci n y soluci n de problemas o p ngase en contacto con el servicio t cnico de Gen Probe para recibir ayuda con los controles fuera de rango de los sistemas DTS 4 Un par metro del TIGRIS DTS System permite a cada centro especificar una frecuencia de encuadre de controles lo cual permite colocar conjuntos de controles adicionales a intervalos definidos dentro de la lista de trabajo Si se especifica este par metro el TIGRIS DTS System requerir que se coloque un conjunto de controles despu s del n mero de muestras definido en el encuadre de control El TIGRIS DTS System eval a autom ticamente cada control de la lista de trabajo de acuerdo c
73. e detergente lt 5 TCR B Reactivo de captura seleccionada B CT APTIMA 1 x 0 30 mL cido nucleico no infeccioso en soluci n de tamp n con lt 5 de detergente Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad AR Soluci n de reconstituci n de reactivo de amplificaci n CT 1x 11 9 mL APTIMA Soluci n acuosa con conservantes ER Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico CT APTIMA 1x6 3 mL Soluci n de tamp n HEPES con un surfactante y glicerol PR Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda CT APTIMA 1x 15 2 mL Soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 S Reactivo de selecci n CT APTIMA 1 x 43 0 mL Soluci n de tamp n borato 600 mM con surfactante TCR Reactivo de captura seleccionada CT APTIMA 1 x 26 0 mL Soluci n de tamp n sal con un contenido de olig meros de captura y fase s lida Collares de reconstituci n 3 Hoja de c digos de barras de lote maestro 1 hoja Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 31 502184ES Rev D Sistema PANTHER Kit de controles APTIMA almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla Simbolo Componente Cantidad PCT Control positivo CT Control negativo GC APTIMA 5 x 1 7 mL NGC cido nucleico CT no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 4
74. e las muestras Dado que el sistema de transporte que se utiliza para este ensayo no permite la valoraci n microsc pica de la idoneidad de las muestras los cl nicos deben recibir formaci n en las t cnicas de recogida de muestras adecuadas Consulte el prospecto del kit de recogida de muestras APTIMA adecuado G El fracaso o xito terap utico no se puede determinar con el ensayo APTIMA CT ya que el cido nucleico puede persistir tras un tratamiento antimicrobiano adecuado H Los resultados del ensayo APTIMA CT deben interpretarse junto con otros datos de laboratorio y cl nicos a disposici n del cl nico I Un resultado negativo no impide una posible infecci n ya que los resultados dependen de una recogida de muestras correcta Los resultados de la prueba pueden verse afectados por la recogida incorrecta de la muestra un error t cnico la confusi n de muestras o niveles de diana por debajo del limite de detecci n del ensayo J Elensayo APTIMA CT proporciona resultados cualitativos Por lo tanto no se puede establecer una correlaci n entre la magnitud de una se al positiva del ensayo y el n mero de organismos existentes en la muestra K Para los estudios cl nicos con muestras de torunda vaginal torunda endocervical torunda uretral masculina y muestras de orina el rendimiento para la detecci n de CT se obtuvo de poblaciones con alta prevalencia Los resultados positivos en poblaciones de baja prevalencia deben interpreta
75. e transferencia APTIMA seg n las instrucciones del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA Los usuarios desconoc an las titulaciones de las muestras muestras ciegas Cada una de las muestras Pap STM resultantes se analiz una vez en el ensayo APTIMA CT Se realizaron un total de cinco ciclos en un per odo de cinco d as para 140 resultados a cada concentraci n IFU Los resultados se resumen en la tabla 10 Tabla 10 Datos de precisi n en laboratorio del ensayo APTIMA CT para PreservCyt utilizando un panel de precisi n de 4 muestras con contenido de 0 a 1 000 IFU 20 mL de c lulas CT RLU Dentro usuario Entre d a Entre usuario Total Muestra IFU 20 mL Con 3 del panel PreservCyt SIB Pe cuerda Comer media SD CV SD CV SD CV SD CV y cord x1 000 x1 000 1 000 x1 000 x1 000 A 20 0 1 140 140 100 6 501 7 734 8 11 3 0 00 5469 84 916 14 1 B 100 05 140 138 98 6 6 337 7 1 054 7 16 6 0 00 97 2 149 1 417 6 22 4 Cc 1 000 5 140 140 100 6 521 9 909 13 9 247 1 3 8 393 9 6 1 021 15 7 D 0 0 140 140 100 1 2 0 8 N C 0 N C 0 4 N C 0 9 N C los resultados discordantes fueron un resultado negativo y un resultado equ voco Nota La variabilidad de algunos factores podr a ser num ricamente negativa lo que puede ocurrir si la variabilidad debida a dichos factores es muy peque a Cuando esto sucede la variabilidad medida en funci n de la SD y el CV se establece en cero 16 N C no correspo
76. encias y precauciones 1 Hibridaci n a Retire la gradilla del ba o de agua y transfi rala al rea del HPA Use la pipeta de repetici n para a adir 100 uL del reactivo de sonda reconstituido CT a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n deben ser ahora amarillas b Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y agite la gradilla en el mezclador v rtex multitubo Incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C 1 C durante 20 5 minutos Retire la gradilla del ba o de agua e inc bela a temperatura ambiente durante 5 1 minutos 2 Selecci n a Use la pipeta de repetici n para a adir 250 uL de reactivo de selecci n a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n deben ser ahora rojas b Cubra los tubos con una tarjeta de sellado agite la gradilla en el mezclador v rtex durante 10 segundos o hasta que el color sea uniforme e incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C 1 C durante 10 1 minutos c Retire la gradilla del ba o de agua 3 Detecci n La detecci n debe realizarse a una temperatura entre 18 C y 28 C a Incube la gradilla a una temperatura entre 18 C y 28 C durante 15 3 minutos Nota Este rango de temperatura es esencial para el rendimiento del ensayo b Para usar el lumin metro LEADER HC y el software del ensayo APTIMA consulte el LEADER HC Luminometer Operator s Manual Manual del usuario del lumin metro LEADER HC y el APTIMA Assay Software Operator s
77. eran sujetos asintom ticos y 359 sintom ticos Los sujetos inscritos proced an de centros con una prevalencia de CT del 2 8 al 14 0 Se recogieron dos muestras de cada sujeto elegible una muestra de Pap en medio l quido PreservCyt y una muestra de torunda endocervical Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se recogieron con la esp tula Cytobrush o con un dispositivo de obtenci n de muestras cervicales de cepillo tipo escobilla La distribuci n de dispositivos de obtenci n de muestras cervicales se resume en la tabla 5 por centro de recogida de muestras y en general Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se procesaron de acuerdo con el ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual del usuario del procesador ThinPrep 2000 y del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA Una vez procesada la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt con el procesador ThinPrep 2000 la muestra se transfiri al kit de transferencia de muestras APTIMA para su an lisis con el ensayo APTIMA CT La sensibilidad y la especificidad del ensayo APTIMA CT en muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se calcularon comparando los resultados con el algoritmo de estado de infecci n del paciente El algoritmo incluy los resultados del ensayo APTIMA COMBO 2 y del ensayo APTIMA CT en muestras de torunda endocervical Ambas NAAT de referencia necesitaron ser positivas para establecer un estado de infecci n de la paciente Por
78. erpretaci n de la prueba RLU totales x1 000 Negativo 0 a lt 50 Equivoco 50 a lt 100 RLU baja positivo 100 a lt 5 000 Positivo 5 000 a lt 12 000 No v lido 0 o gt 12 000 A Un resultado de cero 0 x 1 000 RLU en el informe del ciclo representa un valor entre cero y 999 RLU Los valores de RLU inferiores a 160 en sistemas DTS o a 690 en el TIGRIS DTS System o el sistema PANTHER se notificar n como no v lidos 1 Seg n las directrices de los CDC se deber an considerar an lisis adicionales sistem ticos para personas con pruebas de cribado para CT o GC positivas cuando la informaci n sobre los factores de riesgo o las encuestas actuales indiquen que la prevalencia es baja lo que dar a lugar a VPP m s bajos por ejemplo lt 90 Consulte las directrices de los CDC para informaci n detallada sobre pruebas adicionales y tratamiento de pacientes despu s de un cribado positivo 4 Consulte la tabla 3 para la distribuci n de las RLU de los resultados La magnitud de RLU no es indicativa de la concentraci n del organismo en la muestra 3 En el rango positivo bajo los datos sugieren que los resultados positivos se deber an interpretar con precauci n teniendo en cuenta que la probabilidad de un positivo falso podr a ser superior a la de un positivo verdadero B Resultados del control de calidad y validez El control negativo para CT APTIMA que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT y
79. es de iniciar el ensayo limpie las superficies de trabajo y los pipeteadores con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies y los pipeteadores por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa en la que se vaya a realizar la prueba con cubiertas absorbentes con forro de pl stico que est n limpias para mesas de laboratorio 3 Coloque un n mero suficiente de casetes de diez puntas en el sistema de captura seleccionada Target Capture System TCS Aseg rese de que la botella de lavado del TCS est llena de soluci n de lavado APTIMA y el peine m ltiple de aspiraci n est conectado a la bomba de vac o Consulte el Target Capture System Operator s Manual Manual del usuario del sistema de captura seleccionada Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 13 502184ES Rev D Sistemas DTS B Reconstituci n de reactivos Nota La reconstituci n de los reactivos debe llevarse a cabo antes de iniciar la transferencia de muestras 1 Para reconstituir los reactivos de amplificaci n CT enzim tico y de sonda CT combine los frascos de reactivo liofilizado con la soluci n de reconstituci n Si las soluciones de reconstituci n est n refrigeradas espere a que se equilibren a la temperatura ambiente antes de utilizarlas a Empareje la s
80. es no interfirieron con la amplificaci n y detecci n de CT rRNA utilizando el ensayo APTIMA CT Estudios de la estabilidad de las muestras A Muestras de torunda y de orina Los datos que apoyan las condiciones de envio y almacenamiento recomendadas para las muestras de torunda endocervical uretral y vaginal se generaron con una mezcla de muestras de torunda negativas Las muestras mezcladas se enriquecieron con CT a una concentraci n final de 1 IFU por reacci n Las muestras enriquecidas se mantuvieron a 70 C 20 C 4 C y 30 C Las muestras se analizaron por duplicado los dias 0 20 77 y 117 Todas las condiciones de la prueba dieron positivo para CT en todas las ocasiones y temperaturas Los datos que apoyan las condiciones de env o y almacenamiento recomendadas para las muestras de orina se generaron con muestras de orina masculinas y femeninas negativas Las muestras de orina se enriquecieron con CT a la concentraci n final de 10 IFU por reacci n Dos conjuntos de muestras de orina enriquecidas se mantuvieron a 30 C durante 24 horas antes de a adirse a los medios de transporte de orina Urine Transport Medium UTM Los dos conjuntos de muestras UTM se mantuvieron a continuaci n a 4 C y 30 C y se analizaron por triplicado los d as 0 1 5 20 y 35 Todas las muestras dieron positivo para CT en todos los momentos Los dos conjuntos de muestras UTM se analizaron tambi n despu s de 116 d as de almacenamiento a 20 C y 7
81. estras analizadas sustituya los tapones penetrables de los tubos de transporte de muestras por tapones nuevos no penetrables Si es necesario enviar las muestras para su an lisis a otro laboratorio se deben mantener las temperaturas recomendadas Antes de destapar las muestras anteriormente analizadas y tapadas se deben centrifugar los tubos de transporte de muestras durante 5 minutos a una fuerza centr fuga relativa Relative Centrifugal Force RCF de 420 para llevar todo el l quido al fondo del tubo Evite salpicaduras y todo tipo de contaminaci n cruzada Nota Las muestras deben envia rse de acuerdo con las normativas de transporte nacionales e internacionales aplicables Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 9 502184ES Rev D Sistemas DTS Sistemas DTS Los reactivos para el ensayo APTIMA CT se indican a continuaci n para los sistemas DTS Los s mbolos de identificaci n de los reactivos tambi n se indican junto al nombre del reactivo DTS sven Reactivos y materiales suministrados Kit para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 100 pruebas 2 cajas N de catalogo 301088 Caja refrigerada del ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 1 de 2 almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla Simbolo Componente Cantidad A Reactivo de amplificaci n CT APTIMA 1 vial cidos nucleicos no infecciosos secados en soluci n de tamp n con un contenido de agente de volumen lt 5 E Reactivo enzim t
82. ia de la enfermedad CT en poblaciones de pacientes depende de factores de riesgo tales como la edad el sexo la presencia de sintomas el tipo de clinica y el m todo de prueba En las tablas 1a y 1b se muestra un resumen de la prevalencia de CT por tipo de muestra de acuerdo con el ensayo APTIMA CT para dos investigaciones clinicas multic ntricas por centro clinico y en general Tabla 1a Prevalencia de C trachomatis por centro clinico y general de acuerdo con los resultados del ensayo APTIMA CT N positivas N analizadas Centro OM TF OF TVP TVC 1 27 0 68 252 25 0 63 252 16 5 38 230 17 0 39 229 19 2 42 219 19 1 44 230 2 27 7 98 354 26 6 94 354 35 0 70 200 26 5 53 200 30 8 61 198 33 0 66 200 3 25 0 1 4 25 0 1 4 11 4 13 114 8 8 10 113 10 8 12 111 11 5 13 113 4 N C N C N C N C 11 6 31 267 8 1 22 271 9 3 25 268 12 2 33 270 5 8 0 16 200 8 0 16 200 9 0 18 199 7 5 15 199 8 0 16 199 10 1 20 199 6 22 7 69 304 20 0 61 305 14 3 42 294 13 2 39 295 15 2 44 290 16 2 48 296 7 5 8 12 207 6 3 13 207 7 8 8 102 9 8 10 102 12 7 13 102 8 8 9 102 8 N C N C N C N C 8 2 4 49 6 1 3 49 12 5 6 48 7 8 4 51 Todos 20 0 264 1 321 18 8 248 1 322 15 4 224 1 455 13 1 191 1 458 15 3 219 1 435 16 2 237 1 461 TM torunda uretral masculina OM orina masculina TF torunda endocervical femenina OF orina femenina TVP torund
83. ia de una torunda en el tubo de transporte de muestras APTIMA con muestras de Pap en medio l quido PreservCyt 4 Inspeccione los tubos de muestras antes de cargarlos en la gradilla a Siun tubo de muestra contiene burbujas en el espacio entre el l quido y el tap n centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para eliminar las burbujas b Si un tubo de muestra tiene un volumen inferior al que se suele observar cuando se siguen las instrucciones de recogida centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para asegurarse de que no quede l quido en el tap n c Si el nivel de l quido de un tubo de muestra de orina no est entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta la muestra debe rechazarse No perfore un tubo sobrellenado d Si un muestra de orina contiene precipitados caliente la muestra a 37 C durante un m ximo de 5 minutos Si el precipitado no se vuelve a disolver aseg rese visualmente de que ste no obstaculice la entrega de la muestra Nota Una incorrecta realizaci n de los pasos 4a c puede provocar una descarga de l quido del tap n del tubo de muestras Nota Se pueden analizar hasta 3 al cuotas independientes de cada tubo de muestra Los intentos de pipetear m s de 3 al cuotas del tubo para muestras pueden dar lugar a errores de procesamiento Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 35 502184ES Rev D Sistema PANTHER E Preparaci n del sistema 1 Configure el sistema de acuer
84. icaci n CT 1x9 3 mL APTIMA Soluci n acuosa con conservantes ER Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico APTIMA 1x 3 3 mL Soluci n de tamp n HEPES con un surfactante y glicerol PR Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda CT APTIMA 1x 12 4 mL Soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 S Reactivo de selecci n APTIMA 1x31 mL Soluci n de tamp n borato 600 mM con surfactante Collares de reconstituci n 3 Tarjetas de sellado 1 envase Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad TCR Reactivo de captura seleccionada CT APTIMA 1 x 22 mL Soluci n de tamp n sal con un contenido de olig meros de captura y fase s lida Ww Soluci n de lavado APTIMA 1x402 mL 10 mM de soluci n de tamp n HEPES con un contenido de detergente lt 2 DF Tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA 1 x 402 mL Soluci n de tamp n bicarbonato 800 mM O Reactivo de aceite APTIMA 1x 24 6 mL Aceite de silicona Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 11 502184ES Rev D Sistemas DTS Material necesario que debe adquirirse por separado Nota Se indica el n mero de cat logo de los materiales que pueden adquirirse de Gen Probe a menos que se especifique lo con trario N de cat logo Lumin metro LEADER HC 104747 01 Sistema de capt
85. ico APTIMA 1 vial Transcriptasa inversa y RNA polimerasa secadas en soluci n de tamp n HEPES con un contenido de reactivo de volumen lt 10 P Reactivo de sonda CT APTIMA 1 vial Sondas de DNA quimioluminiscentes y no infecciosas secadas en soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 TCR B Reactivo de captura seleccionada B APTIMA 1x 0 35 mL cido nucleico no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 PCT Control positivo CT Control negativo GC APTIMA 3x 1 7 mL NGC cido nucleico CT no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 1 IFU CT 5 fg ensayo PGC Control positivo GC Control negativo CT APTIMA 3 x 1 7 mL NCT cido nucleico GC no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC 250 fg ensayo Los equivalentes de rRNA se calcularon a partir del tama o del genoma y de la raz n DNA RNA por c lula estimada de cada organismo Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 10 502184ES Rev D Sistemas DTS La caja refrigerada contiene tambi n lo siguiente bandeja de almacenamiento almacenar enire 2 C y 30 C al recibirla Simbolo Componente Cantidad AR Soluci n de reconstituci n de reactivo de amplif
86. ientes masculinos se recogieron dos torundas uretrales aleatorizadas seguidas por una muestra de orina Para pacientes femeninas se recogi una muestra de orina seguida de una torunda vaginal recogida por la paciente una torunda vaginal recogida por el cl nico y dos torundas endocervicales aleatorizadas Los resultados CT del ensayo APTIMA CT y del ensayo APTIMA COMBO 2 se generaron a partir de dos torundas vaginales una torunda endocervical una torunda uretral masculina y una al cuota de orina masculina y femenina La otra muestra de torunda endocervical torunda uretral masculina y una al cuota de orina masculina y femenina se analizaron con otra NAAT disponible comercialmente Las muestras de torunda endocervical y uretral masculina y de orina masculina y femenina analizadas en el ensayo APTIMA COMBO 2 y en las otras NAAT disponibles comercialmente se utilizaron como NAAT de referencia para determinar el estado de infecci n de cada sujeto El an lisis de las muestras se realiz en el centro de inscripci n de los sujetos o en un centro de an lisis externo Todos los c lculos de rendimiento se basaron en el n mero total de resultados de muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina y de orina masculina y femenina del ensayo APTIMA CT comparados con el algoritmo del estado de infecci n del paciente para cada sexo En el algoritmo la designaci n de un sujeto como infectado o no infectado con CT se bas en los result
87. l APTIMA 301162 Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para 301041 muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras 301040 de orina masculina y femenina Tubos de transporte de muestras de orina APTIMA para muestras 105575 de orina masculina y femenina Lej a soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M Guantes desechables Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Tapones penetrables APTIMA 105668 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 32 502184ES Rev D Sistema PANTHER Tapones no penetrables de repuesto 103036A Tapones de repuesto para los kits de 100 pruebas Soluciones de reconstituci n de los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda CL0041 100 tapones TCR y reactivo de selecci n 501604 100 tapones Materiales opcionales N de cat logo Kit de controles APTIMA 301110 Potenciador de lej a GEN PROBE 302101 para la limpieza sistem tica de las s uperficies y el equipo Procedimiento de prueba del sistema PANTHER Nota Consulte el PANTHER System Operator s Manual Manual del usuario del sistema PANTHER para informaci n adicional sobre los procedimientos del sistema PANTHER A Preparaci n del rea de trabajo 1 Limpie las superficies de trabajo en las que van a preparar los reactivos y las muestras Limpie las superficies de trabajo con una soluci n de hipoclorito de sodio al 2 5 3 5 0
88. l rendimiento clinico especifico del TIGRIS DTS System en el apartado Concordancia de las muestras clin icas del TIGRIS DTS System a continuaci n del apartado Rendimiento clinico en sistemas DTS Estudio clinico de muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina torunda vaginal y orina Se obtuvieron muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el clinico de torunda vaginal recogidas por la paciente y de orina masculina y femenina de 2 787 hombres y mujeres sintomaticos y asintomaticos que asistian a clinicas de Obstetricia y Ginecolog a de enfermedades de transmisi n sexual ETS de adolescentes y de planificaci n familiar en ocho centros cl nicos en diferentes localidades geogr ficas de Norteam rica Los sujetos se clasificaron como sintom ticos si informaron de s ntomas como secreciones disuria y dolor p lvico Los sujetos se clasificaron como asintom ticos si no informaron s ntomas De los 1 392 sujetos asintom ticos inscritos en el estudio 2 eran menores de 16 a os de edad 237 ten an edades entre 16 y 20 423 entre 21 y 25 y 730 eran mayores de 25 a os de edad De los 1 395 sujetos sintom ticos inscritos en el estudio 211 ten an edades entre 16 y 20 494 entre 21 y 25 y 690 eran mayores de 25 a os de edad Se recogieron tres muestras de cada uno de los 1 322 hombres elegibles Se recogieron cinco muestras de cada una de las 1 465 pacientes femeninas elegibles Para pac
89. l sistema PANTHER con respecto a este posible interferente Se a adi sangre nueva a mezclas cl nicas de muestras de torunda vaginal muestras de Pap en medio l quido PreservCyt post procesadas o muestras de orina y luego analizaron para determinar la posible interferencia en el ensayo en presencia y ausencia de CT seleccionado El equivalente de rRNA estimado de una IFU CT ensayo 5 fg ensayo se utiliz como la concentraci n diana ya que ste representa la sensibilidad anal tica del ensayo Las muestras se analizaron en el sistema PANTHER Todas las muestras que conten an cido nucleico seleccionado dieron positivo al analizarse a una concentraci n del 10 vol vol de sangre en muestras de torunda o de Pap en medio l quido PreservCyt o del 30 vol vol de sangre en muestras de orina Todas las muestras que no conten an la diana se identificaron correctamente como negativas Estos resultados son id nticos a los demostrados para el TIGRIS DTS System cuando se enriquecen con las mismas cantidades de sangre La sangre a adida a las muestras de torunda PreservCyt y de orina a concentraciones mucho m s altas de lo que podr a esperarse con la obtenci n normal de muestras no interfiri con los resultados en el sistema PANTHER Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 72 502184ES Rev D Bibliografia Estudios de arrastre para el sistema PANTHER Para establecer que el sistema PANTHER reduce al minimo el riesgo de resultados positi
90. l specimens from women J Clin Microbiol 36 391 394 9 CUMITECH 31 Verification and Validation of Procedures in the Clinical Microbiology Laboratory ASM PRESS FEBRUARY 1997 10 Frommell G T R Rothenberg S Wang and K McIntosh 1979 Chlamydial infection of mothers and their infants Journal of Pediatrics 95 28 32 11 Gaydos C A T C Quinn D Willis A Weissfeld E W Hook D H Martin D V Ferraro and J Schachter 2003 Performance of the APTIMA Combo 2 Assay for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in female urine and endocervical swab specimens J Clin Microbiol 41 304 309 12 Goessens W H F J W Mouton W I Van Der Meijden S Deelen T H Van Rijsoort Vos N L Toom H Verbrugh and R P Verkooyen 1997 Comparison of three commercially available amplification assays AMP CT LCx and COBAS AMPLICOR for detection of Chlamydia trachomatis in first void urine J Clin Microbiol 35 2628 2633 13 Holmes K K H H Handsfield S P Wang B B Wentworth M Turck J B Anderson and E R Alexander 1975 Etiology of nongonococcal urethritis NEJM 292 1199 1205 14 Jaschek G C A Gaydos L E Welsh and T C Quinn 1993 Direct detection of Chlamydia trachomatis in urine specimens from symptomatic and asymptomatic men by using a rapid polymerase chain reaction assay J Clin Microbiol 31 1209 1212 15 Mahony J S Chong D Jang K Luinstra M Faught D Dal
91. la botella de la soluci n de reconstituci n correspondiente y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia e Mientras sostiene el frasco con la soluci n de reconstituci n sobre la mesa inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en la abertura del frasco figura 2 paso 2 f Invierta lentamente el conjunto de los frascos Deje que la soluci n pase del frasco al vial de vidrio figura 2 paso 3 g Agite con una rotaci n suave la soluci n en el vial para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el vial figura 2 paso 4 h Espere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego invierta de nuevo el conjunto de los frascos inclin ndolo a un ngulo de 45 para reducir al m nimo la formaci n de espuma figura 2 paso 5 Deje que todo el l quido regrese a la botella de pl stico i Quite el collar de reconstituci n y el vial de vidrio figura 2 paso 6 j Vuelva a tapar el frasco e Para los frascos para 50 pruebas desprenda y deseche la etiqueta superior Anote las iniciales del usuario la fecha de reconstituci n y el n mero de lote del reactivo liofilizado en la otra etiqueta figura 2 paso 7 e Para los frascos de 100 pruebas anote las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n directamente en la etiqueta figura 3 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 26 502184ES Rev D k TIGRIS DTS System Deseche el collar de reconstituci n
92. lications for diagnostic testing and screening J Clin Microbiol 34 2395 2400 3 Cates Jr W and J N Wasserheit 1991 Genital chlamydia infections epidemiology and reproductive sequelae Am J Obstet Gynecol 164 1771 1781 4 Centers for Disease Control and Prevention 2002 Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections United States Morbid and Mortal Weekly Rep 51 RR 15 5 Centers for Disease Control and Prevention 2011 Sexually Transmitted Disease Surveillance 2010 Atlanta GA U S Department of Health and Human Services November 6 Chernesky M A D Jang J Sellors K Luinstra S Chong S Castriciano and J B Mahony 1996 Urinary inhibitors of polymerase chain reaction and Ligase chain reaction and testing of multiple specimens may contribute to lower assay sensitivities for diagnosing Chlamydia trachomatis infected women Mol Cell Probes 11 243 249 7 Chong S D Jang X Song J Mahony A Petrich P Barriga and M Chernesky 2003 Specimen processing and concentration of Chlamydia trachomatis added can influence false negative rates in the LCx assay but not in the APTIMA Combo 2 Assay when testing for inhibitors J Clin Microbiol 41 778 782 8 Crotchfelt K A B Pare C Gaydos and T C Quinn 1998 Detection of Chlamydia trachomatis by the Gen Probe AMPLIFIED Chlamydia Trachomatis assay AMP CT in urine specimens from men and women and endocervica
93. lio R No se ha evaluado el rendimiento de las muestras de torunda vaginal en mujeres embarazadas S No se ha evaluado el rendimiento de las muestras en torundas endocervicales vaginales o uretrales masculinas las muestras de orina masculina o femenina ni las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt en adolescentes menores de 16 a os T No se ha determinado el rendimiento del TIGRIS DTS System a altitudes superiores a los 2 240 m 7 355 pies En laboratorios situados a altitudes superiores a los 2 240 m 7 355 pies se realizar n verificaciones volum tricas y estudios espec ficos del ensayo adicionales antes de la instalaci n y del proceso de validaci n o como parte de los mismos U No se ha evaluado el rendimiento del sistema PANTHER a altitudes superiores a los 2 000 m 6 561 pies V No hay evidencia de degradaci n de los cidos nucleicos en la soluci n PreservCyt Si una muestra de Pap en medio l quido PreservCyt tiene cantidades peque as de material celular CT puede producirse una distribuci n desigual de este material celular Adem s en comparaci n con la recogida directa de las muestras con los medios de transporte de torunda APTIMA el volumen adicional de la soluci n PreservCyt produce una mayor diluci n del material de la muestra Estos factores pueden afectar a la capacidad para detectar peque as cantidades de organismos en el material recogido Silos resultados negativos de la muestra no concuerdan con
94. lo menos una NAAT de referencia necesit ser negativa para establecer un estado de paciente no infectada La tabla 7e resume la frecuencia de los resultados de prueba para las dos NAAT de referencia La tabla 5a muestra las sensibilidades y especificidades del ensayo APTIMA CT por estado de s ntomas y en general La sensibilidad general fue del 95 6 86 90 En sujetos sintom ticos y asintom ticos la sensibilidad fue del 96 7 29 30 y del 95 0 57 60 respectivamente La especificidad general fue del 98 8 1 539 1 557 En sujetos sintom ticos y asintom ticos la especificidad fue del 98 8 325 329 y del 98 9 1 214 1 228 respectivamente La tabla 6a presenta las sensibilidades y especificidades del ensayo APTIMA CT por centro de recogida de muestras y en general Las sensibilidades abarcaron desde el 92 9 hasta el 100 Las especificidades abarcaron desde el 96 5 hasta el 100 Tabla 5 Distribuci n de dispositivos de obtenci n de muestras cervicales utilizado para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Dispositivo de obtenci n de muestras Centro de recogida cl nico Total cervicales utilizado 1 2 3 4 5 Esp tula Cytobrush 0 124 475 287 57 364 1 307 Dispositivo tipo escobilla 100 0 0 0 240 0 340 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 49 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 5a Sensibilidad y especificidad del ensayo APTIMA CT en relaci n al estado de infecci n del
95. miento Agitaci n con mezclador v rtex para los detalles 23 Coloque la gradilla sobre la base magn tica del TCS durante 5 a 10 minutos 24 Aspire todo el l quido seg n se describe en los pasos 19 y 20 25 Despu s de la aspiraci n final retire la gradilla de la base magn tica del TCS e inspeccione los tubos visualmente para asegurarse de que todo el l quido ha sido aspirado y de que todos los tubos contienen granos de part culas magn ticas Si hay l quido visible coloque la gradilla nuevamente en la base magn tica del TCS durante 2 minutos y repita la aspiraci n de esa TTU con las mismas puntas utilizadas anteriormente para cada muestra Nota Se puede aceptar el tubo si despu s de terminada la aspiraci n se puede ver alg n grano de part culas magn ticas Si no se puede ver ning n grano la muestra debe volverse a analizar Si la misma muestra no contiene un grano de part culas magn ticas en este paso en un ciclo subsiguiente esto podr a ser indicativo de un problema espec fico de la muestra En este caso se recomienda recoger de nuevo la muestra 1 Consulte la Hoja de especificaciones del nivel de vac o del sistema de captura seleccionada al final del Target Capture System Operator s Manual Manual del usuario del sistema de captura seleccionada o p ngase en contacto con el servicio t cnico Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 17 502184ES Rev D Sistemas DTS D Amplificaci n Si se usa el ba o de c
96. mposible alcanzar una determinaci n concluyente sobre el estado de infecci n Los resultados de estos sujetos no se incluyeron en ninguno de los c lculos de rendimiento De los 8 452 resultados del ensayo APTIMA CT procedentes del estudio cl nico multic ntrico un peque o porcentaje 8 0 09 de las muestras dio inicialmente un resultado no v lido para CT Tras la repetici n de la prueba no hubo resultados equ vocos o no v lidos Tabla 4 Sensibilidad y especificidad del ensayo APTIMA CT en relaci n al estado de infecci n del paciente por estado de s ntomas y en general Muestra ES N R F NR NF perenne clon Sintom tico 576 131 23 418 4 97 0 92 6 99 2 94 8 92 3 96 7 Torunda Asintom tico 745 90 20 634 1 98 9 94 0 100 96 9 95 3 98 1 Todos 1 321 221 43 1 052 5 97 8 94 9 99 3 96 1 94 7 97 1 Hombres Sintomatico 576 127 14 427 8 94 1 88 7 97 4 96 8 94 7 98 3 Orina Asintomatico 746 90 17 638 1 98 9 94 0 100 97 4 95 9 98 5 Todos 1 322 217 31 1 065 9 96 0 92 6 98 2 97 2 96 0 98 1 Sintom tico 807 114 28 664 1 99 1 95 3 100 96 0 94 2 97 3 Torunda Asintom tico 636 59 22 553 2 96 7 88 7 99 6 96 2 94 3 97 6 Todos 1 443 173 50 1 217 3 98 3 95 1 99 6 96 1 94 8 97 1 Mujeres Sintom tico 809 107 13 682 7 93 9 87 8 97 5 98 1 96 8 99 0 Orina Asintom tico 639 58 13 565 3 95 1 86 3 99 0 97 8
97. n Gen Probe La precisi n del ensayo APTIMA CT se evalu con tres lotes de kit de ensayo APTIMA CT tres centros de estudio seis usuarios y 108 ciclos del ensayo APTIMA CT Dos usuarios en cada uno de los tres centros de an lisis realizaron un total de seis ciclos de ensayo APTIMA CT por lote de kit sumando un total de 36 ciclos por lote de kit Cada ciclo estaba formado por un panel de precisi n de 12 muestras con un contenido de 0 a 2 000 fg ensayo rRNA de CT La reproducibilidad se estableci Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 58 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS enriqueciendo el medio de transporte de torunda con rRNA No se ha determinado la reproducibilidad en el an lisis de muestras de torunda y de orina que conten an el organismo seleccionado La tabla 9 presenta los datos RLU de precisi n en t rminos de media desviaci n est ndar coeficiente de variaci n CV y porcentaje de concordancia con los resultados esperados para c lculos de variabilidad entre centro entre lote entre usuario entre ciclo y dentro ciclo Tabla 9 Datos de precisi n del ensayo APTIMA CT utilizando un panel de precisi n de 12 muestras con contenido de 0 a 2 000 fg ensayo de rRNA de CT RLU Dentro ciclo Entre centro Entre lote Entre usuario Entre ciclo Concentraci n N media concord SD z SD SD 4 SD 3 sD 7 x1 000 ancia RLU x1 000 Y RLU x1 000 Y RLU x1 000 Y RLU x1 000 Y RLU x1 000
98. n individualmente a muestras de torunda Pap en medio l quido PreservCyt y orina 10 de sangre gel anticonceptivo espermicida humectante anest sico hemorroidal aceite corporal polvo crema antif ngica lubricantes vaginales duchas femeninas y leucocitos 1 0 x 10 c lulas mL Las siguientes sustancias interferentes se a adieron individualmente a muestras de orina 30 de sangre analitos de orina prote na glucosa cetonas bilirrubina nitrato urobilin geno pH 4 cido pH 9 alcalino leucocitos 1 x 10 c lulas mL restos celulares vitaminas minerales acetaminof n aspirina e ibuprofeno Todos se analizaron para determinar la interferencia potencial del ensayo en ausencia y presencia de CT al equivalente de rRNA estimado de 1 c lula ensayo 5 fg ensayo Los equivalentes rRNA se calcularon en funci n del tama o del genoma y de la relaci n DNA RNA c lula estimada de cada organismo No se observ ninguna interferencia con ninguna de las sustancias analizadas No se observ ning n inhibidor de amplificaci n en el ensayo APTIMA CT Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 61 502184ES Rev D Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Recuperaci n Se a adieron Escherichia coli Gardnerella vaginalis Lactobacillus acidophilus Bacteroides ureolyticus y Staphylococcus epidermidis 1 x 10 c lulas ensayo a muestras que contenian el equivalente de rRNA de aproximadamente una IFU CT 5 fg Estas adicion
99. ncluyen los resultados de muestras positivas con RLU bajas Consulte Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente m s arriba Notas El primer resultado v lido y no equ voco de cada analito es el resultado que debe registrarse Se recomienda ponderar cuidadosamente los datos de rendimiento al interpretar los resultados del ensayo APTIMA CT para individuos asintom ticos o para cualquier individuo de poblaciones con baja prevalencia Un resultado negativo no impide la presencia de una infecci n CT ya que los resultados dependen de una recogida de muestras correcta de la ausencia de inhibidores y de si se detecta suficiente rRNA Los resultados de la prueba pueden verse afectados por la recogida y almacenamiento incorrectos de la muestra un error t cnico la confusi n de muestras o niveles de diana por debajo del l mite de detecci n del ensayo e Se recomienda analizar una muestra endocervical en pacientes femeninas cl nicamente sospechosas de padecer una infecci n clamidial o gonoc cica Si se recogen ambas muestras de Pap y de torunda endocervical la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt debe recogerse antes de la muestra de torunda endocervical Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 40 502184ES Rev D Limitaciones Limitaciones A El uso de este ensayo est limitado al personal con la debida formaci n para realizar el procedimiento El incumplimiento de las instrucci
100. nde para muestras de paneles negativos Usuario Ciclo Las muestras con resultados discordantes se incluyeron en el an lisis de variabilidad de la se al Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 59 502184ES Rev D Rendimiento analitico de los sistemas DTS Rendimiento analitico de los sistemas DTS Consulte el Rendimiento analitico del TIGRIS DTS System en el apartado Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System a continuaci n del apartado Concordancia de las mue stras cl nicas del TIGRIS DTS System Consulte el Rendimiento anal tico del sistema PANTHER en el apartado Rendimiento anal tico del sistema PANTHER Sensibilidad anal tica La sensibilidad anal tica l mite de detecci n de C trachomatis se determin comparando directamente diluciones de organismos de CT en cultivo celular y en el ensayo APTIMA CT La sensibilidad anal tica declarada para el ensayo es de una unidad formadora de inclusi n Inclusion Forming Unit IFU por ensayo 7 25 IFU torunda 5 IFU mL de orina 9 75 IFU mL de Pap en medio l quido PreservCyt para el total de 15 serotipos CT A B Ba C D E F G K I J K L1 L2 y L3 Sin embargo las diluciones de menos de un IFU ensayo de todos los serotipos dieron positivo Especificidad anal tica Se evaluaron un total de 154 aislados de cultivo utilizando el ensayo APTIMA CT Estos aislados inclu an 86 organismos que pueden aislarse del tracto genitourinario y 68 organismos adicionales que repre
101. o de sonda a 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento la soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Despu s de la resuspensi n mezcle bien el vial con un movimiento de inversi n suave con cuidado para que no se forme espuma Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 19 502184ES Rev D Sistemas DTS D Temperatura 1 Los pasos de captura seleccionada amplificaci n hibridaci n y selecci n dependen de la temperatura Por lo tanto es imperativo que los ba os de agua se mantengan dentro de los rangos de temperatura especificados 2 La temperatura ambiente se define como de 15 C a 30 C 3 Los pasos de detecci n en el ensayo se deben realizar a una temperatura entre 18 C y 28 C E Tiempo Las reacciones de captura seleccionada amplificaci n hibridaci n y selecci n dependen todas del tiempo Observe los tiempos especificados en el Procedimiento de prueba de los sistemas DTS F Agitaci n con mezclador v rtex Una agitaci n con mezclador v rtex correcta es importante para el resultado satisfactorio del ensayo APTIMA CT Cuando se consigue un movimiento de agitaci n correcto la suspensi n gira a un ritmo que eleva la soluci n a la mitad superior del tubo Esta manipulaci n agitaci n en mezclador v rtex se mantiene durante periodos de tiempo especificados Para agitar en mezclador v rtex las reacciones seleccione
102. o en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 53 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 7a Resultados de torundas uretrales masculinas y orina de sujetos infectados o no infectados con C trachomatis seg n el estado de infecci n del paciente NAAT 1 _Estadode Ensayo APTIMA NAAT 2 Ensayo Estado de s ntomas infecci n del COMBO 2 APTIMA CT Total paciente TM OM TM OM TM OM Sint Asint Infectado 96 68 164 Infectado 5 1 6 Infectado 11 7 18 Infectado 13 11 24 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 2 0 2 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 0 2 2 Infectado 3 1 4 Infectado 0 1 1 No infectado 4 4 8 No infectado 1 0 1 No infectado 1 4 5 No infe
103. o utilizando la instrumentaci n semiautomatizada de los sistemas DTS seg n se especifique El ensayo se puede utilizar para analizar los siguientes muestras de individuos sintom ticos muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico y muestras de orina masculina y femenina El ensayo se puede utilizar para analizar las siguientes muestras de individuos asintom ticos muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente y muestras de orina masculina y femenina Este ensayo tambi n est indicado para utilizarse en el an lisis de muestras ginecol gicas de pacientes tanto sintom ticas como asintom ticas Estas muestras de cuello uterino recolectadas en viales de soluci n PreservCyt pueden analizarse antes o despu s de procesar la citolog a El an lisis de las muestras procesadas despu s de la citolog a se limita a las muestras procesadas con el sistema ThinPrep 2000 exclusivamente Las muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente son una opci n para el cribado de mujeres cuando el examen p lvico no est indicado El kit de recogida de muestras de torunda vaginal no es para uso dom stico Resumen y explicaci n de la prueba Las infecciones por Chlamydia trachomatis se cuentan entre las infecciones de transmisi n sexual m s comunes en todo el mundo Solamente en Estados Unidos se calcula que se
104. oensis Staphylococcus aureus Citrobacter freundii Morganella morganii Staphylococcus epidermidis Clostridium perfringens Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae Corynebacterium genitalium Mycoplasma genitalium Streptococcus bovis Corynebacterium xerosis Mycoplasma hominis Streptococcus mitis Cryptococcus neoformans meningitidis serogrupo A Streptococcus mutans Citomegalovirus meningitidis serogrupo B Streptococcus pneumoniae Deinococcus radiodurans meningitidis serogrupo C 4 Streptococcus pyogenes Derxia gummosa meningitidis serogrupo D Streptococcus salivarius Eikenella corrodens meningitidis serogrupo Y Streptococcus sanguis Enterobacter aerogenes 2 Z meningitidis serogrupo W135 Streptomyces griseinus Enterobacter cloacae Neisseria cinerea 4 Trichomonas vaginalis Entercoccus avium Neisseria dentrificans Ureaplasma urealyticum Entercoccus faecalis Neisseria elongata 3 Vibrio parahaemolyticus Entercoccus faecium Neisseria flava Yersinia enterocolitica Erwinia herbicola Neisseria flavescens 2 Erysipelothrix rhusiopathiae Neisseria lactamica 9 n numero de cepas analizadas Todos los organismos analizados dieron un resultado negativo en el ensayo APTIMA CT Substancias interferentes Las siguientes sustancias interferentes se a adiero
105. ogenes Gemella haemolysans Neisseria polysaccharea Aerococcus viridans Haemophilus ducreyi Paracoccus denitrificans Aeromonas hydrophila Haemophilus influenzae Peptostreptococcus anaerobius Agrobacterium radiobacter Virus herpes simple Peptostreptococcus productus Alcaligenes faecalis Virus herpes simple II Plesiomonas shigelloides Bacillus subtilis Virus del papiloma humano 16 Propionibacterium acnes Bacteriodes fragilis Kingella dentrificans Proteus mirabilis Bacteriodes ureolyticus Kingella kingae Proteus vulgaris Bifidobacterium adolescentis Klebsiella oxytoca Providencia stuartii Bifidobacterium brevi Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Branhamella catarrhalis Lactobacillus acidophilus Pseudomonas fluorescens Brevibacterium linens Lactobacillus brevis Pseudomonas putida Campylobacter jejuni Lactobacillus jensonii Rahnella aquatilis Candida albicans Lactobacillus lactis Rhodospirillum rubrum Candida glabrata Legionella pneumophila 2 Saccharomyces cerevisiae Candida parapsilosis Leuconostoc paramensenteroides Salmonella minnesota Candida tropicalis Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium Chlamydia pneumoniae Micrococcus luteus Serratia marcescens Chlamydia psittaci 2 Moraxella lacunata Staphylococcus saprophyticus Chromobacterium violaceum Moraxella osl
106. oluci n de reconstituci n adecuada con el reactivo liofilizado Las etiquetas est n codificadas por color de forma que se puedan emparejar correctamente b Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte con firmeza el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial figura 1 paso 1 c Abra la botella de la soluci n de reconstituci n correspondiente y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia d Mientras sostiene el frasco con la soluci n de reconstituci n sobre la mesa inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en la abertura del frasco figura 1 paso 2 e Invierta lentamente el conjunto de frasco y vial Deje que la soluci n pase del frasco al vial de vidrio figura 1 paso 3 f Agite con una rotaci n suave la soluci n en el vial para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el vial figura 1 paso 4 g Espere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego invierta de nuevo el conjunto de frasco y vial inclin ndolo a un ngulo de 45 para reducir al m nimo la formaci n de espuma figura 1 paso 5 Deje que todo el l quido regrese al frasco h Retire el collar de reconstituci n del frasco figura 1 paso 6 i Vuelva a tapar el frasco Anote las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n en la etiqueta figura 1 paso 7 j Deseche el collar de reconstituci n y el vial figura 1 paso 8 A 3 Y 4
107. on los criterios anteriores e invalidar todas las muestras en el encuadre o los encuadres de controles afectados si no se cumplen los criterios de los controles Consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System para informaci n adicional 5 Los controles negativos puede que no sean efectivos en la supervisi n del arrastre aleatorio Consulte Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System para conocer los resultados procedentes de un estudio de arrastre anal tico de diana alta que se realiz para demostrar el control de la contaminaci n cruzada en el TIGRIS DTS System Consulte Rendimiento anal tico del sistema PANTHER para conocer los resultados procedentes de un estudio de arrastre anal tico de diana alta que se realiz para demostrar el control de la contaminaci n cruzada en el sistema PANTHER C Control de preparaci n de muestras opcional El control negativo para CT APTIMA que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT y el control positivo para CT APTIMA que est etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC act an como controles para los pasos de captura seleccionada amplificaci n y detecci n y deben incluirse en cada ciclo del ensayo Si se desea se pueden analizar controles para lisis celular y estabilizaci n del RNA de acuerdo con los requisitos de las organizaciones de acreditaci n pertinentes o los procedimientos de cada laboratorio Las muestras con un
108. ondiciones de env o distintas a las recomendadas O Las muestras pueden ser infecciosas Tome las precauciones universales al realizar este ensayo El director del laboratorio debe establecer m todos de manipulaci n y eliminaci n adecuados S lo se deber a permitir realizar este procedimiento de diagn stico a personal con la formaci n debida para manipular materiales infecciosos P Evite la contaminaci n cruzada durante los pasos de manipulaci n de las muestras Las muestras pueden contener concentraciones extremadamente altas de organismos Aseg rese de que los recipientes de muestras no entren en contacto unos con otros y deseche los materiales usados sin pasarlos por encima de los recipientes abiertos Cambie los guantes si entran en contacto con la muestra Q Si el laboratorio recibe un tubo de trasporte de muestra en torunda con ninguna torunda dos torundas una torunda de limpieza o una torunda no suministrada por Gen Probe la muestra debe rechazarse Antes de rechazar un tubo de transporte de torunda que no contenga ninguna torunda compruebe que no se trata de un tubo de transferencia de muestras APTIMA ya que este tubo de transporte de muestras no contendr ninguna torunda R Para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt recoja la muestra de acuerdo con las instrucciones del fabricante Las al cuotas posteriormente eliminadas del vial PreservCyt para su an lisis con el ensayo APTIMA CT deben procesarse utilizando s
109. ones indicadas en este prospecto puede producir resultados err neos B No se han evaluado los efectos del uso de tampones lavados vaginales y variables de recogida de muestras para determinar su impacto en la detecci n de CT C La presencia de mucosidad en las muestras endocervicales no interfiere con la detecci n de CT con el ensayo APTIMA CT Sin embargo para garantizar la recogida de c lulas infectadas con CT deben recogerse muestras de las c lulas epiteliales cil ndricas que recubren la endoc rvix Si no se elimina el exceso de mucosidad la recogida de muestras de estas c lulas no est garantizada D La recogida de muestras de orina de torunda vaginal y de Pap en medio l quido PreservCyt no est concebida para sustituir a los ex menes cervicales y a las muestras endocervicales para el diagn stico de infecciones del aparato genitourinario femenino Las pacientes pueden padecer cervicitis uretritis infecciones de las v as urinarias o infecciones vaginales debido a otras causas o infecciones simult neas con otros agentes E El ensayo APTIMA CT no pretende servir para la evaluaci n de sospechas de abusos sexuales ni para otras indicaciones m dico legales En aquellos pacientes en los que un resultado positivo falso pueda tener un impacto psicol gico o social adverso los CDC recomiendan repetir la prueba con un m todo que utilice otra tecnolog a 4 F La fiabilidad de los resultados depende de la recogida adecuada d
110. oratorio Para supervisar la contaminaci n del laboratorio se puede realizar el siguiente procedimiento usando el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina 1 Etiquete los tubos de transporte de torunda con los n meros correspondientes a las reas que se van a analizar 2 Extraiga la torunda para recogida de muestras aplicador azul con impresiones verdes de su envase humedezca la torunda en el medio de transporte de torunda y p sela por el rea designada con un movimiento circular 3 Inserte inmediatamente la torunda en el tubo de transporte 4 Quiebre con cuidado el bastoncillo de la torunda en la l nea con la muesca tenga cuidado de que el contenido no salpique 5 Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de torunda Repita los pasos 2 al 5 en todas las reas en las que se vaya a aplicar la torunda 7 Analice la torunda utilizando el ensayo APTIMA CT de acuerdo con el Procedimiento de prueba de los sistemas DTS D Si los resultados son positivos o equ vocos para CT consulte Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad QC y del paciente la superficie podr a estar contaminada Descontamine la superficie con soluci n de hipoclorito de sodio seg n lo recomendado en Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Preparaci n del equipo Nota Si se sospecha la existencia de contaminaci n en el ba o de agua ste puede analiz
111. ores esperados de los sistemas DTS Tabla 2 Valores predictivos positivos y negativos para tasas de prevalencia hipot tica Tasa de prevalencia hipot tica Sensibilidad Especificidad VPP VPN 1 96 7 96 8 23 5 100 0 2 96 7 96 8 38 3 99 9 5 96 7 96 8 61 6 99 8 10 96 7 96 8 77 2 99 6 15 96 7 96 8 84 3 99 4 20 96 7 96 8 88 4 99 2 25 96 7 96 8 91 0 98 9 30 96 7 96 8 92 9 98 6 Distribuci n de las RLU del ensayo APTIMA CT La figura 4 muestra la distribuci n RLU del ensayo APTIMA CT para todos los tipos de muestras en el estudio cl nico excepto las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt La tabla 3 resume la distribuci n RLU para los resultados positivos totales y negativos totales as como para los resultados positivos falsos y negativos falsos para cada tipo de muestra excepto las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt en relaci n con el estado de infecci n del paciente En ciertos tipos de muestras hay una tendencia hacia una proporci n mayor de positivos verdaderos a medida que aumentan los valores de RLU 7 000 4 6 293 6 0004 5 000 4 i o i 5 2 4 0004 3 Negativo Equivoco RLU baja positivo Positivo 3 0004 o i o i 2 2 000 4 1 035 1 000 4 48 10 8 6 0 50 22 14 16 18 92 0 a T T er T T T T mm i o o o o o o Q o o Q o o Y Y N g S S 8 8 8 8 8 o o 3 Y v V 4 V y N o o i Y v v A 7 8 8 8 8 8 S S
112. os deben alcanzar la temperatura ambiente de 15 C a 30 C antes de que se inicie el ensayo 2 Siel reactivo de sonda CT reconstituido contiene precipitado que no se disuelve a temperatura ambiente caliente el frasco tapado a una temperatura que no exceda de 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento el reactivo de sonda CT se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Mezcle el reactivo de sonda CT por inversi n con cuidado de que no se forme espuma antes de cargarlo en el sistema 3 Mezcle bien cada reactivo mediante inversi n suave antes de cargarlo en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos 4 No llene hasta el borde los frascos de reactivos El sistema PANTHER reconocer y rechazar los frascos que est n llenos hasta el borde D Manipulaci n de muestras 1 Deje que los controles y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes del procesamiento 2 No agite las muestras en un mezclador v rtex 3 Confirme visualmente que cada tubo de muestras satisface uno de los criterios siguientes a La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA azul en un tubo de transporte de muestras de torunda unisex b La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA rosa en un tubo de transporte de muestras de torunda vaginal c Un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina d La ausenc
113. pondiente y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia e Ala vez que sujeta el frasco de la soluci n sobre la mesa del laboratorio inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en la abertura del frasco figura 3 paso 2 f Invierta lentamente el conjunto de los frascos Deje que la soluci n pase del frasco al vial de vidrio figura 3 paso 3 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 33 502184ES Rev D Sistema PANTHER g Agite con una rotaci n suave la soluci n del frasco para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el frasco figura 3 paso 4 h Espere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego invierta de nuevo el conjunto de los frascos inclinandolos a un ngulo de 45 para reducir al m nimo la formaci n de espuma figura 3 paso 5 Deje que todo el l quido regrese a la botella de pl stico i Retire el collar de reconstituci n y el vial de vidrio figura 3 paso 6 j Tape la botella de pl stico Anote las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n en la etiqueta figura 3 paso 7 k Deseche el collar de reconstituci n y el vial de vidrio figura 3 paso 8 Advertencia Evite que se forme espuma al reconstituir los reactivos La espuma compromete la detecci n de nivel en el sistema PANTHER 1 ES pP es 3 amp HS i due Ie g la y All I Figura 3 Proceso de reconstituci n del sistema PANTHER
114. raci n CV Coeficiente de variaci n N C No corresponde para muestras negativas RLU Unidades relativas de luz SD Desviaci n est ndar 1 Los valores de SD y CV se establecen en 0 y 0 0 respectivamente de acuerdo con el modelo de efectos aleatorios si la variabilidad debida a esta fuente en relaci n con los errores aleatorios y o la variaci n de otras fuentes es num ricamente negativa Una lista de trabajo incluy 1 r plica adicional de una muestra del panel con 50 fg rRNA ensayo En una lista de trabajo faltaba 1 r plica de una muestra del panel con 500 fg de rRNA ensayo Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 67 502184ES Rev D Rendimiento analitico del TIGRIS DTS System Rendimiento analitico del TIGRIS DTS System Consulte el rendimiento analitico especifico del sistema PANTHER en el apartado Rendimiento analitico del sistema P ANTHER Estudio de equivalencia de la sensibilidad analitica Los paneles de sensibilidad en mezcla de torundas endocervicales mezcla de muestras vaginales mezcla de muestras de orina y mezcla de muestras de Pap en medio liquido PreservCyt se prepararon al equivalente de rRNA de CT de 1 IFU por ensayo 7 25 IFU torunda y 5 1FU mL orina y con ellos se analizaron 60 r plicas en el TIGRIS DTS System El porcentaje de positivos IC 95 en el TIGRIS DTS System para la muestra de torunda endocervical fue del 100 95 1 100 para la muestra de torunda vaginal fue del 100 95 1 10
115. res predictivos del ensayo APTIMA CT en relaci n al estado de infecci n del paciente por centro cl nico y en general Prev Sensibilidad Especificidad VPP VPN IC 95 IC 95 1 252 54 14 183 1 21 8 98 2 90 3 100 92 9 88 4 96 1 794 99 5 Muestra Centro N PR PF NR NEF 2 354 83 15 252 4 246 95 4 88 6 98 7 94 4 90 9 96 8 84 7 98 4 3 4 1 0 3 0 25 0 100 2 5 100 100 292 100 100 100 4 NC NC NC NC NC NC NC N C N C N C N C N C Torunda 5 200 12 4 184 0 6 0 100 73 5 100 97 9 94 6 99 4 75 0 100 6 304 59 10 235 0 194 100 93 9 100 95 9 92 6 98 0 85 5 100 7 207 12 0 195 O 58 100 73 5 100 100 981 100 100 100 8 N C NC NC NC NC NC NC N C N C N C N C N C Todos 1 321 221 43 1 052 5 17 1 97 8 94 9 99 3 96 1 94 7 97 1 83 7 99 4 Hombres 1 252 54 9 188 1 21 8 98 2 90 3 100 95 4 91 5 97 9 85 7 99 5 2 354 85 9 258 2 24 6 97 7 91 9 99 7 966 93 7 98 4 90 4 99 2 3 4 1 0 3 O 25 0 100 2 5 100 100 29 2 100 100 100 4 NC NC NC NC NC NC NC N C N C N C N C N C Orina 5 200 12 4 184 0 6 0 100 73 5 100 97 9 94 6 99 4 75 0 100 6 305 53 8 238 6 19 3 89 8 79 2 96 2 96 7 93 7 98 6 86 9 97 5 7 207 12 1 194 0 5 8 100 73 5 100 99 5 97 2 100 92 3 100 8 NC NC NC NC NC NC NC N C N C N C N C N C Todos 1 322 217 31 1 065 9 17 1 96 0 92 6 98 2 97 2 96 0 98 1 87 5 99 2 1 228 36 2 190 0 15 8 100 90 3 100 9
116. rgente lt 5 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 23 502184ES Rev D TIGRIS DTS System Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla Cantidad Cantidad 2 x Simbolo Componente kit de 50 pruebas 100 pruebas kit S Reactivo de selecci n APTIMA 1x430mL 2x20mL Soluci n de tamp n borato 600 mM con surfactante TCR Reactivo de captura seleccionada CT APTIMA 1x26 0mL 2x17 mL Soluci n de tamp n sal con un contenido de olig meros de captura y fase s lida Collares de reconstituci n 3 Pipetas de transferencia 2 Hoja de c digos de barras de lote maestro 1 hoja 1 hoja Kit de controles APTIMA almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad PCT Control positivo CT Control negativo GC APTIMA 5 x 1 7 mL NGC cido nucleico CT no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 1 IFU CT 5 fg ensayo PGC Control positivo GC Control negativo CT APTIMA 5 x 1 7 mL NCT cido nucleico GC no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC 250 fg ensayo Los equivalentes de rRNA se calcularon a partir del tama o del genoma y de la raz n DNA RNA por c l
117. rse con cautela sin olvidar que la probabilidad de un positivo falso puede ser mayor que la de un positivo real L Para los estudios cl nicos de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt el rendimiento del ensayo APTIMA CT en la detecci n de CT se deriva principalmente Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 41 502184ES Rev D Limitaciones de poblaciones con baja prevalencia No obstante los resultados positivos en poblaciones con baja prevalencia deben interpretarse con cautela sin olvidar que la probabilidad de un positivo falso puede ser mayor que la de un positivo real M No se ha evaluado el rendimiento del kit de transferencia de muestras APTIMA para el an lisis de la misma muestra de Pap en medio l quido PreservCyt tanto antes como despu s del procesamiento de la citolog a ThinPrep N No se ha evaluado el uso con los ensayos APTIMA de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt procesadas con instrumentos distintos al procesador ThinPrep 2000 O Las muestras de torunda vaginal recogidas por las pacientes son una opci n para el cribado de mujeres cuando el examen p lvico no est indicado P La aplicaci n de las muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente se limita a centros m dicos que cuentan con recursos y asesoramiento para explicar los procedimientos y las precauciones Q El ensayo APTIMA CT no ha sido validado para su uso con muestras de torunda vaginal recogidas por las pacientes en su domici
118. runda vaginal recogida por paciente asintom tica w a a a 3 3a pm oO a a Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 56 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 7d Resultados de torundas vaginales recogidas por el cl nico de mujeres infectadas o no infectadas con C trachomatis de acuerdo con el estado de infecci n de la paciente Estado de NAAT 1 Ensayo NAAT 2 E m infecci n del Ensayo APTIMA COMBO 2 APTIMA CT stado de sintomas Total paciente TF OF TVC Sint Asint Infectado 76 4 gi e Tm Infectado Infectado Infectado Infectado Infectado ala Infectado 4 4 4 4 4 4 Infectado 4 4 4 4 4 a N Infectado Infectado Infectado f Infectado Infectado Infectado 4 Infectado No infectado No infectado N C No infectado No infectado No infectado No infectado No infectado 4 4 4 4 4 No infectado No infectado No infectado 1 1 1 1 No infectado No infectado z 2 ol wl rm rm Nw a a l a al nN a ow a a a o No infectado z z O Aj Al alo oa gt a om rm of w Of O NI ajoj GC N
119. s APTIMA de acuerdo con las instrucciones del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA c Si la muestra se va a analizar despu s del procesamiento con el procesador ThinPrep 2000 procese la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt seg n se indica en el ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual del usuario del procesador ThinPrep 2000 y en el prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA Transfiera 1 mL del fluido restante en el vial de soluci n PreservCyt a un tubo de transferencia de muestras APTIMA de acuerdo con las instrucciones del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA d Una vez transferida la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt al tubo de transferencia de muestras APTIMA la muestra debe analizarse con el ensayo APTIMA CT antes de 30 d as si se ha almacenado a una temperatura entre 2 C y 8 C o antes de 14 d as si se ha almacenado entre 15 C y 30 C Si fuera necesario ampliar el tiempo de almacenamiento se pueden congelar a una temperatura entre 20 C y 70 C durante un per odo de hasta 12 meses despu s de la transferencia consulte Estudios de la estabilidad de las muestras C Almacenamiento de muestras despu s de la prueba 1 Las muestras analizadas deben almacenarse boca arriba en una gradilla 2 Los tubos de transporte de muestras deben cubrirse con una nueva barrera de aluminio o pel cula de pl stico limpias 3 Sies necesario congelar o enviar las mu
120. s de manipular las muestras y los reactivos del kit F Advertencia Irritantes corrosivos Evite el contacto de Auto Detect 1 y Auto Detect 2 con la piel los ojos y las mucosas Si estos fluidos entran en contacto con la piel o los ojos l velos con agua Si se produce un derrame de estos fluidos diluya el derrame con agua antes de secarlo G Las superficies de trabajo pipetas y otros equipos se deben descontaminar regularmente con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Informaci n de los sistemas DTS H Para reducir al m nimo la contaminaci n por amplicones en el ensayo se recomienda encarecidamente utilizar un rea aparte para el HPA Este rea dedicada debe estar separada de las reas de preparaci n del reactivo de captura seleccionada y de amplificaci n Para evitar que las reas del laboratorio se contaminen con amplicones dichas areas deben organizarse con un flujo de trabajo unidireccional de la preparaci n del reactivo al HPA Las muestras equipos y reactivos no deben devolverse al rea donde se realiz un paso anterior Adem s el personal no debe volver a las reas de trabajo anteriores sin tomar las medidas de precauci n adecuadas contra la contaminaci n Informaci n para las muestras J Para la recogida de muestras de torunda endocervical y uretral masculina utilice s lo el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para dichas muestras Para la recogida de
121. s deben limpiarse regularmente seg n se describe en Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Notas de procedimiento Y Cuando se usen pipetas de repetici n para la adici n de reactivos no toque el tubo con la punta de pipeta para impedir el arrastre de un tubo a otro Z Es necesaria una mezcla adecuada para lograr resultados exactos en el ensayo Para los detalles completos consulte Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Notas de procedimiento AA Se deben dedicar ba os de agua independientes para los pasos de captura seleccionada amplificaci n y HPA del ensayo AB La reproducibilidad del ensayo se estableci utilizando un medio de transporte de torunda enriquecido con rRNA No se ha determinado la reproducibilidad en el an lisis de muestras de torunda y de orina que conten an el organismo seleccionado AC Las tarjetas de sellado se deben desechar en el contenedor de desechos inmediatamente despu s de retirarlas de los tubos de reacci n Se deben utilizar siempre tarjetas de sellado nuevas no deben reutilizarse nunca las de un paso anterior Las tarjetas de sellado se deben fijar firmemente a la parte superior de todos los tubos de reacci n Requisitos de almacenamiento y manipulaci n de los reactivos A Los siguientes reactivos permanecen estables cuando se almacenan a una temperatura entre 2 C y 8 C refrigerados Reactivo de amplificaci n CT APTIMA Reactivo enzim tico APTIMA Reactivo de sonda CT APTI
122. sentan un corte transversal filogen tico de organismos Los organismos analizados inclu an bacterias hongos levadura par sitos y virus Todos los organismos excepto C psittaci C pneumoniae U urealyticum y los virus se analizaron a 1 0 x 10 c lulas ensayo en medios de transporte de orina KOVA Trol y 60 organismos se analizaron en medios de transporte de torunda Los organismos Chlamydia y Neisseria se analizaron en el medio PreservCyt C psittaci VR601 se analiz a 8 0 x 10 c lulas ensayo y C psittaci VR125 se analiz a 1 0 x 10 c lulas ensayo C pneumoniae se analiz a 4 x 10 c lulas ensayo y U urealyticum se analiz a 6 7 x 10 c lulas ensayo Los virus se analizaron como sigue a virus herpes simple 2 5 x 10 TCIDsy ensayo b virus herpes simple Il 6 0 x 10 TCIDsy ensayo c papipomavirus humano 16 2 9 x 10 copias de DNA ensayo y d citomegalovirus 4 8 x 10 c lulas ensayo La lista de organismos analizados se muestra en la tabla 11 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 60 502184ES Rev D Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Tabla 11 Especificidad anal tica Organismo Organismo Organismo Achromobacter xerosis Escherichia coli Neisseria mucosa 3 Acinetobacter calcoaceticus Flavobacterium meningosepticum Neisseria sicca 3 Acinetobacter Iwoffi Fusobacterium nucleatum Neisseria subflava 14 Actinomyces israelii Gardnerella vaginalis Neisseria perflava Actinomyces py
123. sferencia de muestras APTIMA y se analizaron al inicio del ensayo antes de colocarse a 2 C 10 C y 30 C Las muestras procesadas se analizaron entonces durante 17 d as almacenadas a 30 C y durante 36 d as almacenadas a una temperatura entre 2 C y 10 C Todas las muestras enriquecidas fueron positivas para CT en todas las ocasiones y temperaturas Los datos que apoyan condiciones de almacenamiento m s prolongadas se generaron de cuatro mezclas de muestras en soluci n PreservCyt procesadas negativas analizadas a temperaturas por debajo del punto de congelaci n Cada mezcla se enriqueci con 1 a Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 62 502184ES Rev D Rendimiento anal tico de los sistemas DTS 10 IFU CT ensayo y luego se analiz al inicio del ensayo Cada mezcla se coloc primero a 30 C durante 14 d as y luego se almacen a 20 C o 70 C a lo largo de 106 d as Todas las muestras enriquecidas fueron positivas para CT en todas las ocasiones y temperaturas C Estudio de la estabilidad de las muestras con congelaci n adicional a 20 C Los datos que apoyan las condiciones de almacenamiento recomendadas a una temperatura de 20 C para las muestras de torunda endocervical torunda uretral torunda vaginal orina femenina orina masculina y Pap en medio l quido PreservCyt se generaron con 90 muestras de cada tipo con resultado negativo donde 30 muestras fueron enriquecidas con CT a 1 0 IFU por reacci n 30 muestr
124. soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M Recipientes est ndar para recogida de orina sin conservantes Recipiente de pl stico con tap n grande Tapones penetrables APTIMA 105668 Tapones no penetrables de repuesto 103036A Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 12 502184ES Rev D Sistemas DTS Materiales opcionales N de cat logo Kit de controles APTIMA 301110 Potenciador de lej a GEN PROBE 302101 para la limpieza sistem tica de las s uperficies y el equipo Fluidos de ensayo APTIMA 302002C Soluci n de lavado APTIMA tamp n para fluido de de sactivaci n APTIMA y reactivo de aceite APTIMA Prueba m ltiple de cualificaci n de ETS 102325 Puntas conductoras de 1000 uL con detecci n de l quido 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 con 900932 Sistemas DTS 800 APTIMA COMBO 2 Placa de la plataforma 105200 Dep sito de reactivos cuarto de m dulo de 40 mL 104765 Dep sito de reactivo dividido cuarto de m dulo de 19 mL x 2 104763 Procedimiento de prueba de los sistemas DTS A Preparaci n del equipo 1 Prepare un ba o de agua a 62 C 1 C para captura seleccionada y anilado del cebador un segundo ba o de agua a 42 C 1 C para amplificaci n y un tercer ba o de agua a 62 C 1 C para HPA Si se usa el ba o de calor seco mezclador v rtex SB 100 consulte la Hoja de aplicaci n del ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 Hoja de aplicaci n SB 100 2 Ant
125. sporte de torunda A lo largo del estudio se analizaron 576 muestras de diana alta y 2 376 muestras negativas en los tres TIGRIS DTS Systems La tabla 15 presenta la proporci n de arrastre general promediada a 0 21 5 2 364 Un total de 12 muestras negativas se registraron como no v lidas y se excluyeron del c lculo Se realiz un an lisis independiente de un subconjunto de la poblaci n del estudio compuesto por las muestras negativas que siguieron inmediatamente a un resultado positivo alto La proporci n de arrastre para este subconjunto de la poblaci n se promedi a 0 47 2 424 Para los resultados positivos falsos en este subconjunto la proporci n de arrastre abarc desde el 0 al 1 43 en los tres TIGRIS DTS Systems Estos resultados demuestran que la contaminaci n de arrastre se reduce al m nimo en el TIGRIS DTS System Tabla 15 Resumen de arrastre general del TIGRIS DTS System N de pruebas N total de resultados A PN Intervalos de confianza Instrumento negativas resultados positivos falsos IC 95 v lidas positivos falsos CT para CT 3 TIGRIS 1 789 2 0 25 0 03 0 91 TIGRIS 2 783 3 0 38 0 08 1 12 TIGRIS 3 792 0 0 00 0 00 0 38 Todos los 2 364 5 0 21 0 07 0 49 instrumentos AnS a TIGRIS DTS System 1 no tuvo ning n resultado positivo CT falso directamente despu s de un positivo de diana alta b TIGRIS DTS System 2 tuvo dos resultados positivos CT falsos directamente despu s de un
126. to B Temperatura La temperatura ambiente se define como de 15 C a 30 C C Talco de guantes Como sucede en cualquier sistema de reactivos el exceso de talco en algunos guantes puede ser causa de contaminaci n de los tubos abiertos Se recomienda utilizar guantes sin talco D Protocolo de supervisi n de la contaminaci n en laboratorios para el sistema PANTHER Existen numerosos factores espec ficos de los laboratorios que pueden contribuir a la contaminaci n incluido el volumen de la prueba el flujo de trabajo la prevalencia de la enfermedad y otras actividades de laboratorio Estos factores deben tenerse en consideraci n al establecerse la frecuencia con que se supervisar la contaminaci n Los intervalos para la supervisi n de la contaminaci n deben establecerse en funci n de las pr cticas y procedimientos de cada laboratorio Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 36 502184ES Rev D Sistema PANTHER Para supervisar la contaminaci n del laboratorio se puede realizar el siguiente procedimiento usando el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina 1 Etiquete los tubos de transporte de torunda con los n meros correspondientes a las reas que se van a analizar 2 Extraiga la torunda para recogida de muestras aplicador azul con impresiones verdes de su envase humedezca la torunda en el medio de transporte de torunda y p sela por el re
127. tra Centro N PR PF NR NF a pep Ha pa 4 iy 1 70 14 4 52 O 20 0 100 768 100 92 9 82 7 98 0 77 8 100 2 46 13 4 29 0 283 100 75 3 100 87 9 71 8 96 6 76 5 100 3 45 4 2 39 0 89 100 398 100 95 1 83 5 99 4 66 7 100 ao co 4 152 6 3 142 1 46 85 7 42 1 99 6 97 9 94 1 99 6 66 7 99 3 tee a vaginal 130 7 3 120 0 54 100 590 100 976 930 995 700 100 6 75 8 5 62 0 10 7 100 63 1 100 92 5 83 4 97 5 61 5 100 7 68 5 2 61 0 74 100 478 100 96 8 890 996 71 4 100 8 43 3 2 38 0 7 0 100 29 2 100 95 0 83 1 99 4 60 0 100 Todos 629 60 25 543 1 97 98 4 91 2 100 95 6 93 6 97 1 706 99 8 1 228 36 8 184 0 15 8 100 90 3 100 95 8 92 0 98 2 81 8 100 2 198 50 16 130 2 263 96 2 86 8 99 5 89 0 82 8 93 6 758 98 5 3 13 9 4 100 0 80 100 664 100 96 2 90 4 98 9 69 2 100 T 4 263 18 14 229 2 7 6 90 0 68 3 98 8 94 2 90 5 96 8 56 3 99 1 poral vaginal 199 13 7 179 0 65 100 753 100 962 92 4 98 5 650 100 6 296 33 15 248 0 11 1 100 894 100 94 3 90 8 96 8 68 8 100 7 1022 9 0 92 14 98 90 0 55 5 99 7 100 961 100 100 989 8 50 3 1 46 0 60 100 29 2 100 97 9 88 7 99 9 75 0 100 Todos 1 449 171 65 1 208 5 12 1 97 2 93 5 99 1 94 9 93 5 96 0 72 5 99 6 Se eee a a a a aa a PR positivo real PF positivo falso NR negativo real NF negativo falso Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 52 502184ES Rev D Rendimiento clinico en sistemas DTS Tabla 6a Sensibilidad especificidad y valores predictivos del ensa
128. u recogida Almacene entre 2 C y 30 C y analice en los 30 d as siguientes a su recogida b Una vez recogidas las muestras de orina procesadas se deben transportar en el tubo de transporte de muestras de orina APTIMA a una temperatura entre 2 C y 30 C y almacenar entre 2 C y 30 C hasta que se analicen Las muestras de orina procesadas se deben analizar con el ensayo APTIMA CT en los 30 d as siguientes a su recogida Si fuera necesario ampliar el tiempo de almacenamiento se pueden congelar a una temperatura entre 20 C y 70 C durante un per odo de hasta 12 meses despu s de la recogida consulte Estudios de la estabilidad de las muestras 3 Muestras de Pap en medio l quido PreservCyt a Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt destinadas a pruebas de CT se deben procesar para citolog a o transferirse a un tubo de transferencia de muestras APTIMA en los 30 d as siguientes a su recogida si se conservan a una temperatura entre 2 C y 30 C consulte Estudios de la estabilidad de las muestras b Sise va a usar el procedimiento de eliminaci n de al cuotas ThinPrep consulte el ThinPrep 2000 o ThinPrep 3000 Processor Operator s Manual Addendum Manual del usuario del procesador ThinPrep 2000 o ThinPrep 3000 Ap ndice para obtener instrucciones al respecto Transfiera 1 mL de la al cuota extra da a un tubo de Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 8 502184ES Rev D Informaci n general transferencia de muestra
129. ue un nuevo TTC en la gradilla para TTC Encienda la bomba de vac o Conecte el peine m ltiple de aspiraci n a las puntas del TTC Aspire toda la soluci n de lavado restante en la cubeta de cebado de la estaci n de distribuci n de la soluci n de lavado Aparte el peine m ltiple de distribuci n b Vierta al menos 100 mL de soluci n de hipoclorito de sodio del 0 5 al 0 7 0 07 M a 0 1 M o si se prefiere del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M en la cubeta de cebado Aspire toda la soluci n a trav s del peine m ltiple de aspiraci n Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 20 502184ES Rev D Sistemas DTS c Vierta al menos 100 mL de agua desionizada en la cubeta de cebado Aspire toda el agua a trav s del peine m ltiple de aspiraci n Expulse las puntas a su TTC original e Deje encendida la bomba de vac o hasta que el tubo del peine m ltiple est seco para evitar el retroflujo f Descontamine las superficies del peine m ltiple de aspiraci n seg n se describe en Unidad TCS 3 Contenedor de desechos del TCS Retire la botella de desechos del sistema de captura seleccionada semanalmente o cuando est llena en un 25 a Apague la bomba de vac o y deje que la presi n de vac o se iguale b Libere los conectores de desconexi n r pida entre la botella de desechos y la botella de derrames y entre la botella de desechos y el peine m ltiple de aspiraci n Retire la botella de desechos del alojamiento
130. uestra de orina femenina tuvo un resultado inicial equ voco en los sistemas DTS cuando se volvi a analizar el resultado final fue v lido Una muestra de orina masculina tuvo un resultado inicial no v lido en el TIGRIS DTS System cuando se volvi a analizar el resultado final fue v lido Una muestra de orina femenina tuvo un resultado inicial equ voco en el TIGRIS DTS System Esta muestra se volvi a analizar sin embargo hab a caducado por lo que el resultado final fue equ voco La tabla 12 presenta las concordancias positivas negativas y generales de todos los resultados emparejados para cada tipo de muestra por estado sintom tico Las muestras est n relativamente desequilibradas por estado sintom tico y asintom tico pero las concordancias generales para los sujetos sintom ticos fueron 98 5 131 133 para torundas femeninas torundas endocervicales y vaginales combinadas 100 60 60 para torunda uretral masculina 98 2 55 56 para muestras de orina femenina 100 60 60 para muestras de orina masculina y 100 81 81 para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Para sujetos asintom ticos las concordancias generales fueron del 100 para 72 torundas femeninas 60 torundas uretrales masculinas 42 muestras de orina femenina 55 muestras de orina masculina y 35 muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 64 502184ES Rev D Concordancia de las muestras clinicas del T
131. ula estimada de cada organismo Material necesario que debe adquirirse por separado Nota Se indica el n mero de cat logo de los materiales que pueden adquirirse de Gen Probe a menos que se especifique lo con trario N de cat logo TIGRIS DTS System 105118 Kit de fluidos del ensayo APTIMA 302382 soluci n de lavado APTIMA tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA y reactivo de aceite APTIMA Kit de Auto Detect APTIMA 301048 Kit de conservante de fluido del sistema APTIMA 302380 Puntas conductoras de 1000 uL detectoras de l quido 10612513 Tecan Kit del ciclo del TIGRIS DTS System con 301191 Unidades multitubo Multi tube Unit MTU 104772 02 Kit de bolsa de de sechos de MTU puntas 900907 Deflectores de desechos de MTU 900931 Cubiertas del contenedor de desechos de MTU 105523 Ensayo de Chlamydia trachomatis APTIMA 24 502184ES Rev D TIGRIS DTS System N de cat logo Kit de transferencia de muestras APTIMA 301154C para utilizar con muestras en soluci n PreservCyt Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA 301162 Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para 301041 muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras 301040 de orina masculina y femenina Tubos de transporte de muestras de orina APTIMA para muestras 105575 de orina masculina y femenina Lej a soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M
132. ura seleccionada Target Capture System TCS 104555 de GEN PROBE Incubadoras y mezcladores v rtex 2 mezcladores v rtex multitubo 102160 3 ba os de agua circulante 104586 62 C 1 C 42 C 1 C 62 C 1 C 3 espaciadores de bafio de agua 104627 O 2 ba os de calor seco mezcladores v rtex SB100 105524 Puede que se requieran ba os SB100 adicionales a medida que aumente el volumen de la prueba Kit de Auto Detect APTIMA 301048 2 pipeteadores Eppendorf Repeater Plus 105725 2 pipeteadores 1000 uL RAININ PR1000 901715 Pipeteador Eppendorf 20 uL a 200 uL 105726 Puntas de pipeta de repetici n 2 5 mL 21 381 329 Puntas de pipeta de repetici n 5 0 mL 21 381 330 Puntas de pipeta de repetici n 25 0 mL 21 381 115 Puntas estilo P1000 105049 punta de di metro especial distribuida solamente por Gen Probe Puntas de pipeta de 20 uL a 200 uL 705512 Fisher Unidades de diez tubos Ten Tube Unit TTU TU0022 Casetes de diez puntas Ten Tip Cassette TTC 104578 Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para 301041 muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras 301040 de orina masculina y femenina Tubos de transporte de muestras de orina APTIMA para muestras 105575 de orina masculina y femenina Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA 301162 Kit de transferencia de muestras APTIMA 301154C Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Lej a
133. va si se puede esperar un valor predictivo positivo bajo o si un resultado positivo falso tendr a graves consecuencias psicosociales o legales 4 Una de estas opciones para pruebas adicionales puede ser una prueba de amplificaci n de cido nucleico aprobada por la FDA diferente dirigida a una secuencia de cido nucleico distinta a la de la prueba inicial El ensayo APTIMA CT selecciona diferentes secuencias de cido nucleico de las seleccionadas por otras NAAT de C trachomatis incluido el ensayo APTIMA COMBO 2 Principios del procedimiento El ensayo APTIMA CT combina las tecnolog as de captura seleccionada TMA y HPA Las muestras se recogen y transfieren a sus respectivos tubos de transporte La soluci n de transporte en estos tubos libera el rRNA diana y lo protege de la degradaci n durante el almacenamiento Cuando el APTIMA CT se realiza en el laboratorio la mol cula de rRNA diana se a sla de las muestras mediante el uso de un olig mero de captura a trav s de un proceso de captura seleccionada que utiliza microparticulas magn ticas El olig mero de captura contiene una secuencia complementaria a una regi n espec fica de la mol cula diana as como una cadena de residuos de deoxiadenosina Durante el paso de hibridaci n la regi n espec fica de la secuencia del olig mero de captura se une a una regi n espec fica de la mol cula seleccionada El complejo olig mero de captura diana se captura y extrae a continuaci n
134. vos falsos provocados por contaminaci n de arrastre se realiz un estudio anal tico de varios ciclos utilizando paneles enriquecidos en tres sistemas PANTHER El arrastre se evalu utilizando aproximadamente un 20 de muestras de CT de t tulo elevado dispersadas entre muestras negativas Los ciclos incluyeron grupos de muestras positivas altas con grupos de muestras negativas as como muestras positivas altas individuales dispersadas en un patr n espec fico dentro del ciclo Se hicieron muestras de t tulo elevado utilizando rRNA de CT a adido a STM para dar una concentraci n final de 5 x 10 fg rRNA reacci n equivalente de rRNA de 2 5 x 10 FU mL Las pruebas se llevaron a cabo utilizando 5 ciclos en tres sistemas PANTHER con un total de 2 933 muestras negativas La proporci n de arrastre general fue del 0 con un intervalo de confianza del 95 de 0 0 1 Un total de 7 muestras negativas se registraron como no v lidas en los ciclos de arrastre de t tulo elevado y se excluyeron del c lculo Bibliograf a 1 Beem M O and E M Saxon 1977 Respiratory tract colonization and a distinctive pneumonia syndrome in infants infected with Chlamydia trachomatis NEJM 296 306 310 2 Buimer M G J J Van Doornum S Ching P G H Peerbooms P K Plier D Ram and H H Lee 1996 Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae by Ligase chain reaction based assays with clinical specimens from various sites imp
135. y Ginecolog a de ocho centros en diferentes localidades geogr ficas con baja a alta prevalencia para CT contribuyeron muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina orina masculina y femenina torunda vaginal y Pap en medio l quido PreservCyt Las muestras se transfirieron directamente a Gen Probe para su an lisis mientras que las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se procesaron en 2 laboratorios de citopatolog a antes de transferirse En Gen Probe las muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina y orina femenina y masculina se cribaron primero con el ensayo APTIMA COMBO 2 en el TIGRIS DTS System y las muestras de torunda vaginal y de Pap en medio l quido PreservCyt se evaluaron con el ensayo APTIMA COMBO 2 en los sistemas DTS Las muestras con resultados finales no v lidos o equ vocos no se seleccionaron para el estudio de concordancia de las muestras cl nicas APTIMA CT Se seleccionaron 205 muestras de torunda femeninas 87 endocervicales y 118 vaginales 120 de torunda uretral masculina 98 de orina femenina 115 de orina masculina y 116 de Pap en medio l quido PreservCyt con resultados CT positivos y negativos del ensayo APTIMA COMBO 2 para el an lisis comparativo entre el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS en relaci n con el ensayo APTIMA CT Las muestras con resultados iniciales no v lidos o equ vocos volvieron a analizarse utilizando el mismo sistema en el que se gener el resultado Una m
136. yo APTIMA CT en relaci n al estado de infecci n del paciente por centro cl nico y en general para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Resultado de la soluci n Prev Sensibilidad Especificidad o Centro PreservCyt J 9 IC 95 IC 95 VPP VPN APTIMA CT Positivo 14 0 1 2 100 14 14 96 5 83 86 1 Negativo 0 0 0 83 14 0 5 82 4 100 76 8 100 90 1 99 3 Total 14 0 1 85 Positivo 4 0 0 0 2 Negativo 0 0 2 118 3 2 109144 190 1201120 100 100 39 8 100 97 0 100 Total 4 0 2 118 Positivo 29 0 0 6 3 Negativo 2 0 2 436 6 5 9392A once 82 9 99 5 78 6 99 2 97 1 99 5 Total 31 0 2 442 Positivo 8 0 0 4 4 Negativo 0 3 1 271 2 8 1001818 ara 66 7 100 63 1 100 96 4 99 6 Total 8 3 1 275 Positivo 13 0 0 3 92 9 13 14 98 9 280 283 5 Negativo 1 1 4 275 4 7 9 dd 81 3 99 6 66 1 99 8 96 9 99 8 Total 14 1 4 278 Positivo 18 0 1 1 94 7 18 19 99 4 343 345 6 Negativo 1 1 5 337 5 2 7 Al 90 0 99 7 74 0 99 9 97 9 99 9 Total 19 1 6 338 Positivo 86 0 2 16 95 6 86 90 98 8 1 539 1 557 Todos Negativo 4 5 14 1 520 5 5 6 8 82 7 99 7 89 0 98 8 98 2 99 3 Total 90 5 16 1 536 sp AA AA AN A A A A AO Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA CT Resultado positiv

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