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cobas TaqScreen WNV Test kit

1. 134 Tableau 15 Sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen tests individuels aa UTILISATION Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen utilis avec le syst me cobas s 201 est un essai qualitatif in vitro destin la d tection directe de l ARN du virus du Nil occidental VNO dans le plasma humain Ce produit est destin tre utilis comme test de d pistage des donneurs afin de d tecter l ARN du VNO dans les chantillons de plasma de donneurs humains individuels y compris les donneurs de sang total et de composants sanguins ainsi que d autres donneurs vivants Son usage est aussi pr vu pour d pister des donneurs d organe lorsque les chantillons de plasma sont pr lev s pendant que le c ur du donneur bat encore ainsi que les chantillons de sang de donneurs d c d s c ur ayant arr t de battre Ce test n est pas destin tre utilis sur des chantillons de sang de cordon ombilical Le plasma provenant de l ensemble des donneurs peut tre test comme chantillons individuels Pour les dons de sang total et de composants sanguins les chantillons de plasma peuvent tre test s en pools compos s d un maximum de six aliquotes gales provenant d chantillons individuels Pour les dons de tissus et d organes provenant de donneurs d c d s c ur ayant arr t de battre les chantillons de plasma et de s
2. Tableau 1 Test de d pistage du virus du Nil occidental TaqScreen r sultats de reproductibilit ora Site op Pherae Jour Pourcentage de Pourcentage Concentration 00 es rateur 6S negar cycle r sultats n gatifs global trousse n gatifs par test par site jour cycle ac 95 lot de trousse op rateur du test Lot lot Site site Essai essai Total 100 0 A 359 359 1 100 0 360 360 1 100 0 209 209 100 0 B 859 359 2 100 0 359 359 2 100 0 198 198 100 0 N gatifs 100 0 1077 1077 859 359 3 100 0 358 358 3 100 0 209 209 99 7 100 0 4 100 0 192 192 5 100 0 203 203 6 100 0 66 66 Pourcentage Pourcentage de K Site op a Jour Pourcentage de Pourcentage Loge de r sultats rateur du r sultats a cycle r sultats r actifs global Concentration trousse r actifs par test par site te jour cycle 95 lot de trousse op rateur du test J Lot a lot Site a site Essai a essai Total 73 9 0 49x LDD A 264 357 1 75 5 271 359 1 71 5 148 207 72 2 B 260 360 2 74 7 269 360 2 68 2 135 198 734 74 2 791 1077 267 360 3 70 1 251 358 3 74 6 156 209 70 7 76 1 4 78 1 150 192 5 153 205 6 74 2 49 66 99 4 2 5x LDD A 179 180 1 100 0 180 180 1 100 0 105 105 100 0 B 179 179
3. Ne pas congeler les r actifs ou les t moins Conserver les r actifs WNV CS1 WNV CS2 WNV CS3 et WNV CS4 une temp rature de 2 8 C Ces r actifs non ouverts sont stables jusqu la date de p remption indiqu e Une fois un flacon ouvert les r actifs sont stables pendant 30 jours une temp rature de 2 8 C ou jusqu la date de p remption le premier des deux pr valant Les r actifs peuvent tre utilis s pendant 6 s ries d analyse jusqu 40 heures cumulatives sur appareil COBAS AmpliPrep Les r actifs doivent tre conserv s une temp rature de 2 8 C entre es cycles d utilisation Le logiciel AMPLILINK contr le le nombre d heures cumulatives d utilisation des cassettes de r actif dans l appareil COBAS AmpliPrep et bloque l utilisation des cassettes une fois atteintes les 40 heures cumulatives Les r actifs sont stables pendant 24 heures continues sur l appareil COBAS AmpliPrep Le logiciel AMPLILINK ne contr le pas le nombre d heures continues d utilisation des cassettes de r actif dans appareil ni le nombre de s ries d analyse pour lesquelles les cassettes ont t utilis es C est a utilisateur d liminer les cassettes de r actif une fois atteintes les 24 heures continues ou les 6 s ries d analyse Conserver les t moins WNV C et WNV C une temp rature de 2 8 C Les t moins sont stables jusqu la date de p remption indiqu e Une fois un flacon ouvert tou
4. PROCLIN est une marque de commerce de Rohm and Haas Company MICROCIDE SQ est une marque de commerce de Global Biotechnologies Inc Les colorants de cyanine contenus dans ce produit sont soumis aux droits de brevets de GE Healthcare Bio Sciences Corp et de l Universit Carnegie Mellon et sont conc d s sous licence Roche uniquement dans le but d tre incorpor s des composants de trousses de recherche et de diagnostic in vitro Toute utilisation de ces trousses dans un but autre que la recherche ou le diagnostic in vitro requiert la concession de sous licences par GE Healthcare Bio Sciences Corp Piscataway New Jersey E U et par l Universit Carnegie Mellon Pittsburgh Pennsylvanie E U 2014 Roche Molecular Systems Inc 05 2014 05618169001 04 Doc Rev 4 0 Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Str 116 68305 Mannheim Germany 05618169001 04FRC 37 Doc Rev 4 0 Les symboles suivants sont d sormais en usage pour l tiquetage des produits diagnostiques par PCR de Roche Logiciel auxiliaire SW Mandataire dans la Communaut europ enne 1 Fiche technique codes barres BARCODE Code du lot Risques biologiques R f rence du catalogue Consulter les instructions d utilisation Contenu de la trousse Distributeur Pour valuation de performance IVD uniquement CE 05618169001 04FRC DF gt lt 4 E E Dispositif m dical de diagnostic in vitro Limite inf rieure d
5. et les intervalles de confiance bilat raux 95 du panel tableaux 10 et 11 La LDD 95 estim e par analyse PROBIT au moyen de l talon secondaire de VNO de Roche pour les chantillons de cadavres mod r ment h molys s tait de 117 4 copies ml et de 365 1 copies ml pour la matrice d chantillons hautement h molys s 05618169001 04FRC 29 Doc Rev 4 0 Tableau 10 R sum de sensibilit analytique selon l talon secondaire de VNO de Roche avec les chantillons de cadavres mod r ment h molys s Valeur Nombre Nombre de Timire interieure nominale d chantillons tests Pata gt copies ml r actifs individuels R actifs confiance HA unilat ral 40 28 43 65 1 51 5 90 38 44 86 4 74 9 120 64 66 97 0 90 8 140 64 66 97 0 90 8 160 65 66 98 5 93 0 200 65 66 98 5 93 0 Limite inf rieure P E de l intervalle Limite sup rieure de Taux de Concentration Je connance l intervalle de Analyse PROBIT d tection copies ml 95 confiance 95 copies ml copies ml 95 117 4 97 8 150 7 Tableau 11 R sum de sensibilit analytique selon l talon secondaire de VNO de Roche avec une matrice d chantillons hautement h molys s Valeur Nombre Nombre de Limite Infenieure 9 de l intervalle de nominale d chantillons tests R actifs confiance 95 copies ml r actifs individuels seek un
6. ge et la pr sence de sympt mes le stade de l infection et la taille du groupe 6 Le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD a t valid uniquement pour une utilisation avec test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen pour la pr paration automatis e de pools de plasma Respecter les instructions relatives au mat riel et les mesures de s curit mentionn es dans le Manuel d utilisation du syst me cobas s 201 et dans le Manuel de l utilisateur du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARlet IVD 7 Les membres du complexe antig nique de l enc phalite japonaise enc phalite japonaise enc phalite Murray Valley enc phalite de Saint Louis et virus Kunjin peuvent galement tre r actifs au test de d pistage du virus du Nil occidental TaqScreen 8 Les mutations tr s rares dans un fragment tr s bien conserv du g nome viral compris par les amorces et ou les sondes du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen peuvent provoquer l chec de la d tection du virus 9 tant donn les diff rences inh rentes entre les technologies il est recommand aux utilisateurs de r aliser des tudes de corr lation entre les m thodes dans leur laboratoire avant de passer d une technologie une autre afin de caract riser les diff rences de technologie Les utilisateurs doivent appliquer leurs propres politiques proc dures CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE CH
7. lt 7 8 de prot inase Glyc rol Xn lt 7 8 p p de prot inase Nocif WNV EB tampon d lution pour le VNO Tampon TRIS lt 0 002 d ARN poly rA synth tique EDTA 0 09 d azoture de sodium 05618169001 04FRC 8 96 tests 2 x 48 tests 2x7 0 ml 2 x 48 tests 2x78 2 x 48 tests 2x 3 8 ml 2x7 0 ml Doc Rev 4 0 WNV CS4 2 x 48 tests WNV MMX 2x 2 5 m lange r actionnel WNV Tampon Tricine Ac tate de potassium Glyc rol lt 18 de dim thylsulfoxyde lt 0 07 de dATP de dCTP de dGTP de dUTP lt 0 002 d amorces du VNO en amont et en aval lt 0 002 de sonde VNO marqu e par fluorescence lt 0 002 de sonde de t moin interne marqu e par fluorescence lt 0 002 d aptam re oligonucl otidique lt 0 05 d ADN polym rase Z05 microbienne lt 0 1 d enzyme AmpErase uracile N glycosylase d origine microbienne 0 08 d azoture de sodium WNV Mn 2x 19 8 ml solution de mangan se VNO lt 0 6 d ac tate de mangan se Acide ac tique glacial 0 09 d azoture de sodium WNV IC 2x 3 6 ml t moin interne pour le VNO Tampon TRIS lt 0 002 d ARN poly rA synth tique EDTA 0 05 d azoture de sodium lt 0 001 d ARN de t moin interne synth tique et non infectieux encapsul dans une prot ine de coque du bact riophage MS2 cobas TaqScreen West Nile Virus Control Kit 6 ensembles Trousse de t moins du virus du Nil
8. F HIV 1 sous type F Virus Epstein Barr avec cellules RAJI Herp s simplex type 1 HF HIV 1 sous type G Virus Epstein Barr avec cellules P3 Herp s simplex type Maclntyre HIV 1 sous type H Virus de l h patite A PA 21 Herp s simplex type Il G HIV 2 Virus de l h patite B g notype A Herp s simplex type Il MS Pneumocystis carinii D amp D Virus de l h patite B g notype Virus du papillome humain type 11 Propionibacterium acnes Virus de l h patite C g notype 1a Virus du papillome humain type 18 Staphylococcus aureus Virus de l h patite C g notype 1b Virus du papillome humain type 6B Staphylococcus epidermidis Virus de l h patite g notype 2a Virus de l influenza type A A New Jersey 8 76 Virus de l enc phalite japonaise Virus de l h patite C g notype 2b Virus de l influenza type B B Hong Kong 5 72 Virus de l enc phalite Murray Valley Virus de l h patite C g notype 3 Virus varicelle zona Ellen Virus de l enc phalite de Saint Louis Virus de l h patite C g notype 4 Virus varicelle zona Oka Virus Kunjin Virus de l h patite C g notype 5 Sp cificit analytique autres probl mes de sant Des chantillons de plasma provenant de 10 20 patients de chacune des cat gories de maladie suivantes infection au cytom galovirus infection par le virus de l h patite
9. chantillons et des t moins Remarque M langer au moins 3 fois les t moins en les retournant en vitant la formation de bulles tel que pr cis ci dessous Chaque fois le t moin est retourn vers le bas puis vers le haut Lors de chaque retournement maintenir le t moin pendant 2 secondes au moins dans chaque direction c d tourner le t moin vers le bas et le maintenir dans cette position au moins 2 secondes Puis le retourner vers le haut et le maintenir dans cette position pendant au moins 2 secondes Remarque Pour le test d chantillons de cadavres l utilisation de plaques puits profonds est d sactiv e lors de l installation du syst me cobas s 201 Effectuer les proc dures de d marrage sur le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARlet IVD puis d marrer le PDM Pooling Wizard de Roche en suivant les instructions l cran A2 Manipuler avec soin afin de ne pas endommager le code barres d identification sur les tubes d chantillons et les adaptateurs de tubes de t moin Si le code barres est endommag le syst me pourra pas reconna tre les chantillons ou les t moins 05618169001 04FRC 16 Doc Rev 4 0 D boucher les tubes de t moin et charger les chantillons les consommables et les t moins dans le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Lorsque les chantillons les consommables et les t moins sont charg s l appareil transf re les t moins et les chantillons
10. chantillons qui seront trait s au cours du fonctionnement en continu de l appareil COBAS AmpliPrep Chaque cartouche contient une quantit suffisante de r actifs pour effectuer 48 tests Se reporter au Manuel d utilisation du syst me cobas s 201 pour obtenir des renseignements concernant le chargement des r actifs pour un fonctionnement en continu Installer la cartouche WNV CS1 dans le portoir de r actif s assurer que le code barres de la cartouche est bien align avec le code barres du portoir situ sur le c t droit du portoir Les cartouches WNV CS1 doivent tre charg es ensemble sur un portoir de r actifs distinct des autres cartouches B4 Installer le portoir de r actifs contenant le WNV CS1 la position de portoir A en glissant vers le haut jusqu au butoir de l appareil COBAS AmpliPrep puis attendre que DEL du portoir de r actifs tourne au vert avant de glisser le portoir au fond de l appareil sa position finale Ne pas charger des lots de r actifs m lang s dans l appareil B5 Installer un ensemble de cartouches WNV CS2 WNV CS3 et WNV CS4 pour chaque cartouche CS1 dans un portoir de r actifs et s assurer que les codes barres de la cartouche sont align s avec le code barres du portoir situ sur le c t droit du portoir 05618169001 04FRC 17 Doc Rev 4 0 B6 Installer les portoirs de r actifs la position de portoir B D ou en glissant vers le haut jusqu au butoir de l ap
11. 0 5 0 Non r actif au VNO 0 s 0 0 s 0 86 935 0 s 0 86 935 Bae F 100 000 0 0 86 935 0 86 935 Sp cificit clinique uae ts 1 95 100 000 Le crit re d valuation du VNO a t d riv du r sultat valide du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen de l essai sur l index de don l aide de l algorithme de test en pools L tat du donneur au VNO a t attribu par programme selon les profils de r activit du test sur l index de don et le cas ch ant les dons de suivi Un tat du donneur au VNO Pr sum positif a t attribu par programme aux donneurs sans don d tude de suivi mais qui ont obtenu un r sultat r actif au test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen et au moins 1 r sultat r actif ou positif sur la source de plasma secondaire le TAN secondaire ou l IgM pour l index de don Les donneurs avec un tat au VNO inconnu sont des donneurs dont les r sultats du test taient insuffisants pour leur attribuer un tat au VNO La sp cificit du pool du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen de l index de don tait de 99 986 14 387 14 389 IC 95 9 99 950 99 998 Deux pools de 6 taient r actifs au test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen mais les deux contenaient des chantillons non r actifs au test de d pistage du virus
12. 90 1 85 8 30 182 192 94 8 91 3 35 183 192 95 3 92 0 50 187 192 97 4 94 6 Limite inf rieure de Limite sup rieure de Taux de Concentration confiance 95 confiance 95 Analyse PROBIT d tection copies ml copies ml copies ml 95 36 9 32 7 42 6 Un r plicat tait valide Sensibilit analytique panel de virus du Nil occidental de CBER et de la FDA souche 1 La limite de d tection LDD du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen t valu e l aide du panel de virus du Nil occidental de CBER et de la FDA Le panel est compos de 14 membres d riv s d un isolat de souche 1 du virus du Nil occidental humain Hu2002 et d un isolat de souche 1 du virus du Nil occidental de flamant NY99 fabriqu pour CBER par BBI Diagnostics 375 West Street West Bridgewater MA 02379 Chaque membre du panel a t test en double l aide de trois lots diff rents du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Tableau 4 Tableau 4 R sum de sensibilit analytique selon le panel de virus du Nil occidental de CBER et de la FDA ID du membre Isolat de souche 1 rer le de r actifs CBER FDA 03 Hu2002 0 0 0 6 CBER FDA 05 NY99 0 0 0 6 CBER FDA 09 Hu2002 5 50 3 6 CBER FDA 10 NY99 5 83 5 6 CBER FDA 12 Hu2002 10 50 3 6 CBER FDA 02 NY99 10 33 2 6 CBE
13. A infection par le virus de l h patite infection par le virus de l h patite C virus de l immunod ficience humaine HIV 1 infection par le virus Epstein Barr ont t test s avec ou sans l ajout du VNO une concentration de la limite de d tection du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen a produit des r sultats non r actifs sur tous les chantillons de probl mes de sant sans l ajout du VNO et des r sultats r actifs sur tous les chantillons avec ajout du VNO Ces probl mes de sant n ont pas nui la sensibilit ou la sp cificit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen 05618169001 04FRC 26 Doc Rev 4 0 Substances potentiellement interf rentes Substances endog nes interf rentes Des chantillons de plasma dont les niveaux de triglyc rides jusqu 2487 mg dl d h moglobine jusqu 516 mg dl de bilirubine Gusqu a 23 5 mg dl ou d albumine jusqu 6900 mg dl taient anormalement lev s ont t test s avec ou sans l ajout du virus du Nil occidental une concentration de la limite de d tection du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Ces substances endog nes n ont pas nui la sensibilit ni la sp cificit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Des chantillons de plasma de patients pr sentant u
14. ARN du VNO soit une sp cificit de 100 Pour les chantillons de donneurs vivants soixante dix r sultats valides ont t obtenus avec les trois m mes lots de trousse Un chantillon tait initialement r actif lors du test mais la reprise du test en double il tait non r actif pour l ARN du VNO Le r sum des r sultats du test de sp cificit est pr sent au tableau 9 Tableau 9 R sum des tests de sp cificit des chantillons de cadavres et de donneurs vivants avec le test de d pistage du VNO cobas TaqScreen chantillons de cadavres chantillons de donneurs vivants re dilu s dans un rapport de 1 6 r actif Nombre de Nombre de Nombre de Nombre de Nombre de Nombre de r sultats r sultats r sultats r sultats r sultats r sultats valides non r actifs r actifs valides non r actifs r actifs Lotn 1 23 23 0 25 25 0 Lot n 2 21 21 0 20 20 0 Lot n 3 25 25 0 25 24 1 Total 69 69 0 70 69 1 Sp cificit 100 98 6 Exclut les r sultats invalides initiaux R sultats non r actifs lors de la reprise des tests en double Sensibilit analytique dans les chantillons de cadavres avec l talon secondaire de VNO de Roche La limite de d tection LDD du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen a t valu e sur des chantillons de plasma EDTA de cadavres l aide de l talon secondaire de VNO de Roche stock de vi
15. Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD pour l ensemble du pipetage et du pooling Le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARlet IVD effectue la lecture des code barres et le pooling depuis des aliquotes gales d chantillons pour former des pools 2 Si des pools r actifs sont d tect s par le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD effectue le pipetage d chantillons individuels provenant soit des plaques a puits profonds soit des tubes d chantillons initiaux pour r aliser un test de r solution REMARQUES RELATIVES A LA PROCEDURE A Equipement 1 2 Pr parer le syst me cobas s 201 conform ment aux instructions du Manuel d utilisation du syst me cobas s 201 Effectuer la maintenance recommand e sur les appareils pour assurer un fonctionnement ad quat B R actifs 1 Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen la trousse de t moins de virus du Nil occidental cobas TaqScreen et le r actif de lavage cobas TaqScreen doivent tre quilibr s temp rature ambiante 30 minutes avant l utilisation Se reporter la section Conservation et manipulation pour conna tre les conditions de conservation des r actifs Chaque trousse du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen contient une quantit suffisante de mat riel pour effectuer 96 tests r alis s en s ries pouvant contenir jusqu 24 tests p
16. PROBIT pour valuer la limite de d tection de 95 et les intervalles de confiance bilat raux de 95 du panel Tableau 5 La LDD de 95 estim e l aide du panel de qualification QWN701 d ARN du virus du Nil occidental souche 2 tait de 3 8 copies ml Tableau 5 R sum de sensibilit analytique selon le panel de qualification QWN701 de PARN du virus du Nil occidental souche 2 Valeur Nombre Limite de fiabilit nominale d chantillons Nombre de tests de r actifs inf rieure 95 copies ml r actifs individuels unilat rale 0 00 0 90 0 8 0 0 25 22 90 24 17 2 0 50 29 90 32 24 1 1 00 48 90 53 44 1 1 50 68 90 76 67 0 3 00 85 90 94 88 7 5 00 90 90 100 96 7 x Limite inf rieure de Limite sup rieure de Taux de Concentration confiance 95 confiance 95 Analyse PROBIT d tection copies ml copies ml copies ml 95 3 8 2 3 11 1 05618169001 04FRC 25 Doc Rev 4 0 Sp cificit analytique r actions crois es potentielles et interf rence de micro organismes La sp cificit analytique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen a t valu e par le test d un panel de 52 micro organismes dont 47 isolats viraux 4 souches bact riennes et 1 isolat de levure Tableau 6 Les micro organismes ont t ajout s au plasma humain normal et n gatif au virus puis test s avec et sans le virus du Nil occidental ajout u
17. Tubes d entr e d chantillon tubes S avec pinces code barres P N 03137040001 Portoirs d embouts K P N 03287343001 Boite de 12 x 96 tubes K P N 03137082001 Portoir K COBAS TaqMan P N 28150397001 Embouts CO RE grand d bit 1000 ul filtre P N 04639642001 Plaques puits profonds avec tiquettes code barres P N 04639634001 Enduits protecteurs pour plaque puits profonds P N 04789288001 Portoir d chantillons pour 24 tubes a essai P N 04639502001 Portoir d chantillons pour 32 tubes a essai P N 04639529001 Portoir d embouts P N 04639545001 Portoir de plaque puits profonds P N 04639553001 Support de portoir SK24 P N 04639600001 D sinfectant en vaporisateur Microcide SQ ou HAMILTON P N 04592557001 Gants jetables non poudr s 05618169001 04FRC 7 Doc Rev 4 0 REACTIFS cobas TaqScreen West Nile Virus Test wv P N 04741722 190 WNV CS1 MGP Particules magn tiques en verre Particules magn tiques en verre 93 d isopropanol Xi 93 p p d isopropanol Irritant F 93 d isopropanol Hautement inflammable CS2 LYS R actif de lyse Citrate de sodium dihydrat 42 5 de thiocyanate de guanidine lt 14 de polydocanol 0 9 de dithiothr itol Xn 42 5 p p de thiocyanate de guanidine Nocif WNV CS3 Pase Solution de prot inase Tampon TRIS lt 0 05 d EDTA Chlorure de calcium Ac tate de calcium
18. accumulation de d p ts dans les conduites m talliques o des compos s explosifs pourraient se former L h parine a un effet inhibiteur sur la r action de PCR Ne pas utiliser de plasma h parin pour cette proc dure de test L utilisation de pipettes jetables st riles et d embouts de pipettes exempts de nucl ase est recommand e En cas de manquement lors de la manipulation et du traitement des chantillons une contamination crois e des chantillons peut entra ner des r sultats faussement positifs Utiliser uniquement les produits jetables fournis ou indiqu s pour assurer une performance optimale du test Manipuler tout mat riel contenant des chantillons ou des t moins conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire afin d viter la contamination crois e des chantillons ou des t moins Avant l utilisation examiner chaque cartouche de r actif tube de t moins et r actif de lavage pour s assurer de l absence de fuites En pr sence de fuite possible ne pas utiliser ce mat riel pour le test liminer tout mat riel entrant en contact avec les chantillons et les r actifs conform ment la r glementation locale nationale f d rale ou gouvernementale applicable Ne pas utiliser un test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen la trousse de t moins du virus du Nil occidental cobas TaqScreen le r actif de lavage cobas la trousse de diluant d chantillons de cadavres
19. dans des tubes S Les chantillons et les t moins sont stables pendant un maximum de 5 heures dans les tubes ouverts et pendant 5 heures suppl mentaires dans les tubes S Pour les chantillons de cadavres individuels pipeter 2000 ul de CADV SPEC DIL dans des tubes de 13 100 mm convenablement tiquet s ajouter 500 pl d chantillon de cadavre chaque tube individuel et m langer chaque chantillon en pipetant quatre 4 fois Puis charger les chantillons les consommables et les t moins dans le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Lorsque les chantillons de cadavres dilu s les consommables et les t moins sont charg s l appareil transf re les t moins et les chantillons dans des tubes S Les chantillons de cadavres dilu s et les t moins sont stables jusqu 5 heures dans les tubes ouverts Remarque Afin que l appareil proc de une dilution 1 10 du t moin WNV C deux tubes de t moin WNV C doivent tre charg s pour chaque tube de t moin utilis A5 Lorsque le cycle de pipetage est termin examiner les alarmes et imprimer les rapports de pooling Proc der l inspection des pools et des puits des plaques puits profonds Invalider les pools et ou les puits si une contamination en globules rouges est observ e ou si les volumes sont incoh rents Refermer les tubes S et transf rer le ou les portoirs SK24 sur l appareil COBAS AmpliPrep pour proc der l
20. enzyme AmpErase pour r duire le risque de contamination provenant de mat riel pr c demment amplifi amplicon PRINCIPES DU TEST Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen utilis sur le syst me cobas s 201 comporte 4 op rations principales 1 Pooling et pipetage automatis s des chantillons l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Pr paration automatis e des chantillons l aide de l appareil COBAS AmpliPrep Amplification automatis e des acides _hucl iques et d tection en temps r el automatis e de produits de PCR l aide de l analyseur COBAS TaqMan 4 Gestion des donn es automatis e l aide du logiciel Pooling and Data Management 05618169001 04FRC 3 Doc Rev 4 0 Pooling et pipetage automatis s des chantillons a l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD automatise le pipetage des pools et des chantillons de donneur individuels le transfert des aliquotes vers les plaques a puits profonds optionnel et le pipetage des t moins de tests Le systeme cobas s 201 permet d effectuer des tests de r solution de pools r actifs et d identifier les chantillons r actifs individuels Le syst me cobas s 201 est con u pour traiter les chantillons en s ries Une s rie est un rassemblement d chantillons et de t moins qui sont pr lev s la pipette extraits amplifi s et d
21. extraction de l acide nucl ique Une fois transf r s dans l appareil COBAS AmpliPrep toutes les cibles virales et tous les t moins sont stables pendant 5 heures dans les tubes S A7 Refermer et entreposer les plaques puits profonds si des plaques ont t cr es au cours du cycle de pipetage Les plaques puits profonds peuvent tre conserv es jusqu 7 jours une temp rature de 2 8 C pour des p riodes prolong es ou lt 18 C pour des p riodes prolong es A8 Retirer et entreposer les tubes de donneur Se reporter la section Pr l vement conservation et pooling des chantillons pour conna tre les conditions de conservation A9 Retirer et liminer les tubes de t moin Les tubes de t moin sont usage unique B Pr paration et chargement des r actifs du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Remarque Manipuler avec pr caution afin de ne pas endommager les tiquettes de cartouche Le lecteur de code barres de l appareil COBAS AmpliPrep lit automatiquement l tiquette code barres de chaque cartouche lorsque les portoirs de r actifs sont charg s sur l appareil quilibrer les r actifs temp rature ambiante au moins 30 minutes avant le traitement du premier chantillon Aucune autre pr paration de r actif n est n cessaire B2 Avant de commencer une quantit suffisante de cartouches doit tre charg e afin de tenir compte du nombre total d
22. les chantillons r actifs sont d clar s Complete Reactive et le reste des chantillons n gatifs associ s au pool positif est d clar Complete Non reactive Si tous les chantillons de donneur individuels de ce pool sont n gatifs les chantillons de ce pool sont tous d clar s Complete Non reactive 05618169001 04FRC 20 Doc Rev 4 0 LIMITES DE LA PROCEDURE Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas doit tre utilis uniquement avec la trousse de t moins de virus du Nil occidental cobas TaqScreen le r actif de lavage cobas TaqScreen et le systeme cobas s 201 2 Pour le test d chantillons de cadavres le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen a uniquement t valu pour une utilisation avec la trousse de diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen la trousse de t moins du virus du Nil occidental cobas TaqScreen le r actif de lavage cobas TaqScreen et le syst me cobas s 201 3 L h parine a un effet inhibiteur sur la r action de PCR Ne pas utiliser de plasma h parinis lors de cette proc dure 4 La fiabilit des r sultats d pend du pr l vement et du transport appropri s des chantillons 5 La d tection d ARN du VNO d pend de la quantit de virions pr sents dans l chantillon et peut tre influenc e par les m thodes de pr l vement d chantillon les facteurs du patient c d l
23. occidental cobas TaqScreen P N 04741749 190 WNV C 6x 1 1 ml t moin positif pour le VNO Tampon TRIS lt 0 002 d ARN poly rA synth tique EDTA 0 05 d azoture de sodium lt 0 001 dARN du VNO synth tique et non infectieux encapsul dans une prot ine de coque du bact riophage MS2 05618169001 04FRC 9 Doc Rev 4 0 WNV 12x 1 6 ml t moin n gatif pour le VNO plasma humain Plasma humain n gatif non r actif aux test agr s de d tection des anticorps anti VHC des anticorps anti VIH 1 2 et de l antig ne HBs ARN du VNO d tectable par les m thodes de PCR 0 1 d agent de conservation ProClin 300 Xi 8 1 m lange de 5 Chloro 2 m thyl 2H isothiazol 3 one et de 2 M thyl 2H isothiazol 3 one Irritant R36 38 Irritant pour les yeux et la peau R43 Peut provoquer une sensibilisation par contact avec la peau cobas TaqScreen Wash Reagent R actif de lavage cobas TaqScreen P N 04404220 190 TS WR r actif de lavage cobas TaqScreen Citrate de sodium dihydrat 0 1 de l agent de conservation m thylparab ne cobas TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit CADV SPEC DIL 96 tests Trousse de diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen P N 05002125 190 CADV SPEC DIL 4x 100 ml Diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen EDTA CONSERVATION ET MANIPULATION La temp rature ambiante correspond a la plage comprise entre 15 et 30 C
24. particules magn tiques en verre ajout es Cela est d essentiellement la charge positive nette de la surface des particules en verre et la charge n gative nette des acides nucl iques sous la concentration de sel chaotropique et la force ionique de la r action de lyse Le r actif de lavage limine les substances non li es et les impuret s telles que les prot ines d natur es les d bris cellulaires et les inhibiteurs de PCR comme I h moglobine et autres et r duit la concentration de sel Les acides nucl iques purifi s sont lib r s des particules magn tiques en verre une temp rature lev e l aide du tampon d lution Amplification automatis e de l acide nucl ique l aide de l analyseur COBAS TaqMan Apr s l isolation des acides nucl iques purifi s effectu e au cours de la pr paration automatis e des chantillons le m lange r actionnel cobas WNV Master WNV MMX permet l amplification et la d tection de l ARN du VNO et de l ARN du TI Une fois activ par l ajout d ac tate de mangan se le m lange WNV MMX permet la transcription inverse suivie de l amplification par PCR d un fragment d ARN du VNO tr s bien conserv et de l ARN du TI l aide d amorces sp cifiques La d tection concomitante de l ADN amplifi est r alis e par la g n ration de signaux de fluorescence la suite de la d gradation nucl olytique en 5 des sondes sp cifiqu
25. rum peuvent uniquement tre test s comme chantillons individuels Ce test n est pas destin tre utilis comme aide au diagnostic R SUM ET DESCRIPTION DU TEST Le virus du Nil occidental appartient la famille des Flaviviridae au genre des Flavivirus et au complexe antig nique du virus de l enc phalite japonaise Les virus de ce complexe sont des arbovirus susceptibles de provoquer des m ningites des enc phalites et des m ningo enc phalites Le groupe de l enc phalite japonaise englobe le virus de l enc phalite japonaise le virus de l enc phalite Murray Valley le virus Kunjin maintenant connu comme une variante du VNO et le virus de l enc phalite de Saint Louis ce dernier ayant entra n une pid mie d enc phalite aux Etats Unis au milieu des ann es 70 2 Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen est un essai qualitatif qui permet le d pistage et la d tection de du VNO dans les dons d chantillons individuels et de pools infect s Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen est un test qui utilise une technique g n rique de pr paration des acides nucl iques sur l appareil COBAS AmpliPrep L ARN du VNO est alors d tect une amplification PCR automatis e et temps r el effectu e sur l analyseur COBAS TaqMan Le test int gre un t moin interne qui surveille la performance de chaque test effectu ainsi que l
26. trousse tableau 7 et deux paires op rateur appareil tableau 8 Les r sultats ont t valu s au moyen du test exact de Fisher unilat ral afin de d terminer si les diff rences dans les taux de r activit pour les chantillons de cadavres et de donneurs vivants taient significatives Tableau 7 R sum de reproductibilit des chantillons de cadavres et de donneurs vivants R sultats par lot de trousse _ Valeur p Echantillons de Cible virale de Lot n 1 Lot n 2 Lot n 3 donneurs vivants onneur vs Echantillons de cadavres VNO Cadavres 40 40 100 39 39 100 40 40 100 0 Donneurs 39 39 100 39 39 100 40 40 100 _ Valeur p unilat rale Echantillons de donneurs vivants vs de cadavres par lot de r actif Un r plicat tait non valide Remarque Les valeurs pour le test exact de Fisher sup rieures 0 05 ne sont pas statistiquement significatives 1 0 1 0 1 0 Tableau 8 R sum de reproductibilit des chantillons de cadavres et de donneurs vivants R sultats par paire op rateur appareil _ Valeur p Type de Op rateur Op rateur Echantillons de Cible virale donneur Appareil Appareil donneurs vivants n 1 n 2 vs chantillons de cadavres VNO Cadavres 60 60 100 59 59 100 Donneurs 59 59 100 59 59 100 _ Valeur unilat rale Echantillons de donneurs
27. vivants vs de cadavres par paire op rateur appareil Un r plicat tait non valide Remarque Les valeurs pour le test exact de Fisher sup rieures 0 05 ne sont pas statistiquement significatives 1 0 1 0 05618169001 04FRC 28 Doc Rev 4 0 Sp cificit Soixante dix chantillons individuels de plasma EDTA de donneurs vivants et soixante et onze chantillons individuels de plasma EDTA de cadavres n gatifs pour l ARN du VNO ont t r partis en trois groupes et chaque groupe a t test avec un de trois lots de trousse de test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Les chantillons de plasma EDTA de cadavres ont t r partis en trois groupes de 25 21 et 25 chantillons et manuellement dilu s dans un rapport de 1 5 avec du diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen puis test s conform ment a la proc dure de test des chantillons de cadavres Les chantillons de plasma EDTA de donneurs vivants ont t r partis en trois groupes de 25 20 et 25 chantillons et manuellement dilu s dans un rapport de 1 6 avec un pool de plasma EDTA n gatif pour l ARN du VNO avant le test afin de simuler la proc dure de six tests recommand e pour le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Pour les chantillons de cadavres soixante neuf r sultats valides ont t obtenus avec trois lots de trousse Les soixante neuf r sultats taient non r actifs pour l
28. 2 100 0 179 179 2 100 0 98 98 998 100 0 638 539 c 180 180 3 99 4 179 180 3 100 0 105 105 99 0 100 0 4 100 0 96 96 5 99 0 101 102 6 100 0 33 33 99 4 5 0x LDD A 178 179 1 100 0 180 180 1 99 0 103 104 100 0 B 179 179 2 100 0 179 179 2 100 0 99 99 998 100 0 537 538 180 180 3 99 4 178 179 3 100 0 104 104 99 0 100 0 4 100 0 96 96 5 100 0 102 102 6 100 0 33 33 100 0 10 0x LDD A 179 179 1 100 0 180 180 1 100 0 105 105 100 0 B 180 180 2 100 0 179 179 2 100 0 98 98 100 0 100 0 539 539 c 180 180 3 100 0 180 180 3 100 0 105 105 99 3 100 0 4 100 0 96 96 5 100 0 102 102 6 100 0 33 33 Ilya un jour 6 parce que les s ries non valides des jours 1 5 ont t r p t es 1 95 intervalle de confiance binomial exact 95 05618169001 04FRC 22 Doc Rev 4 0 Sensibilit analytique talon de Sant Canada souche 1 La limite de d tection LDD du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen t valu e l aide de l talon de r f rence de Sant Canada pour le virus du Nil occidental Maladies infectieuses Soci t canadienne du sang 1800 Alta Vista Ottawa Ontario K1G 4J5 Les panels ont t pr par s par dilution de l talon dans un plasma humain normal et n gatif au virus Chaque dilution a t test e l aide de trois lots diff rents du test de d pistage du virus du Nil occide
29. ANTILLONS DE DONNEURS VIVANTS Reproductibilit La reproductibilit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen l aide du syst me cobas s 201 a t valu e par un essai r partition al atoire et l insu sur un panel de 21 membres compos de six chantillons de plasma n gatifs de six chantillons de plasma positifs une concentration de 0 49 fois la limite de d tection LDD du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen et de groupes de trois chantillons de plasma positifs des concentrations respectives de 2 5 5 et 10 fois la LDD La v rification a t effectu e 3 sites avec 1 op rateur a chaque site utilisant 3 lots du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen et 1 syst me cobas s 201 A chaque site 4 panels avec les t moins positifs et n gatifs correspondants ont t test s chaque jour pendant 5 jours pour un total de 180 tests pour chaque membre du panel Les donn es de reproductibilit valides ont t valu es en calculant le pourcentage de r sultats de test r actifs pour chaque niveau de panel Les donn es ont t analys es par lot de trousse site op rateur jour cycle et int gral Tableau 1 L tude montre une performance stable du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen dans l ensemble des lots de la trousse de la v rification du site op rateur et du jour cycle 05618169001 04FRC 21 Doc Rev 4 0
30. AT RIEL N CESSAIRE MAIS VENDU S PAR MENT GALEMENT DISPONIBLE CHEZ ROCHE Instruments et logiciel du syst me cobas s 201 Configuration C ou Configuration MR1 Maintenance Release 7 nn OU PODIE sn tenir sante REA CTIFS CONSERVATION ET MANIPULATION PR CAUTIONS js PR L VEMENT CONSERVATION ET POOLING DES CHANTILLONS Echantillons de donneurs vivants chantillons de cadavres a POOLING ET PIPETAGE DES CHANTILLONS REMARQUES RELATIVES A LA PROCEDURE MODE DEMA Gnir CONTROLE DE QUALITE nm La section Information sur les r visions apport es au document est situ e la fin de ce document 05618169001 04FRC 1 Doc Rev 4 0 Repeat 20 Test de pools Resolution Needed LIMITES DE LA PROCEDURE CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE CHANTILLONS DE DONNEURS VIVANTS rm T Reproductibilit ra Sensibilit analytique talon de Sant Canada souche 1 Sensibilit analytique talon secondaire de VNO de Roche souche 1 Sensibilit analytique panel de virus du Nil occidental de CBER et de la FDA souche 1 Sensibilit analytique panel de qualification QWN701 d ARN du virus du Nil occidental souche 2 25 Sp cificit analytique r actions crois es pot
31. E5 Examiner le r sultat du pool dans l onglet Alarms Review de la s rie s lectionn e Les pools non r actifs peuvent tre invalid s manuellement par l utilisateur au besoin Les chantillons de donneur dans un pool non valide doivent tre test s de nouveau E6 Examiner et lib rer les donneurs dans l onglet Donor Review de la s rie s lectionn e E7 Imprimer les rapports et envoyer au syst me d information de laboratoire SIL le cas ch ant CONTR LE DE QUALIT 1 Un r plicat du t moin n gatif WNV et un r plicat du t moin positif WNV doivent tre trait s avec chaque s rie 2 Etat de la s rie Un tat de s rie Complete Valid est attribu lorsque les t moins de la s rie sont valides Si un t moin d une s rie est non valide toute la s rie est non valide Le logiciel rend automatiquement les r sultats non valides selon les d faillances de t moin a T moin n gatif Pour que le t moin n gatif WNV soit valide le r sultat interpr t doit tre non r actif et le t moin interne correspondant doit tre valide Si le t moin interne est non valide le r sultat interpr t du t moin n gatif est non valide Si le r sultat interpr t du t moin n gatif est non valide la totalit de la s rie est non valide et doit tre r p t e b T moin positif Pour que le t moin positif WNV soit valide le r sultat interpr t doit tre r acti
32. HCI 327 5 mol L ont t test s avec ou sans le virus du Nil occidental ajout une concentration de 3x la limite de d tection du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Ces substances exog nes n ont pas nui la sensibilit ni la sp cificit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen 05618169001 04FRC 27 Doc Rev 4 0 ECHANTILLONS DE CADAVRES Reproductibilit Vingt chantillons de plasma EDTA de donneurs vivants et 20 chantillons de plasma EDTA de cadavres ont t dop s avec la cible virale du VNO au moyen de l talon secondaire de VNO de Roche une concentration finale de 3 fois la LDD conform ment au niveau d h molyse de chaque chantillon Les chantillons de cadavres taient dilu s manuellement dans un rapport de 1 5 avec le diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen et test s en suivant la proc dure de test des chantillons de cadavres Chacun des 20 chantillons de cadavres et de donneurs vivants ont t test s en simple par 2 op rateurs au moyen de trois lots de trousse du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Chaque op rateur tait appari a un systeme cobas s 201 afin de cr er deux paires op rateur appareil Toutes les donn es de reproductibilit valides ont t analys es en comparant les taux de r activit pour le VNO des chantillons de cadavres et de donneurs vivants dop s entre trois lots de
33. N701 de l ARN du virus du Nil occidental souche 2 aani rehear Tableau 6 Micro organismes 1 5165 A EEE 126 Tableau 7 R sum de reproductibilit des chantillons de cadavres et de donneurs vivants R sultats lot de trouss EENES E 128 Tableau 8 R sum de reproductibilit des chantillons de cadavres et de donneurs vivants R sultats par paire op rateur appareil ONI A ea he i Tableau 9 R sum des tests de sp cificit pour les chantillons de cadavres et de donneurs vivants avec le test de d pistage du VNO cobas TaqScreen in 20 Tableau 10 R sum de sensibilit analytique selon l talon secondaire de VNO de Roche avec les chantillons de cadavres mod r ment h molys s 80 Tableau 11 R sum de sensibilit analytique selon l talon secondaire de VNO de Roche avec une matrice d chantillons hautement R MOIyS S nn OO 05618169001 04FRC 2 Doc Rev 4 0 Tableau 12 R sum de sensibilit au VNO avec des chantillons de cadavre mod r ment h molys s MH et hautement h molys s HH Tableau 13 Sensibilit clinique des chantillons positifs connus du virus du Nil occidental Tableau 14 Sp cificit caique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen tests de pools een
34. P L enzyme AmpErase reconna t et catalyse la destruction des brins d ADN contenant de la d soxyuridine mais pas l ADN contenant de la d soxythymidine ou l ARN contenant de ribouridine naturel ne contient pas de d soxyuridine alors que en contient toujours cause de l utilisation de la d soxyuridine triphosphate avec la thymidine triphosphate comme un des dNTP du m lange r actionnel WNV MMX Ainsi seul contient de la d soxyuridine La d soxyuridine rend les amplicons contaminants susceptibles d tre d truits par enzyme AmpErase avant l amplification de l ARN cible L enzyme AmpErase d truit galement tout produit non sp cifique form apr s l activation initiale du m lange r actionnel MMX par le mangan se L enzyme AmpErase contenue dans le m lange r actionnel WNV MMX catalyse le clivage de l ADN contenant de la d soxyuridine au niveau des r sidus de d soxyuridine en ouvrant la cha ne de d soxyribose en position C1 Lorsqu elle est chauff e au cours de la premi re tape du cycle thermique la cha ne d ADN de l amplicon se scinde la position de la d soxyuridine rendant ainsi l ADN non amplifiable L enzyme AmpErase reste inactive durant une longue p riode si elle est expos e une temp rature sup rieure 55 C et ne d truit donc pas l amplicon cible form apr s l amplification par PCR D tection automatis e en temps r el de produ
35. R FDA 04 Hu2002 50 100 6 6 CBER FDA 13 NY99 50 100 6 6 CBER FDA 07 Hu2002 100 100 6 6 CBER FDA 01 NY99 100 100 5 5 CBER FDA 14 Hu2002 500 100 6 6 CBER FDA 11 NY99 500 100 6 6 CBER FDA 08 Hu2002 1000 100 6 6 CBER FDA 06 NY99 1000 100 6 6 Un r plicat tait non valide 05618169001 04FRC 24 Doc Rev 4 0 Sensibilit analytique panel de qualification QWN701 d ARN du virus du Nil occidental souche 2 La limite de d tection LDD du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas a t valu e l aide du panel de qualification QWN701 d ARN du virus du Nil occidental stock de virus du Nil occidental souche 212 Ouganda BBI Diagnostics 375 West Street West Bridgewater MA 02379 Le stock de virus a t talonn par le fournisseur l aide d un test de RT PCR bas sur le TaqMan Les panels ont t pr par s par dilution des talons dans un plasma humain normal et n gatif au virus Chaque dilution a t test e l aide de trois lots diff rents du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Un total de 30 r plicats par lot de trousse ont t test s pour un total de 90 r plicats par concentration l aide des donn es combin es provenant de tous les r plicats test s la LDD a t tablie selon le taux de positivit avec les limites de fiabilit inf rieures 95 unilat rale ainsi que calcul e par l analyse
36. TaqScreen ainsi que pour le traitement des chantillons de cadavres avec la trousse de diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen Remarque Ne pas ouvrir les cassettes Remarque Ne pas m langer des r actifs provenant de diff rents lots ou de flacons diff rents d un m me lot Remarque Ne pas m langer les r actifs y compris les cassettes provenant de trousses diff rentes Ne pas charger des lots de r actifs m lang s sur l appareil COBAS AmpliPrep Remarque Ne pas s parer les tubes de t moin des adaptateurs le porte tubes de t moin en plastique Remarque Le logiciel PDM d tecte et veille ce qu une s rie soit ex cut e sur un seul appareil COBAS AmpliPrep et analyseur COBAS TaqMan li s la m me station de donn es AMPLILINK Remarque Ne pas r partir les s ries sur plus d un appareil COBAS AmpliPrep ou un analyseur COBAS TaqMan Effectuer la maintenance requise telle que le d crit le Manuel d utilisation du syst me cobas s 201 Se reporter au Manuel d utilisation du syst me cobas s 207 pour obtenir les directives d utilisation d taill es II est important que l utilisateur respecte les directives du Manuel d utilisation du syst me cobas s 207 afin d assurer une performance appropri e du test A Pipetage des chantillons et des t moins l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Remarque viter de contaminer les gants lors de la pr paration des
37. al cobas TaqScreen et 3 le r actif de lavage cobas TaqScreen Le bureau local de Roche peut sur demande fournir les fiches de s curit des produits SDS cobas TaqScreen West Nile Virus Test wav 96 tests P N 04741722 190 WNV CS1 cartouche de r actifs avec particules magn tiques en verre VNO WNV CS2 cartouche de r actif de lyse VNO WNV CS2 cartouche de r actifs multiples VNO WNV CS4 cartouche de r actifs sp cifiques au test VNO cobas TaqScreen West Nile Virus Control Kit _ Trousse de t moins du virus du Nil occidental cobas TaqScreen 6 ensembles P N 04741749 190 WNV C t moin positif pour le VNO WNV t moin n gatif pour le VNO plasma humain cobas TaqScreen Wash Reagent R actif de lavage cobas TaqScreen P N 04404220 190 TS WR R actif de lavage cobas TaqScreen Remarque Pour la d tection de PARN du VNO dans les chantillons de cadavres la trousse suivante est n cessaire et fournie en plus des trousses cit es ci dessus Trousse de diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen cobas TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit Trousse de diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen CADV SPEC DIL 96 tests P N 05002125 190 CADV SPEC DIL diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen 05618169001 04FRC 6 Doc Rev 4 0 AUTRE MATERIEL NECESSAIRE MAIS VENDU SEPAREMENT EGALEMENT DISPONIBLE CHEZ ROCHE Ce test
38. aqScreen t valu e l aide de l talon secondaire de Roche stock de virus du Nil occidental Zeptometrix NY 2001 6263 lot n 302142 talonn selon l talon de r f rence de virus du Nil occidental de Sant Canada Les panels ont t pr par s par dilution de l talon dans un plasma humain normal et n gatif au virus Chaque dilution a t test e l aide de trois lots diff rents du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Un total de 64 r plicats par lot de trousse ont t test s pour un total de 192 r plicats par concentration l aide des donn es combin es provenant de tous les r plicats test s la LDD a t tablie selon le taux de positivit avec les limites de fiabilit inf rieures 95 unilat rale ainsi que calcul e par l analyse PROBIT pour valuer la limite de d tection de 95 et les intervalles de confiance bilat raux de 95 du panel Tableau 3 La LDD de 95 estim e l aide de l talon de Roche souche 1 tait de 36 9 copies ml 05618169001 04FRC 23 Doc Rev 4 0 Tableau 3 R sum de sensibilit analytique selon l talon secondaire de VNO de Roche Valeur Nombre Nombre de tests a Limite de fiabilit nominale d chantillons de r actifs inf rieure 95 copies ml r actifs individuels unilat rale 0 0 192 0 8 0 5 68 192 35 4 29 7 10 110 191 57 6 51 4 20 153 192 79 7 74 3 25 173 192
39. aque chantillon a t manuellement dilu dans un rapport de 1 5 avec le diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen avant le test Quatre des douze chantillons dans chaque groupe ont t test s avec un lot de trousse de r actif et trois lots de trousse de r actif ont t utilis s dans cette tude pour un total de 20 chantillons test s par lot de trousse de r actif Le taux de r activit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen tait de 100 IC 95 94 100 pour tous les chantillons de cadavres test s dans cette tude Le r sum des r sultats du test de sp cificit est pr sent au tableau 12 Tableau 12 R sum de sensibilit au VNO avec des chantillons de cadavre mod r ment h molys s MH et hautement h molys s HH Lot de trousse Type d chantillon de cadavre VNO we lo Total MH HH 60 60 Sensibilit IC 95 i vais 100 05618169001 04FRC 31 Doc Rev 4 0 PERFORMANCE CLINIQUE ECHANTILLONS DE DONNEURS VIVANTS Sensibilit clinique Test d chantillons positifs connus du virus du Nil occidental La sensibilit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen a t valu e l aide d un test sur 315 chantillons cliniques positifs au virus du Nil occidental Les chantillons ont t tablis positifs l ARN du virus du Nil occi
40. ar portoir SK24 Un r plicat du t moin n gatif WNV C et un r plicat du t moin positif WNV C doivent tre trait s avec chaque s rie ou portoir SK24 Chaque trousse du test de diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen contient une quantit suffisante de mat riel pour effectuer 96 tests r alis s en s ries pouvant contenir jusqu 24 tests par portoir SK24 Un r plicat du t moin n gatif WNV C et un r plicat du t moin positif WNV C doivent tre trait s avec chaque s rie ou portoir SK24 Les t moins sont trait s de la m me mani re pour les tests d chantillons de cadavres de donneurs vivants avec le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Tous les t moins sont usage unique Le syst me emp che l utilisation des r actifs qui ont d pass les heures autoris es sur l appareil COBAS AmpliPrep plus de 40 heures cumulatives et 30 jours apr s la premi re utilisation ainsi que des r actifs dont la date de p remption est expir e ou des cartouches m lang es provenant d un ensemble de quatre cartouches pr c demment utilis es sur le syst me C Traitement des chantillons 1 2 viter de contaminer les gants lors de la manipulation des chantillons et des t moins Une attention particuli re doit tre port e afin d viter la contamination des chantillons et des t moins WNV C par des t moins positifs 05618169001 04FRC 15 D
41. ation et le traitement des chantillons une contamination crois e des chantillons peut entra ner des r sultats faussement positifs Echantillons de cadavres A Les chantillons de sang de donneurs d c d s recueillis dans des tubes d anticoagulant EDTA ou des tubes de s rum peuvent tre utilis s avec le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Suivre les directives fournies par le fabricant des tubes de pr l vement La stabilit de l chantillon est affect e par des temp ratures lev es B Le sang de cadavres recueilli dans un tube d anticoagulant EDTA peuvent tre conserv s pendant jusqu 24 heures une temp rature de 2 25 C avant la s paration du plasma Pour une conservation sup rieure un jour s parer le plasma des globules rouges par centrifugation 800 1600 x g pendant 20 minutes Apr s s paration le plasma peut tre conserv une temp rature de 2 8 C pendant sept jours suppl mentaires On peut galement conserver le plasma une temp rature lt 18 C pendant un maximum de 30 jours Le plasma EDTA de cadavres peut tre congel et d congel trois 3 reprises au maximum Le sang de cadavres recueilli dans un tube de s rum peuvent tre conserv s jusqu 24 heures une temp rature de 2 8 C avant la s paration Pour une conservation sup rieure un jour s parer le s rum du caillot par centrifugation 800 1600 x g pendant 20 minute
42. cobas TaqScreen West Nile Virus Test obas for use on the cobas s 201 system DESTIN AU DIAGNOSTIC N VITRO TaqScreen West Nile Virus Test 96 Tests P N 04741722 190 cobas TaqScreen West Nile Virus Control Kit WNV CTL 6 Sets P N 04741749 190 cobas TaqScreen Wash Reagent TS WR 5 1L P N 04404220 190 GE Pour appliquer des chantillons de cadavres le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen l utilisateur a besoin de la trousse suivante en plus des trousses cit es ci dessus cobas TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit CADV SPEC DIL 96 Tests P N 05002125 190 TABLE DES MATI RES Liste des tableaux UTILISATION RESUME ET DESCRIPTION DU TEST RRINCIPES TEST nn REA Pooling et pipetage automatis s des chantillons l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARI t ID ue Pr paration automatis e des chantillons l aide de l appareil COBAS AmpliPrep Ww wo Amplification automatis e de l acide nucl ique l aide de l analyseur COBAS TaqMan Transcription inverse et amplification par PCR dues Amplification s lective D tection automatis e en temps r el de produits de PCR l aide de D tection des produits de PCR Gestion des donn es automatis e l aide du logiciel PDM nn MAT RIEL FOURNI PAR AUTRE M
43. cobas TaqScreen apr s leur date d expiration Ne pas permuter m langer ou combiner des r actifs provenant de trousses ou de lots diff rents Ne pas charger des lots de r actifs m lang s sur l appareil COBAS AmpliPrep Le bureau local de Roche peut sur demande fournir les fiches de s curit des produits SDS 05618169001 04FRC 11 Doc Rev 4 0 Eviter le contact des r actifs avec la peau les yeux ou les muqueuses En cas de contact rincer imm diatement avec un grand volume d eau afin d viter les br lures En cas de d versement de ces r actifs diluer avec de l eau avant d essuyer viter le contact du r actif de lyse LYS qui contient du thiocyanate de guanidine avec une solution d hypochlorite de sodium eau de Javel Ce m lange peut g n rer un gaz hautement toxique Se conformer aux proc dures et aux directives fournies pour assurer l ex cution ad quate du test Tout d faut de se conformer aux proc dures et aux directives peut nuire a la performance optimale du test L utilisation d chantillons de donneurs vivants excessivement h molys s doit tre vit e La contamination en globules rouges des chantillons de plasma gt 5 peut inhiber le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen N utiliser dans aucune phase du test les composants dont les tiquettes code barres sont endommag es Lors des tests d chantillons de cadavres les chantillons qui sont de coul
44. dental par une de trois m thodes de test d acides nucl iques L tude a t men e dans 3 laboratoires d essai qui ont chacun test environ 100 chantillons autant purs que dilu s 1 6 l aide de trois lots diff rents du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Dans le cadre de cette tude la sensibilit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen a t de 100 IC 95 98 8 100 0 avec les chantillons purs et de 97 5 IC 95 95 1 98 9 avec les chantillons dilu s 1 6 tableau 13 Les huit 8 chantillons dilu s 1 6 et non r actifs provenaient d chantillons purs dont la charge virale tablie tait de moins de 100 copies ml selon l essai de PCR quantitatif du VNO du National Genetics Institute Tableau 13 Sensibilit clinique d chantillons positifs connus du virus du Nil occidental Nombre Nombre Nombre ste Sensibilit IC 95 7 5 Sensibilit d chantillons d chantillons d chantillons aoe test s r actifs non r actifs Limite Limite inf rieure sup rieure Pur 314 314 0 100 98 8 100 0 Dilu 1 6 315 307 8 97 5 95 1 98 9 Un chantillon pur tait non valide Sp cificit clinique La sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen t valu e par un test sur des dons de sang total s lectionn s au hasard dans si
45. doit tre r alis sur le systeme cobas s 201 Le systeme cobas s 201 doit tre install par un repr sentant d entretien de Roche Diagnostics et utilis en tant que configuration de syst me complet Les composants individuels du syst me cobas s 201 ne peuvent pas tre utilis s comme dispositifs autonomes et ils ne peuvent pas tre substitu s Le syst me cobas s 201 utilise les composants num r s ci apr s Se reporter la Fiche d information du produit pour de l information suppl mentaire Instruments et logiciel du syst me cobas s 201 Configuration C ou Configuration C MR1 Maintenance Release 1 Pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Appareil COBAS AmpliPrep Analyseur COBAS avec mise jour EX48 Station de donn es du logiciel AMPLILINK et logiciel v3 1 2 ou v3 2 1 Serveur PDM Data Manager de Roche station de travail Data Manager et logiciel v2 0 10 ou v2 0 14 Manuel d utilisation de la configuration ou de la configuration Maintenance Release 1 du systeme cobas s 201 Syst me cobas s 201 Configuration ou Mise jour corrective 1 de la configuration C MRT liste des probl mes connus Portoirs et produits jetables Portoirs des chantillons COBAS AmpliPrep SK24 P N 28122172001 Portoirs des SPU COBAS AmpliPrep P N 05471664001 Portoirs de r actifs COBAS AmpliPrep P N 28122199001 Unit s de traitement des chantillons SPU P N 03755525001
46. du Nil occidental cobas TaqScreen au niveau de l chantillon individuel Les r sultats d chantillons en pools ont affich un taux non valide de 2 3 en raison d une d faillance du t moin interne ou de l appareil 05618169001 04FRC 33 Doc Rev 4 0 R sultats des tests individuels Le tableau 15 illustre le calcul de la sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen pour les 10 375 donneurs mesurables des tests individuels La sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen des tests individuels tait de 100 10 375 10 375 IC 95 99 964 100 000 dans le cadre de cette tude Les r sultats d chantillons individuels ont affich un taux non valide de 1 1 en raison d une d faillance du t moin interne ou de l appareil Tableau 15 J Sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen tests individuels Crit re Etat du donneur au VNO d valuation du Le Pr sum Fe Total VNO Positifs positifs N gatifs Inconnu R actif au VNO 0 50 0 8 0 0 8 0 0 Non r actif au VNO 0 s 0 0 s 0 nto 0 5 10 375 Total 0 0 10 375 0 10 375 Sp cificit clinique Gadea IC 495 100 000 Le crit re d valuation du VNO a t d riv du r sultat valide du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen de l essa
47. e la plage assign e Fabricant Conserver dans un endroit sombre Suffisant pour lt n gt tests Limites de temp rature Fichier de d finition de tests Limite sup rieure de la plage assign e Utiliser jusque Ce produit r pond aux exigences de la Directive Europ enne 98 79 CE concernant les dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro Doc Rev 4 0
48. entielles et interf rence de micro organismes 26 Sp cificit analytique autres probl mes de sant Substances potentiellement interf rentes Substances endog nes interf rentes Substances exog nes interf rentes 207 CHANTILLONS DE CADAVRES in DO Reproductibilit Sp cificit Sensibilit analytique dans les chantillons de cadavres avec l talon secondaire de VNO de Roch 29 Sensibilit HSE eee PERFORMANCE CLINIQUE ECHANTILLONS DE DONNEURS VIVANTS PE EEI AA E E E Sensibilit clinique Test d chantillons positifs connus du virus du Nil occidental Sp cificit clinique R sultats des tests de pools R sultats des tests individuels S8S4 Liste des tableaux Tableau 1 Test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen r sultats de reproductibilit eeeeseccccesseesssssssssssessssseeseessssennsee Tableau 2 R sum de sensibilit analytique selon l talon de virus du Nil occidental de Sant Canada Tableau 3 R sum de sensibilit analytique selon l talon secondaire de VNO de Roche Tableau 4 R sum de sensibilit ne selon le paner de virus du Nil occidental de CBER et de la FDA m EA 24 Tableau 5 R sum de sensibilit analytique selon le panel de qualification QW
49. es au VNO et au TI galement pr sentes dans le WNV MMX Deux marqueurs fluorescents sont utilis s un marque la sonde du et l autre marque la sonde sp cifique la cible pour permettre l identification distincte du VNO et du TI Transcription inverse et amplification par PCR Les r actions de transcription inverse et d amplification sont accomplies par une enzyme recombinante thermostable l ADN polym rase 205 En pr sence de mangan se Mn l ADN polym rase 205 a des activit s de transcriptase inverse et d ADN polym rase Cela permet la transcription inverse et l amplification par PCR de se produire dans le m me m lange r actionnel L amplification par PCR est r alis e l aide de l ADN polym rase Z05 qui permet l extension des amorces hybrid es le long des matrices cibles pour produire une mol cule d ADN bicat naire appel e amplicon processus est r p t au cours de multiples cycles chaque cycle doublant la quantit d ADN amplicon L amplification se produit uniquement dans la r gion des g nomes cibles comprise entre les amorces les g nomes ne sont pas amplifi s en entier 05618169001 04FRC 4 Doc Rev 4 0 Amplification s lective L amplification s lective de l acide nucl ique cible de l chantillon est r alis e lors du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen gr ce l enzyme AmpErase uracil N glycosylase et la d soxyuridine triphosphate dUT
50. eur paille rose sont class s comme mod r ment h molys s tandis que ceux qui sont de couleur rouge rouge fonc ou brun sont class s comme des chantillons hautement h molys s PR PARATION DES R ACTIFS A Equilibrer les r actifs et les t moins WNV cobas TaqScreen temp rature ambiante 30 minutes avant l utilisation PR L VEMENT CONSERVATION ET POOLING DES CHANTILLONS Remarque Manipuler tous les chantillons comme s ils taient des agents infectieux Echantillons de donneurs vivants A B Les chantillons de plasma pr lev s l aide d une solution d EDTA de CPD de CPDA1 de CP2D d ACDA et de citrate de sodium 4 peuvent tre utilis s avec le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Suivre les directives fournies par le fabricant des tubes de pr l vement La stabilit de l chantillon est affect e par des temp ratures lev es Le sang pr lev dans les anticoagulants EDTA K2 et EDTA K3 peut tre conserv sous deux conditions Condition 1 le sang peut tre conserv jusqu 24 heures une temp rature de 2 30 C suivi d une p riode de 24 heures entre 2 et 25 C puis d une p riode de 72 heures entre 2 et 8 C avant la s paration du plasma Pour une conservation sup rieure cinq jours s parer le plasma des globules rouges par centrifugation 800 1600 x g pendant 20 minutes Apr s s paration le plasma peut tre conserv a u
51. f et le t moin interne correspondant doit tre valide Si le t moin interne est non valide le r sultat interpr t du t moin positif est non valide Si le r sultat interpr t du t moin positif est non valide la totalit de la s rie est non valide et doit tre r p t e 3 T moin interne des chantillons de donneur a Pour qu un chantillon de donneur ait un r sultat de test non r actif valide le t moin interne correspondant doit tre valide autrement le r sultat non r actif est non valide et l chantillon de donneur doit tre test de nouveau b Pour qu un chantillon de donneur ait un r sultat de test r actif valide le t moin interne correspondant doit tre valide ou non valide 05618169001 04FRC 19 Doc Rev 4 0 RESULTATS 1 Les r sultats des chantillons sont valides uniquement si la s rie qui les contient est valide Se reporter la section Contr le de qualit pour conna tre les crit res d acceptation Deux param tres sont mesur s pour chaque chantillon un pour la cible VNO et l autre pour le t moin interne 2 Les r sultats de donneur finaux du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen sont pr sent s par le logiciel PDM comme suit tat Signification Complete Non Reactive Le donneur est non r actif au VNO Complete Reactive Le donneur est r actif au VNO Le d lai de viabilit s est termin avant qu un tat r actif ou non r actif
52. i sur l index de don l aide de l algorithme de test en pools L tat du donneur au VNO a t attribu par programme selon les profils de r activit du test sur l index de don et le cas ch ant les dons de suivi Un tat du donneur au VNO Pr sum positif a t attribu par programme aux donneurs sans don d tude de suivi mais qui ont obtenu un r sultat r actif au test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen et au moins 1 r sultat r actif ou positif sur la source de plasma secondaire le TAN secondaire ou l IgM pour l index de don Les donneurs avec un tat au VNO inconnu sont des donneurs dont les r sultats du test taient insuffisants pour leur attribuer un tat au VNO 05618169001 04FRC 34 Doc Rev 4 0 BIBLIOGRAPHIE Petersen L R Marfin A A A primer for the clinician Ann Intern Med 2002 137 173 179 Kramer L D Bernard K A West Nile Virus in the western hemisphere Curr Opin Infect Dis 2001 14 5 519 525 Longo M C Berninger M S Hartley J L 1990 Use of uracil DNA glycosylase to control carry over contamination in polymerase chain reactions Gene 93 125 128 Sawa R McAuley Hecht K Brown T Pearl L 1995 The structural basis of specific base excision repair by uracil DNA glycosylase Nature 373 487 493 Mol D Arvai S Slupphaug G Kavli B Alseth l Krokan E Tainer J A 1995 Crystal structure and mutational analysis
53. ilat ral 200 39 44 88 6 77 6 330 43 44 97 7 89 7 400 43 44 97 7 89 7 425 43 43 100 0 93 3 450 43 44 97 7 89 7 525 43 44 97 7 89 7 Limite inf rieure Limite sup rieure de de l intervalle de Concentration de confiance l intervalle de Analyse PROBIT d tection copies ml A95 confiance 95 copies ml copies ml 95 365 1 285 6 873 0 Un r plicat tait non valide 05618169001 04FRC 30 Doc Rev 4 0 Sensibilit Soixante chantillons de plasma EDTA de cadavres choisis al atoirement non r actifs pour l ARN du VNO et class s par niveau d h molyse chantillon mod r ment h molys de couleur paille rose ou chantillon hautement h molys de couleur rouge rouge fonc ou brun ont t r partis en 5 groupes de 12 chantillons par groupe Les chantillons de chaque groupe ont t dop s avec la cible virale de VNO en utilisant un isolat clinique diff rent pour chaque groupe une concentration finale d environ 570 copies ml 3 x 190 copies ml pour les chantillons de cadavres mod r ment h molys s et environ 990 copies ml 3 x 330 copies ml pour les chantillons de cadavres hautement h molys s Ces chantillons dop s avec de l ARN de VNO ont t test s soit imm diatement apr s le dopage ou dans le mois ayant suivi le dopage p riode au cours de laquelle les chantillons taient conserv s une temp rature de lt 80 C Dans tous les cas ch
54. its de PCR l aide de COBAS TaqMan Pendant l amplification PCR la temp rature lev e intermittente au cours du cycle d nature l amplicon cible et du TI pour former de l ADN monocat naire Les sondes oligonucl otidiques de d tection s hybrident la forme monocat naire de l ADN amplifi L amplification I hybridation et la d tection se font simultan ment D tection des produits de PCR Le m lange r actionnel cobas TaqScreen WNV MMX contient des sondes de d tection sp cifiques l acide nucl ique du VNO et du TI Chaque sonde de d tection est marqu e l aide de deux marqueurs fluorescents un qui agit comme rapporteur et l autre comme extincteur Un type de rapporteur est associ la sonde cible et est mesur une longueur d onde d termin e Un second type de rapporteur est associ la sonde du TI et est mesur une longueur d onde diff rente Les deux sondes utilisent un seul type d extincteur Ce syst me permet la d tection de la cible VNO amplifi e une longueur d onde et la d tection simultan e de l acide nucl ique du TI amplifi une longueur d onde diff rente Avant le d but de l amplification par PCR les sondes sont l tat intact et le marqueur fluorescent rapporteur est supprim par l extincteur cause du transfert d nergie de type Forster Au cours de l amplification par PCR les sondes s hybrident aux s quences d ADN monoca
55. le HBsAg Les tests par m thodes de PCR sur un plasma humain n gatif indiquent un ARN du VNO non d celable Cependant aucune m thode de test connue ne peut garantir avec une certitude absolue que des produits d riv s du sang humain ne transmettront pas d agents infectieux Tous les produits base de sang humain doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux et manipul s en appliquant les pr cautions universelles En cas de d versement d sinfecter imm diatement l aide d une solution d hypochlorite de sodium 0 5 eau de Javel dilu e pr par e extemporan ment ou suivre les proc dures appropri es du site Respecter les pr cautions habituelles du travail en laboratoire Ne pas pipeter la bouche Ne pas manger boire ou fumer dans les zones de travail d sign es Porter des gants jetables une blouse de laboratoire et des lunettes de protection lors de la manipulation des chantillons et des r actifs de la trousse Se laver soigneusement les mains apr s la manipulation des chantillons et des r actifs Les r actifs WNV WNV MMX Mn WNV IC et C contiennent de l azoture de sodium comme conservateur Ne pas utiliser des tubulures m talliques pour le transfert de r actifs En cas d limination de solutions contenant de l azoture dans les conduites d vacuation diluer ces solutions et rincer abondamment l eau courante Ces pr cautions sont recommand es afin d viter l
56. min la proc dure de pr paration des chantillons D1 Transf rer le SK24 contenant les chantillons trait s vers l analyseur COBAS TaqMan L analyseur COBAS TaqMan commence automatiquement l amplification et la d tection Le cycle de l analyseur COBAS TaqMan doit d buter moins de 1 heure apr s la fin de la pr paration des chantillons pour ce portoir SK24 Les r sultats des portoirs SK24 qui ne sont pas transf r s dans un d lai d une heure ne seront pas valides exception faite des r sultats r actifs dans un lot valide qui sont signal s comme r actifs D2 Lorsque l analyseur COBAS TaqMan a termin l amplification et la d tection les chantillons analys s sont automatiquement limin s et jet s dans la poubelle D3 Accepter les r sultats sur la station de travail du logiciel AMPLILINK D4 Les r sultats sont automatiquement transf r s vers le logiciel PDM 05618169001 04FRC 18 Doc Rev 4 0 E R vision et divulgation des r sultats D marrer la station de travail de Roche E2 Extraire les s ries non valu es dans l onglet Review Batches de la station de travail Data Manager E3 Examiner les alarmes en mettant en vidence une s rie puis cliquer sur Next Examiner les r sultats des t moins dans l onglet Controls Review Pour conna tre les crit res de validit des t moins se reporter la section Contr le de qualit
57. ne temp rature de 2 8 C pendant sept jours suivi d une p riode maximale de 30 jours une temp rature de lt 20 C Anticoagulant EDTA Condition 1 30 c 30 ZM 25 c 20 2 to 4 je Sang total Plasma rd T tT TT FT 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Jours apr s le pr l vement 05618169001 04FRC 12 Doc Rev 4 0 Condition 2 le sang peut tre conserv jusqu 72 heures une temp rature de 2 25 C suivi d une p riode de 48 heures entre 2 et 8 C avant la s paration du plasma Pour une conservation sup rieure cing jours s parer le plasma des globules rouges par centrifugation 800 1600 x g pendant 20 minutes Apr s s paration le plasma peut tre conserv une temp rature de 2 8 C pendant sept jours suivi d une p riode maximale de 30 jours une temp rature de lt 20 C Le plasma EDTA K2 et EDTA K3 peut tre congel et d congel trois 3 reprises au maximum 4 Anticoagulant EDTA Condition 2 5 ome 2 25 C 5 xJ 5 5 J 5 2 10 6 28 J Sang total Plasma TT TT TT I 012 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Jours apr s le pr l vement Le sang pr lev dans les anticoagulants CPD CPDA1 et CP2D peut tre conserv jusqu 24 heures une temp rature de 2 30 C avant la s paration d
58. ne concentration de 3x la limite de d tection du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen l exception des 4 isolats de la famille de virus de l enc phalite japonaise enc phalite japonaise enc phalite Murray Valley enc phalite de Saint Louis et virus Kunjin le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas a donn des r sultats non r actifs pour tous les chantillons de micro organismes sans virus du Nil occidental ajout et des r sultats r actifs pour tous les chantillons de micro organismes avec le virus du Nil occidental ajout Les 4 isolats de la famille de virus de l enc phalite japonaise ont t r actifs dans les 8 r plicats du test Ces r sultats taient pr vus puisque ces virus poss dent une s quence de nucl otides homologue celle du virus du Nil occidental ainsi qu aux amorces et aux sondes du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Ad novirus type 7 Cellules C5 MJ produisant le HTLV I Tableau 6 Microorganismes test s Ad novirus type 2 Virus de l h patite C g notype 6 HIV 1 sous type Ad novirus type 3 Cellules MJ G11 produisant le HTLV I HIV 1 sous type B HIV 1 sous type C Candida albicans Cellules MoT produisant le HTLV II HIV 1 sous type D Cytom galovirus Davis Chaine delta H6H11 pleine longueur du HTLV II HIV 1 sous type E Cytom galovirus Towne Herp s simplex type
59. ne maladie ou une condition auto immune tablie anticorps antinucl aire positif facteur rhumato de positif et lupus ryth mateux diss min ont t test s avec ou sans l ajout du virus du Nil occidental une concentration de 3x la limite de d tection du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Ces substances endog nes n ont pas nui la sensibilit ni la sp cificit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Des chantillons de plasma auxquels des globules rouges ont t ajout s une concentration anormalement lev e jusqu 10 vol vol ont t test s avec et sans l ajout du virus du Nil occidental une concentration de la limite de d tection du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Le plasma auquel 10 vol vol de globules rouges ont t ajout s a nui a la sensibilit et a la sp cificit du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Substances exog nes interf rentes Des chantillons de plasma contenant une concentration anormalement lev e d ac taminoph ne 1324 pmol L d acide ac tylsalicylique 3 62 pmol L d atorvastatine 600 Eq L de fluox tine 11 2 pmol L de loratadine 0 78 pmol L de nadolol 3 88 pmol L de naprox ne 2170 pmol L de parox tine 3 04 pmol L de sertraline 1 96 pmol L d acide ascorbique 284 pmol L d ibuprof ne 2425 pmol L ou de ph nyl phrine
60. ntal cobas TaqScreen Un total de 30 r plicats par lot de trousse ont t test s pour un total de 90 r plicats par concentration A l aide des donn es combin es provenant de tous les r plicats test s LDD a t tablie selon le taux de positivit avec les limites de fiabilit inf rieures 95 unilat rale ainsi que calcul e par l analyse PROBIT pour valuer la limite de d tection de 95 et les intervalles de confiance bilat raux de 95 du panel Tableau 2 La LDD de 95 estim e l aide de l talon de Sant Canada souche 1 tait de 40 3 copies ml Tableau 2 R sum de sensibilit analytique selon I talon de virus du Nil occidental de Sant Canada Valeur Nombre Limite de fiabilit nominale d chantillons Nombre de tests de r actifs inf rieure a 95 copies ml r actifs individuels unilat rale 0 0 89 0 8 0 5 10 90 11 1 6 2 10 43 90 47 8 38 7 20 70 90 77 8 69 4 25 74 90 82 2 74 3 30 76 90 84 4 76 8 35 85 90 94 4 88 7 50 89 90 98 9 94 8 Limite inf rieure de Limite sup rieure de Taux de Concentration confiance 95 confiance 95 Analyse PROBIT d tection copies ml copies ml copies ml 95 40 3 35 1 47 8 Un r plicat tait non valide Sensibilit analytique talon secondaire de VNO de Roche souche 1 La limite de d tection LDD du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas T
61. oc Rev 4 0 MODE D EMPLOI Le syst me cobas s 201 comporte quatre op rations principales le pipetage d chantillons et de t moins l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD la pr paration des chantillons l aide de l appareil COBAS AmpliPrep et du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen l amplification et la d tection sur COBAS TaqMan et la gestion des donn es La configuration du syst me cobas s 201 permet la prise en charge d un maximum de six pipeteurs Hamilton MICROLAB STAR STARlet IVD cinq stations de travail Data Manager et dix stations de donn es AMPLILINK Chaque station de donn es AMPLILINK peut prendre en charge jusqu trois appareils COBAS AmpliPrep et deux analyseurs COBAS TaqMan Se reporter au Manuel d utilisation du syst me cobas s 201 pour obtenir des renseignements d taill s concernant la configuration du syst me cobas s 201 Chaque trousse du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen contient huit cartouches deux cartouches WNV CS1 avec particules magn tiques en verre deux cartouches WNV CS2 avec r actif de lyse deux cartouches WNV CS3 avec prot ase et tampon d lution et deux cartouches WNV CS4 avec TI m lange r actionnel MMX et solution de mangan se Cette trousse de test doit tre utilis e avec la trousse de t moins du virus du Nil occidental cobas TaqScreen et le r actif de lavage cobas
62. of human uracil DNA glycosylase structural basis for specificity and catalysis Cell 80 869 878 Higuchi R Dollinger G Walsh P S Griffith R 1992 Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences Biotechnology N Y 10 413 417 Heid C A Stevens J Livak J K Williams P M 1996 Real time quantitative PCR Genome Research 6 986 994 Richmond J Y and McKinney RW eds 1999 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories HHS Publication Number CDC 93 8395 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections Approved Guideline Third Edition CLS Document M29 A3 Wayne PA CLSI 2005 International Air Transport Association Dangerous Goods Regulations 41st Edition 2000 704 pp Saldanha J Shead S Heath A Drebot M and the West Nile Virus Collaborative Group 2005 Collaborative study to evaluate a working reagent for West Nile virus RNA detection by nucleic acid testing Transfusion 45 97 102 Briese T Rambaut A Pathmajeyan M Bishara J Weinberger M Pitlik S Lipkin W l 2002 Phylogenetic analysis of human isolate from the 2000 Israel West Nile virus epidemic Emererging Infectious Diseases 8 5 528 531 Hayes C G West Nile Virus Uganda 1937 to New York City 1999 Annals of the New York Academy of Sciences 951 25 37 Ji J Chen X Manak M 2001 TaqMan P
63. pareil COBAS AmpliPrep puis attendre que la DEL du portoir de r actifs passe au vert avant de glisser le portoir au fond de l appareil sa position finale B7 Les voyants DEL sur la barre d tat de l appareil COBAS AmpliPrep passent au vert lorsque tous les composants requis de la trousse sont charg s et reconnus par le syst me C Extraction des acides nucl iques des chantillons et des t moins pipet s Remarque Ex cuter les tapes suivantes sur une table de travail st rile Retirer l enveloppe de l unit de traitement des chantillons SPU et garder intacts le ruban et le rev tement en plastique C2 La grande languette du portoir SPU orient e vers l op rateur ins rer le lot SPU au m me niveau que le c t droit du portoir SPU C3 Enlever le ruban et le rev tement en plastique des SPU log es dans le portoir S assurer que toutes les SPU sont enfonc es niveau et bien log es dans le portoir Des SPU sur lev es peuvent entra ner une d faillance de l appareil Ne pas mettre de pression sur l embout de la SPU C4 Glisser les portoirs SPU charg s dans l appareil COBAS AmpliPrep aux positions de SPU J ou K jusqu que le portoir soit enti rement ins r et reconnu L appareil peut accueillir jusqu 72 SPU la fois Installer le nombre minimal de SPU requis pour le cycle ou en ajouter au besoin C5 Retirer l enveloppe de cellophane des portoirs de tubes K et d embouts K charg
64. robe Assay for the Detection of West Nile Virus 16th Annual San Diego Conference New Technologies for Molecular Diagnostics Clinical Chem 2001 47 2078 2085 Poster 11 05618169001 04FRC 35 Doc Rev 4 0 Information sur les r visions apport es au document Doc Rev 4 0 05 2014 Suppression du symbole Dangereux pour l environnement Retrait de la phrase Tous droits r serv s du copyright Mise a jour des descriptions de la page des symboles harmonis s la fin de la notice Retrait du nom ROCHE de l nonc relatif la marque Veuillez communiquer avec le repr sentant de Roche de votre r gion si vous avez d autres questions 05618169001 04FRC 36 Doc Rev 4 0 Roche Molecular Systems Inc 1080 US Highway 202 South Branchburg NJ 08876 USA N de licence aux E U 1636 Roche Diagnostics 201 boulevard Armand Frappier H7V 4A2 Laval Qu bec Canada For Technical Assistance call Distributed by Pour toute assistance technique appeler le 1 877 273 3433 COBAS COBAS S TAQMAN TAQSCREEN AMPLILINK AMPERASE et AMPLIPREP sont des marques de commerce de Roche MICROLAB est une marque de commerce de Hamilton Company ARMORED RNA est une technologie brevet e mise au point par Ambion Inc et Cenetron Diagnostics LLC Brevets am ricains n 5 677 124 n 5 919 625 et n 5 939 262 et brevets en instance ARMORED RNA est une marque de commerce d Ambion and Cenetron
65. rus du Nil occidental Zeptometrix NY 2001 6263 lot n 302142 talonn selon l talon de r f rence de virus du Nil occidental de Sant Canada Des panels mod r ment h molys s ont t pr par s par dilution de l talon dans un pool de plasma EDTA de cadavre n gatif au virus comprenant des chantillons de cadavres individuels dont il avait t d termin qu ils appartenaient la cat gorie des chantillons mod r ment h molys s de couleur paille rose La matrice d chantillons hautement h molys s tait une matrice artificielle comprenant du sang total conserv lys m lang du plasma EDTA afin de repr senter un chantillon clinique hautement h molys de couleur rouge fonc ou brun Il a t v rifi que la matrice d chantillons hautement h molys s tait n gative pour l ARN du VNO avant la pr paration des panels de dilution On a utilis deux lots de trousse de test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen pour tester les panels mod r ment h molys s et un lot de trousse de test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen pour tester les panels hautement h molys s Pour chaque matrice l aide des donn es combin es tir es de tous les r plicats test s la LDD a t tablie selon le taux de positivit avec les limites inf rieures des intervalles de confiance 95 unilat raux et calcul e par analyse PROBIT pour valuer la limite de d tection de 95
66. s Apr s le retrait les chantillons de s rum peut tre conserv s jusqu trois jours une temp rature de 2 8 C Dans le cas du s rum extrait du caillot il est aussi possible de conserver les chantillons de s rum de cadavres mod r ment h molys s une temp rature lt 18 C pendant une dur e maximale de 15 jours et les chantillons de s rum de cadavres hautement h molys s une temp rature lt 18 C pendant un maximum de 8 jours Le plasma de s rum de cadavres peut tre congel et d congel trois 3 reprises au maximum D Les chantillons de cadavres dilu s dans un rapport de 1 5 dans le diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen peuvent tre conserv s jusqu 7 jours une temp rature de 2 8 et apr s un nouveau m lange en pipetant chaque tube quatre 4 fois ils peuvent subir le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen E Si les chantillons doivent tre exp di s ils doivent tre emball s et tiquet s conform ment aux r glementations f d rales et internationales applicables relatives au transport d chantillons et d agents tiologiques F En cas de manquement dans la manipulation et le traitement des chantillons une contamination crois e des chantillons peut entra ner des r sultats faussement positifs 05618169001 04FRC 14 Doc Rev 4 0 POOLING ET PIPETAGE DES ECHANTILLONS 1 Le syst me cobas s 201 utilise le pipeteur
67. s par le fabricant en prenant soin de ne pas faire basculer les portoirs S assurer qu ils sont tous log s convenablement C6 Glisser aux positions N ou P le nombre minimal requis de portoirs de tubes et d embouts dans l appareil COBAS AmpliPrep C7 Cr er des ordres au poste de travail l aide du logiciel AMPLILINK C8 Charger aux positions F G ou H de l appareil COBAS AmpliPrep les portoirs SK24 contenant les chantillons et les t moins pipet s l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Glisser jusqu au verrouillage du portoir V rifier la fen tre Sample d tat du syst me pour s assurer que tous les chantillons de chaque portoir ont t reconnus C9 V rifier le logiciel AMPLILINK pour s assurer que la quantit de mat riel et de consommables charg e corresponde la pr paration d chantillon voulue C10 Appuyer sur le bouton Start de la station de travail du logiciel AMPLILINK pour commencer la pr paration des chantillons de l appareil COBAS AmpliPrep C11 Les embouts et les tubes non utilis s restent verrouill s dans l appareil COBAS AmpliPrep jusqu au prochain cycle D Amplification et d tection Remarque La stabilit du m lange r actionnel Working Master Mix avec les chantillons trait s contenus dans le portoir SK24 est limit e L appareil COBAS TaqMan doit tre pr t recevoir les chantillons d s que l appareil COBAS AmpliPrep a ter
68. soit attribu au donneur Aucun autre test ne peut tre effectu sur le syst me pour ce donneur Se reporter au Manuel d utilisation du syst me cobas s 201 pour obtenir une description du d lai de viabilit Complete Unresolved 3 Donneurs qui requi rent un test suppl mentaire les tubes de donneur dont l tat du pool ou l tat du don individuel est non valide et qui re oivent l tat Repeat Needed et les tubes de donneur contenus dans un pool r actif qui re oivent l tat Resolution Needed Repeat Needed Les tubes de donneur dont l tat du pool ou l tat du don individuel est invalid requi rent un nouveau test faisant partie d une analyse r p t e individuelle ou en pool Test de pools Resolution Needed Lorsqu un pool faisant partie d un test de pool est d clar r actif par le syst me cobas s 201 l tat Resolution needed est attribu aux donneurs associ s ce pool et le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD effectue le pipetage des chantillons individuels depuis les plaques puits profonds ou les tubes d chantillon initiaux pour r aliser le test de r solution Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas permet d identifier l chantillon r actif individuel l aide des m mes m thodes test es en simple qu avec les chantillons en pool Si au moins un chantillon individuel d un pool est r actif le ou
69. t naire et sont cliv es par l activit nucl asique 5 vers 3 de l ADN polym rase 205 au m me moment o se produit l amplification D s que ce clivage s pare les marqueurs rapporteur et extincteur l activit fluorescente du marqueur rapporteur se d voile Chaque cycle PCR g n re un nombre croissant de sondes cliv es et le signal cumulatif du marqueur rapporteur s accro t en m me temps La d tection en temps r el des produits de PCR est effectu e par la mesure de la fluorescence des marqueurs rapporteurs lib r s repr sentant de fa on ind pendante la cible de VNO et le TI Gestion des donn es automatis e l aide du logiciel PDM Le logiciel PDM Data Manager de Roche permet l utilisateur d examiner les r sultats et de les rapporter Le logiciel PDM Data Manager de Roche attribue un r sultat non r actif r actif ou non valide tous les tests En plus d extraire et d examiner les r sultats de PCR le logiciel de Roche permet l op rateur d imprimer des rapports de rechercher des r sultats d accepter les r sultats de donneur et de transmettre s il le d sire les r sultats un SIL 05618169001 04FRC 5 Doc Rev 4 0 MATERIEL FOURNI PAR ROCHE Trois trousses sont n cessaires et fournies pour permettre la d tection de l ARN du VNO dans les chantillons de plasma 1 le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen 2 la trousse de t moins de virus du Nil occident
70. te partie inutilis e doit tre limin e Conserver le r actif TS WR une temp rature de 15 30 C Le TS WR inutilis est stable jusqu la date de p remption indiqu e Une fois un flacon ouvert ce r actif est stable pendant 30 jours une temp rature de 15 30 C ou jusqu la date de p remption en tenant compte du d lai le plus court 05618169001 04FRC 10 Doc Rev 4 0 Conserver CADV SPEC DIL a une temp rature de 15 30 C Le diluant est stable jusqu a la date de p remption indiqu e Une fois un flacon ouvert toute partie inutilis e dans le contenant doit tre limin e PRECAUTIONS DESTIN AU DIAGNOSTIC N VITRO A Les chantillons peuvent tre infectieux Prendre les pr cautions standard lors de la r alisation du test Cette proc dure ne doit tre effectu e que par des personnes habilit es l utilisation du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen et form es la manipulation de mat riel infectieux Nettoyer et d sinfecter soigneusement tous les plans de travail du laboratoire l aide d une solution 0 5 d hypochlorite de sodium pr par e extemporan ment avec de l eau distill e ou d ionis e Nettoyer ensuite les plans de travail avec de l thanol 70 AVERTISSEMENT Le WNV C contient du plasma humain d riv de sang humain Le produit source a t test non r actif pour l anticorps contre le HIV 1 2 anticorps contre le HCV et
71. tect s ensemble Lorsque le pipetage d une s rie est termin sur le pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD tout le portoir des chantillons est transf r dans l appareil COBAS AmpliPrep afin de passer la phase suivante du processus Remarque Pour les tests d chantillons de cadavres l chantillon doit tre tout d abord dilu manuellement dans un rapport de 1 5 dans le diluant d chantillons de cadavres cobas TaqScreen CADV SPEC DIL avant le pipetage au moyen du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Pr paration automatis e des chantillons l aide de l appareil COBAS AmpliPrep Les acides nucl iques des cibles et les mol cules ajout es du t moin interne Armored RNA t moin du processus de pr paration d amplification et de d tection des chantillons sont trait s simultan ment Le test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen contient des r actifs qui ex cutent cinq tapes s quentielles sur l appareil COBAS AmpliPrep La solution de prot ase dig re les prot ines pour favoriser la lyse et l inactivation des nucl ases et pour faciliter la lib ration de l ARN et de l ADN des virions L ajout du r actif de lyse un chantillon produit la lyse virale et l inactivation des nucl ases par la d naturation des prot ines L ARN et l ADN sont lib r s tout en tant prot g s contre les nucl ases Les acides nucl iques lib r s se lient la surface de silice des
72. tilis s lors de l ex cution du test de d pistage du virus du Nil occidental TaqScreen Type de pool Volume plasmatique minimal Pool primaire de 6 3 ml Pool primaire de 1 3 ml Pool de r p tition a partir du tube 1 5 ml Pool de r solution a partir du tube 2ml Comprend la cr ation d une plaque puits profonds 05618169001 04FRC 13 Doc Rev 4 0 F Ne pas congeler du sang complet L h parine a un effet inhibiteur sur la r action de PCR L utilisation d chantillons h parinis s n est pas recommand e H Les plaques puits profonds couvertes peuvent tre conserv es une temp rature de 2 8 C jusqu sept jours depuis la date de la s paration du plasma des globules rouges Autrement les plaques puits profonds couvertes peuvent tre conserv es lt 18 C pendant des p riodes plus longues I Aucun effet ind sirable n a t observ sur la performance du test lorsque les chantillons de plasma ont t soumis trois 3 cycles de cong lation et d cong lation J Equilibrer les chantillons individuels ou en pool temp rature ambiante avant utilisation K Si les chantillons doivent tre exp di s ils doivent tre emball s et tiquet s conform ment aux r glementations f d rales et internationales applicables relatives au transport d chantillons et d agents tiologiques L En cas de contr le inappropri dans la manipul
73. u plasma Pour une conservation sup rieure un jour s parer le plasma des globules rouges par centrifugation 800 1600 x g pendant 20 minutes Apr s s paration le plasma peut tre conserv une temp rature de 2 8 C pendant sept jours suivi d une p riode maximale de 30 jours une temp rature de lt 20 C Pour une conservation de longue dur e le plasma s par des globules rouges peut tre conserv lt 70 C pendant un maximum de 30 mois Le plasma CPD CPDA1 et CP2D peut tre congel et d congel trois 3 reprises au maximum Anticoagulant CPD CPDA1 CP2D 30 20 Temp rature C Sang total Plasma N w Jours apr s le pr l vement D Le plasma par aph r se dans les anticoagulants ACDA ou citrate de sodium 4 peut tre conserv jusqu 24 heures une temp rature de 2 30 C apr s le pr l vement Le plasma par aph r se peut tre conserv jusqu 30 jours lt 20 C Le plasma par aph r se dans l ACDA ou une solution de citrate de sodium 4 peut tre congel et d congel trois 3 reprises au maximum E Les lignes directrices suivantes en mati re de volume plasmatique sont bas es sur le pipetage partir de tubes de 13 x 100 mm en plastique ou en verre effectu l aide du pipeteur Hamilton MICROLAB STAR STARIet IVD Les volumes indiqu s correspondent au plasma en plus du concentr de globules rouges et sont u
74. x laboratoires externes Les chantillons individuels et les chantillons en pools de six ont t test s Trois lots diff rents du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen ont t utilis s au cours de l tude La sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas a t calcul e comme le pourcentage intervalle de confiance IC binomial bilat ral exact 95 des donneurs n gatifs au VNO qui ont obtenu des r sultats non r actifs au test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen Il y avait 86 935 donneurs mesurables provenant des tests de pools et 10 375 donneurs mesurables provenant des tests individuels 05618169001 04FRC 32 Doc Rev 4 0 R sultats des tests de pools Le tableau 14 illustre le calcul de la sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental TaqScreen pour les 86 935 donneurs mesurables des tests de pools La sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental TaqScreen des tests de pools tait de 100 86 935 86 935 IC 95 99 996 100 000 dans le cadre de cette tude Tableau 14 Sp cificit clinique du test de d pistage du virus du Nil occidental cobas TaqScreen tests de pools Crit re Etat du donneur au VNO d Positifs N gatifs Inconnu 0 R actif au VNO 0 s 0 0 s 0 0 000

cobas TaqScreen WNV Test kit

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