bph2013 3
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1. ues l examen microsco pique Le volume apr s la lyse correspond la classification des types cellulaires dans l histogramme de l appareil La diff renciation automatis e des sous types leucocytaires MQZH 2013 03 Introduction Les automates d h matologie de petite taille mesurent jusqu 18 param tres h matologiques diff rents En font partie outre le nombre de cellules la concentration d h moglobine et de nombreux autres param tres galement la diff renciation en trois groupes des sous types leu cocytaires Les r sultats de la diff renciation des leucocytes sont exprim s en pour cent et en chiffres ab solus quantitatif et repr sent s sous forme de graphique soit d histogramme En outre des avertissements Flags gt signalent d ventuels probl mes techniques ou des r sultats patholo giques du patient L utilisateur de l appareil analyste biom dicale assistante m dicale est responsable de la va lidation technique des r sultats de mesure Celui ci doit interpr ter correctement les r sultats r aliser ventuellement un examen microscopique du frottis sanguin respectivement transmett re Les r sultats au m decin prescripteur Des connaissances de la technique de mesure ainsi que de l interpr tation de l histogramme sont indispensables dans ce contexte Mesure des param tres h matologiques avec la m thode par variation d imp dance Le sang destin l2. CE mesure Ec Tc nombre diff Lc DE l v3 EE Dilution pr alable CE avec une solution 2 isotonique Sang EDTA Impression des r sultats de mesure quantitatifs et des histogrammes d riv s de l image d impulsion RDW SD 40 0 x10 L 2 g L LYMPH 31 2 r MXD 6 8 z fl NEUT 62 0 pg LYMPH 1 8 x10 L g L MXD 0 4 x10 L x10 L NEUT 3 6 x10 L L gende Thrombocytes e Leucocytes 6 e nm Erythrocytes entiers Eclys s ps D Point de vue H matologie Flags Probl mes techniques potentiels Interf rences dans la zone du discrimi nateur inf rieur p ex agr gats plaquettaires volumineux gt v rifier sur le frottis sanguin pseudo Tc p nie induite par EDTA plaquettes g antes gt v rifier sur le frottis sanguin rythroblastes gt v rifier sur le frottis sanguin gt 5 bl 100 Lc corriger manu ellement le nombre de Lc rythrocytes r sistants la lyse gt v diluer chantillon Interf rences dans la zone du discrimi nateur sup rieur p ex cellules immatures blastes gt v rifier sur le frottis sanguin nombre de Lc extr mement lev gt diluer l chantillon R sultats pathologiques potentiels suspicion de pr curseurs de la granulopo se suspicion de lymphocytes atypiques suspicion de cellules immatures blastes suspicion d osinophilie basophilie suspicion de monocytose gt v rifier sur le frottis sanguin Documentatio
3. 85 3 Conseil professionnel K Schreiber Dr J Goede Clinique d H matologie H pital Universitaire Z rich 2013 Verein f r medizinische Qualit tskontrolle www mqzh ch
4. D Point de vue H matologie Effet de l agent lysant sur les leucocytes Lors de la diff renciation des leuco cytes les cellules sont trait es avec des r actifs de lyse Ces r actifs provo quent la lyse des rythrocytes et le r tr cissement des plaquettes Cependant les agents lysant propos s par les fabricants agissent diff rem ment sur chaque type de cellule sous types leucocytaires Il en r sulte que les cellules se placent en diverses positions dans les histo grammes des diff rents appareils Pour une valuation correcte de l histogramme il faut donc conna tre la m thode utilis e La membrane cytoplasmique des leucocytes r agit l agent lysant par une perte de volume cytoplasmique L enveloppe restante r tr cit et se place plus pr s du noyau cellulaire L importance de la modification des cellules sous l influence de l agent lysant d pend du type cellulaire et de l agent lysant utilis En raison de cette modification cellulaire due la lyse la taille des diff rents sous types de leucocytes ne montre pas non plus de corr lation avec la taille de la cellule telle qu elle est per ue l examen microscopique Modifications du volume cellulaire Exemple de lymphocytes monocytes et granulocytes neutrophiles Volume avant Volume apr s l agent lysant l agent lysant Granulocyte GA CA neutrophile ww Le volume avant la lyse correspond aux tailles per
5. analyse est dilu avec une solution isotonique conductrice puis transf r dans diff rentes chambres de mesure A ce niveau l les cellules passent individuellement travers un orifice de mesure sur lequel est appliqu un courant continu Les cellules tant de mauvais conducteurs lectriques le passage de chaque cellule travers l orifice de mesure augmente la r sistance lectrique En pr sence d un courant constant ceci entra ne une aug mentation de la tension entre les lectrodes qui est enregistr e comme impulsion lectrique Chaque impulsion correspond alors une cellule compt e et la hauteur du pic de l impulsion correspond au volume de la cellule L image form e par ces impulsions est transform e en une repr sentation graphique un histogramme et finalement imprim e avec les r sultats quanti tatifs Les num rations cellulaires se font dans deux chambres de mesure diff rentes chambre Ec Tc et chambre Lc Un agent lysant est ajout dans la chambre destin e aux leucocytes Ce r actif provoque la lyse des rythrocytes et le r tr cissement des thrombocytes Une partie de l chantillon lys est transf r e en m me temps pour le dosage de l h moglobine dans une unit de mesure s par e o elle est analys e par photom trie d absorption Agent lysant Aiguille d aspiration de l chantillon Go V0 Ph LE M Chambre de Chambre de Un T mesure 1 mesure 2
6. n des r sultats de diff renciation quantitatifs TYPE CELLULAIRE pourcentage sur 100 leucocytes TYPE CELLULAIRE nombre absolu pro portion par rapport au nombre total de Lc Calcul des nombres absolus nombre total de Lc 100 x TYPE CELLULAIRE Diff rence dans la classification des sous populations leucocytaires illustr e par l exemple de l ABX Micros et Sysmex KX Serie Poch i Dans l histogramme WBC white blood cells la plage de mesure pour les leucocytes est limit e par les appareils aussi bien dans la zone inf rieure que sup rieure pour Sysmex p ex avec les discriminateurs fixes LD et UD L int gralit de la courbe des leucocytes doit voluer dans cette zone Deux autres discriminateurs pour Sysmex p ex T1 et T2 permettent de diff rencier les trois populations de cellules Des probl mes techniques facteurs perturbateurs ou des r sultats pathologiques peuvent af fecter la diff renciation correcte par les discriminateurs Les automates affichent alors un Flag correspondant aux r sultats pour ABX Micros p ex G1 Suspicion d osinophilie my locytes neutrophiles hypersegment s gt Ces mentions sont sp cifiques chaque appareil et sont list es dans le manuel d utilisation de l appareil ou dans les documents de formation du fabricant En important directement les r sultats dans des syst mes lectroniques les informations Flag ne sont souvent pas envoy es en m me temp
7. s Il est donc particuli rement important que l utilisateur de l appareil proc de correctement la validation technique des r sultats et trans f re des informations importantes au m decin prescripteur Sysmex KX Serie Poch i x10 uL x10 uL x10 uL x10 uL 100 amp Li Lymphocytes D Granulocytes LYM neutrophiles Mixed Cells NEUT monocytes osinophiles basophiles MXD Les monocytes et les osinophiles se situant dans la m me zone de l histogramme les courbes en cas de monocytoses a et d osinophilies b sont tr s similaires Une diff renciation microscopique permet une identification claire ABX Micros WBC 7 8 10 L LYM 46 MON 5 GRA 48 LYM MON 50 100 200 300 400 GRA Lymphocytes 2 LYM Monocytes Granulocytes tous MON GRA Impressum aaun a EE ABX Micros Exemple d un histogramme essai interlaboratoire MQZH 2013 03 H3b leuc mie aigu AML MO Photos Dr R Fried P 8 i d 8 WBC 15 9 H 10 L A c Flags G1 G2 et M2 MM2 Flag pr somption de pr somption de BC Flags M2 G1 2 lympho blastes lymphocytes e Iympho blastes LYM 59 3 H atyp my locytes basophilie e my locytes MON 26 5 H Flag G1 et G2 peu clairs e lymphocytes anormaux ARE ae P sya LYM 9 4 H 10 L j i 0 basophilie wo n Microscopie 81 de blastes LYM 2 3 H 10 L ceux ci correspondent aux populations Micros LYM et MON de
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