Réactifs - Inova Diagnostics
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1. Precision et reproductibilite La pr cision du test QUANTA Flash MPO a t valu e en analysant les chantillons de 11 patients conform ment au document EP5 12 du CLSI Les donn es sont r sum es ci dessous Sur plusieurs Intra analyse Entre analyses Total jours chantill N Moyenne ET CV 0 0 0 0 ET CV ET CV A 84 1 9 0 2 48 0 0 0 0 03 58 04 75 B 84 12 7 1 3 10 4 0 0 0 0 091 7 4 1 6 12 8 C 80 19 0 07 38 0 2 0 9 08 40 1 1 55 D 80 17 6 0 7 38 0 0 00 05 31 09 51 E 80 20 2 08 39 0 0 00 0 71 32 1 0 51 F 84 32 4 14 43 0 0 00 12 38 19 58 G 84 36 0 141 39 0 0 00 2 1 58 25 7 0 H 84 39 0 2 3 60 0 0 00 3 3 85 4 1 104 84 41 5 22 53 0 0 0 0 18 44 29 69 J 84 124 1 63 50 0 0 00 481 3 9 79 64 K 84 641 0 29 0 45 0 0 00 28 4 4 4 405 63 Limites de d tection plages de lin arit et de conformit Conform ment au document EP17 A du CLSI la limite de d tection inf rieure de ce test est d environ 560 RLU soit 0 4 CU c est dire bien au dessous de la plage de conformit La limite de d tection sup rieure est d environ 1 000 000 RLU c est dire environ 330 au dessus de la plage de conformit L ensemble de la plage de conformit qui s tend de 3 2 CU 739 8 CU est lin aire Une tude de lin arit a t men e2. 84 1 76 6 90 0 Total Concordance g n rale 88 8 83 2 93 0 Sensibilite et specificite cliniques L tude de validation clinique comprenait 89 chantillons de granulomatose avec polyang ite GPA 89 polyang ites microscopiques MPA 10 syndromes de Churg Strauss CSS 47 syndromes de Goodpasture GPS 73 arthrites rhumatoides 101 lupus ryth mateux diss min s 7 syndromes de Sjogren 47 maladies inflammatoires chroniques intestinales 49 scl roses syst miques 18 scl roses multiples 29 virus de l h patite B 19 virus de l h patite C 7 virus de l immunod ficience humaine 10 syphilis et 66 patients souffrant d autres pathologies Les chantillons de 405 donneurs de sang sains ont galement t ajout s Les patients CSS et GPS sont connus pour produire des anticorps anti MPO Ils ont donc t exclus du calcul de sp cificit Les r sultats de ce test sont pr sent s ci dessous Diagnostic Sans MPA QUANTA Positif Sensibilit 79 8 69 9 87 6 tude clinique N 661 Analyse confiance 95 Flash N gatif Sp cificit 96 2 94 2 97 6 MPO Total Concordance g n rale 93 9 91 9 95 6 Neuf chantillons discordants ont t d tect s chez les patients GPA 9 ont t d tect s chez les patients GPS 2 chez les patients IBD 1 chez les patients CSS et 1 chez les patients souffrant d un lupus ryth mateux diss min
3. QUANTA Flash MPO doivent donc tre manipul s de la m me mani re que les substances potentiellement infectieuses Utiliser un quipement de protection personnelle appropri pour travailler avec les r actifs fournis Les claboussures de r actifs doivent tre nettoy es imm diatement Respecter les r glements en vigueur concernant l limination des d chets Precautions Ce produit est pour un usage diagnostique n Vitro Les contr les QUANTA Flash MPO sont con us pour tre utilis s avec le test QUANTA Flash MPO Ne pas transf rer les r actifs de contr le dans des tubes secondaires Les codes barres appos s sur les tubes permettent l appareil d identifier le contr le Une fois ouvert chaque tube de contr le est utilisable jusqu 15 fois avec une dur e maximum bord de l instrument de 10 minutes par utilisation La contamination des r actifs par produit chimique peut tre due un nettoyage ou un rin age inadapt de l appareil Les r sidus de produits chimiques courants en laboratoire tels que le formol l eau de Javel l thanol ou le d tergent provoquent des interf rences avec le test Veiller suivre la proc dure de nettoyage de l appareil recommand e dans le manuel de l utilisateur de BIO FLASH Conditions de conservation 1 Conserver les contr les non ouverts entre 2 et 8 C Ne pas congeler Les r actifs sont stables jusqu la date de p remption dans des conditions de stock
4. Suivre les instructions de la fen tre Add Triggers Add Trigger 1 bottle Une fois le code barres accept placer le D clencheur 1 sur le support rouge Cliquer sur Finish Remettre le tiroir de d chets en place et le fermer Pour remplacer le conteneur de rin age du syst me cliquer sur le bouton F9 Bulks Inventory en haut droite l cran Inventory Bulks cliquer sur le bouton Sys Rinse Dans la nouvelle fen tre Add System Rinse Remove bottles cliquer sur Next Suivre les instructions de la nouvelle fen tre Add System Rinse Add bottle Une fois le code barres accept cliquer sur Finish si n cessaire Pour vider le conteneur de d chets liquides cliquer sur le bouton Fluid Waste l cran Inventory Bulks Retirer les d chets liquides et les liminer Cliquer sur Suivant Une fois le flacon vide remplac cliquer sur Finish M thode Pr paration de la cartouche de r actifs Pour la premi re utilisation de la cartouche de r actifs suivre les instructions suivantes pour l installer correctement dans l appareil BIO FLASH instrument Remarque ne pas utiliser la cartouche de r actifs en cas de d t rioration visible Cartouche de r actifs QUANTA Flash MPO Des microparticules peuvent se d poser lors du transport ou de l entreposage elles doivent tre agit es pour tre remises en suspension 1 Lors de la premi re utilisation de la cartouche la retourner d licatement 30 fois en vitant la
5. charg e sur l appareil BIO FLASH L appareil pr dilue un chantillon de s rum de patient l aide du tampon d chantillon ajout une cuvette en plastique jetable De petites quantit s de s rum de patient dilu les billes de MPO et le tampon de dosage sont tous plac s dans une seconde cuvette puis m lang s Cette cuvette est incub e 37 C Les billes sont ensuite magn tis es et lav es plusieurs fois L anticorps IgG antihumain conjugu l isoluminol est alors ajout la cuvette et incub 37 C Les billes sont a nouveau magn tis es et lav es plusieurs fois Le conjugu d isoluminol produit une r action luminescente lorsque les r actifs d clencheurs sont ajout s dans la cuvette Le syst me optique BIO FLASH mesure la lumi re produite par cette r action en unit s de luminescence relatives RLU Les RLU sont proportionnelles la quantit de conjugu d isoluminol li elle m me proportionnelle la quantit d autoanticorps IgG anti MPO li e la MPO sur les billes Le test QUANTA Flash MPO utilise une courbe ma tresse pr d finie sp cifique au lot qui est charg e dans l appareil par le biais du code barres de la cartouche de r actifs Selon les r sultats de test de deux talons une courbe d talonnage sp cifique l appareil est g n r e Elle permet de calculer les unit s de chimiluminescence CU a partir des RLU obtenues pour chaque patient R actifs 1 La cartouche de
6. conform ment au document EP6 A du CLSI Les donn es sont r sum es ci dessous chantillon ae test Pente IC 95 a oe a R2 1 1 3 12 5 0 99 0 96 1 02 0 0 0 257 0 2 1 00 2 3 2 32 1 1 00 0 97 1 02 0 6 0 018 1 1 1 00 3 8 8 87 7 1 01 0 98 1 04 0 7 0 923 2 3 1 00 4 32 3 322 5 1 02 0 99 1 05 2 6 3 453 8 7 1 00 5 93 9 939 0 0 97 0 93 1 00 32 0 11 76 52 2 0 99 Interf rences Les chantillons contenant jusqu 10 mg dL de bilirubine 200 mg dL d h moglobine 1000 mg dL de triglyc rides 224 mg dL de cholest rol ou 500 Ul mL de facteur rhumato de IgM n ont produit aucune interf rence avec le QUANTA Flash MPO QUANTA Flash MPO 701131 Etalons Pour usage diagnostique n Vitro Application Les talons QUANTA Flash MPO sont destin s tre utilis s avec le test CIA immunodosage par chimiluminescence QUANTA Flash MPO sur l appareil BIO FLASH Chaque talon tablit un point de r f rence pour la courbe d talonnage servant au dosage des auto anticorps IgG anti my loperoxydase MPO dans le s rum humain R sum et principes de la proc dure Le test CIA QUANTA Flash MPO utilise une courbe ma tresse pr d finie sp cifique au lot stock e dans le code barres de la cartouche de r actifs Les talons QUANTA Flash MPO sont destin s produire une courbe d talonnage sp cifique l appareil partir des param tres
7. de la courbe ma tresse le point de d cision reposant sur les caract ristiques de performance et l valuation clinique du test CIA QUANTA Flash MPO Avant l affectation de valeurs les talons sont test s sur plusieurs appareils et avec plusieurs lots de r actifs R actifs 1 QUANTA Flash MPO Calibrators 1 Etalons Deux 2 tubes tiquet s avec des codes barres comportant un tampon contenant des anticorps anti MPO dans du s rum humain pr dilu s pr ts a l emploi 0 7 mL contenant un tampon des stabilisateurs de prot ine et des conservateurs 2 QUANTA Flash MPO Calibrators 2 Etalons Deux 2 tubes tiquet s avec des codes barres comportant un tampon contenant des anticorps anti MPO dans du s rum humain pr dilu s pr ts a l emploi 0 7 mL contenant un tampon des stabilisateurs de prot ine et des conservateurs Avertissements 1 Les talons contiennent un produit chimique cloramph nicol 0 02 connu dans l tat de Californie pour provoquer le cancer 2 L azide de sodium sert de conservateur Il s agit d un poison qui peut tre toxique en cas d ingestion ou d absorption par la peau ou les yeux Cette substance peut r agir avec les canalisations en plomb ou en cuivre pour former des azides de m tal potentiellement explosifs Apr s l vacuation des r actifs laver grande eau afin d viter des d p ts dans les canalisations et les viers 3 Toutes les substances d origine humain
8. en papier recyclable Haut QUANTA Flash est une marque d pos e d INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH est une marque d pos e de Biokit S A 2012 Fabriqu par INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Etats Unis d Am rique Service technique Etats Unis et Canada uniquement 877 829 4745 Service technique en dehors des Etats Unis 1 858 805 7950 support inovadx com Repr sentant europ en agr Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Allemagne T l 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621130FRA Septembre 2012 R vision 2
9. et de d terminer la sensibilit et la sp cificit de ces auto anticorps R cemment des tests de capture et d ancrage ont t mis au point pour d tecter les ANCA anti PR3 et anti MPO Contrairement la plupart des tests ELISA men s sur les ANCA anti PR3 et anti MPO les tests de capture et d ancrage n immobilisent pas l antig ne par absorption On pense donc qu ils affichent une meilleure performance en raison de l exposition optimale de l antig ne La pr valence des ANCA anti PR3 et anti MPO dans leurs maladies apparent es d pend du groupe de patients et de la m thodologie employ e pour les d tecter Les ANCA anti PR3 et anti MPO ont un lien avec l activit de la vascularite La plupart des experts sp cialis s dans la vascularite auto immune continuent recommander l utilisation du test par immunofluorescence aux neutrophiles humains fix s au formol et l thanol pour un premier d pistage tant donn la nature progressive rapide de la vascularite des petits vaisseaux il est tr s important de d tecter rapidement les ANCA anti PR3 et anti MPO Principes du test La MPO purifi e native est rev tue sur des billes de latex paramagn tiques stock es dans la cartouche de r actifs dans des conditions pr servant l antig ne dans son tat r actif Lorsque la cartouche est pr te tre utilis e pour la premi re fois elle est retourn e plusieurs fois afin de bien m langer les r actifs Elle est ensuite
10. formation de mousse V rifier que les microparticules sont enti rement remises en suspension Si elles ne le sont pas continuer de retourner la cartouche S il est impossible de remettre les microparticules en suspension NE PAS UTILISER LA CARTOUCHE 2 Lorsque les microparticules sont remises en suspension poser la cartouche de r actifs sur une surface solide pour retirer la languette rouge Maintenir la cartouche de r actifs en place d une main De lautre main saisir fermement la languette rouge situ e l arri re de la cartouche de r actifs et tirer pour la retirer compl tement 3 Appuyer sur les deux ailettes situ es sur les c t s du capuchon perceur partie grise et appliquer une pression sur la partie sup rieure de la cartouche de r actifs jusqu ce qu elle s enclenche en position verrouill e Les ailettes ne doivent plus tre visibles NE PAS RETOURNER LA CARTOUCHE UNE FOIS OUVERTE 4 Placer la cartouche de r actifs dans une fente ouverte du carrousel de r actifs de l appareil BIO FLASH Une fois la cartouche plac e dans le carrousel de r actifs l instrument effectue un m lange p riodique suppl mentaire des billes talonnage du test 1 Chaque nouveau lot de cartouches de r actifs doit tre talonn avant la premi re utilisation Le logiciel ne permet pas d utiliser un nouveau lot avant qu il ne soit talonn 2 Se reporter a la section intitul e QUANTA Flash MPO Calibrators 701
11. r actifs QUANTA Flash MPO contient les r actifs suivants pour 50 mesures a Billes paramagn tiques rev tues de MPO dans du tampon contenant du liquide des stabilisateurs de prot ines et un conservateur b Tampon de dosage de couleur rose contenant une solution saline tamponn e Tris du Tween 20 des stabilisateurs de prot ine et des conservateurs c IgG marqueur anticorps IgG antihumain marqu l isoluminol contenant du tampon des stabilisateurs de prot ines et un conservateur d Tampon de dilution d chantillon de couleur rose contenant une solution saline tamponn e Tris du Tween 20 des stabilisateurs de prot ine et des conservateurs Avertissements 1 Le tampon de dosage contient un produit chimique cloramph nicol a 0 02 connu dans l tat de Californie pour provoquer le cancer 2 L azide de sodium est utilis comme conservateur Il s agit d un poison qui peut tre toxique en cas d ingestion ou d absorption par la peau ou les yeux Cette substance peut r agir avec les canalisations en plomb ou en cuivre pour former des azides de m tal potentiellement explosifs Apr s l vacuation des r actifs laver a grande eau afin d viter des d p ts dans les canalisations et les viers 3 Lors de la manipulation de ces produits utiliser un quipement de protection personnelle appropri 4 Les claboussures de r actifs doivent tre nettoy es imm diatement Respecter les r gleme
12. sultats en Ul mL Limites Ces contr les sont con us pour 15 utilisations L tiquette appos e sur chaque tube de contr le poss de une rang e de 15 cases pouvant tre coch es afin de suivre le nombre d utilisations Le temps total pendant lequel les tubes de contr le peuvent rester sans capuchon bord du syst me est de 2 5 heures ou 10 minutes par utilisation Au del ils doivent tre limin s Utiliser les m mes tubes de contr le plus de 15 fois ou pendant plus de 2 5 heures au total peut produire des r sultats inexacts Bibliographie Kallenberg CG Pathogenesis of ANCA associated vasculitides Ann Rheum Dis 2011 70 Suppl 1 i59 i63 Trevisin M Pollock W Dimech W Savige J Evaluation of a multiplex flow cytometric immunoassay to detect PR3 and MPO ANCA in active and treated vasculitis and in inflammatory bowel disease IBD J Immunol Methods 2008 336 104 112 Holle JU Hellmich B Backes M Gross WL Csernok E Variations in performance characteristics of commercial enzyme immunoassay kits for detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies what is the optimal cut off Ann Rheum Dis 2005 64 1773 1779 Mahler M Radice A Yang W Bentow C Seaman A Bianchi L Sinico RA Development and performance evaluation of novel chemiluminescence assays for the detection of anti PR3 and anti MPO antibodies Clin Chim Acta 2012 413 719 26 Trevisin M Pollock W Dimech W Melny J Paspaliaris B Gillis D et al Ant
13. 131 de cette notice pour obtenir des instructions d taill es sur l talonnage de la cartouche de r actifs 3 Une fois l talonnage valid le lot de cartouches de r actifs en ayant fait l objet est pr t a l emploi Programmation et analyse des chantillons 1 Appuyer sur le bouton Worklist en haut de l cran puis s lectionner l onglet Racks en bas 2 S lectionner le portoir d chantillons utiliser en le mettant en surbrillance l cran ou en scannant son code barres avec le lecteur manuel Scanner le nom de l chantillon ou le saisir puis s lectionner le type d chantillon le type de conteneur tube cupule et s lectionner MPO dans le volet de dosages Recommencer ces tapes pour tous les chantillons 3 Charger les chantillons dans les positions s lectionn es du portoir puis charger ce dernier dans le carrousel d chantillons de l appareil 4 Si tous les mat riaux requis sont bord de l appareil l ic ne de d marrage appara t en vert en haut de l cran Appuyer sur l ic ne de Start F4 pour d buter le test Contr le de qualit Les contr les QUANTA Flash MPO vendus s par ment sous la r f rence INOVA 701132 contiennent la fois des contr les MPO positifs et n gatifs Se reporter la section intitul e QUANTA Flash Controls MPO 701132 de cette notice pour obtenir des instructions d taill es sur la saisie de la valeur d unit et de l cart type de chaque contr le dans le logicie
14. QUANTA Flash MPO 701133 Reactifs Pour usage diagnostique n Vitro Application Le QUANTA Flash MPO est un test CIA immunodosage de chimiluminescence destin a la d tection semi quantitative des auto anticorps IgG anti my loperoxydase MPO dans le s rum humain sur l appareil BIO FLASH Le QUANTA Flash MPO est une aide au diagnostic de la polyang ite microscopique PAM qui compl te les observations cliniques et d autres tests de laboratoire R sum et explication du test Le test des anticorps cytoplasmiques anti neutrophiles ANCA a r volutionn le diagnostic et le traitement des diverses vascularites auto immunes Les ANCA p rinucl aires bANCA et les ANCA cytoplasmiques cANCA ont une utilit clinique prouv e car ils facilitent le diagnotic des vascularites des petits vaisseaux telles que la granulomatose avec polyang ite GPA anciennement appel e granulomatose de Wegener WG la glom rulon phrite croissant n crosante la polyang ite microscopique MPA et le syndrome de Chrug Strauss CSS De plus les ANCA sont pr sents dans d autres maladies notamment la p riart rite noueuse le syndrome de Goodpasture et la maladie inflammatoire chronique intestinale Les deux principaux antig nes cibl s par les ANCA sont la my loperoxydase MPO et la s rine prot ase 3 PR3 Plusieurs tudes ont t men es afin d valuer la pr valence des ANCA anti PR3 et anti MPO dans diff rentes maladies
15. age et d utilisation conformes Les contr les ouverts peuvent tre utilis s jusqu 15 fois avec une dur e maximum bord de l instrument de 10 minutes par utilisation Le temps total pendant lequel les tubes de contr le peuvent rester sans capuchon bord du syst me est de 2 5 heures ou 10 minutes par utilisation Au del ils doivent tre limin s Utiliser le m me tube de contr le plus de 15 fois et ou pendant plus de 2 5 heures au total peut g n rer des r sultats erron s Pour une stabilit optimale retirer les contr les du syst me imm diatement apr s utilisation et les conserver entre 2 et 8 C rebouch s dans leur flacon d origine Proc dure Cr er de nouveaux mat riels CQ pour le test MPO 1 Avant d utiliser un nouveau lot de contr les QUANTA Flash MPO pour la premi re fois le nom le lot la date de p remption la valeur ou dose et les informations sur l cart type cible doivent tre entr s dans le logiciel l cran Instrument Summary cliquer sur le bouton fl ch Choose more options Ctrl M V S lectionner QC Ctrl F2 Cliquer sur le bouton New QC Material Une fiche de donn es sp cifique au lot est jointe chaque kit de contr le Introduire d abord dans le logiciel le nom le num ro de lot et la date de p remption figurant sur la fiche Cliquer sur le bouton Add Assay A l cran suivant v rifier que la case Show All Assays est coch e S lectionner le test MPO dans la
16. convertir les unit s CU en Ul mL Lorsque les unit s Ul mL sont choisies le logiciel BIO FLASH utilise ce facteur de conversion pour notifier les r sultats en Ul mL Limites Ces talons sont con us pour 4 talonnages Le temps total pendant lequel les tubes d talons peuvent rester sans capuchon bord du syst me ne doit pas d passer 8 heures Au del ils doivent tre limin s L utilisation des m mes tubes d talons pour plus de 4 talonnages et ou pendant plus de 8 heures peut entra ner un talonnage inadapt du test qui peut son tour g n rer des r sultats erron s QUANTA Flash MPO 701132 Contr les Pour usage diagnostique n Vitro Application Les contr les QUANTA Flash MPO sont utilis s des fins de contr le de qualit du kit CIA immunodosage de chimiluminescence QUANTA Flash MPO sur l appareil BIO FLASH servant au dosage des auto anticorps IgG anti my loperoxydase MPO dans le s rum humain Resume et principes de la procedure Les contr les QUANTA Flash MPO se composent d un contr le n gatif et d un contr le positif Chacun contient une quantit diff rente d anticorps anti MPO Le contr le n gatif est con u pour valuer la pr cision et l exactitude du test des niveaux d anticorps tr s bas Le contr le positif est con u pour valuer la pr cision et l exactitude du test des niveaux d anticorps mod r s lev s R actifs 1 QUANTA Flash MPO Negative Cont
17. e utilis es pour pr parer les contr les de ce produit ont t test es et se sont av r es n gatives aux anticorps anti VIH HBsAg et VHC par des m thodes approuv es par la FDA Aucune m thode de test ne peut toutefois garantir que le VIH le VHB et le VHC ou d autres agents infectieux sont absents Les talons QUANTA Flash MPO doivent donc tre manipul s de la m me mani re que les substances potentiellement infectieuses 4 Utiliser un quipement de protection personnelle appropri pour travailler avec les r actifs fournis 5 Les claboussures de r actifs doivent tre nettoy es imm diatement Respecter les r glements en vigueur concernant l limination des d chets Precautions Ce produit est pour un usage diagnostique n Vitro Les talons QUANTA Flash MPO sont con us pour tre utilis s avec le test QUANTA Flash MPO Ne pas transf rer les r actifs d talons dans des tubes secondaires L appareil utilise les codes barres appos s sur les tubes pour mettre en correspondance les talons avec le type de test appropri Lorsqu un tube d talon est ouvert il est utilisable jusqu 8 heures ou 4 talonnages Le r actif doit ensuite tre limin La contamination des r actifs par produit chimique peut tre due un nettoyage ou un rin age inadapt de l appareil Les r sidus de produits chimiques courants en laboratoire tels que le formol l eau de Javel l thanol ou le d tergent provoquent de
18. est consid r comme positif Le logiciel BIO FLASH poss de une option de r ex cution automatique Lorsqu elle est s lectionn e l appareil reteste automatiquement les chantillons dont le r sultat est sup rieur 739 8 CU en les diluant de nouveau par un facteur de 20 puis calcule l unit CU r elle l aide de ce facteur de dilution suppl mentaire Interpr tation des r sultats Le test QUANTA Flash peut d tecter de petites diff rences dans des groupes de patients Chaque laboratoire doit tablir sa propre plage normale selon ses contr les et son groupe de patient mais aussi en fonction des proc dures qu il a tablies Il est sugg r d inclure aux r sultats rapport s par le laboratoire Les r sultats suivants ont t obtenus avec un test CIA INOVA QUANTA Flash MPO Les valeurs obtenues avec des m thodes de test de fabricants diff rents ne peuvent tre utilis es de fa on interchangeable L importance des taux rapport s ne peut pas tre corr l e un titrage limite Limites du test 1 Certains patients souffrant d une polyang ite microscopique sont n gatifs aux anticorps anti MPO 2 Les r sultats de ce test doivent tre utilis s conjointement aux r sultats cliniques et a d autres examens s rologiques 3 Un m lange inappropri des r actifs avant la premi re utilisation peut produire des r sultats inexacts 4 Les caract ristiques de performances de ce test n ont pas t tablies po
19. igen specific ANCA ELISAs have different sensitivities for active and treated vasculitis and for nonvasculitic disease Am J Clin Pathol 2008 129 42 53 Xu PC Chen M Cui Z Zhao MH Influence of myeloperoxidase by anti myeloperoxidase antibodies and its association with the disease activity in microscopic polyangiitis Rheumatology Oxford 2010 49 2068 2075 Westman KW Bygren PG Eilert Wiik A Wieslander J Rapid screening assay for anti GBM antibody and ANCAs an important tool for the differential diagnosis of pulmonary renal syndromes Nephrol Dial Transplant 1997 12 1863 1868 Aslam A Newman TL Misbah SA Audit of the clinical usefulness of a rapid qualitative ELISA screen for antimyeloperoxidase and antiproteinase 3 antibodies in the assessment of patients with suspected vasculitis J Clin Patho 2003 56 775 777 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 2007 Fifth Edition ep lt 3 o D o c D D o lt o Oaa O el ONTR ONTR FEE SEEN a Dispositif m dical de diagnostic n Vitro Consulter le mode d emploi Limite de temp rature Ne pas r utiliser Risques biologiques Code du lot R f rence catalogue Date de p remption Fabricant Repr sentant autoris Contenu suffisant pour lt n gt tests Contr le positif Contr le n gatif talon 1 talon 2 Carton
20. ir compte des exigences r glementaires en vigueur Chaque contr le doit tre m lang d licatement avant utilisation pour garantir son homog n it viter la formation de mousse car les bulles peuvent interf rer avec la d tection du niveau de liquide des appareils Retirer le capuchon de chaque tube de contr le et placer ce dernier dans un portoir d chantillons les codes barres pointant travers les espaces du portoir Placer le portoir d chantillons dans le carrousel de l appareil BIO FLASH et fermer la porte L appareil lit les codes barres sur les tubes de contr les puis identifie la cartouche de r actifs utiliser Consulter le manuel de l utilisateur joint au syst me BIO FLASH pour obtenir des instructions d taill es sur le fonctionnement de l analyseur de chimiluminescence BIO FLASH et le logiciel BIO FLASH Tra abilit Actuellement il n existe aucune norme internationale reconnue concernant la mesure des anticorps IgG anti MPO Le s rum de r f rence international 182720 n 15 ANCA anti MPO du CDC Center of Disease Control and Prevention a toutefois t test et une concentration de 331 6 CU a t d termin e Un test de lin arit a galement t effectu une valeur R de 1 0 a t obtenue Un facteur de conversion de 0 3 peut tre employ pour convertir les unit s CU en Ul mL Lorsque les unit s Ul mL sont choisies le logiciel BIO FLASH utilise ce facteur de conversion pour notifier les r
21. l ainsi que sur l analyse des contr les Il est recommand d analyser les contr les une fois par jour o le dosage est utilis Les utilisateurs doivent toutefois tenir compte des exigences r glementaires en vigueur Calcul des r sultats Une courbe ma tresse six points est g n r e par INOVA pour chaque lot de QUANTA Flash MPO Cette courbe logistique quatre param tres est cod e dans le code barres de chaque cartouche de r actifs D s que la cartouche de r actifs a t talonn e une courbe d talonnage sp cifique l appareil est utilis e pour convertir les unit s RLU en unit s CU La r activit des anticorps anti MPO peut ensuite tre class e selon le tableau ci dessous R activit CU N gatif lt 20 Positif 20 La r activit en unit s CU est directement li e au titre de l auto anticorps pr sent dans l chantillon patient Les augmentations et diminutions de concentrations d anticorps patients sont refl t es par les hausses et chutes correspondantes en unit s CU qui sont proportionnelles la quantit d anticorps La plage de conformit du test s tend de 3 2 CU 739 8 CU Si le r sultat d un patient est inf rieur 3 2 CU le syst me BIO FLASH indique lt 3 2 CU Dans la mesure o cette valeur est inf rieure 20 CU elle est consid r e comme n gative Si le r sultat d un patient est sup rieur 739 8 CU le syst me BIO FLASH indique gt 739 8 CU Ce r sultat
22. liste puis cliquer sur Add Pour finir introduire la dose cible et l cart type cible Cliquer sur Save Effectuer cette proc dure pour les deux contr les Cr er un nouveau lot de mat riels QC existants 1 Avant d utiliser un nouveau lot de contr les QUANTA Flash MPO pour la premi re fois le lot la date de p remption la valeur ou dose et les informations sur l cart type cible doivent tre entr s dans le logiciel l cran Instrument Summary cliquer sur le bouton fl ch Choose more options Ctrl M V S lectionner QC Ctrl F2 Mettre le test MPO en surbrillance dans la colonne de gauche Ensuite mettre le mat riau de contr le appropri en surbrillance droite MPON pour le contr le n gatif ou MPOP pour le contr le positif Cliquer sur le bouton New QC Lot 3 Une fiche de donn es sp cifique au lot est jointe chaque kit de contr le Entrer les informations de cette fiche de donn es dans le logiciel Elles doivent inclure le num ro de lot la date de p remption la dose cible et l cart type cible Si n cessaire cliquer sur le bouton Add Assay l cran suivant v rifier que la case Show All Assays est coch e S lectionner le test MPO dans la liste puis cliquer sur Add Cliquer sur Save Effectuer cette proc dure pour les deux contr les Il est recommand d utiliser les contr les QUANTA Flash MPO une fois par jour o le test est utilis L utilisateur doit toutefois ten
23. llons Les chantillons ayant subi une contamination microbienne et thermo trait s ou contenant des particules visibles ne doivent pas tre utilis s Les s rums ou chantillons h molys s ou ict riques sont viter Apr s pr l vement le s rum doit tre s par du caillot Le document H18 A4 du CLSI recommande de conserver les chantillons dans les conditions suivantes 1 Conserver les chantillons temp rature ambiante pendant 8 heures maximum 2 Si le test n est pas r alis dans les 8 heures r frig rer l chantillon entre 2 et 8 C 3 Si le test n est pas r alis dans les 48 heures ou si l chantillon doit tre transport le congeler 20 C ou moins Les chantillons congel s doivent tre bien m lang s apr s d cong lation et avant le test Proc dure Mat riels fournis 1 Cartouche de r actifs QUANTA Flash MPO Mat riels suppl mentaires requis mais non fournis Appareil BIO FLASH avec ordinateur Rin age du syst me BIO FLASH r f 3000 8205 D clencheurs BIO FLASH r f 3000 8204 Cuvettes BIO FLASH r f 3000 8206 talons QUANTA Flash MPO r f 701131 Contr les QUANTA Flash MPO r f 701132 Utilisation de l analyseur de chimiluminescence BIO FLASH 1 Consulter le manuel de l utilisateur joint au syst me BIO FLASH pour obtenir des instructions d taill es sur le fonctionnement de l analyseur de chimiluminescence BIO FLASH et le logiciel BIO FLASH Pour t
24. n en triple Une fois les talons analys s le logiciel doit valider l talonnage l cran Instrument Summary cliquer sur le bouton fl ch Choose more options Ctrl M V S lectionner Calibrations Ctrl F3 Dans la fen tre Etalonnage mettre le test souhait en surbrillance puis cliquer sur Details Dans la nouvelle fen tre Calibration Details s lectionner l talonnage qui vient d tre effectu La courbe maitresse appara t en lignes pointill es alors que la courbe d talonnage est repr sent e par une ligne pleine Si les r sultats de l talonnage sont valides un bouton de validation appara t dans l angle inf rieur gauche de l cran Cliquer sur le bouton Validate Calibration Une fois l talonnage valid le lot de cartouches de r actifs en ayant fait l objet est pr t l emploi Il est recommand de tester les contr les QUANTA Flash MPO vendus s par ment sous la r f rence 701132 apr s avoir talonn un lot de cartouches de r actifs Tra abilit Actuellement il n existe aucune norme internationale reconnue concernant la mesure des anticorps IgG anti MPO Le s rum de r f rence international 182720 n 15 ANCA anti MPO du CDC Center of Disease Control and Prevention a toutefois t test et une concentration de 331 6 CU a t d termin e Un test de lin arit a galement t effectu une valeur R de 1 0 a t obtenue Un facteur de conversion de 0 3 peut tre employ pour
25. nts en vigueur concernant l limination des d chets Precautions 1 Ce produit est pour un usage diagnostique n Vitro Ce test doit uniquement tre utilis dans l appareil BIO FLASH Une fois ouverte cette cartouche de r actifs doit tre conserv e dans le carrousel de r actifs de l appareil Veiller viter les claboussures de r actifs la premi re fois que la cartouche de r actifs est plac e dans l appareil 4 La contamination des r actifs par produit chimique peut tre due un nettoyage ou un rin age inadapt de l appareil Les r sidus de produits chimiques courants en laboratoire tels que le formol l eau de Javel l thanol ou le d tergent provoquent des interf rences avec le test Veiller suivre la proc dure de nettoyage de l appareil recommand e dans le manuel de l utilisateur de BIO FLASH Conditions de conservation 1 Conserver les cartouches de r actifs non ouvertes entre 2 et 8 C Ne pas congeler Les r actifs sont stables jusqu a la date de p remption dans des conditions de stockage et d utilisation conformes 2 Les cartouches de r actifs ouvertes doivent tre conserv es a bord de l appareil et sont stables pendant 84 jours au total apr s quoi elles doivent tre limin es Le logiciel BIO FLASH surveille les dates de p remption des cartouches bord et des lots de cartouches de r actifs Pr l vement des chantillons Ce test doit tre r alis avec des s rums comme chanti
26. oute information compl mentaire et pour r soudre les probl mes li s a ce test contacter le service technique d INOVA Diagnostics Inc a l adresse ou au num ro de t l phone indiqu s la fin de cette notice Pour vider le conteneur de d chets solides ouvrir le tiroir de d chets Retirer le conteneur de d chets solides et jeter les cuvettes usag es Remettre le conteneur de d chets solides en place fermer le tiroir de d chets puis cliquer sur Yes dans la fen tre Empty Waste Drawer Pour remplacer les d clencheurs cliquer sur le bouton F9 Bulks Inventory en haut a droite a l cran Inventory Bulks cliquer sur le bouton Triggers gauche Une nouvelle fen tre intitul e Add Triggers Remove old bottles appara t b Ouvrir le tiroir de d chets et le retirer de l appareil BIO FLASH Eliminer les cuvettes ventuellement pr sentes dans le tiroir de d chets solides Cliquer sur Yes dans la fen tre Empty Waste Drawer Retirer les flacons de d clencheur de leur support et cliquer sur le bouton Next D visser les anciens flacons de d clencheurs de leur capuchon et les remplacer par de nouveaux Veiller a proc der un flacon a la fois et a faire correspondre les couleurs des capuchons blanc avec blanc et rouge avec rouge c Suivre les instructions de la nouvelle fen tre Add Triggers Add Trigger 2 bottle Une fois le code barres accept placer le D clencheur 2 sur le support blanc Cliquer sur Next d
27. rols Contr les n gatifs Deux 2 tubes tiquet s avec des codes barres comportant un tampon contenant des anticorps anti MPO dans du s rum humain pr ts a l emploi 0 5 mL contenant un tampon des stabilisateurs de prot ine et des conservateurs QUANTA Flash MPO Positive Controls Contr les positifs Deux 2 tubes tiquet s avec des codes barres comportant un tampon contenant des anticorps anti MPO dans du s rum humain pr ts a l emploi 0 5 mL contenant un tampon des stabilisateurs de prot ine et des conservateurs Avertissements 1 Les contr les contiennent un produit chimique cloramph nicol 0 02 connu dans l tat de Californie pour provoquer le cancer L azide de sodium sert de conservateur Il s agit d un poison qui peut tre toxique en cas d ingestion ou d absorption par la peau ou les yeux Cette substance peut r agir avec les canalisations en plomb ou en cuivre pour former des azides de m tal potentiellement explosifs Apr s l vacuation des r actifs laver grande eau afin d viter des d p ts dans les canalisations et les viers Toutes les substances d origine humaine utilis es pour pr parer les contr les de ce produit ont t test es et se sont av r es n gatives aux anticorps anti VIH HBsAg et VHC par des m thodes approuv es par la FDA Aucune m thode de test ne peut toutefois garantir que le VIH le VHB et le VHC ou d autres agents infectieux sont absents Les contr les
28. s interf rences avec le test Veiller suivre la proc dure de nettoyage de l appareil recommand e dans le manuel de l utilisateur de BIO FLASH Conditions de conservation 1 2 Conserver les talons non ouverts entre 2 et 8 C Ne pas congeler Les r actifs sont stables jusqu la date de p remption dans des conditions de stockage et d utilisation conformes Les talons ouverts doivent tre limin s apr s 8 heures Proc dure 1 Chaque nouveau lot de cartouches de r actifs doit tre talonn avant la premi re utilisation Le logiciel ne permet pas d utiliser un nouveau lot avant qu il ne soit talonn Chaque talon doit tre m lang d licatement avant utilisation pour garantir son homog n it Eviter la formation de mousse car les bulles peuvent interf rer avec la d tection du niveau de liquide des appareils Retirer le capuchon de chaque tube d talon et placer ce dernier dans un portoir d chantillons les codes barres pointant travers les espaces du portoir Placer le portoir d chantillons dans le carrousel de l appareil BIO FLASH et fermer la porte L appareil lit les codes barres sur les tubes d talons puis identifie la cartouche de r actifs utiliser Consulter le manuel de l utilisateur joint au syst me BIO FLASH pour obtenir des instructions d taill es sur le fonctionnement de l analyseur de chimiluminescence BIO FLASH et le logiciel BIO FLASH L appareil analyse chaque talo
29. ur d autres matrices que le s rum Valeurs attendues Pour d terminer les valeurs attendues le s rum de 400 donneurs apparemment sains a t analys La moyenne tait inf rieure 3 2 CU et l IC 95 tait inf rieur 3 2 CU Il est recommand que chaque laboratoire tablisse ses propres plages de r f rence sp cifiques de la population tudi e Tra abilit Actuellement il n existe aucune norme internationale reconnue concernant la mesure des anticorps IgG anti MPO Le s rum de r f rence international IS2720 n 15 ANCA anti MPO du CDC Center of Disease Control and Prevention a toutefois t test et une concentration de 331 6 CU a t d termin e Un test de lin arit a galement t effectu une valeur R de 1 0 a t obtenue Un facteur de conversion de 0 3 peut tre employ pour convertir les unit s CU en Ul mL Lorsque les unit s Ul mL sont choisies le logiciel BIO FLASH utilise ce facteur de conversion pour notifier les r sultats en Ul mL Comparaison des methodes avec dispositif de prediction Les chantillons utilis s pour l analyse de comparaison des m thodes comp Ces chantillons ont t test s avec le test QUANTA Flash MPO et le test ELISA de pr diction M thode de ELISA MPO Pourcentage de concordance comparaison N 178 Positif N gatif confiance a 95 Positif Concordance pos 100 93 2 100 2 CIA QUANTA Flash MPO N gatif Concordance n g
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