RIA-gnost T4
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1. RIA gnost T4 Cisbio Bioassays Mai 2012 Mod le 13 Trousse pour la d termination radioimmunologique de la L thyroxine T4 Contenu de la trousse 1 flacon de solution de traceur I T4 lt 150 kBq liquide 105 mi de tampon azoture de sodium et un colorant jaune 2x50 tubes rev tus d anticorps de mouton anti T4 6 flacons de standards de T4 liquides contenant chacun 0 5 ml de s rum humain et de l azoture de sodium concentration allant de 0 360 ng ml T4 1 flacon de s rum de contr le de T4 liquide contenant 0 5 ml de s rum humain et de l azoture de sodium concentration indiqu e sur l tiquette 1 sachet plastique 1 mode d emploi Certains r actifs contiennent de l azoture de sodium comme conservateur Eviter toute absorption des r actifs ainsi que tout contact avec la peau ou les muqueuses L azoture de sodium peut r agir avec les canalisations de plomb et de cuivre pour former des azotures de m taux fortement explosifs Les diluer abondamment lors de l vacuation des d chets 1 Introduction La thyroxine T4 acide amin renfermant de l iode et labor uniquement dans la thyro de est une hormone dont la concentration s rique est contr l e par un m canisme de r tro contr le n gatif par l interm diaire de la thyrotrophine TSH La glande thyro de produit chez les sujets sains environ 80 ug de thyroxine par jour dont plus de 99 9 sont li s aux prot ines plasmatiques2. nome de la thyro de de goitre et titre de contr le dans le traitement comportant une substitution par la thyroxine Certains facteurs cliniques ou m taboliques influent sur les taux de T4 ils seront tudi s ci apr s Une hypo ou une hyperthyro die peuvent donc parfois se recouper avec la plage euthyro dienne si bien que certains patients sont euthyro diens malgr des taux de T4 augment s ou diminu s Ces patients pr sentent en g n ral des taux de TBG modifi s Des taux accrus de T4 en cas de m tabolisme euthyro dien sont dus en partie une l vation de la TBG pendant la grossesse et chez les femmes sous traitement par des oestrog nes gestag nes contraceptifs par exemple On a enregistr des taux diminu s de T4 en pr sence d un m tabolisme euthyro dien par suite d une TBG r duite en cas de n phrose ou sous un traitement par des androg nes Les h patopathies ainsi que les anomalies de TBG h r ditaires exercent une influence variable sur le taux de T4 tant donn qu elles peuvent entra ner une production de TBG aussi bien accrue que diminu e Le taux de T4 peut malgr un m tabolisme euthyro dien tre diminu par des m dicaments qui lib rent la T4 de la TBG tels les salicylates ou qui acc l rent le m tabolisme de la T4 tels les barbituriques et l hydanto ne En outre il peut se former apr s une thyro dite ou un cancer de la thyro de des anticorps liant la T4 qui influent sur le dosage de cett
3. s sur du papier absorbant et les laisser ainsi pendant 2 5 minutes Eliminer les restes de liquide pouvant adh rer au bord du tube en tapant bri vement les tubes On peut galement op rer par aspiration 4 6 Mesure de la radioactivit Mesurer la radioactivit se trouvant sur les tubes pendant 0 5 1 minute l aide d un compteur gamma 4 7 Lecture des r sultats Apr s avoir mesur la radioactivit exprim e en coups par minute cpm de tous les standards So S5 porter les r sultats obtenus sur une feuille de papier millim tr pr par e cet effet en fonction de la concentration de T4 correspondante cf exemple d une courbe d talonnage Construire la courbe talon en reliant les points Etablir la moyenne des valeurs cpm obtenues pour le s rum d un patient puis lire la concentration de T4 partir de la courbe d talonnage Si l on pr f re exploiter les r sultats l aide de la liaison en B T tablir l activit totale T et diviser les nombres de cpm mesur s par la valeur T RIA gnost T4 Cisbio Bioassays Mai 2012 Mod le 13 Tableau 1 protocole de dosage de la T4 chaque fois en double Standards S rum de Echantillons ul contr le ul ul N des tubes So S S2 S3 S4 S5 C 1 2 Etc Standards So 20 20 S 20 20 S2 20 20 S3 20 20 S4 20 20 S5 20 20 S rum de contr le C 20 20 Echantillon
4. 1 20 20 Echantillon 2 etc 20 20 Etc Traceur lt lt ml gt Agiter 2 heures 5 minutes temp rature ambiante D canter ou aspirer le surnageant Compter Exemple d une courbe d talonnage Groupe de cpm B T B Bo Concentration tubes moyens x 100 x 100 ng ml T 65669 Standard 0 47741 72 7 100 0 e Standard 1 30315 63 5 21 4 F Standard 2 22338 46 7 46 0 j Standard 3 16184 33 9 87 0 Standard 4 10168 21 3 187 0 Standard 5 5872 12 0 390 0 i T DERSE DEBERET A Contr le 17807 37 3 75 0 TARAR 5 R gles de base de radioprotection Ce produit radioactif ne peut tre re u achet d tenu ou utilis que par des personnes autoris es cette fin et dans des laboratoires couverts par cette autorisation Cette solution ne peut en aucun cas tre administr e ni l homme ni aux animaux L achat la d tention l utilisation et l change de produits radioactifs sont soumis aux r glementations en vigueur dans le pays de l utilisateur L application des r gles de base de radioprotection assure une s curit ad quate Un aper u en est donn ci dessous Les produits radioactifs seront stock s dans leur conteneur d origine dans un local appropri Un cahier de r ception et de stockage de produits radioactifs sera tenu jour La manipulation de produits radioactifs se fera dans un local appropri dont l acc s doit tre r glement zone contr l e Ne
5. pas manger ni boire ni fumer ni appliquer des cosm tiques en zone contr l e Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche Eviter le contact direct avec tout produit radioactif en utilisant des blouses et des gants de protection Le mat riel de laboratoire et la verrerie qui ont t contamin s doivent tre limin s au fur et mesure afin d viter une contamination crois e de plusieurs isotopes Chaque cas de contamination ou perte de substance radioactive devra tre r solu selon les proc dures tablies Toute limination de d chets radioactifs se fera conform ment aux r glementations en vigueur
6. 26 9 14 3 2 115 4 4 5 5 84 1 5 1 3 299 4 0 6 181 4 4 6 RIA gnost T4 Cisbio Bioassays Mai 2012 Mod le 13 2 4 Limite de d tection La limite de d tection est d finie comme tant la plus petite concentration d tectable diff rente de 0 avec une probabilit de 95 Elle a t valu e 2 5 ng ml 3 2 nmol l 3 Principe du dosage et caract ristique du RIA gnost T4 Le RIA gnost T4 permet de doser in vitro la thyroxine totale T4 dans le s rum humain selon le principe de l analyse comp titive par saturation Sous l action de l acide 8 anilino 1 sulfonique la T4 qui doit tre mesur e est lib r e des prot ines de liaison et elle entre en comp tition avec la 125174 pour atteindre les sites de fixation d un nombre limit d un anticorps anti T4 sp cifique La quantit de T4 radioactive li e est donc inversement proportionnelle la concentration de T4 de l chantillon ou de l talon Un composant essentiel de la trousse RIA gnost T4 est repr sent par les tubes rev tus d anticorps L chantillon c est dire le standard le s rum de contr le ou le s rum de patient sera introduit avec le traceur dans le tube puis incub L anticorps tant immobilis sur la paroi interne de la partie inf rieure du tube la fraction libre du traceur peut tre facilement s par e par d cantation de la fraction li e l anticorps En mesurant la radioac
7. dans le sang La prot ine v hicule proprement dite est la globuline liant la thyroxine TBG la pr albumine TPBA et l albumine TBA jouant un r le moins important dans les conditions normales Le temps de demi vie de la T4 s l ve environ 8 jours La T4 est consid r e comme tant le pr curseur ou la forme de stockage de la triiodothyronine T3 laquelle est environ 4 fois plus active par mole mais 10 fois plus rapidement m tabolis e La T3 est labor e en majeure partie la p riph rie partir de la T4 par l action de monod siodases mais elle est s cr t e galement en faible quantit par la thyro de La principale action pharmacologique de la T4 libre non li e la globuline de transport TBG et de la T3 est la stimulation du m tabolisme Tous les organes peuvent tre perturb s lorsque les valeurs s cartent de la norme Le d veloppement intellectuel et physique de l enfant est ralenti lorsque les valeurs sont trop basses Ce processus est d des troubles de la diff renciation cellulaire et de la croissance 2 R sultats cliniques et caract ristiques sp cifiques obtenus avec le RIA gnost T4 2 1 Importance clinique du dosage de la T4 L importance du dosage de la T4 r side dans le diagnostic diff rentiel permettant de distinguer la dystonie v g tative de l hyperthyro die Il est donc indiqu en cas de soup on aussi bien d hypothyro die que d hyperthyro die maladie de Basedow et ad
8. e derni re Il faut donc appr cier le dosage de la T4 en relation avec les donn es cliniques et d autres param tres d analyses de laboratoire Ainsi est il judicieux de d terminer la capacit des prot ines de fixation ou la concentration de TBG par exemple avec le RIA gnost TBG pour claircir des r sultats impr cis On diff rencie une hypothyro die primitive d une hypothyro die secondaire ou tertiaire par le dosage de la TSH s rique par exemple avec RIA gnost TSH avant ainsi que 20 30 minutes apr s stimulation par la TRH L hyperthyro die isol e due la T3 ne peut tre tablie qu au moyen du dosage de la T3 par exemple avec le RIA gnost T3 2 2 Valeurs attendues La plage normale de la concentration s rique de la T4 a t tablie chez l homme et la femme au cours de l essai clinique du RIA gnost T4 Hyperthyro diens gt 110 ng ml gt 142 nmol l Euthyro diens 45 110 ng m 58 142 nmol l Hypothyro diens lt 45 ng ml lt 58 nmol l Il est recommand chaque utilisateur de la trousse d tablir ses propres normes en raison d ventuelles variations r gionales ou des conditions op ratoires du laboratoire 2 3 Impr cision Elle a t valu e l aide de 3 chantillons dos s 24 fois dans la m me s rie et dans 36 s ries diff rentes Intra essai Inter essai Echantillons Moyenne ng ml CV Echantillons Moyenne ng ml CV 1 56 9 5 6 4
9. s au maximum entre 2 et 8 Il convient de le congeler 20 si on d sire le conserver plus lon gtemps Agiter soigneusement les chantillons apr s d cong lation 4 4 Mises en garde et pr cautions d emploi Les mati res premi res d origine humaine contenues dans les r actifs de cette trousse ont t test es avec des trousses agr es et trouv es n gatives en ce qui concerne les anticorps anti HIV 1 anti HIV 2 anti HCV et l antig ne HBs Cependant aucune m thode d analyse ne permet ce jour de garantir totalement qu une mati re premi re d origine humaine soit incapable de transmettre l h patite le virus HIV ou toute autre infection virale Aussi faut il consid rer toute mati re premi re d origine humaine y compris les chantillons doser comme potentiellement infectieuse 4 5 Protocole de dosage 1 Marquer les tubes rev tus d anticorps comme indiqu dans le tableau 1 standards et chantillons en double 2 Distribuer 20 ul de standard ou de s rum de patient au fond de chaque tube 3 Ajouter 1 ml de traceur Les op rations 2 et 3 peuvent tre effectu es en une seule phase au moyen d un syst me distributeur diluteur par aspiration de 20 ul d chantillon ou de standard et distribution de 1 ml de traceur 4 Agiter les tubes sur un agitateur horizontal pendant 2 heures 5 minutes temp rature ambiante 5 Retirer ensuite la solution par d cantation puis poser les tubes retourn
10. tivit de la I T4 li e l anticorps on peut par cons quent lire la concentration s rique de T4 partir d une courbe d talonnage tablie dans les m mes conditions Les standards fournis pr par s partir de s rum humain exempt de T4 et d adjonctions de T4 ainsi que le s rum de contr le et la T4 marqu e l iode 125 sont livr s sous forme liquide 4 Mode d emploi 4 1 Mat riel n cessaire Micropipettes avec embout plastique interchangeable de 20 ul et de 1 ml ou distributeur de 1 ml ou diluteur distributeur appropri agitateur 150 400 tr min compteur gamma r gl pour la mesure de l iode 125 4 2 Pr paration des r actifs Conserv s entre 2 et 8 les r actifs sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Porter temp rature ambiante 18 25 les compos ants de la trousse Les r actifs portant le m me num ro de lot peuvent tre rassembl s Il convient de conserver les r actifs non utilis s entre 2 et 8 Les tubes rev tus d anticorps sortis de leur emballage et non utilis s doivent tre stock s dans le sachet plastique fourni dans la trousse 4 3 Pr paration des chantillons Apr s le pr l vement sanguin pr parer le s rum ou le plasma de la fa on habituelle Les tubes essai silicon s pouvant perturber l essai il est d conseill d employer de tels tubes Utiliser le s rum ou le plasma rapidement pour le test ou le conserver pendant 3 jour
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