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1. Fer color AA M todo colorim trico direto para a determina o de fer ro em soro ou plasma SIGNIFICADO CL NICO O ferro encontra se distribu do no organismo em diferentes formas que incluem hemoglobina ferro tissular e mioglobina O transporte de ferro de um rg o a outro realiza se mediante uma prote na transportadora a apotransferrina O complexo formado com o ferro conhecido como transfer rina A ferritina localizada em quase todas as c lulas do corpo constitui uma reserva de ferro dispon vel para a forma o da hemoglobina e outras prote nas que cont m o grupo hemo A absor o de ferro realizada principalmente no duodeno Tanto a ferritina como a transferrina encontram se nas c lu las da mucosa intestinal e ambas regulam a absor o de ferro Os mais grandes desordens do metabolismo de ferro relacio nam se com a defici ncia ou excesso No entanto obser vam se altera es em muitas outras doen as como anemia doen as cardiovasculares hepatite cr nica doen as renais e infec es A anemia por perda de ferro representa um dos transtornos org nicos mais frequentes principalmente em crian as mu lheres jovens gr vidas e idosos Tamb m constituem causas de anemia ferrop nica as lceras g stricas ou duodenais e carcinoma de est mago Por outra parte o excesso de ferro associa se com outros desordens como hemosiderose hemocromatose e anemia siderobl stica FUNDAMENTO DO M TODO2. O ferro s rico libera se de sua liga o com sua prote na trans portadora espec fica a transferrina tamp o acetato de pH 4 5 e em presen a de um redutor o cido asc rbico Depois reage com o reagente de cor piridil bis fenil triazina sulfonato ferrozina obtendo se um produto de cor magenta que se mede a 560 nm REAGENTES FORNECIDOS Reagente de Cor solu o estabilizada de ferrozina S Padr o solu o de i nes Fe III equivalem a 100 ug dl Tamp o solu o de acetato 150 mmol para pH 4 5 conten do guanidina Redutor cido absc rbico Concentra es finais Va eI Ee O DEE E caserna 150 mmol l pH 4 5 FOrOZINA scsarisaeis emas a micro e nuas R 0 2 mmol l cido absc rbico s 0 03 mol l Guanidihaa Desa ptiss Ao fia ash Ss LABELO ASS RA 4 0 mol l N o fornecido em todas as apresentac es REAGENTE N O FORNECIDO Calibrador A plus fornecido separadamente pela Wiener lab quando seja utilizada a t cnica autom tica gua destilada INSTRU ES DE USO Reagente de Cor pronto para uso Padr o pronto para uso Tamp o Redutor transferir ao frasco de Redutor a quantida de de Tamp o indicada no r tulo Colocar a data de preparo PRECAU ES Os reagentes s o para uso diagn stico in vitro ESTABILIDADE E INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO Reagentes Fornecidos s o est veis a temperatura ambien te lt 25 C at a data do vencimento indicada na emba
3. 5x 20 ml 100 ml Tamp o C d 1492003 5x20 ml 5 x 20 ml Tamp o C d 1009324 REFER NCIAS Dixon K Ann Clin Biochem 10 5 127 1973 1 C S H Am J Clin Path 56 4 543 1971 Zak B Baginski E S Epstein E y Wiener L M Clin Toxicol 4 4 621 1971 Rojk n M L Olgu n de Mariani M C Drappo G A y Albarrac n A III Congreso Argentino de Bioqu mica Buenos Aires 1975 Young D S Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests AACC Press 4 ed 2001 O Wiener lab 2000 Rosario Argentina 864109001 02 P g 6 de 6 URO70813
4. QUALIDADE Standatrol S E 2 niveles VALORES TE RICOS Homens 65 a 175 ug dl 11 6 31 3 umol l Mulheres 50 a 170 ug dl 9 30 4 umol l VALORES DE REFER NCIA Em um grupo de 20 mulheres e 20 homens sadios com ida des entre os 18 e 51 anos foram encontradas faixas de 55 a 175 ug dl com as seguintes m dias Homens 114 6 ug dl 20 5 umol l Mulheres 103 3 ug dl 18 5 umol l Valores de refer ncia extra dos de arquivos da Wiener lab E recomend vel que cada laborat rio estabele a seus pr pri os valores de refer ncia LIMITA ES DO PROCEDIMENTO Valores de Branco aceit vel a determina o de oligoele mentos comprometem as poss veis contamina es de gua e os reagentes O Branco de Reagente realizado segun do o Manual de Instru es n o deve superar 0 150 D O devendo ser ainda desprez vel a contribui o de gua no Branco Para poder ser controlado recomenda se o uso de gua de qualidade comprovada condutibilidade menor a 0 02 uOhms Limpeza do material todo o material do laborat rio utilizado deve estar livre de ferro submergindo o durante 6 horas em HCl p a 10 15 eliminando a acidez com v rios lavados com gua livre de ferro Enxugar o material perfeitamente temperatura n o superior a 80 C em cesto de a o inoxid vel ou recoberto com pl stico Todo o material deve ser uti lizado s para a determina o de ferro PERFORMANCE a Reprodutibilidade processando duplicatas
5. das mesmas amostras no mesmo dia foram obtidos os seguintes dados N vel D P C V 146 5 ug dl 1 93 ug dl 1 32 324 6 ug dl 1 76 ug dl 0 54 Processando a mesma amostra em diferentes dias obteve se o seguinte N vel D S N 142 8 ug dl 2 50 ug dl 1 75 314 0 ug dl 3 93 ug dl 1 25 b Recupera o adicionar quantidades conhecidas de Fe II a al quotas de um mesmo soro recuperou se entre 90 e 103 c Linearidade a rea o linear at 1000 ug dl PAR METROS PARA ANALISADORES AUTOM TICOS Comprimento de onda snnm 560 nm Tipo deirea o ranc nananana ponto final Dire o de rea o Crescente Volume de amostra s is sisseesersmeceeess 30 ul Volume de Tamp o Redutor Volume de Reagente de Cor Branco de amostra s asussascassessaseisserasirssarscasesssississ sas sim Tempo de incuba o 300 segundos Tempo de leitura 30 segundos Absorb ncia do Branco st lt 0 500 D O Limite de absorb ncia c 2 000 D O Valor normal inferior s s sines 60 ug dl 864109001 02 P g 5 de 6 Valor normal superior s 160 ug dl Eingandade saias siga carol dedica gt 700 ug dl Para a programa o consultar o manual de uso do anali sador a ser utilizado Para a calibra o deve se utilizar Ca librador A plus da Wiener lab segundo os requerimentos do analisador APRESENTA O
6. lagem Tamp o Redutor est vel 3 meses a contar da data de sua prepara o conservado sob refrigera o 2 10 C ou 10 dias a temperatura ambiente 18 25 C IND CIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORA O DOS REAGENTES Varia es nas leituras de Brancos de Reagentes e ou Pa dr o s o ind cios de contamina es ocasionais gua ma terial de vidro etc Aumento no valor dos Brancos indicar uma contamina o com ferro AMOSTRA Soro ou plasma a Coleta o paciente deve estar em jejum sendo que as extra es devem ser realizadas sempre na mesma hora pre ferencialmente de manh j que as oscila es fisiol gicas s o muito importantes durante o dia b Aditivos se a amostra plasma dever utilizar se hepari na como anticoagulante c Subst ncias interferentes conhecidas n o se observa interfer ncia pela hemoglobina at 90 mg dl bilirrubina at 15 mg dl nem heparina at 50 Ul ml Amostras lip micas podem levar a resultados err neos N veis de triglicer deos de 3 72 g l produzem interfer ncias Sendo que hem lises ligeiras n o interferem com este m to do o International Committee for Standardization in Hematology ICSH recomenda a utiliza o de soro livre de hem lise Refer ncia bibliogr fica de Young para efeitos de drogas nes te m todo d Estabilidade e instru es de armazenamento o soro 864109001 02 P g 4 de 6 e o plasma heparinizado podem ser conservados at uma se
7. mana sob refrigera o 2 10 C MATERIAL NECESS RIO n o fornecido Espectrofot metro fotocolor metro ou analisador autom tico Micropipetas e pipetas para medir os volumes indicados Tubos de fotocolor metro CONDI ES DE REA O Comprimento de onda 560 nm em espectrofot metro ou 540 560 nm em fotocolor metro com filtro verde Temperatura de rea o temperatura ambiente Tempo de rea o 5 minutos Volume de amostra 200 ul Volume total de rea o 1 4 ml PROCEDIMENTO Em tr s tubos marcados B Branco de Reagente P Pa dr o e D Desconhecido colocar B P D gua bidestilada 200 ul Padr o 200 ml Amostra 200 ml Tamp o Redutor 1ml 1ml 1ml Misturar Ler a absorb ncia do tubo D Branco de Soro BS em espectrofot metro a 560 580 nm ou em fotocolor metro com filtro verde 540 560 nm levando a zero o apa relho com gua Depois adicionar Reagente de Cor 200 ul 200 ul 200 ul Misturar imediatamente Voltar a ler cada tubo em 5 minu tos levando o aparelho a zero com gua ESTABILIDADE DA MISTURA DE REA O FINAL Os tubos devem ser lidos entre 5 e 60 minutos ap s comple tados os passos do procedimento C LCULOS DOS RESULTADOS Corrigir as leituras de P e D subtraindo os Brancos corres pondentes P B P corrigido D B BS D corrigida Fe ug dl D corrigida x f 100 ug dl P corrigido onde f M TODO DE CONTROLE DE
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