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1. ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 REF 41424 Distribu do por zewrr ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG YANNAN INSTRU ES ads D NV CE APLICA O O teste ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG um teste imunol gico quimioluminescente CLIA para a determina o quantitativa com instrumenta o dedicada Analisador ZENIT RA dos anticorpos espec ficos de classe IgG dirigidos contra a cardiolipina dependentes da 82 Glicoproteina em amostras de soro ou de plasma humano EDTA Heparina Este ensaio utilizado como t cnica de diagn stico suplementar na avalia o da s ndroma de antifosfol pidos APS ATEN O Qualquer decis o m dica n o poder basear se unicamente no resultado deste teste mas dever incluir o conjunto de todos os dados cl nicos e laboratoriais dispon veis SIGNIFICADO CL NICO A presen a de anticorpos antifosfol pidos aPL em doentes com tromboses venosas e ou arteriais ou em doentes com complica es obst tricas o marcador de laborat rio essencial em conjunto com o LAC para o diagn stico da s ndroma de anticorpos antifosfol pidos APS Segundo os crit rios de Sapporo actualizados em 2006 10 diagn stico de APS pode ser definido na presen a de pelo menos um crit rio cl nico e um laboratorial Os crit rios laboratoriais prev em a positividade persistente no tempo 12 semanas a um t tulo m dio alto de anticorpos anti cardiolip
2. es de anti cardiolipina IgG executada individualmente com dois lotes de reagentes diferentes em 30 sess es diferentes A concentrac o do soro anti cardiolipina IgG negativo N4 deu um resultado compreendido no intervalo de 0 0 a 4 3 GPL U mL Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 3 soros positivos Amostra Rad ORE UAR SD CV P1 23 4 2 15 9 2 P2 71 6 5 19 7 2 P3 153 2 16 82 11 0 Linearidade das Dilui es A precis o das dilui es do kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG foi avaliada utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP6 A do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 12 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Foram doseadas dilui es seriadas de 3 soros de concentra o elevada de IgG anti cardiolipina dilui es executadas com o Diluente de Amostra Os resultados deste estudo est o resumidos na tabela seguinte Concentra o Concentra o Factor de Recuperac o Amostra dilui o medida prevista o s GPL U mL GPL U mL 2 De qualquer modo torna se necess rio sublinhar que nem todos os soros quando medidos em dilui es diferentes podem dar resultados n o lineares dentro do intervalo de medi o dependendo o resultado n o s da concentra o mas tamb m da afinidade dos anticorpos presentes na amo
3. Limit of Blank determinado como percentil 95 de popula o negativa deu resultado igual a 6 2 GPL U mL com o Lote de reagentes 2 2 SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE CL NICA Foram testadas com o kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG um total de 244 amostras das quais 68 amostras de doentes com a s ndroma de anticorpos antifosfol pidos APS 46 amostras de doentes com doen as auto imunes sist micas reum ticas 7 conectivites 15 l pus eritematoso sist mico 24 artrites reumat ides 30 amostras de doentes com diversas patologias infecciosas 5 HIV 7 HBV 18 HCV e 100 amostras de indiv duos normais Na popula o presumivelmente negativa 46 amostras de doentes com doen as auto imunes sist micas reum ticas 30 amostras de pacientes com diversas patologias infecciosas e 100 amostras de indiv duos normais estudada 5 amostras deram resultados positivos 6 duvidosos e 165 negativos Especificidade do diagn stico 93 7 165 176 Na popula o presumivelmente positiva 68 amostras de doentes com a s ndroma de anticorpos antifosfol pidos estudada 6 amostras deram resultados negativos 4 duvidosos e 58 positivos Sensibilidade do diagn stico 84 4 58 68 Em fun o dos resultados da especificidade e da sensibilidade de diagn stico a concord ncia de diagn stico de 91 4 223 244 DESEMPENHO Advert ncia os dados apresentados n o representam as especifica es de funcionamento do kit mas constituem a e
4. N 41402 Embalagem de 960 cuvetes ZENIT RA System Liquid C d N 41409 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 10x ZENIT RA Wash Solution C d N 41407 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 20x ZENIT RA Trigger Set j C d N 41403 1 frasco de 250 mL de Trigger A solu o de pr activa o 1 frasco de 250 mL de Trigger B solu o de pr activa o ZENIT RA D SORB Solution C d N 41436 Embalagem de 2 garrafas de 1 litro de solu o pronta a usar ZENIT RA Cartridge Checking System C d N 41401 IFU014ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 4 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 ZENIT RA Top Cap Set C d N 41566 300 tampas externas para tapar os tubos dos calibradores ap s a primeira utiliza o O analisador ZENIT RA e os acess rios identificados pelo asterisco s o fabricados por Immunodiagnostic Systems S A Rue E Solvay 101 B 4000 Li ge B lgica e distribu dos por A Menarini Diagnostics Srl Outros Reagentes Aconselhados ZENIT RA APS IgG CONTROL SET C d N 41450 3 tubos de 1 5 mL de soro humano negativo e 3 tubos de 1 5 mL de soro humano positivo para anticorpos anti cardiolipina ADVERT NCIAS E PRECAU ES Os reagentes fornecidos no kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG s o exclusivamente para uso em diagn stico in vitro e n o para uso in vivo em pessoas ou animais Este produto deve ser usado por utilizadores profi
5. PREPARA O E CONSERVA O DAS AMOSTRAS O ensaio deve ser executado em amostras humanas de soro e de plasma EDTA Heparina Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas e turvas Se o ensaio for executado mais de 8 horas depois da colheita das amostras separar o soro do co gulo ou o plasma dos gl bulos vermelhos transferir o sobrenadante do tubo prim rio para um tubo secund rio seco Antes de serem analisadas as amostras podem ser conservadas no frigor fico entre 2 e 8 C no m ximo por 7 dias Se a dosagem for executada mais de 7 dias depois conservar as amostras congeladas lt 20 C Evitar congelamentos e descongelamentos repetidos PROCEDIMENTO Para obter desempenhos anal ticos v lidos respeitar escrupulosamente as instru es do manual de opera o do instrumento IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 6 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Carregamento dos reagentes Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar Antes de inserir o cartucho de reagentes no sistema o tubo das part culas magn ticas deve ser agitado por rota o horizontal de modo a facilitar a suspens o das part culas Executar a opera o evitando a forma o de espuma Colocar o cartucho de reagentes na rea dos reagentes do analisador utilizando as indica es para o efeito e deixar em agita o durante pelo menos 30 minutos antes de usar A coloca
6. ncia de efeito hook at concentra o de 815 GPL U mL Sensibilidade e Especificidade Relativas A presen a de anticorpos anti cardiolipina IgG foi determinada utilizando o kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG e um m todo ELISA dispon vel no mercado em 234 amostras das quais 64 amostras de doentes com a s ndroma de anticorpos antifosfol pidos APS 45 amostras de doentes com doen as auto imunes sist micas reum ticas 26 amostras de doentes com diversas patologias infecciosas e 99 amostras de indiv duos normais 6 amostras deram origem a resultados divergentes entre o ensaio ZENIT RA e o m todo ELISA dispon vel no mercado Concord ncia relativa 97 4 228 234 Sensibilidade relativa 95 2 60 63 Especificidade relativa 98 2 168 171 IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 14 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Calibra o e Prepara es de refer ncia O sistema calibrado contra os soros de refer ncia HARRIS Produto n 6495GM Lote n 021008 reconhecidos internacionalmente A quantidade de anticorpos anti cardiolipina IgG presentes no reagente de refer ncia Human IgG Anti Cardiolipin Monoclonal Antibody HCAL 1 1 ug ml CDC Cat n 1S2717 Lote n 05 0058 09 20 05 reconstitu do com 0 5 mL concentra o proteica 1 1 ug mL testada com o kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG deu o resultado de 55 6 GPL U mL BIBLIOGRAFIA Miyakis S Lock
7. tem um peso molecular de aproximadamente 50kDa uma concentra o plasm tica de aproximadamente 0 15 a 0 30mg mL e uma fun o biol gica ainda hoje obscura parece capaz de modular o metabolismo das lipoprote nas de interferir em algumas reac es coagulativas e ter um efeito antiagregante das plaquetas Estudos cristalogr ficos recentes definiram a estrutura tridimensional da prote na e a sua organiza o em 5 dom nios T dando informa es teis sobre o funcionamento desta mol cula Em especial o V dom nio apresenta numerosos res duos de lisina que s o respons veis pela interac o electrost tica da 82 Glicoprote na com os fosfol pidos ani nicos das membranas celulares Com o mesmo mecanismo d se a liga o in vitro entre a B2 Glicoprote na e a cardiolipina adsorvida na fase s lida Foi amplamente demonstrado que os anticorpos anti cardiolipina de doentes com s ndroma de anticorpos antifosfolipidos reconhecem uma por o modificada da B2 Glicoproteina esses auto anticorpos n o s o capazes de reconhecer a cardiolipina a B2 Glicoproteina nativa n o ligada a fases s lidas ou a outras estruturas gt 1 Os conhecimentos adquiridos at hoje permitem nos definir os anticorpos anti cardiolipina como anticorpos capazes de ligar se a neoep topes gerados pela liga o entre a 82 Glicoprote na e a cardiolipina adsorvida numa fase s lida Posteriormente foi demonstrado que os anticorpos anticardiol
8. 41424 Subst ncias Potencialmente X no Concentra o m xima testada Interferentes Bilirrubina livre 20 mg dL Bilirrubina conjugada 28 mg dL Hemoglobina 1000 mg dL Acidos gordos 3000 mg dL Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas ou turvas Especificidade anal tica Reac es cruzadas Para avaliar as potenciais reac es cruzadas do antig nio utilizado para sensibilizar as part culas magn ticas foi conduzido um estudo com 26 amostras todas com n veis altos de outros auto anticorpos e negativos a anti cardiolipina IgG As amostras utilizadas estavam assim subdivididas SS A 2 SS B 3 U1 snRNP 1 Jo 1 2 Scl 70 3 Cenp B 2 Histonas 2 Nucleolares 1 Gliadina t TG 3 CCP 1 RF 1 dsDNA 3 MPO 1 PR3 1 O estudo n o demonstrou nenhuma reac o cruzada significativa do antig nio em fase s lida com os outros auto anticorpos Efeito de satura o em doses elevadas Alguns m todos imunol gicos empregues para a determina o de amostras que cont m o analito em concentra es extremamente elevadas podem fornecer n veis aparentes de analito que est o subestimados em rela o ao conte do real Efeito hook O m todo utilizado no kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG sendo um m todo com duas incuba es n o sofre esse efeito Uma amostra com concentra o extremamente elevada acima do intervalo de medi o de IgG anti cardiolipina confirmou a aus
9. A gest o da recalibra o accionada automaticamente pelo analisador IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 8 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Ensaio Premir o bot o de in cio 1 O sistema aspira 100 uL de Diluente de Amostra 20 uL de Part culas Magn ticas 100 uL de Diluente de Amostra e 6 uL de amostra ou controlo para os calibradores o soro positivo fornecido pr dilu do com o Diluente de Amostra e o volume aspirado de 106 uL As solu es e a suspens o aspiradas s o distribu das na cuvete de reac o A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos Depois desta fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas S o distribu dos 200 uL de conjugado na cuvete A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos oa F wo DN Depois desta ltima fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas e a cuvete transferida para a c mara de leitura 7 A quantidade de conjugado aderido fase s lida exprimida em RLU directamente proporcional concentra o de IgG anti cardiolipina presente na amostra 8 Os resultados obtidos s o interpolados na curva de calibra o e expressos em concentra es Se o valor de concentra o de uma amostra exceder o limite superior do intervalo de medi o a amostra deve ser dilu da e testada novamente O novo valor obtido mult
10. activity of human platelets is inhibited by beta 2 glycoprotein l Bioch Biophys Acta 1986 884 142 149 IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 15 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Balasubramanian K Chandra J Schroit AJ Immune clearance of phosphatidylserine expressing cells by phagocytes The role of beta 2 glycoprotein in macrophage recognition J Biol Chem 1997 272 31113 31117 Bouma B de Groot PG van den Elsen JM Ravelli RBG Schouten A Simmelink M Derksen RHWM Kroon J Gros P Adhesion mechanism of human B2 Glicoprotein to phospholipids based on its crystal structure EMBO J 1999 18 5166 5174 Schwarzenbacher R Zeth K Diederichs K Gries A Kostner GM Laggner P Prassi R Crystal structure of human B2 glicoprotein implication for phospholipid binding and the antiphospholipid sindrome EMBO J 1999 18 6228 6239 Hunt JU Krilis S The fifth domain of beta 2 glycoprotein contains a phospholipid binding site Cys 281 Cys 288 and a region recognized by anticardiolipin antibodies J Immunol 1994 152 653 659 Matsuura E Igarashi Y Fujimoto M Ichikawa K and Koike T Anticardiolipin cofactor s and differential diagnosis of autoimmune disease Lancet 1990 336 177 178 Koike T and Matsuura E What is the true antigen for anticardiolipin antibodies Lancet 1991 337 671 672 Matsuura E Igarashi Y Fujimoto M Ichikawa K Suzuki T Sumida T Yasuda T
11. o do cartucho de reagentes determina simultaneamente a leitura do c digo de barras de identifica o Se o r tulo do cartucho estiver estragado ou que a leitura falte por qualquer outro motivo os dados de identifica o do cartucho de reagentes podem ser introduzidos manualmente O analisador mant m automaticamente as part culas magn ticas em agita o cont nua Se o cartucho de reagentes for retirado do analisador deve ser conservado na vertical e s escuras entre 2 e 8 C Carregamento dos calibradores e dos controlos Os calibradores e os controlos ZENIT RA est o prontos a usar Deixar os calibradores e os controlos temperatura ambiente durante 10 minutos e agitar cuidadosamente manualmente ou com um vortex evitando a forma o de espuma N o inverter o tubo e n o retirar a tampa perfuradora tampa amarela para os calibradores e tampas verdes ou azuis para os controlos No caso em que os calibradores ou os controlos sejam utilizados pela primeira vez premir a tampa perfuradora para baixo at ao fim Deste modo a membrana que veda o tubo ser perfurada tornando assim poss vel o acesso ao l quido contido no mesmo Se a tampa perfuradora for utilizada correctamente a risca vermelha que se encontra no topo do r tulo ficar coberta Fig 1 Tubo selado e Tubo perfurado Os calibradores e ou os controlos j utilizados dever o ser fechados com uma tampa externa branca de modo que a risca vermelha do r tulo fique cobe
12. ES DO ENSAIO Para efeitos de diagn stico os resultados obtidos com o kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG e o sistema ZENIT RA Analyzer devem ser utilizados em conjunto com os outros dados cl nicos e de laborat rio disposi o do m dico A contamina o bacteriana das amostras e a inactiva o por calor podem influenciar o resultado do ensaio Os anticorpos heter filos presentes nas amostras de soro humano podem reagir com os reagentes base de imunoglobulinas provocando interfer ncias nos ensaios imunol gicos in vitro Estas amostras podem dar lugar a valores anormais se analisados com o kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 10 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Em alguns casos as amostras de doentes com doen as cr nicas do f gado infec es cr nicas doen as do colag nio e mieloma com hipergamaglobulinemia concentra o de IgG superior a 1800 mg dL podem apresentar resultados positivos de anti cardiolipina VALORES PREVISTOS Foram analisadas as amostras de 100 dadores saud veis para verificar a presen a de anticorpos IgG anti cardiolipina Todas as amostras analisadas deram resultados negativos com um valor m dio de 2 5 GPL U mL e um desvio padr o de 2 14 GPL U mL Com os resultados obtidos foi calculado o Limit of Blank LoB o valor mais elevado que podemos esperar numa s rie de amostras que n o contenham o analito O
13. a concentra o de anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores e nos controlos IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 2 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 AUTOMATIZA O O Analisador ZENIT RA executa automaticamente todas as opera es previstas pelo protocolo do ensaio adi o na cuvete de reac o as amostras calibradores controlos part culas magn ticas conjugado e solu es de activa o de quimioluminesc ncia separa o magn tica e lavagem das part culas medi o da luz emitida O sistema calcula os resultados do ensaio para as amostras e para os controlos atrav s da curva de calibra o memorizada e imprime um relat rio que inclui todas as informa es relativas ao ensaio e ao doente MATERIAIS E REAGENTES Materiais e reagentes fornecidos Part culas magn ticas revestidas com composto cardiolipina 82 Glicoprote na em tamp o fosfato com prote nas estabilizantes tensioactivo Pro Clin 300 e azida de s dio lt 0 1 como conservantes Anticorpo monoclonal de rato anti lgG humanos marcado com um derivado do ster de acridina conjugado em tamp o fosfato com prote nas estabilizantes e azida de s dio 0 196 como conservante Solu o Diluente de Amostra tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Soro humano com baixa conce
14. and Koike T Heterogeneity of anticardiolipin antibodies defined by the anticardiolipin cofactor J Immunol 1992 148 3885 3891 Viard JP Amoura Z and Back JF Association of anti B2 glicoprotein antibodies with lupus type circulating anticoagulant and thrombosis in systemic anticoagulant and thrombosis in systemic lupus erythematosus AM J Med 1992 93 181 186 TECHNOGENETICS S r l Viale Casiraghi 471 20099 Sesto San Giovanni MI It lia PORTUGAL Distribu do por A Menarini Diagnosticos Lda Quinta da Fonte Edif cio D Manuel 2 B 2770 203 Paco de Arcos Tel 351 210 93 00 00 Fax 351 210 93 00 01 www menarinidiag pt IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 16 de 16
15. duos no esgoto mas respeitar as normas nacionais em mat ria de elimina o de lixos potencialmente perigosos IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 5 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Precau es de utiliza o Para assegurar a obten o de resultados v lidos devem ser rigorosamente respeitadas estas instru es de utiliza o e as indica es do manual de opera o do instrumento Os reagentes fornecidos no kit devem ser utilizados exclusivamente com o sistema ZENIT RA Analyzer Os componentes do cartucho de reagentes n o podem ser retirados do cartucho e reagrupados novamente N o usar o kit para al m do prazo de validade PREPARA O DOS REAGENTES Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Conservar os reagentes fornecidos no kit entre 2 e 8 C em posi o vertical e s escuras Nestas condi es o cartucho de reagente e os calibradores que n o tiverem sido abertos estar o est veis at ao fim do prazo de validade O cartucho de reagentes depois de aberto poder ser utilizado por 60 dias se conservado no frigor fico entre 2 e 8 C ou a bordo da m quina Os calibradores depois de abertos poder o ser utilizados por 60 dias se conservados no frigor fico entre 2 e 8 C e se a perman ncia a bordo da m quina n o ultrapassar as 6 horas por sess o N o congelar os reagentes e os calibradores
16. ina aCL e ou anticorpos anti 82 Glicoprote na a B2GPI e ou anticorpos lupus anticoagulant LAC Os anticorpos aCL e a B2GPI podem ser de isotipo G ou M e ter um t tulo superior a 40 U mL A presen a de anticorpos antifosfol pidos foi demonstrada pela primeira vez em 1941 em amostras de doentes com diagn stico serol gico de s filis 2 Foi evidenciado que o soro destes doentes interactuava com o fosfol pido cardiolipina contido nas camadas de cora o bovino do teste VDRL Veneral Disease Research Laboratory considerado espec fico para o diagn stico da s filis A especificidade do ensaio VDRL foi posta em discuss o pelos numerosos resultados de falsa positividade em amostras de doentes com doen as auto imunes sist micas e em aus ncia de doen as ven reas Em 1983 Harris et al utilizando um m todo de elevada sensibilidade para a determina o dos anticorpos anti cardiolipina encontraram em 61 dos doentes com LES concentra es elevadas de aCL demonstrando uma correla o significativa entre n veis de anticorpos e as tromboses venosas e arteriais o lupus anticoagulant e a trombocitopenia IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 1 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Em 1990 dois grupos independentes de pesquisadores x demonstraram que para evidenciar os anticorpos anti cardiolipina indispens vel a presen a da B2 Glicoproteina I A p2 Glicoprote na
17. ipina nos doentes com doen as auto imunes podem reconhecer a B2 Glicoprote na directamente adsorvida em microplacas de polistireno tratado com UV ou irradiado Tamb m neste caso o reconhecimento da mol cula pelos auto anticorpos determinado pelas modifica es estruturais provocadas pela liga o da prote na fase s lida PRINC PIO DO M TODO O kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG para a determina o quantitativa dos anticorpos IgG espec ficos anti cardiolipina dependentes da B2 Glicoprote na utiliza um m todo imunol gico indirecto em dois passos baseado no princ pio da quimioluminesc ncia O composto cardiolipina B2 Glicoprote na utilizado para revestir as part culas magn ticas fase s lida e um anticorpo anti lgG humano marcado com um derivado do ster de acridina conjugado Durante a primeira incuba o os anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores ou nos controlos ligam se fase s lida Durante a segunda incuba o o conjugado reage com os anticorpos anti cardiolipina IgG capturados pela fase s lida Depois de cada incuba o o material n o aderido fase s lida removido por aspira o e subsequente lavagem A quantidade de conjugado marcado que ficou aderido fase s lida avaliada atrav s da reac o de quimioluminesc ncia e da medi o do sinal luminoso O sinal gerado expresso em unidades relativas de luz RLU Relative Light Unit indicativo d
18. iplicado pelo factor de dilui o utilizado para obter o resultado final CONTROLO DE QUALIDADE Para assegurar a validade do ensaio devem ser testados soros de controlo com n veis diferentes de concentra o pelo menos um soro negativo e um soro positivo cada dia em que se executa o ensaio De acordo com as pr ticas de qualidade de cada laborat rio para a verifica o dos resultados do ensaio podem ser realizados mais controlos ou mais frequentemente Siga os procedimentos de qualidade locais Se forem utilizados os soros de controlo ZENIT RA os valores m dios esperados e os limites de aceitabilidade s o os indicados no DATA DISK dados tamb m presentes na embalagem dos controlos Se forem utilizados soros de controlo diferentes necess rio antes da sua utiliza o definir os valores esperados com os reagentes e com o sistema ZENIT RA Se o valor dos controlos n o estiver dentro do intervalo de aceitabilidade especificado os respectivos resultados do ensaio s o inv lidos e essas amostras devem ser analisadas novamente Neste caso necess rio executar uma recalibra o antes da repeti o do ensaio IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 9 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 C LCULO E INTERPRETAC O DOS RESULTADOS C lculo dos resultados A concentra o dos anticorpos IgG anti cardiolipina presentes nas amostras em exame calculada automaticamente pelo si
19. leitura os dados de identificac o da amostra podem ser introduzidos manualmente Seleccionar os par metros requeridos para cada amostra Calibra o O Analisador ZENIT RA utiliza uma curva de calibra o memorizada master curve criada pelo fabricante para cada lote de cartuchos de reagentes Os par metros das master curve juntamente com os valores das concentra es dos calibradores est o memorizados no DATA DISK e s o transferidos para a base de dados do analisador Os calibradores A e B s o utilizados para recalibrar a master curve quer em fun o do analisador utilizado quer dos reagentes a bordo Para executar a recalibra o analisar os dois calibradores A e B em triplicado e realizar uma r plica por cada controlo Os valores de concentra o obtidos com os controlos permitem validar a nova calibra o Assim que a recalibra o da master curve tiver sido aceite e memorizada todas as amostras seguintes poder o ser analisadas sem outra calibra o excepto nos seguintes casos quando estiver carregado a bordo do analisador um cartucho de reagentes com um lote novo quando os valores dos controlos n o estiverem dentro do intervalo de aceitabilidade quando for executada a opera o de manuten o do analisador quando tiver expirado a validade da master curve recalibrada O prazo de validade da master curve recalibrada para o kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG de 15 dias
20. ntra o de anticorpos anti cardiolipina IgG em tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 3 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Soro humano com alta concentra o de anticorpos anti cardiolipina IgG em tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Todos os reagentes est o prontos a usar Os reagentes 1 2 e 3 s o embalados em conjunto constituindo um cartucho de reagentes As concentra es dos calibradores s o indicadas em GPL U mL Unidades GPL e calibradas contra os soros de refer ncia Harris Os valores das concentra es s o espec ficos para cada lote de produto e est o registados no DATA DISK inclu do no kit DATA DISK Mini DVD que cont m as informa es relativas a todos os produtos da Linha ZENIT RA Reagentes Calibradores Soros de controlo actualizados at ao ltimo lote de produ o excep o dos produtos expirados na data de realiza o de cada DATA DISK novo Basta conservar o DATA DISK com o n mero de lote mais elevado para manter actualizadas as informa es necess rias para o funcionamento correcto do sistema Materiais e reagentes necess rios mas n o fornecidos no kit ZENIT RA Analyzer C d N 41400 ZENIT RA Cuvette Cube C d
21. rta S devem ser carregados no instrumento os tubos sem tampa externa tampa branca e com a risca vermelha do r tulo coberta Fig 1 Tubo perfurado Introduzir no analisador os calibradores ou os controlos na rea das amostras depois da leitura do c digo de barras Os dados do c digo de barras tamb m podem ser introduzidos manualmente se o r tulo estiver estragado ou em caso de falha da leitura Os valores da concentra o de anticorpos IgG anti cardiolipina presente nos calibradores ou nos controlos est o registados no DATA DISK e s o transferidos automaticamente para o analisador Em caso de falha de transfer ncia dos dados poss vel introduzi los manualmente No final da sess o os recipientes dos calibradores e dos controlos devem ser fechados com as respectivas tampas externas tampas brancas e conservados entre 2 e 8 C at serem novamente utilizados Fig 1 Tubo fechado Os calibradores s podem ser utilizados ao m ximo quatro vezes IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 7 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Figura 1 Desenho do tubo Tubo selado Tubo perfurado Tubo fechado eg j SE El 1p 7g L Carregamento das amostras Identificar as amostras utilizando o leitor de c digo de barras e introduzi las no analisador na rea respectiva Em caso de falta do c digo de barras na amostra ou em caso de falha de
22. shin MD Atsumi T Branch DW Brey RL Cervera R et al International consensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome J Thromb Haemost 2006 4 295 306 Pangborn MC A new serologically active phospholipids from beef heart Proc Soc Exp Biol NY 1941 48 484 486 Harris EN Gharavi AE Boey ML Patel BM Mackworth Young CG Loizou S Hughes GR Anticardiolipin antibodies detection by radioimmunoassay and association with thrombosis in systemic lupus erythematosus Lancet 1983 2 1211 1214 Galli M Comfurius P Maassen C Hemker HC de Baets MH van Breda Vriesman PJC et al Anticardiolipin antibodies ACA directed not to cardiolipin but to a plasma protein cofactor Lancet 1990 335 1544 1547 McNeil HP Simson RJ Chesterman CN Krilis SA Antiphospholipid antibodies are directed against a complex antigen that includes a lipid binding inhibitor of coagulation B2 glicoprotein apolipoprotein H Proc Natl Acad Sci USA 1990 87 4120 4127 Wurm H Beubler E Plz E Holasek A Kostner G Studies on the possible function of beta 2 glycoprotein I influence in the triglyceride metabolism in the rat Metabolism 1982 31 484 486 Nimpf J Wurm H Kostner GM Interaction of beta 2 glycoprotein l with human blood platelets influence upon the ADP induced aggregation Thromb Haemost 1985 54 397 401 Nimpf J Bevers EM Boman PH Till U Wurm H Kostner GM et al Prothrombinase
23. ssionais respeitando rigorosamente as instru es deste documento A Menarini n o pode ser considerada respons vel por perdas ou danos provocados por uma utiliza o diferente da indicada nas instru es fornecidas Precau es de seguran a Este produto cont m material de origem animal e portanto deve ser manuseado como potenciais agentes infecciosos Este produto cont m componentes de origem humana Todas as unidades de soro ou plasma utilizadas para o fabrico dos componentes deste Kit foram analisadas com m todos aprovados pela FDA e resultaram n o reactivas para HBsAg anti HCV anti HIV1 e anti HIV2 Todavia como nenhum m todo de an lise capaz de garantir a aus ncia de agentes patog nicos todo o material de origem humana deve ser considerado potencialmente infeccioso e manuseado como tal Se a embalagem estiver estragada com derramamento dos reagentes descontaminar a rea afectada com uma solu o dilu da de Hipoclorito de S dio utilizando dispositivos de protec o individual adequados bata luvas culos Eliminar o material utilizado e os res duos da embalagem afectada pelo derramamento de acordo com as normas nacionais para a elimina o de lixos potencialmente infecciosos Alguns reagentes cont m azida de s dio como conservante Como a azida de s dio pode reagir com o chumbo cobre e lat o revestido de chumbo formando azidas explosivas nos canos aconselha se a n o deitar reagentes ou res
24. stema Os valores podem ser visualizados no ecr ou impressos As concentra es s o expressas em GPL U mL O c lculo da concentra o na amostra efectuado atrav s da leitura do resultado obtido para cada amostra numa curva de calibra o elaborada com um sistema de fitting log stico de quatro par metros 4PL Y ponderado corrigida periodicamente em fun o dos resultados obtidos para os calibradores Para mais informa es sobre o sistema de c lculo dos resultados consultar o manual de instru es do sistema Interpreta o dos resultados O intervalo de medi o da dosagem ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG de 0 0 a 640 GPL U mL Os valores inferiores a 0 0 GPL U mL s o valores extrapolados e podem ser indicados como iguais a 0 0 GPL U mL Os valores superiores a 640 GPL U mL podem ser indicados como superiores a 640 GPL U mL ou a amostra deve ser testada novamente ap s dilui o Os resultados das amostras podem ser interpretados do seguinte modo GPL U mL Interpretac o 10 A amostra deve ser considerada Negativa pela presen a de IgG anti cardiolipina 10 a 20 A amostra deve ser considerada duvidosa pela presen a de IgG anti cardiolipina gt 20 A amostra deve ser considerada Positiva pela presen a de IgG anti cardiolipina Os valores acima mencionados devem ser considerados como valores indicativos Cada laborat rio deve estabelecer os seus pr prios intervalos de refer ncia LIMIT
25. stra Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica do kit ZENIT RA CARDIOLIPINA IgG expressa como limite de detec o Limit of Detection LoD ou seja a menor quantidade de analito que o m todo capaz de medir foi determinada utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP17 A do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI e a f rmula para o c lculo LoD LoB Cg SDs onde LoB representa o valor do Limit of Blank SDs o desvio padr o previsto para a distribui o da amostra a baixa concentra o e Cg deriva do percentil 95 da distribui o padr o de Gauss Foram utilizadas 4 amostras de baixa concentra o de analito determinadas uma s vez com dois Lotes de reagentes diferentes em 30 sess es diferentes O Limite de detec o do kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG foi igual a 10 8 GPL U mL Os valores do limite de detec o juntamente com as considera es de car cter cl nico e com os resultados de compara o com m todos de refer ncia contribu ram para a defini o do valor de cut off Especificidade Anal tica Interfer ncias Um estudo baseado nas directrizes do documento EP7 A2 do CLSI demonstrou que o desempenho do ensaio n o influenciado pela presen a na amostra de subst ncias potencialmente interferentes indicadas na tabela seguinte at concentra o testada IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 13 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF
26. vid ncia experimental em como o kit funciona dentro dessas especifica es no modo previsto pelo fabricante IFUO14ZENIT RA Vers o 01 26 de Mar o de 2010 P gina 11 de 16 ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG REF 41424 Precis o e Reprodutibilidade A precis o e a reprodutibilidade do kit ZENIT RA CARDIOLIPIN IgG foram avaliadas utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP5 A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI A precis o foi calculada analisando os resultados de cinco soros com 20 repeti es cada um negativo e quatro positivos com diferentes concentra es de anti cardiolipina IgG executados com dois lotes de reagentes diferentes na mesma sess o experimental A concentrac o do soro anti cardiolipina IgG negativo N4 deu um resultado compreendido no intervalo de 0 3 a 2 5 GPL U mL e de 0 0 a 3 2 GPL U mL respectivamente com o Lote de reagentes 1 e 2 Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 4 soros positivos Reagentes Concentra o E Amosma Lote n m dia GPL U mL 9B ere ER ls i Jp 3 240 E NN 2 22 2 1 05 4 7 O Lic Esso 828 l o 223 oo 27 o 2 69 2 1 67 2 4 P30 Lo e i eran a 2 133 4 5 53 4 1 Em LLL i dox 3448 0 1653 48 2 286 1 17 88 6 2 A reprodutibilidade foi calculada analisando os resultados da determina o de quatro soros um negativo e tr s positivos com diferentes concentra

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