1510 Neospora caninum1
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1. caninum Qual PCR Box 1 0 Especificidade O kit Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 espec fico para a detec o da regi o Nc5 do genoma de Neospora caninum em DNA de amostras biol gicas A sua especificidade foi comprovada com plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo e plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo e outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A especificidade do kit Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 conferida por NeoC mix que apresenta 100 de homologia com todas as sequ ncias de todas as esp cies de Neospora caninum registadas em bases de dados Sensibilidade A sensibilidade do kit Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 foi testada e a Genebox garante a detec o de n veis m nimos de Nc5 do genoma de Neospora caninum at 0 1 ng ul de DNA Componentes do Neospora caninum PCR Box 1 0 Kit Mistura de reac o NeoC 1 tubo NeoC mix 1 ml conservar de 30 a 152C Controlo Interno CI 1 tubo CI 100 ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Positivo CP ltubo CP 50 ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Negativo CN 1tubo CN 50 l conservar de 30 a 152C Manual de instru es 1 Manual de Instru es Componentes da PCR Master Mix Nucle tidos concentra o final de cada dNTP 600 uM Tamp o da PCR concentra es finais s o 3 3x NH4 2 0 mM MgCl e 0 4 u ul Taq DNA polimerase pH 8 3 Glicerol concentra o final 16 6 Vermelh2. s PCR O fluxo Laboratorial deve ser sempre unidireccional da rea pr PCR para a rea p s PCR Deve sempre utilizar se equipamentos espec ficos para cada area de trabalho prepara o de amostras pr amplifica o amplifica o e p s amplifica o Todos os equipamentos utilizados na rea de p s PCR n o devem sais desta zona Utilize micropipetas luvas e batas espec ficas para cada rea Utilize preferencialmente luvas sem talco uma vez que o talco pode inibir a reac o de PCR Utilize pontas de filtro de forma a minimizar contamina es cruzadas Verifique periodicamente as micropipetas de forma a assegurar a varia o de pipetagem inferior a 5 Utilize micropipetas adaptadas a cada volume de pipetagem Verifique periodicamente os termocicladores de forma a assegurar a varia o de temperaturas inferiores a 1 Abra e feche os reagentes com cuidado Depois de utilizar armazene os restantes componentes do kit s temperaturas recomendadas devidamente fechados N o utilize o kit com a validade expirada 15 PROBLEMAS Falsos negativos de uma banda espec fica com o controlo interno normal POSSIVEIS CAUSAS Degrada o da amostra de DNA SUGEST ES Reextraia a amostra de DNA de material fresco Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Esfrega o de bandas Degrada o da amostra de DNA Reextraia a amostra de DNA de material fre
3. 0 um teste para diagn stico molecular da infec o pelo g nero Neospora caninum com maior sensibilidade especificidade e rapidez do que os m todos tradicionais por cultura Altera es e melhoramento do Produto Este produto pode ser melhorado ao n vel do seu rendimento interpreta o especificidade de forma a incluir novas variantes que venham a ser descritas As altera es adi es ou modifica es de NeoC Mix Controlo Interno Controlo Positivo ou Controlo Negativo em rela o ao lote anterior est o detalhadas na tabela abaixo Modifica o N A Folha de Dados de Seguran a 2 3 Material Safety Data Sheet MSDS 4 Informa o Toxicol gica Qu mico Toxicidade Glicerol LD50 oral 4090 mg kg ratinho LD50 oral 12600 mg kg rato LD50 oral 1480 mg kg humano 5 Estabilidade e reactividade Condi es a evitar Calor e humidade Incompatibilidades Bases e agentes oxidantes fortes 6 Protec o pessoal Protec o das m os use luvas apropriadas resistentes a qu micos Protec o dos olhos recomenda se o uso de culos de protec o qu mica 7 Manipula o e armazenamento Manipula o evite o contacto directo com a subst ncia Armazenamento armazene temperatura aconselhada proteja do contacto com a luz Danifica o da embalagem protectora rejeitar o constituinte contido na embalagem 8 Perigos Os componentes da mistura de reac o podem ser perigosos se inala
4. armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C B Zaragatoas Se a amostra for testada dentro de 24 horas ap s a sua colheita as zaragatoas podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C 3 Transporte de amostras A sensibilidade do teste pode ser reduzida se as amostras forem expostas a altas temperaturas por um longo per odo de tempo A Plasma e soro O sangue colhido deve ser armazenado a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportado em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24 48h B Zaragatoas A amostra colhida deve ser armazenada a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportada em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24 48h 1 Pureza e Concentra o do DNA Para obter bons resultados com o Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 recomenda se o uso de qualquer kit de extrac o de DNA que apresente marca o CE de modo a obter um DNA extra puro 2 DNA Polimerase O Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 foi intensivamente testado utilizando a DNA p
5. de NeoC mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 15 dias a partir da data de recep o temperatura ambiente NeoC mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 3 dias a partir da data de recep o NeoC mix Cl CP e CN nunca devem ser deixados ou armazenados com a tampa aberta 2 DNA As amostras de DNA armazenadas em dH20 ou tamp o TE permanecem est veis durante pelo menos 4 semanas a 4 C ou 2 anos a 20 C geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico responsabiliza se perante os seus clientes pelos defeitos no material e componentes dos seus produtos aplicados em condi es normais Os produtos da empresa que apresentam esta garantia devem ser substitu dos sem encargos para o cliente Esta garantia aplica se s para produtos que sejam manipulados e armazenados de acordo com as especifica es e recomenda es de utiliza o As reclama es devem ser enviadas por escrito directamente para a geneBOX e devem ser acompanhadas por uma c pia da guia de transporte ou factura do produto Este produto n o pode ser reformulado reembalado ou revendido em nenhuma forma sem o expresso consentimento da geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico 18 Protocolo de amplifica o por PCR 1 4 Pr an lise 1 Colheita de amostras Para garantir um teste de alta qualidade das amostras devem ser colhidas nas seguintes condi es A Plasma e soro A am
6. do transporte n o deve ser superior a 3 dias de modo a garantir que todos os componentes do Kit cheguem em perfeitas condi es aos seus destinat rios 15 Contactos teis N mero Nacional de Emerg ncia 112 Centro de Informa o Anti Venenos 808 250 143 16 Outras informa es As informa es a cima dispon veis s o baseados no n vel de conhecimento actual devendo ser utilizado apenas como guia A geneBOX R amp D Diagnostic Tests n o se responsabiliza por qualquer dano causado pela manipula o inapropriada ou pelo contacto com os referidos produtos Para mais esclarecimentos por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 22 Folha de da Refer ncias dos de seguran ismassssessseseaseszrasraso sesnieisasaopas o Apresenta o O Protozo rio intracelular Neospora caninum o agente etiol gico da Neosporose patologia na qual se verifica a ocorr ncia de abortos nos animais infectados O gado bovino e os can deos s o hospedeiros naturais do parasita onde este se desenvolve e se reproduz Uma vez que existem outras causas subjacentes ocorr ncia de abortos em gado bovino e que o Neospora caninum morfologicamente semelhante ao Toxoplasma gondii em fases particulares do seu ciclo a identifica o molecular deste parasita uma ferramenta importante Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 detecta a regi o Nc5 espec fica do genoma de Neospora caninum Neospora caninum Qual PCR Box 1
7. a todos os produtos de PCR da geneBOX 1 Produtos Qu micos e Identifica o da Companhia Data de realiza o Mar o de 2011 Grupo do produto Produtos de PCR da geneBOX Manufactura o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410 946 fax 351 231 410 947 e mail info genebox com 2 Composi o e Informa o sobre os reagentes Componente Qu mico Nome vulgar N de lote Mistura de primers Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Mistura de reac o Desoxiribonucle tidos Nucle tidos Tamp o Cloreto de Magn sio Mgci2 Vermelho de Cresol Glicerol DNA polimerase Controlo interno Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Acido Desoxiribonucleico DNA Controlo positivo D Agua bidestilada est ril Controlo negativo H20 3 Propriedades f sico qu micas Componente Aspecto Cor Odor Mistura de primers l quido incolor nenhum Mistura de reac o l quido vermelho rosa nenhum Controlo Interno l quido incolor nenhum Controlo Positivo l quido incolor nenhum Controlo Negativo l quido incolor nenhum 20 Controlo de Qualidade O kit Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 foi testado com plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo e plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo de outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A Genebox garante a qualidade e a fiabilidade do seu kit Neospora
8. ad J P Dubey and M L Anderson 1991 Neosporalike Par metros do programa de PCR 10 encephalomyelitis in a calf pathology ultrastructure Protocolo de electroforese em gel de agarose 11 Prepara o do gel a 4 11 Electroforese 11 Tabela de interpreta o dos Resultados sses 12 Guia de resolu o de problemas iietaa 13 Avisos Precau es rrenan nennen 15 Guia t cnico insistan raria 17 Gafa Mtis ensine airar aaa astani 18 Aviso de Garantia as szsosesssesassesrsrsasaesromenorpdo pes ni EE Sa aaia 18 Declara o de Conformidade 19 Folha de Dados de Seguran a 3 3 Material Safety Data Sheet MSDS Equipamento especial de combate ao inc ndio quando s o libertadas grandes quantidades de subst ncia trabalhe apenas com protec o adequada para olhos e pele 11 Medidas a tomar no caso de derrame acidental Precau es pessoais evite o contacto directo com a subst ncia Limpeza limpe normalmente a rea afectada n o s o necess rios cuidados adicionais Protec o da pele use uma bata de laborat rio 12 Informa o ecol gica N o existem dados dispon veis 13 Informa o sobre a elimina o Elimine o material de acordo com toda a regulamenta o aplic vel Grupo IV res duos hospitalares espec ficos 14 Informa o sobre o transporte No transporte dos Kits devem estar a seguradas as temperaturas n o devendo ultrapassar os 15 C A dura o
9. dos ingeridos ou absorvidos pela pele Este material pode causar irrita o da pele dos olhos e do tracto respirat rio A ingest o de grandes quantidades desta mistura pode causar dores de est mago v mitos ou diarreia 9 Medidas de Primeiros Socorros No caso de contacto com os olhos deve lavar imediatamente os olhos com gua abundante por cerca de 15 minutos Deve consultar o seu m dico No caso de contacto com a pele deve lavar imediatamente a zona afectada com gua corrente e sab o Lave a roupa contaminada antes da sua utiliza o No caso de ingest o lave a boca com gua abundante Deve contactar o seu m dico se necess rio No caso de inala o mudar a v tima para um local arejado Se encontrar inanimado aplique respira o artificial Se apresentar dificuldades respirat rias aplique oxig nio Deve consultar o seu m dico 10 Medidas a tomar em caso de inc ndio Meios de extin o gua di xido de carbono p qu mico seco ou espuma apropriada Meios de extin o n o aconselhados n o existem restri es conhecidas Perigos espec ficos de exposi o em caso de inc ndio podem emitir fumos t xicos de di xido e mon xido de carbono nitrog nio f sforo cloreto de hidrog nio e g s hidrog nio 21 Folha de Dados de Seguran a 1 3 Material Safety Data Sheet MSDS geneBOX R amp D Diagnostic Tests PCR Kits Produtos PCR da geneBOX Esta folha de dados de seguran a aplic vel
10. ilicone para placas de 96 e ou adicione leo mineral
11. num Box 1 0 Kit u 6 4 Anderson M L C W Palmer M C Thurmond J P Picanso P C Blanchard R E Protocolo de amplifica o por PCR 7 Breitmeyer A W Layton M McAllister B Daft H Kinde et al 1995 Evaluation of 4 Zi abortions in cattle attributable to neosporosis in selected dairy herds in California J Am Pr an lise 7 Vet Med Assoc 207 1206 1210 E 5 Barr B C M L Anderson P C Blanchard B M Daft H Kinde and P A Conrad 1990 Colheita ssssssssssssssssssssessrttrnnrresnesnnsnteerterennnenne 7 Bovine fetal encephalitis and myocarditis associated with protozoal infections Vet Pathol 27 354 361 Armazemamento eessasessssmsessemessaesasememso k 6 Barr B C M L Anderson J P Dubey and P A Conrad 1991 Neosporalike protozoal Transporte 8 infections associated with bovine abortions Vet Pathol 28 110 116 i 7 Barr B C M L Anderson K W Sverlow and P A Conrad 1995 Diagnosis of bovine Extrac o de DNA ccnsoriccicisnssrsiuranis 9 fetal Neospora infection with an indirect fluorescent antibody test Vet Rec 137 611 613 8 Barr B C M L Anderson L W Woods J P Dubey and P A Conrad 1992 Neospora REAgEN ES ssssssseeiisreriirsrnirsrnitertrnernsnenesnnrts 9 like protozoal infections associated with abortion in goats J Vet Diagn Investig 4 365 ARDEI 367 Amplifica o por PCR ssssssessssssrtsrsrseseseseeseseese 9 9 Barr B C P A Conr
12. o de cresol concentra o final de 300ug ml Nome do Produto Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 Numero do Produto GB 1510 Utiliza o Detec o de Neospora caninum Produ o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede portugal N s geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico indubitavelmente declaramos que este produto ao qual se relaciona esta declara o de conformidade est em conformidade com os seguintes documentos normativos ISO 9001 2008 e ISO 13485 2004 Seguindo ainda as indica es da Directiva Europeia 98 79 CE sobre dispositivos m dicos de diagn stico in vitro conformidade de acordo com o Anexo IV transposto para as leis nacionais dos estados membros da Uni o Europeia Europeia A ficha e os documentos t cnicos deste produto s o mantidos na geneBOX biocant centro de inova o em biotecnologia 3060 197 Cantanhede Portugal Sandra Balseiro Directora T cnica 19 geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico garante que os primers presentes no Neospora caninum Qual PCR Box apresentam as especificidades dadas nas folhas e tabelas de interpreta o de resultados do produto 1 NeoC mix Cl CP e CN Armazenamento a 20 C NeoC mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 12 meses a partir da data de produ o ver validade do lote na embalagem Armazenamento a 42C
13. ogo ee geneBox 069 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO E geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410946 fax 351 231 410947 e mail infoQgenebox com 24 C digo do Produto 1510 Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 Dispositivo para utiliza o in vitro Manual de I nstru es 0 ee genesox 000 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO Vers o1 1 Abril de 2011 indie O Refer ncias 1 Timothy V Baszler Lawrence J C Gay Maureen T Long and Bruce A Mathison 1999 ApreSEnTA A Orisun nsn aiita 4 Detection by PCR of Neospora caninum in Fetal Tissues from Spontaneous Bovine Abortions Altera es e Melhoramento do produto isis 4 Journal Of Clinical Microbiology 37 4059 4064 2 Anderson M L B C Barr and P A Conrad 1994 Protozoal causes of reproductive Controlo da Qualidade ii iisisisiirsiniraiinsnnirnsnnnntanian tanaira niaii 5 failure in domestic ruminants Vet Clin N Am Food Anim Pract 10 439 461 amais E 3 Anderson M L P C Blanchard B C Barr J P Dubey R L Hoffman and P A Conrad Sensibilidade e Especificidade u eermmmessermssenrems 5 1991 Neospora like protozoan infection as a major cause of abortion in California dairy cattle J Am Vet Med Assoc 198 241 244 Componentes do Neospora cani
14. olimerase da Reagente 5 Reagente 5 Lisboa Portugal 3 NeoC mix Para uma boa performance detec o de Neospora caninum com o Neospora caninum Qual PCR Box 1 0 obrigat ria a utiliza o da NeoC Mix fornecida com o Kit 4 Procedimentos de amplifica o Para uma correcta utiliza o do kit aconselha se a seguir o programa de PCR apresentado neste Manual de Instru es 5 Termociclador Recomenda se utiliza o de qualquer Termociclador que apresente as seguintes caracter sticas heating rate superior a 2 5 C sec cooling rate superior a 1 5 C sec gama de temperaturas 4 1002C uniformidade de temperaturas 0 5 C heated lid superior a 100 C 6 Validade Como especificado na embalagem Se os problemas persistirem por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 17 Avisos e precau es 2 2 Os componentes dos kits s o resistentes s temperaturas de armazenamento indicadas O armazenamento dos kits a temperaturas n o recomendadas podem levar a rupturas no material e contamina o dos reagentes dos kits Os materiais pl sticos fornecidos neste kit s o resistentes gama de temperaturas de utiliza o e armazenamento recomendadas A sua utiliza o em gamas distintas de temperaturas pode causar rupturas impossibilitando a utiliza o normal do kit Verifique a concentra o e qualidade de todas as amostras de DNA antes de utilizar este kit Instru es de ge
15. ostra de sangue deve ser colhida para Tubos de colheita 2 10ml BD Vacutainer Blood EDTA ou Tubos de colheita Vacutainer BD Blood Serum vidro ou pl stico Alternativamente podem ser usados tubos de colheita com marca o CE de outras marcas N O UTILIZAR AMOSTRAS HEPARINIZADO COM ESTE M TODO B Zaragatoas A amostra deve ser colhida com uma zaragatoa Dacron de pl stico Alternativamente podem ser usadas zaragatoas de pl stico com marca o CE de outras marcas N o use zaragatoas de alum nio ou madeira Ap s a colheita as amostras podem ser transportados em meio de cultura 1 2 ml como nos seguintes exemplos STM AMPLI COR meio de transporte da amostra Roche Inc Kit para colheita de zaragatoas Digene Corporation M dio de PBS a 10 Home made Precau o Todas as amostras t m de ser tratadas como material potencialmente infeccioso NOTA Os Nossos Kits tamb m podem ser usado com amostras de fezes e urina desde que se utilize um kit de extrac o adequado 2 Armazenamento da Amostra A sensibilidade do teste pode ser reduzida com o processo repetitivo de congela o descongela o ou com longos per odos de armazenamento Protocolo de amplifica o por PCR 2 4 A Plasma e soro Se o plasma ou soro for testado dentro de 24 horas ap s a sua colheita as amostras podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser
16. rais de seguran a no laborat rio N o coma beba ou fume dentro do laborat rio Utilize sempre luvas descart veis e mude as com frequ ncia Utilize batas limpas e proteja os olhos sempre que se justifique Lave as m os antes e depois de qualquer manipula o de amostras ou reagentes Lave a rea de trabalho antes e depois de qualquer manipula o N o pipete com a boca 16 Protocolo de amplifica o por PCR 3 4 Extrac o de DNA A sensibilidade do teste pode ser reduzido se voc usar um m todo de isolamento de DNA ineficiente A detec o destes tipo de bact ria requer amostras de DNA altamente puras e concentradas As quantidade e qualidade das amostras dependem do protocolo de isolamento de DNA usado Recomenda se a kits de isolamento seguintes tanto para plasma soro como para zaragatoas QlAamp DNA Mini Kit from QIAGEN QlAamp DNeasy Kit from QIAGEN QlAamp DNA Blood Mini Kit from QIAGEN Alternativamente podem ser usados outros kits com a marca o CE para extrac o de DNA que garantam DNA com r cio DO260 280 superior a 1 6 e concentra es entre 1ng 200 ng ul Reagentes Amostra de DNA Mistura de reac o NeoC mix Controlo interno CI Controlo positivo CP Controlo negativo CN gua bi destilada est ril n o fornecida Este componente apresenta alto potencial contaminante dado conter DNA de Neospora caninum recomenda se o m ximo cuidado no se
17. sco Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Amostra de DNA muito concentrada Verifique a qualidade e concentra o do DNA Dissolva o DNA em ddH20 de forma a obter a concentra o exacta Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Problemas com tamp o de electroforese Fora de prazo ou composi o errada Use um tamp o recomendado novo Protocolo de electroforese em gel de agarose Prepara o do gel de agarose a 4 I 2 3 4 5 6 7 Dissolver 8 gramas de p agarose em 200 ml de tamp o TAE 1X Dissolver completamente a agarose aquecendo a no microondas Arrefe a o gel at aproximadamente 502C Adicione pelo menos 20 pl de brometo de et dio 10 mg ml ou de Sybr Safe 10000x concentrado agarose Agite at estar completamente incorporado Numa superf cie nivelada monte a placa do gel com 96 po os Verta uma camada de gel com cerca de 5mm Deixe o gel arrefecer Aten o este reagente um forte agente mutag nico leia atentamente a MSDS do produto Electroforese 1 Submirja o gel na tina de electroforese com tamp o TAE 1X 2 Remova os pentes com cuidado do gel 3 Adicione 10 pl do produto de PCR em cada po o 4 Ligue a tina de electroforese corrente com uma voltagem m dia 115V 5 Deixe a electroforese correr por cerca de 20 minutos ou at o corante estar a 2 3 da linha 6 Ponha o gel no transiluminador 7 Fo
18. tografe o gel e identifique o 8 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 11 Tabela de Interpreta o de resultados Tabela I Interpreta o de an lises v lidas Po o Neospora Controlo caninum Interno Interpreta o Valida o 275pb 101pb E N caninum Validado Tamanho da banda espec fica Tamanho da banda de Controlo Interno Tabela Il Interpreta o de an lises n o v lidas AEE tlc Controlo caninum Intemo Interpreta o Valida o 275pb 101pb positivo nvalido SEE neg reac o inv negativo reac o inv lido 12 Guia de resolu o de problemas PROBLEMAS POSSI VEI S CAUSAS SUGEST ES Verifique a qualidade e concentra o do DNA Reextraia a amostra de DNA ou tente n o adicionar gua mistura de reac o Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Concentra o da amostra de DNA baixa Bandas controlo e espec ficas fracas Repurifique a amostra de DNA Repita a reac o com um DNA de boa qualidade EEE E Repurifique a amostra de DNA Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de DNA Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de DNA Os controlos internos falharam em diversos Verifique a selagem po os das placas Repita a reac o Produtos de utilizando um amplifica o secos adaptador de s
19. u manuseamento Protocolo de amplifica o por PCR 4 4 Amplifica o por PCR 1 Agite brevemente todos os tubos do kit e os tubos de DNA 2 Para cada detec o pipete de acordo com a tabela Tabela TuboNeoCmix eu Tubo Controlo Interno CI DNA de amostra Volume final NOTA Por cada utiliza o do kit deve correr pelo menos uma reac o CP e CN 3 Para o controlo positivo proceder como em 2 substituindo o DNA de amostra por 1 ul de Tubo Controlo Positivo CP 4 Para o controlo negativo proceder como em 2 substituindo o Controlo Interno por 1 ul de gua bidestilada est ril e o DNA de amostra por 1 ul de Tubo controlo negativo CN 5 Coloque os componentes da reac o no termociclador e corra o seguinte programa de PCR Programa PCR Fim 42C Infinito 1 6 Detecte os produtos do PCR com uma electroforese em gel de agarose a 4 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 10 Avisos e precau es 1 2 A amplifica o por PCR permite nos obter milh es de c pias de DNA a partir de uma pequena quantidade de amostra Infelizmente isto tamb m verdade para o DNA contaminante que pode comprometer performance da nossa reac o Consequentemente pr ticas laboratoriais espec ficas podem evitar a presen a de amplifica es inespec ficas Em baixo encontram se descriminadas as recomenda es da Genebox Separe fisicamente as reas de pr PCR e de p
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