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1. ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 REF 41413 Distribuido por zxr ZENIT RA dsDNA IgG ymu INSTRU ES E o A Z CE UTILIZA O 100 APLICA O O teste ZENIT RA dsDNA IgG um teste imunol gico quimioluminescente CLIA para a determina o quantitativa com instrumenta o dedicada Analisador ZENIT RA dos anticorpos espec ficos de classe IgG dirigidos contra o dsADN em amostras de soro ou de plasma humano EDTA Este ensaio utilizado como t cnica de diagn stico suplementar na avalia o das doen as auto imunes sist micas reum ticas ATEN O Qualquer decis o m dica n o poder basear se unicamente no resultado deste teste mas dever incluir o conjunto de todos os dados cl nicos e laboratoriais dispon veis SIGNIFICADO CL NICO Os auto anticorpos anti antig nios nucleares extra veis ENA representam uma grande fam lia de auto anticorpos n o rg os e n o esp cies espec ficos cuja detec o de grande import ncia no diagn stico laboratorial das doen as auto imunes sist micas reum ticas 23 As doen as auto imunes sist micas caracterizam se do ponto de vista laboratorial pela presen a de auto anticorpos anti n cleo ANA Os ANA s o o primeiro teste auto anticorpos a pedir para o doente com suspeita de patologia auto imune sist mica Em geral a pesquisa dos ANA executa se com o m todo de imunofluoresc ncia indirecta IFI numa cama
2. es relativas a todos os produtos da Linha ZENIT RA Reagentes Calibradores Soros de controlo actualizados at ao ltimo lote de produ o excep o dos produtos expirados na data de realiza o de cada DATA DISK novo Basta conservar o DATA DISK com o n mero de lote mais elevado para manter actualizadas as informa es necess rias para o funcionamento correcto do sistema Materiais e reagentes necess rios mas n o fornecidos no kit ZENIT RA Analyzer C d n 41400 ZENIT RA Cuvette Cube C d n 41402 Embalagem de 960 cuvetes ZENIT RA System Liquid C d n 41409 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 10x ZENIT RA Wash Solution C d n 41407 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 20x ZENIT RA Trigger Set a C d n 41403 1 frasco de 250 mL de Trigger A solu o de pr activa o 1 frasco de 250 mL de Trigger B solu o de pr activa o ZENIT RA D SORB Solution C d n 41436 Embalagem de 2 garrafas de 1 litro de solu o pronta a usar ZENIT RA Cartridge Checking System C d n 41401 ZENIT RA Top Cap Set C d n 41566 300 tampas externas para tapar os tubos dos calibradores ap s a primeira utiliza o O analisador ZENIT RA e os acess rios identificados pelo asterisco s o fabricados por Immunodiagnostic Systems S A Rue E Solvay 101 B 4000 Li ge B lgica e distribu dos por A Menarini Diagnostics Srl Outros Reagentes Aconselhados ZENIT
3. mara de leitura 7 A quantidade de conjugado aderido fase s lida exprimida em RLU directamente proporcional concentra o de IgG anti dsADN presente na amostra 8 Os resultados obtidos s o interpolados na curva de calibra o e expressos em concentra es Se o valor de concentra o de uma amostra exceder o limite superior do intervalo de medi o a amostra deve ser dilu da e testada novamente O novo valor obtido multiplicado pelo factor de dilui o utilizado para obter o resultado final CONTROLO DE QUALIDADE Para assegurar a validade do ensaio devem ser testados soros de controlo com n veis diferentes de concentra o pelo menos um soro negativo e um soro positivo cada dia em que se executa o ensaio De acordo com as pr ticas de qualidade de cada laborat rio para a verifica o dos resultados do ensaio podem ser realizados mais controlos ou mais frequentemente Siga os procedimentos de qualidade locais Se forem utilizados os soros de controlo ZENIT RA os valores m dios esperados e os limites de aceitabilidade s o os indicados no DATA DISK dados tamb m presentes na embalagem dos controlos Se forem utilizados soros de controlo diferentes necess rio antes da sua utiliza o definir os valores esperados com os reagentes e com o sistema ZENIT RA Se o valor dos controlos n o estiver dentro do intervalo de aceitabilidade especificado os respectivos resultados do ensaio s o inv lidos e es
4. premir a tampa perfuradora para baixo at ao fim Deste modo a membrana que veda o tubo ser perfurada tornando assim poss vel o acesso ao l quido contido no mesmo Se a tampa perfuradora for utilizada correctamente a risca vermelha que se encontra no topo do r tulo ficar coberta Fig 1 Tubo selado e Tubo perfurado Os calibradores e ou os controlos j utilizados dever o ser fechados com uma tampa externa branca de modo que a risca vermelha do r tulo fique coberta S devem ser carregados no instrumento os tubos sem tampa externa tampa branca e com a risca vermelha do r tulo coberta Fig 1 Tubo perfurado Introduzir no analisador os calibradores ou os controlos na rea das amostras depois da leitura do c digo de barras Os dados do c digo de barras tamb m podem ser introduzidos manualmente se o r tulo estiver estragado ou em caso de falha da leitura Os valores da concentra o de anticorpos IgG anti dsADN presente nos calibradores ou nos controlos est o registados no DATA DISK e s o transferidos automaticamente para o analisador Em caso de falha de transfer ncia dos dados poss vel introduzi los manualmente No final da sess o os recipientes dos calibradores e dos controlos devem ser fechados com as respectivas tampas externas tampas brancas e conservados entre 2 e 8 C at serem novamente utilizados Fig 1 Tubo fechado Os calibradores s podem ser utilizados ao m ximo quatro vezes I
5. concentra o mas tamb m da afinidade dos anticorpos presentes na amostra Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica do kit ZENIT RA dsDNA IgG expressa como limite de detec o Limit of Detection LoD ou seja a menor quantidade de analito que o m todo capaz de medir foi determinada utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP17 A do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI e a f rmula para o c lculo LoD LoB Cg SDs onde LoB representa o valor do Limit of Blank SDs IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 12 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 o desvio padr o previsto para a distribui o da amostra a baixa concentra o e Cg deriva do percentil 95 da distribui o padr o de Gauss Foram utilizadas 4 amostras de baixa concentra o de analito determinadas uma s vez com dois Lotes de reagentes diferentes em 30 sess es diferentes O Limite de detec o do kit ZENIT RA dsDNA IgG foi igual a 24 2 Ul mL Os valores do limite de detec o juntamente com as considera es de car cter cl nico e com os resultados de compara o com m todos de refer ncia contribu ram para a defini o do valor de cut off Especificidade Anal tica Interfer ncias Um estudo baseado nas directrizes do documento EP7 A2 do CLSI demonstrou que o desempenho do ensaio n o influenciado pela presen a na amostra de subst ncias potencialmente in
6. deve ser considerada Negativa pela presen a de IgG anti dsADN 30 a 50 A amostra deve ser considerada duvidosa pela presen a de IgG anti dsADN gt 50 A amostra deve ser considerada Positiva pela presen a de IgG anti dsADN Os valores acima mencionados devem ser considerados como valores indicativos Cada laborat rio deve estabelecer os seus pr prios intervalos de refer ncia LIMITES DO ENSAIO Para efeitos de diagn stico os resultados obtidos com o kit ZENIT RA dsDNA IgG e o sistema ZENIT RA Analyzer devem ser utilizados em conjunto com os outros dados cl nicos e de laborat rio disposi o do m dico A contamina o bacteriana das amostras e a inactiva o por calor podem influenciar o resultado do ensaio Os anticorpos heter filos presentes nas amostras de soro humano podem reagir com os reagentes base de imunoglobulinas provocando interfer ncias nos ensaios imunol gicos in vitro Estas amostras podem dar lugar a valores anormais se analisados com o kit ZENIT RA dsDNA IgG IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 10 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 VALORES PREVISTOS Foram analisadas as amostras de 100 dadores seleccionados casualmente para verificar a presen a de anticorpos IgG anti dsADN 99 amostras analisadas deram resultados negativos com um valor m dio de 11 2 Ul mL e um desvio padr o de 3 78 Ul mL Com os resultados obtidos foi calculado o Limit of Blan
7. tamp o fosfato com prote nas estabilizantes tensioactivo Pro Clin 300 e azida de s dio lt 0 1 como conservantes Anticorpo monoclonal de rato anti lgG humana marcado com um derivado do ster de acridina conjugado em tamp o fosfato com prote nas estabilizantes e azida de s dio lt 0 1 como conservante Solu o Diluente de Amostra tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO como conservantes Soro humano com baixa concentra o de anticorpos anti dsADN IgG em tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Soro humano com elevada concentra o de anticorpos anti dsADN IgG em tamp o fosfato com seroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Todos os reagentes est o prontos a usar Os reagentes 1 2 e 3 s o embalados em conjunto constituindo um cartucho de reagentes As concentra es dos Calibradores s o expressas em Ul mL Unidades Internacionais e calibradas contra um padr o de refer ncia Internacional Wo 80 WHO Os valores das concentra es s o espec ficos para cada lote de produto e est o registados no DATA DISK inclu do no kit IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 3 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 DATA DISK Mini DVD que cont m as informa
8. DN confirmou a aus ncia de efeito hook at concentra o de 1984 Ul mL IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 13 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 Sensibilidade e Especificidade Relativas A presen a de anticorpos anti dsADN IgG foi determinada utilizando o kit ZENIT RA dsDNA IgG e um m todo de dosagem ELISA dispon vel no com rcio em 447 amostras 13 amostras deram origem a resultados divergentes entre o ensaio ZENIT RA e o m todo ELISA dispon vel no mercado Concord ncia relativa 97 1 434 447 Sensibilidade relativa 89 3 50 56 Especificidade relativa 98 2 384 391 Padr o e Soro de refer ncia O sistema est calibrado contra o primeiro padr o internacional Wo 80 WHO A quantidade de anticorpos anti dsADN IgG presentes na amostra ANA HUMAN REFERENCE SERUM 1 CDC Cat n IS2072 Lote n 82 0007 medida com o kit ZENIT RA dsDNA IgG foi de 226 Ul mL BIBLIOGRAFIA 1 CA von M hlen EM Tan Autoantibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases Sem Arthr Rheum 1995 24 323 58 2 RL Humbel Auto immunit auto anticorps et maladie In Humbel RL ed Autoanticorps et maladies autoimmunes Paris France Edition Scientifiques Elsevier 1997 17 20 3 PN Hollingsworth SC Pummer RL Dawkins Antinuclear antibodies In Peter JB Shoenfeld Y eds Autoantibodies Amsterdam The Netherlands Elsevier Science BV 1996 74 90 4 CA
9. FUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 7 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 Figura 1 Desenho do tubo Tubo selado Tubo perfurado Tubo fechado I ae El E tY E Carregamento das amostras Identificar as amostras utilizando o leitor de c digo de barras e introduzi las no analisador na rea respectiva Em caso de falta do c digo de barras na amostra ou em caso de falha de leitura os dados de identifica o da amostra podem ser introduzidos manualmente Seleccionar os par metros requeridos para cada amostra Calibra o O Analisador ZENIT RA utiliza uma curva de calibra o memorizada master curve criada pelo fabricante para cada lote de cartuchos de reagentes Os par metros das master curve juntamente com os valores das concentra es dos calibradores est o memorizados no DATA DISK e s o transferidos para a base de dados do analisador Os calibradores A e B s o utilizados para recalibrar a master curve quer em fun o do analisador utilizado quer dos reagentes a bordo Para executar a recalibra o analisar os dois calibradores A e B em triplicado e realizar uma r plica por cada controlo Os valores de concentra o obtidos com os controlos permitem validar a nova calibra o Assim que a recalibra o da master curve tiver sido aceite e memorizada todas as amostras seguintes poder o ser analisadas sem outr
10. RA ANA CONTROL SET C d n 41448 3 tubos de 1 5 mL de soro humano negativo e 3 tubos de 1 5 mL de soro humano positivo para anticorpos anti dsADN IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 4 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 ADVERTENCIAS E PRECAU ES Os reagentes fornecidos no kit ZENIT RA dsDNA IgG s o exclusivamente para uso em diagn stico in vitro e n o para uso in vivo em pessoas ou animais Este produto deve ser usado por utilizadores profissionais respeitando rigorosamente as instru es deste documento A Menarini n o pode ser considerada respons vel por perdas ou danos provocados por uma utiliza o diferente da indicada nas instru es fornecidas Precau es de seguran a Este produto cont m material de origem animal e portanto deve ser manuseado como potenciais agentes infecciosos Este produto cont m componentes de origem humana Todas as unidades de soro ou plasma utilizadas para o fabrico dos componentes deste Kit foram analisadas com m todos aprovados pela FDA e resultaram n o reactivas para HBsAg anti HCV anti HIV1 e anti HIV2 Todavia como nenhum m todo de an lise capaz de garantir a aus ncia de agentes patog nicos todo o material de origem humana deve ser considerado potencialmente infeccioso e manuseado como tal Se a embalagem estiver estragada com derramamento dos reagentes descontaminar a rea afectada com uma solu o dilu da de Hipoclor
11. Slater RB Davis RH Shmerling Antinuclear antibodies testing A study of clinical utility Arch Int Med 1996 156 1421 5 5 RL Humbel Detection of antinuclear antibodies by immunofluorescence In van Venrooij Maini RN eds Manual of biological markers of disease Dordrecht the Netherlands Kluwer 1993 A2 1 16 6 National Committee for clinical Laboratory Standarditation Quality assurance for the indirect immunofluorescence test for autoantibodies to nuclear antigen IF ANA Approved guideline Wayne PA NCCLS I LA2 A vol 16 11 1996 7 RJT Smeenk Detection of antibodies to dsDNA current insights into its relevance Clin Exp Rheumatol 2002 20 294 300 IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 Pagina 14 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 8 DB Stollar G Zon RW Pastor A recognitation site on synthetic helical oligonucleotides for monoclonal anti native DNA autoantibodies Proc Natl Acad Sci USA 1986 83 4469 73 9 DS Pisetsky CF Reich The influence of DNA size on the binding of anti DNA antibodies in the solid and fluid phase Clin Immunol Immunopathol 1994 72 350 6 10 M Hochberg Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus Arthritis Rheum 1997 40 1725 11 AJG Swaak R Smeenk Detection of anti dsDNA as a diagnostic tool a prospective study in 441 non systemic lupus erythematosus SLE patients wit
12. a calibra o excepto nos seguintes casos quando estiver carregado a bordo do analisador um cartucho de reagentes com um lote novo quando os valores dos controlos n o estiverem dentro do intervalo de aceitabilidade quando for executada a opera o de manuten o do analisador quando tiver expirado a validade da master curve recalibrada O prazo de validade da master curve recalibrada para o kit ZENIT RA dsDNA IgG de 15 dias A gest o da recalibra o accionada automaticamente pelo analisador IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 8 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 Ensaio Premir o bot o de in cio 1 O sistema aspira 100 uL de Diluente de Amostras 20 uL de Part culas Magn ticas 100 uL de Diluente de Amostras e 4 uL de amostra ou controlo para os calibradores o soro positivo fornecido pr diluido com o Diluente de Amostras e o volume recolhido de 104 uL As solu es e a suspens o aspiradas s o distribu das na cuvete de reac o A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos Depois desta fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas S o distribu dos 200 uL de conjugado na cuvete A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos Pak WN Depois desta ltima fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas e a cuvete transferida para a c
13. da nica de c lulas HEp 2 a positividade por ANA em IFI indica a presen a de auto anticorpos dirigidos contra diferentes antig nios nucleares ADN histonas prote nas n o hist nicas antig nios nucleolares etc ou citoplasm ticos A positividade dos ANA a t tulo significativo deve ser aprofundada com a pesquisa dos auto anticorpos anti ENA e anti dsADN A verifica o de positividade dos ANA e de uma ou mais especificidades para anti ENA e ou para anti dsADN extremamente sugestiva de patologias auto imunes sist micas l pus eritematoso sist mico LES s ndroma de Sjogren SS esclerose sist mica progressiva SSp dermatomiosite polimiosite DM PM e doen a mista do tecido conectivo MCTD Os anticorpos anti ADN incluem um grupo heterog neo de imunoglobulinas com especificidades e avidez diferentes Esses podem ser dirigidos contra o ADN em h lice dupla dSADN ou contra o ADN com uma h lice SsADN Os anticorpos anti dsADN reconhecem epitopos localizados ao longo do esqueleto deoxiribosio fosfato e o site de liga o inclui cerca de 6 nucledtidos Pelo contr rio os anticorpos anti ssADN reconhecem regi es nucleot dicas individuais e isso d se quando a mol cula est desnaturada ou parcialmente aberta Os anti ssADN s o anticorpos de baixa avidez e t m um valor de diagn stico IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 1 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 reduzido d
14. das part culas magn ticas deve ser agitado por rota o horizontal de modo a facilitar a suspens o das part culas Executar a opera o evitando a forma o de espuma IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 6 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 Colocar o cartucho de reagentes na area dos reagentes do analisador utilizando as indica es para o efeito e deixar em agita o durante pelo menos 30 minutos antes de usar A coloca o do cartucho de reagentes determina simultaneamente a leitura do c digo de barras de identifica o Se o r tulo do cartucho estiver estragado ou que a leitura falte por qualquer outro motivo os dados de identifica o do cartucho de reagentes podem ser introduzidos manualmente O analisador mant m automaticamente as part culas magn ticas em agita o cont nua Se o cartucho de reagentes for retirado do analisador deve ser conservado na vertical e s escuras entre 2 e 8 C Carregamento dos calibradores e dos controlos Os calibradores e os controlos ZENIT RA est o prontos a usar Deixar os calibradores e os controlos a temperatura ambiente durante 10 minutos e agitar cuidadosamente manualmente ou com um vortex evitando a forma o de espuma N o inverter o tubo e n o retirar a tampa perfuradora tampa amarela para os calibradores e tampas verdes ou azuis para os controlos No caso em que os calibradores ou os controlos sejam utilizados pela primeira vez
15. evido a sua elevada especificidade Os anticorpos anti dsADN t m um valor de diagn stico elevado como marcadores auto anticorpos em doentes com LES e por isso fazem parte dos crit rios de classifica o da LES segundo o American College of Rheumathology A sua preval ncia na LES varia de 40 a 80 dependendo dos casos seleccionados e do m todo de ensaio Para al m do seu papel no diagn stico o ensaio dos anti dsADN pode ter um papel importante na monitoriza o da LES e em especial nos doentes com nefrite l pica Isso est estritamente associado ao seu papel patogen tico os agravamentos da LES s o antecedidas por um incremento constante e progressivo dos anti dsADN seguido de uma repentina descida no momento em que se verifica clinicamente o seu agravamento justificado pelo dep sito de imunocomplexos ADN anti dsADN de alta avidez ao n vel glomerular Por estes motivos o seu ensaio muito utilizado na fase de diagn stico e na monitoriza o da LES PRINC PIO DO M TODO O kit ZENIT RA dsDNA IgG para a determina o quantitativa das IgG espec ficas anti dsADN utiliza um m todo imunol gico indirecto em dois passos baseado no princ pio da quimioluminesc ncia O antig nio espec fico utilizado para revestir as part culas magn ticas fase s lida e um anticorpo anti IgG humano este marcado com um derivado do ster de acridina conjugado Durante a primeira incuba o os anticorpos espec ficos presente
16. h anti dsDNA antibody anti dsDNA Am Rheum Dis 1985 44 245 51 TECHNOGENETICS S r l Viale Casiraghi 471 20099 Sesto San Giovanni MI It lia Distribuido por A Menarini Diagnosticos Lda Quinta da Fonte Edificio D Manuel 2 B 2770 203 Pago de Arcos Tel 351 210 93 00 00 Fax 351 210 93 00 01 www menarinidiag pt IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 15 de 15
17. ilidade foi calculada analisando os resultados da determina o de cinco soros um negativo e quatro positivos com diferentes concentra es de anti dsADN IgG executada individualmente com dois lotes de reagentes diferentes em 30 sess es diferentes IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 11 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 A concentra o do soro anti dsADN IgG negativo N1 deu um resultado dentro do intervalo de 0 2 a 7 4 Ul mL Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 4 soros positivos Amostra EU SD CV P1 63 9 2 81 4 4 P2 88 0 5 05 5 7 P3 111 0 5 26 4 7 P4 193 4 81 7 4 2 Linearidade das Dilui es A precis o das dilui es do kit ZENIT RA dsDNA IgG foi avaliada utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP6 A do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Foram doseadas dilui es seriadas de 2 soros de concentra o elevada de IgG anti dsADN dilui es executadas com o Diluente de Amostra Os resultados deste estudo est o resumidos na tabela seguinte Concentra o Concentra o 5 Factor de h Recupera o Amostra dilui o medida prevista o e Ul mL Ul mL 1 2 Torna se necess rio sublinhar que nem todos os soros quando medidos em dilui es diferentes podem dar resultados lineares dentro do intervalo de medi o dependendo o resultado n o s da
18. ito de S dio utilizando dispositivos de protec o individual adequados bata luvas culos Eliminar o material utilizado e os res duos da embalagem afectada pelo derramamento de acordo com as normas nacionais para a elimina o de lixos potencialmente infecciosos Alguns reagentes cont m azida de s dio como conservante Como a azida de s dio pode reagir com o chumbo cobre e lat o revestido de chumbo formando azidas explosivas nos canos aconselha se a n o deitar reagentes ou res duos no esgoto mas respeitar as normas nacionais em mat ria de elimina o de lixos potencialmente perigosos Precau es de utiliza o Para assegurar a obten o de resultados v lidos devem ser rigorosamente respeitadas estas instru es de utiliza o e as indica es do manual de opera o do instrumento Os reagentes fornecidos no kit devem ser utilizados exclusivamente com o sistema ZENIT RA Analyzer Os componentes do cartucho de reagentes n o podem ser retirados do cartucho e reagrupados novamente N o usar o kit para al m do prazo de validade IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 5 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 PREPARA O DOS REAGENTES Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Conservar os reagentes fornecidos no kit entre 2 e 8 C em posi o vertical e s escuras Nestas condi es o cartucho de reage
19. k LoB o valor mais elevado que podemos esperar numa s rie de amostras que n o contenham o analito O Limit of Blank determinado como 95 por cento de popula o negativa resultou igual a 16 9 Ul mL com o Lote de reagentes n 1 DESEMPENHO Advert ncia os dados apresentados n o representam as especifica es de funcionamento do kit mas constituem a evid ncia experimental em como o kit funciona dentro dessas especifica es no modo previsto pelo fabricante Precis o e Reprodutibilidade A precis o e a reprodutibilidade do kit ZENIT RA dsDNA IgG foram avaliadas utilizando um protocolo baseado nas directrizes do documento EP5 A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI A precis o foi calculada analisando os resultados quatro soros com 20 repeti es um negativo e tr s positivos com diferentes concentra es de anti dsADN IgG executados com dois lotes de reagentes diferentes na mesma sess o experimental A concentra o do soro anti dsADN IgG negativo NC deu um resultado dentro do intervalo de 7 8 a 13 5 Ul mL e de 3 6 a 8 2 Ul mL respectivamente com o Lote de reagentes n 1 e 2 2 Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 3 soros positivos Reagentes Concentra o A Amposta Lote n m dia Ul mL P GM w EE 70 6 232 33 0 2 73 4 1 18 1 6 EO AL RS PI 936 8 382 0 2 98 8 3 76 3 8 HP Fr io do SA 2 156 2 3 32 2 1 A reprodutib
20. nte e os calibradores que n o tiverem sido abertos estar o est veis at ao fim do prazo de validade O cartucho de reagentes depois de aberto poder ser utilizado por 60 dias se conservado no frigor fico entre 2 e 8 C ou a bordo da m quina Os calibradores depois de abertos poder o ser utilizados por 60 dias se conservados no frigor fico entre 2 e 8 C e se a perman ncia a bordo da m quina n o ultrapassar as 6 horas por sess o N o congelar os reagentes e os calibradores PREPARA O E CONSERVA O DAS AMOSTRAS O ensaio deve ser executado em amostras humanas de soro e de plasma EDTA Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas e turvas Se o ensaio for executado mais de 8 horas depois da colheita das amostras separar o soro do co gulo ou o plasma dos gl bulos vermelhos transferir o sobrenadante do tubo prim rio para um tubo secund rio seco Antes de serem analisadas as amostras podem ser conservadas no frigor fico entre 2 e 8 C no maximo por 7 dias Se a dosagem for executada mais de 7 dias depois conservar as amostras congeladas lt 20 C Evitar congelamentos e descongelamentos repetidos PROCEDIMENTO Para obter desempenhos anal ticos v lidos respeitar escrupulosamente as instru es do manual de opera o do instrumento Carregamento dos reagentes Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar Antes de inserir o cartucho de reagentes no sistema o tubo
21. s na amostra nos calibradores ou nos controlos ligam se fase s lida Durante a segunda incuba o o conjugado reage com os anticorpos anti dsADN IgG capturados pela fase s lida Depois de cada incuba o o material n o aderido fase s lida removido por aspira o e subsequente lavagem A quantidade de conjugado marcado que ficou aderido fase s lida avaliada atrav s da reac o de quimioluminesc ncia e da medi o do sinal luminoso O sinal gerado expresso em unidades relativas de luz RLU Relative Light Unit indicativo da concentra o de anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores e nos controlos AUTOMATIZA O O Analisador ZENIT RA executa automaticamente todas as opera es previstas pelo protocolo do ensaio adi o na cuvete de reac o as amostras calibradores controlos part culas magn ticas conjugado e solu es de activa o de quimioluminesc ncia separa o magn tica e lavagem das part culas medi o da luz emitida O sistema calcula os resultados do ensaio para as amostras e para os controlos atrav s da curva de calibra o memorizada e imprime um relat rio que inclui todas as informa es relativas ao ensaio e ao doente IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 2 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 MATERIAIS E REAGENTES Materiais e reagentes fornecidos Part culas magn ticas revestidas com dsADN em
22. sas amostras devem ser analisadas novamente Neste caso necess rio executar uma recalibra o antes da repeti o do ensaio IFUOOSZENIT RA Vers o 01 18 de Junho de 2010 P gina 9 de 15 ZENIT RA dsDNA IgG REF 41413 C LCULO E INTERPRETA O DOS RESULTADOS C lculo dos resultados A concentra o dos anticorpos IgG anti dsADN presentes nas amostras em exame calculada automaticamente pelo sistema Os valores podem ser visualizados no ecr ou impressos As concentra es s o expressas em Ul mL O c lculo da concentra o na amostra efectuado atrav s da leitura do resultado obtido para cada amostra numa curva de calibra o elaborada com um sistema de fitting log stico de quatro par metros 4PL Y ponderado corrigida periodicamente em fun o dos resultados obtidos para os calibradores Para mais informa es sobre o sistema de c lculo dos resultados consultar o manual de instru es do sistema Interpreta o dos resultados O intervalo de medi o do ensaio ZENIT RA dsDNA IgG de 0 0 a 600 Ul mL Os valores inferiores a 0 0 Ul mL s o valores extrapolados e podem ser indicados como iguais a 0 0 Ul mL Os valores superiores a 600 Ul mL podem ser indicados como superiores a 600 Ul mL ou a amostra deve ser testada novamente ap s dilui o Os resultados das amostras podem ser interpretados do seguinte modo Ul mL Interpreta o lt 30 A amostra
23. terferentes indicadas na tabela seguinte at concentra o testada Subst ncias Potencialmente A por Concentra o m xima testada Interferentes Bilirrubina livre 20 mg dL Bilirrubina conjugada 28 mg dL Hemoglobina 500 mg dL Acidos gordos 3000 mg dL Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas ou turvas Especificidade anal tica Reac es cruzadas Para avaliar as potenciais reac es cruzadas do antig nio utilizado para sensibilizar as part culas magn ticas foi conduzido um estudo com 18 amostras todas com n veis altos de outros auto anticorpos e negativos a anti dsADN IgG As amostras utilizadas estavam assim subdivididas SS A 2 SS B 2 Jo 1 1 Scl 70 2 Cenp B 2 Nucleolares 1 B2 GPI CL IgG 1 Gliadina t TG 2 RF 2 MPO 1 PR3 1 e CCP 1 O estudo n o demonstrou nenhuma reac o cruzada significativa do antig nio em fase s lida com os outros auto anticorpos Efeito de satura o em doses elevadas Alguns m todos imunol gicos empregues para a determina o de amostras que cont m o analito em concentra es extremamente elevadas podem fornecer n veis aparentes de analito que est o subestimados em rela o ao conte do real Efeito hook O m todo utilizado no kit ZENIT RA dsDNA IgG sendo um m todo com duas incuba es n o sofre esse efeito Uma amostra com concentra o extremamente elevada acima do intervalo de medi o de IgG anti dsA

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