QUANTA FlashTM h-tTG IgA
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1. Na tabela abaixo mostram se os resultados dos 25 doentes com dermatite herpetiforme Dermatite Herpetiforme Diagn stico An lise N 25 DH N o DH Total Intervalo de seguran a de 95 QUANTA Flash Positivo 20 0 20 Sensibilidade 80 0 59 3 93 2 hATG IgA EQ Negativo 5 i E Total 25 0 25 Estas 5 amostras foram tamb m negativas pelo h tTG IgA ELISA Precis o e reprodutibilidade Avaliou se a precis o do ensaio QUANTA Flash h tTG IgA testando 7 doentes de acordo com o CLSI EP5 A2 e abaixo encontram se os dados resumidos Durante os Entre Entre Testes Testes Dias Total Amostra N M dia UQ DP CV DP CV DP CV DP CV Dt 1 100 8 7 0 3 3 5 0 2 2 5 0 0 0 0 0 3 4 0 Dt 2 100 22 9 0 6 2 6 0 7 3 0 0 3 1 3 1 0 4 2 Dt3 100 25 1 0 5 2 2 0 8 3 2 0 5 1 8 1 1 4 2 Dt 4 100 40 5 1 2 2 9 1 5 3 6 0 0 0 0 1 8 4 5 Dt 5 100 69 6 1 5 2 2 2 5 3 6 1 0 1 4 3 1 4 4 Dt6 100 342 1 10 6 3 1 9 9 2 9 4 6 1 3 15 2 4 4 Dt 8 84 3476 1 224 3 6 5 277 4 8 0 171 6 4 9 395 8 11 4 Intervalo de medi o anal tica limites e linearidade De acordo com a CLSI EP17 A o limite de dete o inferior deste ensaio 465 URL que est muito abaixo do fundo do intervalo de medi o anal tico 1 9 UQ Todo o intervalo de medi o anal tico desde 1 9 UQ at 4965 5 UQ linear Realiz2. Add Trigger 1 bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite coloque o Ativador 1 no suporte com o c digo de cores vermelho Clique em Finish Volte a colocar a gaveta dos res duos e feche a Para substituir o recipiente da lavagem do sistema clique no bot o Bulks Inventory F9 canto superior direito No ecr Inventory Bulks clique no bot o Sys Rinse Na nova janela Add System Rinse Remove botiles clique em Next Siga as instru es na janela nova Add System Rinse Add bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite se necess rio clique em Finish Para esvaziar o recipiente de res duos de fluido a partir do ecr Inventory Bulks clique no bot o Fluid Waste Retire e elimine os res duos de fluido Clique em Next Quando tiver substitu do a garrafa vazia clique em Finish M todo Prepara o do cartucho de reagente Da primeira vez que utilizar o cartucho de reagente tem de seguir os passos seguintes para instalar corretamente o cartucho no instrumento BIO FLASH Nota n o utilize o cartucho de reagente se observar quaisquer sinais de danos 1 Coloque o cartucho de reagente numa superf cie s lida Com uma m o segure o cartucho de reagente no lugar Com a outra m o segure firmemente a patilha vermelha na parte de tr s do cartucho de reagente e puxe a totalmente para fora Enquanto pressiona as duas patilhas nos lados da tampa perfurada parte cinzenta exer a press o na pa
3. QUANTA Flash uma marca comercial registada da INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH uma marca comercial registada da Biokit S A O 2013 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos da Am rica Assist ncia T cnica apenas EUA e Canad 877 829 4745 Assist ncia T cnica Fora dos EUA 1 858 805 7950 support inovadx com Representante Autorizado na UE Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621100PRT Dezembro de 2013 Revis o 2
4. 3 N o transfira os reagentes calibradores para tubos secund rios O instrumento utiliza os c digos de barras nos tubos para combinar os calibradores com o tipo de ensaio adequado 4 Ap s aberto um tubo calibrador mant m se bom durante um per odo de 8 horas quando deixado destapado inserido no instrumento ap s o qual o reagente tem de ser eliminado 5 A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir por limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Os res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza recomendado do instrumento conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Condi es de conserva o 1 Conserve os calibradores por abrir a 2 8 C N o congele Os reagentes permanecem est veis at data de validade indicada quando conservados e manipulados conforme descrito no protocolo 2 Devem eliminar se os calibradores abertos ap s 8 horas deixados destapados inseridos no instrumento Procedimento 1 Cada lote novo de cartucho de reagente tem de ser calibrado antes da primeira utiliza o O software n o permitir utilizar um lote novo at que seja calibrado 2 Antes da utiliza o tem de misturar se suavemente cada calibrador para garantir a homogeneidade Evite a forma o de espuma uma vez que as bolhas podem interferir com a dete o do n vel do l quido d
5. es adicionais e resolu o de problemas com este ensaio contacte a assist ncia t cnica da INOVA Diagnostics Inc no endere o ou atrav s do n mero de telefone indicados no final deste Folheto de Instru es Para esvaziar o recipiente de res duos s lidos abra a gaveta dos res duos Remova o recipiente de res duos s lidos e elimine adequadamente as tinas usadas Substitua o recipiente de res duos s lidos feche a gaveta dos res duos e clique em Yes na janela Empty Waste Drawer Para substituir os ativadores clique no bot o Bulks Inventory F9 superior direito a No ecr Inventory Bulks clique no bot o Triggers do lado esquerdo Aparecer uma janela nova intitulada Add Triggers Remove old bottles b Abra e retire a gaveta dos res duos do instrumento BIO FLASH Elimine quaisquer tinas da gaveta de res duos secos Clique em Yes na janela Empty Waste Drawer Retire as garrafas ativadoras dos respetivos suportes e clique no bot o Next Desaperte as garrafas antigas de ativadores das tampas e substitua por ativadores novos Certifique se de que as coloca uma de cada vez com as tampas com o c digo de cores correspondente branca com branca e vermelha com vermelha c Siga as instru es na janela nova Add Triggers Add Trigger 2 bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite coloque o Ativador 2 no suporte com o c digo de cores branco Clique em Next d Siga as instru es da janela Add Triggers
6. 909 911 Dieterich W Ehnis T Bauer M Donner P Volta U Riecken EO Schuppan D Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease Nature Medicine 1997 3 797 801 S rdy M Odenthal U K rp ti S Paulsson M Smyth N Recombinant human tissue transglutaminase ELISA for the diagnosis of gluten sensitive enteropathy Clin Chem 1999 45 2142 2149 Sblattero D Berti lI Trevisiol C Marzari R Tommasini A Bradbury A Fasano A Ventura A Not T Human recombinant tissue transglutaminase ELISA an innovative diagnostic assay for celiac disease Am J Gastroenterology 2000 95 1253 1257 Marietta EV Camilleri MJ Castro LA Krause PK Pittelkow MR Murray JA Transglutaminase autoantibodies in dermatitis herpetiformis and Celiac Sprue J Invest Dermatol 2007 128 332 335 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL 5 Edition Centers for Disease Control National Institute of Health 2009 S mbolos utilizados lt f E eo RAe OS E o ONTROL ONTR EORI u Dispositivo m dico para diagn stico In Vitro Consultar as instru es de utiliza o Limite de temperatura N o reutilizar Riscos biol gicos C digo do lote N mero de cat logo Utilizar at Fabricante Representante autorizado Cont m o suficiente para lt n gt testes Controlo Positivo Controlo Negativo Calibrador 1 Calibrador 2 Reciclar a caixa de papel Este lado para cima
7. com o instrumento BIO FLASH O protocolo para a ressuspens o deve ser criteriosamente respeitado Uma vez aberto este cartucho de reagente deve guardar se no carrossel do reagente do instrumento Deve ter se cuidado para evitar entornar os reagentes quando se coloca pela primeira vez o cartucho de reagente no instrumento A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Os res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza recomendado do instrumento conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Condi es de conserva o 1 Conserve os cartuchos de reagente e o tamp o de ressuspens o por abrir a 2 8 C N o congele Os reagentes permanecem est veis at data de validade indicada quando conservados e manipulados conforme descrito no protocolo Devem guardar se no instrumento os cartuchos de reagentes abertos O software BIO FLASH monitoriza as datas de validade durante a utiliza o bem como a data de validade do lote do reagente per odo de armazenamento do cartucho do reagente O sistema n o permite a utiliza o de um cartucho que tenha expirado Colheita prepara o e manuseamento de amostras Este procedimento deve ser efetuado numa amostra de soro As amostras de soro com contamina o microbiana que sofreram tra
8. determina es 701100 a Esferas paramagn ticas revestidas de h tTG conservadas antes da primeira utiliza o b Tamp o de ensaio cor de rosa contendo tamp o salino Tris Tween 20 estabilizadores proteicos e conservantes C Marcador IgA anticorpo IgA anti numano marcado a isoluminol contendo tamp o estabilizadores proteicos e conservante Tamp o de ressuspens o 1 frasco cor de rosa contendo tamp o estabilizadores proteicos e conservantes Advert ncias 1 O tamp o de ensaio cont m um qu mico 0 02 cloranfenicol conhecido no Estado da Calif rnia por causar cancro A azida de s dio utilizada como conservante A azida de s dio venenosa e pode ser t xica se for ingerida ou absorvida pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de canaliza es de chumbo ou cobre formando azidas met licas potencialmente explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a acumula o de azida Usar equipamento de prote o individual apropriado para trabalhar com os reagentes fornecidos Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Respeitar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 2 3 4 Este produto destina se a Utiliza o para Diagn stico In Vitro Este ensaio destina se apenas a utiliza o
9. no instrumento tem de introduzir no software o nome o lote a data de validade o valor ou dose e as informa es de desvio padr o DP alvo 2 A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctrl M v Selecione QC Ctrl F2 Clique no bot o New QC Material 3 Com cada kit de Controlos est inclu da uma ficha de dados espec fica do lote Introduza primeiro o nome o n mero do lote e a data de validade desta folha de dados no software Em seguida clique no bot o Add Assay Na nova janela certifique se de que a caixa Show All Assays est assinalada Selecione o ensaio h tTG IgA da lista e clique em Add Por fim introduza a dose alvo e o DP alvo Clique em Save Execute este processo para ambos os controlos Para criar um novo lote para materiais de CQ existentes 1 Antes de utilizar um lote novo de Controlos QUANTA Flash h tTG IgA pela primeira vez tem de introduzir no software o lote a data de validade o valor ou dose e as informa es de DP alvo 2 A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctri M v Selecione QC Ctrl F2 Realce o ensaio h tTG IgA na coluna do lado esquerdo Em seguida realce o material do controlo adequado direita TTGAN para o Controlo Negativo ou TTGAP para o Controlo Positivo Clique no bot o New QC Lot 3 Com cada kit de Controlos est inclu da uma ficha de dados espec fica do lote Introdu
10. QUANTA Flash h tTG IgA 701103 Reagents 701100 Para Utiliza o em Diagn stico In Vitro Utiliza o prevista O QUANTA Flash h tTG IgA um imunoensaio quimioluminescente IEQ para a dete o semiquantitativa de anticorpos IgA da transglutaminase do tecido anti humano h tTG em soro humano A presen a de anticorpos IgA anti h tTG em conjun o com conclus es cl nicas e outros testes laboratoriais pode auxiliar no diagn stico de enteropatias sens veis ao gl ten como a doen a cel aca DC e a dermatite herpetiforme DH Resumo e explica o do teste A doen a cel aca uma condi o cr nica cujas caracter sticas principais incluem a inflama o e o esmagamento caracter stico da mucosa intestinal resultando numa s ndroma de m absor o conhecida como uma enteropatia sens vel ao gl ten A etiologia exata da doen a permanece desconhecida exce o da gliadina fra o sol vel do lcool de gl ten do trigo que claramente o agente t xico Inicialmente utilizou se uma s rie de biopsias intestinais para diagnosticar a doen a cel aca Mais recentemente t m sido sugeridos testes sorol gicos para anticorpos de antigliadina antiendomisial e anti tTG para examinar os doentes com enteropatia sens vel ao gl ten bem como para controlar a conformidade diet tica A Sociedade Europeia de Gastrenterologia e Nutri o Pedi trica recomendou a utiliza o de marcadores de anticorpos tais como os antico
11. arcados com c digo de barras contendo 0 5 ml de reagente pronto a usar Controlos contendo anticorpos IgA humanos para h tTG em estabilizadores e conservantes 2 Controlo Positivo QUANTA Flash h tTG IgA dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 5 ml de reagente pronto a usar Controlos contendo anticorpos IgA humanos para h tTG em estabilizadores e conservantes Advert ncias 1 Todo o material de origem humana utilizado na prepara o dos controlos deste produto foi testado e deu resultados negativos com m todos aprovados pela FDA para anticorpos de VIH HBsAg e VHC Contudo nenhum teste pode garantir com certeza absoluta a aus ncia de VIH VHB VHC ou outros agentes infecciosos Portanto devem manipular se os Controlos QUANTA Flash h tTG IgA como se fossem qualquer material potencialmente infeccioso 2 Usar equipamento de prote o individual apropriado para trabalhar com os reagentes fornecidos 3 Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Respeitar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro 2 Os Controlos QUANTA Flash h tTG IgA destinam se a utiliza o com o ensaio QUANTA Flash h tTG IgA 3 N o transfira os reagentes do controlo para tubos secund rios O instrumento utiliza os c digos de barras nos tubos para identificar o controlo 4 Uma vez abe
12. com doen a cel aca ou dermatite herpetiforme s o positivos para autoanticorpos IgA h tTG Para al m disso muitas vezes um resultado h tTG IgA negativo num doente n o tratado pode explicar se por defici ncia IgA seletiva uma conclus o relativamente frequente na doen a cel aca A INOVA oferece o kit QUANTA Flash h tTG IgG para estes doentes 2 Os resultados deste ensaio devem ser utilizados em conjunto com as conclus es cl nicas e outros testes serol gicos 3 A ressuspens o inadequada das esferas revestidas de h tTG pode apresentar valores inferiores aos de uma ressuspens o correta 4 As caracter sticas de desempenho deste ensaio n o foram determinadas para outras matrizes al m do soro Valores esperados Determinou se o corte do ensaio testando 446 amostras caracterizadas clinicamente sangramentos simples de doentes que foram diagnosticados claramente com ou sem doen a cel aca e n o estavam a fazer uma dieta sem gl ten Utilizaram se estas amostras 117 clinicamente positivas e 329 clinicamente negativas para ajustar o corte para 20 UQ para otimizar a sensibilidade e a especificidade a 92 3 e 98 2 respetivamente neste conjunto de forma o Compara o do m todo com dispositivo implicado As amostras para a an lise de compara o do m todo inclu ram as amostras dos estudos de valida o cl nica doentes com DC sem DC e com dermatite herpetiforme que estavam dentro do intervalo pass vel de relat
13. lash h tTG IgA vendidos separadamente n mero de pe a 701102 ap s a calibra o de um lote de cartucho de reagente Rastreabilidade Atualmente n o existe uma norma internacional reconhecida para a medi o de anticorpos da transglutaminase tecidular anti numana da IgA Limita es Estes calibradores est o concebidos para 4 calibra es O tempo total em que os tubos calibradores podem estar destapados dentro do instrumento de 8 horas Se se deixarem os calibradores destapados dentro do instrumento durante mais tempo dever o ser eliminados Utilizar os mesmos tubos calibradores mais de 8 horas pode originar uma calibra o incorreta do ensaio que por sua vez pode fornecer resultados errados QUANTA Flash h tTG IgA 701102 Controls Para Utiliza o em Diagn stico In Vitro Utiliza o prevista Utilizam se os Controlos QUANTA Flash htTG IgA para controlo da qualidade do kit de imunoensaio quimioluminescente IEQ QUANTA Flash h tTG IgA testado num instrumento BIO FLASH Resumo e princ pios do procedimento Os Controlos QUANTA Flash h tTG IgA s o constitu dos por um Controlo Negativo e um Controlo Positivo Cada um cont m uma quantidade diferente de anticorpos IgA anti h tTG O Controlo Negativo e o Controlo Positivo s o utilizados para monitorizar o desempenho anal tico do imunoensaio quimioluminescente QUANTA Flash h tTG IgA Reagentes 1 Controlo Negativo QUANTA Flash h tTG IgA dois 2 tubos m
14. libradores em v rios instrumentos com diversos lotes de reagentes Reagentes 1 Calibrador 1 QUANTA Flash h tTG IgA dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 3 ml de reagente pr dilu do pronto a usar Calibradores contendo anticorpos IgA humanos para h tTG em estabilizadores e conservantes 2 Calibrador 2 QUANTA Flash h tTG IgA dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 3 ml de reagente pr dilu do pronto a usar Calibradores contendo anticorpos IgA humanos para h tTG em estabilizadores e conservantes Advert ncias 1 Todo o material de origem humana utilizado na prepara o dos calibradores deste produto foi testado e deu resultados negativos com m todos aprovados pela FDA para anticorpos de VIH HBsAg e VHC Contudo nenhum teste pode garantir com certeza absoluta a aus ncia de VIH VHB VHC ou outros agentes infecciosos Portanto devem manipular se os Calibradores QUANTA Flash RNP como se fossem qualquer material potencialmente infeccioso 2 Usar equipamento de prote o individual apropriado para trabalhar com os reagentes fornecidos 3 Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Respeitar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 Este produto destina se utiliza o para diagn stico In Vitro 2 Os calibradores QUANTA Flash h tTG IgA destinam se a utiliza o com o ensaio QUANTA Flash h tTG IgA
15. mento BIO FLASH O instrumento dilui uma amostra do doente 1 17 numa tina pl stica descart vel Pequenas quantidades de soro do doente dilu do as esferas de h tTG e o tamp o de ensaio s o todos combinados numa segunda tina e misturados Incuba se esta tina a 37 C As esferas s o ent o magnetizadas e lavadas v rias vezes Adiciona se ent o tina o anticorpo IgA anti humano conjugado de isoluminol e incuba se a 37 C Mais uma vez as esferas s o magnetizadas e lavadas repetidamente O conjugado de isoluminol produz uma rea o luminescente quando se adicionam os reagentes Ativadores tina A luz produzida a partir desta rea o medida como i Unidades Relativas de Luz URL pelo sistema tico BIO FLASH As URL s o proporcionais quantidade de conjugado de isoluminol ligado que por sua vez proporcional quantidade de anticorpos IgA anti h tTG ligados ao h tTG nas esferas O ensaio QUANTA Flash h tTG IgA utiliza uma Curva Modelo espec fica do lote predefinida que carregada no instrumento atrav s do c digo de barras do cartucho de reagente Baseando se no resultado da execu o de dois calibradores cria se uma Curva de Trabalho espec fica do instrumento que o software utiliza para calcular unidades quimioluminescentes UQ a partir do valor da URL obtido para cada amostra Reagentes 1 O cartucho de reagente QUANTA Flash h tTG IgA cont m os reagentes seguintes para 50 determina es 701103 100
16. o O software n o permitir utilizar um lote novo at que seja calibrado 2 Consulte a sec o intitulada QUANTA Flash h tTG IgA Calibrators 701101 deste Folheto de Instru es relativamente a instru es pormenorizadas sobre como calibrar o cartucho de reagente 3 Quando a calibra o tiver sido validada o lote do cartucho de reagente onde se realizou a calibra o est pronto a ser utilizado Programa o e realiza o de testes 1 Pressione o bot o Worklist na parte superior do ecr e selecione o separador Racks no fundo 2 Selecione o rack de amostras a utilizar real ando o rack no ecr ou digitalizando o c digo de barras com o leitor de c digo de barras port til Digitalize ou escreva o nome da amostra selecione o tipo de amostra o tipo de recipiente tubo ta a e selecione h tTG IgA a partir do painel do ensaio Repita estes passos para todas as amostras 3 Carregue as amostras nas posi es selecionadas no rack de amostras e carregue o rack no carrossel de amostras do instrumento 4 Se todos os materiais necess rios estiverem colocados no instrumento o cone start estar dispon vel a verde na parte superior do ecr Pressione o cone Start F4 para iniciar o ensaio Controlo de qualidade Os Controlos h tTG IgA QUANTA Flash vendidos em separado INOVA N mero de Item 701102 cont m os Controlos h tTG IgA Positivos e Negativos Consulte a sec o intitulada QUANTA Flash h tTG IgA Con
17. os instrumentos Destape cada tubo calibrador e coloque ambos num rack de amostras com os c digos de barras virados para a frente atrav s dos espa os no rack Coloque o rack de amostras no carrossel de amostras do instrumento BIO FLASH e feche a porta O instrumento ler os c digos de barras nos tubos calibradores e identificar o cartucho de reagente necess rio Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH 3 O instrumento testar ent o cada calibrador em triplicado Ap s os Calibradores terem sido testados o software exigir a valida o da calibra o A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctrl M V Selecione Calibration Ctrl F3 Na janela Calibration realce o ensaio pretendido e clique em Details 4 Na nova janela Calibration Details selecione a calibra o que acabou de ser executada A Curva Modelo aparece como uma linha tracejada ao passo que a Curva de Trabalho aparece como uma linha cont nua Se os resultados da calibra o forem v lidos aparecer um bot o de valida o no canto inferior esquerdo do ecr Clique no bot o Validate Calibration 5 Quando a calibra o tiver sido validada o lote do cartucho de reagente onde se realizou a calibra o est pronto a ser utilizado Recomenda se testar os Controlos QUANTA F
18. ou se um estudo de linearidade de acordo com a CLSI EP6 A e abaixo encontram se os dados resumidos mos MS E MES 1 9 45 4 1 0 0 95 1 05 0 93 0 26 2 2 1 000 2 2 8 118 3 1 03 0 99 1 06 0 68 1 38 2 7 1 000 j 3 0 141 3 0 99 0 95 1 02 1 05 1 46 3 56 1 000 E 17 6 724 7 1 02 0 98 1 06 7 81 7 25 22 87 1 000 x 2 2 2699 0 1 05 1 0 1 09 31 18 18 39 80 76 1 000 6 10 0 5428 0 0 92 0 86 0 98 100 9 267 2 65 5 0 990 QUANTA Flash h tTG IgA 701101 Calibrators Para Utiliza o em Diagn stico In Vitro Utiliza o prevista Os Calibradores QUANTA Flash h tTG IgA destinam se a utiliza o com o imunoensaio quimioluminescente QUANTA Flash h tTG IgA IEQ no instrumento BIO FLASH Cada calibrador estabelece um ponto de refer ncia para a curva de trabalho utilizada para determinar valores de Unidades Quimioluminescentes UQ na medi o de anticorpos IgA anti h tTG em soro Resumo e princ pios do procedimento O QUANTA Flash h tTG IgA IEQ utiliza uma Curva Modelo espec fica do lote predefinida que est armazenada no c digo de barras do cartucho de reagente Os Calibradores QUANTA Flash htTG IgA est o concebidos para produzir uma Curva de Trabalho espec fica do instrumento a partir de par metros da Curva Modelo com um ponto de decis o baseado nas caracter sticas de desempenho e na avalia o cl nica do QUANTA Flash h tTG IgA IEQ Antes da atribui o do valor testam se os ca
19. r inferior a 1 9 UQ ent o o sistema BIO FLASH indic lo como lt 1 9 UQ Visto ser inferior a 20 UQ considera se um resultado negativo Se o resultado de um doente for superior a 4965 5 UQ ent o o sistema BIO FLASH indic lo como gt 4965 5 UQ Este considerado um resultado positivo O software BIO FLASH disponibiliza uma op o de Novo teste autom tico Se estiver selecionada esta op o o instrumento retestar automaticamente 6 qualquer amostra que tenha um resultado gt 4965 5 UQ diluindo a mais por um fator de 10 colocando o valor medido dentro do IMA O resultado final ser calculado pelo software tendo em conta o fator de dilui o adicional Uma vez que o valor mais elevado que pode ser medido 4965 5 UQ o valor mais elevado que pode ser apresentado 49 655 UQ Interpreta o dos resultados Cada laborat rio aconselhado a verificar o intervalo de refer ncia fornecido pelo fabricante e pode estabelecer o seu pr prio intervalo normal baseando se nos seus pr prios controlos e na popula o de doentes de acordo com os procedimentos estabelecidos pelo mesmo Sugere se que os resultados apresentados pelo laborat rio incluam a declara o Obtiveram se os resultados seguintes com o imunoensaio quimioluminescente INOVA QUANTA Flash h tTG IgA Os valores obtidos com m todos de ensaio de diferentes fabricantes n o podem ser comparados Limita es do procedimento 1 Nem todos os doentes
20. rio do ensaio Testaram se estas amostras no QUANTA Flash h tTG IgA e no dispositivo implicado ELISA Compara o do m todo h tTG IgA ELISA Concord ncia de Percentagem N 140 Positivo Negativo Total Intervalo de seguran a de 95 Positivo 69 o 7 CIO Pos 100 Ad A Negativo 0 69 69 Concord ncia Neg 97 2 9 90 3 99 2 Total 69 11 140 Concord ncia Total 99 1 Uma amostra era de um dador de sangue que foi altamente negativo no h tTG IgA ELISA e a outra foi de um doente com dermatite herpetiforme Sensibilidade e especificidade cl nicas O estudo de valida o cl nica incluiu 200 dadores de sangue normais 71 controlos de doen a n o cel aca 77 amostras de uma oficina tTG 27 controlos DC e 50 n o DC e 29 amostras de DC adicionais da biblioteca de soros INOVA Testaram se estas amostras com o kit QUANTA Flash h tTG IgA Abaixo encontram se os resultados destes testes Cl nico N 371 Diagn stico Sensibilidade e Especificidade DC N o DC Total Intervalo de seguran a de 95 Positivo 47 6 53 e 94 0 83 5 QUANTA Flash PV Tica asa htTG IgA EQ Negativo 3 o e o RR Total 50 321 371 Estes s o provenientes de 4 dadores de sangue 3 dos quais positivos pelo ELISA e de 2 pessoas que foram positivas para anticorpos para H pylori e tiroglobulina respetivamente As tr s amostras foram tamb m negativas pelo h tTG IgA ELISA
21. rpos da antigliadina e antiendomisial para reduzir o n mero de biopsias intestinais necess rias para fazer um diagn stico O antig nio endomisial foi identificado como a enzima de liga o cruzada com a prote na tTG O antig nio h tTG tem sido produzido por tecnologia recombinante e pode ter certas vantagens comparando com o antig nio do f gado de porquinho da ndia A dermatite herpetiforme uma doen a de pele que tal como a doen a cel aca causada pela ingest o da prote na do trigo A maioria dos doentes com DH apresenta atrofia das vilosidades jejunais id ntica encontrada nos casos de doen a cel aca e uma dieta rigorosa sem gl ten melhora tanto as les es intestinais como as dermatol gicas Os m todos sorol gicos atuais como os ensaios endomisiais de gliadina nativa e tTG apresentam desempenhos inferiores quando usados para a DH com sensibilidades de apenas 60 75 quando comparados com os valores de 95 ou superiores para a doen a cel aca Princ pios do procedimento O h TG recombinante purificado est revestido por esferas paramagn ticas que est o guardadas no cartucho de reagente em condi es que conservem o antig nio no seu estado reativo Quando o cartucho do ensaio estiver pronto a ser utilizado pela primeira vez adiciona se uma solu o tamp o ao tubo que cont m as esferas e as esferas s o ressuspendidas com o tamp o O cartucho de reagente ent o carregado no instru
22. rte superior do cartucho de reagente at encaixar numa posi o bloqueada As patilhas dever o deixar de estar vis veis N O VIRE O CARTUCHO ABERTO Ressuspens o de micropart culas htTG a Destape o frasco do tamp o de ressuspens o e recolha fluido para a pipeta de transfer ncia fornecida Ser utilizado todo o conte do do frasco b Fa a deslizar a porta na tampa do cartucho de reagente para a posi o de aberta pressionando suavemente o lado estreito do cartucho de reagente e mantenha a nesta posi o Transfira cuidadosamente todo o conte do do frasco para o tubo do reagente de micropart culas atrav s de um nico orif cio na parte superior do cartucho de reagente C Misture os conte dos do tubo do reagente de micropart culas aspirando e doseando o l quido pelo menos 30 vezes Se estiverem vis veis peda os de esferas continue a misturar a solu o mais 30 vezes Se as micropart culas n o ficarem em ressuspens o NAO UTILIZE O CARTUCHO d Certifique se de que pipeta todo o l quido antes de retirar a pipeta do tubo e elimin la Retire o autocolante da parte superior do cartucho de reagente para p r vista os outros tr s orif cios Coloque o cartucho de reagente em qualquer ranhura aberta no carrossel do reagente do instrumento BIO FLASH Calibra o do ensaio 1 Cada lote novo de cartucho de reagente tem de ser calibrado antes da primeira utiliza
23. rto cada tubo de controlo est em condi es de ser utilizado at 15 vezes com um tempo m dio de 10 minutos inserido no instrumento por utiliza o durante um total de 2 horas e meia 5 A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Os res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza recomendado do instrumento conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Condi es de conserva o 1 Conserve os controlos por abrir a 2 8 C N o congele Os reagentes permanecem est veis at data de validade indicada quando conservados e manipulados conforme descrito no protocolo 2 Os controlos est o concebidos para 15 utiliza es com um tempo m dio de 10 minutos inserido no instrumento por utiliza o O tempo total que os tubos de controlo podem estar destapados inseridos no instrumento de 2 horas e meia Se se deixarem os controlos abertos colocados no instrumento por um per odo total superior a 2 horas e meia dever o ser eliminados 3 Para a estabilidade ideal retire os controlos do sistema imediatamente ap s a amostragem e guarde os a 2 8 C tapados no frasco original Procedimento Para criar novos materiais de CQ para o ensaio h tTG IgA 1 Antes de utilizar Controlos QUANTA Flash h tTG IgA pela primeira vez
24. tamento t rmico que cont m part culas vis veis n o devem ser utilizadas N o deve utilizar se soro muito hemolizado ou it rico Ap s a colheita o soro deve ser separado do co gulo O documento H18 A4 da CLSI recomenda as seguintes condi es de conserva o para as amostras N o conservar as amostras temperatura ambiente durante mais de 8 horas 2 Se o teste n o for conclu do num prazo de 8 horas guardar a amostra a 2 8 C 3 Se o teste n o for conclu do num prazo de 48 horas ou para transporte da amostra congelar a 20 C ou temperatura inferior As amostras congeladas devem ser bem agitadas depois de descongelarem e antes de serem testadas Procedimento Materiais Fornecidos 1 1 1 Cartucho de reagente QUANTA Flash h tTG IgA Tamp o de ressuspens o Pipeta de transfer ncia Material adicional necess rio mas n o fornecido Instrumento BIO FLASH com computador Lavagem do Sistema BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8205 Ativadores BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8204 Tinas BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash h tTG IgA N mero de Pe a 701101 Controlos QUANTA Flash h tTG IgA N mero de Pe a 701102 Utilizar o Analisador Quimioluminescente BIO FLASH 1 Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH Para informa
25. ticorpos da transglutaminase tecidular anti numana da IgA Limita es Estes controlos est o concebidos para 15 utiliza es A etiqueta de cada tubo de controlo tem uma fila de 15 caixas que podem marcar se para verificar o n mero de utiliza es O tempo total que os tubos de controlo podem estar destapados inseridos no instrumento de 2 horas e meia Se se deixarem os controlos abertos colocados no instrumento durante mais tempo dever o ser eliminados Refer ncias 1 2 Trier JS Celiac Sprue N Engl J Med 1991 325 1709 1719 Strober W Gluten sensitive enterophy A nonallergic immune hypersensitivity of the gastrointestinal tract J Allergy Clin Immunol 1986 78 202 211 McMillan SA Haughton DJ Biggart JD Edgar JD Porter KG McNeill TA Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy BMJ 1991 303 1163 1165 Valdimarsson T Franzen L Grodzinsky E Skogh T Str m M Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and IgA anti endomysial antibodies 100 positive predictive value for celiac disease in adults Digestive Diseases and Science 1996 41 83 87 Walker Smith JA Guandalini S Schmitz J Shmerling DH Visakorpi JK Revised criteria for diagnosis of celiac disease Report of working group of European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition ESPGAN Arch Diseases of Childhood 1990 65
26. trols 701102 do Folheto de Instru es relativamente a instru es pormenorizadas sobre como introduzir todas as informa es necess rias de cada controlo no software bem como sobre o funcionamento dos controlos Recomenda se que se testem os controlos pelo menos uma vez nos dias em que se utiliza o ensaio no entanto os utilizadores tamb m dever o considerar os requisitos regulamentares locais nacionais C lculo dos resultados Para cada lote novo de QUANTA Flash h tTG IgA cria se na INOVA uma Curva Modelo de cinco pontos Os par metros da curva est o codificados no c digo de barras de cada cartucho de reagente Durante a calibra o cria se uma curva de trabalho espec fica com base na Curva Modelo e utiliza se para converter os valores de URL para UQ A reatividade do anticorpo em IgA para h tTG pode ent o classificar se de acordo com a tabela abaixo Reatividade UQ Negativa lt 20 Positivo Fraco 20 30 Positiva gt 30 A reatividade em UQ est diretamente relacionada com o t tulo do autoanticorpo na amostra do doente Os aumentos e as diminui es nas concentra es do autoanticorpo no doente refletir se o numa subida ou descida correspondente em UQ proporcionalmente quantidade de anticorpo O intervalo de medi o anal tica IMA do ensaio determinado pelos pontos superiores e inferiores da Curva Modelo situa se entre 1 9 UQ e 4965 5 UQ o que corresponde ao intervalo linear do ensaio Se o resultado de um doente fo
27. za as informa es desta ficha de dados no software Estas dever o incluir o n mero do lote a data de validade a dose alvo e o DP alvo Se necess rio clique no bot o Add Assay Na nova janela certifique se de que a caixa Show All Assays est assinalada Selecione o ensaio h_tTG_IgA da lista e clique em Add Clique em Save Execute este processo para ambos os controlos Recomenda se a utiliza o dos controlos QUANTA Flash h tTG IgA uma vez por cada dia que se utilize o ensaio no entanto os utilizadores tamb m dever o considerar os requisitos regulamentares locais nacionais Antes da utiliza o tem de misturar se suavemente cada controlo para garantir a homogeneidade Evite a forma o de espuma uma vez que as bolhas podem interferir com a dete o do n vel do l quido dos instrumentos Destape cada tubo de controlo e coloque ambos num rack de amostras com os c digos de barras virados para a frente atrav s dos espa os no rack Coloque o rack de amostras no carrossel de amostras do instrumento BIO FLASH e feche a porta O instrumento ler os c digos de barras nos tubos de controlo e identificar o cartucho de reagente necess rio Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH 13 Rastreabilidade Atualmente n o existe uma norma internacional reconhecida para a medi o de an
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