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GEN-PROBE APTIMA HPV Assay Package Insert

1. 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay nao tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 51 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima As estimativas de risco absoluto e relativo de doen a 2CIN2 e 2CIN3 com base em todas as avalia es de biopsias para o Aptima HPV Assay e o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado s o apresentados por grupo et rio na Tabela 16 Tabela 16 Popula o ASC US 2 21 anos Riscos absolutos e negativos de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um Teste do DNA do HPV por grupo et rio Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 939 N 865 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Idade Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 N 415 N 389 Positiva 22 0 55 250 20 8 56 269 21a 29 19 6 24 2 6 1 19 0 22 5 8 3 anos Neaativa 3 6 6 165 2 7 13 7 2 5 3 120 2 7 26 1 9 1 5 7 0 0 6 6 4 Preval ncia 14 7 61 415 15 2 59 389 N 262 N 239 Positiva 18 9 18 95 16 0 16 100 i 30 a 39 14 7 22 7 15 8 11 8 19 6 5 6 e anos Negativa 1 2 2 167 3 8 66 7 2 9 4 139 1 9 16 1 0 2 3 5 0 9 5 9 Preval ncia 7 6 20 262 8 4 20
2. Crit rios de aceita o do calibrador A tabela abaixo define os crit rios de RLU para as r plicas dos Calibradores Negativo e Positivo Calibrador negativo Analito 2 0 e lt 45 000 RLU IC gt 75 000 e lt 400 000 RLU Calibrador positivo Analito 2480 000 e lt 1 850 000 RLU IC lt 450 000 RLU Calculo do cutoff do IC O cutoff do IC determinado a partir do sinal do IC sinal intermitente das r plicas do Calibrador Negativo valido Cutoff do IC 0 5 x m dia da RLU do IC das r plicas do Calibrador Negativo v lido Calculo do cutoff do analito O cutoff do analito determinado a partir do sinal do analito sinal continuo das r plicas do Calibrador Negativo v lido bem como do sinal do analito das r plicas do Calibrador Positivo v lido Cutoff d lito m dia da RLU do analito das r plicas do Calibrador Negativo v lido utol do anailto 9 09 x m dia da RLU do analito das r plicas do Calibrador Positivo v lido C lculo do sinal para cutoff S CO do analito O S CO do analito determinado a partir da RLU do analito da amostra de teste e do cutoff do analito para a execu o S CO do analito RLU do analito da amostra de teste cutoff do analito Crit rios de aceita o do controlo apenas Sistemas DTS e Tigris DTS System O Controlo Negativo tem de ter um resultado negativo valido RLU do IC 2 cutoff do IC e S CO do analito lt 0 50 O Controlo Positivo tem d
3. Aptima HPV Assay Total Positiva Negativa Positiva 13 1 14 73 7 Negativa 3 2 5 Total 16 84 2 3 19 Rela o de taxas de resultados positivos reais 0 88 14 16 95 CI 0 65 1 10 Tabela 52 Popula o NILM 2 30 anos Rela o de taxas de resultados positivos falsos Aptima HPV Assay teste de DNA do HPV aprovado pela FDA para mulheres com lt CIN2 estimativas n o ajustadas Teste do DNA do HPV Total Positiva Negativa Positiva 223 19 242 31 0 Aptima HPV Assay Negativa 177 362 539 Total 400 51 2 381 781 Rela o de taxas de resultados positivos falsos 0 61 242 400 95 Cl 0 55 0 66 Aptima HPV Assay 88 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Desempenho clinico do Aptima HPV Assay com esp cimes de citologia liquida SurePath Foram colhidos esp cimes de citologia liquida SurePath de mulheres canadianas n 558 encaminhadas para seguimento devido a um ou mais exames Papanicolau an malos infec o por HPV ou outra raz o Uma al quota 0 5 ml de cada esp cime foi transferida para um Tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima e depois tratada com a Solu o de Transfer ncia Aptima Uma nica r plica de cada esp cime foi testada com o Aptima HPV Assay Uma al quota individual 1 ml de cada esp cime foi retirada para ser avaliada com um teste de PCR para o HPV dispon vel no mercado A sensibili
4. Espermicida f Delfen Vaginal Contraceptive Foam p v Encare Vaginal Contraceptive p v Conceptrol Vaginal Contraceptive p v Vagisil Maximum Strength p v Monistat Soothing Care p v Medica o Antif ngica Anticomich o Monistat 3 Combination Pack p v Target Brand Tioconazole 1 p v Target Brand Mioconazole 3 p v cido Ac tico Glacial EMD M N AX0073 11 v v Sangue Total Sangue total v v Lubrificantes pessoais que cont m Poliquat rnio 15 Aptima HPV Assay 43 AW 11141 601 Rev 003 PT Resultados previstos do Tigris DTS System Preval ncia de mRNA do HPV de alto risco Aptima Resultados previstos do Tigris DTS System Preval ncia de mRNA do HPV de alto risco A preval ncia de infec o por HPV de alto risco varia amplamente e influenciada por diversos factores para os quais a idade o factor com mais preponder ncia Diversos estudos investigaram a preval ncia do HPV conforme determinado pela detec o de DNA do HPV contudo poucos estudos reportaram a preval ncia baseada na detec o do mRNA do HPV oncog nico Foram inscritas num estudo cl nico prospectivo conhecido por ensaio CLEAR mulheres provenientes de diversas cl nicas n 18 representando uma ampla distribui o geogr fica e uma popula o diversa 10 estados dos Estados Unidos da Am rica A preval ncia de amostras de mRNA do HPV positivo observadas no ensaio cl nico f
5. Tabela 55 Limite de detec o no cutoff cl nico do Aptima HPV Assay Alvo Limite de detec o CI de 95 HPV 16 49 4 37 1 73 0 HPV 18 44 0 34 4 62 1 HPV 31 32 5 23 2 52 1 HPV 33 67 5 48 8 106 2 HPV 35 32 7 23 6 51 4 HPV 39 20 9 16 3 29 5 HPV 45 37 1 27 9 54 7 HPV 51 51 1 36 3 83 9 HPV 52 410 2 310 7 595 1 HPV 56 59 4 46 7 81 5 HPV 58 124 1 90 7 190 1 HPV 59 81 1 61 9 116 6 HPV 66 118 5 83 2 202 0 HPV 68 22 4 17 1 32 4 SiHa 0 25 0 19 0 36 HeLa 0 11 0 09 0 14 ME180 0 10 0 08 0 16 MS751 0 17 0 14 0 25 C pias por reac o para transcritos in vitro e c lulas por reac o para linhas celulares Aptima HPV Assay 91 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Precis o do Ensaio A precis o do Aptima HPV Assay foi avaliada em dois estudos utilizando o mesmo painel de 20 membros O Estudo 1 decorreu em 3 locais 2 externos e 1 interno e o Estudo 2 decorreu internamente O painel incluiu 13 membros positivos para HPV com concentra es iguais ou superiores ao limite de detec o do ensaio positividade prevista 295 3 membros positivos para HPV com concentra es abaixo do limite de detec o do ensaio positividade prevista gt 0 a lt 25 e 4 membros negativos para HPV Os membros do painel positivos para HPV foram preparados aditivando tr
6. CI de 95 CI de 95 iai 4 8 15 314 3 8 16 417 Positiva 3 4 5 8 2 9 4 4 4 8 4 9 1 0 5 505 18 1311 0 8 3 384 1 4 16 7 2CIN2 Negativa 0 4 1 9 0 2 1 9 Preval ncia 2 4 20 819 2 4 19 801 pe 3 2 10 314 2 4 10 417 Positiva 2 2 3 7 1 6 2 7 16 1 9 2 0 2 1 505 e1 0 3 1 384 aena 2CIN3 Negativa 0 0 0 9 0 0 1 1 Preval ncia 1 3 11 819 1 4 11 801 18 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay nao tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 55 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Tabela 21 Popula o NILM 2 30 anos Risco absoluto e relativo de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste do DNA do HPV por grupo et rio estimativas n o ajustadas Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 819 N 801 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Idade Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 N 384 N 377 EM 4 8 8 167 3 2 7 216 Positiva RAR 2 1 9 2 10 4 1 3 6 6 2 6 0 5 1 217 1 3 82 3 1 2 2 161 0 5 12 4 anos Negativa 4 0 0 2 5 0 2 4 4 Preval ncia 2 3 9 384 2 4 9 377 2CIN2 N 435 N 424 or 4 8 7 147 4 5 9 201 Positiva ah 1 9 9 6 3 4
7. 2 1 8 3 10 0 Anos Negativa 1 4 4 288 1 0 11 5 0 4 1 223 1 3 78 1 0 4 3 5 0 0 2 5 Preval ncia 2 5 11 435 2 4 10 424 N 384 N 377 Er 3 0 5 167 2 3 5 216 Positiva 1 0 6 8 0 8 5 3 20 239 0 See 1 0 Ra 6 anos a 0 5 1 217 10 00 0 6 1 161 aE Nhs Negativa 0 0 2 5 0 0 3 4 Preval ncia 1 6 6 384 1 6 6 377 2CIN3 N 435 N 424 as 3 4 5 147 2 5 5 201 Positiva 1 1 7 8 0 8 5 7 240 N o calcul vel N o calcul vel Anos 2 0 0 0 288 0 0 0 223 Negativa 0 0 1 3 0 0 1 6 Preval ncia 1 1 5 435 1 2 5 424 18 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 56 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System As estimativas do desempenho cl nico ajustado do Aptima HPV Assay incluindo sensibilidade especificidade PPV e NPV para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 s o apresentadas na Tabela 22 tal como as estimativas para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado As estimativas do desempenho cl nico n o ajustadas s o apresentadas na Tabela 23 O Aptima HPV Assay e o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado apresentaram sensibilidade semelhante ao passo que a especificidade foi significativamente superior para o Aptima HPV Assay CI n o sobrepostos de 95 As estimativas do valor de progn stico do A
8. 90 7 98 108 83 8 94 9 97 5 157 161 93 8 99 0 92 6 150 162 87 5 95 7 IVT de HPV 16 183 c pias 100 102 102 96 4 100 100 162 162 97 7 100 IVT de HPV 18 155 c pias 100 108 108 96 6 100 100 159 159 97 6 100 C lulas MS751 0 63 c lulas 100 108 108 96 6 100 100 162 162 97 7 100 C lulas HeLa 0 35 c lulas 100 108 108 96 6 100 100 162 162 97 7 100 C lulas SiHa 0 90 c lulas 87 9 94 107 80 3 92 8 89 5 145 162 83 8 93 3 IVT transcrito in vitro A esperada de concord ncia positiva foi de 95 observou se um valor mais baixo possivelmente devido variabilidade de fabrico do membro do painel Aptima HPV Assay 93 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Tabela 56b Precis o do Aptima HPV Assay nos Estudos 1 e 2 Descri o do painel concord ncia negativa e percentil de distribui o dos valores de S CO do analito para os membros do painel com resultados negativos esperados Estudo 1 Estudo 2 Descri o do painel dad ad Sa A eet ous de concord ncia de concord ncia c lulas reac o negativa negativa CI de 95 CI de 95 C lulas MS751 87 0 94 108 93 8 152 162 0 005 c lulas 79 4 92 1 89 0 96 6 C lulas SiHa 97 2 105 108 95 7 155 162 0 008 c lulas 92 1 99 1 91 4 97
9. Aptima HPV Assay 47 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Quando foram avaliadas todas as biopsias as estimativas de sensibilidade cl nica do Aptima HPV Assay e do teste do DNA do HPV dispon vel no mercado onde foram disponibilizados os resultados dos dois ensaios para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 foram semelhantes as diferen as nas estimativas de sensibilidade n o foram estatisticamente significativas Diferen a de sensibilidade 2 3 CI de 95 9 5 4 8 As estimativas de especificidade cl nica do Aptima HPV Assay para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 foram superiores s do teste do DNA do HPV dispon vel no mercado as diferen as nas estimativas de especificidade foram estatisticamente significativas Para 2CIN2 a diferen a de especificidade foi de 6 8 CI de 95 4 9 9 0 Os NPV foram semelhantes por m para a detec o de 2CIN2 o PPV para o Aptima HPV Assay foi ligeiramente superior ao PPV para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado 20 1 vs 18 7 Dos 91 casos de 2CIN2 60 65 9 foram identificados em biopsias direccionadas e 31 34 1 foram identificados a partir de biopsias aleat rias e ou ECC ou seja n o em biopsias direccionadas Estas conclus es s o compar veis a resultados de estudos publicados nos quais aproximadamente 25 a 40 dos casos de 2CIN2 foram identificados apenas a partir de esp cimes de biopsias aleat rias e ou ECC Utilizando a
10. M Os esp cimes de citologia l quida ThinPrep e de Colheita e Transporte de Esp cimes do Colo do Utero Cervical Specimen Collection and Transport CSCT devem ser rejeitados se tiver sido deixado um dispositivo de recolha no tubo de amostra Aptima HPV Assay 4 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Informa es gerais N Os esp cimes de citologia l quida SurePath devem ser rejeitados se n o estiver presente um dispositivo de colheita no frasco Relacionados com o ensaio O Armazene os reagentes s temperaturas especificadas O desempenho do ensaio pode ser afectado pela utiliza o de reagentes conservados de forma incorrecta Evite a contamina o microbiana ou com ribonuclease dos reagentes Q N o utilize o kit ap s a data de validade V Z N o troque misture ou combine reagentes do ensaio ou calibradores de kits com n meros de lote diferentes Os Fluidos do Aptima Assay os Reagentes Aptima Auto Detect o Conservante do Fluido do Sistema Aptima apenas DTS Systems e Tigris DTS System e os Controlos do Aptima HPV assay apenas DTS Systems e Tigris DTS System n o fazem parte do lote mestre qualquer lote pode ser utilizado necess rio misturar bem os reagentes do ensaio para alcan ar resultados exactos Tem de utilizar pontas com encaixes hidrof bicos Espec ficos do Sistema DTS Tem de haver pelo menos dois pipetadores de repeti o dedicados a este ensaio um para utilizar nos passos
11. o era obtida uma biopsia de pun o m todo direccionado 1 biopsia por les o e quadrantes sem uma les o vis vel foram submetidos a biopsia na jun o escamo colunar m todo aleat rio No Estudo NILM as mulheres positivas com o Aptima HPV Assay e ou o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado bem como as mulheres seleccionadas aleatoriamente que tinham sido negativas com os dois ensaios foram encaminhadas para colposcopia para a avalia o da linha de refer ncia Estas mulheres seleccionadas aleatoriamente que tinham sido negativas para os dois ensaios foram inclu das para correc o relativa do desvio de verifica o com estimativas de desempenho ajustadas geradas recorrendo a um m todo de imputa o m ltipla Foi obtida uma biopsia ECC de cada uma das mulheres que realizaram colposcopia As biopsias por pun o foram obtidas apenas de les es vis veis m todo direccionado 1 biopsia por les o O acompanhamento de mulheres no Estudo NILM que n o t m 2CIN2 prossegue h 3 anos com visitas citol gicas anuais As mulheres com ASC US ou resultados citol gicos mais graves durante o per odo de acompanhamento s o encaminhadas para colposcopia utilizando o mesmo procedimento de biopsia realizado para a avalia o da linha de refer ncia Foi determinado o estado da doen a para ambos os estudos a partir de um consenso do painel de revis o de histologia que foi baseado na concord ncia de pelo menos 2 patologistas especial
12. papillomavirus type 16 serve as a diagnostic tool for the detection of micrometastasis in cervical cancer Int J Cancer 64 3 211 5 Doorbar J 2006 Molecular biology of human papillomavirus infection and cervical cancer Clin Sci Lond 110 5 525 41 Burd E M 2003 Human papillomavirus and cervical cancer Clin Microbiol Rev 16 1 1 17 Lambert P F H Pan H C Pitot A Liem M Jackson and A E Griep 1993 Epidermal cancer associated with expression of human papillomavirus type 16 E6 and E7 oncogenes in the skin of transgenic mice Proc Natl Acad Sci U S A 90 12 5583 7 Kjaer S K A J C van den Brule G Paull E l Svare M E Sherman B L Thomsen M Suntum J E Bock P A Poll and C J L M Meijer 2002 Type specific persistence of high risk human papillomavirus HPV as indicator of high grade cervical squamous intraepithelial lesions in young women population based prospective follow up study BMJ 325 7364 572 579 Monsonego J F X Bosch P Coursaget J T Cox E Franco Frazer R Sankaranarayanan J Schiller A Singer T C Wright Jr W Kinney C J Meijer J Linder E McGoogan and C Meijer 2004 Cervical cancer control priorities and new directions Int J Cancer 108 3 329 33 Erratum in Int J Cancer 108 6 945 Cuschieri K S M J Whitley H A Cubie 2004 Human papillomavirus type specific DNA and RNA persistence implications for cervical disease progression and monitoring J Med Virol 73 1
13. pias ml HPV 53 2 5x10 c pias ml HPV 11 2 5x10 c pias ml HPV 61 2 5x10 c pias ml HPV 42 2 5x10 c pias ml HPV 71 2 5x10 c pias ml HPV 43 2 5x10 c pias ml HPV 81 2 5x10 c pias ml HPV 44 2 5x10 c pias ml Aptima HPV Assay 42 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Interfer ncia As subst ncias descritas na Tabela 9 foram aditivadas individualmente em solu o PreservCyt e em meio de transporte de esp cimes Specimen Transport Media STM Aptima a 1 e 10 de v v ou p v e testadas com o Aptima HPV Assay Todas as subst ncias foram testadas na presen a e na aus ncia de c lulas cultivadas infectadas pelo HPV SiHa 3 c lulas reac o N o se observou interfer ncia com qualquer das subst ncias testadas excepto com dois dos cinco lubrificantes que continham Poliquat rnio 15 a concentra es gt 0 025 na amostra de teste e com uma medica o antif ngica que continha tioconazol a concentra es gt 0 075 na amostra de teste Tabela 9 Subst ncias testadas quanto a poss vel interfer ncia com o Aptima HPV Assay Categoria do produto Marca ou tipo de produto KY Sensual Mist v v KY Warming Jelly p v Lubrificante KY Warming Liquid v v Astroglide Personal Lubricant Target Brand Lubricating Liquid Gynol Il Vaginal Contraceptive Original Formula p v Gynol Il Vaginal Contraceptive Extra Strength p v
14. plicas do Calibrador Negativo e do Calibrador Positivo Para trabalhar adequadamente com o Software do Aptima HPV Assay as tr s r plicas do Calibrador Negativo seguidas das tr s r plicas do Calibrador Positivo devem estar nas primeiras seis posi es da primeira TTU A coloca o na posi o errada causa a falha da execu o Controlos Cada execu o de um m ximo de 100 testes deve conter uma r plica do Controlo Negativo e do Controlo Positivo O Controlo Negativo deve estar na s tima posi o dos tubos seguido do Controlo Positivo na oitava posi o dos tubos A coloca o na posi o errada causa a falha da execu o Pipetagem de amostras 1 O volume de amostra adicionado ao tubo de reac o deve ser 400 yul 100 ul Recomenda se a inspec o visual do volume pipetado para a TTU para assegurar uma transfer ncia adequada do volume necess rio um volume de esp cime adequado para fornecer resultados exactos Se o volume adequado n o tiver sido pipetado volte a pipetar o Reagente de Capta o do Alvo de trabalho e o esp cime para um novo tubo de reac o 2 Deite as amostras em cada tubo com cuidado evitando o contacto com o rebordo para minimizar a hip tese de contamina o cruzada de um tubo para outro Temperatura 1 A temperatura ambiente define se como uma temperatura entre 15 C e 30 C 2 A Detec o sens vel temperatura A temperatura do laborat rio na rea de detec o deve est
15. 1 0 ml de cada esp cime foi dilu do em 2 9 ml de meio de transporte de esp cimes Aptima e uma nica r plica foi testada com o Aptima HPV Assay A citologia a histologia e os resultados de um teste do DNA do HPV HPV DNA dispon vel no mercado estavam dispon veis para a maior parte dos esp cimes O estado de HPV de alto risco de cada esp cime foi determinado pela concord ncia entre o Aptima e o teste do HPV DNA dispon vel no mercado e por outra an lise dos esp cimes com resultados discordantes utilizando um teste de genotipagem do DNA amplificado A sensibilidade e a especificidade para a detec o de cido nucleico do HPV foram determinadas A sensibilidade e a especificidade cl nicas para a detec o de doen a definida como uma Neoplasia Intraepitelial Cervical Cervical Intraepithelial Neoplasia CIN 2 ou um resultado histol gico mais alto tamb m foram calculadas para toda a popula o de esp cimes bem como para subconjuntos espec ficos baseados em resultados citol gicos A sensibilidade e a especificidade do Aptima HPV Assay para a detec o de HPV de alto risco s o apresentadas na Tabela 1 para os 781 esp cimes testados nos Sistemas DTS A sensibilidade do ensaio foi de 92 6 a especificidade de 98 5 e os valores de progn stico positivos e negativos para a detec o de HPV de alto risco foram de 98 8 e 90 9 respectivamente Tabela 1 Sensibilidade e especificidade do Aptima HPV Assay nos Sistemas DTS para d
16. 4 5 39 863 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 80 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System As estimativas de risco absoluto e relativo de doen a 2CIN2 e 2CIN3 com base na avalia o de todas as biopsias para o Aptima HPV Assay e o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado s o apresentadas por grupo et rio na Tabela 43 Tabela 43 Popula o ASC US 2 21 anos Riscos absolutos e relativos de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado por grupo et rio Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 937 N 863 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Idade Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 N 415 N 389 Podiya 21 7 54 249 20 8 56 269 21a29 19 3 23 9 5 1 19 0 22 5 8 3 anos Nedativa 4 2 7 166 2 4 11 0 2 5 3 120 2 7 26 1 3 1 9 7 7 0 6 6 4 Preval ncia 9 7 61 415 15 2 59 389 N 261 N 238 Positiva 17 3 17 98 16 2 16 99 JcN 30 a 39 13 1 21 1 9 4 11 8 19 8 5 6 anos en 1 8 3 163 2 8 31 3 2 9 4 139 1 9 16 3 9 0 4 4 3 0 9 5 9 Preval ncia 7 7 2
17. 59 0 00 0 0 0 00 0 0 0 00 0 0 0 00 0 0 5 25 69 2 5 25 69 2 Amostra clinica positiva baixa 3 do HPV 161 883 0 00 0 0 0 00 0 0 0 26 30 0 00 0 0 3 48 39 4 3 49 39 5 Amostra clinica positiva baixa 4 do HPV 162 4 95 0 00 0 0 0 00 0 0 0 75 15 2 0 00 0 0 3 35 67 6 3 43 69 3 IVT de HPV 16 rae 162 11 02 0 13 1 2 0 11 1 0 0 12 1 1 0 13 1 2 10 54 49 0 59 5 4 183 c pias IVT de HPV 18 ae 159 11 40 0 16 1 4 10 17 1 5 1 21 10 6 0 23 2 0 1 17 10 3 1 72 15 0 155 c pias velulas Mofo 162 9 87 0 76 7 7 0 00 0 0 0 65 66 0 65 66 1 41 14 3 1 85 18 7 0 63 c lulas Celulas Hela 162 7 80 0 55 7 0 0 00 0 0 0 85 10 9 0 00 0 0 2 44 31 3 2 65 33 9 0 35 c lulas C lulas SiHa E 162 7 30 0 32 4 3 10 00 0 0 0 93 12 7 1 04 14 3 349 47 8 3 77 51 7 0 90 c lulas Seis amostras apresentaram resultados do Aptima HPV Assay inv lidos 1 para amostra cl nica positiva alta 1 do HPV 1 para IVT de HPV 16 1830 c pias 1 para amostra clinica positiva baixa 3 do HPV 3 para IVT de HPV 18 155 c pias CV coeficiente de varia o IVT transcrito in vitro DP desvio padr o Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa Tal pode ocorrer se a variabilidade provocada por esses factores for muito diminut
18. 7 5 c lulas IVT de HPV 18 100 c pias 160 11 9 0 1 0 6 0 2 1 6 0 8 7 0 0 4 3 6 1 3 11 3 1 7 13 8 IVT de HPV 16 100 c pias 162 10 8 0 0 0 1 1 3 0 0 0 2 2 2 0 7 6 1 0 7 6 6 C lulas MS751 1 c lula 162 13 6 0 0 0 6 4 3 0 0 2 5 18 4 2 1 15 2 3 3 24 2 C lulas ME180 0 3 c lulas 162 5 8 0 0 0 6 10 8 0 5 9 4 2 2 36 9 1 7 29 7 2 9 49 5 IVT de HPV 18 30 copias 162 8 8 0 4 4 4 0 5 6 0 0 7 7 9 1 0 11 5 1 9 21 4 2 4 26 6 IVT de HPV 16 30 copias 162 10 5 0 0 0 1 1 3 0 2 2 0 1 6 14 9 1 2 11 2 2 0 18 8 C lulas HeLa 2 5 c lulas 159 12 0 0 6 5 1 1 0 8 5 0 0 2 8 23 8 2 0 16 6 3 7 30 6 C lulas SiHa 1 c lula 162 7 4 0 9 12 5 0 0 0 7 9 3 1 8 24 4 2 56 8 4 7 63 8 DP desvio padr o CV coeficiente de varia o IVT transcrito in vitro S CO rela o de sinal para cutoff Cinco amostras apresentaram resultados do Aptima HPV Assay inv lidos 2 para IVT de HPV 18 100 c pias 3 para c lulas HeLa 2 5 c lulas e n o foram inclu das na an lise Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa Tal pode ocorrer se a variabilidade provocada por esses factores for muito diminuta Nestes casos DP e CV s o apresentados a 0 Foi realizado um terceiro estudo para determinar a reprodutibilidade do ensaio testando um painel de 6 membros de esp cimes cl nicos de citologia l quida ThinPrep agrupados Foram preparados seis grupos nicos de esp cimes residua
19. 9 C lulas HeLa 70 4 76 108 67 3 109 162 0 02 c lulas 61 2 78 2 59 8 74 0 Amostra cl nica negativa 99 1 107 108 100 162 162 1 do HPV 94 9 99 8 97 7 100 Amostra cl nica negativa 97 2 105 108 100 162 162 2 do HPV 92 1 99 1 97 7 100 Solu o PreservCyt 1 99 1 107 108 94 9 99 8 100 162 162 97 7 100 Solu o PreservCyt 2 99 1 107 108 100 161 161 94 9 99 8 97 7 100 IVT transcrito in vitro de concord ncia negativa esperada gt 75 e lt 100 Aptima HPV Assay 94 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Tabela 57 Precis o do Aptima HPV Assay no Estudo 1 Variabilidade do sinal para os membros do painel com resultados positivos esperados Nas pr prias Entre Entre Entre listas listas de Descri o do painel instrumentos operadores Entre lotes de trabalho trabalho Total c pias ou S ICO c lulas reac o n M dia DP CV DP cv DP CV DP CV DP CV DP CV Amostra cl nica positiva 5934 000 00 loool 00 143 49 187 64 149 51 279 95 alta 1 do HPV Amostra cl nica positiva 5909 055 18 000 00 1 06 35 073 24 221 73 261 87 alta 2 do HPV IVT de HPN TS 107 11 20 0 09 0 8 0 16 14 0 03 0 3 10 14 1 3 0 46 4 1 052 46 1830 c pias WT de HEV TS 107 14 89 0
20. Codigo de Produto Intensificador de Lixivia para limpeza 302101 Procedimento de teste do Tigris DTS System Nota Consulte o Tigris DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Tigris DTS System para mais informa es sobre o procedimento do Tigris DTS System A Prepara o da rea de trabalho Limpe as superf cies de trabalho onde ser o preparados os reagentes e as amostras Limpe as superf cies de trabalho com 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M de solu o de hipoclorito de s dio Deixe a solu o de hipoclorito de s dio entrar em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto e depois enxag e com gua N o deixe a solu o de hipoclorito de s dio secar Cubra a superf cie da bancada onde ser o preparados os reagentes e as amostras com capas limpas e absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Prepara o dos reagentes de um novo kit Nota A Reconstitui o dos Reagentes deve ser realizada antes de qualquer trabalho no Tigris DTS System 1 Para reconstituir os Reagentes de Amplifica o Enzim tico e de Sonda combine os frascos do reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com o respectivo reagente liofilizado Antes de aplicar o colarinho de reconstitui o certifique se de que a solu o
21. HPV captadas ligadas a elas s o arrastadas para a parte lateral do tubo de reac o pela utiliza o de manes e o sobrenadante aspirado As part culas s o lavadas para remover a matriz de esp cime residual que possa conter inibidores de amplifica o Terminada a capta o do alvo o mRNA do HPV amplificado por TMA que um m todo de amplifica o do cido nucleico baseado na transcri o e que utiliza duas enzimas a transcriptase reversa MMLV e a polimerase do RNA T7 A transcriptase reversa utilizada para gerar uma c pia do DNA da sequ ncia alvo do mRNA contendo uma sequ ncia promotora para a polimerase do RNA T7 A polimerase do RNA T7 produz v rias c pias do produto de amplifica o do RNA a partir do modelo da c pia do DNA A detec o do produto de amplifica o feita atrav s do HPA utilizando sondas de cido nucleico de cadeia simples marcadas por quimioluminesc ncia que s o complementares do produto de amplifica o As sondas de cido nucleico marcadas s o hibridadas especificamente no produto de amplifica o O Reagente de Selec o diferencia entre sondas hibridadas e n o hibridadas atrav s da desactiva o da marca nas sondas n o hibridadas Durante o passo de detec o a luz emitida a partir dos h bridos RNA DNA marcados medida como sinais de fot es denominados Unidades de Luz Relativa Relative Light Units RLU num lumin metro Os resultados finais do ensaio s o interpretados co
22. Preval ncia 1 6 6 383 1 6 6 376 2CIN3 N 435 N 424 asa 4 3 5 116 2 5 5 201 Positiva 2 2 5 1 1 3 2 8 240 y i 4 N o calcul vel N o calcul vel anos PER 0 0 0 319 0 0 0 223 9 0 0 0 8 0 0 1 1 Preval ncia 1 1 5 435 1 2 5 424 18 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 85 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima As estimativas ajustadas do desempenho cl nico do Aptima HPV Assay incluindo sensibilidade especificidade PPV e NPV para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 s o apresentadas na Tabela 49 bem como as estimativas para o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado As estimativas n o ajustadas do desempenho cl nico s o apresentadas na Tabela 50 O Aptima HPV Assay e o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado apresentaram sensibilidade semelhante ao passo que a especificidade foi significativamente superior para o Aptima HPV Assay Cl n o sobrepostos de 95 As estimativas do valor de progn stico do Aptima HPV Assay foram clinicamente relevantes e semelhantes s estimativas para o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado Os NPV foram semelhantes mas para a detec o de 2CIN2 o PPV para o Aptima HPV Assay foi ligeiramente superior ao PPV para o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado 4 5 v
23. as estimativas de desempenho ajustadas em rela o ao desvio de verifica o como as estimativas de desempenho n o ajustadas com base nas 818 mulheres com estado de doen a verificado Tabela 45 Popula o NILM gt 30 anos Classifica o de mulheres NILM eleg veis para avalia o atrav s dos resultados do Aptima HPV Assay de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado estado da doen a 2CIN2 e 2CIN3 e estado de verifica o da doen a Resultado do Estado de doen a Estado de doen a Estado de doen a n o Aptima HPV Assay verificada 2CIN2 verificada 2CIN3 verificada Teste Total de do DNA Mulheres com mulheres Panther Tigris DTS do HPV Mulheres Mulheres Mulheres Mulheres estado de doenca System System doentes n o doentes doentes n o doentes desconhecido gt gt 2CIN2 lt CIN2 2CIN3 lt CIN3 desconhecida Positiva Positiva Positiva 313 13 189 9 193 111 35 5 Positiva Positiva Negativa 37 1 18 1 18 18 48 6 Positiva Positiva Sem ll 22 0 13 0 13 9 40 9 resultado Positiva Negativa Positiva 70 0 34 0 34 36 51 4 Positiva Negativa Negativa 60 0 1 0 1 59 98 3 Positiva Negativa Sem li 40 0 0 0 0 10 100 resultado Negativa Positiva Positiva 46 0 33 0 33 13 28 3 Negativa Positiva Negativa 113 1 41 0 42 71 62 8 Negativa Positiva SEmi alll 2g 0 4 0 4 4 50 0 resultado Negativa Negativa Positiva 236 3 144 1 146 89 37 7 Negativa N
24. calibradores n o sejam v lidos b o respectivo kit de reagente de ensaio seja retirado do sistema c o respectivo kit de reagente de ensaio tenha ultrapassado os limites de estabilidade 3 As tentativas de pipetar mais de tr s r plicas a partir de um tubo de calibrador podem originar erros de processamento B Temperatura A temperatura ambiente define se como uma temperatura entre 15 C e 30 C C P das luvas Como em qualquer sistema de reagentes o excesso de p nalgumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p Aptima HPV Assay 30 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Procedimentos de controlo de qualidade Procedimentos de controlo de qualidade A Crit rios de validade da execu o O software determina automaticamente a validade da execu o O software invalida uma execu o se qualquer das seguintes condi es ocorrer Mais de uma r plica de Calibrador Negativo inv lido Mais de uma r plica de Calibrador Positivo inv lido Um Controlo Negativo inv lido apenas Sistemas DTS e Sistema Tigris DTS Um Controlo Positivo inv lido apenas Sistemas DTS e Tigris DTS System Uma execu o pode ser invalidada por um operador se forem observadas e documentadas dificuldades t cnicas do operador ou do instrumento durante a realiza o do ensaio Uma execu o inv lida tem de ser repetida As execu es abortadas devem ser repetidas
25. cl nico do Aptima HPV Assay incluindo sensibilidade especificidade valor de progn stico positivo positive predictive value PPV e valor de progn stico negativo negative predictive value NPV para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 baseadas na avalia o de todas as biopsias e incluindo apenas biopsias direccionadas s o Aptima HPV Assay 75 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima apresentadas na Tabela 39 bem como as estimativas para o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado Tabela 39 Popula o ASC US gt 21 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 937 N 863 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 Todas as biopsias Sensibilidade oi 75 8 90 6 do 80 5 93 8 62 1 55 8 pea Especificidade 525 846 58 7 65 3 432 774 52 3 59 3 19 3 18 8 o PPV 771398 17 3 21 2 79 421 17 0 20 4 97 4 97 7 E NPV 525 539 96 0 98 5 432 442 96 2 98 8 Preval ncia 9 7 91 937 10 3 89 863 2CIN2 Biopsias direccionadas Sensibilidade eee 79 9 95 3 eas 83 8 97 3 60 8 54 5 ead A Especificidade 531 874 57 5 63 9 437 802 51 0 57 9 13 6 13 1 o PPV 54 3
26. da Capta o e da Amplifica o do Alvo e outro para utilizar no passo P s Amplifica o Quando utilizar pipetadores de repeti o para adi o de reagentes nao toque no tubo com a ponta da pipeta para evitar a contamina o cruzada de um tubo para outro Todos os pipetadores t m de ser limpos regularmente conforme descrito nas Notas sobre o procedimento S o necess rios pelo menos dois instrumentos SB100 individuais um para a Capta o Amplifica o do Alvo e outro para a P s Amplifica o NAO reutilize cart es vedantes Para cada passo deve utilizar novos cart es vedantes Requisitos de conserva o e manuseamento dos reagentes N o utilize reagentes que ultrapassem o prazo de validade indicado nos frascos Consulte outras instru es de conserva o abaixo A Os seguintes reagentes s o conservados a uma temperatura de 2 C a 8 C refrigerados ap s a recep o Reagente de Amplifica o do HPV Reagente Enzim tico do HPV Reagente de Sonda do HPV Reagente de Controlo Interno do HPV Calibradores positivos e calibradores negativos do HPV Aptima HPV Assay 5 AW 11141 601 Rev 003 PT Informa es gerais Aptima Controlos positivos e negativos do HPV apenas sistemas DTS e sistema Tigris DTS B Os seguintes reagentes s o conservados a uma temperatura de 15 C a 30 C temperatura ambiente Solu o de Reconstitui o de Amplifica o do HPV Solu o de reconstitui
27. de 95 55 7 51 8 59 6 Valor de progn stico positivo 32 1 Valor de progn stico negativo 96 3 Tabela 2b Sensibilidade e especificidade do ensaio HPV DNA para detec o de doen a 2CIN2 2CIN2 lt CIN2 Total 134 322 456 HPV DNA 7 290 297 Total 141 612 753 Sensibilidade CI de 95 95 0 90 1 97 6 Especificidade Cl de 95 47 4 43 5 51 4 Valor de progn stico positivo 29 4 Valor de progn stico negativo 97 6 Tabela 3a Sensibilidade e especificidade do Aptima HPV Assay nos Sistemas DTS para detec o de doen a 2CIN3 2CIN3 lt CIN3 Total 85 314 399 Aptima HPV 2 352 354 Total 87 666 753 Sensibilidade Cl de 95 97 7 92 0 99 4 Especificidade Cl de 95 52 9 49 1 56 6 Valor de progn stico positivo 21 3 Valor de progn stico negativo 99 4 Tabela 3b Sensibilidade e especificidade do ensaio HPV DNA para detec o de doen a 2CIN3 2CIN3 lt CIN3 Total 86 370 456 HPV DNA 1 296 297 Total 87 666 753 Sensibilidade CI de 95 98 9 93 8 99 8 Especificidade CI de 95 44 4 40 7 48 2 Aptima HPV Assay 36 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Valor de progn stico positivo 18 9 Valor de progn stico negativo 99 7 Desempenho cl nico do Aptima HPV Assay com Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais Os esp cimes de cito
28. de esp cime E Prepara o do sistema Configure o instrumento e a lista de trabalho de acordo com as instru es no Tigris DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Tigris DTS System e na sec o Notas sobre o procedimento abaixo Aptima HPV Assay 23 AW 11141 601 Rev 003 PT Tigris DTS System Aptima Notas sobre o procedimento A Calibradores 1 Cada lista de trabalho deve conter 3 r plicas do Calibrador Negativo e do Calibrador Positivo Para funcionar adequadamente com o Software do Aptima HPV Assay o Calibrador Negativo tem de estar na primeira posi o de tubos do primeiro suporte da lista de trabalho e o Calibrador Positivo tem de estar na segunda posi o de tubos do primeiro suporte da lista de trabalho 2 As tentativas de pipetar mais de tr s r plicas a partir de um tubo de calibrador podem originar erros de volume insuficiente B Controlos 1 O Software do Aptima HPV Assay exige controlos de in cio e de fim da execu o O Controlo Negativo tem de estar na terceira posi o de tubos do primeiro suporte e na pen ltima posi o do ltimo suporte da lista de trabalho O Controlo Positivo tem de estar na quarta posi o de tubos do primeiro suporte e na ltima posi o do ltimo suporte da lista de trabalho 2 As tentativas de pipetar mais de uma vez a partir de um tubo de controlo podem originar erros de volume insuficiente C Temperatura A temperatura ambiente define se como uma
29. de esp cimes do colo do tero em frascos de exame de Papanicolau ThinPrep que contenham Solu o PreservCyt com dispositivos de colheita tipo vassoura ou escova esp tula de acordo com as instru es do fabricante Aptima HPV Assay 6 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima 2 Informa es gerais Antes ou ap s o processamento com o Sistema ThinPrep 2000 ou o Sistema ThinPrep 3000 transfira 1 ml do esp cime de citologia l quida ThinPrep para um tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima de acordo com as instru es do folheto informativo do Kit de Transfer ncia de Esp cimes Aptima Esp cimes de citologia l quida SurePath apenas Tigris DTS System e Panther System 1 2 Proceda a colheita de um esp cime de citologia liquida SurePath de acordo com as instru es de utiliza o do exame de Papanicolau SurePath e ou do PrepStain System Transfira o esp cime de citologia l quida SurePath para um tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima de acordo com as instru es no folheto informativo do Kit de Transfer ncia de Esp cies Aptima Esp cimes do Kit Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais Proceda colheita do esp cime de acordo com as instru es de utiliza o do Kit CSCT Aptima B Transporte e conserva o antes do teste Esp cimes de citologia l quida ThinPrep 1 2 3 Transporte os esp cimes de citologia liquida ThinPrep a uma temperatura de 2 C a 30 C Os esp c
30. do HPV Transcrito de RNA n o infeccioso em solu o tamponada com lt 5 de detergente 1 frasco 1 frasco Embalagem temperatura ambiente do Aptima HPV conservar temperatura ambiente de 15 C a 30 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de Reconstitui o de Amplifica o do HPV Solu o aquosa contendo conservantes 1 ER Solu o de reconstitui o enzim tica do HPV Solu o tamp o com HEPES contendo um agente tensioactivo e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sondas do HPV 1 Solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selec o do HPV 1 Solu o tamponada com 600 mM de borato contendo agente tensioactivo Aptima HPV Assay 25 AW 11141 601 Rev 003 PT Panther System Aptima Embalagem temperatura ambiente do Aptima HPV conservar temperatura ambiente de 15 C a 30 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade TCR Reagente de capta o do alvo do HPV 1 cido nucleico n o infeccioso numa solu o tamponada contendo fase s lida lt 0 5 mg ml Colarinhos de Reconstitui o 3 Ficha de C digos de Barras do Lote Principal 1 folha Embalagem de calibradores Aptima HPV C digo de Produto 302554 conservar a uma temperatura de 2 C a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade PCAL Calibrador Positivo do HPV 5 frascos Transcrito in vitro
31. do ensaio no Tigris DTS System O risco absoluto de doen a 2CIN2 e 2CIN3 com base na avalia o de todas as biopsias conforme o resultado do Aptima HPV Assay e o risco relativo de doen a para resultados do Aptima HPV Assay positivo versus negativo s o apresentados na Tabela 15 tal como acontece com as estimativas para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado O risco relativo de 2CIN2 foi de 9 1 Cl de 95 5 0 16 5 indicando que uma mulher que teve um resultado positivo com o Aptima HPV Assay tinha 9 1 vezes mais probabilidade de ter 2CIN2 do que uma mulher que tenha tido um resultado negativo com o Aptima HPV Assay O risco relativo de 2CIN3 foi de 12 8 CI de 95 4 6 35 6 Tabela 15 Popula o ASC US 2 21 anos Riscos absolutos e relativos de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um Teste do DNA do HPV Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 939 N 865 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 Positiva 20 1 79 394 18 7 79 422 18 1 22 0 17 0 20 4 9 1 8 3 2 2 12 545 5 0 16 5 2 3 10 443 14 198 2CIN2 Negativa 1 2 3 5 1 2 3 8 Preval ncia 9 7 91 939 10 3 89 865 ss 9 4 37 394 8 5 36 422 positive 8 1 10 4 7 4 9 4 12 8 12 6 0 7 4 545 Ree 0 7 3 443 3 9 40 65 2CIN3 Negativa 0 2 1 7 0 2 1 7 Preval ncia 4 4 41 939 4 5 39 865
32. ensaio no Panther System Aptima O risco absoluto de doen a 2CIN2 e 2CIN3 com base na avalia o de todas as biopsias conforme o resultado do Aptima HPV Assay e o risco relativo de doen a para resultados do Aptima HPV Assay positivos versus negativos s o apresentados na Tabela 42 bem como as estimativas para o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado O risco relativo de 2CIN2 foi de 7 4 CI de 95 4 3 13 0 indicando que uma mulher que tinha tido um resultado positivo com o Aptima HPV Assay tinha 7 4 vezes mais probabilidade de ter CIN2 do que uma mulher que tinha tido um resultado negativo com o Aptima HPV Assay O risco relativo de 2CIN3 foi de 12 5 CI de 95 4 5 34 9 Tabela 42 Popula o ASC US 2 21 anos Riscos absolutos e relativos de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado Aptima HPV Assay Teste de DNA do HPV N 937 N 863 Resultado do Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 TERN 19 3 77 398 18 8 79 421 17 3 21 2 a 17 0 20 4 a gt CIN2 RE 2 6 14 539 4 3 13 0 2 3 10 442 4 4 15 8 g 1 5 4 0 1 2 3 8 Preval ncia 9 7 91 937 10 3 89 863 a 9 3 37 398 8 6 36 421 Positiva 8 0 10 3 we 7 4 9 4 og SCINS ee 0 7 4 539 4 5 34 9 0 7 3 442 3 9 40 6 g 0 2 1 7 0 2 1 7 Preval ncia 4 4 411937
33. equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado persistir 4 Seo Reagente de Selec o contiver precipitado aque a o Reagente de Selec o a 60 C 1 C por um m ximo de 45 minutos para facilitar a dissolu o do precipitado Misture o frasco suavemente a cada 5 a 10 minutos Deixe o Reagente de Selec o equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado ou a nebulosidade persistir 5 Misture bem cada reagente invertendo o suavemente antes de ser colocado no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes 6 N o ateste frascos de reagente O Tigris DTS System reconhece e rejeita os frascos que tenham sido atestados D Manuseamento de amostras 1 Deixe as amostras calibradores controlos e esp cimes alcan ar a temperatura ambiente antes de serem processadas 2 N o coloque as amostras no agitador 3 Os esp cimes de citologia l quida SurePath devem ser tratados com proteinase K antes de serem testados com o Aptima HPV Assay de acordo com as instru es no Procedimento de teste do Tigris DTS System sec o C 4 Inspeccione os tubos de amostras antes de os colocar no suporte Se um tubo de amostra contiver bolhas ou um volume mais inferior ao normalmente observado centrifugue o tubo durante 5 minutos a 420 RCF para garantir que n o h l quido na tampa Nota Se n o executar o passo 4 poder sair l quido da tampa do tubo
34. ml Pseudomonas aeruginosa 1x10 CFU ml Escherichia coli 1x10 CFU ml Ruminococcus productus 1x10 CFU ml Finegoldia magna 1x10 CFU ml Serratia marcescens 1x10 CFU ml Fusobacterium nucleatum 1x10 CFU ml Staphylococcus aureus 1x10 CFU ml Gardnerella vaginalis 1x10 CFU ml Staphylococcus epidermidis 1x10 CFU ml Haemophilus ducreyi 1x10 CFU ml Staphylococcus saprophyticus 1x10 CFU ml Klebsiella pneumoniae 1x10 CFU ml Streptococcus agalactiae 1x10 CFU ml Lactobacillus acidophilus 1x10 CFU ml Streptococcus pyogenes 1x10 CFU ml Lactobacillus crispatus 1x10 CFU ml Streptococcus sanguinis 1x10 CFU ml Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus 1x10 CFU ml Ureaplasma urealyticum 1x10 CFU ml Lactobacillus jensenii 1x10 CFU ml Aptima HPV Assay 41 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Aptima Tabela 8 Painel da especificidade anal tica continua o Organismo Concentra o de teste Organismo Concentra o de teste Leveduras protozo rios Candida albicans 1x10 CFU ml Trichomonas vaginalis 1x10 c lulas ml Virus Adenovirus 2 1x10 vp ml V rus Herpes simplex 1 2 5x10 TCID 50 ml Citomegalovirus 33 TCID 50 ml Virus Herpes simplex 2 5x10 TCID 50 ml Virus Epstein Barr 4x10 vp ml Sv40 1 2 x10 TCID 50 ml HIV 1 1 0x10 c pias ml Gen tipos de HPV n o visados HPV 6 2 5x10 c
35. o wTCR a uma temperatura de 42 C a 60 C at um m ximo de 90 minutos Deixe o wTCR equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado Prepare o Reagente de Selec o Se o Reagente de Selec o contiver precipitado aque a o Reagente de Selec o a 60 C 1 C por um m ximo de 45 minutos para facilitar a dissolu o do precipitado Misture o frasco suavemente a cada 5 a 10 minutos Deixe o Reagente de Selec o equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado ou a nebulosidade persistir C Prepara o de reagentes previamente reconstitu dos 1 2 Os Reagentes de Sonda Amplifica o e Enzim tico previamente reconstituidos t m de alcan ar a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio Se o Reagente de Sonda reconstituido contiver precipitado que n o se dissolva novamente temperatura ambiente aque a o a uma temperatura m xima de 60 C durante 1 ou 2 minutos Ap s a ressuspens o misture o frasco invertendo o suavemente N o utilize se houver precipitado ou nebulosidade Se o wTCR contiver precipitado aque a o wTCR a uma temperatura de 42 C a 60 C durante um m ximo de 90 minutos Deixe o wTCR equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado Se o Reagente de Selec o contiver precipitado aque a o Reagente de Selec o a 60 C 1 C por um maximo de 45 minutos para facilitar a dissolu o do precipitado Misture o fra
36. observado centrifugue o tubo durante 5 minutos a 420 RCF para garantir que n o h l quido na tampa Nota Se n o executar o passo 3 poder sair l quido da tampa do tubo de esp cime E Prepara o do sistema 1 Configure o sistema de acordo com as instru es no Panther System Operator s Manual Manual do Operador do Panther System e na sec o Notas sobre o procedimento abaixo Certifique se de que s o utilizados suportes de reagente e adaptadores de TCR de dimens o adequada 2 Coloque as amostras Notas sobre o procedimento A Calibradores 1 Para funcionar adequadamente com o software do Aptima HPV Assay no Panther System s o necess rias tr s r plicas do Calibrador Positivo e tr s r plicas do Calibrador Negativo Um frasco de cada calibrador pode ser colocado em qualquer posi o do suporte em qualquer Pista da Zona de Amostras no Panther System A pipetagem de esp cimes come a quando se verificar uma das duas condi es seguintes a O sistema est actualmente a processar um Calibrador Positivo e um Calibrador Negativo Aptima HPV Assay 29 AW 11141 601 Rev 003 PT Panther System Aptima b Resultados v lidos para os calibradores est o registados no sistema 2 Uma vez pipetados os tubos de calibrador e quando estiverem a ser processados para um kit de reagente espec fico os esp cimes podem ser executados com o respectivo kit de reagente de ensaio at 24 horas a menos que a os
37. quando manusear esp cimes e reagentes de um kit Lave bem as m os depois de manusear os esp cimes e os reagentes do kit E Advert ncia Irritantes e Corrosivos Evite o contacto do Auto Detect 1 e 2 com a pele olhos e membranas mucosas Se estes fluidos entrarem em contacto com a pele ou os olhos lave bem com gua a zona afectada Se estes fluidos derramarem dilua o derrame com gua antes de o limpar e secar F As superf cies de trabalho as pipetas e outro equipamento t m de ser regularmente descontaminados com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Consulte os Procedimentos de teste para mais informa o Espec ficos do Sistema DTS G Para ajudar a prevenir que as reas de laborat rio fiquem contaminadas com o produto de amplifica o a rea do laborat rio deve estar disposta de modo a ter um fluxo de trabalho unidireccional desde a prepara o do reagente at detec o Os esp cimes equipamentos e reagentes n o devem ser devolvidos rea onde um passo anterior tenha sido executado Al m disso os t cnicos n o devem voltar s reas de trabalho anteriores sem as devidas medidas de protec o contra contamina o Recomenda se vivamente que haja uma rea separada dedicada detec o Relacionados com os esp cimes H Mantenha as condi es de temperatura adequadas durante o envio e conserva o dos esp cimes de modo a garantir a integridade dos esp cimes A estabilid
38. que continham Poliquat rnio 15 e um dos cinco medicamentos antif ngicos que continham tioconazol N o foi observada interfer ncia com qualquer outras das subst ncias testadas Aptima HPV Assay 71 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Tabela 36 Subst ncias testadas quanto a poss vel interfer ncia com o Aptima HPV Assay Categoria do produto Lubrificante Marca ou tipo de produto Concentra o mais alta testada que n o interferiu com o desempenho do ensaio KY Sensual Mist 10 viv KY Warming Jelly 10 p v KY Warming Liquid 10 viv Lubrificante pessoal marca CVS 10 p v Lo o aquecedora para massagem e lubrificante pessoal 10 viv Target Brand 0 3 p v Astroglide Personal Lubricant 0 075 p v da amostra testada Target Brand Lubricating Liquid 0 1 v v 0 025 v v da amostra testada Espermicida Gynol II Vaginal Contraceptive Original Formula 10 p v Gynol II Vaginal Contraceptive Extra Strength 10 p v Delfen Vaginal Contraceptive Foam 10 p v Encare Vaginal Contraceptive 10 p v Conceptrol Vaginal Contraceptive 10 p v Medica o Antifungica Vagisil Maximum Strength 10 p v Anticomichao Monistat Soothing Care 10 p v Monistat 3 Combination Pack 10 p v 0 3 p v Target Brand Tioconazole 1 0 075 p v da amostra testada Target Brand Miconazole 3 10 p v cido Ac tico G
39. quido para o fundo do tubo Nota Os esp cimes devem ser transportados de acordo com os regulamentos de transporte nacionais e internacionais em vigor Aptima HPV Assay 8 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Sistemas DTS Sistemas DTS Os reagentes para o Aptima HPV Assay est o indicados abaixo para os Sistemas DTS Os S mbolos de Identifica o do Reagente tamb m est o indicados ao lado do nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Nota Para obter informa es sobre quaisquer declara es de perigo e de precau o que possam estar associadas a estes reagentes consulte a Biblioteca de fichas de dados de seguran a Safety Data Sheet Library em www hologic com sds Kit do Aptima HPV Assay 100 testes C digo de Produto 302610 4 embalagens Os Calibradores e Controlos podem ser adquiridos em separado Veja abaixo os c digos de produto das embalagens individuais Embalagem refrigerada do Aptima HPV conservar a uma temperatura de 2 C a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de Amplifica o do HPV 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos desidratados em solu o tamponada com lt 5 de agente de volume E Reagente Enzim tico do HPV 1 frasco Transcriptase reversa e polimerase do RNA desidratadas em solu o tamponada com HEPES com lt 10 de reagente de volume P Reagente de Sonda do HPV 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas lt 50
40. repeti o utilizado na capta o e amplifica o do alvo deve estar dedicado apenas a estes passos Consulte o Procedimento de teste do Tigris DTS System para obter mais informa es 1 Cubra os cart es vedantes com a estrutura do SB100 2 Assim que o instrumento SB100 tiver alcan ado os 62 C segurando na estrutura e no suporte juntos para assegurar que as TTU estejam fixas no suporte leve o suporte para o bloco de aquecimento Tenha cuidado para n o salpicar o conte do nos cart es vedantes Rode os man pulos pretos at os rolamentos ficarem encaixados nos orif cios da estrutura 3 Prima a tecla apropriada para iniciar o programa 4 Quando indicado pelo visor do SB100 terminada a ltima incuba o retire suavemente o suporte do bloco de aquecimento tendo cuidado para n o salpicar o conte do nos cart es vedantes 5 Coloque o suporte na base magn tica do Sistema de Capta o do Alvo Target Capture System TCS durante 5 a 10 minutos Execute os seguintes passos de lavagem a Purgue as linhas da bomba da Esta o de Distribui o bombeando a Solu o de Lavagem atrav s do tubo de distribui o Bombeie l quido suficiente pelo sistema para que n o existam bolhas de ar na linha e todos os 10 bicos forne am um fluxo de l quido constante b Ligue a bomba de v cuo e desligue o tubo de aspira o no primeiro conector entre o tubo e a garrafa colectora Certifique se de que o vacu metro cumpre a especifica
41. respectivamente Tabela 24 Popula o NILM gt 30 anos Rela o de taxas de resultados positivos reais Aptima HPV Assay teste do DNA do HPV para mulheres com 2CIN2 estimativas n o ajustadas Teste do DNA do HPV Positiva Negativa Total Positiva 13 2 15 78 9 Aptima HPV Assay Negativa 3 1 4 Total 16 84 2 3 19 Rela o de taxas de resultados positivos reais 0 94 15 16 CI de 95 0 67 1 20 Tabela 25 Popula o NILM gt 30 anos Rela o de taxas de resultados positivos falsos Aptima HPV Assay teste do DNA do HPV para mulheres com lt CIN2 estimativas n o ajustadas Teste do DNA do HPV Positiva Negativa Total Positiva 223 59 282 36 1 Aptima HPV Assay Negativa 178 322 500 Total 401 51 3 381 782 Rela o de taxas de resultados positivos falsos 0 70 282 401 CI de 95 0 64 0 77 Aptima HPV Assay 59 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Desempenho cl nico do Aptima HPV Assay com esp cimes de citologia l quida SurePath Esp cimes conservados em SurePath tratados com a Solu o de Transfer ncia Aptima Esp cimes de citologia l quida SurePath foram colhidos de mulheres canadianas n 558 encaminhadas para acompanhamento devido a um ou mais exames Papanicolau anormais infec o pelo HPV ou outra raz o Uma al quota 0 5 ml de cada esp cime foi transferida para um tubo de
42. temperatura entre 15 C e 30 C D P das luvas Como em qualquer sistema de reagentes o excesso de p nalgumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p Aptima HPV Assay 24 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Panther System Panther System Os reagentes para o Aptima HPV Assay est o indicados abaixo para o Panther System Os S mbolos de Identifica o do Reagente tamb m est o indicados ao lado do nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Aptima HPV Assay 250 testes C digo de Produto 303093 3 embalagens Aptima HPV Assay 100 testes C digo de Produto 302929 3 embalagens Os calibradores podem ser adquiridos parte Veja abaixo os c digos de produto individuais Embalagem refrigerada do Aptima HPV conservar a uma temperatura de 2 C a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de Amplifica o do HPV cidos nucleicos n o infecciosos desidratados em solu o tamponada com lt 5 de agente de volume 1 frasco E Reagente Enzim tico do HPV Transcriptase reversa e polimerase do RNA desidratadas em solu o tamponada com HEPES com lt 10 de reagente de volume 1 frasco P Reagente de Sonda do HPV Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas lt 500 ng frasco desidratadas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente IC Reagente de Controlo Interno
43. tubo de reac o Todas as misturas de reac o dever o estar amarelas 3 Cubra os tubos com os cart es vedantes e a estrutura do SB100 e leve o suporte para o bloco de aquecimento 4 Prima a tecla apropriada para iniciar os passos de agita o incuba o 5 Terminado o passo de incuba o retire o suporte e deixe o a incubar temperatura ambiente durante 5 minutos Assegure se de que selecciona a tecla apropriada no teclado do SB100 para iniciar o per odo de incuba o 6 Terminados os 5 minutos conforme indicado pelo visor do SB100 adicione 250 ul de Reagente de Selec o a cada tubo de reac o utilizando um pipetador de repeti o Todas as misturas de reac o dever o estar cor de rosa 7 Cubra os tubos com os cart es vedantes e a estrutura do SB100 e leve o suporte para o bloco de aquecimento Prima a tecla apropriada para iniciar os passos de agita o incuba o 8 Terminada a incuba o retire o suporte do instrumento SB100 e avance para a Detec o H Detec o 1 O passo da detec o deve ser realizado a uma temperatura de 18 C a 28 C 2 Assegure se de que h volume suficiente de Auto Detect 1 e 2 para completar os testes 3 Prepare o Lumin metro Leader HC colocando uma TTU vazia na posi o 1 da cassete e executando o protocolo WASH Para obter instru es espec ficas consulte o Leader HC Luminometer Operator s Manual Manual do Operador do Lumin metro Leader HC 4 Coloque as TT
44. 0 261 8 4 20 238 N 261 N 236 o 11 8 6 51 13 2 7 53 Positiva 5 6 17 7 62 6 9 18 7 81 240 anos y Nadia 1 9 4 210 1 8 21 1 1 6 3 183 2 2 30 1 gt 0 6 3 4 0 4 3 4 Preval ncia 3 8 10 261 4 2 10 236 N 415 N 389 ore 10 4 26 249 9 3 25 269 21a 29 9 0 11 5 17 3 8 2 10 0 z N o calcul vel anos Nesativa 0 6 1 166 2 4 127 0 0 0 120 g 0 0 2 8 0 0 2 5 Preval ncia 6 5 27 415 6 4 25 389 N 261 N 238 ae 8 2 8 98 7 1 7199 Positiva SCIN3 30 a 39 5 0 10 1 13 3 4 0 9 2 4 9 anos N dativa 0 6 1 163 1 7 105 1 4 2 139 1 0 23 2 9 0 0 2 4 0 2 3 6 Preval ncia 3 4 9 261 3 8 9 238 N 261 N 236 5 9 3 51 7 5 4 53 e sae 1 6 9 7 62 2 9 10 7 138 2 anos Naata 1 0 2 210 1 1 36 0 0 5 1 183 1 6 121 g 0 1 2 0 0 0 1 8 Preval ncia 1 9 5 261 2 1 5 236 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 81 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Popula o NILM 2 30 anos Desempenho cl nico do Aptima HPV Assay Na totalidade foram inscritas 11 644 mulheres com resultados citol gicos de NILM no Estudo NILM destas 773 mulheres foram exclu das As restantes 10 871 mulheres foram consideradas eleg veis para testes no Panther System
45. 0 8 0 0 0 2 0 0 0 0 0 4 3 9 0 5 4 2 14 Pos mod 108 100 100 N A 12 22 0 3 2 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 6 12 8 1 6 13 0 15 Pos mod 108 100 100 N A 23 37 0 7 2 8 0 3 1 5 0 0 0 0 0 1 0 6 2 5 10 5 2 6 11 0 16 Neg 108 0 9 99 1 1 79 0 03 0 0 2 3 0 0 1 7 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 7 5 0 1 81 an lise de variabilidade da rela o S CO do controlo interno para os pain is negativos 1 4 8 9 12 16 an lise de variabilidade da rela o S CO do analito para os pain is positivos 2 3 5 6 7 10 11 13 14 15 1 reac o inv lida n o foi novamente testada S CO rela o sinal cutoff DP desvio padr o N A n o aplic vel Aptima HPV Assay 40 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Reactividade cruzada Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS A especificidade anal tica do Aptima HPV Assay foi avaliada com meio de solu o PreservCyt dilu do em meio de transporte de esp cimes Aptima e aditivado com bact rias leveduras ou fungos cultivados v rus cultivados ou transcritos de HPV de baixo risco in vitro A sensibilidade anal tica foi avaliada com o mesmo painel aditivado com uma baixa concentra o de c lulas SiHa infectadas pelo HPV 1 c lula por reac o Os organismos e as concentra es de teste s o identificados na Tabela 8 N o se observou qualquer efeito na especificidade ou sensibilidade do Aptima HPV Assay com qualquer dos organ
46. 0 ng frasco desidratadas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente IC Reagente de Controlo Interno do HPV 1 frasco Transcrito de RNA n o infeccioso em solu o tamponada com lt 5 de detergente Embalagem temperatura ambiente do Aptima HPV conservar a uma temperatura de 15 C a 30 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de Reconstitui o de Amplifica o do HPV 1 frasco Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o enzim tica do HPV 1 frasco Solu o tamp o com HEPES contendo um agente tensioactivo e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sondas do HPV 1 frasco Solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selec o do HPV 1 frasco Solu o tamponada com 600 mM de borato contendo agente tensioactivo Aptima HPV Assay 9 AW 11141 601 Rev 003 PT Sistemas DTS Aptima Embalagem temperatura ambiente do Aptima HPV conservar a uma temperatura de 15 C a 30 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade TCR Reagente de capta o do alvo do HPV cido nucleico n o infeccioso numa solu o tamponada contendo fase s lida lt 0 5 mg ml 1 frasco Cart es Vedantes 1 embalagem Colarinhos de Reconstitui o 3 Embalagem de calibradores Aptima HPV C digo de Produto 302554 conservar a uma temperatura de 2
47. 10 Materiais opcionais cccccccceeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeteeeseneteetes 11 Procedimento de teste dos Sistemas DTS 11 Notas sobre o procedimento 17 Panther System Panther System ccccssseeeseeeseeeeenseeeeseeeeeeeeeesenseeeeees 25 Reagentes e materiais fornecidos 25 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 26 Materiais opcionais e irereaeee 27 Procedimento de teste no Panther System 27 Notas sobre o procedimento cccceeceeeeeeetecteeeesteeeeees 29 Tigris DTS System Tigris DTS System cceeseenseeeeeseneeeeeeeeeeeesnnseeenes Reagentes e materiais fornecidos Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 20 Materiais opcionais rr 21 Procedimento de teste do Tigris DTS System 21 Notas sobre o procedimento 24 Aptima HPV Assay AW 11141 601 Rev 003 PT Informa es gerais Aptima Informa es gerais Utiliza o prevista O Aptima HPV Assay um teste com sonda de amplifica o do cido nucleico alvo para a detec o qualitativa in vitro do RNA mensageiro messenger RNA mRNA viral E6 E7 de 14 tipos de HPV de alto risco do v rus do papiloma humano human papillomavirus HPV 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 68 O Aptima HPV Assay n o discrimina entre os 14 tipos de alto risco Os esp c
48. 18 1 2 0 00 0 0 0 20 1 3 0 14 0 9 1 53 10 3 1 56 10 5 1550 c pias Amostra cl nica positiva 407 524 000 0 0 000 00 loool 00 looo 00 323 392 3 23 392 baixa 1 do HPV Amostra cl nica positiva 55 707 000 00 041 58 000 00 000 00 4 57 64 7 4 59 650 baixa 2 do HPV Amostra cl nica positiva 145 4923 026 25 000 00 0 00 00 132 129 323 316 3 49 342 baixa 3 do HPV Amostra cl nica positiva 55 468 050 107 020 42 0 00 00 099 211 302 646 322 689 baixa 4 do HPV IVT de HEV 16 102 11 09 0 08 0 7 0 00 00 0 00 00 0 26 23 0 54 49 061 5 5 183 c pias Wide HEY 18 108 11 78 0 00 0 0 043 3 7 000 00 1 12 95 1 97 167 230 19 6 155 c pias gelulas Mats 108 10 73 0 00 0 0 059 5 5 072 67 082 76 1 86 17 3 2 23 20 8 0 63 c lulas C lulas HeLa 108 6 78 0 00 0 0 0 56 83 0 00 00 1 23 18 2 3 08 455 3 37 49 7 0 35 c lulas celulas ole 107 7 74 0 37 48 0 00 0 0 0 00 0 0 0 00 00 3 85 49 8 3 87 50 1 0 90 c lulas Doze amostras apresentaram resultados do Aptima HPV Assay inv lidos 1 para a amostra cl nica positiva alta 1 do HPV 1 para a amostra cl nica positiva alta 2 do HPV 1 para IVT de HPV 16 1830 c pias 1 para IVT de HPV 18 1550 c pias 1 para a amostra cl nica positiva baixa 1 do HPV 6 para IVT de HPV 16 183 c pias e 1 para c lulas SiHa 0 90 c lulas CV coefi
49. 2 As mulheres foram inscritas tanto no Estudo ASC US como no Estudo NILM com base em resultados citol gicos provenientes de rastreios de rotina ao cancro do colo do tero A popula o do Estudo ASC US incluiu mulheres com 21 anos e idade superior com resultados citol gicos de ASC US e a popula o do Estudo NILM incluiu mulheres com 30 anos e idade superior com resultados citol gicos de NILM O Estudo NILM foi concebido para apoiar a reivindica o de rastreio auxiliar para mulheres com 30 anos e idade superior pois as mulheres nesta faixa et ria com resultados citol gicos mais altos do que ASC US devem seguir para colposcopia independentemente do seu estado de HPV Foram analisadas mulheres provenientes de 18 cl nicas sobretudo cl nicas de obstetr cia ginecologia que abrangeram uma ampla distribui o geogr fica e uma popula o diversificada As mulheres eleg veis foram designadas para o Estudo ASC US ou o Estudo NILM com base no esp cime de encaminhamento de citologia de base l quida ThinPrep Os esp cimes de encaminhamento residuais foram testados com o Aptima HPV Assay e com um teste do DNA de HPV dispon vel no mercado Todas as mulheres no Estudo ASC US foram encaminhadas para colposcopia independentemente dos seus resultados do teste de HPV Foi obtida uma curetagem endocervical endocervical curettage ECC biopsia e biopsias cervicais por pun o 1 biopsia de cada um dos 4 quadrantes Caso fosse vis vel uma les
50. 2 159 2 5 c lulas 97 7 100 91 2 97 9 C lulas SiHa 77 2 125 162 79 0 128 162 1 c lula 70 1 83 0 72 1 84 6 IVT transcrito in vitro IVT foi aditivado em STM e as c lulas foram aditivadas em solu o PreservCyt A esperada de concordancia positiva foi de 95 foi observada mais baixa possivelmente devido a variabilidade de fabrico do membro do painel Aptima HPV Assay 65 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Tabela 30b Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay no Estudo 1 e 2 Descri o do painel Concord ncia negativa e Percentil de distribui o dos valores de S CO do analito para os membros do painel com resultados negativos esperados Descri o do painel c pias ou c lulas reac o Estudo 1 3 locais de teste Estudo 2 1 local de teste de concord ncia negativa CI de 95 de concord ncia negativa CI de 95 IVT de HPV 18 78 8 126 160 83 3 135 162 1 c pia 71 8 84 4 76 8 88 3 IVT de HPV 16 80 9 131 162 88 3 143 162 1 c pia 74 1 86 2 82 4 92 4 C lulas HeLa 0 05 c lulas 79 0 128 162 72 1 84 6 82 1 133 162 75 5 87 2 C lulas SiHa 93 8 152 162 95 7 155 162 0 03 c lulas 89 0 96 6 91 4 97 9 STM Lote 1 r7 100 r7 100 STM Lote 2 es 999 or7 100 STM Lote 3 eos eoo 056 999
51. 239 N 262 N 237 di 12 2 6 49 13 2 7 53 a a 5 8 18 4 6 5 6 9 18 7 8 1 2 40 anos i 1 9 4 213 1 9 22 2 1 6 3 184 2 2 30 2 Negativa 0 6 3 4 0 4 3 4 Preval ncia 3 8 10 262 4 2 10 237 N 415 N 389 Positiva 10 4 26 250 9 3 25 269 21a29 8 9 11 4 17 2 8 2 10 0 2 s N o calcul vel anos f 0 6 1 165 2 4 125 0 0 0 120 Negativa 0 0 2 8 0 0 2 5 Preval ncia 6 5 27 415 6 4 25 389 N 262 N 239 E 8 4 8 95 7 0 7 100 Positiva gt CIN3 30 a 39 5 2 10 4 14 1 3 9 9 1 4 9 z anos 0 6 1 167 1 8 111 1 4 2 139 1 0 22 9 Negativa 0 0 2 4 0 2 3 6 Preval ncia 3 4 9 262 3 8 9 239 N 262 N 237 a 6 1 3 49 7 5 4 53 ls 1 6 10 2 6 5 2 9 10 7 13 9 2 40 anos 5 3 0 9 2 213 1 1 38 0 0 5 1 184 1 6 122 Negativa 0 1 2 0 0 0 1 8 Preval ncia 1 9 5 262 2 1 5 237 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 52 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Popula o NILM 2 30 anos Desempenho Cl nico do Aptima HPV Assay com Esp cimes de Citologia L quida ThinPrep Na totalidade verificaram se 11 644 mulheres com resultados citol gicos de NILM inscritas no Estudo NILM Destas 773 mulheres foram retiradas e exclu das da an lise As restantes 10 871 m
52. 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado estimativas ajustadas em rela o ao desvio de verifica o Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV Resultado do Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 4 5 3 7 Positiva i 2 7 7 4 75 2 3 6 1 7 3 2 1 26 3 1 6 33 5 2CIN2 Negativa 0 6 0 5 0 2 1 9 0 1 2 1 Preval ncia 0 9 0 9 3 0 2 3 Positiva j 1 6 5 5 24 9 1 3 4 1 21 0 2 0 307 0 1 0 423 8 2CIN3 Negativa 0 1 0 1 0 0 1 7 0 0 2 4 Preval ncia 0 4 0 4 Tabela 47 Popula o NILM gt 30 anos Riscos absolutos e relativos de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado estimativas n o ajustadas Resultado do Aptima HPV Assay N 818 Teste do DNA do HPV N 800 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 P 5 2 14 269 3 8 16 416 Positiva 3 5 6 6 Jz 2 9 4 5 a gt CIN2 1 1 6 549 1 9 12 3 0 8 3 384 1 4 16 8 E Negativa 0 5 1 9 0 2 1 9 Preval ncia 2 4 20 818 2 4 19 800 3 7 10 269 2 4 10 416 Positiva 2 5 4 3 sd 1 6 2 7 bys gt CIN3 f 0 2 1 549 2 6 159 0 3 1 384 1 2 71 8 E Negativa 0 0 0
53. 5 C a 30 C antes do in cio do ensaio 2 Seo Reagente de Sonda reconstitu do contiver precipitado que n o se dissolva novamente temperatura ambiente aque a o a uma temperatura m xima de 60 C durante 1 ou 2 minutos N o utilize se houver precipitado ou nebulosidade 3 Se o wTCR contiver precipitado aque a o wTCR a uma temperatura de 42 C a 60 C durante um m ximo de 90 minutos Deixe o wTCR equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado persistir 4 Seo Reagente de Selec o contiver precipitado aque a o Reagente de Selec o a 60 C 1 C por um m ximo de 45 minutos para facilitar a dissolu o do precipitado Misture o frasco suavemente a cada 5 a 10 minutos Deixe o Reagente de Selec o equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado ou a nebulosidade persistir 5 Misture bem cada reagente invertendo o suavemente antes de o colocar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes 6 N o ateste frascos de reagente O Panther System reconhece e rejeita os frascos que tenham sido atestados D Manuseamento de amostras 1 Deixe as amostras calibradores e esp cimes alcan ar a temperatura ambiente antes de serem processadas 2 N o agite os esp cimes no vortex 3 Inspeccione os tubos de amostras antes de os colocar no suporte Se um tubo de amostra contiver bolhas ou um volume mais inferior ao normalmente
54. 65 70 Baseman J G and L A Koutsky 2005 The epidemiology of human papillomavirus infections J Clin Virol 32 Suppl 1 S16 24 Kacian D L and T J Fultz 1995 Nucleic acid sequence amplification methods U S Patent 5 399 491 Arnold L J P W Hammond W A Wiese and N C Nelson 1989 Assay formats involving acridinium ester labeled DNA probes Clin Chem 35 1588 1594 Nelson N C A BenCheikh E Matsuda and M Becker 1996 Simultaneous detection of multiple nucleic acid targets in a homogeneous format Biochem 35 8429 8438 Clad A M Reuschenbach J Weinschenk R Grote J Rahmsdorf and N Freudenberg Performance of the Aptima high risk HPV mRNA assay in a referral population in comparison with Hybrid Capture 2 and cytology 2010 J Clin Microbiol n a doi 10 1128 JCM 01674 10 Ratnam S F Coutless D Fontaine J Bentley N Escott P Ghatage G Holloway E Bartellas N Kum and A Lear 2008 Clinical Correlations of Aptima HPV E6 E7 mRNA Test in Cervical Cancer Screening Preliminary Results from a Multicentre Candian Study Presented at EUROGIN 2008 November 12 15 2008 Scientific Communication SS 8 6 Szarewski A L Ambroisine L Cadman J Austin L Ho G Terry S Little R Dina J McCarthy H Buckley C Bergeron P Soutter D Lyons and J Cuzick 2008 Comparison of predictors for High Grade Cervical Intraepithelian Neoplasia in Women with Abnormal Smears Cancer Epidemiol Biomarkers Pre
55. 68 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System A concord ncia foi de 100 para os membros do painel de HPV positivo alto 98 6 para os membros do painel de HPV positivo baixo e 2 94 4 para os membros do painel de HPV negativo Tabela 33 Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay no Estudo 3 Descri o do painel concord ncia percentual Descri o do painel ii de Positivo baixo 1 ee US Positivo baixo 2 os Positivo alto 1 oe O Positivo alto 2 oes foes Negativa 1 eos Negativa 2 Goo crs Tabela 34 Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay no Estudo 3 An lise do sinal para os membros do painel com resultados positivos esperados Nas proprias Entre Entre Entre listas listas de instrumentos operadores Entre lotes de trabalho trabalho Total Descri o do s co Cv Cv Cv Cv Cv Cv painel n M dia DP DP DP DP DP DP Positivo baixo 1 72 9 8 0 0 0 0 0 0 2 2 22 8 3 0 30 4 3 7 38 0 Positivo baixo 2 72 10 5 0 0 2 2 21 0 0 9 9 0 3 7 35 3 2 7 26 1 5 2 49 5 Positivo alto 1 72 22 7 1 3 5 6 0 0 0 1 0 5 3 0 13 3 3 7 16 4 5 0 21 9 Positivo alto 2 72 23 9 0 0 0 0 0 0 2 9 12 3 3 0 12 4 4 2 17 4 DP desvio padr o CV coeficiente de varia o S CO rela o de sinal para cutoff Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa Tal pode ocorrer se a variabilidade provo
56. 7 3 ane 61 5 54 5 o Especificidade 539 876 58 3 64 7 438 804 51 0 57 9 14 2 13 1 0 PPV 56 393 12 7 15 6 55 421 11 7 14 2 99 3 99 1 0 NPV 539 543 98 3 99 8 438 442 97 9 99 7 Preval ncia 6 4 60 936 6 8 59 863 Todas as biopsias Sensibilidade dai 77 5 96 1 mane 79 7 97 3 Especificidade Baun 57 0 63 4 AR 49 9 56 6 9 4 8 5 0 PPV 37 394 8 1 10 4 36 422 7 4 9 4 99 3 99 3 0 NPV 541 545 98 3 99 8 440 443 98 3 99 8 Preval ncia 4 4 41 939 4 5 39 865 2CIN3 Biopsias direccionadas Sensibilidade tries 78 0 98 1 Eco 82 3 99 4 Especificidade ROS 56 4 62 7 MERO 49 4 56 1 6 9 6 4 0 EENAA 27 394 5 8 7 6 27 422 5 5 7 0 99 6 99 8 0 NPV 541 543 98 8 100 441 442 98 9 100 Preval ncia 3 1 29 937 3 2 28 864 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia O resultado do consenso de histologia foi obtido recorrendo apenas a resultados de biopsias direccionadas As mulheres sem biopsias direccionadas reflectem uma colposcopia normal e s o inclu das nestas an lises como n o sofrendo de doen as lt CIN2 ou lt CIN3 conforme adequado Nem sempre foi alcan ado um consenso quando foram inclu das apenas biopsias direccionadas
57. 8 0 0 1 1 Preval ncia 1 3 11 818 1 4 11 800 18 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 84 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Tabela 48 Popula o NILM 2 30 anos Riscos absolutos e relativos de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado por grupo et rio estimativas n o ajustadas Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 818 N 800 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Idade Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 N 383 N 376 Es 4 6 7 153 3 3 7 215 Positiva 30 a 39 2 5 5 9 5 3 1 8 4 1 26 anos Rs 0 9 2 230 1 1 25 0 1 2 2 161 0 6 12 4 9 0 1 2 2 0 2 3 2 Preval ncia 2 3 9 383 2 4 9 376 2CIN2 N 435 N 424 ge 6 0 7 116 4 5 9 201 Positiva gt 40 3 2 8 5 48 2 9 5 3 10 0 Idade ao 1 3 4 319 1 4 16 1 0 4 4 223 1 3 78 1 9 0 4 2 3 0 0 1 8 Preval ncia 2 5 11 435 2 4 10 424 N 383 N 376 E 3 3 5 153 2 3 5 215 Positiva 30 a 39 1 6 4 1 75 1 1 2 9 ay anos ate 0 4 11230 0 9 63 7 0 6 11161 0 4 31 7 9 0 0 1 6 0 0 2 2
58. 8 3 2 3 25 3 2 6 28 5 IVT de HPV 16 30 c pias 162 10 8 0 1 0 8 0 0 0 1 1 3 0 4 3 8 0 9 8 4 1 0 9 3 C lulas HeLa 2 5 c lulas 162 12 4 0 0 0 4 3 3 0 4 3 1 0 0 2 3 18 4 2 4 19 0 C lulas SiHa 1 c lula 162 7 5 0 3 3 7 1 0 13 0 0 0 0 0 4 8 63 6 4 9 65 0 DP desvio padr o CV coeficiente de varia o IVT transcrito in vitro S CO rela o de sinal para cutoff Uma amostra apresentou um resultado do Aptima HPV Assay inv lido e n o foi inclu da na an lise Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa Tal pode ocorrer se a variabilidade provocada por esses factores for muito diminuta Nestes casos DP e CV s o apresentados a 0 Aptima HPV Assay 67 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Tabela 32 Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay no Estudo 2 Variabilidade do sinal para os membros do painel com resultados positivos esperados Entre Nas pr prias Es R instrumento Entre Entre listas listas de Descri o do painel s operadores Entre lotes de trabalho trabalho Total c pias ou S CO c lulas reac o n M dia DP CV DP CV DP CV DP CV DP CV DP ICV INT de HPV 16 HPV 18 462 232 o4 15 o6 23 08 34 os 34 15 63 20 84 100 c pias C lulas SiHa 3 c lulas igo que o o 4 7 980 o o 35 186 27 200 54 28 9 c lulas HeLa
59. 95 303096 303014 303013 104772 02 902731 902714 10612513 Tecan 301154C 302657 105668 103036A CL0041 501616 CL0040 CL0041 CL0041 501604 Aptima HPV Assay 26 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Panther System Luvas descart veis Proteinase K apenas para esp cimes conservados em SurePath Kit de Solu o de Transfer ncia Aptima 303658 Materiais opcionais C digo de Produto Intensificador de Lix via para limpeza 302101 Procedimento de teste no Panther System Nota Consulte o Panther System Operator s Manual Manual do Operador do Panther System para mais informa es sobre o procedimento do Panther System A Prepara o da rea de trabalho Limpe as superf cies de trabalho onde ser o preparados os reagentes e as amostras Limpe as superf cies de trabalho com 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M de solu o de hipoclorito de s dio Deixe a solu o de hipoclorito de s dio entrar em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto e depois enxag e com gua N o deixe a solu o de hipoclorito de s dio secar Cubra a superf cie da bancada onde ser o preparados os reagentes e as amostras com capas limpas e absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Prepara o dos reagentes de um novo kit Nota A Reconstitui o do Reagente deve ser realizada antes de qualquer trabalho no Panther System 1 Para reconstituir os Reagentes de Amplifica o E
60. 97 12 0 15 0 55 420 11 7 14 2 98 9 99 1 0 NPV 531 537 97 8 99 6 437 441 97 9 99 7 Preval ncia 6 4 60 934 6 9 59 861 Todas as biopsias Sensibilidade pore 77 5 96 1 ae 79 7 97 3 Especificidade pen 56 5 62 9 sana 49 9 56 7 9 3 8 6 0 PPV 37 398 8 0 10 3 36 421 7 4 9 4 99 3 99 3 0 NPV 535 539 98 3 99 8 439 442 98 3 99 8 Preval ncia 4 4 41 937 4 5 39 863 2CIN3 Biopsias direccionadas Sensibilidade ae 78 0 98 1 ae 82 3 99 4 Especificidade Edo 55 8 62 2 nies 49 4 56 1 6 8 6 4 0 7 PPV 27 398 5 7 7 5 27 421 5 5 7 0 99 6 99 8 0 y NPV 535 537 98 8 100 440 441 98 9 100 Preval ncia 3 1 29 935 3 2 28 862 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico O resultado do consenso de histologia foi obtido recorrendo apenas a resultados de biopsias direccionadas As mulheres sem biopsias direccionadas reflectem uma colposcopia normal e s o inclu das nestas an lises como n o sofrendo de doen as lt CIN2 ou lt CIN3 conforme adequado Nem sempre foi alcan ado um consenso quando foram inclu das apenas biopsias direccionadas Aptima HPV Assay 76 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Quando foram avaliadas todas as bio
61. Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais 1 2 Transporte e conserve os esp cimes a uma temperatura de 2 C a 30 C durante um m ximo de 60 dias Se for necess rio um per odo de conserva o mais longo os esp cimes do kit de transporte podem ser conservados a uma temperatura de 20 C ou menos durante um m ximo de 24 meses C Tratamento dos esp cimes de citologia l quida SurePath apenas Tigris DTS System e Panther System Aptima HPV Assay 7 AW 11141 601 Rev 003 PT Informa es gerais Aptima Nota Os esp cimes de citologia l quida SurePath t m de ser tratados com a Solu o de Transfer ncia Aptima ou o reagente PACE 2 Fast Express antes de serem analisados com o Aptima HPV Assay 1 Solu o de Transfer ncia Aptima apenas Tigris DTS System e Panther System As amostras tratadas podem ser conservadas entre 2 C e 8 C durante at 17 dias antes da realiza o de testes com o Aptima HPV Assay Consulte mais detalhes no folheto informativo do Kit de Transfer ncia de Esp cimes Aptima 2 Reagente PACE 2 Fast Express apenas Tigris DTS System a Prepare o kit de reagente PACE 2 Fast Express seguindo as instru es abaixo N o siga as instru es do folheto informativo do Kit de Reagente PACE 2 Fast Express 1 Adicione 1 ml de diluente A ao frasco de reagente B 2 Coloque novamente a tampa no frasco do reagente B e dissolva o conte do do reagente B invertendo suav
62. C a 8 C ap s a recep o Simbolo Componente Quantidade PCAL Calibrador Positivo do HPV 5 frascos Transcrito in vitro de HPV 16 n o infeccioso a 1000 c pias por ml numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente NCAL Calibrador Negativo do HPV 5 frascos Solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Embalagem de controlos Aptima HPV C digo do Produto 302556 conservar a uma temperatura de 2 C a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade PC Controlo Positivo do HPV 5 frascos C lulas cultivadas HPV negativas e HPV positivas desactivadas e lisadas a 25 c lulas por ml numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente NC Controlo Negativo do HPV 5 frascos C lulas cultivadas HPV negativas desactivadas e lisadas numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Os materiais dispon veis na Hologic t m a indica o do c digo de produto a menos que seja especificado em contr rio Lumin metro Leader HC C digo de Produto 104747 Sistema de Capta o do Alvo Target Capture System TCS Hologic 104555 2 Bacias de Calor Seco Agitadores SB100 105524F Kit Aptima Auto Detect 301048C Kit de Fluidos do Aptima Assay 302002C Micropipetador 1000 ul RAININ PR1000 104216 2 pipetadores eppendorf Repeater Plus 105725 Pontas de pipetador de repeti o 2 5 ml 5 0 ml 25 0 ml Pontas 1000 ul P1000 105049 Pontas de di me
63. Fluido de Desactiva o e Reagente de Oleo Aptima Kit Aptima Auto Detect Kit de Conservante do Fluido do Sistema Aptima Pontas 1000 ul condutoras detec o de l quido Kit de Execu o do Tigris DTS System C digo de Produto 105118 302382 301048 302380 10612513 Tecan 301191 Unidades Multitubos Multi tube Units MTU 104772 02 Saco de Residuos de MTU Pontas 900907 Deflectores do Recipiente de Residuos de MTU 900931 Tampas do Recipiente de Residuos de MTU 105523 Kit de Transfer ncia de Esp cimes Aptima 301154C Kit Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais 302657 Tampas Perfuraveis Aptima 105668 Tampas nao perfuraveis de substituigao 103036A Tampas sobresselentes para solu es de reconstitui o dos Reagentes de Amplifica o e de Sonda CLO041 Tampas sobresselentes para a solu o de reconstitui o do Reagente Enzim tico 501616 Tampas sobresselentes para o TCR e o Reagente de Selec o CL0040 Lix via m nimo de 5 ou 0 7 M de solu o de hipoclorito de s dio Aptima HPV Assay 20 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Tigris DTS System gua para O Tigris DTS System Consulte o Tigris DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Tigris DTS System para especifica es Luvas descart veis Proteinase K apenas para esp cimes conservados em SurePath Kit de Solu o de Transfer ncia Aptima 303658 ou Kit de Reagente PACE 2 Fast Express 102930F Materiais opcionais
64. HOLOGIC Aptima Aptima HPV Assay Para utiliza o em diagn stico in vitro Exclusivamente para exporta o dos EUA Informa es gerais 0 cee eee eee 2 Utiliza o prevista a ses an eee eee eed ee deb eee le ewe edad eee eee 2 Resumo e explica o do teste 0 2 0 eae 2 Princ pios do procedimento 00 t tee 2 Advert ncias e precau es 1 tenets 3 Requisitos de conserva o e manuseamento dos reagentes 0 0005 5 Colheita e conserva o de esp cimes iiciiiiiiiiciiis 6 Procedimentos de controlo de qualidade 2220 eee eee eee 31 Interpreta o do teste sais cee ere 32 EIMITA ES si sad dada dda Ed Ae a 33 Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS 2200 eee eee eee 35 Resultados previstos do Tigris DTS System Preval ncia de mRNA do HPV de LOSS CO cage ces eta arara ra ig gs ac EG UA CI ESC A asa ata SEO a ata 44 Desempenho do ensaio no Tigris DTS System 0 00 e eee ees 45 Resultados previstos do Panther System Preval ncia de mRNA do HPV de AILO TNS CO a pecs o Sf ty ra rf a ca ara a O a a Cave 73 Desempenho do ensaio no Panther System 0 0 0 eee eee eee 74 Bibliografia 0 ccc eee nen 98 Sistemas DTS sistemas DUS naino aaa te iad 9 Reagentes e materiais fornecidos ccccccceeeeeeeeeeeteeee 9 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente
65. Havia amostras em falta para onze mulheres tendo sido exclu das da an lise As restantes 10 860 mulheres eleg veis para avalia o tinham idade igual ou superior a 30 anos com resultados citol gicos de NILM e resultados do Aptima HPV Assay no Panther System Das 512 mulheres com resultados positivos do Aptima HPV Assay no Panther System 284 compareceram na colposcopia Das 10 348 mulheres com resultados negativos do Aptima HPV Assay 580 compareceram na colposcopia Vinte 20 mulheres tinham 2CIN2 e onze 11 tinham 2CIN3 798 mulheres tinham histologia normal CIN1 46 mulheres apresentavam um estado de doen a indeterminado Os resultados do Aptima HPV Assay atrav s do consenso dos diagn sticos do painel de revis o de histologia s o apresentados na Tabela 44 Tabela 44 Popula o NILM gt 30 anos Resultados do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado atrav s do consenso dos diagn sticos do painel de revis o de histologia Resultado do Consenso do diagn stico do painel de revis o de histologia Aptima HPV Teste do Assay DNA do HPV Indeterminado Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancro Total Positiva Positiva 11 211 12 4 7 2 247 Positiva Negativa 2 19 0 0 0 1 22 e Sem Positiva MA 2 12 1 0 0 0 15 resultado Negativa Positiva 10 170 7 2 1 0 190 Negativa Negativa 20 353 9 2 0 0 384 X Sem Negativa resultado 1 4 0 1 0 0 6 Total 46 769 29 9 8 oan 864 T
66. ILM foi concebido para apoiar a reivindica o de rastreio auxiliar para mulheres com idade igual ou superior a 30 anos dado que as mulheres nesta faixa et ria com resultados citol gicos mais altos do que ASC US devem seguir para colposcopia independentemente do seu estado de HPV Foram analisadas mulheres provenientes de 18 cl nicas sobretudo cl nicas de obstetr cia ginecologia que abrangeram uma ampla distribui o geogr fica e uma popula o diversificada As mulheres eleg veis foram designadas para o Estudo ASC US ou o Estudo NILM com base no esp cime de citologia de base l quida ThinPrep encaminhado Os esp cimes residuais encaminhados foram inicialmente testados com o Aptima HPV Assay no Tigris DTS System e com um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado Os esp cimes foram ent o arquivados e conservados a 70 C at serem testados com o Aptima HPV Assay no Panther System Todas as mulheres no Estudo ASC US foram encaminhadas para colposcopia independentemente dos seus resultados do teste de HPV Foi obtida uma curetagem endocervical ECC biopsia e biopsias cervicais por pun o 1 biopsia de cada um dos 4 quadrantes Caso fosse vis vel uma les o era obtida uma biopsia por pun o m todo direccionado 1 biopsia por les o e quadrantes sem uma les o vis vel foram submetidos a biopsia na jun o escamo colunar m todo aleat rio No Estudo NILM as mulheres positivas com o Aptima HPV Assay no Tigris DTS Sy
67. IN3 por grupo et rio Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 939 N 865 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 N 415 N 389 Sensibilidade pee 81 7 99 3 bees 86 7 100 ae 42 3 33 0 0 dido Especificidade 164 388 37 5 47 2 120 364 28 3 38 0 anos 10 4 9 3 o PPV 26 250 8 9 11 4 25 269 8 2 10 0 99 4 100 0 NPV 164 165 97 2 100 120 120 97 5 100 Preval ncia 6 5 27 415 6 4 25 389 N 262 N 239 Sensibilidade ao 56 5 98 0 es 45 3 93 7 rae 65 6 59 6 0 das Especificidade 166 253 59 6 71 2 137 230 53 1 65 7 anos 8 4 7 0 PPV 8 95 5 2 10 4 7 100 3 9 9 1 99 4 98 6 0 NPV 166 167 97 6 100 137 139 96 4 99 8 Preval ncia 3 4 9 262 3 8 9 239 N 262 N 237 Sensibilidade a 23 1 88 2 ae 37 6 96 4 ae 82 1 78 9 0 Sa Especificidade 211 257 77 0 86 3 183 232 73 2 83 6 Anos PPV gel 1 6 10 2 ie 2 9 10 7 P 3 49 IA 4 53 i ie 99 1 99 5 0 NPV 211 213 98 0 99 9 183 184 98 2 100 Preval ncia 1 9 5 262 2 1 5 237 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 50 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho
68. IVT para todos os 14 gen tipos de alto risco e 4 linhas celulares infectadas com HPV SiHa HeLa MS751 e ME180 ATCC Manassas Virg nia No caso dos pain is de IVT o meio de transporte de esp cimes foi aditivado com IVT com v rias concentra es e depois dilu do com esp cimes de citologia l quida ThinPrep individuais negativos antes de serem realizados testes No caso de pain is de c lulas infectadas com HPV grupos de esp cimes de citologia l quida ThinPrep negativos para HPV foram aditivados com c lulas infectadas com HPV com v rias concentra es e depois dilu dos com meio de transporte de esp cimes antes de serem realizados testes Trinta r plicas de cada n vel de c pias foram testadas com cada um de dois lotes de reagente para um total de 60 r plicas Realizaram se testes durante 17 dias com 1 a 12 execu es por dia e 5 r plicas de um dado gen tipo com testes de concentra o em cada execu o O limite de detec o de 95 foi calculado a partir da an lise de regress o Probit dos resultados de positividade para cada painel de dilui o Os resultados da an lise Probit Tabela 55 mostram que os tipos 16 18 31 33 35 39 45 51 56 59 e 68 de HPV tinham limites de detec o de 95 inferiores a 100 c pias reac o tendo os tipos 52 58 e 66 limites de detec o de 95 entre 100 e 500 c pias reac o As quatro linhas celulares testadas tinham limites de detec o de 95 inferiores a 1 c lula reac o
69. NPV 543 549 98 1 99 5 381 384 98 1 99 8 Preval ncia 2 4 20 818 2 4 19 800 Sensibilidade som 62 3 98 4 oi 62 3 98 4 Especificidade ae 64 6 71 0 aaa 45 1 52 0 2CIN3 o 3 7 2 4 REM 10 269 2 5 4 3 10 416 1 6 2 7 99 8 99 7 0 NPV 548 549 99 2 100 383 384 98 9 100 Preval ncia 1 3 11 818 1 4 11 800 18 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay nao apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 87 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Enquanto que estabelecer a sensibilidade e especificidade cl nicas exige a conclus o dos 3 anos de acompanhamento a compara o directa entre o Aptima HPV Assay e o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado demonstra uma sensibilidade semelhante e uma especificidade melhorada estatisticamente significativa do Aptima HPV Assay em rela o ao teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para a detec o de 2CIN2 conforme demonstrado pelas rela es de taxas de resultados positivos reais e de resultados positivos falsos Tabela 51 e Tabela 52 respectivamente Tabela 51 Popula o NILM gt 30 anos Rela o de taxas de resultados positivos reais Aptima HPV Assay teste de DNA do HPV aprovado pela FDA para mulheres com 2CIN2 estimativas n o ajustadas Teste do DNA do HPV
70. PV Assay Teste do DNA do HPV N 939 N 865 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 N 415 N 389 Sensibilidade een 80 2 95 4 fees 86 1 98 3 ee 44 9 35 5 4038 Especificidade 159 354 39 8 50 1 117 330 30 5 40 8 anos 22 0 20 8 0 PPV 55 250 19 6 24 2 56 269 19 0 22 5 96 4 97 5 0 NPV 159 165 93 0 98 5 117 120 93 6 99 4 Preval ncia 14 7 61 415 15 2 59 389 N 262 N 239 Sensibilidade EDS 69 9 97 2 eon 58 4 91 9 eee Especificidade eco 62 1 73 7 RR 55 1 67 8 anos 18 9 16 0 0 PPV 18 95 14 7 22 7 16 100 11 8 19 6 98 8 97 1 0 NPV 165 167 96 5 99 8 135 139 94 1 99 1 Preval ncia 7 6 20 262 8 4 20 239 N 262 N 237 Sensibilidade o 31 3 83 2 EO 39 7 89 2 so Especificidade oa 77 8 87 1 pice 74 0 84 4 Anos 12 2 13 2 0 4 PPV 6 49 5 8 18 4 7 53 6 9 18 7 98 1 98 4 0 NPV 209 213 96 6 99 4 181 184 96 6 99 6 Preval ncia 3 8 10 262 4 2 10 237 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 49 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Tabela 14 Popula o ASC US gt 21 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um Teste do DNA do HPV para a detec o de 2C
71. SiHa e HeLa Positivo Moderado 19 Sy sical aie Positiva 1 c lula reac o 8 STM Lote 2 N A Negativa 9 Grupo cl nico 2 N A Negativa 10 HPV 16 IVT Positivo Baixo 30 c pias reac o Positiva 11 HPV 18 IVT Positivo Baixo 30 c pias reac o Positiva 12 STM Lote 3 N A Negativa 13 HPV 16 IVT Positivo Moderado 100 c pias reac o Positiva 14 HPV 18 IVT Positivo Moderado 100 c pias reac o Positiva 15 HPV 16 e HPV 18 Positivo Moderado 100 100 c pias reac o Positiva 16 Grupo cl nico 3 N A Negativa Foram analisados para os Sistemas DTS cento e oito pontos de dados para cada membro do painel de reprodutibilidade cujos resultados est o resumidos na Tabela 7 A percentagem de positivos para os pain is negativos variou entre O e 3 7 o positivo baixo foi gt 98 e o positivo moderado foi 100 A concord ncia com o resultado esperado foi gt 96 para todos os membros do painel A rela o S CO m dia do IC foi determinada para os 6 membros negativos do painel 1 4 8 9 12 e 16 a variabilidade entre instrumentos operadores lotes e execu es foi calculada bem como a variabilidade intra execu o A rela o S CO m dia do IC para os membros negativos do painel variou entre 1 76 e 1 92 O coeficiente de varia o coefficient of variation CV para os valores da rela o S CO do IC foi bastante baixo lt 10 para todos os par metros avaliados A variabilidade dos valores da rela o S CO do analito para os membros negativos d
72. Transfer ncia de Esp cimes Aptima e depois tratada com a Solu o de Transfer ncia Aptima Uma nica r plica de cada esp cime foi testada com o Aptima HPV Assay Uma al quota individual 1 ml de cada esp cime foi retirada para ser avaliada com um teste de PCR para o HPV dispon vel no mercado A sensibilidade cl nica para a detec o da doen a definida como resultado histol gico 2CIN3 foi calculada tanto para o Aptima HPV Assay como para o teste de PCR para o HPV conforme apresentado na Tabela 26 com os valores de progn stico positivos e negativos Tabela 26 Desempenho do Aptima HPV Assay e do teste de PCR para o HPV dispon vel no mercado para a detec o de CIN3 Aptima HPV Assay Teste de PCR para o HPV N 558 N 558 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 89 3 89 3 ane 0 a T Sensibilidade 25 28 72 8 96 3 25 28 72 8 96 3 56 8 49 1 e O 1 px ig Especificidade 301 530 52 5 60 9 260 530 44 8 53 3 9 8 8 5 0 i n iJ a PPV 25 254 8 1 11 2 25 295 7 0 9 5 99 0 98 9 o 7 _ NPV 301 304 97 6 99 8 260 263 97 2 99 7 Preval ncia 5 0 28 558 5 0 28 558 Esp cimes conservados em SurePath tratados com Reagente PACE 2 Fast Express A sensibilidade do Aptima HPV Assay para a detec o de RNA do HPV em esp cimes de citologia l quida SurePath foi avaliada testando os pain is preparados em grupos de
73. U ml Bacteroides fragilis 1x10 CFU ml Mycoplasma genitalium 1x10 CFU ml Bacteroides ureolyticus 1x10 CFU ml Mycoplasma hominis 5x10 CFU ml Bifidobacterium adolescentis Bifidobacterium breve 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml Neisseria gonorrhoeae Neisseria gonorrhoeae e Chlamydia trachomatis 1x10 CFU ml 2 5x10 CFU ml 2 3x10 TCIDso ml Campylobacter fetus fetus 1x10 CFU ml Neisseria meningitidis 1x10 CFU ml Chlamydia trachomatis 3 2x10 TCIDso ml Peptoniphilus lacrimalis 1x10 CFU ml Clostridium difficile 6x10 CFU ml Peptostreptococcus anaerobius 1x10 CFU ml Clostridium perfringens 1x10 CFU ml Propionibacterium acnes 1x10 CFU ml Corynebacterium genitalium 1x10 CFU ml Proteus mirabilis 1x10 CFU ml Corynebacterium xerosis 1x10 CFU ml Proteus vulgaris 1x10 CFU ml Enterobacter cloacae 1x10 CFU ml Providencia stuartii 1x10 CFU ml Enterococcus faecalis Escherichia coli Finegoldia magna Fusobacterium nucleatum 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml Pseudomonas aeruginosa Ruminococcus productus Serratia marcescens Staphylococcus aureus 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml Gardnerella vaginalis 1x10 CFU ml Staphylococcus epidermidis 1x10 CFU ml Haemophilus ducreyi 1x10 CFU ml Staphylococcus sap
74. U no lumin metro 5 Inicie a sess o no Software do Aptima HPV Assay Caso uma lista de trabalho tenha sido criada assegure se de que est activado o caminho correcto para que o Software do Aptima HPV Assay possa localizar a lista de trabalho correcta 6 Clique em NEW RUN Nova Execu o Caso uma lista de trabalho n o tenha sido criada introduza o n mero de tubos Calibradores Controlos e esp cimes Clique em NEXT Seguinte para iniciar a execu o Nota A execu o deve ser realizada num per odo de 2 horas ap s o final da incuba o do passo de selec o Aptima HPV Assay 16 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Sistemas DTS 7 Prepare Fluido de Desactiva o misturando volumes id nticos de 5 a 7 0 7 Ma 1 0 M de solu o de hipoclorito de s dio e de Tamp o Aptima para Fluido de Desactiva o num recipiente de pl stico com tampa grande Coloque uma etiqueta e escreva a data de validade no recipiente de pl stico O Fluido de Desactiva o permanece est vel durante 4 semanas temperatura ambiente 8 Depois de ter retirado as TTU utilizadas do lumin metro coloque as TTU no recipiente com Fluido de Desactiva o Deixe as TTU no recipiente durante 15 minutos antes de as deitar fora Os m todos de manuseamento e elimina o adequados devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Notas sobre o procedimento A Calibradores Cada execu o de um m ximo de 100 testes deve conter tr s r
75. a Nestes casos DP e CV s o apresentados como 0 Reactividade cruzada Os testes de organismos potencialmente com reactividade cruzada para o Aptima HPV Assay foram realizados utilizando o Tigris DTS System Consulte os resultados em Reactividade cruzada Tabela 35 na sec o Tigris DTS System Aptima HPV Assay 96 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Interfer ncia Os testes com potenciais subst ncias de interfer ncia para o Aptima HPV Assay foram realizados utilizando o Tigris DTS System Consulte os resultados em Interfer ncia Tabela 36 na sec o Tigris DTS System Aptima HPV Assay 97 AW 11141 601 Rev 003 PT Bibliografia Aptima Bibliografia 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 28 24 Walboomers J M M V Jacobs M M Manos F X Bosch J A Kummer K V Shah P J Snijders J Peto C J Meijer N Mu oz 1999 Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide J Pathol 189 12 19 Li N S Franceschi R Howell Jones P J Snijders G M Clifford 2010 Human papillomavirus type distribution in 30 848 invasive cervical cancers worldwide Variation by geographical region histological type and year of publication Int J Cancer n a doi 10 1002 ijc 25396 Czegledy J C Losif B G Hansson M Evander L Gergely and G Wadell 1995 Can a test for E6 E7 transcripts of human
76. a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de Amplifica o do HPV 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos desidratados em solu o tamponada com lt 5 de agente de volume E Reagente Enzim tico do HPV 1 frasco Transcriptase reversa e polimerase do RNA desidratadas em solu o tamponada com HEPES com lt 10 de reagente de volume P Reagente de Sonda do HPV 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas lt 500 ng frasco desidratadas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente IC Reagente de Controlo Interno do HPV 1 frasco Transcrito de RNA n o infeccioso em solu o tamponada com lt 5 de detergente Embalagem temperatura ambiente do Aptima HPV conservar a uma temperatura de 15 C a 30 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de Reconstitui o de Amplifica o do HPV 1 frasco Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o enzim tica do HPV 1 frasco Solu o tamp o com HEPES contendo um agente tensioactivo e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sondas do HPV 1 frasco Solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selec o do HPV 1 frasco Solu o tamponada com 600 mM de borato contendo agente tensioactivo TCR Reagente de capta o do alvo do HPV 1 frasco cido nucleico n o infeccioso numa solu o tamp
77. a durante este passo mh Anote as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Deite fora o frasco e a tampa do IC h poss vel que haja forma o de precipitado no wTCR o que pode resultar em resultados inv lidos devido aos erros de verifica o de volume O precipitado pode ser dissolvido aquecendo o wTCR a uma temperatura de 42 C a 60 C durante um m ximo de 90 minutos Deixe o wTCR equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado persistir 3 Prepare o Reagente de Selec o a Verifique o n mero do lote de reagente na Ficha de C digos de Barras do Lote Principal para garantir que pertence ao kit b Se o Reagente de Selec o contiver precipitado aque a o Reagente de Selec o a 60 C 1 C por um m ximo de 45 minutos para facilitar a dissolu o do precipitado Misture o frasco suavemente a cada 5 a 10 minutos Deixe o Reagente de Selec o equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado ou a nebulosidade persistir Aptima HPV Assay 28 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Panther System Nota Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os colocar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes C Prepara o de reagentes previamente reconstitu dos 1 Os Reagentes de Sonda Amplifica o e Enzim tico previamente reconstitu dos t m de alcan ar a temperatura ambiente 1
78. a instrumentos operadores Entre lotes execu es execu o Total Membro do Cv Cv CV Cv cv cv painel Descri o N positivo Concord ncia IC Analito DP DP DP DP DP DP 1 Neg 108 0 0 100 1 92 0 00 0 0 0 0 0 0 1 5 0 0 1 9 0 0 0 7 0 1 5 8 0 1 63 2 Pos baixo 108 99 1 98 1 N A 10 68 0 3 2 6 0 0 0 0 0 4 4 1 0 0 0 0 2 0 19 0 2 1 19 6 3 Pos baixo 108 100 99 1 N A 10 65 0 5 4 7 0 0 0 0 0 3 2 5 0 3 3 0 24 223 25 23 1 4 Neg 108 0 0 100 1 80 0 00 0 0 2 1 0 0 1 8 0 0 0 2 0 0 0 7 0 1 6 6 0 1 7 2 5 Pos mod 107 100 100 N A 8 84 0 2 1 8 0 1 0 8 0 2 2 3 0 0 0 0 0 6 7 2 0 7 7 8 6 Pos mod 108 100 100 N A 15 75 0 4 2 4 0 4 2 6 1 1 7 0 0 1 0 9 0 6 3 9 1 4 8 7 7 Pos mod 107 100 100 N A 22 90 0 7 3 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 1 9 1 2 2 9 7 8 Neg 108 0 0 100 1 85 0 00 0 0 0 0 0 0 2 2 0 0 1 1 0 0 1 5 0 1 6 1 0 1 6 8 9 Neg 108 3 7 96 3 1 76 0 06 0 0 0 0 0 1 3 6 0 0 0 0 0 0 1 3 0 1 7 5 0 1 8 4 10 Pos baixo 108 99 1 99 1 N A 10 61 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 8 16 8 1 8 16 8 11 Pos baixo 108 98 1 98 1 N A 9 04 0 0 0 0 0 4 4 1 0 0 0 0 0 9 10 0 2 9 32 6 3 1 34 3 12 Neg 108 0 0 100 1 85 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 3 0 0 1 0 0 1 7 6 0 1 7 8 13 Pos mod 108 100 100 N A 10 99 0 1 1 4 0 1
79. ade do esp cime n o foi avaliada em condi es de envio e conserva o para al m das recomendadas As datas de validade indicadas nos kits e tubos de colheita transfer ncia de esp cimes referem se ao local da colheita transfer ncia e n o s instala es de testes Os esp cimes colhidos transferidos a qualquer momento antes destas datas de validade s o v lidos para efeitos de testes desde que tenham sido transportados e conservados de acordo com o folheto informativo apropriado mesmo que estas datas de validade tenham passado J Os esp cimes podem ser infecciosos Empregue Precau es Universais ao executar este ensaio Os m todos de manuseamento e elimina o adequados devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Apenas o pessoal com a devida forma o no manuseamento de materiais infecciosos deve ter permiss o para realizar este procedimento K Evite a contamina o cruzada durante os passos de manuseamento dos esp cimes Certifique se de que os recipientes de esp cimes n o entram em contacto uns com os outros e deite fora os materiais usados sem pass los por cima de recipientes abertos Mude de luvas se elas entrarem em contacto com o esp cime L Ap s a perfura o o l quido pode esguichar pelas tampas dos tubos em certas condi es Consulte Procedimento de teste dos Sistemas DTS Procedimento de teste do Tigris DTS System ou Procedimento de teste no Panther System para obter mais informa es
80. ae SUSI ae e Grupo sde ThinPrep DUETOS aa erea STM meio de transporte de esp cimes IVT transcrito in vitro IVT foi aditivado em STM e as c lulas foram aditivadas em solu o PreservCyt de concord ncia negativa esperada gt 75 e lt 100 Aptima HPV Assay 66 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Tabela 31 Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay no Estudo 1 Variabilidade do sinal para os membros do painel com resultados positivos esperados Nas pr prias ee i Entre Entre listas listas de Descri o do painel Entre locais operadores Entre lotes de trabalho trabalho Total c pias ou S CO c lulas reac o n M dia DP CV DP cv DP CV DP CV DP CV DP CV WT de HPV 16 HPV 18 seis 234 01 04 0 1 04 09 40 0 o 16 70 19 81 100 c pias C lulas SiHa 3 c lulas e ago 479 o o ai 8311o l o loe 31 15 1 286 53 299 c lulas HeLa 7 5 c lulas IVT de HPV 18 100 c pias 162 11 8 0 0 0 0 0 8 6 4 0 1 0 9 1 2 10 1 1 4 12 0 IVT de HPV 16 100 c pias 162 10 8 0 2 1 5 0 0 0 1 1 1 0 3 2 6 0 3 3 1 0 5 4 5 C lulas MS751 1 c lula 162 13 3 0 3 2 1 0 0 1 0 7 8 0 9 7 1 2 2 16 2 2 6 19 4 C lulas ME180 0 3 c lulas 162 6 5 0 2 3 2 0 0 0 6 8 6 0 4 5 5 2 4 36 2 2 5 37 7 IVT de HPV 18 30 c pias 162 9 0 0 7 7 3 0 0 0 7 7 2 0 8
81. aio no Tigris DTS System Aptima Precis o do Ensaio A precis o do Aptima HPV Assay foi avaliada em dois estudos utilizando o mesmo painel de 20 membros O estudo 1 foi conduzido em 3 locais de teste externos para determinar a reprodutibilidade do ensaio O estudo 2 foi conduzido nas instala es para medir a repetibilidade do ensaio O painel incluiu 10 membros de HPV positivo com concentra es no ou acima do limite de detec o do ensaio positividade esperada gt 95 4 membros de HPV positivo com concentra es abaixo do limite de detec o do ensaio positividade esperada gt 0 a lt 25 e 6 membros de HPV negativos Os membros do painel de HPV positivos foram preparados aditivando transcritos de RNA in vitro IVT em meios de transporte de esp cimes specimen transport medium STM ou c lulas cultivadas infectadas pelo HPV SiHa HeLa ME180 e MS751 ATCC Manassas Virginia na solu o PreservCyt Os membros do painel negativo de HPV foram preparados com STM ou esp cimes de citologia l quida residuais ThinPrep agrupados No estudo 1 2 operadores em cada um dos 3 locais de teste 1 instrumento por local efectuaram uma lista de trabalho do Aptima HPV Assay por dia durante 3 dias para cada um dos 3 lotes de reagente Cada lista de trabalho continha 3 r plicas de cada um dos membros do painel de reprodutibilidade Foram testados cento e sessenta e dois 162 tubos de amostra individuais para cada membro do painel 3 loca
82. alignancy NILM Tabela 37 Preval ncia de mRNA do HPV de alto risco por grupo et rio local de teste e tudo em conjunto Taxa de Positividade x n Popula o ASC US Popula o NILM 221 anos 2 30 anos Tudo 42 3 404 956 4 7 512 10 860 Grupo etario anos 21a29 60 0 251 418 N A 30 a 39 38 1 101 265 6 8 286 4192 240 19 0 52 273 3 4 226 6668 Local de teste 1 41 5 134 323 3 7 304 8286 2 43 1 137 318 9 2 118 1285 3 42 2 133 315 7 0 90 1289 N A n o aplic vel Aptima HPV Assay 73 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Desenho do estudo cl nico do Aptima HPV Assay com esp cimes de citologia l quida ThinPrep Realizou se um estudo cl nico prospectivo e multic ntrico nos EUA designado ensaio CLEAR para determinar o desempenho cl nico do Aptima HPV Assay na detec o de neoplasia intraepitelial cervical de grau 2 ou doen a cervical mais grave 2CIN2 As mulheres foram inscritas tanto no Estudo ASC US como no Estudo NILM com base nos respectivos resultados de citologia provenientes de rastreios de rotina ao cancro do colo do tero A popula o do Estudo ASC US incluiu mulheres com 21 anos e idade superior com resultados citol gicos de ASC US e a popula o do Estudo NILM incluiu mulheres com 30 anos e idade superior com resultados citol gicos de NILM O Estudo N
83. anscritos de RNA in vitro IVT a solu o PreservCyt dilu da com meio de transporte de esp cimes specimen transport medium STM ou c lulas cultivadas infectadas pelo HPV SiHa HeLa e MS751 ATCC Manassas Virg nia a esp cimes de citologia l quida ThinPrep negativos agrupados e dilu dos com STM Os membros do painel negativos para HPV foram preparados com solu o PreservCyt ou esp cimes de citologia l quida ThinPrep negativos agrupados e dilu dos com STM No Estudo 1 2 operadores em cada um dos 3 locais de teste 1 instrumento por local efectuaram 2 listas de trabalho do Aptima HPV Assay por dia 1 com cada lote de reagente durante 3 dias Cada lista de trabalho continha 3 r plicas de cada um dos membros do painel de reprodutibilidade Foram testados cento e oito 108 tubos de amostra individuais para cada membro do painel 3 locais x 1 instrumento x 2 operadores x 2 lotes x 3 listas de trabalho x 3 r plicas No Estudo 2 os testes foram efectuados internamente durante 13 dias com um total de 162 reac es testadas para cada membro do painel 1 local x 3 instrumentos x 3 operadores x 3 lotes x 2 listas de trabalho x 3 r plicas Os membros do painel s o descritos na Tabela 56a membros do painel com resultados positivos esperados e na Tabela 56b membros do painel com resultados negativos esperados juntamente com um resumo da concord ncia com resultados esperados e valores de S CO do analito ao 2 5 50 e 97 5 per
84. anther PreservCyt SB100 ThinPrep e Tigris s o marcas comerciais e ou marcas registadas da Hologic Inc e ou respectivas subsidi rias nos EUA e ou em outros pa ses eppendorf estilizado e REPEATER s o marcas comerciais da Eppendorf AG RAININ uma marca comercial da Rainin Instruments LLC TECAN e FREEDOM EVO s o marcas comerciais da Tecan Group AG SUREPATH e PREPSTAIN s o marcas comerciais da TriPath Imaging Inc Quaisquer outras marcas comerciais que possam aparecer neste folheto informativo pertencem aos respectivos propriet rios O 2007 2015 Hologic Inc Todos os direitos reservados AW 11141 601 Rev 003 PT 2015 02 Aptima HPV Assay 99 AW 11141 601 Rev 003 PT
85. ar entre 18 C e 28 C Tempo As reac es da capta o do alvo da amplifica o da hibrida o e da selec o dependem todas do tempo Respeite os tempos especificados no Procedimento de teste dos Sistemas DTS P das luvas Como em qualquer sistema de reagentes o excesso de p nalgumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p Aptima HPV Assay 17 AW 11141 601 Rev 003 PT Sistemas DTS Aptima G Descontamina o 1 As superf cies das bancadas de laborat rio e os pipetadores t m de ser descontaminados regularmente com 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M de solu o de hipoclorito de s dio Deixe a solu o entrar em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto e depois enxag e com gua N o deixe a solu o secar As solu es com cloro podem provocar corros o nos equipamentos e metais Enxag e bem o equipamento com gua para evitar a corros o Descontamine o instrumento TECAN Freedom EVO de acordo com as instru es no Manual do Operador Descontamine os instrumentos SB100 conforme as instru es na SB100 Dry Heat Bath Vortexer Application Sheet for the Aptima HPV Assay Ficha de Aplica o da Bacia de Calor Seco Agitador SB100 para o Aptima HPV Assay Descontamine o Sistema de Capta o do Alvo conforme as instru es no Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Capta o do Alvo Limpe
86. as ml HPV 71 2 5x10 c pias ml HPV 42 2 5x10 copias ml HPV 73 2 5x10 c pias ml HPV 43 2 5x10 c pias ml HPV 81 2 5x10 c pias ml HPV 44 2 5x10 c pias ml HPV 82 2 5 c pias ml HPV 53 2 5x10 c pias ml HPV 85 2 5x10 c pias ml HPV 54 2 5x10 c pias ml vp part culas virais viral particles CFU unidades formadoras de col nias colony forming units TCIDso dose infecciosa de culturas de tecidos 50 Nota A negrito encontram se os tipos em que foi observada reactividade cruzada gt 5 positividade a concentra es superiores s indicadas na tabela A sensibilidade anal tica do Aptima HPV Assay na presen a de microrganismos foi avaliada com o mesmo painel descrito na Tabela 35 o qual foi tamb m aditivado com uma baixa concentra o de c lulas SiHa infectadas com HPV 1 c lula por reac o Os crit rios do estudo para a avalia o do efeito da presen a de microrganismos na sensibilidade do ensaio basearam se na positividade A sensibilidade do Aptima HPV Assay n o foi afectada por nenhum dos organismos testados Interfer ncia As subst ncias descritas na Tabela 36 foram aditivadas individualmente numa solu o PreservCyt a 1 e 10 v v ou p v dilu das com STM e posteriormente testadas com o Aptima HPV Assay Todas as subst ncias foram testadas na presen a e na aus ncia de c lulas cultivadas infectadas pelo HPV SiHa 3 c lulas reac o Foi observada interfer ncia com dois dos sete lubrificantes
87. as superf cies da unidade TCS e lave as pontas de ejec o de tamp o com toalhas de papel humedecidas com 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M de solu o de hipoclorito de s dio Depois enxag e com gua e seque as superf cies totalmente com toalhas de papel Mergulhe os suportes de TTU em 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M de solu o de hipoclorito de s dio garantindo que estejam cobertos pela solu o Mantenha os suportes mergulhados durante 10 minutos Uma exposi o mais prolongada pode danificar os suportes Enxag e bem os suportes com gua coloque os numa superf cie absorvente limpa e deixe os secar completamente Para prolongar a vida til dos suportes deixe os secar direitos e n o virados ao contr rio As TTU devem ser descontaminadas com o Fluido de Desactiva o conforme descrito no passo da Detec o N o volte a utilizar as TTU Aptima HPV Assay 18 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Tigris DTS System Tigris DTS System Os reagentes para o Aptima HPV Assay est o indicados abaixo para o Tigris DTS System Os S mbolos de Identifica o do Reagente tamb m est o indicados ao lado do nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Kit do Aptima HPV Assay 250 testes C digo de Produto 302611 4 embalagens Os Calibradores e Controlos podem ser adquiridos em separado Veja abaixo os c digos de produto das embalagens individuais Embalagem refrigerada do Aptima HPV conservar a uma temperatura de 2 C
88. cada por esses factores for muito diminuta Nestes casos DP e CV s o apresentados a 0 Aptima HPV Assay 69 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Reactividade cruzada A especificidade anal tica do Aptima HPV Assay foi avaliada com meio de solu o PreservCyt dilu do de 1 2 9 em STM e aditivado com bact rias leveduras ou fungos cultivados v rus cultivados ou transcritos de HPV de baixo risco in vitro Os organismos e as concentra es de teste s o identificados na Tabela 35 Os crit rios do estudo para a avalia o do efeito da presen a de microrganismos na especificidade do ensaio basearam se na positividade Foi observada reactividade cruzada com gen tipos de HPV 26 67 70 e 82 de baixo risco mas n o com qualquer um dos outros organismos testados Tabela 35 Painel de especificidade anal tica Organismos e concentra o sem reactividade cruzada Concentra o de teste Concentra o de teste Organismo sem reactividade Organismo sem reactividade cruzada cruzada Bact rias Acinetobacter Iwoffii 1x10 CFU ml Listeria monocytogenes 1x10 CFU ml Actinomyces israelii 1x10 CFU ml Micrococcus luteus 1x10 CFU ml Alcaligenes faecalis 1x10 CFU ml Mobiluncus curtisii 2x10 CFU ml Atopobium vaginae 5x10 CFU ml Mycobacterium smegmatis 1x10 CFU ml Bacillus cereus 1x10 CFU ml Mycoplasma fermentans 5x10 CF
89. centis da distribui o do S CO A variabilidade do S CO do analito para os membros do painel com resultados positivos esperados indicada na Tabela 57 para o Estudo 1 e na Tabela 58 para o Estudo 2 Aptima HPV Assay 92 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Tabela 56a Precis o do Aptima HPV Assay nos Estudos 1 e 2 Descri o do painel concord ncia positiva e percentil de distribui o dos valores de S CO do analito para os membros do painel com resultados positivos esperados Estudo 1 Estudo 2 3 locais de teste 1 local de teste Descri o do painel c pias ou c lulas reac o Amostra cl nica positiva de concord ncia positiva CI de 95 100 107 107 de concord ncia positiva CI de 95 100 161 161 alta 1 do HPV 96 5 100 97 7 100 Amostra cl nica positiva 100 107 107 100 162 162 alta 2 do HPV 96 5 100 97 7 100 IVT de HPV 16 100 107 107 100 161 161 1830 c pias 96 5 100 97 1 100 IVT de HPV 18 1550 c pias 100 107 107 96 5 100 100 162 162 97 7 100 Amostra cl nica positiva baixa 1 do HPV Amostra cl nica positiva baixa 2 do HPV 94 4 101 107 88 3 97 4 88 0 95 108 80 5 92 8 89 5 145 162 83 3 93 3 92 0 149 162 86 8 95 3 Amostra cl nica positiva baixa 3 do HPV Amostra cl nica positiva baixa 4 do HPV 100 108 108 96 6 100
90. ciente de varia o IVT transcrito in vitro DP desvio padr o Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa Tal pode ocorrer se a variabilidade provocada por esses factores for muito diminuta Nestes casos DP e CV s o apresentados como 0 Aptima HPV Assay 95 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Tabela 58 Precis o do Aptima HPV Assay no Estudo 2 Variabilidade do sinal para os membros do painel com resultados positivos esperados Nas pr prias Entre Entre Entre listas listas de Descri o do painel instrumentos operadores Entre lotes de trabalho trabalho Total c pias ou S ICO c lulas reac o n M dia DP CV DP CV DP CV DP CV DP CV DP CV Amostra cl nica positiva alta 1 do HPV 161 26 81 0 75 2 8 0 00 0 0 0 91 34 048 1 8 1 84 69 2 24 83 Amostra clinica positiva alta 2 do HPV 162 28 83 0 00 0 0 0 00 00 0 96 33 065 23 235 82 2 62 9 1 IVT de HPV 16 poke 161 11 07 0 14 1 2 10 00 0 0 0 05 05 0 16 1 4 032 2 9 039 3 5 1830 c pias IVT de HPV 18 is 162 13 34 0 14 1 1 0 12 0 9 1 00 7 5 0 31 2 3 0 75 5 6 1 31 9 8 1550 c pias Amostra clinica positiva baixa 1 do HPV 162 7 57 0 56 7 5 055 7 3 0 63 83 10 00 0 0 3 61 47 7 3 75 49 5 Amostra cl nica positiva baixa 2 do HPV 162 7
91. da consulta de colposcopia com o intuito de evitar desvio O desempenho cl nico do Aptima HPV Assay no Panther System foi determinado em rela o detec o de 2CIN2 e Aptima HPV Assay 74 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System neoplasia intraepitelial cervical de grau 3 ou doen a cervical mais grave 2CIN3 O desempenho cl nico do teste de DNA do HPV aprovado pela FDA tamb m foi determinado para compara o directa com os resultados do Aptima HPV Assay Popula o ASC US 2 21 anos Desempenho cl nico do Aptima HPV Assay Na totalidade 1252 mulheres com idade igual ou superior a 21 anos com resultados citol gicos de ASC US foram inscritas no Estudo ASC US destas excluiram se 294 mulheres As restantes 958 mulheres foram consideradas eleg veis para testes no Panther System Havia amostras em falta para duas mulheres e 19 tiveram um diagn stico de doen a indeterminada foram todas exclu das da an lise As restantes 937 mulheres eleg veis para avalia o tinham idade igual ou superior a 21 anos e resultados citol gicos de ASC US resultados do Aptima HPV Assay no Panther System e um estado de doen a conclusivo Noventa e uma 91 mulheres tinham 2CIN2 e quarenta e uma 41 tinham 2CIN3 A preval ncia de 2CIN2 e 2CIN3 em mulheres eleg veis para avalia o com resultados citol gicos de ASC US foi de 9 7 e 4 4 respectivamente Os resultados do Aptima HPV Assay atrav s do consenso
92. dade cl nica para a detec o da doen a definida como um resultado histol gico 2CIN3 foi calculada tanto para o Aptima HPV Assay como para o teste de PCR para o HPV conforme apresentada na Tabela 53 com os valores de progn stico positivos e negativos Tabela 53 Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste de PCR para o HPV dispon vel no mercado para a detec o de 2CIN3 Aptima HPV Assay Teste de PCR para o HPV N 558 N 558 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 89 3 89 3 hey 0 a 2 Sensibilidade 25 28 72 8 96 3 25 28 72 8 96 3 58 7 49 1 e 0 a Especificidade 311 530 54 4 62 8 260 530 44 8 53 3 10 2 8 5 0 z A PPV 25 244 8 4 11 7 25 295 7 0 9 5 99 0 98 9 0 4 2 a NPV 311 314 97 6 99 8 260 263 97 2 99 7 Preval ncia 5 0 28 558 5 0 28 558 Aptima HPV Assay 89 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Desempenho cl nico do Aptima HPV Assay com colheita de esp cimes com o kit de colheita e transporte de esp cimes cervicais Esp cimes cl nicos positivos para HPV de alto risco e negativos para HPV de alto risco colhidos tanto de popula es de rastreios consulta de rotina como de encaminhamentos consulta para colposcopia foram testados com o Aptima HPV Assay no Panther System e Tigris DTS System utilizando dois lotes de reagente A conc
93. de reconstitui o e o reagente liofilizado t m cores de etiqueta correspondentes b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digos de Barras do Lote Principal para garantir que est o emparelhados os reagentes adequados c Abra o frasco do reagente liofilizado e insira bem a extremidade com entalhe do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 1 d Abra a solu o de reconstitui o correspondente e coloque a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta e Segurando o frasco de solu o na bancada insira bem a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 2 f Inverta suavemente os frascos montados Deixe a solu o vazar do frasco para o frasco de vidro Figura 2 Passo 3 g Agite suavemente a solu o no frasco para a misturar bem Evite criar espuma quando agitar o frasco Figura 2 Passo 4 Aptima HPV Assay 21 AW 11141 601 Rev 003 PT Tigris DTS System Aptima k Aguarde que o reagente liofilizado se dissolva e depois inverta novamente os frascos montados inclinando os a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 2 Passo 5 Deixe o l quido vazar todo de novo para o frasco de pl stico Retire o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 6 Volte a colocar a tampa no frasco de pl stico Registe as iniciais do operador e a data de reconstitui o em todos os frasco
94. de HPV 16 n o infeccioso a 1000 c pias por ml numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente NCAL Calibrador Negativo do HPV 5 frascos Solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Os materiais dispon veis na Hologic t m a indica o do c digo de produto a menos que seja especificado em contr rio Panther System Kit de Execu o Panther Kit de Fluidos do Aptima Assay Solu o de Lavagem Aptima Tamp o Aptima para Fluido de Desactiva o e Reagente de leo Aptima Kit Aptima Auto Detect Unidades Multitubos Multi tube units MTU Kit do Saco de Res duos Panther Tampa do Recipiente de Res duos Panther Pontas 1000 ul condutoras detec o de l quido Kit de Transfer ncia de Esp cimes Aptima Kit Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais Tampas Perfur veis Aptima Tampas n o perfur veis de substitui o Tampas sobresselentes para kits de 250 testes Solu es de reconstitui o do Reagente de Amplifica o e do Reagente de Sonda Solu o de reconstitui o do Reagente Enzim tico TCR e Reagente de Selec o Tampas sobresselentes para kits de 100 testes Solu es de reconstitui o do Reagente de Amplifica o e do Reagente de Sonda Solu o de reconstitui o do Reagente Enzim tico TCR e Reagente de Selec o Lix via m nimo de 5 ou 0 7 M de solu o de hipoclorito de s dio C digo de Produto 3030
95. doen a n o verificada 2CIN2 verificada 2CIN3 verificada Mulheres com Resultado Mulheres Mulheres n o Mulheres Mulheres n o estado de doen a do Aptima Teste do DNA Total de doentes doentes doentes doentes desconhecido HPV Assay do HPV mulheres 2CIN2 lt CIN2 2CIN3 lt CIN3 desconhecida Positiva Positiva 360 13 223 9 227 124 34 4 Positiva Negativa 150 2 59 1 60 89 59 3 Positiva sem resultado 30 0 17 0 17 13 43 3 Negativa Positiva 306 3 178 1 180 125 40 8 Negativa Negativa 9420 1 322 0 323 9097 96 6 Negativa Sem 9 resultado 605 1 0 0 1 604 99 8 Total 10 871 20 799 11 808 10 052 92 5 Todas as amostras apresentaram resultados finais v lidos quando foi realizado o teste inicial ou ap s resolu o de resultados iniciais inv lidos por procedimento 635 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 54 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System A preval ncia ajustada de 2CIN2 e 2CIN3 em mulheres com resultados citol gicos de NILM foi de 0 9 e 0 4 respectivamente As estimativas ajustadas de risco absoluto e negativo para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 s o demonstradas na Tabela 19 O risco relativo ajustado de 2CIN2 foi de 8 1 Cl de 95 2 3 28 1 indicando que uma mulher que teve um resultado positi
96. dos diagn sticos do painel de revis o de histologia s o apresentados na Tabela 38 Tabela 38 Popula o ASC US gt 21 anos Resultados do Aptima HPV Assay atrav s do consenso dos diagn sticos do painel de revis o de histologia Resultado do Consenso do diagn stico do painel de revis o de histologia Aptima HPV Teste do Assay DNA do HPV Indeterminado Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancro Total Positiva Positiva 6 178 110 40 32 1 367 Positiva Negativa 0 5 2 0 2 0 9 ee Sem Positiva RE 0 15 11 0 2 0 28 resultado Negativa Positiva 0 39 15 3 3 0 60 Negativa Negativa 10 372 53 7 1 0 443 Negativa Sem 3 39 7 0 0 0 49 resultado Total 19 648 198 50 40 Tes 956 Todas as amostras apresentaram resultados finais v lidos quando foi realizado o teste inicial ou ap s resolu o de resultados iniciais inv lidos por procedimento 19 participantes compareceram na consulta de colposcopia no entanto n o foi poss vel determinar um diagn stico pelas seguintes raz es lt 5 de esp cimes de biopsia obtidos todos com resultados de histologia normais CIN1 n 15 n o foram colhidas biopsias n 3 e l minas da biopsia perdidas n 1 77 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Uma mulher apresentava adenocarcinoma in situ AIS As estimativas de desempenho
97. e o l quido vazar todo de novo para o frasco de pl stico Retire o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 3 Passo 6 Aptima HPV Assay 27 AW 11141 601 Rev 003 PT Panther System Aptima j Volte a colocar a tampa no frasco de pl stico Registe as iniciais do operador e a data de reconstitui o em todos os frascos de reagente reconstituidos Figura 3 Passo 7 k Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco Figura 3 Passo 8 Advert ncia Evite formar espuma quando reconstituir os reagentes A espuma compromete a detec o de n vel no Panther System A N 3 4 A a AP A E 5 6 E 8 a ge s ilgili Y q Na P N Figura 3 Processo de reconstitui o do Panther System 2 Prepare o Reagente de Capta o do Alvo de trabalho working Target Capture Reagent wTCR a Emparelhe os frascos de TCR e de Controlo Interno Internal Control IC adequados b Verifique os n meros do lote de reagente na Ficha de C digos de Barras do Lote Principal para garantir que est o emparelhados os reagentes adequados do kit c Abra o frasco de TCR e deposite a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta d Abra o frasco de IC e deite todo o conte do no frasco de TCR Uma pequena quantidade de l quido dever ficar no frasco de IC e Tape o frasco de TCR e agite suavemente a solu o para misturar o conte do Evite formar espum
98. e ter um resultado positivo valido S CO do analito 2 0 50 Aptima HPV Assay 31 AW 11141 601 Rev 003 PT Interpreta o do teste Aptima Interpreta o do teste Os resultados dos testes de ensaios s o automaticamente determinados pelo software do ensaio Um resultado de teste pode ser negativo positivo ou inv lido conforme determinado pelo RLU do IC e do S CO para o analito Um resultado de teste tamb m pode ser inv lido devido a outros par metros forma anormal da curva cin tica que estejam fora dos intervalos de valores normalmente esperados Os resultados de testes inv lidos iniciais devem ser repetidos Os esp cimes do Kit CSCT Aptima podem ser dilu dos para transpor potenciais subst ncias inibit rias Dilua 1 parte do esp cime inv lido em 8 partes de meio de transporte de esp cimes a solu o nos tubos do kit CSCT por ex 560 ul do esp cime para um novo tubo do kit CSCT que cont m 4 5 ml de meio de transporte de esp cimes Inverta suavemente o esp cime dilu do para mistur lo evite a cria o de espuma Teste o esp cime dilu do em conformidade com o procedimento de ensaio padr o Nota necess rio um volume m nimo de 1 7 ml para testar 1 al quota da amostra N o dilua um esp cime dilu do inv lido Se um esp cime dilu do produzir um resultado inv lido dever ser obtido um novo esp cime do doente Resultado do Aptima HPV Crit rios Assay S CO do analito lt 0 50 Nega
99. ec o de 2CIN3 por grupo et rio Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 937 N 863 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 N 415 N 389 Sensibilidade Geno 81 7 99 3 Eos 86 7 100 42 5 33 0 ra o ee Especificidade 165 388 37 7 47 5 120 364 28 3 38 0 anos 10 4 9 3 0 PPV 26 249 9 0 11 5 25 269 8 2 10 0 99 4 100 0 NPV 165 166 97 2 100 120 120 97 5 100 Preval ncia 6 5 27 415 6 4 25 389 N 261 N 238 Sensibilidade jaa 56 5 98 0 ar 45 3 93 7 Pae 64 3 59 8 0 ER Especificidade 162 252 58 2 69 9 137 229 53 4 66 0 anos 8 2 7 1 0 PPV 8 98 5 0 10 1 7 99 4 0 9 2 99 4 98 6 0 NPV 162 163 97 6 100 137 139 96 4 99 8 Preval ncia 3 4 9 261 3 8 9 238 N 261 N 236 Sensibilidade a5 23 1 88 2 Pi 37 6 96 4 81 3 78 8 af x S Especificidade 208 256 76 0 85 6 182 231 73 1 83 6 anos 5 9 7 5 0 PPV 3 51 1 6 9 7 4 53 2 9 10 7 99 0 99 5 6 NPV 208 210 98 0 99 9 182 183 98 2 100 Preval ncia 1 9 5 261 2 1 5 236 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay nao apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 79 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do
100. ec o de HPV de alto risco foi determinada atrav s do teste de esp cimes individuais negativos de citologia l quida cl nica ThinPrep aditivados com transcritos de HPV in vitro ou c lulas infectadas em v rias concentra es Trinta r plicas de cada n vel de c pias foram testadas com cada um de dois lotes de reagente para um total de 60 r plicas A an lise de regress o probit foi executada e o limite de detec o previsto de 95 foi determinado para cada tipo de HPV Tabela 5 A an lise de regress o probit mostra que o HPV 16 18 31 33 35 39 45 56 58 59 66 e 68 tinham limites de detec o previstos de 95 inferiores a 100 c pias reac o e os tipos 51 e 52 tinham limites de detec o previstos de 95 entre 100 e 300 c pias reac o Aptima HPV Assay 37 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Aptima Tabela 5 Limite de detec o previsto de 95 do Aptima HPV Assay determinado pela an lise probit dos dados dos Sistemas DTS Alvo Limite de detec o de 95 limites fiduciais de 95 HPV 16 74 54 113 HPV 18 52 39 76 HPV 31 19 14 27 HPV 33 24 18 37 HPV 35 27 22 38 HPV 39 32 23 49 HPV 45 28 17 90 HPV 51 198 147 289 HPV 52 239 187 324 HPV 56 48 36 71 HPV 58 99 74 146 HPV 59 89 68 127 HPV 68 27 20 40 HPV 66 68 50 105 c pias por reac o para transcritos in vitr
101. eccionadas apresentavam resultados histol gicos normais pois n o se encontravam presentes les es vis veis a preval ncia de 2CIN2 e 2CIN3 no estudo foi de 6 4 e 3 1 respectivamente As estimativas de sensibilidade cl nica para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 foram superiores para os dois testes utilizando apenas biopsias direccionadas em rela o s estimativas calculadas utilizando todas as biopsias Para os dois ensaios a especificidade cl nica utilizando apenas biopsias direccionadas foi semelhante especificidade obtida com todas as biopsias inclu das Em conformidade quando foram utilizadas apenas biopsias direccionadas a especificidade do Aptima HPV Assay foi significativamente superior do teste de DNA do HPV dispon vel no mercado As estimativas de desempenho cl nico do Aptima HPV Assay e do teste de DNA do HPV dispon vel no mercado s o apresentadas por grupo et rio na Tabela 40 e na Tabela 41 2CIN2 e 2CIN3 respectivamente com base na avalia o de todas as biopsias Aptima HPV Assay 77 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima Tabela 40 Popula o ASC US gt 21 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para a detec o de 2CIN2 por grupo et rio Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 937 N 863 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimati
102. egativa Negativa 9354 1 321 0 322 9032 96 6 E 5 Sem A Negativa Negativa resultado 591 1 0 0 1 590 99 8 Total 10 860 20 798 11 807 10 042 92 5 Todas as amostras apresentaram resultados finais quando foi realizado o teste inicial ou ap s resolu o de resultados iniciais inv lidos de acordo com o procedimento 631 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 83 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Panther System Aptima A preval ncia ajustada de 2CIN2 e 2CIN3 em mulheres com resultados citol gicos de NILM foi de 0 9 e 0 4 respectivamente As estimativas ajustadas de risco absoluto e relativo para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 s o apresentadas na Tabela 46 O risco relativo ajustado de 2CIN2 foi de 7 5 Cl de 95 2 1 26 3 indicando que uma mulher que tinha tido um resultado positivo com o Aptima HPV Assay tinha 7 5 vezes mais probabilidade de ter 2CIN2 do que uma mulher que tinha tido um resultado negativo com o Aptima HPV Assay O risco relativo ajustado de 2CIN3 foi de 24 9 Cl de 95 2 0 307 0 As estimativas n o ajustadas de risco absoluto e relativo para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 s o apresentadas em geral na Tabela 47 e por grupo et rio na Tabela 48 Tabela 46 Popula o NILM 2 30 anos Riscos absolutos e relativos de
103. eite fora os cart es vedantes e adicione 25 ul do Reagente Enzim tico reconstitu do utilizando um pipetador de repeti o enquanto o suporte ainda estiver no bloco de aquecimento Cubra os tubos com novos cart es vedantes e a estrutura do SB100 Prima a tecla apropriada para iniciar a incuba o de amplifica o Aptima HPV Assay 15 AW 11141 601 Rev 003 PT Sistemas DTS Aptima 7 Terminado o passo de incuba o retire o suporte do instrumento SB100 e prossiga com o passo P s Amplifica o G P s amplifica o Ligue o instrumento SB100 de p s amplifica o e seleccione o protocolo APTIMA HPV PSTAMP para que o instrumento aque a at 62 C Para obter informa es espec ficas sobre a utiliza o do instrumento SB100 com o Aptima HPV Assay consulte a SB100 Dry Heat Bath Vortexer Application Sheet for the Aptima HPV Assay Ficha de Aplica o da Bacia de Calor Seco Agitador SB100 para o Aptima HPV Assay Nota O pipetador de repeti o utilizado na detec o deve estar dedicado apenas a estes passos Consulte a sec o Advert ncias e precau es Nota Os passos p s amplifica o devem ser realizados numa rea diferente dos passos de prepara o de reagentes e pr amplifica o Consulte a sec o Notas sobre o procedimento 1 Retire os cart es vedantes e deite os fora 2 Utilizando o pipetador de repeti o adicione 100 ul do Reagente de Sonda reconstitu do a cada
104. emente diversas vezes 3 Cada frasco de reagente reconstitu do cont m solu o suficiente para efectuar 10 testes Reconstitua e agrupe frascos de reagentes B suficientes para efectuar o n mero de testes pretendido b Adicione 100 ul da solu o PACE 2 Fast Express ao tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima que cont m o esp cime de citologia l quida SurePath Inverta suavemente o tubo para garantir a mistura completa do esp cime Incube o esp cime durante 2 horas a uma temperatura de 65 C e Os esp cimes SurePath tratados podem ser conservados a uma temperatura de 2 Ca8 C at 6 dias antes de serem testados com o Aptima HPV Assay D Conserva o de esp cimes ap s o teste 1 Os esp cimes que tenham sido analisados devem ser conservados na vertical num suporte 2 Os tubos de esp cimes devem ser tapados com uma barreira de pl stico ou de folha de alum nio nova e limpa 3 Se os esp cimes analisados tiverem de ser congelados ou transportados retire a tampa perfur vel e coloque novas tampas n o perfur veis nos tubos de esp cimes Se os esp cimes tiverem de ser transportados para a realiza o de testes noutras instala es as temperaturas especificadas dever o ser mantidas Antes de destapar amostras que j tenham sido testadas e novamente tapadas os tubos de esp cimes devem ser centrifugados durante 5 minutos a 420 de For a Centr fuga Relativa Relative Centrifugal Force RCF para levar todo o l
105. empenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 Sensibilidade ree 53 1 88 8 paren 62 4 94 5 Especificidade fearon 59 2 65 9 Eanes 45 2 52 2 4 8 3 8 2CIN2 PPV 15 314 3 4 5 8 16 417 2 9 4 4 99 0 99 2 0 NPV 500 505 98 1 99 6 381 384 98 1 99 8 Preval ncia 2 4 20 819 2 4 19 801 Sensibilidade O 62 3 98 4 No 62 3 98 4 Especificidade Ea 59 0 65 7 eoi 45 0 52 0 3 2 2 4 2CIN3 PPV 10 314 2 2 3 7 10 417 1 6 2 7 99 8 99 7 0 J NPV 504 505 99 1 100 383 384 98 9 100 Preval ncia 1 3 11 819 1 4 11 801 18 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Aptima HPV Assay 58 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Enquanto que estabelecer a sensibilidade e especificidade cl nica exige a conclus o dos 3 anos de acompanhamento a compara o directa entre Aptima HPV Assay e o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado demonstra sensibilidade semelhante e especificidade melhorada significativa estatisticamente do Aptima HPV Assay em rela o ao teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para a detec o de 2CIN2 conforme demonstrado pelas rela es de taxas de resultados positivos reais ou de resultados positivos falsos Tabela 24 e Tabela 25
106. epois inverta os frascos montados inclinando os a um ngulo de 45 para minimizar a espuma Figura 1 Passo 5 Deixe o l quido vazar novamente para o frasco Retire o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 1 Passo 6 Volte a colocar a tampa no frasco de pl stico Registe as iniciais do operador e a data de reconstitui o nos frascos de reagente reconstituidos Figura 1 Passo 7 Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 1 Passo 8 4 IRS N 4 N q JN 6 Bs P J Figura 1 Processo de reconstitui o dos Sistemas DTS Prepare o Reagente de Capta o do Alvo de trabalho working Target Capture Reagent wTCR a b c Emparelhe os frascos de TCR e de Controlo Interno Internal Control IC adequados Abra o frasco de TCR e deposite a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Abra o frasco de IC e deite todo o conte do num frasco de TCR Uma pequena quantidade de l quido pode permanecer no frasco de IC Tape o frasco de TCR e agite suavemente a solu o para misturar bem o conte do Evite formar espuma durante este passo Aptima HPV Assay 12 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima 3 Sistemas DTS e Anote as iniciais do operador e a data actual na etiqueta f Deite fora o frasco e a tampa do IC g Pode ocorrer forma o de precipitado no wTCR O precipitado pode ser dissolvido aquecendo
107. esp cimes de citologia l quida SurePath residuais de HPV negativo bem como esp cimes de citologia l quida ThinPrep residuais de HPV negativo que foram aditivados com transcritos in vitro in vitro transcripts IVT para cada um dos 14 gen tipos de HPV de alto risco Os pain is foram aditivados com IVT pr ximos do limite de detec o de 95 do Aptima HPV Assay conforme determinado anteriormente com os esp cimes de citologia l quida ThinPrep Os pain is de SurePath foram tratados com o Reagente PACE 2 Fast Express Os pain is de ThinPrep e os pain is de SurePath tratados foram analisados com dois lotes de reagente cujos resultados combinados n 60 est o indicados na Tabela 27 A sensibilidade do Aptima HPV Assay com esp cimes de citologia l quida SurePath era compar vel dos esp cimes de citologia l quida ThinPrep Aptima HPV Assay 60 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Tabela 27 Sensibilidade do Aptima HPV Assay com esp cimes de citologia l quida SurePath e ThinPrep ThinPrep SurePath Gen tipo C pias de HPV reac o positiva positiva CI de 95 CI de 95 16 60 A ER 18 100 Gi 5430 O a 25 E Pe 33 ef een 91 po 35 25 P e eR a 23 M 81 aT o pi Sa is ce 5I 280 GIA R 52 600 G 91 i 36 190 eis ee 28 5 gos peer 39 e eee 81 ce ee 130 Biani fis as ee au a een Aptima HPV A
108. etec o de HPV de alto risco HPV de alto risco Total 412 5 417 Aptima HPV 33 331 364 Total 445 336 781 Sensibilidade Cl de 95 92 6 89 8 94 7 Especificidade Cl de 95 98 5 96 6 99 4 Valor de progn stico positivo 98 8 Valor de progn stico negativo 90 9 A sensibilidade e a especificidade cl nicas do Aptima HPV Assay para a detec o de 2CIN2 s o apresentadas na Tabela 2a para os 753 esp cimes com resultados histol gicos testados nos Sistemas DTS A sensibilidade cl nica do ensaio foi de 90 8 a especificidade de 55 7 e os valores de progn stico positivos e negativos para a detec o de 2CIN2 foram de 32 1 e 96 3 respectivamente A sensibilidade do Aptima HPV Assay foi semelhante do HPV DNA que foi de 95 0 Tabela 2b mas a especificidade do Aptima HPV Assay foi significativamente mais alta do que a especificidade do HPV DNA que foi de 47 4 nesta popula o para a detec o de les es 2CIN2 Dos 753 esp cimes com resultados histol gicos 159 tinham um resultado citol gico ASCUS A sensibilidade e a especificidade do Aptima HPV Assay nesta popula o foi de 92 3 e 41 4 respectivamente para a detec o de gt CIN2 An lises semelhantes tamb m foram executadas utilizando um par metro de avalia o cl nico de 2CIN3 A sensibilidade e a especificidade cl nica do Aptima HPV Assay para a detec o de 2CIN3 s o apresentadas na Tabela 3a para os 753 es
109. evido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Um indiv duo apresentava adenocarcinoma in situ AIS As estimativas de desempenho clinico do Aptima HPV Assay incluindo sensibilidade especificidade valor de progn stico positivo positive predictive value PPV valor de progn stico negativo negative predictive value NPV para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 baseados na avalia o de todas as biopsias e incluindo todas as biopsias direccionadas s o apresentados na Tabela 12 tal como acontece com as estimativas para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado Aptima HPV Assay 46 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Tabela 12 Popula o ASC US gt 21 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um Teste do DNA do HPV para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 939 N 865 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 Todas as biopsias Sensibilidade E 78 4 92 3 o 80 5 93 8 cas 62 9 55 8 0 Especificidade 533 848 59 6 66 0 433 776 52 3 59 3 20 1 18 7 0 PPV 79 394 18 1 22 0 79 422 17 0 20 4 97 8 97 7 0 NPV 533 545 96 5 98 8 433 443 96 2 98 8 Preval ncia 9 7 91 939 10 3 89 865 2CIN2 Biopsias direccionadas Sensibilidade dO 84 1 97 4 ES 6d 83 8 9
110. heres suscept veis de serem avaliadas com resultados citol gicos de ASC US foi de 9 7 e 4 4 respectivamente Os resultados do Aptima HPV Assay atrav s do consenso dos diagn sticos do painel de revis o de histologia s o apresentados na Tabela 11 Tabela 11 Popula o ASC US 2 21 anos Resultados do Aptima HPV Assay atrav s do consenso do diagn stico do painel de revis o de histologia Resultado do Teste do DNA Consenso do diagn stico do painel de revis o de histologia Aptima HPV do HPV Assay E Indeterminado Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancro Total Positiva Positiva 6 170 113 41 32 1 363 Positiva Negativa 0 7 0 1 2 0 10 er Sem Positiva 0 14 11 0 2 0 27 resultado Negativa Positiva 0 47 13 2 3 0 65 Negativa Negativa 10 371 55 6 1 0 443 Negativa Sem 3 40 7 0 0 0 50 resultado Total 19 649 199 50 40 is 958 Todas as amostras apresentaram resultados finais v lidos quando foi realizado o teste inicial ou ap s resolu o de resultados inv lidos iniciais por procedimento 19 indiv duos realizaram a visita de colposcopia por m n o foi poss vel determinar um diagn stico pelas seguintes raz es lt 5 de esp cimes de biopsia obtidos todos com resultados histol gicos normais CIN1 n 15 n o foram colhidas biopsias n 3 e l minas da biopsia perdidas n 1 77 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o tinham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo d
111. ima CSCT Negativa 10 469 479 Total 244 491 735 Concord ncia positiva 95 9 92 6 97 8 Concord ncia negativa 95 5 93 3 97 0 Concord ncia geral 95 6 93 9 96 9 Coeficiente kappa 0 90 Aptima HPV Assay 62 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Sensibilidade anal tica O limite de detec o Limit of Detection LOD no cutoff cl nico consiste numa concentra o de RNA do HPV que positiva acima do cutoff cl nico 95 das vezes Determinou se o LOD do Aptima HPV Assay testando pain is de dilui o de transcritos in vitro IVT para todos os 14 gen tipos de alto risco e 4 linhas celulares infectadas com HPV SiHa HeLa MS751 e ME180 ATCC Manassas Virg nia No caso dos pain is de IVT o meio de transporte de esp cimes foi aditivado com IVT com v rias concentra es e depois dilu do com esp cimes de citologia l quida ThinPrep individuais negativos antes de serem realizados testes No caso de pain is de c lulas infectadas com HPV grupos de esp cimes de citologia l quida ThinPrep negativos para HPV foram aditivados com c lulas infectadas com HPV com v rias concentra es e depois dilu dos com meio de transporte de esp cimes antes de serem realizados testes Trinta r plicas de cada n vel de c pias foram testadas com cada um de dois lotes de reagente para um total de 60 r plicas Realizaram se testes durante 14 dias com 1 a 12 e
112. imes cervicais colhidos em frascos do exame de Papanicolau ThinPrep com Solu o PreservCyt podem ser testados com o Aptima HPV Assay antes ou depois do processamento do teste de Papanicolau bem como os esp cimes cervicais colhidos com o Kit Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais O ensaio pode ser utilizado para testar estes tipos de esp cimes quer com os Sistemas de amostragem directa a partir do tubo Direct Tube Sampling DTS com o Tigris DTS System ou com o Panther System Os esp cimes do colo do tero colhidos no Fluido Conservante SurePath podem ser analisados com o Aptima HPV Assay no Tigris DTS System e no Panther System Resumo e explica o do teste O cancro do colo do tero um dos tipos de cancro feminino mais comuns em todo o mundo O HPV o agente etiol gico respons vel por mais de 99 de todos os cancros do colo do tero O HPV um v rus de DNA comum sexualmente transmiss vel e constitu do por mais de 100 gen tipos O genoma viral do HPV um DNA circular de cadeia dupla com um comprimento aproximado de 7900 pares de bases O genoma tem oito grelhas de leitura aberta sobrepostas H seis genes precoces E dois genes tardios L e uma longa regi o de controlo n o traduzida Os genes L1 e L2 codificam as prote nas das c psides major e minor Os genes precoces regulam a replica o viral do HPV Os genes E6 e E7 dos gen tipos de alto risco do HPV s o oncogenes conhecidos As pro
113. imes devem ser transferidos para um Tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima num prazo de 105 dias ap s a colheita Antes da transfer ncia os esp cimes de citologia l quida ThinPrep devem ser conservados a uma temperatura de 2 C a 30 C e n o mais de 30 dias a temperaturas acima de 8 C Os esp cimes de citologia l quida ThinPrep transferidos para um Tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima podem ser conservados a uma temperatura de 2 C a 30 C durante um m ximo de 60 dias Se for necess rio um per odo de conserva o mais longo o esp cime de citologia l quida ThinPrep ou o esp cime de citologia l quida ThinPrep dilu do no tubo de Transfer ncia de Esp cimes pode ser conservado a uma temperatura igual ou inferior a 20 C durante um m ximo de 24 meses Esp cimes de citologia l quida SurePath apenas Tigris DTS System e Panther System 1 2 3 4 Transporte os esp cimes de citologia l quida SurePath a uma temperatura de 2 C a 25 C Os esp cimes devem ser transferidos para um Tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima num prazo de 7 dias ap s a colheita Antes da transfer ncia os esp cimes de citologia l quida SurePath devem ser conservados a temperaturas de 2 C a 25 C Os esp cimes de citologia l quida SurePath transferidos para um tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima podem ser conservados a uma temperatura de 2 C a 25 C durante um m ximo de 7 dias Esp cimes do Kit
114. inham resultados do teste do DNA do HPV sobretudo devido ao volume insuficiente do esp cime de citologia Tr s mulheres apresentavam adenocarcinoma in situ AIS Aptima HPV Assay 53 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Na totalidade 10 052 mulheres apresentavam um estado de doen a n o verificado incluindo indeterminado Tabela 18 Devido a apenas terem sido encaminhadas para colposcopia mulheres seleccionadas aleatoriamente com resultados negativos para o Aptima HPV Assay e para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado a propor o de mulheres com estado de doen a n o verificado neste grupo foi elevada 96 6 Para ajustar este desvio de verifica o foi utilizado um m todo de imputa o m ltipla para efectuar a estimativa de mulheres com doen a que teriam sido identificadas caso todas as mulheres tivessem sido submetidas a colposcopia S o apresentadas tanto as estimativas de desempenho ajustadas do desvio de verifica o como as estimativas de desempenho n o ajustadas com base nas 819 mulheres com estado de doen a verificado Tabela 18 Popula o NILM 2 30 anos Classifica o de mulheres NILM suscept veis de serem avaliadas de acordo com os resultados do Aptima HPV Assay e do teste do DNA do HPV estado da doen a 2CIN2 e 2CIN3 e estado de verifica o da doen a Estado de doen a Estado de doen a Estado de
115. is de citologia l quida ThinPrep de HPV negativo como matriz dois dos quais foram testados como membros do painel de HPV negativo Foram utilizados quatro grupos nicos de esp cimes de citologia l quida ThinPrep de HPV positivo para preparar os membros do painel de HPV positivo baixos n 2 e altos n 2 Os membros do painel positivo baixos apresentavam concentra es no limite de detec o do ensaio positividade esperada gt 95 determinada para cada grupo de HPV positivo individual a partir do teste de dilui es de s rie dos grupos Os membros do painel positivo alto apresentavam concentra es a 1 2 logaritmos acima do limite de detec o estimado para cada grupo positivo de HPV individual positividade esperada 100 de positividade Cada membro do painel foi transferido 1 ml para um tubo de Transfer ncia de Esp cimes Aptima contendo STM no dia do teste O teste foi realizado nas instala es por 2 operadores utilizando 1 lote de reagentes 3 instrumentos durante 6 dias 3 dias para cada operador testando 2 execu es por dia nas quais o painel foi testado em duplicado Os membros do painel s o descritos na Tabela 33 juntamente com um resumo da concord ncia com os resultados esperados e os valores do S CO do analito ao 2 5 50 e 97 5 percentis do sinal de distribui o A variabilidade do S CO do analito para os membros do painel com resultados positivos esperados apresentada na Tabela 34 Aptima HPV Assay
116. is x 1 instrumento x 2 operadores x 3 lotes x 3 listas de trabalho x 3 r plicas No estudo 2 o teste foi efectuado nas instala es durante 20 dias com um total de 162 reac es testadas para cada membro do painel 1 local x 3 instrumentos x 3 operadores x 3 lotes x 2 listas de trabalho x 3 r plicas Os membros do painel s o descritos na Tabela 30a membros do painel com resultados positivos esperados e na Tabela 30b membros do painel com resultados negativos esperados juntamente com um resumo da concord ncia com resultados esperados e valores de S CO do analito ao 2 5 50 e 97 5 percentis da distribui o do S CO A variabilidade do S CO do analito para os membros do painel com resultados positivos esperados indicada na Tabela 31 para o Estudo 1 e na Tabela 32 para o Estudo 2 A concord ncia positiva para membros do painel de HPV positivo com concentra es no ou acima do limite de detec o do ensaio variaram de 95 1 a 100 no Estudo 1 e de 93 2 a 100 no Estudo 2 para 9 dos 10 membros do painel O restante membro do painel positivo de HPV resultou numa concord ncia de 77 2 no Estudo 1 e 79 0 no Estudo 2 a qual foi mais baixa do que o esperado mas foi consistente entre os 2 estudos A concord ncia negativa dos membros do painel negativo do HPV alto com concentra es abaixo do limite de detec o do ensaio variou de 78 8 a 93 8 no Estudo 1 e 82 1 a 95 7 no Estudo 2 A concord ncia com resultados esperados para os
117. ismos testados Tabela 8 Painel da especificidade anal tica Bifidobacterium breve 1x10 CFU ml Organismo Concentra o Organismo Concentra o de teste de teste Bact rias Acinetobacter Iwoffii 1x10 CFU ml Listeria monocytogenes 1x10 CFU ml Actinomyces israelii 1x10 CFU ml Micrococcus luteus 1x10 CFU ml Alcaligenes faecalis 1x10 CFU ml Mobiluncus curtisii 2x10 CFU ml Atopobium vaginae 5x10 CFU ml Mycobacterium smegmatis 1x10 CFU ml Bacillus cereus 1x10 CFU ml Mycoplasma fermentans 5x10 CFU ml Bacteroides fragilis 1x10 CFU ml Mycoplasma genitalium 1x10 CFU ml Bacteroides ureolyticus 1x10 CFU ml Mycoplasma hominis 5x10 CFU ml Bifidobacterium adolescentis 1x10 CFU ml Neisseria gonorrhoeae 1x10 CFU ml Neisseria gonorrhoeae e 5x10 CFU ml Chlamydia trachomatis 1 5x104 TCID 50 ml Campylobacter fetus fetus 1x10 CFU ml Neisseria meningitidis 1x10 CFU ml Chlamydia trachomatis 2x10 TCID 50 ml Peptoniphilus lacrimalis 1x10 CFU ml Clostridium difficile 6x10 CFU ml Peptostreptococcus anaerobius 1x10 CFU ml Clostridium perfringens 1x10 CFU ml Propionibacterium acnes 1x10 CFU ml Corynebacterium genitalium 1x10 CFU ml Proteus mirabilis 1x10 CFU ml Corynebacterium xerosis 1x10 CFU ml Proteus vulgaris 1x10 CFU ml Enterobacter cloacae 1x10 CFU ml Providencia stuartii 1x10 CFU ml Enterococcus faecalis 1x10 CFU
118. istas O estado de HPV e citologia da mulher n o foram apresentados aos patologistas especialistas bem como os diagn sticos de histologia um do outro Os resultados do teste do HPV n o foram apresentados aos investigadores m dicos e mulheres at depois da conclus o da visita de colposcopia com o intuito de evitar desvio O desempenho cl nico do Aptima HPV Assay foi determinado em rela o detec o de 2CIN2 e neoplasia intraepitelial cervical de grau 3 ou doen a cervical mais grave 2CIN3 O desempenho cl nico do teste de DNA dispon vel no mercado foi tamb m determinado para compara o directa com os resultados do Aptima HPV Assay Aptima HPV Assay 45 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Popula o ASC US 2 21 anos Desempenho Cl nico do Aptima HPV Assay com Esp cimes de Citologia L quida ThinPrep Na totalidade verificaram se 1252 mulheres com 21 anos e idade superior com resultados citol gicos de ASC US inscritas no Estudo ASC US Destas 294 mulheres foram retiradas e 19 tiveram um diagn stico de doen a indeterminada foram todas exclu das da an lise As restantes 939 mulheres suscept veis de serem avaliadas tinham 21 anos de idade ou idade superior com resultados citol gicos de ASC US resultados do Aptima HPV Assay e um estado de doen a conclusivo Noventa e uma 91 mulheres tinham 2CIN2 e quarenta e uma 41 tinham 2CIN3 A preval ncia de 2CIN2 e 2CIN3 em mul
119. izando um micropipetador fure a tampa do tubo de amostra tendo o cuidado de n o bater com a ponta no fundo do tubo Utilize uma nova ponta de pipeta para cada calibrador controlo e esp cime Adicione 400 ul do Calibrador Negativo aos tr s primeiros tubos da primeira TTU Adicione 400 ul do Calibrador Positivo aos tubos 4 6 da primeira TTU Adicione 400 ul do Controlo Negativo ao tubo 7 da primeira TTU Adicione 400 ul do Controlo Positivo ao tubo 8 da primeira TTU Adicione 400 ul de cada esp cime aos tubos restantes Quando todas as amostras tiverem sido pipetadas cubra as TTU com cart es vedantes e avance com a Capta o do Alvo Op o do instrumento TECAN Freedom EVO Consulte a TECAN Freedom EVO 100 4 Application Sheet for the Aptima HPV Assay Ficha de Aplica o do TECAN Freedom EVO 100 4 para o Aptima HPV Assay para obter instru es espec ficas sobre a adi o de wTCR e de amostras se utilizar este instrumento OON O O O E Capta o do Alvo Para obter informa es detalhadas sobre a utiliza o do instrumento SB100 com o Aptima HPV Assay consulte a SB100 Dry Heat Bath Vortexer Application Sheet for the Aptima HPV Assay Ficha de Aplica o da Bacia de Calor Seco Agitador SB100 para o Aptima HPV Assay Para informa es sobre a utiliza o do Sistema de Capta o do Alvo Hologic consulte o Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Capta o do Alvo Nota O pipetador de
120. laborat rios com forro pl stico limpas Coloque um n mero suficiente de Cassetes de Dez Pontas no Sistema de Capta o do Alvo Target Capture System TCS Assegure se de que a garrafa de lavagem do TCS est cheia com solu o de lavagem e que o tubo de aspira o est ligado bomba de v cuo Consulte o Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Capta o do Alvo Prepare o instrumento TECAN Freedom EVO de acordo com as instru es no respectivo manual do operador e na HPV Application Sheet Ficha de Aplica o do HPV Prepare o instrumento SB100 de pr amplifica o de acordo com as instru es no respectivo manual do operador e na HPV Application Sheet Ficha de Aplica o do HPV Ligue o instrumento e inicie o protocolo APTIMA HPV PREAMP para que o instrumento aque a at 62 C Terminado o passo de amplifica o prepare o instrumento SB100 de p s amplifica o de acordo com as instru es no respectivo manual do operador e na HPV Application Sheet Ficha de aplica o do HPV Ligue o instrumento e inicie o protocolo APTIMA HPV PSTAMP para que o instrumento aque a at 62 C Terminado o passo de amplifica o prepare o Lumin metro Leader HC de acordo com as instru es no respectivo manual do operador depois de adicionar o Reagente de Sonda conforme descrito nos passos P s Amplifica o B Reconstitui o prepara o dos reagentes de um novo kit Nota A reco
121. lacial EMD M N AX0073 11 10 v v Sangue Total sangue total 10 v v Lubrificantes pessoais que cont m Poliquat rnio 15 Aptima HPV Assay AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Resultados previstos do Panther System Preval ncia de mRNA do HPV de alto risco Resultados previstos do Panther System Preval ncia de mRNA do HPV de alto risco A preval ncia de infec o com HPV de alto risco varia amplamente e influenciada por diversos factores sendo a idade o factor com maior preponder ncia H muitos estudos que investigaram a preval ncia do HPV determinada pela detec o de DNA do HPV contudo poucos estudos indicaram a preval ncia com base na detec o de mRNA do HPV oncog nico Inscreveram se num estudo cl nico prospectivo conhecido como ensaio CLEAR mulheres de v rias cl nicas n 18 representando uma ampla distribui o geogr fica e uma popula o diversificada 10 estados dos Estados Unidos da Am rica Conforme determinada pelo Aptima HPV Assay no Panther System a preval ncia de amostras positivas para mRNA do HPV observada no ensaio cl nico foi categorizada em geral de acordo com o grupo et rio e o local do teste Os resultados s o apresentados na Tabela 37 para as popula es de c lulas escamosas at picas de significado indeterminado Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance ASC US e negativo para les o intraepitelial ou malignidade Negative for Intraepithelial Lesion or M
122. logia l quida ThinPrep emparelhados e os esp cimes do Kit CSCT Aptima foram colhidos em 728 sujeitos Um mililitro 1 0 ml de cada esp cime de citologia l quida ThinPrep foi dilu do em 2 9 ml de meio de transporte de esp cimes Aptima e uma nica r plica foi testada com o Aptima HPV Assay nos Sistemas DTS Uma nica r plica de cada esp cime de CSCT tamb m foi testada com o Aptima HPV Assay A concord ncia percentual do Aptima HPV Assay entre os esp cimes de citologia l quida ThinPrep e os esp cimes de CSCT foi determinada e indicada na Tabela 4 A concord ncia positiva percentual foi de 95 1 CI de 95 91 6 97 2 a concord ncia negativa percentual foi de 95 9 Cl de 95 93 7 97 3 a concord ncia geral foi de 95 6 CI de 95 93 9 96 9 Observou se uma forte correla o entre os esp cimes de citologia l quida e os esp cimes do kit de transporte kappa 0 90 Tabela 4 Concord ncia geral dos resultados do Aptima HPV Assay a partir de esp cimes de citologia l quida ThinPrep e esp cimes de CSCT Aptima testados nos sistemas DTS Esp cime de citologia l quida ThinPrep Total 233 20 253 Esp cime do kit Aptima CSCT 12 463 475 Total 245 483 728 Concord ncia positiva 95 1 91 6 97 2 Concord ncia negativa 95 9 93 7 97 3 Concord ncia geral 95 6 93 9 96 9 Coeficiente kappa 0 90 Sensibilidade anal tica A sensibilidade anal tica do Aptima HPV Assay para a det
123. m base no sinal para cutoff S CO do analito O IC adicionado a cada reac o atrav s do Reagente de Capta o do Alvo O IC controla os passos da capta o amplifica o e detec o do alvo do ensaio O sinal de IC de cada reac o distinguido do sinal do HPV pela diferente cin tica de emiss o de luz de sondas com marcas distintas O produto de amplifica o espec fico do IC detectado utilizando uma sonda com uma emiss o de luz r pida sinal intermitente O produto de amplifica o espec fico do HPV detectado com a utiliza o de sondas com cin tica de emiss o de luz relativamente mais lenta sinal cont nuo O ensaio cin tico Dual Dual Kinetic Assay DKA um m todo usado para diferenciar entre os sinais das marcas do sinal intermitente e do sinal continuo Advert ncias e precau es A Para utiliza o em diagn stico in vitro B Para mais advert ncias e precau es espec ficas consulte os Manuais dos Operadores dos Sistemas DTS do Tigris DTS System e do Panther System Relacionados com o laborat rio C Utilize apenas os artigos de laborat rio descart veis que sejam fornecidos ou especificados Aptima HPV Assay 3 AW 11141 601 Rev 003 PT Informa es gerais Aptima D Empregue todas as precau es laboratoriais de rotina N o coma n o beba nem fume nas reas de trabalho designadas Utilize luvas sem p descart veis protec o ocular e batas de laborat rio
124. membros do painel de HPV negativo variou de 96 9 a 100 no Estudo 1 e de 96 3 a 100 no Estudo 2 Aptima HPV Assay 64 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Tabela 30a Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay no Estudo 1 e 2 Descri o do painel Concord ncia positiva e Percentil de distribui o dos valores de S CO do analito para os membros do painel com resultados positivos esperados Estudo 1 Estudo 2 3 locais de teste 1 local de teste Descri o do painel de concord ncia de concord ncia c pias ou positiva positiva c lulas reac o IVT de HPV 16 e HPV 18 100 c pias CI de 95 100 161 161 97 7 100 CI de 95 100 162 162 97 7 100 C lulas SiHa 3 c lulas e c lulas HeLa 7 5 c lulas 100 162 162 97 7 100 100 162 162 97 7 100 IVT de HPV 18 100 c pias 100 162 162 97 7 100 100 160 160 97 7 100 IVT de HPV 16 100 c pias 100 162 162 97 7 100 100 162 162 97 7 100 C lulas MS751 1 c lula 99 4 161 162 96 6 99 9 96 9 157 162 93 0 98 7 C lulas ME180 95 1 154 162 93 2 151 162 0 3 c lulas 90 6 97 5 88 3 96 2 IVT de HPV 18 99 4 161 162 100 162 162 30 c pias 96 6 99 9 97 7 100 IVT de HPV 16 100 162 162 97 5 158 162 30 c pias 97 7 100 93 8 99 0 C lulas HeLa 100 162 162 95 6 15
125. nstitui o dos reagentes deve ser feita antes de se iniciar a transfer ncia de esp cimes Aptima HPV Assay 11 AW 11141 601 Rev 003 PT Sistemas DTS Aptima 1 Para reconstituir os Reagentes Aptima de Amplifica o Enzim tico e de Sonda combine os frascos de reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com o respectivo reagente liofilizado Antes de aplicar o colarinho de reconstitui o certifique se de que a solu o de reconstitui o e o reagente liofilizado t m cores de etiqueta correspondentes Abra o frasco do reagente liofilizado e insira bem a extremidade com entalhe do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 1 Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Segurando o frasco de solu o na bancada insira com firmeza a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 2 Inverta suavemente os frascos montados Deixe a solu o vazar para dentro do recipiente de vidro Figura 1 Passo 3 Agite suavemente a solu o no frasco para a misturar bem Evite criar espuma quando agitar o frasco Figura 1 Passo 4 Aguarde que o reagente liofilizado se dissolva e d
126. nzim tico e de Sonda combine os frascos do reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com o respectivo reagente liofilizado Certifique se de que a solu o de reconstitui o e o reagente t m cores de etiqueta correspondentes antes de aplicar o colarinho de reconstitui o Verifique os n meros do lote na Ficha de C digos de Barras do Lote Principal para garantir que est o emparelhados os reagentes adequados Abra o frasco do reagente liofilizado e insira bem a extremidade com entalhe do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 3 Passo 1 Abra a solu o de reconstitui o correspondente e coloque a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta Segurando o frasco de solu o na bancada insira bem a outra extremidade do colarinho de reconstitui o no frasco Figura 3 Passo 2 Inverta suavemente os frascos montados Deixe a solu o vazar do frasco para o frasco de vidro Figura 3 Passo 3 Agite suavemente a solu o no frasco para a misturar bem Evite criar espuma quando agitar o frasco Figura 3 Passo 4 Aguarde que o reagente liofilizado se dissolva e depois inverta novamente os frascos montados inclinando os a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 3 Passo 5 Deix
127. o de esp cimes incorrecto O Controlo Interno monitoriza os passos de captura do alvo amplifica o e detec o do ensaio N o se destina a controlar a adequa o da amostra do colo do tero Um resultado negativo no Aptima HPV Assay n o exclui a possibilidade de anormalidades citol gicas nem de CIN2 CIN3 ou cancro subjacente ou no futuro A presen a de lubrificantes pessoais que contenham Poliquat rnio 15 pode interferir com o desempenho do ensaio quando presentes numa amostra de teste a concentra es superiores a 0 025 v v ou p v Os medicamentos antif ngicos que contenham tioconazol podem interferir com o desempenho do ensaio quando presentes numa amostra de teste a concentra es superiores a 0 075 v p O Aptima HPV Assay proporciona resultados qualitativos Portanto n o se pode fazer uma correla o entre a magnitude de um sinal de ensaio positivo e o n vel de express o do mRNA num esp cime detec o de mRNA do HPV de alto risco est dependente do n mero de c pias presentes no esp cime e pode ser afectada pelos m todos de colheita do esp cime de factores do doente da fase da infec o e da presen a de subst ncias interferentes A infec o por HPV n o um indicador de HSIL citol gica nem de CIN subjacente de alto grau nem implica que CIN2 CIN3 ou cancro se ir o desenvolver A maioria das mulheres infectadas com um ou mais tipos de HPV de alto risco n o desenvolvem CIN2 CIN3
128. o do teste de fuga Pode demorar 15 segundos a alcan ar esta leitura Volte a ligar o tubo de aspira o e assegure se de que o vacu metro cumpre a especifica o do n vel de v cuo Deixe a bomba de v cuo ligada at que todos os passos da capta o do alvo estejam conclu dos e o tubo de aspira o esteja seco Aptima HPV Assay 14 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima 10 Sistemas DTS c Fixe bem o tubo de aspira o no primeiro conjunto de pontas Aspire todo o l quido baixando as pontas para a primeira TTU at as pontas entrarem brevemente em contacto com o fundo dos tubos N o mantenha as pontas em contacto com o fundo dos tubos d Terminada a aspira o ejecte as pontas para a respectiva cassete de pontas original Repita os passos da aspira o para as TTU restantes utilizando uma ponta dedicada para cada esp cime e Coloque o tubo de distribui o sobre cada TTU e utilizando a bomba da Esta o de Distribui o forne a 1 0 ml de Solu o de Lavagem a cada tubo da TTU f Cubra os tubos com um cart o vedante e retire o suporte do TCS Cubra os cart es vedantes com a estrutura do SB100 e leve o suporte para o bloco de aquecimento do SB100 Seleccione a tecla adequada para agitar os tubos Terminado o v rtice retire o suporte No instrumento SB100 prima a tecla apropriada para prosseguir com o pr aquecimento do bloco Coloque o suporte de volta no TCS e repita os passos de aspira o nos ponto
129. o e c lulas por reac o para linhas celulares Aptima HPV Assay 38 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Reprodutibilidade do ensaio A reprodutibilidade do Aptima HPV Assay foi determinada atrav s do teste de 16 membros do painel em triplicado em 2 execu es com 2 lotes de reagente em 3 instrumentos por 3 operadores Os testes foram realizados durante 20 dias num nico centro Os membros do painel s o descritos na Tabela 6 Seis dos membros do painel eram HPV negativos 3 eram meio de transporte de esp cimes Aptima e 3 eram esp cimes de citologia l quida ThinPrep agrupados quatro eram HPV positivos baixos limite de detec o de 95 e seis eram HPV positivos moderados 2 3x o limite de detec o de 95 Os membros do painel com positivos baixos e positivos moderados eram compostos por transcritos in vitro in vitro transcript IVT ou c lulas cultivadas infectadas pelo HPV em meio de transporte de esp cimes Aptima Tabela 6 Painel de reprodutibilidade do Aptima HPV Assay Membro do Descri o Concentra o Resultado do HPV painel esperado 1 STM Lote 1 N A Negativa 2 SiHa Positivo Baixo 1 c lula reac o Positiva 3 HeLa Positivo Baixo 0 15 c lula reac o Positiva 4 Grupo cl nico 1 N A Negativa 5 ME180 Positivo Moderado 1 c lula reac o Positiva 6 MS751 Positivo Moderado 1 c lula reac o Positiva 7
130. o enzim tica do HPV Solu o de reconstitui o de sondas do HPV Reagente de capta o do alvo do HPV Reagente de selec o do HPV Solu o de lavagem Reagente de leo Tamp o para o fluido de desactiva o Reagente Auto Detect 1 Reagente Auto Detect 2 Conservante do Fluido do Sistema Aptima apenas para o Tigris DTS System C Ap s a reconstitui o os seguintes reagentes permanecem est veis durante 30 dias desde que conservados a uma temperatura de 2 C a 8 C Reagente de Amplifica o do HPV Reagente Enzim tico do HPV Reagente de Sonda do HPV D O reagente de capta o do alvo de trabalho working Target Capture Reagent wTCR permanece est vel durante 30 dias desde que conservado a uma temperatura de 15 C a 30 C Nao refrigere E Deite fora quaisquer reagentes reconstitu dos e o wTCR n o utilizados ap s 30 dias ou ap s a data de validade do lote principal conforme o que ocorrer primeiro F Os reagentes do Aptima HPV Assay permanecem est veis durante 48 horas quando conservados no Tigris DTS System G Os reagentes do Aptima HPV Assay permanecem est veis durante 72 horas quando conservados no Panther System H O Reagente de Sonda e o Reagente de Sonda Reconstitu do s o fotossens veis Conserve os reagentes ao abrigo da luz Nao congele os reagentes Colheita e conserva o de esp cimes A Colheita e processamento de esp cimes Esp cimes de citologia l quida ThinPrep 1 Efectue a colheita
131. o painel n o foi analisada para os membros negativos do painel devido variabilidade inerente quando se observam valores de zero A rela o S CO m dia do analito foi determinada para os 10 membros positivos do painel 2 3 5 7 10 11 e 13 15 a variabilidade entre instrumentos operadores lotes e execu es foi calculada bem como a variabilidade intra execu o Os valores da rela o S CO m dia do analito variaram entre 9 00 e 10 70 para os pain is de positivos baixos e entre 8 84 e 15 75 para os pain is de positivos moderados Os dois membros do painel contendo 2 tipos de HPV de alto risco os pain is 7 e 15 tiveram valores da rela o S CO m dia do analito de 22 90 e 23 37 respectivamente Os CV para os membros de painel com positivos baixos Aptima HPV Assay 39 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Aptima e positivos moderados foram lt 35 e lt 15 respectivamente com a maior variabilidade observada numa execu o Os valores da rela o S CO do IC n o foram avaliados para os membros positivos do painel porque as RLU do IC n o s o indicativas do desempenho de uma reac o individual numa amostra de analito positivo Tabela 7 Reprodutibilidade do Aptima HPV Assay nos Sistemas DTS An lise da variabilidade da rela o S CO Entre Entre Entre Intra S CO M di
132. odas as amostras apresentaram resultados finais v lidos quando foi realizado o teste inicial ou ap s resolu o de resultados iniciais inv lidos por procedimento 46 participantes compareceram na consulta de colposcopia no entanto n o foi poss vel determinar um diagn stico pelas seguintes raz es esp cimes de biopsia avaliados como inadequados n 29 n o foram colhidas biopsias n 15 e l minas da biopsia perdidas n 2 21 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Tr s mulheres apresentavam adenocarcinoma in situ AIS Aptima HPV Assay 82 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Na totalidade 10 042 mulheres apresentavam um estado de doen a n o verificado incluindo indeterminado Tabela 45 Dado que apenas mulheres seleccionadas aleatoriamente com resultados negativos do Aptima HPV Assay no Tigris DTS System e do teste de DNA do HPV dispon vel no mercado foram encaminhadas para colposcopia a propor o de mulheres com um estado de doen a n o verificado foi elevada neste grupo 96 6 Para ajustar este desvio de verifica o foi utilizado um m todo de imputa o m ltipla para efectuar a estimativa do n mero de mulheres com doen a que teriam sido identificadas caso todas as mulheres tivessem sido submetidas a colposcopia S o apresentadas tanto
133. oi em geral categorizada de acordo com o grupo et rio e com o local de teste Os resultados s o apresentados na Tabela 10 para as popula es de c lulas escamosas at picas de significado indeterminado Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance ASC US e negativo para les o intraepitelial ou malignidade Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy NILM Tabela 10 Preval ncia de mRNA do HPV de alto risco por grupo et rio local de teste e todas em conjunto Taxa de positividade x n Popula o ASC US Popula o NILM 221 anos 2 30 anos Tudo 41 8 400 958 5 0 540 10 871 Grupo etario anos 21a 29 60 3 252 418 N A 30 a 39 36 8 98 266 6 9 289 4199 240 18 2 50 274 3 8 251 6672 Local de teste 1 41 6 134 322 4 7 172 3682 2 41 4 150 362 5 2 194 3702 3 42 3 116 274 5 0 174 3487 N A n o aplic vel Aptima HPV Assay 44 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Desenho do Estudo do Ensaio Cl nico Aptima HPV Assay com Esp cimes de Citologia L quida ThinPrep Realizou se um estudo cl nico prospectivo e multic ntrico nos EUA designado ensaio CLEAR para determinar o desempenho cl nico do Aptima HPV Assay na detec o de neoplasia intraepitelial cervical de grau 2 ou doen a cervical mais grave 2CIN
134. onada contendo fase s lida lt 0 5 mg ml Colarinhos de Reconstitui o 3 Ficha de C digos de Barras do Lote Principal 1 folha Aptima HPV Assay 19 AW 11141 601 Rev 003 PT Tigris DTS System Aptima Embalagem de calibradores Aptima HPV C digo de Produto 302554 conservar a uma temperatura de 2 C a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade PCAL Calibrador Positivo do HPV 5 frascos Transcrito in vitro de HPV 16 n o infeccioso a 1000 c pias por ml numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente NCAL Calibrador Negativo do HPV 5 frascos Solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Embalagem de controlos Aptima HPV C digo do Produto 302556 conservar a uma temperatura de 2 C a 8 C ap s a recep o S mbolo Componente Quantidade PC Controlo Positivo do HPV 5 frascos C lulas cultivadas HPV negativas e HPV positivas desactivadas e lisadas a 25 c lulas por ml numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente NC Controlo Negativo do HPV 5 frascos C lulas cultivadas HPV negativas desactivadas e lisadas numa solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Os materiais dispon veis na Hologic t m a indica o do c digo de produto a menos que seja especificado em contr rio Tigris DTS System Kit de Fluidos do Aptima Assay Solu o de Lavagem Aptima Tamp o Aptima para
135. ord ncia entre o Panther System e o Tigris DTS System para esp cimes de CSCT apresentada na Tabela 54 No caso dos esp cimes de CSCT a concord ncia global entre o Panther System e o Tigris DTS System foi gt 98 como mostra a Tabela 54 Dos 632 esp cimes cl nicos testados 69 foram CIN2 e 38 CIN3 A sensibilidade do Aptima HPV Assay para a detec o de CIN2 foi de 97 1 CI de 95 90 0 99 2 no Panther System e de 98 6 CI de 95 92 2 99 7 no Tigris DTS System A sensibilidade para a detec o de CIN3 foi de 100 CI 90 8 100 tanto para o Panther System como para o Tigris DTS System Tabela 54 Concord ncia dos resultados do Aptima HPV Assay provenientes de esp cimes de Aptima CSCT testados no Tigris DTS System e no Panther System Tigris DTS System Positiva Negativa Total Positiva 490 3 493 Panther System Negativa 9 130 139 Total 499 133 632 Concord ncia global 98 1 CI 96 7 98 9 Concord ncia positiva 98 2 CI 96 6 99 0 Concord ncia negativa 97 7 Cl 93 6 99 2 90 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima HPV Assay Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Sensibilidade anal tica O limite de detec o Limit of Detection LOD no cutoff cl nico consiste numa concentra o de RNA do HPV que positiva acima do cutoff cl nico 95 das vezes Determinou se o LOD do Aptima HPV Assay testando pain is de dilui o de transcritos in vitro
136. orpora um controlo interno Internal Control IC para controlar a capta o amplifica o e detec o do cido nucleico bem como o erro do operador ou do instrumento Aptima HPV Assay 2 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Informa es gerais Os esp cimes s o colhidos ou transferidos para um tubo que cont m um meio de transporte de esp cimes specimen transport media STM que submete as c lulas ao processo de lise liberta o mRNA e o protege da degrada o durante a conserva o Quando se executa o Aptima HPV Assay o mRNA alvo isolado do esp cime atrav s da utiliza o de olig meros de capta o que est o ligados a micropart culas magn ticas Os olig meros de capta o cont m sequ ncias complementares para regi es espec ficas das mol culas alvo do mRNA do HPV bem como uma cadeia de res duos de desoxiadenosina Durante o passo de hibrida o as regi es espec ficas das sequ ncias dos olig meros de capta o ligam se a regi es espec ficas das mol culas alvo do MRNA do HPV O complexo do olig mero de capta o alvo ent o captado e retirado da solu o reduzindo a temperatura da reac o para a temperatura ambiente Esta redu o da temperatura permite que a hibrida o ocorra entre a regi o da desoxiadenosina no olig mero de capta o e as mol culas de polidesoxitimidina que est o ligadas por coval ncia s part culas magn ticas As micropart culas incluindo as mol culas alvo do mRNA do
137. ou cancro Os efeitos de outras vari veis potenciais como descarga vaginal utiliza o de tamp es duches vaginais etc e a colheita dos esp cimes n o foram avaliados Aptima HPV Assay 33 AW 11141 601 Rev 003 PT Limita es Aptima Q A utiliza o deste produto deve ser limitada a pessoal com forma o na utiliza o do Aptima HPV Assay A contamina o cruzada de amostras pode originar resultados falsos positivos A taxa de contamina o cruzada do Aptima HPV Assay no Tigris DTS System foi determinada como sendo 0 3 num estudo n o cl nico Os resultados do Aptima HPV Assay devem ser interpretados em conjunto com outros dados laboratoriais e cl nicos de que o m dico disponha Podem ocorrer resultados positivos falsos com este teste Transcritos in vitro dos gen tipos de HPV 26 67 70 e 82 de baixo risco apresentaram reactividade cruzada com o Aptima HPV Assay O material de controlo positivo n o se destina a monitorizar o desempenho no cutoff do ensaio Aptima HPV Assay 34 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Desempenho cl nico do Aptima HPV Assay com esp cimes de citologia l quida ThinPrep Mais de 700 esp cimes de citologia l quida ThinPrep foram colhidos de mulheres europeias encaminhadas para seguimento devido a um ou mais exames Papanicolau anormais infec o por HPV ou outra raz o Um mililitro
138. p cimes com resultados histol gicos Aptima HPV Assay 35 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio nos Sistemas DTS Aptima testados nos Sistemas DTS A sensibilidade cl nica do ensaio foi de 97 7 a especificidade de 52 9 e os valores de progn stico positivos e negativos para a detec o de 2CIN3 foram de 21 3 e 99 4 respectivamente Mais uma vez a sensibilidade do Aptima HPV Assay foi semelhante do HPV DNA para o qual a sensibilidade para a detec o de CIN3 foi de 98 9 Tabela 3b e a especificidade do Aptima HPV Assay foi significativamente mais alta do que a especificidade do HPV DNA que foi de 44 4 nesta popula o para a detec o de les es 2CIN3 Dos 753 esp cimes com resultados histol gicos 159 tinham um resultado citol gico ASCUS A sensibilidade e a especificidade do Aptima HPV Assay nesta popula o foi de 100 e 40 1 respectivamente para a detec o de 2 CIN3 Estes resultados que deram sensibilidade semelhante e especificidade significativamente mais alta para o Aptima HPV Assay comparados com a detec o de DNA de alto risco s o semelhantes aos resultados obtidos noutros estudos t s161718 Tabela 2a Sensibilidade e especificidade do Aptima HPV Assay nos Sistemas DTS para detec o de doen a 2CIN2 2CIN2 lt CIN2 Total 128 271 399 Aptima HPV 13 341 354 Total 141 612 753 Sensibilidade Cl de 95 90 8 84 9 94 5 Especificidade Cl
139. penas biopsias direccionadas para determinar o estado da doen a assumindo que as mulheres sem biopsias direccionadas apresentavam resultados histol gicos normais pois n o se encontravam presentes les es vis veis a preval ncia de 2CIN2 e 2CIN3 no estudo foi de 6 4 e 3 1 respectivamente As estimativas de sensibilidade cl nica para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 foram superiores para os dois testes utilizando apenas biopsias direccionadas do que as estimativas calculadas utilizando todas as biopsias Para os dois ensaios a especificidade cl nica utilizando apenas biopsias direccionadas foi semelhante especificidade obtida com todas as biopsias inclu das Em conformidade quando foram utilizadas apenas biopsias direccionadas a especificidade do Aptima HPV Assay foi significativamente superior do teste do DNA do HPV dispon vel no mercado As estimativas de desempenho cl nico do Aptima HPV Assay e do teste do DNA do HPV dispon vel no mercado s o apresentadas por grupo et rio na Tabela 13 e na Tabela 14 2CIN2 e 2CIN3 respectivamente com base na avalia o de todas as biopsias Aptima HPV Assay 48 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Tabela 13 Popula o ASC US gt 21 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um Teste do DNA do HPV para a detec o de 2CIN2 por grupo est rio Aptima H
140. psias as estimativas de sensibilidade cl nica do Aptima HPV Assay e do teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para detec o de 2CIN2 e 2CIN3 foram semelhantes nos casos em que estavam dispon veis os resultados dos dois ensaios as diferen as nas estimativas de sensibilidade n o foram estatisticamente significativas No caso de 2CIN2 a diferen a de sensibilidade foi de 4 5 CI de 95 12 2 2 5 As estimativas de especificidade cl nica do Aptima HPV Assay para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 foram superiores as do teste de DNA do HPV dispon vel no mercado as diferen as nas estimativas de especificidade foram estatisticamente significativas No caso de 2CIN2 a diferen a de especificidade foi de 6 1 Cl de 95 4 2 8 2 Os NPV foram semelhantes mas para a detec o de 2CIN2 o PPV para o Aptima HPV Assay foi ligeiramente superior ao PPV para o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado 19 3 vs 18 8 Dos 91 casos de 2CIN2 60 65 9 foram identificados em biopsias direccionadas e 31 34 1 foram identificados a partir de biopsias aleat rias e ou ECC ou seja n o em biopsias direccionadas Estas conclus es s o compar veis a resultados de estudos publicados nos quais aproximadamente 25 a 40 dos casos de 2CIN2 foram identificados apenas a partir de esp cimes de biopsias aleat rias e ou ECC Utilizando apenas biopsias direccionadas para determinar o estado da doen a assumindo que as mulheres sem biopsias dir
141. ptima HPV Assay foram clinicamente relevantes e semelhantes s estimativas para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado Os NPV foram semelhantes por m para a detec o de 2CIN2 o PPV para o Aptima HPV Assay foi ligeiramente superior ao PPV para o teste do DNA do HPV dispon vel no mercado 4 7 vs 3 7 Tabela 22 Popula o NILM gt 30 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste do DNA do HPV para a detec o de 2CIN2 e gt CIN3 estimativas ajustadas do desvio de verifica o Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 Sensibilidade 31 0 5 9 56 1 35 4 3 8 66 9 Especificidade 95 2 94 8 95 6 93 7 93 2 94 2 2CIN2 PPV 4 7 2 9 7 6 3 7 2 3 6 0 NPV 99 4 98 1 99 8 99 5 97 9 99 9 Preval ncia 0 9 0 9 Sensibilidade 61 5 14 0 100 56 4 0 4 100 Especificidade 95 2 94 8 95 6 93 6 93 1 94 1 2CIN3 PPV 3 3 1 4 7 6 2 3 1 3 4 1 NPV 99 9 98 4 100 99 9 97 6 100 Preval ncia 0 4 0 4 Aptima HPV Assay 57 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Tabela 23 Popula o NILM gt 30 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste do DNA do HPV para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 estimativas n o ajustadas Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 819 N 801 Des
142. r temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado persistir Aptima HPV Assay 22 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Tigris DTS System 3 Prepare o Reagente de Selec o a Verifique o n mero do lote de reagente na Ficha de C digos de Barras do Lote Principal para garantir que pertence ao kit b Seo Reagente de Selec o contiver precipitado aque a o Reagente de Selec o a 60 C 1 C por um m ximo de 45 minutos para facilitar a dissolu o do precipitado Misture o frasco suavemente a cada 5 a 10 minutos Deixe o Reagente de Selec o equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado ou a nebulosidade persistir Nota Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os colocar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes C Prepara o de reagentes previamente reconstitu dos 1 Os Reagentes de Sonda Amplifica o e Enzim tico previamente reconstitu dos t m de alcan ar a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio 2 Se o Reagente de Sonda reconstitu do contiver precipitado que n o se dissolva novamente temperatura ambiente aque a o a uma temperatura m xima de 60 C durante 1 ou 2 minutos N o utilize se houver precipitado ou nebulosidade 3 Seo wTCR contiver precipitado aque a o wTCR a uma temperatura de 42 C a 60 C durante um m ximo de 90 minutos Deixe o wTCR
143. rophyticus 1x10 CFU ml Klebsiella pneumoniae 1x10 CFU ml Streptococcus agalactiae 1x10 CFU ml Lactobacillus acidophilus 1x10 CFU ml Streptococcus pyogenes 1x10 CFU ml Lactobacillus crispatus 1x10 CFU ml Streptococcus sanguinis 1x10 CFU ml Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus Lactobacillus jensenii 1x10 CFU ml 1x10 CFU ml Ureaplasma urealyticum 1x10 CFU ml Aptima HPV Assay 70 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Tabela 35 Painel de especificidade anal tica Organismos e concentra o sem reactividade cruzada continua o Concentra o de teste Concentra o de teste Organismo sem reactividade Organismo sem reactividade cruzada cruzada Leveduras protozo rios Candida albicans 1x10 CFU ml Trichomonas vaginalis 1x10 c lulas ml Virus Adenovirus 2 1x10 vp ml Virus Herpes simplex 1 2 5x10 TCIDso ml Citomegalov rus 5 6x10 TCIDso ml V rus Herpes simplex 2 5x10 TCIDso ml V rus Epstein Barr 4 3x10 vp ml SV40 1 2 x10 TCIDso ml HIV 1 1 0x10 c pias ml Gen tipos de HPV n o visados HPV 6 2 5x10 c pias ml HPV 61 2 5x10 c pias ml HPV 11 2 5x10 c pias ml HPV 67 1 c pia ml HPV 26 2 5 c pias ml HPV 69 2 5x10 c pias ml HPV 30 2 5x10 c pias ml HPV 70 1 c pia ml HPV 34 2 5x10 c pi
144. s 3 7 Tabela 49 Popula o NILM gt 30 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 estimativas ajustadas em rela o ao desvio de verifica o Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 Sensibilidade 28 4 4 9 51 8 35 4 3 8 66 9 Especificidade 95 5 95 1 95 9 93 7 93 2 94 2 2CIN2 PPV 4 5 2 7 7 4 3 7 2 3 6 1 NPV 99 4 98 1 99 8 99 5 97 9 99 9 Preval ncia 0 9 0 0 1 9 0 9 0 0 1 9 Sensibilidade 54 0 3 6 100 56 4 0 4 100 Especificidade 95 4 95 0 95 8 93 6 93 1 94 1 2CIN3 PPV 3 0 1 6 5 5 2 3 1 3 4 1 NPV 99 9 98 3 100 99 9 97 6 100 Preval ncia 0 4 0 0 1 2 0 4 0 0 1 3 Aptima HPV Assay 86 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Tabela 50 Popula o NILM gt 30 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV para a detec o de 2CIN2 e gt CIN3 estimativas n o ajustadas Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 818 N 800 Desempenho Estimativa CI de 95 Estimativa CI de 95 Sensibilidade aso 48 1 85 5 ato 62 4 94 5 Especificidade sra 64 7 71 2 ES 45 3 52 3 2CIN2 9 5 2 3 8 EEN 14 269 3 5 6 6 16 416 2 9 4 5 98 9 99 2 0
145. s 5c e 5d acima Ap s a aspira o final retire o suporte da base magn tica do TCS e inspeccione os tubos visualmente para assegurar que todo o l quido tenha sido aspirado e que todos os tubos cont m bolinhas de part culas magn ticas Se for vis vel qualquer l quido coloque o suporte de novo na base do TCS durante 2 minutos e repita a aspira o para essa TTU utilizando as mesmas pontas utilizadas anteriormente para cada esp cime Avance para o passo da Amplifica o F Amplifica o 1 Adicione o Reagente de Amplifica o e de leo Op o de pipetagem manual a Utilizando o pipetador de repeti o adicione 75 ul do Reagente de Amplifica o reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as misturas de reac o no suporte dever o estar vermelhas b Utilizando o pipetador de repeti o adicione 200 ul de Reagente de leo c Cubra os tubos com cart es vedantes d Avance para o Passo 2 Op o do instrumento TECAN Freedom EVO Consulte a TECAN Freedom EVO 100 4 Application Sheet for the Aptima HPV Assay Ficha de Aplica o TECAN Freedom EVO 100 4 para o Aptima HPV Assay para obter instru es espec ficas sobre a adi o dos Reagentes de Amplifica o e de leo se utilizar este instrumento Cubra os cart es vedantes com a estrutura do SB100 e leve o suporte para o bloco de aquecimento Prima a tecla apropriada para iniciar a incuba o Quando indicado retire a estrutura do SB100 Retire e d
146. s de reagente reconstituidos Figura 2 Passo 7 Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 8 Advert ncia Evite formar espuma quando reconstituir os reagentes A espuma compromete a detec o de nivel no Tigris DTS System 4 DB N 3 4 o A na lt e 5 6 7 8 a Sel Y A U l A Figura 2 Processo de reconstituigao do Tigris DTS System 2 Prepare o Reagente de Capta o do Alvo de trabalho wTCR a Emparelhe os frascos de TCR e de Controlo Interno Internal Control IC adequados Verifique os n meros do lote de reagente na Ficha de C digos de Barras do Lote Principal para garantir que est o emparelhados os reagentes adequados do kit Abra o frasco de TCR e deposite a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Abra o frasco de IC e deite todo o conte do no frasco de TCR Uma pequena quantidade de l quido dever ficar no frasco de IC Tape o frasco de TCR e agite suavemente a solu o para misturar o conte do Evite formar espuma durante este passo Anote as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Deite fora o frasco e a tampa do IC poss vel que haja forma o de precipitado no wTCR o que pode resultar em resultados inv lidos devido aos erros de verifica o de volume O precipitado pode ser dissolvido aquecendo o wTCR a uma temperatura de 42 C a 60 C durante um m ximo de 90 minutos Deixe o wTCR equilibra
147. sco suavemente a cada 5 a 10 minutos Deixe o Reagente de Selec o equilibrar temperatura ambiente antes de ser utilizado N o utilize se o precipitado ou a nebulosidade persistir Misture bem cada reagente invertendo o suavemente antes de ser utilizado Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes D Configura o do suporte 1 2 3 Deixe as amostras calibradores controlos e esp cimes alcan ar a temperatura ambiente antes de serem processadas N o coloque as amostras no agitador Inspeccione os tubos de amostras antes de os furar Se um tubo de amostra contiver bolhas ou um volume mais inferior ao normalmente observado centrifugue o tubo durante 5 minutos a 420 RCF para garantir que n o h l quido na tampa Nota Se n o executar o passo 3 poder sair l quido da tampa do tubo de esp cime 4 5 Nos suportes de TTU coloque TTU suficientes para acomodar os calibradores controlos e esp cimes Opcional Crie uma lista de trabalho utilizando o software Aptima Worklist Editor Consulte a sec o do Worklist Editor no Aptima Assay Software Operator s Manual Manual do Operador do Software do Aptima HPV Assay para obter instru es especificas Op o de pipetagem manual 1 Misture bem o wTCR TCR mais IC Utilizando um pipetador de repeti o adicione 100 ul de wTCR a cada tubo de reac o Aptima HPV Assay 13 AW 11141 601 Rev 003 PT Sistemas DTS Aptima N Util
148. ssay 61 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ensaio no Tigris DTS System Aptima Desempenho do Aptima HPV Assay com Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais Os esp cimes de citologia l quida ThinPrep emparelhados e os esp cimes do Kit CSCT Aptima foram colhidos em 735 sujeitos Um mililitro 1 0 ml de cada esp cime de citologia l quida ThinPrep foi dilu do em 2 9 ml de meio de transporte de esp cimes Aptima e uma nica r plica foi testada com o Aptima HPV Assay no Tigris DTS System Uma nica r plica de cada esp cime de CSCT tamb m foi testada com o Aptima HPV Assay A concord ncia percentual do Aptima HPV Assay entre o esp cime de citologia l quida ThinPrep e o esp cime do CSCT foi determinada e os resultados s o indicados na Tabela 28 A concord ncia positiva percentual foi de 95 9 Cl de 95 92 6 97 8 a concord ncia negativa percentual foi de 95 5 CI de 95 93 3 97 0 a concord ncia geral foi de 95 6 CI de 95 93 9 96 9 Observou se uma forte correla o entre os esp cimes de citologia l quida e os esp cimes do kit de transporte kappa 0 90 Tabela 28 Concord ncia geral dos resultados do Aptima HPV Assay de esp cimes de citologia l quida ThinPrep e de esp cimes do Kit Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes do Colo do Utero testadas no Tigris DTS System Esp cime de citologia l quida ThinPrep Positiva Negativa Total rae s E Positiva 234 22 256 Esp cime do kit Apt
149. stem e ou com o teste de DNA do HPV dispon vel no mercado bem como as mulheres seleccionadas aleatoriamente que tinham sido negativas com os dois ensaios foram encaminhadas para colposcopia para a avalia o da linha de refer ncia As mulheres seleccionadas aleatoriamente que tinham sido negativas com os dois ensaios foram inclu das para correc o relativa ao desvio de verifica o com estimativas de desempenho ajustadas geradas recorrendo a um m todo de imputa o m ltipla Foi obtida uma biopsia ECC de cada uma das mulheres que realizaram colposcopia As biopsias por pun o foram obtidas apenas de les es vis veis m todo direccionado 1 biopsia por les o O acompanhamento de mulheres no Estudo NILM que n o t m 2CIN2 prossegue h 3 anos com consultas citol gicas anuais As mulheres com ASC US ou resultados citol gicos mais graves durante o per odo de acompanhamento s o encaminhadas para colposcopia utilizando o mesmo procedimento de biopsia realizado para a avalia o da linha de refer ncia O estado da doen a foi determinado a partir de um consenso do painel de revis o de histologia que foi baseado na concord ncia de pelo menos 2 patologistas especialistas Os estados de HPV e citologia das mulheres n o foram apresentados aos patologistas especialistas nem os diagn sticos de histologia de cada um Os resultados do teste do HPV n o foram apresentados aos investigadores m dicos e mulheres at depois da conclus o
150. te nas expressas do MRNA policistr nico E6 E7 alteram as fun es das prote nas celulares p53 e retinoblastoma dando origem falha dos pontos de verifica o do ciclo celular e instabilidade do genoma da c lula Catorze dos gen tipos do HPV s o considerados patog nicos ou de alto risco para doen a do colo do tero Diversos estudos t m associado os gen tipos 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 e 68 progress o da doen a Os doentes que apresentem uma infec o persistente com um desses tipos possuem um maior risco de desenvolver displasia grave ou carcinoma do colo do tero As infec es por HPV s o muito comuns e a maioria das mulheres ir o eliminar infec es por HPV no prazo de 6 a 12 meses A presen a de cido nucleico de HPV n o significa que estejam presentes displasia do colo do tero ou cancro do colo do tero Uma abordagem mais eficaz detec o de doen a cervical consiste em visar os elementos oncog nicos do HPV que fomentam a infec o viral persistente e a transforma o celular Princ pios do procedimento O Aptima HPV Assay envolve tr s passos principais os quais ocorrem num nico tubo capta o do alvo amplifica o do alvo por amplifica o mediada por transcri o Transcription Mediated Amplification TMA e detec o dos produtos de amplifica o pelo ensaio de protec o da hibrida o Hybridization Protection Assay HPA O ensaio inc
151. tiva IC 2 cutoff do IC IC lt 2 000 000 RLU S CO do analito 2 0 50 Positiva IC lt 2 000 000 RLU Analito lt 13 000 000 RLU IC gt 2 000 000 RLU ou Invalida S CO do analito lt 0 50 e IC lt cutoff do IC ou Analito gt 13 000 000 RLU Aptima HPV Assay 32 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Limita es Limita es A N o foram avaliados outros tipos de esp cimes para al m dos identificados na utiliza o prevista O desempenho do Aptima HPV Assay n o foi avaliado para indiv duos vacinados contra o HPV C O Aptima HPV Assay n o foi avaliado em casos de suspeita de abuso sexual D A preval ncia de infec o por HPV numa popula o pode afectar o desempenho Os valores de progn stico positivo diminuem quando se examinam popula es com baixa preval ncia ou indiv duos sem risco de infec o Os esp cimes de citologia l quida ThinPrep com menos de 1 ml ap s a prepara o de l minas para o exame de Papanicolau ThinPrep s o consideradas inadequadas para o Aptima HPV Assay A remo o de 1 ml de esp cime de citologia l quida SurePath antes do processamento citol gico n o foi avaliada relativamente ao impacto do resultado de citologia Os esp cimes conservados em SurePath tratados com o Kit de Reagente PACE 2 Fast Express n o foram avaliados quanto sua utiliza o no Panther System Os resultados dos testes podem ser afectados por uma colheita conserva o ou processament
152. tro especial apenas dispon veis na Hologic Unidades de Dez Tubos Ten Tube Units TTU TU0022 Suporte de TTU 104579 Aptima HPV Assay 10 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Cassetes de Dez Pontas Ten Tip Cassettes TTC Kit de Transfer ncia de Esp cimes Aptima Kit Aptima de Colheita e Transporte de Esp cimes Cervicais Lix via m nimo de 5 ou 0 7 M de solu o de hipoclorito de s dio Luvas descart veis Tampas Perfur veis Aptima Tampas n o perfur veis de substitui o Materiais opcionais Instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 Conjunto da Placa do Tabuleiro Aptima DTS 800 Pontas 1000 ul condutoras detec o de l quido Reservat rio de reagente m dulo de quarto de 40 ml Reservat rio de reagente dividido 19 ml x 2 m dulos de quarto Intensificador de Lix via para limpeza Sistemas DTS 104578 301154C 302657 105668 103036A C digo de Produto 900932 105200 10612513 Tecan 104765 901172 302101 Procedimento de teste dos Sistemas DTS A Prepara o da rea de trabalho equipamento 1 Antes de iniciar o ensaio limpe as superf cies de trabalho e os pipetadores com 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M de solu o de hipoclorito de s dio Deixe a solu o entrar em contacto com as superf cies e os pipetadores durante pelo menos 1 minuto e depois enxag e com gua N o deixe a solu o secar Cubra a superf cie da bancada em que ser executado o teste com capas absorventes para bancadas de
153. ulheres suscept veis de serem avaliadas tinham 30 anos ou idade superior com resultados citol gicos de NILM e resultados do Aptima HPV Assay Das 540 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay positivos 335 realizaram colposcopia Das 10 331 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay negativos 530 realizaram colposcopia Vinte 20 mulheres tinham 2CIN2 e onze 11 tinham 2CIN3 799 mulheres tinham histologia normal CIN1 46 mulheres tinham um estado de doen a indeterminado Os resultados do Aptima HPV Assay pelo diagn stico do painel de consenso de estudo histol gico s o apresentados na Tabela 17 Tabela 17 Popula o NILM gt 30 anos Resultados do Aptima HPV Assay e do diagn stico do painel de consenso de estudo histol gico Consenso do diagn stico do painel de revis o de histologia Resultado do Teste do Aptima HPV Assay DNA do HPV Indeterminado Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancro Total Positiva Positiva 11 212 11 4 7 2 247 Positiva Negativa 7 59 0 1 0 1 68 a Sem Positiva 3 16 1 0 0 0 20 resultado Negativa Positiva 10 170 8 2 1 0 191 Negativa Negativa 15 313 9 1 0 0 338 E Sem Negativa 0 0 0 1 0 0 1 resultado Total 46 770 29 9 8 gws 865 Todas as amostras apresentaram resultados finais v lidos quando foi realizado o teste inicial ou ap s resolu o de resultados iniciais inv lidos por procedimento 21 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o t
154. uzick J Dockter J Reid D Getman C Giachetti 2013 Aptima HPV assay performance in women with atypical squamous cells of undetermined significance cytology results American Journal of Obstetrics amp Gynecology 208 2 144 145 Wright TC Jr Massad LS Dunton CJ Spitzer M Wilkinson EJ and Solomon D 2006 Consensus Guidelines for the Management of Women with Abnormal Cervical Cancer Screening Tests 2007 Am J Obstet Gynecol 197 4 346 355 Pretorius R G W H Zhang J L Belinson et al Colposcopically directed biopsy random cervical biopsy and endocervical curettage in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia Il or worse 2004 Am J Obstet Gynecol 191 430 434 Pretorius R G R J Kim J L Belinson P Elson Y L Qiao Inflation of sensitivity of cervical cancer screening tests secondary to correlated error in colposcopy 2006 J Low Genit Tract Dis 10 1 5 9 Aptima HPV Assay 98 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima dal IVD CE Hologic Inc EMERGO EUROPE 10210 Genetic Center Drive Molenstraat 15 San Diego CA 92121 USA 2513 BH The Hague Apoio ao Cliente 1 844 Hologic 1 844 465 6442 Holanda customersupport hologic com Suporte t cnico 1 888 484 4747 molecularsupport hologic com Para obter mais informa es sobre contactos aceda a www hologic com Este produto destina se a ser utilizado apenas no dominio do diagn stico in vitro de seres humanos Hologic Aptima DTS Leader PACE P
155. v 17 11 November Castle P E J Dockter C Giachetti F A R Garcia M McCormick A L Mitchell E B Holladay and D P Kolk 2007 A Cross sectional Study of a Prototype Carcinogenic Human Papillomavirus E6 E7Messenger RNA Assay for Detection of Cervical Pre cancer and Cancer Clin Cancer Res 13 9 2599 Monsonego J M G Hudgens L Zerat J C Zerat K Syrjanen P Halfon F Ruiz and J S Smith 2010 Evaluation of oncogenic human papillomavirus RNA and DNA tests with liquid based cytology in primary cervical cancer screening The FASE study Int J Cancer n a doi 10 1002 ljc 25726 Datta S D L A Koutsky S Ratelle E R Unger J Shlay T McClain B Weaver P Kerndt J Zenilman M Hagensee C J Suhr and H Weinstock 2008 Human Papillomavirus Infection and Cervical Cytology in Women Screened for Cervical Cancer in the United States 2003 2005 Annals Int Med 148 493 Clifford G M S Gallus R Herrero N Mu oz P J F Snijders S Vaccarella P T H Anh C Ferreccio N T Hieu E Matos M Molano R Rajkumar G Ronco S de Sanjos H R Shin S Sukvirach J O Thomas S Tunsakul C J L M Meijer S Franceschi and the IARC HPV Prevalence Surveys Study Group Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys a pooled Analysis 2005 The Lancet 366 991 Stoler M H T C Wright Jr J C
156. va CI de 95 N 415 N 389 Sensibilidade ee 78 2 94 3 eas 86 1 98 3 44 9 35 5 eal o ERR Especificidade 159 354 39 8 50 1 117 330 30 5 40 8 anos 21 7 20 8 0 PPV 54 249 19 3 23 9 56 269 19 0 22 5 95 8 97 5 0 NPV 159 166 92 3 98 1 117 120 93 6 99 4 Preval ncia 14 7 61 415 15 2 59 389 N 261 N 238 Sensibilidade Ro 64 0 94 8 eee 58 4 91 9 rae 66 4 61 9 0 adiada Especificidade 160 241 60 2 72 1 135 218 55 3 68 1 anos 17 3 16 2 0 PPV 17 98 13 1 21 1 16 99 11 8 19 8 98 2 97 1 0 t NPV 160 163 95 7 99 6 135 139 94 1 99 1 Preval ncia 7 7 20 261 8 4 20 238 N 261 N 236 Sensibilidade aio 31 3 83 2 AO 39 7 89 2 82 1 79 6 a a Sio Especificidade 206 251 76 9 86 3 180 226 73 9 84 4 anos 11 8 13 2 0 PPV 6 51 5 6 17 7 7 53 6 9 18 7 98 1 98 4 o NPV 206 210 96 6 99 4 180 183 96 6 99 6 Preval ncia 3 8 10 261 4 2 10 236 74 mulheres com resultados do Aptima HPV Assay n o apresentaram resultados do teste de DNA do HPV devido sobretudo ao volume insuficiente do esp cime citol gico Aptima HPV Assay 78 AW 11141 601 Rev 003 PT Aptima Desempenho do ensaio no Panther System Tabela 41 Popula o ASC US gt 21 anos Desempenho do Aptima HPV Assay e de um teste de DNA do HPV dispon vel no mercado para a det
157. vo com o Aptima HPV Assay tem 8 1 vezes mais probabilidade de ter 2CIN2 do que uma mulher que tenha tido um resultado negativo com o Aptima HPV Assay O risco relativo ajustado de 2CIN3 foi de 34 5 Cl de 95 2 7 443 3 As estimativas n o ajustadas de risco absoluto e relativo para a detec o de 2CIN2 e 2CIN3 s o apresentadas em geral na Tabela 20 e por grupo et rio na Tabela 21 Tabela 19 Popula o NILM 2 30 anos Risco absoluto e relativo de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste do DNA do HPV estimativas ajustadas do desvio de verifica o Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95 CI de 95 CI de 95 Positiva 4 7 3 7 2 9 7 6 8 1 2 3 6 0 7 3 2 3 28 1 05 1 6 33 4 2CIN2 Negativa 0 6 0 2 1 9 0 1 5 1 Preval ncia 0 9 0 9 Positiva 3 3 2 3 1 4 7 6 34 5 1 3 4 1 21 0 0 1 2 7 443 3 0 1 1 0 423 4 2CIN3 Negativa 0 0 1 6 0 0 2 4 Preval ncia 0 4 0 4 Tabela 20 Popula o NILM 2 30 anos Risco absoluto e relativo de 2CIN2 e 2CIN3 para os resultados do Aptima HPV Assay e de um teste do DNA do HPV estimativas n o ajustadas Aptima HPV Assay Teste do DNA do HPV N 819 N 801 Risco absoluto Risco relativo Risco absoluto Risco relativo Resultado do ensaio CI de 95 CI de 95
158. xecu es por dia e 5 r plicas de um dado gen tipo com testes de concentra o em cada execu o O limite de detec o de 95 foi calculado a partir da an lise de regress o Probit dos resultados de positividade para cada painel de dilui o Os resultados da an lise Probit Tabela 29 mostram que os tipos 16 18 31 33 35 38 45 58 59 e 68 de HPV tinham limites de detec o de 95 inferiores a 100 c pias reac o tendo os tipos 51 52 56 e 66 limites de detec o de 95 entre 100 e 300 c pias reac o As quatro linhas celulares testadas tinham limites de detec o de 95 inferiores a 1 c lula reac o Tabela 29 Limite de detec o no cutoff cl nico do Aptima HPV Assay Alvo Limite de detec o CI de 95 HPV 16 48 7 36 6 72 2 HPV 18 80 9 60 4 118 4 HPV 31 18 6 14 2 27 3 HPV 33 49 1 37 0 71 3 HPV 35 19 1 14 2 29 1 HPV 39 24 6 19 1 34 4 HPV 45 33 8 25 7 49 4 HPV 51 206 6 157 5 297 7 HPV 52 266 2 205 5 373 8 HPV 56 100 1 81 9 129 9 HPV 58 48 0 37 3 68 7 HPV 59 49 0 36 4 75 9 HPV 66 168 7 129 6 241 1 HPV 68 27 0 20 3 40 1 SiHa 0 30 0 24 0 43 HeLa 0 18 0 14 0 29 ME180 0 11 0 09 0 16 MS751 0 19 0 14 0 33 c pias por reac o para transcritos in vitro e c lulas por reac o para linhas celulares Aptima HPV Assay 63 AW 11141 601 Rev 003 PT Desempenho do ens

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