Disco de Reagente do Painel Lipídico Piccolo
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1. second edition NCCLS Document GP5 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Procedure for the collection of diagnostic specimens by venipuncture approved guideline fourth edition NCCLS Document H3 A4 Wayne PA NCCLS 1998 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Procedures for the handling and processing of blood specimens approved guideline second edition NCCLS Document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Document EP7 A Wayne PA NCCLS 2002 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3 ed Washington DC AACC Press 1990 and 1991 Supplement Kroll MH et al Standardization of Lipoprotein Reporting Am J Clin Pathol 2000 114 696 702 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of Linearity of Quantitative Analytical methods proposed guideline second edition NCCLS Document EP6 P2 Wayne PA NCCLS 2001 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of precision performance of clinical chem2. Sensibilidade O limite inferior de detec o do intervalo report vel din mico para cada analito de colesterol 20 mg dL 0 52 mmol L HDL 15 mg dL 0 39 mmol L e triglic ridos 20 mg dL 0 23 mmol L Precis o Foram realizados estudos de precis o utilizando as directrizes NCCLS EP5 A com modifica es com base na NCCLS EP18 P para dispositivos de utiliza o unit ria Os resultados de precis o intra ensaio e total foram determinados utilizando duas amostras de soro Os estudos utilizaram os dados de quatro analisadores dois lotes de discos e dois locais diferentes ao longo de 10 dias para ambas as amostras Os resultados est o resumidos abaixo P gina 9 de 13 Analito amostra Colesterol total CHOL Soro 1 M dia mg dL DP HCV Soro 2 M dia mg dL DP PCV HDL Soro 1 M dia mg dL DP HCV Soro 2 M dia mg dL DP CV Triglic ridos TRIG Soro 1 M dia mg dL DP CV Soro 2 M dia mg dL DP CV N 160 N 160 N 160 N 160 N 160 N 160 Tamanho da Intra ensaio 223 7 3 0 1 3 202 2 3 1 1 5 55 3 1 4 2 6 38 0 1 3 3 5 206 8 4 7 2 3 163 7 1 8 1 1 Total 223 7 5 7 2 6 202 2 44 22 55 3 1 9 3 5 38 0 1 6 4 3 206 8 255 2 6 163 7 2 4 1 5 a EP ar 2 3 4 Estes dados indicam que os tr s ensaios cumprem os crit rios de precis o do NCEP Correla o As amostras de soro foram colhidas e processadas no Analis
3. n o seja poss vel processar a amostra no prazo de 60 minutos e Inicie o teste no prazo de 10 minutos ap s a transfer ncia da amostra para o disco de reagente 8 Procedimento Materiais fornecidos e Um Disco de Reagente do Painel Lip dico Piccolo PN 400 1025 uma caixa de discos PN 400 0025 Materiais necess rios mas n o fornecidos e Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou Analisador Qu mico Piccolo xpress P gina 5 de 13 e A pipeta de transfer ncia de amostras volume fixo de aproximadamente 100 uL e as pontas s o fornecidas com cada Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou com o Analisador Qu mico Piccolo xpress e podem ser encomendadas novamente junto da Abaxis e Reagentes de controlo dispon veis no mercado recomendados pela Abaxis contacte o Servi o de Assist ncia T cnica da Abaxis para obter mais informa es sobre os materiais de controlo e os valores esperados e Temporizador Par metros de teste O Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress funciona a temperaturas ambiente entre os 15 C e os 32 C 59 90 F O tempo de an lise de cada Disco de Reagente do Painel Lip dico Piccolo inferior a 15 minutos O analisador mant m o disco de reagente temperatura de 37 C 98 6 F durante o intervalo de medi o Procedimento de teste Os procedimentos completos de colheita da amostra e os procedimentos passo a passo relativos ao funcionamento s o descritos no
4. Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Calibra o O Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress encontra se calibrado pelo fabricante antes do envio O c digo de barras impresso no anel de c digo de barras indica ao analisador os dados de calibra o espec ficos do disco Consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Controlo de qualidade Consulte a Sec o 2 4 do Manual do Operador do Analisador Piccolo ou a Sec o 6 Calibra o e controlo de qualidade do Manual do Operador do Analisador Piccolo xpress O desempenho do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress pode ser verificado atrav s do processamento de controlos Para obter uma lista dos materiais de controlo de qualidade aprovados com os intervalos de aceita o contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis Outros controlos base de soro humano ou plasma podem n o ser compat veis Os materiais de controlo de qualidade devem ser armazenados de acordo com o folheto informativo inclu do nos controlos Se os resultados de controlo estiverem fora do intervalo repita o controlo uma vez Se continuarem fora do intervalo contacte a Assist ncia T cnica N o inclua os resultados no relat rio se os controlos estiverem fora dos limites rotulados Consulte no Manual do Operador do Analisador Piccol
5. Network CRMLN que coordenada pelos Centros para Controlo de Doen as O processo de certifica o avalia a exactid o da calibra o do m todo e a precis o ajudando a garantir uma classifica o de doentes fi vel baseada nos pontos de corte do NCEP Tal como acontece com qualquer procedimento de teste de diagn stico todos os outros procedimentos de teste incluindo o estado cl nico do doente devem ser considerados antes do diagn stico final 3 Princ pios dos procedimentos Colesterol total CHOL O ensaio CHOL da Abaxis consiste num m todo de ponto final enzim tico que utiliza a colesterol esterase CE e a colesterol desidrogenase CHDH CE Esteres de colesterol HO sy Colesterol cidos gordos CHDH Colesterol NAD gt Colest 4 en 3 ona NADH H A CE hidrolisa os steres de colesterol para formar colesterol e cidos gordos A reac o da CHDH converte colesterol em colest 4 en 3 ona O NADH medido bicromaticamente a 340 nm e 405 nm A produ o de NADH directamente proporcional quantidade de colesterol presente Um branco espec fico do ensaio igualmente monitorizado para garantir que nenhuma reac o exterior interfere com os c lculos dos n veis de CHOL Colesterol ligado a lipoprote nas de alta densidade HDL O ensaio de HDL da Abaxis consiste num m todo de precipita o que utiliza colesterol esterase PEG CE e colesterol oxidase PEG CO modificadas por polietil
6. a todos os requisitos CLIA Nos laborat rios com dispensa dos crit rios CLIA apenas pode ser testado sangue total com heparina de l tio Em laborat rios de complexidade moderada poss vel utilizar sangue total heparinizado com l tio plasma heparinizado com l tio ou soro necess rio um Certificado de Dispensa dos Crit rios CLIA para realizar testes com dispensa dos crit rios CLIA poss vel obter um Certificado de Dispensa junto dos Centros de Servi os Medicare e Medicaid CMS Contacte o Servi o de Assist ncia T cnica da Abaxis atrav s do n mero 800 822 2947 para saber como obter um Certificado 2 Resumo e explica o dos testes Relev ncia cl nica A medi o de l pidos e lipoprote nas no soro til para caracterizar o risco de desenvolvimento de doen as cardiovasculares DCV de um indiv duo e para monitorizar interven es terap uticas O Programa Nacional de Educa o para o Colesterol EUA forneceu directrizes consensuais para a medi o e pontos de corte para a interpreta o Os l pidos circulantes s o transportados em lipoprote nas A frac o LDL o principal contribuinte de lipoprote nas para o desenvolvimento da aterosclerose e cujo tratamento tem sido conclusivamente demonstrado como eficaz transporta a maioria do colesterol que circula no sangue O colesterol total no soro medido h v rios anos para quantificar a quantidade total de lipoprote nas enquanto m todo pr tico de
7. apolipoprote na prim ria associada com as lipoprote nas aterog nicas 12 Caracter sticas de desempenho Linearidade A qu mica de cada analito linear no intervalo din mico abaixo indicado quando o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress utilizado de acordo com o procedimento recomendado consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Esta avalia o utilizou a directriz NCCLS EP6 P2 Tabela 5 Intervalos din micos do Analisador Piccolo Analito Unidades comuns Unidades SI CHOL 20 520 mg dL 0 52 13 5 mmol L HDL 15 100 mg dL 0 39 2 59 mmol L TRIG 20 500 mg dL 0 23 5 65 mmol L Se a concentra o de analitos se situar acima do intervalo de medi o intervalo din mico mas for inferior ao intervalo do sistema o cart o impresso ir indicar um sinal gt no limite superior e um asterisco depois do n mero por exemplo CHOL gt 520 mg dl Se for inferior ao intervalo din mico ser impresso um lt com um asterisco por exemplo CHOL lt 20 mg dL Para valores que se situem largamente fora do intervalo de medi o intervalo do sistema ser impresso em vez de um resultado Sempre que for apresentado num cart o impresso recolha uma nova amostra e reprocesse o teste Se os resultados da segunda amostra forem novamente suprimidos contacte o Servi o de Assist ncia T cnica da Abaxis
8. dentro 63 63 63 63 63 63 IC de 95 94 3 a 100 Triglic ridos Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 63 63 63 M dia 83 4 mg dL 152 7 mg dL 205 6 mg dL PCV 3 0 1 5 0 9 Intervalo observado 71 96 148 164 201 210 Percentagem de resultados dentro do intervalo 15 0 100 63 63 IC de 95 94 3 a 100 100 63 63 IC de 95 94 3 a 100 100 63 63 IC de 95 94 3 a 100 13 Bibliografia 1 10 11 Castelli WP et al Lipids and risk of coronary heart disease The Framingham Study Ann Epidemiol 1992 2 23 28 National Cholesterol Education Program Expert Panel Third report of the National Cholesterol Education Program NCEP Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults ATP HI NIH Publication Bethesda MD National Heart Lung and Blood Institute 2002 Executive summary of the third report of the National Cholesterol Education Program NCEP Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults Adult Treatment Panel II JAMA 2001 285 2486 97 Warnick GR et al Impact of the third cholesterol report from the Adult Treatment Panel of the National Cholesterol Education Program on the Clinical Laboratory Clin Chem 2002 48 11 17 Kayamori Y et al Endpoint colorimetric method for assaying total cholesterol in serum with choleste
9. igualmente monitorizado para garantir que nenhuma reac o exterior interfere com os c lculos dos n veis de HDL Triglic ridos TRIG O ensaio de TRIG da Abaxis consiste num m todo de ponto final enzim tico que utiliza quatro enzimas O mecanismo da reac o o seguinte Lipase Triglic ridos 3H0 _ Glicerol 3 cidos gordos Glicerol quinase Mg Glicerol ATP sy G 3 P ADP G 3 PDH G 3 P NAD _ DAP NADH H Diaforase NADH Ht INT gt _ NAD Formazan G 3 P Glicerol 3 fosfato G 3 PDH Glicerol 3 fosfato desidrogenase DAP Fosfato de di hidroxiacetona INT Violeta de p iodonitrotetrazolio No primeiro passo os triglic ridos s o hidrolisados em glicerol e cidos gordos numa reac o catalisada por lipase Em seguida o glicerol fosforilado numa reac o que exige ATP catalisada pela glicerol quinase GK O glicerolfosfato ent o oxidado em fosfato de di hidroxiacetona com a redu o simult nea de NAD em NADH numa reac o catalisada pela glicerol 3 fosfato desidrogenase G 3 PDH O NADH ent o oxidado com a redu o simult nea de INT numa reac o catalisada pela diaforase A intensidade do formazan extremamente colorido medida bicromaticamente a 500 nm e 850 nm e directamente proporcional concentra o de triglic ridos presente na amostra Um branco espec fico do ensaio igualmente monitorizado para gara
10. resultados s o impressos em cart es de resultados fornecidos pela Abaxis Os cart es de resultados t m um verso autocolante para facilitar a coloca o nos ficheiros dos doentes 10 Limita es do procedimento P gina 6 de 13 As limita es gerais do procedimento s o descritas no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress e O nico anticoagulante recomendado para utiliza o com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress a heparina de l tio N o utilize heparina de s dio e As amostras com hemat critos com um excesso de volume de concentrado de eritr citos de 62 podem apresentar resultados inexactos As amostras com um n vel elevado de hemat critos podem ser inclu das nos relat rios como hemolisadas Estas amostras podem ser centrifugadas de forma a obter plasma e reprocessadas num novo disco de reagente e Qualquer resultado de um determinado teste que exceda o intervalo de ensaio dever ser analisado atrav s de outro m todo de teste aprovado ou enviado para um laborat rio de refer ncia N o dilua a amostra e processe novamente no Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou no Analisador Qu mico Piccolo xpress Advert ncia Testes extensivos com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress demonstraram que em casos muito raros a amostra distribu da no disco de reagente pode n o fluir
11. 66199 triglic ridos No cart o impresso o valor calculado para VLDL seguido de um c para indicar que calculado Rela o colesterol total HDL calculada O Analisador Piccolo ou o Analisador Piccolo xpress calcula automaticamente a rela o entre colesterol total HDL abreviada como TC H para cada amostra Se o valor de colesterol total ou HDL medido directamente estiver em falta n o ser fornecida oe 99 qualquer rela o No cart o impresso o valor calculado para TC H seguido de um c para indicar que calculado N o HDL calculado dispon vel apenas no analisador Xpress O Analisador Piccolo Xpress calcula automaticamente o colesterol n o HDL abreviado como nHDLc de cada amostra O nHDLc calculado subtraindo o colesterol HDL do colesterol total CHOL Na fita de resultado o valor calculado para o nHDLc seguido P gina 3 de 13 por um C para indicar que est calculado Se o colesterol total medido diretamente CHOL ou o valor de HDL estiverem faltando o nHDLc n o pode ser calculado 4 Princ pio de funcionamento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress os princ pios e limita es do procedimento Schembri et al fornecem uma descri o detalhada do analisador Piccolo e do disco de reagente 5 Descri o dos reagentes Reagentes Cada Disco de Reagente do Painel Lip dico Piccolo cont m esferas de reagente s
12. Disco de Reagente do Painel Lip dico Piccolo Ce Servi o de Apoio ao Cliente e de Assist ncia T cnica 800 822 2947 Aplic vel apenas a clientes nos EUA Os clientes fora dos EUA dever o contactar o representante Dispensa dos crit rios CLIA Utilizar local da Abaxis para solicitar o servi o de apoio ao cliente apenas sangue total com heparina de l tio Complexidade moderada Utilizar sangue total com heparina de l tio plasma com heparina de l tio ou soro Abril de 2014 PN 400 7144 Rev Q 2002 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Aplica o O Disco de Reagente do Painel Lip dico Piccolo utilizado com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress destina se a ser utilizado para a determina o quantitativa in vitro de colesterol total CHOL colesterol ligado a lipoprote nas de alta densidade HDL e triglic ridos TRIG em laborat rios cl nicos ou locais de presta o de cuidados A partir destas determina es s o calculados pelo analisador o colesterol ligado a lipoprote nas de baixa densidade LDL o colesterol ligado a lipoprote nas de muito baixa densidade VLDL e a rela o entre colesterol total lipoprote nas de alta densidade TC H Apenas para clientes nos EUA Este teste est dispensado ao abrigo dos regulamentos CLIA de 1988 Se um laborat rio modificar as instru es do sistema de testes este teste considerado de elevada complexidade e est sujeito
13. ador Qu mico de Sangue Piccolo e por m todos comparativos Todos os resultados dos testes foram gerados no local de colheita As amostras foram seleccionadas de forma a indicar uma distribui o de valores utilizando a directriz NCCLS EP9 A2 como alvo para cada analito A Tabela 8 apresenta estat sticas de correla o representativas Tabela 7 Correla o do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo com m todos comparativos Intervalo da Ensaio po E Declive T EPE N amostra PEA tivo Ensaio de Colesterol colesterol Bayer CHOL 0 997 1 079 17 1 4 5 174 115 342 I As Hitachi 917 Roche HDL 0 965 0 851 8 3 3 9 166 23 97 PE a instrumento Hitachi 917 Ensaio de Triglic ridos triglic ridos Bayer TRIG 0 999 0 983 8 2 4 4 172 38 487 ie dak dae te Hitachi 917 Pagina 10 de 13 Tabela 8 Recupera o calculada dos ensaios do Painel Lip dico da Abaxis Ensaio Concentra o Recupera o Desvio de desvio prevista calculada do mg dL do dispositivo Analisador Piccolo mg dL a partir dos dados de regress o linear acima mg dL Colesterol 200 199 1 0 5 CHOL 240 242 2 0 8 HDL 40 42 2 5 0 60 59 1 1 7 Triglic ridos 150 156 6 4 0 TRIG 200 205 5 255 Exactid o Certifica o da Rede de Laborat rios de M todo de Refer ncia para o Colesterol Cholesterol Reference Method Laboratory Network CRMLN A exactid o dos ensaios Piccolo para colesterol total e colesterol HDL foi estabelecida completando o processo de certif
14. ap uticas como potencialmente interferentes para os ensaios de colesterol total HDL e triglic ridos com base nas recomenda es de Young A interfer ncia significativa define se como um desvio no resultado gt 10 para uma amostra de intervalo normal Os pools de soro humano foram suplementados com concentra es conhecidas dos f rmacos ou qu micos e posteriormente analisados Tabela 2 Subst ncias terap uticas avaliadas Intervalo fisiol gico ou Concentra o mais elevada terap utico testada mg dL mg dL Acetaminofeno 2 10 100 Acetoacetato l tio 0 05 3 6 102 cido acetilsalic lico 1 2 50 cido asc rbico 3 Digoxina 0 8 1 5 5 Glutationa 30 Heparina l tio 4 4 800 U dL B hidroxibutirato 0 21 2 81 1 000 Ibuprofeno 0 5 4 2 50 Isoniazida 0 1 0 7 4 Lactato l tio 6 12 84 Lidoca na 0 5 0 6 1 Meticilina s dio 100 P gina 7 de 13 Fenito na cido salic lico Teofilina 1 2 1 2 3 50 20 Nenhum dos ensaios demonstrou uma interfer ncia significativa com as concentra es de subst ncias ex genas testadas Tabela 3 Concentra o de analitos nos pools de soro 2 n veis utilizados para estudos de interfer ncia de subst ncias ex genas Analito Colesterol CHOL HDL Triglic ridos TRIG 11 Pontos de corte Concentra o 163 e 197 mg dL 39 e 52 mg dL 125 e 183 mg dL O Programa Nacional de Educa o para o Colesterol estabeleceu pontos de corte consensuais
15. avalia o do risco de DCV No entanto algum do colesterol transportado em part culas de HDL que s o anti aterog nicas ou inversamente associadas ao risco de desenvolvimento de DCV Assim a quantifica o das principais lipoprote nas individuais transportadoras de colesterol a LDL e a HDL permite uma melhor avalia o do risco global Os triglic ridos o principal combust vel do organismo s o transportados para a corrente sangu nea em lipoprote nas grandes designadas por quilomicra CM As part culas de VLDL tamb m transportam triglic ridos sintetizados sobretudo no f gado a partir do excesso de cidos gordos Na circula o os triglic ridos s o hidrolisados e os respectivos cidos gordos s o transportados para c lulas perif ricas deixando part culas residuais precursoras da LDL Ap s uma noite de jejum os quilomicra s o normalmente eliminados da circula o Os n veis elevados de triglic ridos medidos numa amostra colhida em jejum indicam uma defici ncia de depura o ou sobreprodu o que pode aumentar o risco de desenvolvimento de DCV tornando a sua medi o til para a caracteriza o de doen as metab licas e do risco global O Instituto Nacional de Cora o Pulm es e Sangue dos EUA organizou o Programa Nacional de Educa o para o Colesterol National Cholesterol Education Program NCEP que reuniu um painel de especialistas para desenvolver directrizes cl nicas para P gina 1 de 13 a class
16. bra a bolsa de alum nio selada retire o disco e utilize de acordo com as instru es fornecidas no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Armazenamento Armazene os discos de reagente nas respectivas bolsas seladas a 2 8 C 36 46 F N o exponha os discos abertos ou fechados a luz solar directa ou a temperaturas superiores a 32 C 90 F Pode utilizar os discos de reagente at ao prazo de validade impresso no r tulo da caixa de cada bolsa O prazo de validade tamb m est codificado no c digo de barras impresso no anel de c digo de barras Ser apresentada uma mensagem de erro no visor do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress se os reagentes estiverem fora do prazo Indica es de instabilidade deteriora o do disco de reagente Uma bolsa rasgada ou que apresente qualquer tipo de danos pode permitir a entrada de humidade no disco n o utilizado e afectar adversamente o desempenho do reagente N o utilize um disco de uma bolsa danificada 6 Instrumento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress informa es completas sobre como utilizar o analisador 7 Colheita e prepara o das amostras As t cnicas de colheita das amostras s o descritas na sec o Colheita de amostras do Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Anali
17. devidamente para a c mara da amostra Devido ao fluxo n o uniforme poss vel que seja analisada uma quantidade de amostra inadequada e v rios resultados poder o encontrar se fora dos intervalos esperados A amostra pode ser reprocessada utilizando um novo disco de reagente Interfer ncia Foram testadas subst ncias como interferentes com os analitos Foram preparados pools de soro humano A concentra o a que cada subst ncia potencialmente interferente foi testada baseou se nos n veis de teste da directriz NCCLS EP7 A Ffeitos de subst ncias end genas e As subst ncias interferentes fisiol gicas hem lise icter cia e lip mia provocam altera es nas concentra es apresentadas de alguns analitos Os ndices de amostra encontram se impressos na parte inferior de cada cart o de resultado para informar o operador dos n veis de subst ncias interferentes presentes em cada amostra e O Sistema Qu mico de Sangue Piccolo ou o Sistema Qu mico Piccolo xpress suprime quaisquer resultados que sejam afectados por gt 10 de interfer ncia resultante de hem lise lip mia ou icter cia A indica o HEM LIP ou ICT respectivamente impressa no cart o de resultado em vez do resultado e Para obter mais informa es sobre os n veis m ximos de subst ncias end genas contacte o Servi o de Assist ncia T cnica da Abaxis Efeitos de subst ncias terap uticas Foram seleccionadas dezasseis subst ncias ter
18. ealizassem testes em 3 pain is lip dicos com amostras aleatorizadas e com oculta o As amostras consistiam em pools de soro preparados a tr s n veis para cada um dos tr s analitos colesterol total HDL colesterol e triglic ridos Os participantes n o receberam qualquer forma o sobre a utiliza o do teste No total foram inscritos 63 participantes de 3 locais representando uma popula o demogr fica educa o idade sexo etc variada As tabelas abaixo apresentam o resumo do desempenho para cada analito Colesterol total N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 63 63 63 M dia 144 2 mg dL 198 4 mg dL 245 1 mg dL CV 2 9 2 3 1 3 Intervalo observado 122 154 186 222 237 255 Percentagem de 98 4 100 100 resultados dentro do 62 63 63 63 63 63 intervalo 11 1 IC de 95 91 5 a 100 IC de 95 94 3 a 100 IC de 95 94 3 a 100 Esta percentagem baseia se no pressuposto de que n o se consegue distinguir devidamente entre valores normais e anormais quando os erros s o superiores a um quarto do intervalo normal Foi considerado o intervalo de 140 mg dL 220 mg dL P gina 11 de 13 Colesterol HDL do intervalo 15 0 IC de 95 94 3 a 100 IC de 95 94 3 a 100 N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 63 63 63 M dia 29 4 mg dL 44 4 mg dL 58 9 mg dL CV 3 3 3 2 2 0 Intervalo 28 32 42 48 57 62 observado Percentagem de 100 100 100 resultados
19. ecas espec ficas do teste descritas abaixo inclu da em cada disco uma esfera de reagente de branco de amostra seca composta por tamp o surfactantes excipientes e conservantes para utiliza o no c lculo de concentra es de HDL S o inclu das no disco esferas de branco dedicadas para calcular as concentra es de CHOL e TRIG Cada disco cont m ainda um diluente composto por um surfactante e conservantes Tabela 1 Reagentes Componente Quantidade Disco 4 aminoantipirina 6 7 ug Adenosina 5 trifosfato sal diss dico 9 2 ug Ascorbato oxidase 0 042 U Colesterol desidrogenase 0 080 U Colesterol esterase Genzyme N 0 27 U Colesterol esterase Genzyme P 0 0080 U Sulfato de dextrano 8 4 ug Diaforase 0 25 U N etil N 2 hidroxi 3 sulfopropil 3 metilanilina sal s dico dihidratado TOOS 79 ug Glicerol quinase 0 084 U Glicerol 3 fosfato desidrogenase 0 21 U Cloreto de iodonitrotetrazolio INT 8 4 ug Lipase 16 8 U Cloreto de magn sio hexahidratado 8 6 ug Sulfato de magn sio heptahidratado 197 ug Nicotinamida adenina dinucle tido NAD sal monoss dico 455 ug PEG colesterol esterase 0 013 U PEG colesterol oxidase 0 089 U Peroxidase 0 27 U Tamp es surfactantes excipientes e conservantes Advert ncias e precau es e Para utiliza o em diagn stico in vitro e O recipiente de diluente no disco de reagente automaticamente aberto ao fechar a gaveta do analisador N o poss vel reutilizar um disco com um recip
20. eno glicol para permitir uma especificidade adicional O mecanismo da reac o o seguinte CM LDL VLDL e HDL Sulfato de dextrano MgSO HDL Complexos insol veis Centrifuga o Complexos insol veis Complexos insol veis precipitados contra a parede da cuvete de reac o PEG CE Esteres de colesterol HDL HO gt _ Colesterol cidos gordos PEG CO Colesterol O _ __ Colest 4 en 3 ona HO Peroxidase H 0 TOOS 4 AAP Desenvolvimento de cor TOOS N etil N 2 hidroxi 3 sulfopropil 3 metilanilina sal s dico dihidratado 4 AAP 4 aminoantipirina P gina 2 de 13 Os agentes precipitantes sulfato de dextrano e sulfato de magn sio MgSO especificamente formam complexos insol veis com quilomicra CM VLDL e LDL em plasma ou soro Os complexos insol veis s o precipitados na parede da cuvete de reac o no interior do analisador A HDL restante hidrolisada por PEG CE de modo a criar colesterol e cidos gordos O colesterol reage com a PEG CO para produzir colest 4 en 3 ona e per xido H202 A reac o de peroxidase resulta na produ o de um produto de cor p rpura com um valor m ximo de absorv ncia de 550 nm e referenciado para absorv ncia a 630 nm A concentra o de colesterol HDL directamente proporcional ao valor m ximo de absorv ncia nesta reac o de ponto final Um branco de amostra
21. ica o da CRMLN para estes analitos no soro Uma parte fundamental da certifica o da CRMLN consiste na an lise de regress o linear dos ensaios Piccolo em compara o com os m todos de refer ncia A exactid o do Ensaio de Colesterol Total em compara o com o m todo de refer ncia de Abell Kendall indicada pelo coeficiente de correla o R de 0 996 o declive de 0 972 e a intercep o de 7 2 mg dL Determinou se um CV inter ensaio n 10 para o Ensaio de Colesterol Total Piccolo de 0 8 Para o Ensaio de HDL Piccolo em compara o com o m todo de refer ncia de HDL precipita o seguida pelo ensaio de colesterol de Abell Kendall o coeficiente de correla o R foi de 0 986 o declive de 0 968 e a intercep o de 2 1 mg dL Determinou se um CV inter ensaio n 20 para o Ensaio de HDL Piccolo de 1 9 O desempenho anal tico observado cumpriu os requisitos da certifica o da CRMLN para colesterol total e HDL para soro A certifica o da CRMLN para ensaios de triglic ridos ainda n o est dispon vel nos Estados Unidos No entanto o estudo de correla o para triglic ridos descrito acima foi realizado num laborat rio padronizado para triglic ridos atrav s do Programa de Padroniza o de L pidos CDC NHLBI Resultados do estudo com utilizadores sem forma o Foi realizado um estudo com utilizadores sem forma o no qual os participantes receberam apenas as instru es do teste e lhes foi solicitado que r
22. iente de diluente aberto Certifique se de que a amostra ou o controlo foi colocada o no disco antes de fechar a gaveta e Os discos de reagente usados cont m fluidos corporais humanos Siga as boas pr ticas de seguran a laboratorial quando go 12 ae x manusear e eliminar discos usados Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress as instru es de limpeza de derrames biologicamente perigosos e Os discos de reagente s o de pl stico e podem rachar ou partir se se ca rem Nunca utilize um disco que tenha ca do uma vez que pode espalhar materiais biologicamente perigosos no interior do analisador e As esferas de reagente podem conter cidos ou subst ncias c usticas O operador n o entra em contacto com as esferas de reagente se os procedimentos recomendados forem seguidos Na eventualidade de manuseamento das esferas por exemplo P gina 4 de 13 durante a limpeza depois de um disco cair e se partir evite a ingest o o contacto com a pele ou a inala o das esferas de reagente Instru es para o manuseamento de reagentes poss vel utilizar os discos de reagente directamente a partir do frigor fico sem aquecer Um disco que n o seja utilizado dentro de 20 minutos ap s a abertura da bolsa dever ser eliminado N o permita que os discos selados em bolsas de alum nio permane am temperatura ambiente durante mais de 48 horas antes da utiliza o A
23. ifica o e o tratamento do colesterol elevado As recomenda es mais recentes as directrizes do Terceiro Painel de Tratamento de Adultos 2 servem de base para as decis es de tratamento sobretudo nos n veis de LDL calculados como parte do painel lip dico ap s a medi o do colesterol total da HDL e dos triglic ridos Os pontos de corte de LDL de 100 130 160 e 190 mg dL definem as categorias de risco ideal quase ideal pr ximo do limite m ximo elevado e muito elevado Um valor de HDL abaixo de 40 mg dL baixo considerado como um factor de risco pelo ATPIII modificando o objectivo de tratamento da LDL Um valor de HDL acima de 60 mg dL definido como elevado considerado desej vel e um factor de risco negativo subtraindo se ao n mero total de factores de risco na selec o do objectivo de tratamento da LDL apropriado Para os triglic ridos os pontos de corte de 150 200 e 500 mg dL definem os n veis normal pr ximo do limite m ximo elevado e muito elevado Al m disso o colesterol n o HDL timo calculado deve ser lt 130 mg dl com risco de doen a cardiovascular aumentado associado com concentra es de 130 a 189 mg dl e risco elevado de doen a cardiovascular DCV associado a valores gt 189 mg dl Os ensaios de Colesterol Total e HDL Piccolo cumpriram os requisitos para certifica o de exactid o e precis o da Rede de Laborat rios de M todo de Refer ncia para o Colesterol Cholesterol Reference Method Laboratory
24. istry devices approved guideline NCCLS Document EP5 A Wayne PA NCCLS 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Quality management for unit use testing proposed guideline NCCLS Document EP18 P Wayne PA NCCLS 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Method comparison and bias estimation using patient samples approved guideline second edition NCCLS Document EP9 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Pagina 13 de 13
25. ntir que nenhuma reac o exterior interfere com os c lculos dos n veis de TRIG Os resultados fornecem uma medida dos triglic ridos totais sem um branco de glicerol LDL calculada O Analisador Piccolo ou o Analisador Piccolo xpress calcula automaticamente a concentra o de LDL em cada amostra utilizando os valores directamente determinados para colesterol total HDL e triglic ridos e a equa o de Friedewald padr o Esta equa o n o v lida para concentra es de triglic ridos superiores a 400 mg dL doentes que n o estejam em jejum e doentes com hiperpoprotein mia Tipo II disbetalipoprotein mia Um valor de LDL n o inclu do no relat rio para amostras com concentra es de triglic ridos superiores a 400 mg dL ou se algum dos valores dos analitos medidos directamente n o estiver 66199 dispon vel No cart o impresso o valor calculado para LDL seguido de um c para indicar que calculado VLDL calculada O Analisador Piccolo ou o Analisador Piccolo xpress calcula automaticamente a concentra o de VLDL em cada amostra utilizando a equa o de triglic ridos 5 padr o se as unidades estiverem em mg dL Esta equa o n o v lida para concentra es de triglic ridos superiores a 400 mg dL doentes que n o estejam em jejum e doentes com hiperlipoprotein mia Tipo III disbetalipoprotein mia gt Obviamente nenhum valor de VLDL calculado se n o estiver dispon vel um valor de
26. o ou Piccolo xpress uma descri o detalhada sobre o processamento registo interpreta o e representa o gr fica dos resultados de controlo Laborat rios abrangidos pela dispensa A Abaxis recomenda a realiza o de testes de controlo conforme os seguintes par metros e pelo menos a cada 30 dias e sempre que as condi es laboratoriais tiverem sofrido altera es significativas por exemplo se o Analisador Piccolo tiver sido deslocado para uma nova localiza o ou em caso de altera es no controlo da temperatura e nos casos em que seja indicada a forma o ou renova o da forma o de pessoal e com cada novo lote testes com dispensa dos crit rios CLIA em laborat rios com o estado de dispensa Laborat rios n o abrangidos pela dispensa A Abaxis recomenda que os testes de controlo sigam as directrizes federais estatais e locais 9 Resultados O Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress testa calcula e imprime automaticamente as concentra es do analito na amostra Para os resultados que sejam calculados e n o determinados directamente a LDL VLDL e TC H os resultados s o seguidos de um c para indicar que s o calculados Os detalhes dos c lculos de reac o de ponto final e cin tica encontram se no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress A interpreta o dos resultados descrita no Manual do Operador Os
27. otal e HDL TC H calculada para conveni ncia dos utilizadores Uma rela o TC H lt 5 normalmente considerada desej vel para os indiv duos do sexo masculino Uma vez que as mulheres normalmente apresentam valores de HDL mais elevados do que os homens h quem recomende um ponto de corte de 4 5 para indiv duos do sexo feminino Esta rela o foi advogada por alguns especialistas como um meio simples e pr tico de expressar o risco de DCV num nico n mero incorporando o colesterol total como marcador de lipoprote nas aterog nicas no numerador e o colesterol HDL anti aterog nico no denominador Os utilizadores devem ter em considera o que mesmo que a rela o TC H seja um forte indicador de risco de DCV conforme demonstrado por v rios estudos de epidemiologia o NCEP n o recomenda a sua utiliza o no tratamento de doentes As directrizes cl nicas do NCEP baseiam as decis es de tratamento nas lipoprote nas individuais Tabela 5 e consideram a utiliza o da rela o como um poss vel desvio da prioridade as medi es de lipoprote nas individuais Colesterol n o HDL nHDLc O Relat rio de 2002 NCEP ATP III informou a utilidade cl nica do nHDLc calculado Os estudos demonstraram que o colesterol n o HDL apresenta uma forte correla o com a mortalidade coron ria quando comparado com o colesterol LDL Al m do mais o colesterol n o HDL est altamente correlacionado com o total da apolipoprote na B apo B a
28. para os analitos de l pidos lipoprote na da seguinte forma Tabela 4 Valores de decis o m dica Colesterol total CHOL HDL Triglic ridos TRIG LDL VLDL CALC nHDLc CALC Rela o colesterol total HDL Interpreta o Desej vel Pr ximo do limite m ximo Elevado HDL baixa Factor de risco HDL elevada Factor de risco negativo desej vel Normal Pr ximo do limite m ximo Elevado Muito elevado Ideal Quase ideal Pr ximo do limite m ximo Elevado Muito elevado Normal Elevado timo Risco aumentado Alto risco Baixo risco Risco elevado Pontos de corte mg dL lt 200 200 239 gt 240 lt 40 gt 60 lt 150 150 199 200 499 gt 500 lt 100 100 129 130 159 160 189 gt 190 lt 30 gt 30 lt 130 130 189 gt 189 Homem lt 5 gt 5 Pagina 8 de 13 Pontos de corte mmol L lt 5 17 5 17 6 18 6 20 lt 1 03 gt 1 55 lt 1 70 1 70 2 25 2 26 5 64 gt 5 65 lt 2 58 2 58 3 33 3 36 4 11 4 13 4 88 gt 4 91 lt 3 37 3 37 4 90 gt 4 90 Mulher lt 4 5 gt 4 5 O Analisador Piccolo ou Piccolo xpress calcula a concentra o de LDL utilizando a equa o de Friedewald Para mais informa es consulte NCEP ATP III Report 2002 Sec o II Rationale for Intervention 3 Other Lipid Risk Factors P gina II 8 Rela o colesterol total HDL TC H A rela o entre colesterol t
29. rol dehydrogenase Clin Chem 1999 45 2158 2163 Warnick G Nauck M Rifai N Evolution of methods for measurement of high density lipoprotein cholesterol from ultracentrifugation to homogeneous assays Clin Chem 2001 47 1579 96 Klotzsch SG McNamara JR Triglyceride measurements a review of methods and interferences Clin Chem 1990 36 1605 1613 Cole TG Klotzsch SG McNamara JR Measurement of Triglyceride Concentration In Handbook of Lipoprotein Testing on ed Rifai N Warnick GR Dominiczak MH eds Washington DC AACC Press 2000 207 219 Friedewald WT Levy RI Fredrickson DS Estimation of the concentration of low density lipoprotein cholesterol in plasma without use of the preparative ultracentrifuge Clin Chem 1972 18 499 502 Bachorik PS Measurement of low density lipoprotein cholesterol In Handbook of Lipoprotein Testing 2 ed Rifai N Warnick GR Dominiczak MH eds Washington DC AACC Press 2000 245 263 Schembri CT et al Centrifugation and capillarity integrated into a multiple analyte whole blood analyser J Automatic Chem 1995 17 99 104 journal s name changed in 2000 to J Automated Methods amp Management in Chemistry Pagina 12 de 13 13 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Bibliografia continua o Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Clinical laboratory waste management approved guideline
30. sador Qu mico Piccolo xpress e De acordo como ATP II devem ser utilizadas amostras colhidas em jejum oito a 12 horas para determinar CHOL HDL TRIG e LDL Por isso recomenda se vivamente que sejam utilizadas amostras em jejum com o Disco do Painel Lip dico Se o doente n o estiver em jejum os valores de TRIG e LDL calculados n o s o v lidos e Para as amostras de sangue total ou de plasma utilize apenas tubos de colheita de amostras evacuados com ou sem separadores de gel com heparina de l tio tampa verde Para as amostras de soro utilize tubos de colheita de amostras evacuados sem aditivos tampa vermelha ou tubos para separa o de soro tampa vermelha ou vermelha preta e O volume m nimo da amostra necess rio 100 uL de sangue total heparinizado plasma heparinizado soro ou material de controlo A c mara da amostra do disco de reagente pode conter at 120 uL de amostra e As amostras de sangue total obtidas por pun o venosa devem apresentar se homog neas antes de serem transferidas para o disco de reagente Inverta suavemente o tubo de colheita v rias vezes imediatamente antes de transferir a amostra N o agite o tubo de colheita a agita o pode provocar hem lise 5 E 4 13 14 e As amostras de sangue total por pun o venosa devem ser processadas no prazo de 60 minutos ap s a colheita A amostra pode ser separada em plasma ou soro e armazenada em tubos de amostra com tampa a 2 8 C 36 46 F caso
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