Methotrexate Assay
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1. Colors Black2. Metotrexato nas concentra es farmacol gicas ou fisiol gicas m ximas quando testados na presen a de 1 pmol l de metotrexato Tabela 3 Compostos que n o interferem Compostos estruturalmente n o relacionados Ciclofosfamida Doxorubicina Adriamicina 5 Fluorouracilo Vinblastina Vincristina Compostos estruturalmente relacionados cido di hidrof lico cido f lico 7 Hidroximetotrexato Leucovorina factor citrovorum Metopterina Trimetoprim Para obter informa es suplementares contactar a Syva Company Subst ncias End genas N o foi registada qualquer interfer ncia clinicamente significativa nas amostras em que se adicionaram 800 mg dl de hemoglobina 1 000 mg dl de triglic ridos ou 30 mg dl de Bilirrubina para simular amostras hemol ticas lip micas ou ict ricas Precis o Os valores de precis o e exactid o apresentados em baixo foram obtidos mediante um procedimento t pico de teste N o pretendem demonstrar o desempenho em todos os laborat rios Em investiga es cl nicas a precis o intra ensaio foi determinada utilizando 20 an lises replicadas do calibrador de 1 pmol l a precis o entre ensaios foi determinada atrav s do ensaio de um controlo de metotrexato 0 77 pmol l 10 vezes durante um per odo de duas semanas Seguem se os resultados Tabela 4 Precis o N mero de M dia Coeficiente Laborat rio r plicas mol l de varia o Intra ensaio 1 20 1
3. adicionais para levar a amostra at ao intervalo de quantifica o a concentra o quantificada a partir da curva padr o multiplicada por 6 ou 216 para contar com as tr s dilui es adicionais de 1 6 Configura o 1 Preparar amostras e reagentes Preparar todos os reagentes de acordo com as indica es na Sec o 4 Permitir que todos os reagentes amostras e materiais atinjam uma temperatura ambiente de 20 25 C Agitar os conte dos de todos os recipientes para misturar totalmente os reagentes imediatamente antes da utiliza o 2 Preparar os instrumentos Instalar o processador de dados espectrofot metro e pipetador diluidor de acordo com a Sec o 5 Instrumentos e os manuais do operador Protocolo prim rio Nota Para evitar a contamina o das amostras e dos reagentes limpar a ponta do pipetador diluidor da amostra com um papel absorvente antes e ap s a distribui o de cada solu o Limpar cuidadosamente as pipetas para evitar a remo o de l quido atrav s da ac o de absor o do papel Durante a distribui o colocar cuidadosamente a ponta imediatamente acima da superf cie do l quido e apontar em direc o ao fundo para evitar derrames Antes da distribui o n o manter as solu es na tubagem durante um per odo superior a 5 segundos Para evitar a contamina o cruzada das amostras e controlos ensaiar cada amostra individualmente e completar a totalidade das dilui es e passos do
4. O processador de dados da S rie LP 6000 e CP 5000 PLUS calculam automaticamente a curva padr o e determinam a partir desta a concentra o de droga em cada amostra em unidades de pmol l Os resultados obtidos com amostras dilu das em s rie devem ser ajustados manualmente mediante a multiplica o da concentra o obtida a partir da curva padr o pelo factor de regula o da Tabela 2 Para garantir a quantifica o adequada os utilizadores dos processadores de dados da S rie LP 6000 e CP 5000 PLUS devem introduzir o n mero do modelo Este ensaio utiliza o Modelo Matem tico N 2 9 Interpreta o dos resultados A concentra o de metrotexato no soro ou no plasma depende da hora da administra o da ltima dose modo de administra o terap utica medicamentosa concomitante condi o da amostra hora de recolha da amostra e varia es individuais no que diz respeito absor o distribui o biotransforma o e excre o Estes par metros devem ser considerados durante a interpreta o dos resultados 10 Limita es e A quantifica o de amostras com concentra es de metotrexato inferiores a 0 3 pmol l 3 x 107 mol l n o recomendada consultar a Sec o 7 Procedimento A aminopterina um agente antineopl sico que normalmente n o administrado concomitantemente com metotrexato e o cido 4 amino 4 desoxi N metilpter ico APA um metabolito menor do metotrexato apresentam uma reac o cruzada
5. as indica es dos resultados do controlo consultar Controlo da Qualidade em baixo A sequ ncia de calibra o 0 1 2 3 4 5 Se for utilizado um novo frasco de tamp o validar o sistema atrav s da execu o dos controlos Controlo da Qualidade Validar a curva padr o atrav s do ensaio dos controlos Garantir que os resultados do controlo se situam dentro dos limites aceit veis definidos pelo seu pr prio laborat rio Uma vez validada a curva de controlo processar as amostras do doente e Consultar o s manual is de opera o do instrumento para obter instru es de manuten o Manuten o di ria No final do dia de trabalho limpar a c lula de fluxo do espectrofot metro com solu es de limpeza e enxaguar a mesma exaustivamente com gua destilada ou desionizada Quando n o est a ser utilizada a c lula de fluxo do espectrofot metro e as linhas do pipetador diluidor devem permanecer preenchidas com gua destilada ou desionizada Se a tubagem de amostras do pipetador diluidor exibir qualquer crescimento bacteriano ou forma es proteicas substituir o mesmo ou limpar com uma solu o cida ou alcalina dilu da e enxaguar exaustivamente com gua destilada ou desionizada Reduzir a intensidade da l mpada ajustando o visor com o bot o de controlo zero de modo a apresentar uma leitura de 2 500 3 000 no modo de concentra o CON ou 1 500 1 800 no modo de absorv ncia ABS 8 Avalia o dos resultados
6. da proveta e factores de regula o Intervalo inicial da amostra pmol l 0 3 2 1 8 12 10 8 72 65 430 390 2600 Protocolo leva a amostra at Uma Duas Tr s Quatro ao intervalo de Protocolo dilui o dilui es dilui es dilui es quantifica o prim rio adicional adicionais adicionais adicionais Amostra dilu da AD 000 0000 00000 Mistura da reac o DO BOQ AAO AQIQAH Duplicado Factor de regula o N o 6 36 216 1296 necess rio Nota Esta tabela mostra a regula o das provetas no rack de trabalho do ensaio correspondente a cada passo de dilui o As provetas pode ser dispostas para ajudar a monitorizar o n mero de dilui es efectuadas Por exemplo se uma amostra necessita de tr s dilui es adicionais para a levar ao intervalo de quantifica o a configura o de provetas resultante pode constituir uma nota importante para utilizar um factor de regula o de 216 para calcular os resultados Os c rculos representando provetas est o marcados por ordem alfab tica para aux lio das explica es detalhadas do protocolo A fila de provetas ao fundo dever ser reservada para dilui es em s rie a fila do meio para ensaio de pontos isolados e a fila da frente para o ensaio de pontos em duplicado Utilizar o factor de regula o para calcular a concentra o real de metotrexato de uma amostra quando s o utilizadas dilui es adicionais Se s o necess rias tr s dilui es
7. n o cont m mais do que 0 0025 p v de merc rio sob a forma de timerosal timerosal 0 005 p v Manusear e eliminar de forma adequada Prepara o e armazenamento dos componentes do ensaio Para reconstituir os Reagentes A ou B ou os calibradores remover o selo met lico e marcar a tampa de borracha para a identificar com o frasco original Retirar a tampa e adicionar a quantidade de gua destilada ou desionizada indicada na Tabela 1 Substituir a tampa e agitar suavemente o frasco para dissolver o conte do Ap s a reconstitui o permitir que os reagentes e calibradores se equilibrem a uma temperatura ambiente de 20 25 C durante o per odo de tempo estabelecido na Tabela 1 Alternativamente reconstituir os reagentes e calibradores no dia anterior a serem utilizados e coloc los em frigor fico de um dia para o outro a uma temperatura de 2 8 C Ap s o per odo de equil brio armazenar sempre os reagentes e calibradores em frigor fico a 2 8 C quando n o estiverem a ser utilizados e permitir que atinjam a temperatura ambiente antes da sua utiliza o Ap s a reconstitui o armazen los em posi o vertical N o congelar ou expor a temperaturas acima de 32 C Para preparar a solu o tamp o transferir todo o conte do do frasco de tamp o concentrado para um recipiente limpo graduado pl stico ou vidro Enxaguar v rias vezes o frasco de concentrado com gua destilada ou desionizada para garantir a transfer ncia completa
8. 32 EEC do Concelho da UE sobre r tulos EINECS 258 921 0 EINECS 247 852 1 EINECS 200 210 4 Para obter informa es adicionais sobre sa de e seguran a consultar a ficha de material de seguran a Material Safety Data Sheet MSDS dispon vel no site da Dade Behring Inc na Internet www dadebehring com ou contacte o representante local 14 Bibliografia 1 Crom WR Taylor RH Pratt CB Methotrexate Therapeutic use and serum concentration monitoring in Taylor WJ and Finn AL eds Individualizing Drug Therapy Practical Applications of Drug Monitoring New York Gross Townsend Frank Inc 1981 Vol 1 pp 149 173 2 Oellerich M Enzyme immunoassays in clinical chemistry Present status and trends J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 197 208 3 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories JY Richmond RW Mckinney eds Atlanta GA U S Dept of Health and Human Services Public Health Service Centers for Disease Control and Prevention Bethesda MD National Institutes of Health 1993 4 Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Federal Register Part II 0800 170417 Department of Labor Occupational Safety and Health Administration OSHA 29 CFR Part SAC Servi o de Atendimento ao Cliente 1910 1030 Friday December 6 1991 Feb aO acento com 5 Syva Pipetter Diluter Model 1500 Operator s Manual Cupertino CA Syva Company Importado e distribu do por DADE BEHRING LIDA Rua Geraldo Flausino Gom
9. 5 3 2 20 1 3 2 3 20 1 6 8 Entre ensaios 1 10 0 82 4 4 2 10 0 78 3 8 Exactid o Analisaram amostras de doentes que receberam metotrexato atrav s do Ensaio Emit Metotrexato e por pelo menos um de dois m todos de refer ncia que por radioimunoensaio RIA quer por uma t cnica enzim tica baseada na inibi o da diidrofolato reductase Os resultados foram comparados 6L184UL 8SL Tabela 5 An lise comparativa Notas Lab 1 Lab 2 Lab 3 RIA RIA Enzim tica Declive 0 96 0 98 0 97 Intersec o pmol l 0 04 0 07 0 21 M dia umol Emit 3 5 6 4 5 M todo de compara o 3 3 6 8 4 5 Coeficiente de correla o 0 991 0 996 0 997 N mero de amostras 104 98 100 13 Risco e seguran a T xico Cont m azida de s dio timerosal D glicose 6 fosfato sal monoss dico R20 21 Nocivo por inala o e em contacto com a pele R25 T xico por ingest o R32 Em contacto com cidos liberta gases muito t xicos R33 Perigo de efeitos cumulativos R43 Pode causar sensibiliza o em contacto com a pele Nota Esta classifica o refere se ao produto liofilizado ap s a reconstitui o os ingredientes perigosos ser o dilu dos e estas precau es poder o n o ser aplic veis 836 37 Usar vestu rio de protec o e luvas adequadas 45 Em caso de acidente ou de indisposi o consultar imediatamente o m dico se poss vel mostrar lhe o r tulo Preparado em conformidade com a Directiva 92
10. DADE BEHRING Syva Emit Methotrexate Assay Informa es actualizadas e gt Consultar as sec es 8 13 15 e o painel final ne 6L184UL 8SL Ensaio do Metotrexato 1 Fima que se destina O Ensaio Emit Metotrexato um imunoensaio enzim tico homog neo destinado a ser utilizado na an lise quantitativa de metotrexato no soro ou plasma humano 2 Resumo e explica o do teste A utiliza o de leucovorina de apoio permite a administra o relativamente segura de doses muito elevadas de metotrexato para obter uma actividade anti neopl sica m xima Como o grau de citotoxicidade do metotrexato est relacionado com a concentra o da droga e com a dura o da exposi o as doses de apoio de leucovorina devem ser suficientemente altas e devem durar o tempo suficiente para evitar a toxicidade do metotrexato A monitoriza o das concentra es de metotrexato e a sua taxa de decl nio no soro durante a terap utica com doses elevadas essencial para a concep o de doses de apoio adequadas de leucovorina por diversas raz es e As concentra es extracelulares de metotrexato podem inibir competitivamente o transporte intracelular de leucovorina reduzindo deste modo a efic cia da leucovorina como agente de apoio Quando a depura o do metotrexato atrasada devido a doen a renal ascite efus es pleurais obstru o gastrointestinal pH urin rio ou outras drogas as concentra es t xicas podem persis
11. cos de 1 ml Materiais necess rios mas n o fornecidos Controlos de metotrexato Pipetas volum tricas de Classe A gua destilada ou desionizada Solu es A e B de limpeza da c lula de fluxo Syva n s de cat logo 3A058 e 3A068 Flo Kleen Gilford n de cat logo 6A942 Papel absorvente Recipiente graduado exactid o de 1 de volume Provetas descart veis com fundos c nicos Croan de 2 ml recomendadas n de cat logo 3A031 Suporte de trabalho para provetas descart veis Suporte de Trabalho para Emit de Soro n de cat logo 6A022 O procedimento de execu o manual do Ensaio Emit Metotrexato no sistema Syva Lab descrito em baixo Procedimento O Ensaio Emit Metotrexato pode ser utilizado para analisar amostras contendo 0 3 2600 pmol l de metotrexato a quantifica o de concentra es inferiores a 0 3 umol l n o recomendada As amostras de doentes e calibradores contendo 0 3 2 pmol l de metotrexato s o ensaiadas de acordo com o protocolo prim rio As amostras que contiverem mais do que 2 umol l de metotrexato pode ser levadas ao intervalo da curva padr o utilizando um pipetador diluidor semi autom tico para efectuar uma dilui o em s rie de 1 6 com solu o tamp o consultar o protocolo suplementar A Tabela 2 mostra as configura es da proveta e os factores de regula o necess rios levar amostras com concentra es elevadas para o intervalo do ensaio Tabela 2 Configura es
12. de onda 340 nm Modo Concentra o Cal da Conc Factor de amplifica o de 2 667 Temperatura 30 C Tempo de amostragem 3 5 ajustar defini es para permitir a aspira o completa da mistura da reac o V cuo 5 8 in Hg 125 200 mm Hg Processador de dados Processador Syva Lab da S rie 6000 LP 6000 LP 6500 Atraso 15 segundos Tempo de leitura 30 segundos ou Processador Cl nico Limite de toler ncia 6 unidades AA Syva CP 5000 PLUS Programa Consultar o manual do operador apropriado 6 Colheita e prepara o das amostras e Cada ensaio necessita de 50 ul de soro ou plasma N o permitida a utiliza o de sangue total Os anticoagulantes aceit veis s o a Heparina EDTA e oxalato e Os factores farmacocin ticos influenciam a hora correcta de recolha da amostra ap s a ltima administra o da droga Estes factores incluem a forma farmac utica o modo de administra o terap utica medicamentosa concomitante e varia es biol gicas que afectam a disposi o da droga e Armazenar o soro ou plasma em frigor fico a uma temperatura de 2 8 C e protegido da luz o metotrexato em solu o sens vel luz Para transporte manter a amostra a uma temperatura de 2 8 C 7 Procedimento Materiais fornecidos O kit de Ensaio Emit Metotrexato quando preparado cont m Reagente A 3 ml Reagente B 3 ml Solu o tamp o para o ensaio de drogas 200 ml Calibradores seis fras
13. dimentos deve ser utilizado a Se a absorv ncia AA obtida a partir da proveta B corresponde a uma concentra o de droga entre 0 3 e 2 pmol l ensaiar um ponto em duplicado na proveta C 6L184UL 8SL b Se a absorv ncia AA obtida a partir da proveta B for superior velocidade correspondente ao calibrador de 2 pmol l diluir e efectuar novamente o ensaio de acordo com o protocolo suplementar que se segue 8 Amostras restantes Repetir os Passos 1 a 7 para cada amostra a ensaiar Protocolo suplementar para dilui es adicionais 1 Configurar as provetas Instalar tr s provetas adicionais no rack de trabalho correspondentes s posi es D E e F mostradas na Tabela 2 2 Dilui o adicional Utilizando o pipetador diluidor aspirar da proveta A 50 pl da amostra dilu da e dispensar este volume mais 250 ul de solu o tamp o na proveta D 3 Ensaiar a amostra dilu da Seguir os passos 3 7 do protocolo prim rio ensaiando o conte do da proveta E Continuar a diluir e a ensaiar at ser obtida uma velocidade que se enquadre no intervalo de quantifica o ou at terem sido ensaiadas quatro dilui es adicionais 4 Ensaiar um ponto em duplicado Ensaiar um ponto em duplicado quando uma dilui o obtiver uma absorv ncia AA correspondente a uma concentra o de droga entre 0 3 e 2 pmol l Calibra o Preparar uma nova curva padr o sempre que for utilizado um novo conjunto de reagentes e recalibrar de acordo com
14. do material Diluir com exactid o com gua destilada ou desionizada at perfazer 200 ml Inverter v rias vezes para misturar correctamente Tabela 1 Prepara o armazenamento e estabilidade dos componentes do ensaio Temp de Tempo M nimo Armazena Reconst de Reconst Estabilidade Componente mento Volume 20 25 C nao aberto Preparado Reagentes A e B 2 8 C 3 ml Th Prazo val 12 sem Calibradores 2 8 C 1 ml 1h Prazo val 12 sem Tamp o N o aberto Diluir at Nenhum Prazo val 12 sem 2 8 C 200 ml Dilu do 20 25 C A estabilidade depende da manipula o dos componentes do ensaio conforme indicado 5 Instrumentos Os tr s componentes principais do instrumento s o um manipulador da amostra um espectrofot metro e um processador de dados A Syva Company levou a cabo investiga es e estudos internos utilizando os instrumentos apresentados nesta sec o Contactar o Centro de Assist ncia T cnica ou o representante local da Syva Company para obter informa es acerca de outros instrumentos aceit veis O utilizador deve confirmar a equival ncia das caracter sticas de desempenho de quaisquer instrumentos alternativos antes de os aplicar para uso cl nico Instrumentos Defini es Manipulador da Amostra Pipetador Diluidor Syva Modelo 1500 Marcas de volume da seringa Amostra e reagentes 50 50 pl Tamp o 25 250 pl Espectrofot metro Syva S IIl ou Gilford Stasar III Comprimento
15. ensaio necess rios antes de prosseguir para a amostra seguinte 1 Configurar as provetas Instalar tr s provetas descart veis de 2 ml no rack de trabalho correspondente s posi es A B e C mostradas na Tabela 2 2 Diluir a amostra Utilizando o pipetador diluidor aspirar 50 il de calibrador controlo ou amostra e dispensar este volume mais 250 ul de solu o tamp o na proveta A 3 Voltar a diluir a amostra Utilizando o pipetador diluidor aspirar 50 pl da amostra dilu da e dispensar este volume mais 250 uI de solu o tamp o na proveta B 4 Adicionar Reagente A Utilizando o pipetador diluidor aspirar 50 pl de Reagente A e dispensar este volume mais 250 pl de solu o tamp o na proveta B 5 Adicionar Reagente B Utilizando o pipetador diluidor aspirar 50 pl de Reagente B e dispensar este volume mais 250 pl de solu o tamp o na proveta B 6 Aspirar para dentro da C lula de Fluxo Imediatamente ap s a adi o do reagente B aspirar o conte do da proveta para o interior da c lula de fluxo do espectrofot metro Esta opera o activa automaticamente a impressora para temporizar e registar a leitura Ap s um intervalo de 15 segundos o espectrofot metro efectua a leitura da absorv ncia de cada amostra A altera o na absorv ncia AA durante o per odo de medi o de 30 segundos ent o utilizada para calcular os resultados 7 Curva padr o Utilizar a curva padr o para determinar qual dos seguintes proce
16. es 61 1 Andar gt 15 Chave dos s mbolos Brooklin S o Paulo SP CEP 04575 060 Fone 11 3371 3200 Fax 11 3371 3201 CNPJ 00 897 408 0001 08 Resp T c Nanci A Trindade CRF SP 7 297 Fabricado por Representante Autorizado Para obter assist ncia t cnica contactar a Syva Company 1 800 227 8994 nos EUA ui is Fe py 1 800 264 0083 no Canada Dispositivo M dico para Diagn stico In Vitro Fora dos EUA e Canad contactar o representante local da Syva Company C digo do Lote Aviso A adultera o dos reagentes a utiliza o de instrumentos inadequados ou outra falha no cumprimento das instru es definidas neste r tulo podem afectar as caracter sticas do a desempenho e as indica es do r tulo expl citas ou impl citas EXP A data em Utilizar antes de encontra se no YYYY MM DD formato ano m s dia AAAA MM DD gt Syva e Emit s o marcas comerciais registadas da Syva Company nos EUA e noutros BC paises voll Limita o da Temperatura O 1996 Syva Company Dade Behring Limited C Marca GE Regus House Atterbury Milton Keynes MK10 9RG REF N mero de Cat logo United Kingdom C L Consulte as Instru es de Utiliza o falls q Syva Company Printed in USA pi l Dade Behring Inc Revisto Julho 2002 Cupertino CA 95014 6L184UL 8SL 09 03 02 Part No 6L184UL 8SL Portuguese Layout 8 1 2 x 11 e Final size N A Folded to N A e Doc 204 03 22 02 if applicable
17. pois de reconstitu dos cont m as seguintes concentra es expl citas de metotrexato Calibradores 0 0 2 0 5 1 15 2 Metotrexato umol l 0 0 2 0 5 1 1 5 2 Metotrexato mol l 0 2x 107 5x 107 1x 10 1 5x 10 2x 106 Para utiliza o em diagn stico in vitro Precau es e O material de origem do sangue humano utilizado para preparar este produto foi testado tendo se verificado n o ser reactivo para os v rus de imunodefici ncia adquirida tipo 1 HIV 1 e tipo 2 HIV 2 n o reactivo para o antig nio de superf cie da hepatite B HBsAg e n o reactivo para os anticorpos do v rus da hepatite C anti HCV quando testados com reagentes licenciados Devido ao facto de nenhum m todo de teste conhecido poder oferecer uma garantia completa de que os produtos derivados de sangue humano se encontram isentos de agentes patog nicos manusear todos os materiais de origem humana como se fossem potencialmente infecciosos Em caso de exposi o a solu es contendo materiais de origem humana o utilizador dever seguir as recomenda es da U S Occupational Safety and Health Administration e Os reagentes os calibradores e o tamp o cont m azida de s dio A azida de s dio pode reagir com as canaliza es de chumbo ou cobre formando azidas met licas altamente explosivas Durante a elimina o de res duos enxaguar com um grande volume de gua para prevenir a forma o de azidas e Ap s a reconstitui o inicial cada kit
18. que medida espectrofotometricamente A G6PDH s rica end gena n o interfere pois a coenzima funciona apenas com a enzima bacteriana Leuconostoc mesenteroides utilizada no ensaio 4 Reagentes REF Descri o do produto 6L119UL Ensaio Emit Metotrexato 50 ensaios Reagente A Anticorpo Substrato 3 ml anticorpos de ovelha reactivos ao metotrexato t glicose 6 fosfato dinucle tido de adenina nicotinamida tamp o Tris agentes espessantes estabilizadores e azida de s dio 0 05 Reagente B Enzima 3 ml metotrexato marcado com glicose 6 fosfato desidrogenase bacteriana t Tamp o Tris agentes espessantes estabilizadores e azida de s dio 0 05 Tamp o concentrado Emit para o ensaio de drogas 13 3 ml quando dilu do cont m Tamp o Tris surfactante e azida de s dio 0 05 Calibradores Emit Metotrexato seis frascos de 0 0 2 0 5 1 1 5 2 1 ml metotrexato soro humano e azida de s dio 0 1 consultar em baixo as concentra es Quantidade Volume Os reagentes A e Be os calibradores s o enviados sob a forma liofilizada O volume indicado o volume necess rio para a reconstitui o tA titula o do anticorpo e a actividade do conjugado enzim tico podem variar de lote para lote Nota Os reagentes A e B e os calibradores s o fornecidos como um conjunto correspondente N o devem ser trocados com componentes de kits com n meros de lote diferentes Os Calibradores Emit de Metotrexato de
19. significativa com este ensaio 11 Valores esperados O Ensaio Emit Metotrexato quantifica de forma precisa as concentra es de metotrexato no soro ou plasma humanos contendo 0 3 2600 umol 3 x 107 2 6 x 10 mol l de metotrexato Uma concentra o s rica de metotrexato superior a 5 pmol l 5 x 108 mol l 24 horas ap s uma terap utica com doses elevadas indica geralmente um risco de toxicidade Este nivel maximo fornecido apenas como uma indica o os resultados individuais dos doentes devem ser interpretados luz de todos os sinais e sintomas cl nicos 12 Desempenho As caracter sticas de desempenho do Ensaio Emit Metotrexato s o afectadas por todos os par metros de leitura As informa es que se seguem representam o desempenho total do sistema e n o devem ser interpretadas como pertinentes apenas para os reagentes Especificidade O Ensaio Emit Metotrexato mede a concentra o total de metotrexato ligado e n o ligado as prote nas no soro ou plasma Os compostos cuja estrutura qu mica ou uso terap utico concomitante possam sugerir uma poss vel reac o cruzada foram testados A aminopterina um agente antineopl sico que normalmente n o administrado concomitantemente com metotrexato e o cido 4 amino 4 desoxi N metilpterdico APA um metabolito menor do metotrexato apresentam uma reac o cruzada significativa com este ensaio Os compostos apresentados na Tabela 3 n o interferem com o Ensaio Emit
20. tir para al m da dura o normal do apoio com leucovorina A dosagem de leucovorina pode ser alterada nesses casos devendo isto ser feito prontamente a toxicidade do metotrexato pode n o ser revers vel com rapidez se o tratamento de apoio adequado for atrasado por mais de 42 48 horas Em doentes com uma depura o de metotrexato adequada a dosagem de leucovorina n o deve ser t o elevada de modo a reduzir a efic cia da droga contra os tumores Os m todos utilizados tipicamente para monitorizar as concentra es s ricas de metotrexato incluem o radioimunoensaio RIA o ensaio de liga o competitiva da reductase ou o ensaio radioenzimatico REA o ensaio de inibi o enzim tica DHFR e a cromatografia l quida de alta resolu o HPLC com detec o por radia o ultra violeta ou fluorescente 3 Princ pio O Ensaio Emit uma t cnica de imunoensaio enzim tico homog neo utilizada para a an lise de compostos espec ficos em l quidos biol gicos O ensaio baseia se na competi o para os locais de liga o dos anticorpos entre a droga presente na amostra e a droga marcada com a enzima glucose 6 fosfato desidrogenase G6PDH A actividade enzim tica diminui ap s a liga o com o anticorpo pelo que a concentra o da droga na amostra pode ser medida em termos de actividade enzim tica A enzima activa converte o dinucle tido de adenina nicotinamida oxidado NAD para NADH resultando numa altera o na absorv ncia
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