Hoefer SE600 Chroma
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1. e pl3 Fig 5 Derramando um gel de gradiente Uma ponta de pipeta pode ser utilizado em vez de uma canula se a soluc o de gel entregue a uma taxa que mant m um fluxo continuo sobre a superficie do vidro Nota g is de gradiente vertida na Caster Gel SE615 ou SE675 m ltipla s o introduzidos atrav s do fundo Nota Quando vertendo uma exponencial em gel com gradi ente de posi o um mbolo ou buj o de veda o acima do l quido na c mara de mistura para manter o volume constante e pl4 G is de gradiente Ambos g is de gradiente linear e exponencial pode ser vertido no refinado dual gel Reco mendamos usar um Hoefer SG Criador Gradi ente Series G is de gradiente s o derramadas a partir do topo do rodizio com uma canula de se utilizar o rodizio desde dual gel ou a partir do fundo se usando um Hoefer Caster Gel m ltipla ver instruc es que acompanham o rodizio Um gel de empilhamento ent o vertida sobre o gel de gradiente o 0 O o o oO Verter um gel de gradiente linear Montar sanduiche es para os rodizios dual gel como descrito na pagina 9 a Configure o caminho do fluxo da soluc o de mon mero Executar um comprimento de tubagem de vinilo clara atrav s de uma bomba perist ltica Anexar uma extremidade do tubo para a porta de sa da gradiente fabricante ea outra extremidade a uma c nula de 20 cm A OD da c nula deve ser menor do g2. o APS ou ambos pH Solu es com valores extremos de pH cido especialmente n o pode polimerizar oxig nio Remover o oxig nio a partir do ambiente de gel Degas a solu o de mon mero min 5 10 antes de verter e depois sobrepor a superf cie do gel com gua saturada de n butanol temperatura Ajustar a temperatura da solu o de gel para um m nimo de 20 C especialmente para g is de baixa T e p27 problema Vazamentos de camara superior de buffer Fonte de alimenta c o detecta vaza mento de corrente Dye curvas da frente para cima risos nas bordas Estrias proteina verticalmente Extraordinaria mente lento de execuc o ou causa possivel Mis alinhados partes rem dio Verifique se as placas de vidro espacadores e grampos est o alinhadas e se encaixam perfeitamente na vedac o da camara superior Verificar que ambas as juntas s o centradas e que as cristas de posicionamento encaixar no interior das ranhuras Componentes sujos ou danificados Trajet ria el trica ao solo fora Terra Distribuic o desigual de calor Verifigue se a vedac o n o est danificado ou comprimido Trogue se necess rio Verificar gue a c mara de tamp o superior n o deformado a uma exposic o anterior ao calor excessivo Adicionar mais graxa de silicone para selar grommets de trocadores de calor Verifigue se h vazamentos ou rachaduras no trocador de calor Substitua grommets desgastada
3. UL 61010A 1 CSA C22 2 1010 1 Certificado pela CE Esta declara o de conformidade v lida apenas para o instrumento quando ele e utilizado em locais de laborat rio e usado como entregues a partir de Hoefer Inc exceto para altera es descritas no manual do usu rio e e igado a outros CE rotulados instrumentos ou produ tos recomendados ou aprovados por Hoefer Inc Fig 1 Principais componentes do SE600 Hoefer Chroma ver Fig 4 para os componentes de rodizio Incluidos mas nao apresentados e composto Selo Gel 1 4 oz e modelo de alinhamento Spacer Mate e placas de vidro 6 e Maravilha Wedge ferramenta de separa o placa e barragem de buffer Unidade completa tamb m inclui espa adores 4 e pentes 2 Obrigat rio mas n o inclu das e agitador magn tico e Fonte de alimentac o com uma classifica o m nima de 300 V 100 mA constante A ou V Opcional Circulador banho Nota A sec o de ordenac o lista todos os acess rios e pecas de reposic o codificados por e cores leads 2 tampa de seguranca pinos de travamento c mara tamp o superior com el ctrodo superior trocador de calor com eletrodo inferior camara inferior tamp o Desembalar e Invent rio Desembrulhe com cuidado todos os pacotes e comparar o conte do com a lista de embala gem certificando se todos os itens chegaram Se qualquer parte estiver faltando entre
4. gua destilada completamente antes de cada utilizac o Nota Antes de utilizar a primeira vez desmontar a unidade e lava se com uma soluc o diluida de um detergente de laborat rio e enxaguar primeiro com gua e depois com gua destilada Limpar quaisquer gel aderir ao exterior das san du ches de gel a Se voc estiver executando apenas um gel Bloguear o slot segunda camara superior de buffer atrav s da instala o da barragem tamp o de acr lico inclu do com a unidade Coloque grampos para a barragem tendo o cuidado de alinhar os fins de fixa o e as bor das da represa Instale os fict cios gel parafusos para fora no ber o em segundo lugar no rod zio gel dual Anexar o sanduiche de gel para a camara de tampao superior Vire a c mara de amortecimento superior de cabeca para baixo e cologue uma junta encaixada ambos os recessos titular sanduiche Tanto o slot na junta e no slot no recesso deve alinhar Ambas as juntas de fenda deve ser usado mesmo se estiver rodando ape nas sanduiche de gel um Grooves ao longo de cada slot de ajudar a manter a junta no lugar Al m disso uma pequena quantidade de Seal gel pode ser apli cado em cada extremidade da junta de vedac o antes de instalar para ajudar a segurar a junta de vedac o contra a c mara tamp o superior Solte os sanduiches do rodizio removendo todas as cams de fundo se houver Abaixe a c mara de amortecimento superior para os sanduiches
5. maras C maras s o usados duas vezes primeiro para fixar a sandu che montado no suporte de fundi o e em segundo lugar para fixar a san du che para a c mara de tamp o superior Juntas de borracha H dois conjuntos de duas juntas As juntas de veda o s lido laminado se encaixam na parte inferior da pe a fundida de p e formar o selo para o vazamento do gel As juntas de veda o de fenda caber sob a c mara tamp o superior e formar a veda o entre as c maras superior e inferior As cristas sobre a junta de veda o superior alinhar a ranhura de veda o para manter um canal aberto entre o topo do gel e do tamp o na c mara superior Espacadores Espacadores determinar a espessura do gel e est o dispon veis em tr s espessuras 0 75 1 0 e 1 5 mm e duas larguras 1 e 2 cm Pode ser encomendado em separado Espa ador Mate modelo de alinhamento Este modelo se alinha espa adores durante a montagem do sandu che Combs Combs est o dispon veis em tamanhos que formam 10 12 15 20 ou 28 po os Prepara tivo pentes incluir um ou dois po os de refer n cia em adi o a um po o preparativa A maioria pentes est o dispon veis em todas as tr s espes suras 0 75 1 0 e 1 5 mm Pode ser encomen dado em separado Todos os pentes preparativa ea 10 12 15 e 20 bem po os forma pentes isto 25 mm de profundidade Os 28 po os bem pente formas que s o apenas 15 mm de profundidade para
6. Biol Chem 224 4406 4412 1969 Electroforese bidimensional Adams L D and Gallagher S R Two Dimensional Gel Electrophoresis Using the O Farrell System Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A et al eds OSC pp 10 4 1 10 4 13 1992 Anderson N G Anderson N L and Tollaksen S L Proteins of human urine I Concentration and analysis by two dimensional electrophoresis Clin Chem Jul 25 7 1199 2210 1979 Anderson Leigh and Anderson Norman G High resolution two dimensional electrophoresis of human plasma proteins Proc Natl Acad Sci USA 74 5421 5425 1977 Anderson L Two Dimensional Electropboresis Operation of the ISO DALT System Second Edition Large Scale Biology Press 1991 Bravo R Schafer R Willecke K MacDonald Bravo H Fey S J and Celis J E More than one third of the discernible mouse polypeptides are not expressed in a Chinese hamster mouse embryo fibroblast hybrid that retains all mouse chromosomes Proc Natl Acad Sci USA Apr 79 7 2281 2285 1982 Hurkman W J and Tanaka C K Solubilization of Plant Membrane Proteins for Analysis by Two Dimensional Gel Electrophoresis Plant Pbysiology 81 802 806 1986 Mets L J and Bogorad L Two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis an improved method for ribosomal proteins Anal Biochem Jan 57 1 200 210 1974 O Farrell P H High resolution two dimensional electrophores
7. Opcional Aplicar uma fina pelicula de composto de gel de vedac o apenas nas superficies canto inferior criadas pelos espacadores e placas se as sanduiches tendem a vazar O Coloque a junta laminado para dentro do suporte de fundi o Ver Fig 4 com o lado de espuma para baixo Coloque o conjunto de grampo no ber o de fundi o o parafuso do lado voltado para fora Nota Quando ligar as camaras mais facil manter o rodizio equilibrada se voc ligar tanto em direc o ao centro da roda Fig 4 Caster componentes e montagem o Inserir uma c mara dentro do furo em cada lado do tabuleiro de fundic o com o rebordo extremidade curta a apontar para cima Selar o sandu che de gel contra a junta de fundic o girando ambos os cames tanto quanto necess rio geralmente 90 150 at 180 A acc o de camara pressionam as placas para baixo para a junta para selar a parte inferior da sandu che O selo completar uma vez que a borda de vidro parece mais escuro e quase transparente contra a junta Nao ligue para alem deste ponto placa de vidro andar buraco cam gaxeta lado espuma bra adeira para baixo buraco cam ber os de fundi o 2 buraco cam niveladores exc ntrico a pa instalar cume acabar buraco cam e pll e p12 Os geles de acrilamida Preparar a solugao de mon mero e derramar o gel Preparar a quantidade necess ria de soluc o de mon me
8. Opcional Ligue o permutador de calor para um cir culador termost tica Deslizantes bracadeiras de mangueira guatro total em cada extremidade de dois comprimentos de 10 12 mm ID Tubo de vinil ou de silicone Anexar uma extremidade de cada extens o de tubagem a uma porta permutador de calor Anexar as extremidades livres de cada com primento de tubagem para as portas de banho circu lador uma para a entrada ea outro para a saida Fixe as conex es com as abracadeiras Use o gr fico Fig 7 na p gina 20 para estimar um ponto de partida para o ajuste de temperatura de cir o pl9 Fig 7 Aproximado circulador de ajuste de temperatura do banho Definir a temperatura do banho de circulac o de fixac o inferior a temperatura de funcionamento desejada pelo valor indicado no grafico Isto deve ser verificado em tr s pontos o p20 0 1 o 7 E 2 2 E 8 o a 3 5 5 4 S o g 5 5 K 6 7 0 10 20 30 40 50 60 configurac o da fonte de alimentac o W Exemplo Executar parametros 200 V 0 05 A 50 mA 1 Calcule W se sua fonte de alimentac o n o exibir o poder diretamente W VxA 10 W 200 V x 0 05 A 2 Interpolar o n mero de graus para subtrair a partir da temperatura de funcionamento desejado 10 W intersecta o grafico menos cerca de 1 C Se a temperatura desejada de 23 C definir o banho a 23 1 22 C Se a temperatura desejada
9. SE615 10 gels 18 x 16 cm Inclui 20 placas de vidro o espaco saver placa 5 folhas de preenchimento 100 folhas de papel modelo de cera de alinhamento Spacer Mate e as fichas de preenchimento Ordem pentes e espaca dores separadamente e p35 produto quantidade c digo Grampos e cames Grampo e Cam Kit quatro grampos 16 cm e 8 cames negros 1 SE6003UK Parafusos de reposic o para grampos 12 SE6003U 2 Camaras preto para grampos com buracos cam SE6005L Grampo assembl ias 16 cm SE6003U Grampo assembl ias 8 cm SE6403U Placas de vidro 18 x 8 cm Placas de vidro 2 SE6402 Placa de vidro divisor de sanduiche entalhado SE6402D 18 x 16 cm Placas de vidro 2 SE6102 Placa de vidro divisor de sanduiche entalhado SE6102D escolher o espacador eo comprimento da placa para a sua unidade SER11 e p36 grampo universal SE6003U rodizio b sico SE6015 exc ntrico e SE6005L Pente n mero espessura largura de po os mm mm quantidade c digo 10 0 75 8 3 SE511 10 75 10 1 00 8 3 SE511 10 1 0 10 1 50 8 3 SE511 10 1 5 12 0 75 7 6 SE511 12 75 12 1 00 7 6 SE511 12 1 0 12 1 50 7 6 SE511 12 1 5 15 0 75 57 SE511 15 75 15 1 00 5 7 SE511 15 1 0 15 1 50 5 7 SE511 15 1 5 20 0 75 4 1 SE511 20 75 20 1 00 4 1 SE511 20 1 0 20 1 50 4 1 SE511 20 1 5 28 0 75 2 1 SE511 28 75 28 1 00 2 1 SE511 28 1 0 2
10. a amostra As amostras de calor em tamp o de amostra SDS para n o mais do gue 1 2 min a 100 C para melhorar a dissociac o das subunidades Armazenar em gelo ap s o aguecimento Ajustar o volume da amostra ou concentrac o Adicione mais mercaptoetanol ou ditiotreitol verificar o tratamento da amostra Adicionar os inibidores de protease tais como PMSF se necess rio para evitar a degradac o proteolitica da amostra Aumento de glicerol ou sacarose para aumentar a densidade da amostra Armazenar as amostras a serem congelados em aliguotas para evitar repetidos de congelamento descongelamento Conservar a 40 a 80 C Bibliografia Geral Gallagher S R and Smith J A Electrophoretic separation of proteins In Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A eds OSC 10 2 1 10 2 21 1991 Hames B D and Rickwood D Gel Electropboresis of Proteins A Practical Approach Second edition City IRL Press 1990 Sambrook J and Russell D W Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor NY 2001 Sasse J and Gallagher S R Staining proteins in gels Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A et al eds OSC 10 6 1 10 6 8 1991 SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Isoelectric Focusing Handbook 80 6013 88 Hoefer Inc 2001 N o desnaturantes sistemas de gel Reisfeld R A et al Acidic buffer system fo
11. buffer MAX e p21 e p22 Cologue a tampa de seguranca da unidade envol vendo os pinos de travamento de seguranca antes de baixar as conex es de eletrodos para as fichas de banana O Ligue os fios codificados por cores para as tomadas de uma fonte de alimenta o aprovado Ligue o fio vermelho no vermelho tomada de sa da e o cabo preto na tomada de sa da de preto Na maioria dos sistemas de chumbo vermelho o qual ligado ao el ctrodo de fundo o nodo ea ponta de preto ligado ao el ctrodo de topo o c todo Notas importantes montagem e IEF Funciona O nivel de tamp o na c mara inferior tamp o nunca devem chegar c mara de amortec imento superior manter pelo menos 2 cm de folga e N o encha a c mara superior ou inferior acima dos n veis recomendados ilustrados na Fig 8 Remover tamp o em contato com as mensagens de eletrodos e Despeje lentamente tamp o e longe das ranhuras na c mara de amortecimento superior para evitar a perturba o das amostras e Use apenas gua ou 50 50 glicol gua etileno como refrigerante Nunca use um anticongelante comercial ou qualquer mistura base de lcool ou dano irrepar vel para o trocador de calor ir resultar e N o ligue o permutador de calor para uma torneira de gua ou qualquer outra fonte onde a press o da gua n o regulamentada Nota SE600 unidade Chroma usa 18 cm de largura placas A espessura gel det
12. denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen f re koppla kraften tillg ngen blyen till en kraft tillg ng Vander sig alla kraft tillg ng kontroller av och kopplar bort kraften blyen f re flytta s kerheten locket o pvi Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom v rmen exchanger i s utrustad fall Inte kopplar v rmen exchanger till en vatten kran eller n got kylmedel k lla d r vattnet trycket r unregulated Inf r aldrig kylv tska eller nagot organiska l sningsmedel in i n gon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anv nd inte med buffert temperaturer ver det h gsta angivna tekniska specifikationerna verhettning skulle orsaka irreparabla skador p enheten Portugu s English French German Italian Spanish bt 134 D bt 1 1 Res duos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE Este s mbolo indica que os res duos de equipamentos el ctri cos e electr nicos n o devem ser eliminados como res duos urbanos indiferenciados e devem ser recolhidos separada mente Entre em contato com um representante autorizado do fabricante para obter informac es sobre o desmantelamento do seu equipamento This symbol indicates that the waste of electrical and el
13. informaci n sobre la forma de desechar el equipo e pvii Gel de eletroforese Func o e Descric o O Hoefer SE600 Chroma unidade electroforese vertical da laje de gel destina se a proteina e electroforese de cido nucleico sob desnaturac o geralmente usado e n o desnaturante condi es At 28 amostras podem ser comparados num gel nica laje As aplica es incluem separa es de prote nas do fraccionamento de cido nucleico ea sepa ra o dimens o de segundo de electroforese 2 D Separa o primeira dimens o de 2 D electroforese prote na deve ser executada em g is de gradiente de pH imobilizadas As tiras s o focados facilmente transferido para o gel de dimens o segundo laje para a separa o de tamanho As placas de gel s o de 18 cm de largura por 16 cm de comprimento At quatro g is pode ser executado de uma s vez se sandu ches s o emparelhadas em sandu ches O trocador de calor permite o controle do buffer de tempera tura na c mara baixa Especifica es Gel tamanho da placa 18 x 16 cm L x A Gel tamanho 14 ou 16 cm x 16 cm L x A Potencia m xima 50 W Tens o m xima 1000 V Amperagem maxima 500 mA Temperatura maxima 45 C As condic es ambientais de operac o Uso interno 4 40 C Humidade at 80 Altitude de at 2000 m Categoria Instalac o I Grau de poluic o II Dimens es L x A x P 32 x 29 x 14 cm Certifica es de produtos EN 61010 1
14. ytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i cz ci zatwierdzone lub dostarc zone przez Hoefer Inc mog by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obs ugi tego produktu korzysta jedynie zasilacza ze jest nosz ce ozna kowanie CE lub bezpiecze stwa uwierzytelnione przez uznane na poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpiecze stwo lid musi by w miejsce przed pod czeniem zasilania prowadzi do zasilania Za wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kr tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organ icznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Informaci n Importante Spanish Si este equipo es utilizado en una manera no espe cificado por Hoefer Inc la protecci n proporcio nado por el equipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior o pv del laboratorio s lo S lo a
15. 8 1 50 2 1 SE511 28 1 5 Pente profundidade de 15 mm todos os outros 25 mm Preparativa pentes Estes pentes s o de 25 mm de profundidade ajustavel a 10 ou 15 mm n mero de po os espessura largura mm prep ref mm prep ref quantidade c digo 1 1 0 75 121 6 SE511 R 75 1 1 1 121 6 SE511 R 1 0 1 1 1 50 121 6 SE511 R 1 5 1 2 0 75 113 6 SE511 DR 75 1 2 1 113 6 SE511 DR 1 0 1 2 1 50 113 6 SE511 DR 1 5 Volta pente ajust vel SE511 BKA Necess ria para converter gualguer pente 25 mm de profundidade para 10 ou 15 mm de profundidade e p37 Espacadores espessura mm comprimento cm largura cm guantidade c digo 0 75 8 2 2 SE6419 2 75 1 0 8 2 2 SE6419 2 1 0 1 5 8 2 2 SE6419 2 1 5 0 75 16 2 2 SE6119 2 75 1 0 16 2 2 SE6119 2 1 0 5 16 2 2 SE6119 2 1 5 1 0 16 1 2 SE6118 2 1 0 5 16 1 2 SE6118 2 1 5 Produtos associados Hoefer SE 100 lavagem mate Plate e unidade de armazenamento 1 SE100 QuickFit conectores f mea 3 8 2 QF3 8 QuickFit conectores macho 3 8 2 QFX3 8 e p38 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Toll Free 1 800 227 4750 Telefone 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail support amp hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer 6 uma marca registrada da Hoefer Inc Coomassie 6 uma marca comercial da ICI plc 2012 Hoefer Inc Todos os direitos reservados Impresso nos EUA Hoefer
16. amente depois de cada utilizac o lavar as c maras tamp o superior e inferior com gua e em seguida enxaguar com gua destilada Lidar com a c mara de amortecimento supe rior com cuidado para evitar danificar o plug banana Limpe as juntas com detergente neutro e enxaguar com gua destilada Deixa se secar ao ar Limpar placas de vidro e espacadores com uma soluc o diluida de um limpador de laborat rio tais como o RBS 35 em seguida enxaguar com torneira e gua destilada Placas de vidro tamb m pode ser tratada com mas n o s o armazenados em soluc es de limpeza cidas Substitui o de um trocador de calor tubo de vidro Remover o tubo por simultaneamente tor o e desl izando a para baixo tanto quanto poss vel at que a extremidade superior est livre da anilha superior Passe cuidadosamente o tubo de modo que ele ir limpar a montagem em seguida levante o tubo para fora da parte inferior do anel a Unte o exterior de ambas as extremidades do tubo novo com gordura de silicone Torcer e corredica uma extremidade do tubo para o mais baixo ilh Em seguida deslize a outra extremidade o anel superior gentilmente empurrando a com uma leve torc o at gue ele pare Verifigue se o anel n o beliscado Soluc o de problemas problema Gel vazamen tos sanduiche enguanto fundic o Exemplo pocos danificado ou irregular causa possivel Componentes sujos ou danificados r
17. ao longo dos lados do sandu che Com o dedo apertar um parafuso em cada pinca defina o sandu che de p sobre uma superficie plana e soltar o parafuso para alinhar a pilha Tomar muito cuidado no alinhamento ir garan tir uma boa vedac o Com o dedo aperte todos os parafusos Remova o espacador Mate Dica Use o berco elenco para segurar o sanduiche durante o alinhamento Remova a junta laminada a partir do berco e em vez de definir o sanduiche de p sobre uma superficie plana cologue o no berco de fundic o Fig 3 Montagem sanduiche Club Bracadeiras laterais ir acomo dar dois espacadores at 1 5 mm de espessura placas de vidro nos lados exteriores da sanduiche centerplate dentada e plo o Sandu che de tr s andares A 16 cm de comprimento placa central divisor de dentada comprada separadamente pares de dois sandu ches para dobrar o n mero de g is que podem ser expressos e executar Montar um sandu che da mesma maneira como um sandu che regular excepto antes de colocar a placa de vidro de topo colocar a placa divisora e um segundo conjunto de espacadores na pilha Cologue o entalhe de modo gue ele ir estar no topo dos g is essencial gue os espacadores e placas de alinhar perfeitamente a fim de selar Remover o sanduiche e inspeccionar o fundo para se certificar de que as arestas s o alinhados flush para assegurar uma vedac o completa Ajuste se necess rio
18. ccesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguridad certificada por un nacionalmente reconocido probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar antes de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desco necta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del liquido refrigerante donde la presi n del agua est libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente organico en cualquier parte del instrumento Los solventes organicos causaran dano irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del maximo especific especificaciones t cnicas Reca lentar causar da o irreparable a la unidad Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillhan dah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaborato rium anv ndning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller lever erade vid Hoefer Inc kan anv ndas f r fungera underh lla och servicing
19. de 4 C definir o banhoa4 1 3 C Fig 8 Superiores e inferiores de buffer de preenchimento niveis de camara culac o de banho Ajustar conforme necess rio para as vari veis tais como a temperatura ambiente as mudangas na saida de pot ncia e efici ncia banho cir culador Se o controlo preciso da temperatura 6 critica medir a temperatura e ajustar conforme necess rio Opcional buffer do Prechill Coloque a montagem da camara superior do buffer para a camara inferior buffer Use uma m o firme para evitar a perturbac o das amostras Segure o conjunto no suporte de fundic o pela c mara de amortecimento superior e cuidadosamente cologue a c mara inferior o Inspecione a instalac o e verificar os niveis de buffer C mara de amortecimento superior UBC O eletrodo ao longo do cume c mara superior deve ser submersa a cerca de 1 cm Este n vel reguer 450 600 ml de tamp o apenas o suficiente para cobrir as costelas C mara Alta mas n o alto o suficiente para entrar em contato o plug banana N o encha acima UBC linha de enchimento MAX C mara inferior tamp o LBC Preencha a LBC linha de enchimento MAX Superior c mara de amortecimento max a UBC linha de enchimento MAX Baixa c mara de amortecimento max linha de enchimento R tulo n vel MAS de
20. de empilhamento Para melhores resultados permitir uma altura de empilhamento de gel de 2 5 vezes a altura da amostra no po o qualidade do reagente Descarte de solu es de acrilamida desatualizados e utilizar apenas o mais alto grau de acrilamida A prepara o das amostras Ao preparar as amostras evitar o uso de solu es com altas concentra es de sal e p29 problema causa possivel Resolu o banda condi es de pobre Poor band funcionamento resolution rem dio Comece electroforese logo gue a amostra carregada para evitar esp cies de baixo peso molecular a partir de difus o Realizar a separac o em uma configurac o mais baixa de corrente ou tens o para reduzir o aguecimento Joule qualidade do reagente Utilize apenas os reagentes mais alta gualidade pobre de empilhamento Use g is apenas gue foram recentemente preparado Adicionar um gel de empilhamento ou aumentar a altura do gel de empilhamento Preparar a superficie Resolving gel por primeira lavagem com empilhamento de gel de mon mero antes de vazar o gel de empilhamento para assegurar a con tinuidade entre os g is Verificar valores de pH das resolver e empilhamento de gel de soluc es Nao titular back buffers Polimerizac o incompleta gel Permitir gel para polimerizar totalmente A preparac o das amostras e p30 Armazenar amostra em gelo antes que seja desnaturado Dialisar ou dessalinizar
21. de gel no Nota N o force os exc ntricos Se voc encontrar resist ncia incomum desmonte e inspe cione grampo e alinhamento de vidro na parte superior do sandu che Alinhe e reinstale Nota se a op o de arrefe cimento frequentemente utilizado conveniente para anexar conectores QuickFit tubagem As v lvulas nestes acess rios evitar o derrama mento do l quido refrigerante estande casting Instale o cames cume apontando para baixo para o buffer de buracos c mara de cames Prenda o sandu che no lugar em simult neo transformando uma c mara no sentido hor rio eo outro anti hor rio a 180 Completo o Usar uma pipeta para encher cuidadosamente cada ranhura acima dos pocos de amostra com tamp o para minimizar perturbar as amostras Em seguida despeje 100 ml de tamp o para a c mara dirigindo o fluxo de tamp o em direc o a parede lateral Veri figue se h vazamentos de tamp o em torno da junta C mara inferior tamp o 0 Coloque um bar spin magn tico na c mara menor buffer LBC e coloque a unidade sobre um agitador magn tico Encher a c mara inferior com at 4 litros de tamp o e Abaixe o trocador de calor para a camara baixa ajustando as portas para os entalhes na borda O tro cador de calor deve estar no local para todas as corri das porque o eletrodo inferior integrado ao trocador de calor Se n o houver refrigerac o 6 necess ria pule para o passo 3
22. ec tronic equipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning the decommissioning of your equipment Ce symbole indique que les d chets relatifs a l quipement lectrique et lectronique ne doivent pas tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Haus mill entsorgt werden diirfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem auto risierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsichtlich der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Questo simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparec chiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalita di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante Este simbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener mas
23. ecas de reposic o Maravilha Wedge Gel ferramenta 1 SE1514 Separac o Placa Juntas de borracha de silicone de fenda 2 SE6008B para c mara de amortecimento superior Juntas de borracha laminadas de silicone 2 SE6009 para lancar estande barragem tamp o SE6032 C mara tamp o superior SE6054 para SE600 Chroma C mara inferior tamp o SE6150X para SE600 Chroma Tampa com cabos de alta tens o SE6056X para SE600 Chroma De alta tens o conjunto SE6056 HV de chumbo seguranca Plug Banana ouro com 2 arruelas SE6067 SE600 trocador de calor Chroma SE6160 montagem eletrodo inferior Tubo de vidro com 2 grommets SE6160 5 para trocador de calor montagem eletrodo inferior Grommets para trocador de calor 4 SE6060 6 montagem eletrodo inferior nivel de bolha I SER11 Gel composto Seal 1 4 oz tubo 1 SE6070 Spacer Mate 3 SE6119SM produto quantidade c digo Rodinhas de gel Para 1 ou 2 g is Rod zio Gel Dupla 1 SE6015 basic 2 gels 18 cm wide Inclui 2 juntas em branco para 1 ou 2 g is Um inclu dos com cada unidade SE600 Chroma Para at 4 g is Kit Caster Gel 1 SE675 4 gels 18 x 16 cm Inclui 8 placas de vidro 3 espaco saver chapas 5 folhas de preenchimento 100 folhas de papel de cera espacador Mate modelo de alinhamento e tamp es de enchimento Ordem pentes e espaca dores separadamente Para at 10 g is Kit Caster m ltipla Gel 1
24. el de 16 cm SE600 Chroma um 1 5 mm de espes sura Laemmli SDS em gel executar a 25 mA gel sem arrefecimento geralmente requer 5 horas Registre cada corrida Manter um registo da corrente ou tens o con figura o o n mero ea espessura do gel sistema tamp o e as leituras de in cio e no final de cor rente ou tens o para cada percurso de modo que os resultados podem ser comparados Os resultados inconsistentes para o mesmo sistema e configura es indicam poss veis problemas como vazamento de corrente as concentra es de buffer incorretos elevadas concentra es de sal ou de qualidade qu mica inconsistente Verificar o progresso banda ap s 5 min e novamente ap s 1 h mantendo um olho sobre a taxa de migra o do corante de seguimento A execu o est completa quando o corante de rastreio atinge o fundo do gel Ver o n vel de tamp o e se necess rio reabastecer o como necess rio para manter o el ctrodo superior submersa Um pequeno volume de tamp o pode vazar passado uma placa cortado ou junta ou tamp o pode passar atrav s do gel Ap s a electroforese Uma vez que o corante de rastreio atinge o fundo do gel desligar a fonte de alimentac o desligar os fios e remover a tampa de seguranca usando alavanca dedo entre a tampa ea parte superior do permutador de calor Levante se em linha reta para evitar entor tar as fichas de banana a Se refrigerante est circulando interromper o flux
25. em dio Placas Espacadores e da junta deve estar completamente limpa Lavar se necess rio Substituir placas fritas especialmente se endireitada perto dos espacadores Verifigue a junta rodizio de cortes ou fendas e substituir se necess rio Mis alinhados partes Verifigue o alinhamento Placa e espacador realinhar se necess rio Ao longo de aperto As bolhas de ar Ligue came apenas na medida do necess rio para criar uma veda o geralmente 90 150 mas at 180 Em cada espa ador aplicar uma fina camada de gel com posto de veda o para a parte inferior para fora canto s N o use graxa de silicone Remova as bolhas de ar antes de inserir pentes Deslize pente em solu o em ngulo Se pente deve ser removida adicione mais solu o de mon mero antes de reinserir o pente Polimeriza o incom pleta ou retardada Permitir g is de acrilamida a ser definido para um m nimo de 1h Escombros em po os Enxaguar a gel n o polimerizada com tamp o de amostra remo o comb Remover o pente com uma ligeira inclina o e muito devagar para evitar danificar o gel G is de agarose Abaixe o pente n o mais do que 1 cm para o gel Polimeriza o Chemicals Use apenas a es recentes dos reagentes mais alta incompleta gel qualidade Se o persulfato de am nio seco n o crepita o quando adi cionado a gua substituir com estoque fresco Aumentar TEMED ou concentra
26. em contato com seu escrit rio de vendas local Inspecione todos os componentes de danos que possam ter ocorrido guando o aparelho estava em tr nsito Se gualguer parte estiver danificado contate imediatamente a transportadora Certifigue se de manter todo o material de embalagem para pedidos de indemnizac o ou de usar caso seja necess rio para devolver a unidade C mara inferior tamp o A c mara inferior tamp o transparente o que permite um controle visual de processo elec troforese A c mara amp guimicamente resistente a comuns buffers electrofor ticos mas nio a solventes org nicos ou de cidos fortes ou alcali nos Temperaturas acima de 45 C pode causar a camara a entortar Camara tampao superior A c mara de tamp o superior quimicamente resistente a buffers de electroforese comuns mas n o a solventes org nicos ou de cidos fortes ou alcalinos O eletrodo superior c todo corre ao longo da crista centro e termina na ficha banana A c mara superior reguer 0 5 0 8 litros de tamp o encher n o acima da parte superior das nervuras de pl stico Trocador de calor O trocador de calor deve ser instalado para cada uso pois abriga o eletrodo inferior nodo que corre ao longo da parte inferior da moldura Quando ligado a um banho de circu lador o permutador de calor regula a tempera tura de tamp o na camara inferior Refrigerante passa atraves dos tubos de vidro que s o pro tegidos com il
27. enn diese Ausr stung gewisserma en nicht angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausriistung zur Verfigung gestellte Schutz verschlechtert werden Dieses Instrument wird f r den Innenlaborge brauch nur daf r entworfen Nur Zus tze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer Inc kann fur das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produk tes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein fiihrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen fiihrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers thylens durch den W rmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder K hlmittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische L sungsmittel in jeden Teil des Instru mentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen Uber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funktionieren Die Uberhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursac
28. entamente fornecer a solu o de sobreposi o de uma seringa de vidro equipada com uma agulha de calibre 22 Aplicar a solu o de perto o espa ador menos um lado da san du che e permitir que ele flui atrav s da superf cie nu o Permitir gue os g is para polimerizar durante um minimo de 1 h Ap s a polimerizac o deitar fora a sobreposic o e lavar a superficie do gel v rias vezes com gua destilada e p15 O O Nota com Coomassie Blue M poss vel detectar 1 ug de prote na em uma nica banda Com as manchas de prata mais sens veis poss vel detectar t o pouco como 10 ng de prote na e p16 Preparar a soluc o de mon mero de empilhamento de gel derrame o gel de empilhamento e introduzir um pente com uma ligeira inclinac o no sanduiche tomando cuidado para n o prender o ar sob os dentes Permitir um minimo de 1 h para o gel para polimerizar Preparac o de amostras e Carregando A amostra pode ser carregado guer enguanto a sanduiche no refinado ou ap s a c mara tamp o superior est ligado Ouando colocar as amostras ao usar placas divis rias as amostras devem ser carregados sem a c mara de amortec imento superior no lugar A guantidade de amostra carregada depende da espessura do gel a sensibilidade do m todo de detecc o utilizado ea guantidade de amostra esperado em cada banda Em um sistema tamp o continuo a amostra de proteina deve ser relativamente conce
29. ermina a sec o transversal e exig ncia atual para constantes corridas atuais O comprimento da placa deter mina o tempo de execu o Tabela 2 Laemmli sistema tamp o de partida directrizes do ponto espessura gel 1 5 mm Gelo atual 25 mA corrente constante A partir de tens o 80 90 V tens o final 220 250 V G is mais grossos ou mais finos exigem proporcionalmente mais ou menos corrente Por exemplo um gel de 0 75 mm gue 6 metade da espessura de um gel de 1 5 mm reguer a metade da guantidade de corrente ou 12 5 mA TA corrente deve ser multiplicada pelo n mero de geles Por exemplo se dois sandu ches s o instalados os quatro g is requer quatro vezes mais do que atual A corrente pode ser aumentada para corre mais r pido se arrefecimento activo utilizado e que pode ser diminu da para mais lentas corridas durante a noite Em 25 mA por gel Separar a amostra Par metros de electroforese para g is de poliacrilamida descont nuos G is pode ser executado em ambas corrente constante ou constante configura es de tens o Um modo de corrente constante tradiciona Imente utilizado com um sistema de tamp o descont nuo de modo que a taxa de migra o electrofor tica permanece inalterado durante a execu o Sob essas condi es tens o aumenta medida que as receitas administradas A menor configura o atual recomendado para maior resolu o O n vel ptimo de cor
30. h s de borracha de silicone Os trocadores de calor portas de conex o s o 13 mm de diametro externo O permutador de calor 6 avaliado para um m ximo de 0 8 atmosferas acima da temperatura ambiente 12 psig Ligue apenas a fontes de refrigerac o com press o regulada N o ligue torneira de gua Tampa de seguranca O plug banana no trocador de calor se conecta o fio vermelho ea ficha na c mara de amortec imento superior se conecta o cabo preto A 4 mm envolta com c digo de cores ficha leva em c digo de cores tomadas no fornecimento de energia Envolver se pinos de travamento antes de baixar conex es de eletrodos para plugues banana Sempre instale a tampa de seguranca antes de usar Placas de vidro O Chroma SE600 acomoda 18 cm de largura placas de 16 ou 8 cm de comprimento Placas entalhadas divisor encomendados separada mente dividir sanduiches gel para formar san duiches de dois g is cada de modo at quatro g is pode ser executado de uma s vez Grampos Dois 16 cm grampos s o utilizados para fixar a sanduiche de gel A barra de press o da bra cadeira ajustado com parafusos distribui a press o uniformemente Fundic o estande O estande de fundic o tem sanduiches gel mon tadas na posic o vertical para a fundic o g is P s ajust veis nivelar o rodizio Uma junta de laminado no fundo de cada berco vedac es de fundic o na parte inferior da sanduiche guando fixada no suporte C
31. hen Informazioni Importanti Italian Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere indebolita Questo strumento disegnato per l uso di labora torio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approvato o hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazionalmente ricon o piv osciuto testando il laboratorio Il coperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore e disin serisce i piombi di potere prima di togliere il coper chio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cosi equipag giato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acqua o qualunque fonte di refriger ante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento I solventi organici causeranno il danno irreparabile all unita Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causera il danno irreparabile all unita Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utst
32. io do rod zio para obter instru es completas Para executar quatro g is simulta neamente dois acess rios placas divis rias ent alhadas e dois pares de espa adores adicionais s o necess rias Fig 2 Sanduiche de montagem Inspecionar placas de vidro para nicks Use apenas placas unchipped para evitar fugas placas de bra adeira andar vidro cristas placa de press o Nota As placas de vidro e espa cadores tem de estar alinhada com as cristas de fixac o tanto a parte superior e inferior para uma boa vedac o Nota N o utilize graxa de sili cone ou vaselina para selar o sanduiche Estas subst ncias s o dificeis de remover e final mente causar artefactos Construa o sanduiche de gel e inserir em rodizio Prepare o rodizio e grampos Cologue o nivel de alcool no centro de rodizio e ajuste os p s niveladores Solte todos os parafusos de fixac o e abrir espaco para o sanduiche deslizando as placas de press o para os parafusos a Construir sandu ches gel Para cada sandu che escolher dois perfeitamente lim pas placas de vidro unchipped e dois espacadores Lay uma placa sobre uma superficie plana estabel ecem o modelo de alinhamento Espacador Mate sobre a placa lado de largura na parte superior da placa colocar um espacador ao longo de cada aresta e colo car a placa de vidro segundo no topo Fixe o sandu che com grampos Deslizar uma bracadeira de cada vez
33. is of proteins J Biol Chem May 25 250 10 4007 4021 1975 Bjellqvist B et al Isoelectric focusing in immobilized pH gradients principle methodology and some applications J Biochem Biophys Methods 6 317 339 1982 G rg A et al The current state of two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients Electrophoresis 9 531 546 1988 G rg A Two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients current state Biochem Soc Trans 21 130 132 1993 Bjellgvist B et al Micropreparative two dimensional electrophoresis allowing the separation of samples containing milligram amounts of proteins Electrophoresis 14 1375 1378 1993 Blomberg A et al Interlaboratory reproducibility of yeast protein patterns analyzed by immobilized pH gradient two dimensional gel electrophoresis Electropboresis 16 1935 1945 1995 e p33 tampa de seguranca com cabos SE6056X camara tamp o superior SE6054 trocador de calor SE6160 c mara inferior tamp o SE6150X e p34 Informa es sobre pedidos produto quantidade c digo SE600 unidade Chroma completo 1 SE600X 15 1 Inclui 3 conjuntos de placas de vidro dois 15 bem pentes 2 conjuntos de espacadores de 1 5 mm de espessura 6 cames dual gel estande elenco com a base de nivelamento e o nivel da barragem buffer modelo de alinhamento Spacer Mate e Wonder Wedge Separac o placa de gel ferramenta As p
34. kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie vede bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda ethyleng lykolu prost ednictv m v m n k tepla je li to vybav ena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak vody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapravi teln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifika cemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specifice ret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan maske sv kkes Dette instrument er designet for indendors labora toriumbrug bare Bare tilbeh r og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan m ske bruges for drive funk tionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en str mforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedl get m v re p plads for forbinding stromforsyningsblyet til en stromforsyning Drejer alle stromforsyningskontroller af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedl get Cirkulerer bare vand eller 50 50 vand eth
35. n Importante French Si cet quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la protection fourni par V guipement pourrait tre diminu e Cet instrument est con u pour l usage de labora toire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont approuv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entrete nir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationale ment reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre sa place avant connecter l alimentation mene une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par I exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l exchanger de chaleur un robinet d eau ou la source d agent de refroidissement ou la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organique dans n importe quelle partie de instrument Les dissolvants organiques causeront des dommages irr parables I unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications techniques La surchauffe causera des dommages irr parables I unit Wichtige Informationen German W
36. ntrado porgue nenhum gel de empilhamento usado Em um sistema de tamp o descontinuo a zona em gue cada esp cie molecular migra afiada pelo gel de empilhamento de modo a amostra n o neces sita de ser t o concentrada Preparar a pocos Retire o pente o suavemente para que lado a lado e em seguida levantando o para evitar danificar as paredes tamb m Cuidadosamente enxaguar cada po o com gua destilada para remover acrilamida n o polimerizada e depois escoar por sandu che invertendo o gel ou rod zio Encher cada po o com tamp o de electroforese _ __ __Z A D Nota Uma vez que as amostras est o dentro dos po os tome cuidado para n o ranger os sandu ches de modo que as amostras n o s o derramados ou misturado Preparar a amostra Aumentar a densidade da amostra l quida com 10 de glicerol ou sacarose Adicionar um corante de rastreio tais como vermelho de fenol azul de bro mofenol ou Y pironina Para g is de SDS de prote nas usar tamp o trata mento 2X para desnaturar ambas as amostras de l quido e seco num tubo de ensaio Para solu es de prote na l quidos adicionar um vol ume igual de tamp o de 2X Para secar amostras de prote na adicionar volumes iguais de tamp o de amostra 2X e elevado grau de pureza de gua para atingir a concentra o desejada Aquecer o tubo em agua a ferver durante 90 segun dos em seguida deixa se arrefecer at a temperatu
37. o e desconectar os acess rios ou tubulac es Retire o conjunto camara superior buffer Despeje o buffer em uma pia Instale o conjunto do rodizio gel dupla e em seguida solte os sanduiches por virar e tirar os excentricos o Desapertar as bracadeiras dos sandu ches e remover Com cuidado solte e deslize afastado ambos espa cadores Utilizar a Hoefer Maravilha Wedge Gel ferra menta de separac o da placa para separar as placas Cuidadosamente levantar a placa de vidro com o gel em anexo Lidar com o gel com cuidado para evitar danifica lo Inverta a placa e posic o do gel baixo sobre a bandeja de colorac o Pry um canto do gel de distancia a partir do vidro e permitir que ele caia no tabuleiro ou se o gel suficientemente espessa para manusear levant la e coloc lo dentro da bandeja Para evitar salpicos adicionar colorac o ou soluc o fixadora para a bandeja ap s o gel transferido Limpar a unidade tal como descrito na secc o seguinte e p25 Limpeza e N o autoclave ou aquecer qualquer parte acima de 45 C e N o use solventes org nicos abrasivos solu es de limpeza fortes ou cidos fortes ou bases fortes para limpar as c maras e N o molhe a junta laminada Nota Se o tubo antigo est rachado ou quebrado proteger sua m o com luvas grossas um peda o de pano ou toalhas de papel antes de retirar o tubo p26 Cuidados e Manutenc o Imediat
38. por cada gel com uma fina camada de gua butanol saturado gua ou tamp o de gel dilu do para evitar a exposi o ao oxig nio de gel Lentamente fornecer a solu o de sobreposi o de uma seringa de vidro equipada com uma agulha de calibre 22 Aplicar a solu o de perto o espa ador menos um lado da san du che e permitir que ele flui atrav s da superf cie nu Permitir que o gel para polimerizar durante um m nimo de 1 h Empilhamento preparac o de gel Verter o gel de empilhamento enguanto a sanduiche ainda no rodizio de gel Stacking gel resoluc o 6 tima guando derramou um pouco antes de eletroforese o Remover a sobreposic o por lavagem da superficie do gel por v rias vezes com gua destilada Inverter o rod zio para drenar Para garantir um contato con t nuo entre a resolver e empilhamento g is remover o l guido residual borrando um canto com um labo rat rio de limpar Calcular o empilhamento de gel de volume de soluc o de mon mero Preparar a soluc o de mon mero de empilhamento gel deaerate lo e adicionar catalisador e iniciador Verter o gel de empilhamento sobre o gel de res oluc o com uma pipeta descart vel ou Pasteur a um nivel de cerca de 2 mm a partir do topo da placa o Introduzir um pente com uma ligeira inclinac o no sandu che tomando cuidado para n o prender o ar sob os dentes Permitir um m nimo de 1 h para o gel para polimerizar
39. que os po os n o desmoronar quando o pente removido O volume de amostra realizada por cada po o depende da espessura do gel bem profundidade e do n mero de po os por pente A tabela 1 apresenta volumes de amostras de po os para todos os pentes ver p gina 17 Maravilha Wedge Gel ferramenta Separa o Placa Esta ferramenta usada para desmontar san du ches gel e verificar espa ador e pente espes suras Instru es de opera o Procedimentos de fundi o e eletroforese em gel seguir Incluem se as instru es para g is de poliacrilamida usado com sistemas tamp o cont nuas ou descont nuas e g is de gradiente Consulte a p gina 31 para bibliografia Prepare o sandu che de gel Placas de vidro espa adores e conjuntos de fixa o s o dimensionados de modo que o san du che montados podem ser facilmente alinha das para criar o selo exigido primeiro a lan ar o gel e depois execut lo Para melhores resul tados tomar cuidado extra para alinhar todos os componentes ao montar sandu ches De um a quatro g is 18 x 16 cm pode ser montado e executado no Chroma SE600 Ambos os g is pr moldados e auto moldadas g is podem ser utilizados Para auto cast g is v rios kits podem ser encomendados separada mente O SE615 Kit Caster m ltipla Gel com porta at 10 sandu ches gel simples ea SE675 Kit Caster Gel tem capacidade para at quatro sandu ches Veja a acompanhante gel Manual do Usu r
40. r resolution of cationic proteins Nature 195 281 1962 McLellan T Electrophoresis buffers for polyacrylamide gels at various pH values Anal Biochem 126 94 1982 Hedrick J L and Smith A J Size and charge isomer separation and estimation of molecular weights of proteins by discontinuous gel electrophoresis Arch Biochem Biophys 126 155 1968 Desnaturac o sistemas de gel Laemmli U K Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T Nature 227 680 685 1970 Matsudaira P T and Burgess D R SDS microslab linear gradient polyacrylamide gel electrophoresis Anal Biochem 87 386 396 1978 Schreier M H Erni B and Stachelin T Initiation of mammalian protein synthesis I Purification and characterization of seven initiation factors J Mol Biol Nov 116 4 727 753 1977 e p31 e p32 Shapiro A L and Maizel J V Jr Molecular weight estimation of polypeptides by SDS polyacrylamide gel electrophoresis further data concerning resolving power and general considerations Anal Biochem Jun 29 3 505 514 1969 Schaegger H and Von Jagow G Tricine sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa Anal Biochem 166 368 379 1987 Weber K and Osborn M The reliability of molecular weight determinators by dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis J
41. ra ambiente As amostras tratadas podem ser armazena das a 40 a 80 C para execuc es futuras Proteinas de membrana de calor a 60 C durante 20 minutos Armazenar amostra utilizada a 4 C o Subjacente a amostra nas cavidades utilizando uma micro seringa de ponta fina ou gel carregamento ponta da pipeta Tabela 1 Volume de amostra para tamanhos padr o pente volume da amostra uL por 1 mm de profundidade n mero de espessura pente mm pocos 0 75 1 0 1 5 10 6 2 8 3 12 4 12 5 8 7 7 11 5 15 4 3 5 7 8 6 20 3 1 4 1 6 2 28 2 1 2 7 4 1 1 1 ref prep 4 90 6 121 9 183 1 2 ref prep 4 85 6 112 9 171 e p17 Fig 6 Colocar sanduiches de gel para a camara de tamp o superior Se os vazamentos de monta gem lev lo para uma pia e parcialmente liberar as c maras para permitir tamp o a escorrer para fora da c mara superior Desmontar verificar o alin hamento de todos os componen tes do sanduiche e ajustar se necess rio A Remova cames pelos bura cos inferiores cam Coloque a c mara superior para os sandu ches e depois inserir os exc ntricos nos orif cios exc n tricos superiores cume ponta curta apontando para baixo B A posi o de c mara final n o mostrado deve ser vertical de modo que a montagem se encaixa dentro da c mara infe rior tamp o e p18 Montagem Final Camara tampao superior 0 Enxaguar as duas c maras tamp o com gua e
42. rente deve ser determinada empiricamente os factores prin cipais que deve ser equilibrado incluem a con centra o do gel e da velocidade de migra o e do aquecimento Joule resultante e distor o da banda Tabela 2 listas de ponto de partida as orienta es e ajustes de espessura de gel o n mero de g is e taxa de migra o Atual Actos correntes sobre a rea de sec o trans versal total de todos os g is porque os g is s o ligados em paralelo o circuito el ctrico Assim a configura o de corrente para um gel deve ser multiplicada pelo n mero de geles da execu o sec o transversal simultaneamente Para um mil metro de espessura 1 5 gel sugerimos uma defini o corrente de partida de 25 mA Dois 1 5 g is mm 50 mA Nota O arrefecimento pode ser necess rio para controlar o aquecimento Joule e p23 Atenc o Ap s monitorizac o inicial n o deixe o aparelho sem vigil ncia por mais de 1 h antes de verificar o andamento das bandas e do nivel de buffer o p24 Tens o A tens o de partida para um gel de 1 5 milimetros laje ligado a uma fonte de alimentac o definido como 25 mA 6 geralmente 80 90 V usando a uni dade de SE600 Chroma com um sistema tamp o Laemmli descontinuo para SDS g is A tens o final tipicamente 250 400 V dependendo do comprimento do gel Ver Tabela 2 Tempo Uma execu o geralmente completa quando o corante de rastreio atinge o fundo do gel Num g
43. ro Deaerate e adicionar o iniciador e catali sador imediatamente antes de verter o gel Pipetar a soluc o em um canto do sanduiche tomando cuidado para nao introduzir bolhas de ar Ver abaixo para o nivel da soluc o apropriada de acordo com a aplicac o No gel de empilhamento sistema continuo Encha soluc o at um pouco abaixo do topo da aresta da placa superior Se as bolhas est o presos retire com uma pipeta ou seringa Introduzir um pente com uma ligeira inclinac o em cada sanduiche tomando cuidado para n o prender as bolhas de ar sob os dentes Sanduiche de tr s andares Pipetar a soluc o em ambos os sanduiches enchendo cada um para o mesmo nivel abaixo da extremidade marcada Stacking gel Encha soluc o de 3 4 cm abaixo da parte superior da placa de vidro Esta altura permite 1 cm de empil hamento de gel abaixo da pocos Despeje o gel e aplicar uma sobreposic o ver passo 2 Depois de o gel 6 definida preparar o gel de empilhamento como descrito abaixo 2 D de electroforese sistema de proteina descontinuo Encha soluc o de mon mero a cerca de 1 cm abaixo do topo da placa de vidro para permitir 4 5 mm para a tira de IPG ou gel tubo e um selo de agarose Um gel de empilhamento ir reguerer espaco extra Selar a tira IPG ou gel tubo no lugar com agarose dissolv ida em tamp o de corrida Tome cuidado para evitar prender as bolhas de ar entre os g is de primeira e segunda dimens o O 2 Sobre
44. s Encha a c mara baixa do buffer para o nivel apropriado para a corrida nas bordas Veja a figura 8 p gina 21 Use agitador magn tico e barra de agitac o para manter tamp o bem misturado O calor excessivo Particulas em Circular ext refrigerante Diminua a configurac o da corrente ou tens o Prechill o buffer Execute o gel na sala fria Centrifugar ou amostra do filtro antes de carregar para amostra remover particulas sobrecarga Carregar menos amostra degradac o Adicionar inibidor de protease tais como PMSF Fuga de corrente em torno de gel Verifigue se h vazamentos todas as placas e os espacadores devem estar alinhados e livre de gorduras e rachaduras Se utilizada a barragem de buffer deve ser seguro r pido Amostra ou prepara Se o pH requerido de uma solu o ultrapassado n o volta c o de reagentes titula Descarte e preparar uma soluc o tamp o nova Verificar receitas as concentrac es de gel e tampao de dilu i o Por exemplo n o utilize Tris HCl em vez de Tris para Laemmli tanque tamp o Diminuir a concentrac o de sal de amostras gualidade do Descarte de soluc es mais velhos de acrilamida e usar o reagente estogue s da mais alta gualidade Utilize apenas ur ia rec m deionizada As configura es de Para aumentar ou diminuir a taxa de migra o ajustar o tens o ou corrente Tens o ou corrente por 25 50 o p28 problema Bandas s o en
45. s above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the unit T rke Tietoa Finnish Jos t t varusteita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehk isty varusteille saattaa olla avuton T m v line suunnitellaan sis laboratoriok yt lle vain Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen labo ratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan ennen yhdist minen k ytt j nnitelyijyj k ytt j nnit teeseen Kiert kaikki k ytt j nnitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun l mm nvaihtimen l pi l yhdist l mm nvaihdinta vesinapautuk seen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesi paine on unregulated o piii Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill t smennyksill Ylikuumen eminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Informatio
46. t waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of organische oplosmid delen in deel van het instrument voor Organische oplosmiddelen zullen onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische specificaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not speci fied by Hoefer Inc the protection provided by the equipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating main taining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrument Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not operate with buffer temperature
47. tampa de seguran a deve estar em lugar antes de ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguran a Circulam s gua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instru mento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade N o opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especifica es t cnicas Super aquecer causar agress o irrepar vel unidade Dulezit Informace Czech Pokud by toto za zen je pou ito zp sobem kter nen podle Hoefer Inc ochrana poskytovan na z klad za zen m e b t naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskyt nut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid musi b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj nap jen vede k Turn ve ker nap jen
48. ual do su rio Portugu s Hoefer SE600 Chroma Padr o de eletroforese dupla refrigerado Gel mu SE600X IM Portuguese Rev C0 05 12 A hu O e fe r e Conte do Informa es Importantes ji Residuos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE vii Gel de eletroforese Fun o e Descri o 1 ESPECIFICA ES wa aa dE e ad 2 Desembalar e Invent ri0 4 Instru es de opera o o o o oooomoo o 8 Prepare o sandu che de gel 8 Os geles de acrilamida 12 G is de gradiente o o o oooooooo 14 Preparac o de amostras e Carregando 16 Montagem Emma 18 Separar a amostra 23 Cuidados e Manutengao 26 Solu o de problemas 27 Bibliografias z 3 4 Sents zwa a SUMA m KoE 31 Informa es para pedidos 34 pi Informa es Importantes Portugu s Se este equipamento usado numa maneira n o especificada por Hoefer Inc que a protec o forne cida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc pode ser usada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguran a registrada por um nacionalmente recon hecido testando laborat rio A
49. ue a espessura do espacador Cologue a c nula de modo que assenta na parte inferior da sandu che a meio caminho entre os espacadores Opcional Ajustar a soluc o de acrilamida percentagem mais elevada para 15 w v de sacarose ou de 25 v v de glicerol para melhorar camadas Preparar a soluc o de mon mero Calcular o volume de soluc o de mon mero necess rio Dividir o volume total em meia e preparar este volume de ambas as soluc es de maior e menor percentagem de acrilamida o Despeje a soluc o light para a c mara de reser vat rio c mara mais afastada da sa da Abrir a torneira entre as c maras tempo suficiente para deslocar o ar e feche Despeje a soluc o pesado na c mara de mistura e cologue uma barra de agitac o para essa c mara Cologue o fabricante de gradiente para um agitador magn tico e comecar a agitac o a uma taxa gue se mistura bem mas n o introduz bol has na soluc o Misturar o gradiente e bombear a soluc o para o sanduiche Enguanto a soluc o 6 de agitac o comecar a bom bear a partir da c mara de mistura e abrir a torneira de passagem para a c mara de reservat rio Elevar a c nula a forma de liguido entra na sanduiche mantendo a ponta na superficie do gel Preparar g is mais como reguerido O Sobrepor cada gel com uma fina camada de gua butanol saturado gua ou tamp o de gel dilu do para evitar a exposi o ao oxig nio de gel L
50. viesadas ou distorcidas Corada coleta Perto da frente tamp o causa poss vel Prepara o de gel incompleta e polimeriza o rem dio Desgaseificar a solu o de empilhamento gel e evitar bolhas de sob os dentes do pente Interface irregular entre o empilhamento e executando os g is Sobrepor o gel rodando com gua saturada de butanol antes da polimeriza o come a para evitar a forma o de uma superf cie do gel desigual A prepara o das amostras concentra o do gel degrada o Dialisar ou dessalinizar a amostra Mol culas n o s o suficientemente limitada pelo tamanho resolver gel de poro aumentar a T As prote nas podem ser degradados por proteases end genas usar os inibidores da protease durante o passo de isolamento Perto do topo do gel quando a frente de tamp o atingiu o fundo concentra o do gel precipita o O tamanho de poro de gel muito pequeno diminuir o T do gel Resolving ou empilhamento A prote na precipitada Aquecer a amostra a uma tempera tura inferior 70 C ou menos para 1 2 min Tanto a parte superior e inferior do gel Controlar corante n o afiar para uma zona concentrada no gel de empilhamento concentra o do gel pobre de empilhamento O intervalo de peso molecular da amostra requer um gradi ente de concentra o de acrilamida para resolver a gama de tamanhos de prote na Despeje um alto gel
51. ylene glykol gennem varmeveksleren i s fald udrustet Forbind ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemiddelkilde hvor vandtrykket er unregulated Introducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk oplosningsmiddel ind i nogen del af instrumentet Organiske oplosningsmidler vil for rsage uboelig skade til enheden Driver ikke med stodpudetemperaturer over O pii maksimummet specificerede tekniske specifica tions Overheding vil forarsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleen glycol door de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar een waterkraan of koelmiddelbron nie
52. yret blir brukt i en mate ikke spesi fisert ved Hoefer Inc beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innendors labo ratoriumbruk bare Bare tilbehor og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og betjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent prover laboratorium Sikkerheten lokket m v re p plass for forbinding kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene for fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i s fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kjolemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk losemiddel inn i noe del av instrumentet Organi ske losemiddler vil forarsake irreparabel skade pa enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner A overop pheting vil for rsake irreparabel skade p enheten Wazne Informacje Polish Je eli ten sprz t jest wykorzystywany w spos b nie okre lone przez Hoefer Inc do ochrony przewid zianej przez urz dzenie mo e zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do u
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