Hoefer HE33 - Hoefer Inc
Contents
1. sobre a superf cie transiluminador ou deslize o gel sobre a superf cie para a exposi o m xima A bandeja de execu o de 95 transparente luz 302 nm e 40 transparente a 254 nm de luz Ver a amostra em 366 nm de luz UV ou reduzida a intensi dade da luz UV 302 nm para reduzir photonicking Para reduzir a fluoresc ncia de fundo de brometo de et dio n o acoplado o gel pode ser descoradas por imers o durante 5 minutos em 0 01 m de Malz ou durante 1 hora em 0 001 M MgS04 Descolora o torna mais f cil para a detec o de pequenas quantidades menos de 10 ng de DNA Sambrook se o 6 15 Bibliografia Ausubel et al eds Current Protocols in Molecular Biology Greene Publishing and Wiley Interscience New York 1993 Sambrook J Fritsch E F and Maniatis T Molecu lar Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Har bor Laboratory Press 1989 epl5 Solicita o de informa es Todas as quantidades s o 1 excepto onde indicado Unidade b sica e kit c digo Unidade de eletroforese mini submarino b sico HE33B Inclui gel executando bandeja bandeja de gel fundi o e n vel de bolha Pente de ordem e pente para tr s separadamente Unidade de eletroforese mini submarino kit HE33 8 1 5 O mesmo que acima mais um 8 bem 1 5 mm de espessura pente pente para tr s e os parafusos As pe as de reposi o Tamp o de c mara de montagem HE30 Tampa com cab2. a je li to vybav ena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak vody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapravi teln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifika cemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specifice ret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan maske sv kkes Dette instrument er designet for indend rs labora toriumbrug bare Bare tilbeh r og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan maske bruges for drive funk tionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en stramforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedl get m v re p plads for forbinding stromforsyningsblyet til en stromforsyning Drejer alle stromforsyningskontroller af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedl get Cirkulerer bare vand eller 50 50 vand ethylene glykol gennem varmeveksleren i s fald udrustet Forbind ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemiddelkilde hvor vandtrykket er unregulated Int
3. chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguran a Circulam s gua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instru mento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade N o opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especifica es t cnicas Super aquecer causar agress o irrepar vel unidade Dule it Informace Czech Pokud by toto za zen je pou ito zp sobem kter nen podle Hoefer Inc ochrana poskytovan na z klad za zen m e b t naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskyt nut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid musi b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj nap jen vede k Turn ve ker nap jen kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie vede bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda ethyleng lykolu prost ednictv m v m n k tepl
4. commissioning of your equipment Ce symbole indique que les d chets relatifs l quipement lectrique et lectronique ne doivent pas tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsichtli ch der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Questo simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparecchia ture elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalit di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante Este s mbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener m s informaci n sobre la forma de desechar el equipo e pvii E Fun o da unidade mini submarino eletroforese O Hoefer HE33 unidade de agarose horizontal destina se a electroforese r p
5. como o PS300B Definir o n vel de tens o eo tempori zador se estiver dispon vel de acordo com o grau de resolu o procurado e p7 Nota Para calcular o gradiente de voltagem dividir a configura o de tens o pela dist ncia entre os el ctrodos 12 7 cm e p8 R pidas de alta tens o executado Certas aplica es tais como o rastreio de amostras ou verificar a pureza da amostra pode ser realizada rapidamente sob condi es de alta tens o Arrefe a a base 20 C e limitar a execu o para 5 minutos ou menos a 500 V Mais lento menor tens o executado Um gradiente de tens o de 12 V cm 150 V separa 0 1 a 23 kb fragmentos de uma Hind III de digerir A DNA em 30 a 40 minutos utilizando 1 de gel de agarose e tamp o TBE 0 5 X rodando Alternati vamente usando as mesmas solu es esta amostra pode ser executado a 24 V cm 300 V com resolu o banda aceit vel em 20 a 30 minutos Refrigere a base antes do uso Tabela 1 As configura es de tens o e configura es de execu o recomendados tens o gradiente tempo V V em min 500 40 Ch 400 31 10 300 24 20 200 16 30 para 40 150 12 30 para 60 Para execu es r pidas de 20 minutos ou menos usar TBE 0 5 X e refrigerar a base para 20 C antes da utiliza o Tens o e os hor rios s o de 1 Agarose NA TBE 0 5X e uma base refrigerada Ap s a separa o 0 Importante Desligue a fonte de alime
6. dad certificada por un nacionalmente reconocido probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar antes de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desco necta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del l quido refrigerante donde la presi n del agua est libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente org nico en cualquier parte del instrumento Los solventes org nicos causar n da o irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del m ximo especific especificaciones t cnicas Reca lentar causar da o irreparable a la unidad Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillnan dah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaborato rium anvandning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller lever erade vid Hoefer Inc kan anvandas f r fungera underhalla och servicing denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen f re kop
7. debolita Questo strumento disegnato per I uso di labora torio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approvato o hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazionalmente ricon osciuto testando il laboratorio o piv Ilcoperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore e disin serisce i piombi di potere prima di togliere il coper chio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cosi equipag giato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acqua o qualunque fonte di refriger ante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento solventi organici causeranno il danno irreparabile all unit Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causer il danno irreparabile all unit Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utstyret blir brukt i en mate ikke spesi fisert ved Hoefer Inc beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innend rs labo ratoriumb
8. dispon veis que podem estender faixas de resolu o Um padr o comum uma Hind III digerir de fago lambda o que d oito fragmentos que variam em tamanho de 0 1 a 23 pares kb Para boa resolu o executar 45 minutos em um 10 cm de comprimento 1 em gel de agarose 0 5X gel TBE a 150 V Tabela 2 As concentra es de agarose para separar fragmentos de ADN de v rios tamanhos gama eficaz de resolu o de agarose fragmentos de DNA lineares kb 0 5 1 0 30 0 7 0 8 12 1 0 0 5 10 1 2 0 4 7 1 5 0 2 3 Current Protocols in Molecular Biology p 2 5 2 1993 epll Importante N o ajustar o pH destes buffers uma vez que s o preparados de acordo com a receita e pl2 RNA mobilidade RNA tamb m podem ser separados com base no tamanho Para evitar anomalias devido estru tura secund ria o ARN desnaturado antes ou durante a electroforese Por exemplo o RNA fragmenta previamente desnaturado com glioxal e dimetilsulf xido podem ser separados em g is neutros de agarose ou RNA pode ser fraccio nado em g is de agarose contendo hidr xido de methylmercuric ou formalde do Amostras de RNA geralmente requerem per o dos mais longos ou buffers que s o facilmente degradadas e assim o exigirem a circula o O Hoefer SUB20C e SUB25C unidades horizon tais s o recomendados para esta aplica o em vez do HE33 Executando buffers para ADN em g is de agarose Receitas para os dois mais comu
9. do E recomendado que os eletrodos ser substitu do apenas por t cnicos Hoefer Contacte o seu representante local para obter informa es e p9 Solu o de problemas problema solu o Amostra deformada bem Permitir que o gel para definir para um m nimo de 30 minu tos e se certificar de que est temperatura ambiente antes de remover o pente Ao remover o pente segur la em um pequeno ngulo e levantar muito lentamente para evitar que o gel de quebrar Tomar cuidado para n o danificar a bem com a pipeta durante o carregamento da amostra objectivo para o centro do po o e n o perfure a parte inferior com a ponta da pipeta As amostras n o correndo ao longo Se uma bandeja pente ou de execu o deformado substituir de um caminho reto Reduzir a tens o Escolha um buffer com a for a adequada i nica e capacidade de tamponamento A capacidade de tamponamento de TBE por exemplo maior do que a de TAE Se o buffer esgo tado parar o funcionamento remover a tampa e pipetar o buffer de cada c mara para dentro da c mara oposta para a reconstitui o do tamp o Se o gel n o uniforme bandeja o n vel de fundi o antes de vazar o gel D um duplo padr o de faixas O pente deve ser vertical para evitar a distor o forma bem Diminuir o n vel de tamp o de 1 mm acima da parte superior do gel para reduzir o gradiente de temperatura vertical Resolu o banda pobre Adicionar Fico
10. duktu korzysta jedynie zasilacza e jest nosz ce ozna kowanie CE lub bezpiecze stwa uwierzytelnione przez uznane na poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpiecze stwo lid musi by w miejsce przed pod czeniem zasilania prowadzi do zasilania Za wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kr tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organ icznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Informaci n Importante Spanish Si este equipo es utilizado en una manera no espe cificado por Hoefer Inc la protecci n proporcio nado por el equipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior del laboratorio s lo S lo accesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguri
11. fada e em seguida baix la para assentar sobre a parte inferior da bandeja de fundi o com capacidade para a outra extremidade da bandeja contra a almofada de espuma oposto a Preparar o pente s Cologue os dois slots no pente entre os soltos cabe cas de parafuso polegar e as costas do pente Aperte os parafusos at o pente apenas suportada Assen to do conjunto do pente sobre o aro da bandeja de fundic o e ajustar a parte inferior do pente de modo que cerca de 1 0 mm a partir da bandeja execu o Aperte os parafusos para prender o pente Para execu tar o dobro de muitas amostras preparar dois pentes Retire o conjunto do pente Coloque o conjunto de fundi o sobre uma superf cie de nivelamento e n vel usando o n vel de esp rito na bandeja funcionando como um guia 4 Verter a solu o de agarose arrefecido a 50 C para o tabuleiro de fundi o Oriente a montagem pente para que o pente enfrenta o bloco mais pr ximo de espu ma e encaix lo na borda da bandeja Verifique se o pente vertical para evitar distor es de forma bem Para executar o dobro de muitas amostras coloque o conjunto do segundo pente no centro do tabuleiro Permitir um m nimo de 30 minutos para que o gel para definir ep5 E Q Fig 3 Uma volta pente que se encaixa no rebordo do tabuleiro de fundi o posiciona o pente no gel Dois parafusos prender o pente ajust vel Para po os duas vezes
12. g A Laboratory Manual p B 23 1989 Ver tamb m Current Protocols in Molecular Biology p A 2 1 1993 epl3 epl4 De tampao de carregamento de amostra Tampao de carga 5X 25 Ficoll 400 0 25 Azul de bromofenol 10 ml Desionizada H20 a 7 0 ml Ficoll 400 2 5g Azul de bromofenol FW 691 9 25 0 mg Desionizada H20 a 10 0 ml Adicionar a amostra na propor o de modo que 1 5 do volume final tamp o de carga Tamp o de carre gamento aumenta a densidade da solu o Nota 1 Sacarose ou glicerol pode ser utilizado em vez de Ficoll 400 Nota 2 Xylene cyanol 0 25 que migra mais lentamente do que o azul de bromofenol pode ser adicionado como um marcador adicional se desejado A concentra o de agarose determina a posi o das bandas de corante em rela o a um polinucle tido iCorantes de rastreamento podem ser omitidos para eliminar obscure cendo e arrastando efeitos causados pelo comigration com menores de cidos nucl icos Tabela 3 Especifica es pente e volumes po os volume de amostra n mero do n mero espessura largura por 1 mm c digo de pente de po os mm pocos mm profund pl HE31A P 1 0 1 prep 2 ref 1 0 44 6 44 6 HE31A P 1 5 1 prep 2 ref 15 44 6 66 9 HE31A 8 1 0 8 1 0 6 5 6 5 HE31A 8 1 5 8 1 5 6 5 9 7 HE31A 12 1 0 12 1 0 3 9 39 HE31A 12 1 5 12 1 5 3 9 5 8 HE31A 16 1 0 16 1 0 2 6 2 6 HE31A 16 1 5 16 1 5 2 6 3 9 0 preparativa forma pentes dois po os de
13. ida de pequenas quantidades de cidos nucleicos em g is de agarose Um gel escalado para o rod zio de gel que cont m um ou dois pentes Oito pentes diferente est o dispon veis um m ximo de 32 amostras pode ser executado se dois 16 bem pentes s o utilizados Depois dos conjuntos de gel o tabuleiro de execu o transferido para a plataforma da unidade horizontal A base da unidade cont m l quido de arrefecimento que pode ser arrefecida antes da execu o Esta capacidade de refrigera o passiva permite r pi das corridas de alta tens o codificados por cores leva conectar eletrodos na base de unidade para o fornecimento de energia Fig 1 Componentes principais Ver Figura 2 para uma ilustra o do kit de fundi o conectores de eletrodo 2 execu o AN suporta a bandeja em execuc o N encher a base com N glicol 50 50 de etileno gua epl Esta declara o de conformidade v lida apenas para o instrumento quando ele e utilizado em locais de laborat rio e usado como entregues a partir de Hoefer Inc exceto para altera es descritas no manual do usu rio e e ligado a outros CE rotulados instrumentos ou produtos recomendados ou aprovados por Hoefer Inc e p2 Desempacotando Desembrulhe com cuidado todos os pacotes e comparar o conte do com a lista de embala gem certificando se todos os itens chegaram Se qualquer parte estiver faltando entre e
14. ita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehk isty varusteille saattaa olla avuton T m v line suunnitellaan sis laboratoriok yt lle vain e Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote e Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen labo ratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan ennen yhdist minen k ytt j nnitelyijyj k ytt j nnit teeseen e Kiert kaikki k ytt j nnitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta e Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun l mm nvaihtimen l pi l yhdist l mm nvaihdinta vesinapautuk seen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesi paine on unregulated o piii Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill t smennyksill Ylikuumen eminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Information Importante French Si cet quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la protection fourni par V guipement pourrait tre dimi
15. lectroforese o gel pode ser coradas e fotografadas apagou ou secou se para autorradiografia Encha a base com refrigerante Mesmo se nenhum arrefecimento requerido importante para preencher a base com a solu o de refrigera o adequado antes da primeira utili za o porque a solu o fornece um dissipador de calor necess rio 0 Preparar 600 ml de 50 50 de etileno glicol gua Opcional Para ajudar a ver mais claramente os pocos durante o carregamento da amostra adicionar uma gota ou duas de corante sol vel ou cor de alimento para a solu o de refrigera o Localizar os dois orif cios de entrada na borda supe rior da base Encher a cavidade de base t o completa quanto poss vel com refrigerante usando uma seringa de 50 ml ou uma bomba a Empurrar um tamp o de borracha cinza em cada buraco tomando cuidado para gue a ficha est bem encaixada Cologue a base preparada em um balde de gelo ou em uma geladeira ou freezer definir n o inferior a 20 C para cerca de uma hora antes do uso A base estar sempre pronto se voc guarde o no frigor fico ou congelador ep3 Aten o O brometo de et dio um agente mutag nico conhecido Use sempre luvas ao manusear Fig 2 Gel kit casting Aproximar se do bloco de espuma com uma extremidade do tabuleiro em execu o e em seguida pres sione suavemente a borda bandeja contra a almofada comprimindo o suficiente para pe
16. len onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische specificaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not speci fied by Hoefer Inc the protection provided by the eguipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating main taining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrument Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not operate with buffer temperatures above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the unit T rke Tietoa Finnish Jos t t varuste
17. ll glicerol ou sacarose para o tamp o de car regamento de amostra para assegurar que a amostra vai para o fundo do po o Ficoll o preferido Assegure se a amostra completamente dissolvido Reduzir a tens o Reduzir a concentra o da amostra Reduzir o volume da amostra Pelo menos 1 mm de gel abaixo da parte inferior do pente necess ria para prevenir amostras de vazamento para fora do fundo bem Reduzir a concentra o de sal da amostra Verificar a actividade enzim tica a amostra pode exigir mais tempo a digest o ou um tamp o de restri o diferentes Prepare nova amostra se voc suspeita de contamina o nuclease Escolha de agarose com um valor endosmose baixa Almofadas de espuma casca de fora Instale a bandeja funcionando como descrito na p gina 5 n o pressionar para baixo no lugar e plo Notas amortecedores e volumes Eletroforese em gel de agarose notas Electroforese em gel de agarose pode ser usado para separar fragmentos de DNA t o pequenas como 0 1 kb ou menos G is de poliacrilamida s o usados geralmente para fragmentos menores que 1 kb DNA mobilidade Sugerido concentra o de agarose para separar fragmentos de diferentes tamanhos dada na Tabela 2 abaixo Outros factores que afectam os resultados de separa o incluem o tamp o de corrida o ajuste de tens o a temperatura a conforma o e na presen a de brometo de et dio Agaroses especiais est o
18. m contato com seu escrit rio de vendas local Inspecione todos os componentes de danos que possam ter ocorrido quando o aparelho estava em tr nsito Se qualquer parte estiver danificado contate imediatamente a transportadora Certifique se de manter todo o material de embalagem para pedi dos de indemniza o ou de reembalagem caso seja necess rio para devolver a unidade Especifica es Max tens o 500 V durante 5 minutos ou menos Max pot ncia 15W Max atual 500 mA Max operando temp 50 C Max volume de tamp o 250 ml Refrigerante necess ria 600 ml 50 50 de gua glicol de etileno Gel tamanho 7 x 10 cm As condi es ambientais de opera o Uso interno 4 40 C Humidade at 80 Altitude de at 2000 m Instala o categoria II Grau de polui o 2 Dimens es L x P x A 24 x 13x7 cm Peso 0 4 kg base tampa leva apenas EN61010 1 UL61010A 1 CSA C22 2 1010 1 CE Certified Certifica es de produtos Importante N o encha a base com anticongelante comercial solventes org nicos ou gua pura Nota N o necess rio para substituir o refrigerante Instru es de opera o G is de agarose s o primeiro preparadas utili zando o kit de fundi o em gel As amostras s o ent o carregados em po os e electroforetica mente separadas O brometo de et dio fluores cente corante pode ser adicionado ao tamp o de gel ou electroforese ou ambos para controlar o progresso da separa o Ap s a e
19. mais um pente segundo pode ser colocado no centro do gel e p6 Uma vez que o gel definida remover o pente cui dadosamente Parcialmente levantar e ligeiramente inclinar o pente em uma extremidade e em seguida lentamente para o retirar do gel Puxando o pente para cima cria um v cuo nos po os que podem levan tar o gel da bandeja O Remover o tabuleiro de correr e gel agarrando as al as da bandeja e pressionando contra uma das almofadas de espuma Uma vez que a bandeja limpa o bloco oposto retir lo Transferir o tabuleiro de exe cu o e de gel base refrigerada volta pente parafusos 2 Aten o O brometo de et dio um agente mutag nico conhecido Use sempre luvas ao manusear Usar culos de prote o UV e proteger a pele quando se utiliza uma l mpada UV Nota Se nenhum corante foi adicionado ao l quido de arrefecimento colocar a base sobre um fundo escuro para ver os po os com mais facilidade Nota Na configura o m xima a unidade come a logo que o sobreaquecimento da base refrigerada atingir a temperatura ambiente Se o sobreaquecimento n o controlada o gel ir derreter e ou a base da unidade ir deformar A corrida de eletroforese Consulte as notas amortecedores e se o de volumes para informa es adicionais O Arrefe a a base antes da utiliza o especialmente quando as configura es de tens o mais elevados ser o utilizados
20. mente utilizados tamp es de funcionamento para a electroforese do DNA est o listados abaixo A for a i nica destes buffers apropriada para a aplica o 1 10X Tris borato EDTA tamp o de estoque TBE 0 89 M Tris 0 89 M cido b rico 20 mM de EDTA pH 8 2 1000 ml Tris base FW 121 1 0 89 M 108 0 g De cido b rico FW 61 8 0 89 M 55 0 g EDTA Soluc o 0 5 M pH 8 0 Solu o 3 0 02 M 40 0 ml Deionizada H20 para 1000 0 ml Mexa N o ajustar o pH Antes de usar diluir guer para 0 5X para se obter 45 mM de Tris base 45 mM de cido b rico e 1 mM de EDTA Esta dilui o muitas vezes usado porgue a corrente continua a ser baixa resultando em menos calor 0u 1X para se obter 89 mM de Tris base 89 mM de acido b rico e 2 mM de EDTA 2 10X Tris acetato EDTA estoque TAE 0 4 M Tris 0 2 M cido ac tico 10 mM de EDTA pH 8 4 1000 ml Tris base FW 121 1 0 40 M 48 4 g Acido ac tico 99 5 0 20 M 11 4 ml EDTA Solu o 0 5 M pH 8 0 Solu o 3 0 01M 20 0 ml Deionizada H20 para 1000 0 ml Mexa N o ajustar o pH Diluir a 1X antes da utiliza c o para se obter 40 mM de Tris base cido ac tico 20 mM e EDTA 1 mM 3 Solu o EDTA cido etilenodiaminotetrac tico 0 5 M pH 8 0 100 ml Na2EDTA 2H20 FW 372 2 0 5 M 18 6 g Deionizada H20 para 70 0 ml NaOH 10 M para pH 8 0 5 0 ml Deionizada H20 para 100 0 ml iModificado de Sambrook J Molecular Clonin
21. ntac o desco necte os cabos e retire a tampa e Se nenhum brometo de et dio foi adicionado ao gel ou a amostra antes da execu o manchar o gel em uma solu o de 0 5 a 1 0 ug ml de brometo de et dio em gua ou tamp o Limpar a unidade como descrito abaixo Importante Nunca autoclave qualquer componente da unidade de eletroforese ou kit de fundi o Cuidados e manuten o Limpeza Ap s cada uso limpe a unidade com um deter gente neutro e gua lavar abundantemente com gua destilada e deixar secar ao ar Nunca use produtos de limpeza abrasivos N o exponha a unidade para solu es ou vapores de arom tico ou hidrocarbonetos halogenados cetonas ste res lcoois mais de 30 ou cidos concentra dos mais de 25 Para reduzir DNase e RNase contamina o embeber a c mara tamp o ou kit de fundi o durante 10 minutos em um per xido de hidro g nio a 3 H202 solu o e lavar bem com DEPC tratada a gua autoclavado desionizada Sambrook et al 01 07 40 Substitui o de almofadas de espuma Remover almofadas de espuma usadas Retire a tampa do adesivo sobre uma almofada de espuma nova Alinhar a almofada de modo a que ele vai assentar sobre a parte inferior da bandeja ao longo de um lado 7 cm curto lado adesivo para a parede interior e em seguida pression lo no lugar Repita com a almofada em segundo na parede oposta ao primeiro bloco Substituindo o eletro
22. nu e Cet instrument est con u pour l usage de labora toire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont approuv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entrete nir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationale ment reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre sa place avant connecter l alimentation mene une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par l exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l exchanger de chaleur un robinet d eau ou la source d agent de refroidissement ou la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organique dans n importe quelle partie de instrument Les dissolvants organiques causeront des dommages irr parables l unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications techniques La surchauffe causera des dommages irr parables l unit Wichtige Informationen German Wenn diese Ausr stung gewisserma en nicht angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausr stung zur Verf gung gestellte Schutz verschlechtert
23. os de alta tens o HE36 Preencha fundo ficha HE38 Preencha topo ficha HE38TP Bandeja de Gel em execu o UVT 7 x 10 cm HE42 10 Fundi o bandeja 7 x 10 cm HE45 10 Gel lan ando kit com tabuleiro de fundi o gel e correr bandeja 7 x 10 cm HE47 10 Veda o de espuma pk 2 HE48 A alta tens o leva SE6056 HV Kit de substitui o de eletrodo HE39 N vel de bolha SER11 SE6056 HV HE42 10 HE45 10 e p16 Pentes Especificar espessura e n mero de po os como tabelados abaixo Encomende uma volta pente separadamente espessura mm n mero de po os c digo 1 0 preparativa HE31A P 1 0 1 0 8 HE31A 8 1 0 1 0 12 HE31A 12 1 0 1 0 16 HE31A 16 1 0 1 5 preparativa HE31A P 1 5 1 5 8 HE31A 8 1 5 1 5 12 HE31A 12 1 5 1 5 16 HE31A 16 1 5 De volta o pente com 2 parafusos HE31 BK Parafusos de reposi o para costas pente pk 12 HE31 S Produtos associados Hoefer PS300B Alimenta o PS300B 300 V 500 mA 90 W MacroVue UV 20 Transilluminator 115 V UV20 115V 230 V UV20 230V epl7 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Toll Free 1 800 227 4750 Telefone 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail support amp hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer uma marca registrada da Hoefer Inc O 2012 Hoefer Inc Todos os direitos reservados Impresso nos USA Hoefer
24. ou quando a separa o ir requerer mais do que 30 minutos Nota Para monitorizar o progresso de separa o ou adicionar 0 5 ug ml conc final De brometo de et dio para o tamp o de corrida agora ou adicionar 50 ug ml concentra o final Brometo de et dio para o tamp o de amostra Para visualizar o progresso desligue a fonte de alimenta o retire o conjunto da tampa e mantenha uma l mpada UV port til perto do gel Adi o de brometo de et dio para o tamp o de corrida ou amostra retarda a migra o ligeiramente Detec o por este m todo n o t o sens vel como colora o e visualiza o num transiluminador Veja a detec o de DNA p gina 15 e Preencha ambas as c maras do buffer com tamp o de corrida at que o buffer de aproximadamente 1 mm de profundidade ao longo do gel Isso requer cerca de 220 ml Coloque as amostras Adicionar amostra para tamp o de amostra 5X carregamento e mistura 1 5 do volu me final tamp o de carga ver p gina 14 Use um micro pipeta para carregar cada amostra tomando cuidado para evitar a perfura o do fundo bem ou entrapping bolhas o Colocar a tampa de modo que o c todo chumbo preto na extremidade mais pr xima do po o da amostra Amostras de cidos nucleicos migram para o nodo de chumbo vermelho Ligar os fios com c digo de cores vermelho com vermelho e preto para preto a uma fonte de alimenta o aprovado tais
25. pla kraften tillg ngen blyen till en kraft tillg ng V nder sig alla kraft tillg ng kontroller av och kopplar bort kraften blyen f re flytta s kerheten locket Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom v rmen exchanger i s utrustad fall Inte kopplar v rmen exchanger till en vatten kran eller n got kylmedel k lla d r vattnet trycket r unregulated Inf r aldrig kylv tska eller n got organiska l sningsmedel in i n gon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anv nd inte med buffert temperaturer ver det h gsta angivna tekniska specifikationerna verhettning skulle orsaka irreparabla skador p enheten o pvi Portugu s English French German Italian Spanish IM 134 D IM 1 1 Res duos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE Este s mbolo indica que os res duos de equipamentos el ctri cos e electr nicos n o devem ser eliminados como res duos urbanos indiferenciados e devem ser recolhidos separadamen te Entre em contato com um representante autorizado do fabricante para obter informa es sobre o desmantelamento do seu equipamento This symbol indicates that the waste of electrical and electro nic equipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning the de
26. refer ncia para os padr es MW um em cada lado do preparativa bem O primeiro n mero o volume da amostra mm no po o preparativa o segundo o volume mm na refer ncia bem Cuidado O brometo de et dio um agente mutag nico conhecido Use sempre luvas ao manusear Cuidado Usar culos de prote o UV e proteger a pele quando se usa qualquer fonte de luz UV Nota O brometo de et dio retarda a migra o do DNA por cerca de 15 Nota Minimizar o tempo de colora o para evitar pequenos fragmentos de cidos nucleicos a partir de fora da difus o do gel Detec o de DNA O ADN pode ser detectada quer pela fluoresc ncia do brometo de et dio ligado ou por autorradiografia de DNA marcado radioactivamente O brometo de et dio 0 5 ug ml pode ser adicionado ao tamp o de corrida para monitorizar o progresso de amostras porque a fluoresc ncia do corante sob uma l mpada UV revela a localiza o da banda Para verificar o progresso desligue a fonte de alimenta o e retire a tampa da unidade de agarose Segure um port til l mpada UV perto da bandeja de execu o Recoloque a tampa e ligar o aparelho novamente para retomar a eletroforese Alternativamente ap s a electroforese o gel mancha em uma solu o de brometo de et dio 0 5 ug ml H20 durante 15 a 60 minutos e em seguida ver ou fotografar a amostra num transiluminador de UV Para fotografar o gel quer colocar o tabuleiro rodan do
27. rmitir que a extremidade oposta da bandeja rodando a cair totalmente dentro da bandeja de fundi o antes de selar contra a almofada de espuma e p4 UV transparente bandeja de execu o Lan ar o gel sobre esta bandeja em seguida transferir gel base de unidade horizontal para eletroforese Preparar solu es 0 Preparar 250 ml de tamp o de corrida Consulte a p gina 12 para receitas de usados eletrofor ticos buffers em execu o a Preparar o tamp o de carregamento de amostra Con sulte a p gina 14 para uma receita e uma tabela de reguisitos de volume para cada tamanho de comb Preparar aproximadamente 7 ml de solu o de agaro se por mm de espessura de gel Por exemplo um gel de 3 mil metros requer 0 3 cm x 7 x 10 cm 21 ml Dissolve se de agarose em tamp o de execu o de calor de acordo com as instru es que acompanham a agarose e permitir que a solu o arrefecer at 50 C antes de verter para o tabuleiro de fundi o Opcional Adicionar 0 5 ug ml de brometo de et dio para a solu o de gel para observar a separa o durante a electroforese almofadas de gel bandeja espuma 2 de fundi o Lan ai a gel O Instale a bandeja de execu o Segure firmemente a bandeja de fundi o com uma m o Com a outra m o o local de uma extremidade da bandeja execu o contra a almofada de espuma na borda inferior pressione a bandeja contra a almo
28. roducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk oplosningsmiddel ind i nogen del af instrumentet Organiske opl sningsmidler vil for rsage uboelig skade til enheden Driver ikke med stodpudetemperaturer over O pii maksimummet specificerede tekniske specifica tions Overheding vil forarsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleen glycol door de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar een waterkraan of koelmiddelbron niet waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of organische oplosmid delen in deel van het instrument voor Organische oplosmiddelen zul
29. ruk bare Bare tilbeh r og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og betjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent pr ver laboratorium Sikkerheten lokket m v re p plass f r forbinding kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene far fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i sa fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kj lemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk l semiddel inn i noe del av instrumentet Organi ske l semiddler vil for rsake irreparabel skade p enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner overop pheting vil for rsake irreparabel skade p enheten Wazne Informacje Polish Jezeli ten sprzet jest wykorzystywany w spos b nie okreslone przez Hoefer Inc do ochrony przewid zianej przez urz dzenie mo e zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do u ytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i cz ci zatwierdzone lub dostarc zone przez Hoefer Inc mog by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obs ugi tego pro
30. ual do usu rio Portugu s Hoefer HE33 Eletroforese mini submarino mu HE33 IM Portuguese Rev 10 07 12 H O e fe r Conte do Informa es ImportanteS 12 42422241411211 ii Res duos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE 1111111 vii Func o da unidade mini submarino eletroforese ecoiosesias soja damas 1 Desempacotando a awa awa PRA ciganas aaa pan 2 ESPECI ICACO Sicuani dow Kendra wl 2 Instru es de opera o as ay a RE PA EE AA REA 3 Cuidados e manuten o ii ii 9 Solu o de problemas A 10 Notes amortecedores e Volumes 11 Bibliografia cantonal cit RE 15 Solicita o de informa es ee 16 epi Informa es Importantes Portugu s Se este equipamento usado numa maneira n o especificada por Hoefer Inc que a protec o forne cida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc pode ser usada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguran a registrada por um nacionalmente recon hecido testando laborat rio Atampa de seguran a deve estar em lugar antes de ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os
31. werden Dieses Instrument wird f r den Innenlaborge brauch nur daf r entworfen Nur Zus tze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer Inc kann f r das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produk tes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein f hrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen fiihrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers Athylens durch den W rmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder K hlmittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische L sungsmittel in jeden Teil des Instru mentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen ber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funktionieren Die Uberhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Informazioni Importanti Italian Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere in
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