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Metodi - CISBA

1. IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti 9 C 3 Mezzo di conservazione Il mezzo si prepara sciogliendo a 37 C in agitazio 60 g di D glucosio C H 0 4g di cloruro di sodio NaCl 2g di L istidina 0 5 g di sieroalbumina BSA Se necessario si aggiusta la soluzione a pH 7 2 0 2 con NaOH 1M o HCI IM Si porta a 100 mL con acqua distillata La soluzione non pu essere conservata per cui si consiglia di prepararla fresca ogni volta prima del l uso 200 FAU Misurare l assorbanza di ciascuna soluzione a 5778 nm e tracciare una curva di taratura da utilizzare per le misure di torbidit della sospensione batterica APPENDICE D Risultati del test di intercalibrazione L Istituto di Ricerca sulle acque ha condotto nel 1994 un test di intercalibrazione utilizzando per il saggio due sistemi disponibili commercialmente il MICROTOX fornito dalla Microbics Carisbad California USA e il LUMISTox fornito dalla Dr Lange Dusseldorf Germa nia I laboratori che hanno partecipato al test sono 1 seguenti C 4 Determinazione fotometrica della torbidit secondo ISO 7027 1984 per il MICROTOX Apparecchiatura fotometro e spettrofotometro per misu SMPA USL 8 Pistoia Dr A Corsini re a 578 nm LSP USSL 24 Grugliasco TO Dr E Garrou Sig P Giansanti PMIP USSL 47 Mantova Dr T Magnani SMPA USL 25 Piombino Dr G Sbrilli PMP USL Reggio Emilia Dr
2. SAGGIO DI TOSSICIT ACUTA CON BATTERI BIOLUMINESCENTI Metodo per la determinazione dell inibizione della bioluminescenza emessa da Vibrio fischeri RIASSUNTO Il saggio che utilizza il batterio bioluminescente Vibrio fischeri viene proposto per determinare gli effetti tossici a breve termine 15 30 minuti di campioni d ac qua superficiale potabile o di scarico o solidi estratti e eluati di sedimenti e fanghi Il saggio permette di calco lare per ciascun campione i valori di EC EC o la diluizione di non effetto Sono riportati nel metodo 1 risultati di un test di intercalibrazione condotto con alcune sostanze di riferimento SUMMARY A standardized method for the determination of 15 30 min toxicity of Vibrio fischeri bioluminescent bacteria is evaluated The proposed method can be applied for the analysis of liquid superficial and drinking waters eluates and wastes and solid sediments and muds samples and permits the quantification of the EC and EC values and of the no effective sample dilution The results of a inter laboratory ring test conducted with reference substances are illustrated IL metodo stato discusso ed approvato da un sottogruppo dei Metodi Biologici composto da Bielli E Caldini G Corsini Gaiter S Garrou E Giansanti P Magnani T Rampa P Sbrilli G Spaggiari R e Guzzella L a cura di L Guzzella IRSA CNR Brugherio Milano 1 INTRODUZIONE 1 1 OBIETTI
3. B Fig 1 Ceriodaphnia dubia A femmina in attivit riproduttiva partenogenetica B femmina con efippio C maschio modificata da BERNER 1986 Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia 17 Il capo allungato e compresso nettamente distinto tramite un seno cervicale dal carapace Quest ultimo che provvisto di una reticolatura poligonale molto evidente termina dorsalmente con un angolo aguzzo e una corta spina appena pronunciata L individuo di sesso maschile illustrato in Fig 1 ha dimensioni di poco inferiori e forma pi slanciata meno tondeggiante Le sue antennule sono allungate con un flagello terminale molto sviluppato Altrettanto vale per il primo paio di appendici toraciche la cui forma finalizzata all accoppiamento Sia nella fem mina che nel maschio l artiglio terminale del postaddo me presenta un pettine finemente setoloso Fig 1 e 2 La presenza di C dubia stata documentata nella fascia litorale dei laghi nei piccoli bacini e nelle raccolte d acqua temporanee praticamente di tutto il mondo diffusa negli stessi distretti di una specie molto simile nota come C reticulata anche se rispetto a questa decisamente pi rara presente sul territorio nazionale dove stata rinvenuta in Istria nel tratto inferiore del Po in Abruzzo e in Sicilia MARGARITORA 1983 anche se spesso stata citata col sinonimo
4. Sweerts J P et al 1986 Metabolic activities in flocculent surface sediments and underlying sandy littoral sediments Limnol Oceanogr 31 2 330 338 BA 3 89 90 Arata P et al 1989 Importanza delle praterie di Posidonia oceanica nel sistema marino costiero e degli interventi per la loro salvaguardia Acqua Aria 5 555 571 BA 4 89 103 McCtaucuerty ef al 1985 Forest litter decomposition in relation to soil nitrogen dynamics and litter quality Ecolo gy 66 1 266 275 BA 5 89 112 ZOPPINI A et al 1988 Misure di ATP cellulare per la stima delle biomasse di microrganismi acquatici Inquinamento 10 60 63 BA 5 89 113 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Abstracts Rurro S et al 1988 Contributo alla conoscenza della distri buzione degli Anfipodi nel Veneto orientale Riv drobiol 27 2 3 431 448 BA 3 4 91 189 IsMAiL N S 1986 Community structure of macrobenthic invertebrates in sandy beaches of the Jordan Gulf of Aqaba Red Sea Int Rev ges Hydrobiol 71 2 225 232 BA 1 91 174 SCHINDLER D W 1988 Confusion over the origin of alkalinity in lakes Limnol Oceanogr 33 6 part 2 1637 1640 BA 2 91 183 THRELKELD S T 1988 Planktivory and planktivore biomass effects on zooplancton phytoplancton and the trophic ca scade Lymnol Oceanogr 33 6 part 1 1362 1375 BA 2 91 185 Lami A et al 1981 I batteri fotosintetici
5. Emerson J W 1971 Channellization a Case study Sc v 173 july 325 326 BA 1 89 65 Butt W B et al 1974 Impact of mining gravel from urban stream beds in the Southwestern United States Geology april 171 174 BA 1 89 66 Grecory K J 1979 Hydrogeomorphology how applied should we become Progress in Phys Geogr 3 a 84 101 BA 1 89 67 GREGORY K J 1982 Fluvial geomorphology less uncertainty and more practical application Progress in Phys Geogr 6 427 438 BA 1 89 68 FERNHOLZ W B 1979 To determine the significance of wing dams riprap and sand as fishery habitat Mississippi River Wrk Unit Annual Report BA 1 89 69 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Abstracts KeLLER E A 1975 Channellization a search for a better way Geology may 246 248 BA 1 89 70 MosLey M P 1986 River channel inventory habitat and instream flow assessment Progress in Phys Geogr 10 494 523 BA 1 89 71 Brookes A 1985 River channellization traditional engine ering methods physical consequences and alternative prac tices Progress in Phys Geogr 9 a 44 73 BA 1 89 72 Drake J A 1984 Species aggregation the influence of detri tus in a benthic invertebrate community Hydrobiologia 112 109 115 BA 2 89 73 Lena B M PETERSEN ef al 1983 Anomalies in hydropsychid capture nets from polluted streams Freshwater Biology 13 185 191 BA
6. In questo caso la procedura da seguire quella descritta per 1l saggio con diluizione cfr par 4 6 VALIDIT DEL SAGGIO I risultati dei saggi sono giudicati accettabili se al termine del periodo di esposizione la sopravvivenza degli organismi di controllo 2 90 e se la concentrazione di ossigeno disciolto si mantenuta gt 40 del valore di saturazione Pur senza imporre altri vincoli alla validit del saggio consigliabile la conduzione periodica di test in condizioni standard con un tossico di riferimento quale ad esempio il bicromato di potassio o il pentaclorofenolo Questa pratica fa si che sia disponibile un ampia serie di valori di LC del test prescelto rispetto alla quale dovreb be essere possibile evidenziare delle condizioni sperimen tali o lotti di organismi per qualche motivo anomali In condizioni normali il risultato di ogni nuovo saggio di riferimento dovrebbe collocarsi entro l intervallo definito dal valore medio delle precedenti LC e dal doppio della Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia 15 loro deviazione standard media 2 D S Viceversa se la LC del tossico di riferimento si colloca all esterno di questo intervallo di sicurezza tutti i dati ottenuti con il medesimo lotto di organismi e in quel periodo sperimen tale dovrebbero essere considerati con cautela A scopo informativo vengono riportati alcuni
7. VorrERRA L Valutazione quantitativa di salmonelle in fan ghi di risulta BA 5 94 GHETTI P F Il mappaggio biologico dei corsi d acqua un approccio sempre vitale e stimolante BA 2 3 96 Bopon M GarrER S RAFFETTO G Span S Proposte di perfezionamento del metodo I B E BA 2 3 96 BACCHETTA R MAGNETTI P Theromyzon cercasi BA 5 96 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Segnalazioni SEGNALAZIONI Fiumi amp C MANZINI SPAGGIARI ed Ecologia dell ambiente fluviale Prov RE USL 9 RE CISBA 1986 BA 1 87 SILIGARDI ed Esperienze e confronti nell applicazione degli indicatori biologici in corsi d acqua italiani Prov Aut Tren to CISBA 1986 BA 1 87 GHETTI I macroinvertebrati nell analisi di qualit dei corsi d acqua indice biotico E B I modif Ghetti 1986 Prov Aut Trento 1986 BA 1 87 D GiroLamo Mancini Indici biotici per la valutazione della qualit delle acque un approccio alle tecniche di campiona mento e di elaborazione dei dati stisan 1986 BA 2 87 MARCHETTI L eutrofizzazione Un processo degenerativo del le acque Angeli Milano 1987 BA 3 87 SANSONI et al Corsi d acqua del litorale apuano effetti inquinanti della polvere di marmo Com Mont Apuane 1983 BA 3 87 Mappaggio biologico strumento di valutazione della qualit delle acque correnti Esperienze toscane Reg Toscana 1987 BA 3 87 Barpacc
8. punto a aventi approssimati vamente le stesse caratteristiche chimiche e in particola re la stessa durezza del corpo idrico recettore oggetto del controllo In qualche caso anche possibile operare modi ficando la composizione di un acqua naturale purch di qualit adeguata previa aggiunta di sali reagenti di grado analitico e nelle quantit necessarie Il prelievo di acque naturali deve essere effettuato immediatamente prima del loro impiego e comunque non oltre le 96 h dallo stesso mantenendo refrigerati i campioni 4 C quando se ne faccia uso a pi di 24 h dalla raccolta Se infine lo scopo del saggio quello di esaminare Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia 13 gli eventuali effetti additivi o comunque le interazioni tra i contaminanti presenti nello scarico e quelli veicolati dal recettore come acqua di diluizione si user quella del recettore stesso indipendentemente dal suo grado di con taminazione prelevata a monte o al di fuori dell influenza dello scarico in esame In questo caso necessario aggiun gere un gruppo di organismi di controllo esposti alla sola acqua di allevamento cfr Appendice A3 3 4 ILLUMINAZIONE Gli organismi esposti ai campioni da saggiare sono mantenuti alle stesse condizioni di illuminazione a cui sono allevati La sorgente luminosa e costituita da un sistema di lampade fluorescenti ad ampio spettr
9. 1992 A hypothesis for the cause of low F M filament bulking in nutrient removal activated sludge sy stem Wat Res 26 6 867 869 BA 6 95 350 MEZZANOTTE V et al 1995 Analisi di fosforo e boro in alcuni impianti di depurazione urbani Apporto pro capite capaci ta di rimozione e concentrazione nei fanghi Inquinamento 7 40 45 BA 6 95 351 Depurazione seminaturale GersBERG R M et al 1986 Role of aquatic plants in wastewa ter treatment by artificial wetlands Water Research 20 3 363 368 BA 1 88 33 BELL J P et al 1987 Removal of hazardous organic pollutant by biomass adsorption J W P C F 59 4 191 BA 2 88 39 Bowner K H 1987 Nutrient removal from effluents by an artificial wetland influence of rhizosphere aeration and preferential flow studied using bromide and dye tracers Water Research 21 5 591 599 BA 4 88 58 Oron G et al 1988 Nitrogen removal and conversion by duckweed grown on waste water Water Research 22 2 179 184 BA 4 88 59 VuiLLor M et al 1987 French experience in the operation and maintenance of wastewater treatment lagoons Water Sc Techn 19 12 333 335 BA 6 92 243 Desusk T A et al 1987 BOD removal in floating aquatic macrophyte based wastewater treatment systems Water Sc Technol 19 12 273 279 BA 2 93 258 Cooper P F et al 1990 The use of reed bed treatment systems in the UK Water Sc Technol 22 3 4 57 64 BA 2
10. 257 280 BA 1 87 8 MaponI P 1984 Ecological characterization of different types of watercourses by the multivariate analysis of ciliated protozoa populations Arch Hydrobiol 100 2 171 188 BA 3 87 30 Moss D et al 1987 The prediction of the macroinvertebrate fauna of unpolluted running water sites in Great Britain using environmental data Freshwater Biology 17 41 52 BA 4 88 57 SABATER S et al 1987 Water quality and diatom communi ties in two catalan rivers N E Spain Water Research 21 n 8 901 911 BA 2 89 79 RECCHIA F et al 1988 Osservazioni sui licheni nelle vicinan ze di un cementificio Arch Bot e Biogeogr It 64 1 2 8 18 BA 4 89 94 SCHINDLER D W 1987 Detecting ecosystem responses to an thropogenic stress Can J Fish Aquat Sci 44 6 25 BA 1 90 120 Batty L 1989 Birds as monitors of marine environments Biologist 36 3 151 154 BA 1 90 121 Moutuon J 1986 Principes g n raux pour une m thode d suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Abstracts appr ciacion de la qualit globale des s diments lacustres l aide d une analyse simplifi e des malacoc noses Annis Limnol 22 3 209 217 BA 1 90 119 ALEBIC JunETIC A et al 1989 Air pollution damage to cell membranes in lichens Results of simple biological test applied in Rijeka Yugoslavia Water Air and Soil Pollution 47 25 33 BA 3 4 91
11. 93 259 ScuiERUP H H et al 1990 Danish experience with emergent hydrophyte treatment systems EHTS and prospects in the light of future requirements on outlet water quality Water Sc Technol 22 3 4 65 72 BA 2 93 260 MippLEBROOKS E J 1987 Design equations for BOD removal in facultative ponds Water Sc Technol 19 12 187 193 BA 2 93 261 Carr J et al 1987 Effects of maturation on the characteri stics of wastewater stabilization pond sludges Water Sc Technol 19 12 169 175 BA 2 93 262 Pearson H W et al 1987 Factor determining algal popula 15 tions in waste stabilization ponds and the influence of algae on pond performance Water Sc Technol 19 12 131 140 BA 2 93 263 LANSDELL M 1987 The development of lagoons in Venezue la Water Sc Technol 19 12 55 60 BA 2 93 264 OLESZKIEWICZ J A et al 1987 Wastewater lagoons in a cold climate Water Sc Technol 19 12 47 53 BA 2 93 265 NAREASIAH K S et al 1990 Sludge accumulation in aerated facultative lagoons operating in colder climate Water Sc Technol 22 3 4 77 82 BA 2 93 266 VuiLLor M et al 1987 Waste stabilization ponds in Europe a state of the art review Water Sc Technol 19 12 1 6 BA 2 03 267 BucxsTEEG K 1987 German experience with sewage treat ment ponds Wat Sci Tech 19 12 17 23 BA 5 93 268 Boutin P et al 1987 Waste stabilization ponds in France a
12. Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale HO ia olentale BOLLETTINO C I S B A METODI ANALITICI Notiziario dei metodi analitici suppl al Quaderno n 100 Spediz abbon post comma 27 art 2 L 549 95 filiale RE Tassa pagata Taxe pergue Saggio di tossicit acuta con batteri biolumine scenti Metodo per la valutazione della tossicit acuta con Ceriodaphnia dubia Metodo per la valutazione della tossicit acuta con Mysidopsis bahia Bimestrale anno X n 6 novembre dicembre 1996 biologia ambientale Bollettino C I S B A n 6 1996 Autorizzazione del Tribunale di Reggio Emilia n 837 del 14 maggio 1993 proprietario Paola Manzini Presidente del Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale direttore responsabile Rossella Azzoni REDAZIONE Rossella Azzoni Giuseppe Sansoni responsabile grafico Roberto Spaggiari responsabile di segreteria responsabile di redazione Numero chiuso in redazione il 20 12 1996 Il C LS B A Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale si propone di divenire un punto di riferimento nazionale perla formazione e l informazione sui temi di biologia ambientale fornendo agli operatori pubblici uno strumento di documentazione di ag giornamento e di collegamento con interlocutori qualificati favorire il collegamento fra il mondo della ricerca e quello applicativo promuovendo i rapporti tecnico scientifici con i Min
13. mente soddisfatte da una miscela semplificata come quel la riportata in Tab 1 e pertanto se l acqua sintetica deve essere impiegata anche nei saggi cronici e per la coltura degli organismi si consiglia solo l uso di miscele comple te La salinit prevista per un saggio in condizioni stan dard di 35 96 Tab 1 Elenco dei sali di grado analitico e quantitativi necessari alla preparazione di acqua di mare artificiale di salinit 31960 Concentraz g L 21 03 3 52 0 61 0 088 0 034 9 50 190 0 1 32 26 4 0 02 0 4 0 17 3 4 Composto Quantita richiesta per 20 L g 420 6 70 4 12 2 1 76 0 68 NaCl Na SO KCI KBr Na B O 10 H O MgCl 6 H O CaCl 2 H O SrCl 6 H O NaHCO Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 25 b Nel caso la finalit del saggio sia quella di stimare la tossicit acuta di uno scarico nelle acque recettrici non contaminate sar necessario usare come acqua di dilui zione quella prelevata nell area di sversamento ma in zona non inquinata L acqua di diluizione dovrebbe esse re prelevata immediatamente prima del saggio o comun que non oltre 96 h dallo stesso Se non usata entro 24 h dal prelievo l acqua di diluizione verr refrigerata 4 C Se l area recettrice contaminata o sospettata di esserlo si pu ricorrere ad acque naturali o semisintetiche aventi caratteristiche fisiche
14. BA 2 92 224 Denaro R 1990 Utilizzazione delle acque reflue in agricol tura ed acquacoltura I e II parte Ing Amb XIX 5 330 338 e 7 8 502 511 BA 2 92 225 Pitt P et al 1990 Causes and control of Nocardia in activa ted sludge Res J Water Pollut Control Fed 62 143 150 BA 6 92 244 PorLARD S J T et al 1992 Low cost adsorbents for waste and wastewater treatment a review The Sc of the Total Environ 116 31 52 BA 5 93 278 DE FRAJA FRANGIPANE E et al 1992 Recenti tendenze negli impianti di depurazione di piccole dimensioni A Ing Amb XXI 10 565 576 BA 6 93 281 Siracusa G et al 1992 Progetto integrato chimico fisico per la depurazione delle acque di vegetazione di frantoi oleari Inquinamento 7 8 48 51 BA 6 93 282 CARLINI M 1992 Trattamento dei reflui le acque di vegeta zione dei frantoi oleari suppl a CEEP Ambiente 31 1 8 BA 3 4 94 313 De Narpo L et al 1992 Verifica del rendimento di depura zione di reflui urbani di 53 impianti comunali operanti nella provincia di Padova Acqua Aria 1 23 30 BA 2 94 300 Coomgs R M et al 1991 The use of Bacillus thuringiensis var israelensis to control the nuisance fly Sylvicola fenestra lis Anisopodidae in sewage filter beds Wat Res 25 5 605 611 BA 2 94 301 Bonazzi G 1989 Riduzione degli odori da liquami zootecnici mediante trattamento elettrolitico oligolisi L Informatore Agr
15. Can J Fish Aquat Sci 43 1917 1925 BA 2 87 20 MULHOLLAND P J et al 1986 Effect of stream acidification on periphyton composition chlorophill and productivity Can J Fish Aquat Sci 43 BA 1 88 37 Fov R H 1987 A comparison of chlorophyll a and carote noid concentration as indicators of algal volume Freshwater Biology 17 237 250 BA 2 88 41 Crumpton W G 1987 A simple and reliable method for making permanent mounts of phytoplankton for light and fluorescence microscopy Limnol Oceanogr 32 5 1154 1159 BA 5 89 104 Havens K E et al 1986 A comparison of phytoplankton responses to nutrient additions in acidic and circumneutral pH lakewater Hydrobiologia 137 211 222 BA 5 89 105 METCALFE S E 1988 Modern diatom assemblages in central Mexico the role of water chemistry and other environmen tal factors as indicated in TWINSPAN and DECORAMA Freshwater Biology 19 217 233 BA 6 90 157 Gucci P M B et al 1988 Biodosaggi su due dinoflagellati responsabili di fioriture algali nel mare Adriatico L giene Moderna 90 390 398 BA 6 90 158 MancHETTI R et al 1989 Caratterizzazione preliminare degli essudati di origine fitoplanctonica raccolti in Adriatico nell estate 89 Acqua Aria 8 883 887 BA 6 90 159 Lorri A 1990 Relazioni tra lo spettro abiotico e il fitoplan cton frazionato in classi di taglia in ambiente lacustro eutro fo Acqua Aria 2 137 144 B
16. al fine di evitare morie massive degli organismi La procedura da preferire consiste nella progressiva sosti Biologia Ambientale n 6 1996 18 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia tuzione dell acqua di spedizione con percentuali crescenti 25 50 75 100 del mezzo in uso nel laboratorio completando il trasferimento in 48 72 ore Anche per quanto riguarda la temperatura i bruschi cambiamenti devono essere evitati limitando le variazioni a 2 3 C nell arco di 24 48 ore preferibile organizzare l allevamento secondo due procedure aventi diversa finalit I due tipi di allevamento che ne derivano sono definibili l uno come massivo e l altro come controllato L allevamento di tipo massivo ha come scopo quello di garantire la sopravvivenza della specie in laboratorio e di fornire gli organismi necessari all allevamento control lato Per la procedura massiva sono utilizzati dei conteni tori da 1 2 L tipo beaker o cristallizzatori ma anche dei piccoli acquari in tutto vetro possono prestarsi allo scopo Almeno due colture ma preferibilmente pi di due sono mantenute in recipienti distinti Esse sono allestite con non pi di 40 50 organismi per ogni litro di mezzo alimentati giornalmente e trasferiti in mezzo fresco alme no una ma meglio due volte per settimana Ogni 14 giorni la coltura viene scartata e riallestita con un nuovo gruppo di neonati appartenenti alla terza s
17. vasche Il valore di densit consigliato non deve superare 1 20 misidacei L pena l inibizione dell attivit riprodutti va Tuttavia al fine di un corretto dimensionamento della coltura opportuno considerare anche l ampiezza del fondo della vasca e non solo il suo volume A causa della abitudine parzialmente bentonica del l organismo stato infatti proposto che ogni individuo abbia a disposizione circa 30 cm di superficie ASTM 1996 Il popolamento lasciato ad evoluzione spontanea caratterizzato da una crescente dominanza numerica de gli individui di sesso maschile quindi consigliabile controllare la densit di questi ultimi piuttosto che dell in tero popolamento in modo indiscriminato favorendo un rapporto tra i sessi di circa 2 1 femmine maschi La continua raccolta di giovani individui fonte di stress per la coltura di M bahia e ci dovuto fondamentalmente alla frequente manipolazione degli organismi Anche per questo motivo preferibile mantenere contemporanea mente pi vasche Alternando la raccolta degli individui necessari ai saggi si permette alle colture non in uso di beneficiare di un periodo di ripresa Se la frequenza dei saggi impone una continua richiesta di larve opportuno mantenere indicativamente almeno quattro vasche da 200 L ciascuna La registrazione dei dati di produttivit di ciascuna coltura permetter di decidere il momento in cui la coltura potr essere scartata
18. 2 89 74 Lena B M PETERSEN et al 1984 Effects of kraft pulp mill effluent and 4 5 6 trichloroguaiacol on the net spinning behavior of Hydropsyche angustipennis Trichoptera Eco logical Bulletin 36 68 74 BA 2 89 75 LENA B M PETERSEN ef al 1987 Environmental factors affecting the net spinning behavior of Hydropsyche angusti pennis and H saxonica Hydropsychidae Trichoptera Dept of Ecol and Limnol Univ of Lund Sweden BA 2 89 76 DENISEGER J et al 1986 Periphyton communities in a pristi ne muontain stream above and below heavy metal mining operations Freshwater Biology 16 209 218 BA 2 89 80 Newso_p J D et al 1981 Measuring nutrient spiralling in Streams Can J Fish Aquat Sci 38 860 863 BA 3 89 92 MiwsHALL G W et al 1983 Interbiome comparison of stream ecosystem dynamics Ecological Monographs 53 1 1 25 BA 3 89 93 Crosa G et al 1988 Determinazione delle portate minime necessarie per la tutela della vita acquatica in corsi d acqua soggetti a derivazioni o ritenute Acqua Aria 7 839 850 BA 4 89 101 Bournaup M et al 1986 Les microhabitats aquatiques des rives d un grand cours d eau approche faunistique Ann s Limnol 22 3 285 294 BA 1 90 115 OuTRIDGE P M 1987 Possible cause of high species diversity in tropical Australian freshwater macrobenthic communi ties Hydrobiologia 150 95 107 BA 1 90 116 SODERSTROM O 198
19. 20 mL Per il trasferimento si utilizza una pipetta di vetro provvista di bulbo in lattice per l aspirazione e con diame tro interno di almeno un paio di mm avendo cura di premere il bulbo per immettere gli organismi nel nuovo recipiente solo quando l estremit della pipetta sotto la superficie del liquido Per evitare una diluizione significa tiva delle soluzioni di saggio si raccomanda di limitare al minimo il volume di acqua trasferito con gli animali L eventuale prosecuzione della prova fino a 96 h richiede che le soluzioni del saggio siano rinnovate alme no una volta e allo scadere delle 48 h In base ai criteri gi enunciati si pu anche decidere di aumentare la frequen za di rinnovo delle soluzioni e in ogni caso le soluzioni fresche sono preparate rispettando la stessa procedura descritta per l allestimento del saggio Allo scadere delle 48 h o comunque al momento del rinnovo i giovani individui di ceriodafnia sono trasferiti nelle diluizioni corrispondenti a quelle cui sono gi stati esposti Giornal mente e a intervalli di esposizione costanti 24 h 48 h etc si ispezionano i contenitori di saggio con l aiuto di un microscopio binoculare al fine di registrare e rimuove re gli eventuali organismi deceduti Gli esemplari sopravvissuti alla prova tossicologica inclusi gli organismi di controllo non potranno essere riutilizzati 5 PROCEDURA DI SAGGIO SENZA DILUIZIONE CORPO IDRICO 5 1 SAGGIO DE
20. 4 93 Conservazione della natura e ingegneria fluviale di Newbold et al Nature Conservancy Council BA 2 92 Indice Biotico Esteso I B E metodi di analisi per ambienti di acque correnti di Ghetti P F IRSA CNR BA 6 95 Saggio di tossicit con Daphnia Atti della giornata di studio Milano 29 ottobre 1991 IRSA CNR 1991 BA 5 92 Biocorrosione CISBA AGAC Reggio Em 1994 BA 6 94 Metodi analitici per le acque IRSA CNR 1994 BA 3 4 95 Workshop sui salmonidi italiani Atti Workshop AIIAD Tri este 8 aprile 1994 CISBA AIIAD 1995 BA 5 95 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Pubblicazioni 11 PUBBLICAZIONI realizzate direttamente dal C I S B A o grazie alla sua collaborazione Atti del seminario di studi i biologi e l ambiente NUOVE ESPERIENZE PER LA SORVEGLIANZA ECOLOGICA Reggio Emilia 17 18 febbraio 1983 USL n 9 Amministrazione Provinciale di Reggio Emilia CNR Progetto Finalizzato Promozione della qualit dell ambien te Atti del seminario di aggiornamento ECOLOGIA DELL AMBIENTE FLUVIALE Reggio Emilia 31 maggio 1 giugno 1985 USL n 9 Amministrazione Provinciale di Reggio Emilia Atti del convegno ESPERIENZE E CONFRONTI NELL APPLICAZIONE DEGLI INDICATORI BIOLOGICI IN CORSI D ACQUA ITALIANI S Michele all Adige 6 7 settembre 1985 Provincia Autonoma di Trento Stazione Sperimentale Agraria Forestale Serviz
21. Acqua Aria 9 1075 1081 BA 3 88 46 KINNER N E et al 1987 Development of protozoan and suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 14 metazoan communities in rotating biological contactor bio films Water Research 21 481 490 BA 3 88 47 WANNER J et al 1987 Control of activated sludge filamen tous bulking VII Effect of anoxic conditions Water Resear ch 21 12 1447 1451 BA 4 88 60 VALLINI G et al 1987 Metanogenesi aspetti microbiologici e biochimici della degradazione anaerobica di substrati organici complessi Acqua Aria 8 949 954 BA 4 88 61 Ermey N 1988 Depurazione fisica e biologica delle acque reflue mediante microsetacciamento e colture fissate L esempio della stazione di depurazione d Aire Ginevra Amb Risorse Salute n 79 22 31 BA 2 89 81 BuTELLI P 1988 Impatto da aerosol batterici negli impianti di depurazione ng Amb 17 n 1 gen 88 BA 2 89 82 LAVOIE A et al 1985 Hyperconcentrated cultures of Scene desmus obliquus A new approach for waste water biological tertiary treatment Water Research 19 n 11 1437 1442 BA 2 89 83 HAHN H H et al 1989 Aspetti ambientali delle fognature Ing Amb 17 3 4 BA 5 89 109 Desusk T et al 1989 Performance of a pilot scale water hyacinth based secondary treatment system Journal WPCF 61 7 1217 1224 BA 1 90 122 Parry J L et al 1988 The temporal and spa
22. France Regula ted Rivers Res and Manag vol 2 179 186 BA 6 90 165 Horwss N et al 1984 River plant communities Reflectors of water and substrate chemistry Nature Conservancy Coun cil n 9 73 pp BA 3 4 91 196 DumNICKA E et al 1988 Effects of regulated stream on the hydrochemistry and zoobenthos in differently polluted parts of the upper Vistola River Southern Poland Hydrobiolo gia 169 183 191 BA 3 4 91 190 Hit A R 1988 Factors influencing nitrate depletion in a rural stream Hydrobiologia 160 111 122 BA 1 91 177 Cummins K W 1973 Trophic relations of aquatic insects Repr from Annual Review of entomol 18 183 206 BA 1 91 175 Uzunov Y et al 1987 The macrozoobenthos of Struma River An example of a recovered community after the elimination of a heavy industrial impact with suspended materials Arch Hydrobiol suppl 76 1 2 169 196 BA 1 91 176 Decames H et al 1988 Historical influence of man on the riparian dynamics of a fluvial landscape Landscape Ecolo gy 1 3 163 173 BA 2 91 187 WEATHERLEY N S et al 1990 Forests and the temperature of upland streams in Wales a modelling exploration of the biological effects Freshwater Biology 24 109 122 BA 5 91 208 Lzrr L G et al 1989 The effect of leaf peck composition on processing a comparison of mixed and single species packs Hydrobiologia 142 219 224 BA 3 4 92 235 ARMITAGE M J
23. R Spaggiari PMP USL 3 Genova Dr S Gaiter SMPA USL 10 A Firenze Dr G Caldini Reagenti Soluzione A esametilentetramina 10 g 100 mL di acqua distillata idrazina solfato 1 g 100 mL in acqua distillata Metodo in un matraccio tarato da 100 mL unire 5 mL di soluzione A con 5 mL di soluzione B Lasciare per 24 ore a temperatura ambiente e portare a volume con acqua La torbidit della sospensione di formazina cosi preparata di 400 unit di attenuazione formazina FAU Diluire opportunamente in acqua tale standard in modo da ottene re sospensioni il cui valore di torbidit sia 10 50 100 e Soluzione B per il LUMISTox LSP USL 51 Novara Dr E Bielli LSP USL Torino I Dr P Rampa IRSA CNR Brugherio MI Dr L Guzzella Tab 1 Codice Laboratorio Metodica 3 5 diclorofenolo cromo media d s media 2 51 1 93 2 68 3 11 1 79 4 01 3 45 5 07 4 47 3 69 3 92 4 65 4 84 4 50 3 99 0 06 0 07 0 13 0 12 0 09 0 23 0 26 0 24 0 29 0 11 0 30 0 39 0 60 0 57 0 07 21 06 13 06 21 07 14 09 18 45 25 90 13 18 52 3 47 3 73 4 83 4 12 1927 4 59 6 27 Microtox Microtox Microtox Microtox Microtox Microtox Microtox lavat Lumistox hepes Lumistox hepes Lumistox prep lab Lumistox hepes Lumistox hepes Lumitox tamp fosf Lumistox hepes Lumistox hepes A B C D E F F G G G H H H I I Biologia Ambienta
24. Visy E In Ungheria BA 5 94 SPINELLI G In Italia BA 5 94 CaHA M La rete Touch BA 5 94 MesserLI P Gestire l ambiente vulnerabile BA 1 95 LicHTENBERGER E Prospettive montane lezioni storiche BA 1 95 W BATZING Quale futuro per le nostre montagne BA 2 95 BARTALETTI F In Italia BA 2 95 De KLEMM C Facciamo un sogno BA 5 96 FERNANDEZ GALIANO E Punto di vista personale BA 5 96 D seAnT Pons M La Dichiarazione di Monaco BA 5 96 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 PAGINE APERTE RompranEsI G ECDIN una banca dati per l ambiente BA 4 88 Sanson G Contro l artificializzazione del fiume Magra BA 4 88 SANSONI G Positivi risultati della mobilitazione in difesa del fiume Magra BA 1 89 RarreTto G Realizzazione in provincia di Genova di un sistema di monitoraggio dei corsi d acqua basato su metodi biologici BA 2 89 Sanson G Difesa degli ambienti fluviali prosegue la lotta a difesa del fiume Magra BA 2 89 SBRILLI G Un esperienza di valutazione della contaminazione da erbicidi delle acque sotterranee BA 3 89 CARLINI E Istituzione di un centro di informazione e docu mentazione della Regione Liguria BA 4 89 Sansoni G Multizonali trasparenza delle informazioni sul l ambiente BA 5 89 MONTERMINI A Nuovi orientamenti in fitoiatria l esperienza dell Emilia Romagna BA 3 4 90 PowrALTI L Sistemazione naturalistica dei
25. assay for aquatic organisms using microplate readers Wat Res 25 2 147 150 BA 3 4 94 314 BILLINGTON N 1991 A comparison of three methods of mea suring phytoplankton biomass on a daily and seasonal basis Hydrobiologia 226 1 15 BA 1 95 336 Tossicologia BLANCK H 1985 A simple community level ecotoxicological test system using samples of periphyton Hydrobiologia 124 251 261 BA 1 87 1 GREENE J C et al 1985 A comparison of three microbial assay procedures for measuring toxicity of chemical resi dues Arch Environ Contam Toxicol 14 659 667 BA 3 87 26 GersIH F M et al 1986 Technical note Acute toxicity tests with Daphnia magna Straus and Pimephales promelas Rafi nesque in support of national pollutant discharge elimina tion permit requirements Water Research 20 7 939 941 BA 3 87 27 Kenaca E E 1978 Test organisms and methods useful for early assessment of acute toxicity of chemicals Environ Sci amp Technol 12 12 1322 1329 BA 3 87 28 TURBAK S C er al 1986 Comparison of algal assay systems for detecting waterborne herbicides and metals Water Rese arch 20 1 91 96 BA 3 87 29 VIGANO L 1987 Metalli e non metalli tossici totali esame del limite della legge 319 76 con Daphnia magna Ing Amb 16 6 341 345 BA 1 88 35 GRACE A L et al 1987 The effects of copper on the heart rate and filtration rate of Mytilus edulis Marine Pollutio
26. corsi d acqua bavaresi BA 1 90 Sanson G Una svolta nella gestione dei fiumi italiani BA 2 90 GHETTI P F Quale ambiente per il duemila BA 5 90 AZzONI R Diritto all informazione ambientale BA 6 90 GHETTI P F Dall alveo bagnato all ambiente fiume BA 3 4 91 Settanta regole di ecologia spicciola BA 2 91 AMODEI M Ecotasse BA 5 91 Cox E Goetz M Logica fuzzy pi chiara di quanto si creda Indice 1987 1996 Pagine aperte BA 6 91 Fontani N ALGERI M Gestione del controllo di qualit microbiologico interlaboratoriale BA 1 92 Manzini P Una storia di macrobentos quasi una favola BA 2 92 OLIVIERI E Esondazioni e ecologia fluviale BA 2 92 SPAGGIARI R Fontani N Calidad de las aguas Estudio de la calidad biologica BA 6 92 GiMONA A Economia e crisi ambientali BA 6 92 Bucci M SBrILLI G Saggio di tossicit per effluenti comples si BA 1 93 MERLONI R BELLETTI I QUINTABA G Impatto di uno scarico zootecnico accidentale e successivo ripopolamento BA 1 93 GUZZELLA L MARCHETTI R Dibattito sul saggio di tossicit per effluenti complessi BA 2 93 Besio F L ingegneria naturalistica nella rinaturalizzazione BA 6 93 SPAGGIARI R VERONESI Y Enumerazione delle salmonelle nei fanghi BA 1 94 CASARINI P ForLini M T GARAvANI M Un contributo allo studio dei batteri filamentosi dei nostri impianti di depura zione a fanghi attivi BA 2 94
27. dall aggiunta del campione viene misurata per ciascuna cuvetta l intensit luminosa emessa dai batteri I valori ottenuti corrispondo no rispettivamente all I e all I per ciascuna cuvetta necessario cronometrare il tempo intercorrente tra PI e PI o PL per ciascuna cuvetta in maniera da assicurare che sia mantenuto lo stesso tempo di esposizione per ciascuna cuvetta Al termine della prova generalmente possibile individuare un ambito di concentrazioni entro cui proce dere per il successivo saggio definitivo Generalmente tale intervallo compreso tra la concentrazione che causa la completa inibizione della luce emessa dal batterio e quella che non inibisce tale emissione 3 3 2 Saggio definitivo al 10096 Quando l inibizione misurata nel saggio prelimina re per il campione alla massima concentrazione 50 del campione inferiore al 50 o quando si preveda una bassa tossicit del campione es acque di superficie acque sotterranee acque potabili necessario ricorrere al saggio al 100 In questo caso si consiglia di preparare cinque diluizioni successive esempio 1 1 5 del campio ne a partire da quella al 10096 Le cinque diluizioni devono essere saggiate insieme alla soluzione di controllo in duplicato A differenza del saggio preliminare nel Biologia Ambientale n 6 1996 6 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti saggio al 100 non possibile misurare lI
28. di 0 346 mg L e come CV 9 25 C 25 969 US EPA 1991 Un pi recente esercizio di intercalibrazione cui parteciparono 14 laboratori che utilizzarono KCl come tossico di riferimento permise di valutare una 96hLC media di 250 mg KCI L ed un CV di 36 22 C 25960 US EPA 1991 Un simile esercizio di intercalibrazione 25 C 30 o con lo stesso tossico ma con la partecipazio ne di un numero ben maggiore di laboratori n 61 diede come risultati finali 532 mg KCI L e 30 1 rispettiva mente 48hLC media e coefficiente di variazione US EPA 1991 7 ANALISI DEI RISULTATI 7 1 CALCOLO DELLA LC Il saggio per la valutazione della tossicita acuta Biologia Ambientale n 6 1996 28 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia descritto in questa procedura si propone non solo l identi ficazione delle sorgenti di contaminazione capaci di effet ti tossici acuti ma anche la quantificazione della loro potenziale tossicit mediante la stima della concentrazio ne letale al 50 degli organismi LC per un dato tempo di esposizione 24 48 h La determinazione della LC puo essere effettuata con diversi metodi la cui applicabili t in buona parte dipendente dal tipo di risultati ottenuti e piu precisamente dal numero di effetti parziali osservati intermedi cio tra la mortalit 100 e la mortalita nulla La valutazione della LC dovrebbe basarsi sui risultati relativi ad al
29. di effluente La stessa procedura pu essere applicata per rilevare la presenza di effetti tossici acuti nell acqua di mare dell area recettrice o di altre zone E tuttavia infrequen te che i contaminanti raggiungano in quest ultime delle concentrazioni tali da permettere la determinazione di una LC Pertanto il saggio si limita ad indagare l even tuale risposta degli organismi ad un campione non diluito Biologia Ambientale n 6 1996 24 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia e la validit del risultato che ben raramente va al di l di pochi decessi determinata in base al confronto con organismi di controllo esposti ad acqua di mare non contaminata Si fa notare che per M bahia disponibile la meto dica standard per condurre un saggio cronico la cui durata 7 giorni di poco superiore alle 96 h previste per il saggio acuto descritto in queste pagine Poich con sem plici accorgimenti possibile ottenere informazioni sia sulla tossicit di tipo acuto che su quella di tipo cronico mediante un unico saggio di 7 giorni quest ultimo da preferire ogni qualvolta sia possibile Se si adotta tale soluzione necessario attenersi alla procedura di saggio cronico alla quale si rinvia 3 CONDUZIONE DEL SAGGIO 3 1 MATERIALI E STRUMENTAZIONE La conduzione del saggio di tossicit richiede numero minimo di 10 bicchieri di vetro borosilicato beaker con volume utile pari a
30. e chimiche il pi possibile simili a quelle dell acqua recettrice c Se infine l obiettivo del saggio di esaminare le interazioni tra 1 contaminanti dello scarico e quelli gi presenti nell acqua recettrice quest ultima sar utilizzata come acqua di diluizione indipendentemente dal suo grado di contaminazione purch prelevata al di fuori dell area influenzata dallo scarico in esame Nell allesti mento di questo tipo di saggio necessario includere un secondo gruppo di controllo in cui gli organismi vengono esposti solo ad acqua di allevamento Generalmente un effluente ha una salinit trascura bile Gli organismi devono tuttavia essere esposti alle diverse diluizioni di uno scarico senza che le differenti salinit delle soluzioni possano rappresentare una fonte di stress aggiuntivo a quello dei tossici o pi semplicemente una fonte di variabilit dei risultati Si tratta pertanto di uniformare la salinit delle diverse diluizioni di acqua di scarico A questo scopo si dispone di due soluzioni la prima prevede l impiego di acqua di mare ipersalina 100 969 come acqua di diluizione mentre la seconda consiste nell aggiungere i sali per la preparazione di acqua di mare artificiale Il principale vantaggio della prima soluzione che l acqua ipersalina pu essere ottenuta previa filtrazione lt 1 um e per evaporazione controllata lt 40 C da acqua di mare naturale di elevata qualit aree pelagiche Come
31. et al 1990 The realized food niches of three species of stream dwelling Triclads Turbellaria Freshwa suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 18 ter Biology 24 93 100 BA 6 92 238 CourTEMANCH D L et al 1987 A coefficient of community loss to assess detrimental change in aquatic communities Water Research 21 2 217 222 BA 6 92 239 REvNoLpsoN T B et al 1989 The biological assessment of contaminated sediments The Detroit river example Hydro biologia 188 189 463 476 BA 6 92 240 Brown A W et al 1991 Comparison of bentic invertebrates between riffles and pools Hydrobiologia 220 99 108 BA 6 92 241 CRUNKILTON R L et al 1991 Use of stream order and biologi cal indices to assess water quality in the Osage and Black River basin of Missouri Hydrobiologia 224 155 166 BA 6 92 242 PRINGLE C M et al 1991 Effects of geotermical groundwater on nutrient dynamics of a lowland Costa Rican stream Ecology 72 3 951 965 BA 5 93 276 TRISKA F J et al 1990 In situ retention transport response to nitrate loading and storm discharge in a third order stream J of the North Am Benthol Soc 9 3 229 239 BA 5 93 277 S LG E A 1992 La cementificazione dei fiumi e i suoi effetti ambientali A Ingegn Amb XXI 10 590 591 BA 6 93 286 CroonquisT M J et al 1993 Effects of habitat disturbance on birds communities in riparian corridors J Soil an
32. etal 1991 Utilizzazione di filtri a carbone attivo nel trattamento di potabilizzazione delle acque significato della crescita di schizomiceti sulla superficie dei letti e rischi correlati Igiene Moderna 95 589 604 BA 2 92 221 ALBERTIN P et al 1990 La predisinfezione nei trattamenti di potabilizzazione Inquinamento XXXII 9 68 75 BA 2 92 222 Martins M T et al 1991 Comparison of the presence absence P A test and conventional methods for detection of bacteriological water quality indicators Wat Res 25 10 1279 1283 BA 6 93 283 ConNax R et al 1991 Significance of several bacteriophage groups as indicators of sewage pollution in marine waters Wat Res 25 6 673 678 BA 6 93 284 TONELLI E et al 1992 Modificazioni microbiologiche e chi miche di acque potabili sottoposte ad addolcimento con un apparecchio di terza generazione L Igiene Moderna 98 673 687 BA 3 4 94 305 LecLERc H 1993 Le acque minerali naturali microbiologia e normativa Riv Sc Alimentaz 22 2 219 239 BA 3 4 94 306 VAZZOLER M et al 1991 Indici microbiologici nei contenitori per rifiuti solidi urbani R S U L Igiene Moderna 95 304 310 BA 3 4 94 307 VOLTERRA L et al 1992 La conta batterica totale in acque salate Ing Amb XXI 3 4 168 174 BA 3 4 94 308 SCASSELLATI SFORZOLINI G ef al 1992 Acqua destinata ad uso potabile e salute valutazione dei rischi mutageno c
33. minima di 7 giorni nel quale due gruppi di 10 organismi ciascuno sono esposti rispettivamente ai due mezzi da confrontare La procedura la stessa prevista per il saggio cronico con a C dubia ed i parametri di interesse sono sopravvivenza attivit riproduttiva a cui possono essere aggiunti la lunghezza o il peso secco degli organismi A4 Alimentazione Sono varie le diete che sono state e sono utilizzate con successo per nutrire C dubia Generalmente esse risultano da combinazioni di pi ingredienti ciascuno dei quali insufficiente al mantenimento del crostaceo se som ministrato singolarmente Cooney et al 1992b KNIGHT e WALLER 1992 Vigan 1992 Di solito si tratta di colture di una o pi specie algali di mangime per pesci di lievito o suoi estratti di foglie di cereali vitamine e cosi via Sembra accertato che il componente di base della dieta debba essere un alga unicellulare La Cloroficea Selena strum capricornutum preparata come in A5 1 si dimo strata idonea allo scopo e va somministrata quotidiana mente in modo da garantire una densit pari orientativa mente a 200 250 000 cell mL US EPA 1989 Cooney et al 1992b I metodi EPA 1989 e ASTM 1989 preve dono che la dieta algale venga integrata con un secondo alimento rappresentato da una miscela di tre ingredienti mangime per pesci foglie di cereali Cerophy e lievito cfr Appendice A5 2 Questo alimento preparato in sospensioni contenen
34. nazionale per la protezione dell ambiente BA 1 94 5 Consigli vecchi ma sempre attuali BA 5 94 6 Istituzione delPARPA Il progetto di legge della giunta regionale dell Emilia Romagna BA 1 95 7 CEE verso una qualit ecologica globale BA 1 96 Fornara G Pallanza un istituto caposcuola della limnologia italiana BA 4 88 AZZONI R Aspetti biologici dell inquinamento atmosferico intervista al dr Schenone BA 3 89 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Naturopa AZZONI R Agricoltura e ambiente riflessioni sulla diffusione di microrganismi ingegnerizzati Intervista al Prof P Ma nachini BA 3 4 90 CARDINALETTI M Intervista al prof Curds BA 1 91 PonTALTI L Turin P L ittiofauna di acqua dolce Intervista al Prof Gandolfi BA 2 91 AZZONI R Maiouivi B Colloquio a ruota libera con Bob Petersen BA 5 91 NATUROPA Hoekstra H H Centre Naturopa BA 5 89 SCHNEIDER G Il programma CORINE BA 5 89 BLuM W E H Il suolo elemento naturale BA 3 4 90 FepororF N Un sistema produttivo BA 3 4 90 PRATESI F Il mondo affascinante delle rive e coste BA 1 90 PAHR W P L ambiente e il turismo BA 5 90 Travis A S Turismo alternativo BA 5 90 Piersma T La Waddenzee BA 6 90 Hacounr H Il suolo Approccio qualitativo e quantitativo BA 3 4 91 Dary D Torbiere d Irlanda Eredit preziosa BA 3 4 91 CoLLAR N J Civette e guf
35. possono orientarsi L azione dei filtri non si deve affatto limitare alla rimozione meccanica del mate riale in sospensione ma deve estendersi aspetto ben pi importante alla depurazione dei cataboliti disciolti Af finch le unit filtranti siano in grado di svolgere questa funzione necessario un periodo di condizionamento Si possono aggiungere a giorni alterni alcuni mL di sospen sione concentrata di artemie alla vasca da condizionare almeno fino a che 1 nitriti non raggiungono la concentra zione di 2 mg L Essa continuer ad aumentare senza ulteriori aggiunte di artemie per poi diminuire lentamente fino a valori inferiori a 0 05 mg L A questo punto si pu riprendere la somministrazione dei piccoli crostacei o comunque di materiale organico facilmente degradabile e verificare che la concentrazione di nitriti misurata gior nalmente non subisca incrementi significativi Se l unit accetta l aggiunta di artemie o altro materiale organico senza sostanziali mutamenti del contenuto di nitriti il condizionamento compiuto Si possono quindi introdur re alcuni organismi adulti di M bahia non pi di una ventina L assenza di decessi nell arco di 96 h conferma la raggiunta funzionalit dell unit di allevamento L ag giunta di alcuni litri di acqua o di parte del materiale filtrante proveniente da un unit gi operativa pu abbre viare notevolmente il processo di condizionamento de scritto A3 Acqua di all
36. possono svolgere tutte le operazioni necessarie A questi prodotti pertanto si rinvia APPENDICE Al Note sulla sistematica e biologia di Ceriodaphnia dubia I Crostacei Cladoceri sono organismi di piccole dimensioni in larga parte planctonici che popolano pre valentemente le acque dolci In particolare le specie appartenenti alla famiglia Daphnidae sono ubiquitarie delle acque dolci della fascia temperata e a questa famiglia appartengono tre specie che rivestono grande interesse per gli studi tossicologici e cio Daphnia magna Daph nia pulex e Ceriodaphnia dubia Quest ultima relativa mente a tali studi quella di piu recente acquisizione MouNr e NorBERG 1984 Caratteristiche generali dei Cladoceri sono la com pressione laterale del corpo il carapace bivalve che rac chiude il tronco l unico grande occhio composto la pre senza di antennule e di antenne le prime immobili con papille olfattorie e setole sensoriali e le seconde con funzione natatoria molto sviluppate Il postaddome che una formazione esclusiva dei Cladoceri ha ornamenta zioni aventi valore tassonomico In Ceriodaphnia come in generale nei Cladoceri 1 sessi sono separati e con un evidente dimorfismo In Fig illustrato l aspetto di una femmina partenogenetica di C dubia Essa caratterizzata da un corpo ovale molto allargato lungo da 0 95 1 4 mm MARGARITORA 1983 Il secondo paio di antenne provvisto di 9 setole natatorie
37. quelle del controllo rappresentano 1 due cam pioni di dati posti a confronto Di fatto se la mortalit degli organismi esposti al corpo idrico supera il valore del 10 e cio quel limite di decessi accettato come naturale in un gruppo di indivi dui di controllo si pu gi concludere che il campione contiene inquinanti a concentrazioni tossiche Tuttavia pu essere opportuno dare supporto statistico al risultato del saggio verificando la cosiddetta ipotesi nulla o zero e cio che le medie dei decessi osservati nei due trattamenti siano uguali Smentire l ipotesi con un certo grado di probabilit solitamente P 0 05 equivale a verificare che la mortalit osservata per gli organismi esposti al corpo idrico significativa Il test t utilizzato per confrontare i due campioni e dal momento che vi un attesa di contaminazione o di mortalit maggiore per il campione del corpo idrico piut tosto che per il controllo un test unilaterale generalmen te adeguato L applicazione del test t richiede che le proporzioni di decessi osservati nelle repliche siano distri buite normalmente Se i dati soddisfano questo requisito necessario procedere anche alla verifica di omogeneit della varianza dei due gruppi di risultati e solo in caso affermativo e lecito passare all esame della significativit dei decessi osservati Se 1 dati non fossero distribuiti normalmente il problema viene comunemente risolto me diante o
38. risultato di ogni nuovo saggio di riferimento dovrebbe collocarsi entro l intervallo definito dal valore medio di tale serie e dal doppio della corrispondente deviazione standard media 2 DS Viceversa se la LC del tossico di riferimento si colloca all esterno di questo intervallo di sicurezza tutti i dati ottenuti con il medesi mo lotto di organismi dovrebbero essere considerati con cautela A scopo puramente informativo si possono citare i risultati di alcuni studi condotti sul saggio acuto con M bahia tra cui quelli di un esercizio di intercalibrazione US EPA 1985 A quest ultimo parteciparono 6 labora tori che operando sia in condizioni statiche che in flusso continuo saggiarono la tossicit del nitrato di argento e dell endosulfan Il coefficiente di variazione risult ri spettivamente di 27 e 22 per il primo tossico e di 62 e 58 per il secondo Per il Cr stata determinata una 96hLC di 2 03 mg L ed una serie di saggi condotti da due laboratori diede complessivamente un valore medio per la 48hLC di 6 mg L n 8 ed un CV di 21 5 20 960 in GOODFELLOW e Rue 1989 Una serie di 8 prove condotte con lo stesso tossico di riferimento ma da un solo laboratorio diede come 48hLC media il valore di 5 12 mg Cr L e come CV 22 20 960 in GooprELLow e RUE 1989 Una serie di 13 saggi condotti parimenti da un unico laboratorio ma utilizzando come tossico il Cd diede come media delle 96hLC il valore
39. scrivere al Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale via Amendola 2 42100 Reggio Emilia o telefonare al Segretario Roberto Spaggiari tel 0522 295460 0338 6252618 fax 0522 295446 Quote annuali di iscrizione al Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale socio ordinario 70 000 socio collaboratore 50 000 socio sostenitore 600 000 conto corrente postale n 10833424 intestato a CISBA RE I soci ricevono il bollettino Biologia Ambientale e vengono tempe stivamente informati sui corsi di formazione e sulle altre iniziative del C I S B A Gli articoli originali e altri contributi vanno inviati alla Redazione Rossella Azzoni Gastaldi via Cola di Rienzo 26 20144 Milano Idattiloscritti compreso il materiale illustrativo saranno sottoposti a revisori per l approvazione e non verranno restituiti salvo speci fica richiesta dell Autore all atto dell invio del materiale Le opinioni espresse dagli Autori negli articoli firmati non rispecchiano necessariamente le posizioni del C I S B A Stampa ROTOPACK via Degola 7 A REGGIO EMILIA Indice 1987 1996 Articoli INDICE 1987 1996 Legenda IN MAIUSCOLETTO GLI AUTORI in grassetto il Titolo tra parentesi quadre il numero e l anno di pubblicazione su Biologia Ambien tale ARTICOLI Bioindicatori CASARINI P CAMERINI G CARBONE M Agricoltura ed alterazio ni della fauna del suolo BA 3 4 90 Nims P L CasteLLO M L uso
40. sente nell acqua di scarico espressa in mg L conc di tiosolfato concentrazione di tiosolfato espressa in mg L Il titolo del tiosolfato deve essere controllato ogni 15 giorni APPENDICE C Metodo per la coltura di batteri bioluminescenti in laboratorio Strumentazione richiesta oltre a quella gi prevista dal saggio autoclave per sterilizzazione vetreria e mezzi di coltu ra centrifuga refrigerata agitatore magnetico incubatore ad agitazione continua fotometro o spettrofotometro per misure a 578 nm di lunghezza d onda Per la coltura dei batteri utilizzati nel test distribui re 0 1 mL di una sospensione di 10 cellule del ceppo Vibrio fischeri NRRL B 11177 sulla superficie di una piastra Petri sterile contenente il terreno solido C 2 Spatolare il terreno e incubare la piastra a 20 C per 2 5 giorni A crescita delle colonie avvenuta osservare la piastra al buio e contrassegnare le colonie luminescenti Trasferire ciascuna colonia contrassegnata su una nuova piastra di terreno solido e strisciare Incubare come sopra descritto e isolare nuovamente le colonie luminescenti Tale procedura di isolamento si rende necessaria in quan to la sospensione di partenza potrebbe essere stata confe zionata in condizioni di non sterilit Inoculare quindi in condizioni di sterilit una singo la colonia isolata in 50 mL di terreno liquido C 1 coltura primaria Incubare sotto agitazione preferibil mente con a
41. sifona mento che si puo far coincidere con i rinnovi parziali dell acqua di coltura verr sostituita in questo caso da un riallestimento della vasca che prevede il risciacquo della ghiaia e dei supporti filtranti e il rinnovo totale dell acqua di mare adeguatamente condizionata se artificiale E da escludere l uso di detergenti e di disinfettanti se non dopo morie eventi patologici o la comparsa di idrozoi nelle vasche di coltura In questo caso necessario scartare i misidacei che presentino dei polipi sul corpo mentre gli acquari dovranno essere accuratamente lavati con deter genti e acqua calda A ci si far seguire un trattamento con acido 10 HCI e numerosi risciacqui con acqua deionizzata A9 Organismi per il saggio Diverse sono le soluzioni per ottenere le giovani larve necessarie al saggio Se e richiesto un controllo accurato dell et degli organismi preferibile isolare delle femmine adulte di M bahia con l anticipo rispetto Biologia Ambientale n 6 1996 34 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia all allestimento del saggio dettato dalla procedura meto dologica In questo caso con l aiuto di un retino con maglie di 2 mm che trattenga cio solo gli adulti si isola nella vasca di coltura un gruppo di organismi dal quale vengono prelevate quelle femmine gravide le cui uova mostrino la macchia oculare degli embrioni in sviluppo Con una pipetta ad ampio diametr
42. sulfurei e loro importanza nello studio dell evoluzione trofica di ambienti lacustri Acqua Aria 9 845 851 BA 3 4 92 234 MANTOVANI A et al 1992 Animals as host of zoonoses Ann Ist Sup San 28 4 465 471 BA 1 95 333 McCormick P V et al 1991 Limited versus unlimited mem bership in microbial communities evaluation and experi mental tests of same paradigms Hydrobiologia 218 77 91 BA 6 95 358 Gestione ambientale SMITH MLS et al 1985 Transport of Escherichia coli throu gh intact and disturbed soil columns J Environ Qual 14 87 91 BA 2 87 11 BazzaNrI M et al 1985 Seasonal changes of the profundal macrobenthic community in a polluted lake Schweiz Z Hydrol 47 1 57 63 BA 2 87 18 OLorI L et al 1988 La caratterizzazione delle acque di scarico una strategia su standard di qualit Acqua Aria 8 967 979 BA 4 89 100 SiLvA S et al 1987 Effetti dell uso in agricoltura dei fanghi di depurazione conciari ng Amb 16 6 312 318 BA 4 89 102 IucuLANo T 1989 Parco Nazionale di Plitvice da una gestio ne integrata ad una gestione globale Acer 5 29 32 BA 6 90 166 LABROUE L et al 1986 puration naturelle des nitrates des eaux souterraines possibilit es d application au ream na gement de lacs de gravieres Annis Limnol 22 1 83 88 BA 6 90 167 Rec EMiLiA Romacna 1991 Influenza degli apporti costieri sulle acque di balneazi
43. tale essa contiene tutti i micronutrienti e colloidi biogenici richiesti per l accrescimento e l attivit ripro duttiva degli organismi marini e pu essere conservata al buio e a temperatura ambiente per periodi prolungati senza apparente degradazione Il limite della prima solu zione risiede nel fatto che un effluente pu essere saggiato ad una concentrazione massima non superiore all 80 se la salinit prescelta del 20 o od anche del 70 se la salinit voluta del 30 o La seconda soluzione non presenta questo limite ma l aggiunta di sali pu dal canto suo modificare il pH dell effluente o dell eventuale acqua che richiede aggiustamenti potendo alterare in tal modo anche la tossicit del campione In generale si tenga presente che valori di pH al di fuori dell intervallo 6 9 possono contribuire alla mortalit degli organismi Se necessario il pH pu essere riportato al valore desiderato con aggiunte di HCl o NaOH Dopo l aggiunta dei sali la soluzione viene mantenuta in agitazione moderata per circa 60 min con l aiuto di un agitatore magnetico e ci per garantire che tutti i sali siano entrati in soluzione prima di introdurre gli organismi E consigliabile inclu dere nella serie dei trattamenti anche un controllo con acqua preparata in modo analogo per aggiunta di sali al fine di verificare che tale procedura non causi effetti negativi 3 4 ILLUMINAZIONE Il saggio viene condotto conservando le stesse con diz
44. uovo duraturo dalla disidra tazione e dagli estremi di temperatura al punto che pu essere conservato per lunghi periodi di tempo senza com prometterne la vitalit La deposizione degli efippi non rappresenta necessariamente l atto finale dell attivit ri produttiva del Cladocero ma solo una sua fase Dopo la produzione di uova anfigoniche pu essere ripresa infatti la produzione di uova partenogenetiche Gli individui muoiono solo se intervengono fattori letali come il pro sciugamento del bacino la mancanza di cibo i valori estremi di temperatura lasciando tuttavia le uova duratu re negli efippi dai quali se reidratati ed esposti alla temperatura appropriata schiuderanno individui di sesso femminile che si riprodurranno nuovamente per via parte nogenetica A2 Allevamento degli organismi L allevamento di Ceriodaphnia deve essere avviato 23 settimane prima della conduzione dei saggi al fine di disporre di femmine acclimatate alle condizioni di mante nimento del laboratorio e che siano in grado di produrre il numero di neonati sufficienti alla sperimentazione Gra zie alla prolificit delle femmine solo pochi individui 20 30 sono necessari per l avvio dell allevamento In caso di trasporto questi possono essere trasferiti in un contenitore di polietilene da 1 litro completamente riem pito nel rapporto di 20 30 individui L acclimatazione alle condizioni colturali del nuovo laboratorio deve essere graduale
45. 1 91 173 ANTON F et al 1990 Acute toxicity of the fungicide captan to the earthworm Eisenia foetida Savigny Bull Environ Con tam Toxicol 45 82 87 BA 2 91 178 Wanc W et al 1989 Determination and reduction od phyto toxicity of two industrial waste effluents Water Air and Soil Pollution 44 363 373 BA 2 91 179 Wanc W et al 1990 The use of phytotoxicity tests Common Duckweed Cabbage and Millet for determining effluent Indice 1987 1996 Abstracts toxicity Env Monit and Ass 14 45 58 BA 2 91 180 ViGANO L 1990 Tossicit cronica di effluenti di scarico su Daphnia magna ricerca della diluizione di non effetto Acqua Aria 2 145 148 BA 2 91 181 BirKHoLz D A et al 1990 Aquatic toxicology of alkil quino lines Water Research 24 67 73 BA 5 91 202 VersTEEG D J et al 1990 A laboratory scale model for evaluating effluent toxicity in activated sludge wastewater treatment plants Water Research 24 717 723 BA 5 91 203 Lippincott R L et al 1990 Continuous liquid liquid extrac tin for the preparation of chlorinated water samples for the Ames bioassay Water Research 24 709 716 BA 5 91 205 Barbo DJ et al 1989 The Daphnia bioassay a critique Hydrobiologia 188 189 403 406 BA 6 91 210 Buttino I et al 1991 Tossicit dei composti fenolici nell am biente marino Acqua Aria 9 853 861 BA 6 91 218 TYLER G A et al 1989 Heavy meta
46. 1127 1131 BA 1 87 9 Sartory D P 1985 The determination of algal chlorophyl lous pigments by High Performance Liquid Chromatography and spectrophotometry Water Research 19 5 605 610 BA 1 87 10 WARBINGTON R C et al 1987 A membrane filter method for the enumeration of aquatic ammonifiers Water Res 21 5 601 604 BA 3 89 91 FowrER B et al 1987 An inexpensive water circulation system for studies of chemical exchange using intact sedi ments cores Freshwater Biology 17 509 511 BA 4 89 95 Manca M et al 1988 Apparecchiatura elettronica per la realizzazione di catene alimentari artificiali a due o pi stadi con rifornimento costante di alimento Acqua Aria n 4 88 BA 4 89 96 DoucLas D J et al 1987 A simple laboratory method for Benthal Oxygen Demand Annis Limnol 23 3 263 267 BA 4 89 97 Oupor C et al 1988 Precise shipboard determination of dissolved oxygen Winkler procedure for productivity stu dies with a commercial system Limnol Oceanogr 33 1 146 150 BA 5 90 152 TARTONI P L et al 1988 La cluster analysis nel monitoraggio della qualit delle acque potabili Tecnica Sanitaria XXVI 67 76 BA 6 90 163 MANNY B et al 1989 Field test for bioassay procedure for assessing habitat quality on fish spawning grounds Trans 21 Amer Fish Soc 118 175 182 BA 3 4 92 231 GALGANI F et al 1991 Semi automated colorimetric and enzymatic
47. 18 BA 5 93 272 BENNDORF 1990 Conditions for effective biomanipulation conclusions derived from whole lake esperiments in Europe Hydrobiologia 200 201 187 203 BA 5 93 273 Irvine K et al 1990 The potential of artificial refugia for maintaining a community of large bodied cladocera against fish predation in a shallow eutrophic lake Hydrobiologia 200 201 379 389 BA 5 93 274 VAN Donk E et al 1990 Restoration by biomanipulation in a small hypertrophic lake first year results Hydrobiologia 191 285 295 BA 5 93 275 Depurazione TANAKA H et al 1985 Model system of bulking and floccula tion in mixed culture of Sphaerotilus sp and Pseudomonas sp for dissolved oxygen deficiency and high loading Water Research 19 5 563 571 BA 1 88 32 MANSOURI ALIABADI M et al 1985 Passage of selected heavy metals from Sphaerotilus Bacteria Chlamidobacteriales to Paramecium caudatum Protozoa Ciliata Water Resear ch 19 6 697 699 BA 1 88 34 KercuuM L H sr et al 1987 A comparison of biological and chemical phosphorous removals in continuous and sequen cing batch reactors J W P C F 59 1 13 18 BA 2 88 38 Woowss M et al 1987 Seasonal species composition densi ty and role of nematodes in activated sludge effluent treat ment works Water Research 21 4 459 467 BA 2 88 40 Ceccu F et al 1987 Digestione anaerobica aspetti chimici ingegneristici e di processo
48. 194 GERMUND TYLER 1989 Uptake retention and toxicity of heavy metals in lichens A Brief Review Water Air and Soil Pollution 47 321 333 BA 3 4 91 195 Heacue A S et al 1989 Design and performance of a large field exposure chamber to measure effects of air quality on plants J Environ Qual 18 361 366 BA 6 91 215 WHITEHURST I T 1991 The Gammarus Asellus ratio as an index of organic pollution Wat Res 25 3 333 339 BA 1 94 293 PANATTONI A et al 1990 Identificazione dell ozono quale agente di sintomi fogliari su fagiolo in Pianura Padana Informatore fitopatologico 12 43 47 BA 1 94 294 VioLini G et al 1992 Damage by ambient ozone to bean leaves Histological histochemical and ultrastructural ob servations Riv Pat Veg 2 91 110 BA 1 94 295 Bacci E et al 1994 Marine bacteria as indicators of water quality Chemosphere 28 6 1165 1170 BA 1 95 330 BoNADONNA L et al 1993 Clostridium perfringens come indicatore in sedimenti marini Ing Sanit amb gen feb 28 30 BA 1 95 332 GREENWOOD M T et al 1991 The use of Coleoptera Arthro poda Insecta for floodplain characterization on the River Trent Regulated Rivers Res and Manag 6 321 332 BA V 95 334 Biomanipolazione Suapiro J et al 1984 Lake restoration by biomanipulation Round Lake Minnesota the first two years Freshwater Bio logy 14 371 383 BA 2 87 14 Posr J R
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50. 321 323 RicHARDS F A and N Corwin 1956 Some oceanographic applications of recent determinations of the solubility of oxygen in seawater Limnol Oceanogr 1 263 267 SCHIMMEL S C e D J HANSEN 1975 An automatic brine shrimp feeder for aquatic bioassays J Fish Res Board Can 32 314 316 US EPA 1985 Methods for measuring the acute toxicity of effluents to freshwater and marine organisms W H Peltier C I Weber U S Environmental Protection Agency Report EPA 600 485 013 Cincinnati OH US EPA 1988 Mysid Mysidopsis bahia survival growth and fecundity tests Method 1007 In Short term methods for esti mating the chronic toxicity of effluents and receiving waters to marine and estuarine organisms C I Weber W B Horning D J Klemm T W Neiheisel P A Lewis E L Robinson J Menkedick e F Kessier eds EMSL US Environmental Protec tion Agency Cincinnati OH EPA 600 4 87 028 US EPA 1991 Methods for measuring the acute toxicity of effluents to freshwater and marine organisms C I Weber U S Environmental Protection Agency Report EPA 600 4 90 027 Cincinnati OH Warp S H 1984 A system for laboratory rearing of the mysid Mysidopsis bahia Molenock Progr Fish Cult 46 170 175 Ward S H 1987 Feeding response of the Mysid Mysidopsis bahia reared on Artemia Progr Fish Cult 49 29 33 Warb S H 1989 The requirements for a balanced medium in toxicological experiments using
51. 7 Upstream movements of invertebrates in running waters A review Arch Hydrobiol 111 2 197 208 BA 1 90 117 MINSHALL G W et al 1985 Species richness in streams of different size from the same drainage basin The Am Natura list 125 1 16 38 BA 1 90 118 Cummins K W ef al 1981 Trends in particulate organic matter fluxes community processes and macroinvertebra tes functional groups along a Great Drainage Basin river 17 continuum Verh Internat Verein Limnol 21 841 849 BA 5 90 147 VANNOTE R C et al 1982 Fluvial processes and local litholo gy controlling abundance structure and composition of mussel beds Proc Natl Acad Sci USA 79 4103 4107 BA 5 90 148 ALLAN J D et al 1985 The quantification of stream drift Can J Fish Aquat Sci 42 210 215 BA 5 90 149 WiLLoucHBy L G et al 1988 The distribution of Ephemerella ignita in streams the role of pH and food resources Fre shwater Biology 19 145 155 BA 5 90 150 VANNOTE R L 1978 A geometric model describing a quasi equilibrium of energy flow in populations of stream insects Proc Natl Acad Sci USA 75 1 381 384 BA 5 90 151 GARDEN A et al 1988 Decay rates of autumn and springs leaf litter in a stream and effects on growth of a detritivore Freshwater Biology 19 297 303 BA 5 90 156 Fortun M 1988 Historical changes of a large river in an urban area the Garonne River Toulouse
52. 9 BA 3 4 90 L agricoltura alle soglie del 2000 CLESAV 1983 BA 3 4 90 STEFANINI La risorsa agroverde Datanews 1989 BA 3 4 90 L humus osservatorio agroambientale Grifo periodico BA 3 4 90 ALTIERI Agroecologia Prospettive scientifiche per una nuo va agricoltura Muzzio Padova 1991 BA 3 4 93 Guida al riconoscimento degli organismi utili in agricoltura Osserv Agroamb Cesena FO 1991 BA 6 93 FoHLMANN RITTER La siepe Compagna della campagna Ma cro Sarsina FO 1991 BA 6 93 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 10 C R P A Manuale per la gestione e l utilizzazione agronomi ca dei reflui zootecnici Reg Em Romagna 1993 BA 2 95 e e Ingegneria genetica Cuerras Ingegneria genetica la scienza della vita artificiale Boringhieri 1986 BA 5 89 RIFKIN Dichiarazione di un eretico il dilemma del nucleare e dell ingegneria genetica Guerini 1988 BA 5 89 RIFKIN Entropia una nuova concezione del mondo Monda dori 1982 BA 5 89 BENATTI et al eds Biotecnologie e ambiente UNICOPLI 1988 BA 5 89 Drtica Introduzione all ingegneria genetica Garzanti 1985 BA 5 89 Sasson Biotecnologie Calderini 1987 BA 5 89 Ingegneria naturalistica ScHIECHTL Bioingegneria forestale Biotecnica naturalistica Castaldi Feltre 1991 BA 3 4 91 Manuale tecnico di ingegneria naturalistica Reg Emilia Romagna e Reg Veneto 1993 BA 1 94 Te
53. 992 L impiego dei perossidi nei trattamenti di potabilizzazione delle acque superficiali A Ing Amb XXI 1 38 42 BA 5 94 318 BarpRv M G C et al 1991 The activity of peracetic acid on sewage indicator bacteria and viruses Wat Sci Tech 24 2 353 357 BA 2 95 337 Morris R 1993 Reduction of microbial levels in sewage effluents using chlorine and peracetic acid disinfectants Wat Sci Tech 27 3 4 387 393 BA 2 95 338 CaLamo SPECCHIA F P et al 1993 Studio della contaminazio ne microbiologica negli impianti di emodialisi primi risul tati di una ricerca valutazioni e prospettive di intervento L Igiene Moderna 100 943 962 BA 2 95 339 CoNru A et al 1993 La qualit dell acqua potabile in un periodo di emergenza idrica valutazione dei principali in convenienti igienici L 7giene Moderna 99 694 705 BA 6 95 356 Navazio G et al 1993 Impiantistica e sistemi di trattamento per la sicurezza igienica della risorsa acqua JA Ingegn Amb XXII 6 320 326 BA 6 95 357 Mesofauna Suolo Horunpav N J et al 1982 Soil fauna of a pest management apple orchard Rev Ecol Biol Sol 19 1 41 59 BA 3 4 90 136 Gers C 1982 Incidence de la simplification du travail du sol sur la microfaune daphique hivernale donn es pr liminai res Rev Ecol Biol Sol 19 4 593 604 BA 3 4 90 137 Gray MLE et al 1983 Effects of an insecticide and herbicide combin
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55. CNI G N Culicidi note di biologia ecologia control suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Articoli lo BA 5 91 Lozzia G C CasEnio F OrroBoNi F Gli acari degli alberi di Milano BA 1 93 Impatto ambientale Sanson G Effetti biologici delle arginature e delle escavazio ni fluviali BA 2 87 Damiani G Impatto delle opere di canalizzazione sull am biente del fiume Aterno BA 1 88 Legislazione La tutela legale del software BA 3 4 93 La Galli una legge al passo coi tempi BA 3 4 94 Metodi CARLINI E L utilizzo dei batteri luminescenti Microtox Sy stem nei test tossicologici BA 2 87 Miter W E GREENE J C The Selenastrum capricornutum Printz algal assay bottle test I BA 3 87 Mitter W E GREENE J C The Selenastrum capricornutum Printz algal assay bottle test II BA 1 88 Miler W E GREENE J C The Selenastrum capricornutum Printz algal assay bottle test III BA 2 88 MILLER W E GREENE J C The Selenastrum capricornutum Printz algal assay bottle test IV BA 3 88 Mabon P Stima della taglia delle popolazioni di ciliati delle acque dolci mediante una tecnica di sub campionamento BA 3 88 EpLER J L LARIMER F W Toxicity of leachates BA 1 89 Mer_o G Borat E Ganizio M LUNARDI T CARAMELLO S Valutazioni sull utilizzazione di terreni di coltura per la ricerca dei coliformi totali nel controllo di qualit delle acque de
56. Devupis G et al 1989 Effetti del dimetilsulfossido DMSO su alcune specie di macroinvertebrati acquatici Acqua Aria 1 35 37 BA 4 89 98 PETERSEN R C Jr et al 1987 Comparison of the biological effects of Humic materials under acidified conditions The Sc of the Total Environ 62 387 398 BA 4 89 99 GUZZELLA L et al 1989 Potenziale mutageno dei microinqui nanti organici in acque superficiali e potabili dell Italia settentrionale Acqua Aria 2 169 175 BA 5 89 106 Goran MILBRINK 1987 Biological characterization of sedi ments by standardized tubificid bioassays Hydrobiologia 155 267 275 BA 5 89 107 VIGANO L 1986 Test di tossicit su effluenti di scarico con trota e dafnia confronto dei risultati Acqua Aria 4 409 413 BA 5 89 108 VIGANO L 1989 Test di tossicit con Daphnia magna esame dei fattori che determinano l idoneit dell allevamento In quinamento XXXI 9 69 74 BA 1 91 170 GersIcH F M et al 1989 Chronic toxicity of biphenyl to Daphnia magna Straus Bull Environ Contam Toxicol 43 355 362 BA 1 91 171 CowaiLL U M et al 1989 New approach to the seven day Ceriodaphnia dubia test with additional comments pertai ning to the same test for Daphnia magna Bull Environ Contam Toxicol 42 749 753 BA 1 91 172 WUNCHENG Wana 1990 Characterization of phytotoxicity of metal engraving effluent samples Envir Monit and Ass 14 59 69 BA
57. FINITIVO Per determinare se un corpo idrico contiene tossici capaci di determinare effetti acuti a breve termine su C dubia si espongono 1 neonati di questo crostaceo ad un campione non diluito delle acque dello stesso Se le carat teristiche di quest ultimo almeno in termini di durezza sono sostanzialmente diverse da quelle dell acqua di alle vamento necessario utilizzare neonati prodotti da fem mine acclimatate ad un mezzo avente durezza simile a quella del campione da saggiare cfr paragrafo 3 3 e Appendice A3 In tal caso la prova di controllo allestita usando l acqua di acclimatazione Il campione del corpo idrico viene saggiato in quat tro repliche e in modo analogo viene allestita la prova di controllo In ciascuna delle repliche aventi volume di 20 mL sono introdotti 10 neonati di C dubia Contrariamen te alla procedura dei saggi con diluizione in questo caso i risultati delle diverse repliche non vengono cumulati ben si utilizzati per valutare se le eventuali differenze di sopravvivenza o mortalit tra gli organismi esposti al campione e quelli esposti al mezzo di controllo sono statisticamente significative Per quanto riguarda le re stanti condizioni di saggio esse sono da considerare inva riate rispetto a quanto gia descritto Se la tossicit del corpo idrico risultasse tale da causare una mortalit superiore al 50 degli organismi si pu procedere alla misura della tossicit acuta in termini di LC
58. Freshwater Biology 15 1 14 BA 1 87 5 BLOIs C 1985 The larval diet of three anisopteran Odona ta species Freshwater Biology 15 505 514 BA 1 87 6 HiLpREN A G et al 1984 Community structure in some southern English streams the influence of species interac tions Freshwater Biology 14 297 310 BA 2 87 15 BRONMARK C et al 1984 Animal community structure as a function of stream size Hydrobiologia 112 73 79 BA 2 87 16 Irvine J R 1985 Effects of successive flow perturbations on stream invertebrates Can J Fish Aquat Sci 42 1922 1927 BA 2 87 17 GHETTI P F et al 1984 The drift over one year of Plecoptera and Ephemeroptera in a small stream in Northern Italy Arch Hydrobiol 99 4 478 488 BA 3 87 21 Cuapwick J W et al 1986 Recovery of benthic invertebrate communities in silver bow creek Montana following impro ved metal mine wastewater treatment Water Air and Soil Pollution 28 427 438 BA 3 87 22 Rossi L 1985 Interaction between invertebrates and micro fungi in freshwater ecosystems Oikos 44 175 184 BA 3 87 23 DuprEv D W 1986 Factors influencing the microdistribu tion of two sympatric species of Plecoptera an experimental study Can J Fish Aquat Sci 43 BA 1 88 31 ADAMS J et al 1987 Factors affecting the microdistribution of Gammarus pulex Amphipoda an experimental study Freshwater Biology 17 307 316 BA 3 88 55
59. Low ed Handbook of ecotoxicology Blackwell Oxford 1993 4 BA 1 96 Igiene urbana Il controllo dei roditori nocivi nelle aree verdi urbane Comune Viareggio 1988 BA 4 88 MonterMinI ed L Infantria in Italia Consorzio Fitosan Reggio Emilia 1994 BA 1 95 Ambiente amp Ecologia Relazione sullo stato dell ambiente nella provincia di Mode na 1 aggiornamento Prov Modena 1988 BA 2 89 Cerutti Il rischio alimentare Tecniche Nuove 1989 BA 3 89 PASQUALINI SALSA Il diritto dell ambiente Sole 24 ore 1988 BA 4 89 Gli abitanti di Reggio Emilia e l ambiente Comune Reggio Emilia 1985 BA 2 90 Morte biologica o ritorno alla natura WWF Abruzzo 1990 BA 6 90 NicoLai La scienza della bioindicazione ENEA Roma 1992 BA 6 92 MassaRuTTO Economia del ciclo dell acqua Regolamenta zione ambientale ed economica nei servizi pubblici F Ange li Milano 1993 BA 5 93 MARCHETTI ed Ecologia applicata CittaStudi Milano 1993 BA 5 93 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Segnalazioni L acqua in casa Come ridurre gli sprechi smettere d inqui narla e migliorarne la qualit Consorzio Risorse Idriche Firenze 1995 BA 6 95 Evoluzione STANLEY L evoluzione dell evoluzione un nuovo calendario per l origine delle specie Mondadori 1982 BA 2 89 ELDREDGE TATTERSALL I miti dell evoluzione umana Borin ghieri 1984 BA 2 89 Bo
60. M bahia di catturare la preda e quindi di nutrirsi adeguatamente Lussier et al 1988 La necessita di fornire cibo vivo quotidianamente all allevamento dei misidacei pu rendere utile l impiego di sistemi automatizzati che in assenza del personale tecnico fine settimana idratano le cisti di Artemia e somministrano i naupli alle vasche In breve si tratta di congegni artigianali nei quali un temporizzatore control la il deflusso per gravita di un certo volume di acqua di mare al contenitore con le cisti da idratare e similmente dei naupli alla vasca quando la schiusa completata SCHIMMEL e Hansen 1975 WARD 1984 A7 Riproduzione Nelle colture di laboratorio M bahia raggiunge la maturit sessuale in 12 20 giorni in relazione alla temperatura dell acqua ed alla dieta A differenza di quanto accade nei generi Daphnia o Ceriodaphnia le uova non si sviluppano se non fecondate L accoppiamento ha luogo di notte e dura pochi minuti Affinch si abbia una attivit riproduttiva soddisfacente la temperatura delle vasche di allevamento deve essere mantenuta tra 24 e 26 C Normalmente le uova sono presenti negli ovari delle femmine a circa 12 giorni dalla schiusa Fig 3 e la camera di incubazione a marsupio completamente svi luppata negli organismi di circa 15 giorni di et corri spondenti a circa 5 mm di lunghezza corporea Fig 4 I neonati sono liberati a 17 20 giorni Il numero di uova deposte nel marsupio e
61. Mysidopsis bahia with special reference to calcium carbonate In Aquatic Toxicology and Hazard Assessment 12th vol ASTM STP 1027 U M Cowgill and L R Williams eds American Society for Testing and Materials Philadelphia 402 412 Biologia Ambientale n 6 1996 36 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit OSSERVAZIONI E QUESITI Nell ambito delle attivit di supporto tecnico scientifico all azione di verifica del rispetto delle nor mative riguardanti la qualit delle acque svolta dal laboratori di controllo segnaliamo tra le lettere perve nute in istituto che sollevano quesiti sul piano tecnico normativo e o richiedono chiarimenti su taluni aspetti delle metodologie IRSA quella del dr Giaconi diret tore del Dipartimento Provinciale di Pisa dell Agenzia Regionale per la Protezione Ambientale della Toscana ARPAT Nella lettera vengono richieste delucidazioni re lativamente alle condizioni di stabilizzazione del cam pione riportate in una tabella generale inserita nella sezione del manuale Metodi Analitici per le Acque IRSA 1994 dedicata ai metodi di campionamento nel caso dell analisi di metalli e alla loro armonizza zione con le prescrizioni della legge 10 maggio 1976 n 319 Come giustamente evidenziato nella suddetta let tera le modalit di stabilizzazione consigliate per i metalli totali vale a dire l addizione di 5 mL L di acido nitrico 1 1 per litro di campione sono applic
62. RRACCA L TENEGGI E TERRAROLLO A Monitoraggio di Francisella tularensis nella provincia della Spezia il cinghiale quale animale sentinella BA 2 3 96 BALDACCNI G GIANCHECCHI U Metcalfa pruinosa un fitofago in rapida espansione sul territorio nazionale BA 1 96 Buzzanca G QuagLia G M Torri L Il fenomeno della corrosione dei materiali metallici utilizzati nelle reti acque dottistiche BA 6 94 VOLTERRA L La formazione di biofilm e biofouling BA 6 94 Fontan N Peproni M I batteri implicati nei fenomeni di corrosione BA 6 94 BERNABEI S VOLTERRA L Macroinvertebrati colonizzanti il biofilm BA 6 94 Mancini L VOLTERRA L Particolato abiotico e microfite rinvenibili nelle reti acquedottistiche BA 6 94 VoLTERRA L Metodi di prevenzione e contenimento di biofilm e biofouling BA 6 94 Igiene urbana Marrarri P Controllo guidato di topi e ratti nelle aree urbane e suburbane BA 1 89 Marrarri P Controllo di blatte e formiche nell ambiente urbano BA 4 89 Scossa D Piccinini R Il controllo delle blatte in un ambiente ospedaliero BA 1 90 DE CARNERI I Di MATTEO L Uova di elminti nei fanghi dei depuratori di liquami urbani BA 6 90 GIANCHECCHI U Insetti parassiti delle alberature cittadine processionaria del pino e tingide del platano BA 3 4 91 BaLpaccini N E Le popolazioni urbane di storno e di colom bo notizie biologiche e possibilit di controllo BA 2 91 BaLDAC
63. Spesso dopo tre o pi mesi la coltura pu entrare in fase di senescenza e la produzione di larve risultare pressoch annullata Al contrario quan do tutte le condizioni sono favorevoli pi della met delle femmine adulte dovrebbe avere delle uova nella camera di incubazione ASTM 1990 opportuno non attendere la fase di senescenza ma garantire la continuit dell allevamento allestendo nuove vasche con organismi 50 100 per vasche fino a 100 L prelevati da colture in attiva fase riproduttiva meglio se da colture diverse al fine di favorire l eterogeneit del patrimonio genetico A tale scopo la periodica introduzio ne di organismi provenienti da altri allevamenti o me glio da pi popolazioni naturali fortemente raccoman data Gli individui di M bahia ottenuti da fonti esterne devono essere mantenuti separati dall allevamento ed in osservazione per un paio di settimane onde minimizzare il rischio di introdurre degli agenti patogeni Nelle opera zioni di trasferimento gli organismi non devono essere esposti a cambiamenti di salinit e di temperatura che siano superiori rispettivamente a 2 3 o e a 2 3 C in 24 h AS Pulizia e disinfezione Quando una vasca in funzione da alcuni mesi anche se mantenuta correttamente evidenzia un accumu lo di materiale organico artemie non consumate metabo lismo di M bahia e crescita di organismi sulle superfici sommerse della vasca La pulizia periodica per
64. VO Il metodo consente di valutare la tossicit acuta di campioni o estratti provenienti da corpi idrici d acqua dolce marina o salmastra utilizzando come risposta l ini bizione della bioluminescenza naturalmente emessa dai batteri marini della specie Vibrio fischeri 1 2 PRINCIPIO DEL METODO La bioluminescenza emessa da una popolazione monospecifica di 10 cellule di batteri Gram negativi appartenenti alla specie Vibrio fischeri ceppo NRRL B 11177 viene utilizzata per un saggio a 15 30 minuti per la determinazione dell EC dell EC e della diluizione di non effetto 50 1 3 CAMPI DI APPLICAZIONE Il metodo pu essere utilizzato per valutare gli effetti tossici acuti di campioni di scarichi afferenti in acque dolci salmastre marine o a salinit superiore a quella di mare di campioni d acqua superficiale dolce salmastra marina o a salinit superiore a quella di mare di eluati di fanghi sedimenti o altri campioni solidi di estratti di sedimenti per la preparazione di eluati ed estratti si rimanda ad un metodo IRSA che sar pubblicato successi vamente e di sostanze chimicamente definite 1 4 POSSIBILI INTERFERENZE Sostanze volatili o scarsamente solubili in acqua composti che possono reagire con l acqua di diluizione del saggio o che si possono alterare durante le prove possono influenzare l attendibilit del risultato ottenuto Campioni colorati o torbidi possono interferire con la misura foto
65. a mento trasferirli ad un cristallizzatore 2 L e con l aiuto di un piano luminoso e di un reticolo con quadrati da 2 mm selezionare quegli individui aventi lunghezza infe riore a 2 mm che dovrebbero avere un et di circa 24 ore Se non usati immediatamente i neonati di M bahia vengono mantenuti in una vasca di dimensione adeguata al loro numero e nutriti secondo 1 criteri gi esposti A questo scopo si utilizzano generalmente vasche di volume ridotto 10 20 L mantenute in aerazione moderata con un ricambio di almeno il 50 del mezzo ogni 48 h Questo periodo di mantenimento che fissato in un tempo massimo di cinque giorni dalla schiusa pu essere utilizzato per completare l acclimatazione degli organi smi alle condizioni di saggio Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 35 BIBLIOGRAFIA ASTM 1990 Standard guide for conducting lifecycle toxicity tests with saltwater Mysids American Society for Testing and Materials ASTM E 1191 90 ASTM 1992 Standard practice for using brine shrimp nauplii as food for test animals in aquatic toxicology American Society for Testing and Materials ASTM E 1203 92 ASTM 1996 Standard guide for conducting lifecycle toxicity tests with saltwater Mysids American Society for Testing and Materials ASTM E 1191 90 Revision CortigLIA M 1983 Crostacei Decapodi lagunari Guide per il riconoscimento d
66. a ottenere per diluizione il mezzo semisintetico con le caratteristiche volute Nel secondo caso ci si serve di un acqua a basso contenuto di sali oligominerale che viene corretta nei suoi costituenti maggiori mediante l aggiunta di sali di grado analitico a dare il mezzo con i valori di alcalinit e durezza desiderati Entrambe le soluzioni sono state ampiamente col laudate con successo US EPA 1989 Vigan 1991 1992 CooNEv et al 1992a Al pi si pu osservare che nel secondo tipo di impiego il pool di micronutrienti fornito dall acqua minerale prescelta resta invariato nei diversi mezzi di coltura ottenibili Inoltre il secondo tipo di applicazione evita a differenza del primo il rischio tossicologico introdotto dall uso di acqua deionizzata per la diluizione dell acqua minerale rischio che periodica mente si potrebbe concretizzare in effetti negativi sulla coltura del cladocero Cooney et al 1992b a meno di controlli assidui sulla efficienza del deionizzatore Nel primo tipo di applicazione infine pu formarsi un preci pitato nei mezzi di coltura con durezza 2 180 mg CaCO L US EPA 1989 PATTERSON et al 1992 Fatta eccezione per quelle colture di organismi che sono dedicate a saggiare dei campioni con caratteristiche peculiari in generale si consiglia di adottare un mezzo Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia 19 semisintetico c
67. abi li a quel gruppo di metalli As Cd Cr Hg Ni Pb Cu Se Zn per 1 quali la legge 319 prevede la determinazione dell elemento in soluzione come ione sotto forma di complesso ed in sospensione Per gli altri metalli Al Ba B Cr Fe Mn Sn che hanno un limite riferito all elemento in soluzione come ione sotto forma di complesso ed in sospensione dopo sedimentazione di 2 ore non si possono applicare le condizioni di stabilizzazione precedentemente indica te n quelle previste per i metalli disciolti filtrazione sul posto su membrana da 0 45 um e addizione di 3 mL L di acido nitrico 1 1 L apparente lacuna pu essere superata conside rando che la tabella in questione ha una valenza del tutto generale non ancorata a specifici riferimenti normativi mentre informazioni pi precise e dettaglia te si possono trovare al paragrafo Campionamento e conservazione del campione di ogni singolo metodo Imetodi 3090 3120 e 3200 relativi alla determinazio ne del ferro manganese e stagno rispettivamente riportano una nota a pi di pagina in cui vengono fornite le modalit di trattamento del campione nel caso in questione In particolare si prescrive che l ag giunta di acido nitrico 5 mL L di campione venga fatta dopo la decantazione Dette modalit vanno ovviamente estese anche agli altri metalli Al Ba B Cr Nella lettera si chiede inoltre se la stabilizzazio ne debba essere effettuata sul surnatan
68. ad un pratico controllo di routine di questi parametri La rimozione di ammoniaca e nitriti ad opera dei batteri comporta una riduzione del valore di pH e quindi una diminuzione del potere tampone del mezzo acquoso Questo viene comunemente ripristinato con aggiunta di Na CO o NaHCO L aggiunta non deve essere tuttavia indiscriminata in quanto elevati valori di alcalinit pos sono danneggiare l attivit riproduttiva Gli interventi correttivi per pH e alcalinit devono essere dimensionati in modo che il valore di quest ultima sia compreso tra 90 e 120 mg CaCO L Warp 1989 Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 31 Sebbene sia stata osservata una buona attivit ripro duttiva anche con pH 7 5 si raccomanda di mantenere valori superiori a pH 7 8 ricorrendo all impiego controlla to di NaHCO e rinnovi frequenti del mezzo Valori di pH compresi nell intervallo 8 0 2 0 3 sono da considerare ottimali e si consiglia il rinnovo settimanale del 20 30 96 dell acqua delle vasche A4 Alimentazione I Misidacei sono onnivori Lussier et al 1989 in quanto oltre alla cattura di copepodi o di altri organismi dello zooplancton sono in grado di filtrare alghe e di cibarsi del detrito organico integrando pertanto la dieta in vario modo E stato osservato che in corrispondenza della abbondante crescita di diatomee che caratterizza solitamente una vasca dopo va
69. al half lives of eight polycyclic suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 16 aromatic hydrocarbons PAHs in Rainbow Trout Salmo gairdneri Water Research 20 4 503 507 BA 2 88 45 KEEFER R F et al 1986 Chemical composition of vegetables grown on an agricultural soil amended with sewage sludges J Environ Qual 15 n 2 146 152 BA 3 89 85 PETERSEN R C Jn et al 1985 The octanol water partition coefficient of humic material and its dependence on hydro gen ion activity Vatten 41 236 239 BA 3 89 86 MarcevscHI S et al 1988 Indici convenzionali di rischio ambientale una proposta metodologica Acqua Aria 5 569 577 BA 3 89 87 CAMPANELLA L et al 1989 Adsorbimento di metalli pesanti sul terreno influenza della composizione del terreno e dei parametri sperimentali Acqua Aria 1 29 34 BA 5 89 110 GALASSI S et al 1987 Circolazione ed effetti degli idrocar buri aromatici negli ambienti acquatici Acqua Aria 5 BA 5 89 111 Rosas I et al 1984 Cytogenetic effects of cadmium accumu lation on water hyacinth Eichhornia crassipes Environ Research 33 386 395 BA 3 4 91 200 Marenco G et al 1990 Biodegradabilita dell NTA in siste mi acquatici a diverso grado di trofia Acqua Aria 1 35 40 BA 3 4 91 201 WARWICK FISHER S 1990 The pH dependent accumulation of PCP in aquatic microcosms with sediment Aquatic Toxico logy 18 9 218 BA 5 91
70. ale questi metodi sono di recente acquisizio ne e pertanto opportuno che gli utilizzatori e so prattutto gli enti preposti al controllo di qualit delle acque facciano pervenire suggerimenti proposte di modifica o quant altro sia ritenuto utile a migliorare l applicazione dei metodi stessi Al riguardo si sottolinea l introduzione nel No tiziario di uno spazio Osservazioni e quesiti attraverso cui stabilire in modo dialettico un con fronto tra gli utilizzatori dei metodi e la Redazione Il Notiziario si propone in altri termini di costituire sempre piu il punto focale dell analitica per le acque Per il raggiungimento di tale obiettivo pero necessaria la collaborazione piu ampia possibile di tutti i soggetti interessati al problema In particolare la comunit scientifica universitaria invitata a collaborare attraverso l invio di proposte di metodi di suggerimenti relativi a miglioramenti operativi dei metodi esistenti alla segnalazione di nuove pro cedure riportate dalla letteratura scientifica etc Solo in questo modo sar possibile fornire un prodotto utile e vitale che rappresenti un efficace strumento per il miglioramento e lo sviluppo di tecni che analitiche per il controllo ambientale Prof Roberto Passino Direttore dell Istituto di Ricerca sulle Acque Roma giugno 1996 Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti 3
71. am Arch Hydrobiol 122 4 403 420 BA 5 96 368 Ecologia generale MouCcHET P 1986 Revue des r actions des algues aux micro polluants mineraux et organiques conseguences ecologi ques et possibilit s d applications industrielles Water Rese arch 20 4 399 412 BA 3 87 25 HERRMANN J 1985 Temperature dependance of reproduc tion in Dendrocoelum lacteum Turbellaria an experimen tal approach Oikos 44 268 272 BA 3 87 24 AMORI G et al 1987 Elementi di valutazione ambientale di tre siti nell Italia centrale Lazio tramite l analisi di rigetti di Tyto alba Scopoli 1769 Acqua Aria 9 1085 1089 BA 3 88 48 Wnoor A J 1985 A quantitative method for estimating the amount of earthworm Lumbricus terrestris in animal diets Oikos 44 239 242 BA 3 88 49 CnoszrrI D et al 1987 Distribution and life cycles of clado cerans in temporary pools from Central Italy Freshwater Biology 18 165 175 BA 3 88 53 KonPELAINEN H 1986 The effects of temperature and photo period on life history parameters of Daphnia magna Cru stacea Cladocera Freshwater Biology 16 615 620 BA 3 88 54 Fripay L E 1987 The diversity of macroinvertebrate and macrophyte communities in ponds Freshwater Biology 18 87 104 BA 4 88 56 PETERSEN R C Jn et al 1987 The Biological Importance of Humic Material in Acidified Waters Nat Swedish Environ Prot Board Rep 3388 BA 3 89 89
72. ancero geni per l uomo L giene Moderna 97 5 884 898 BA 1 94 287 IAWPCR 1991 Bacteriophages as model viruses in water quality control JAWPRC Wat Res Vol 25 N 5 pp 529 545 91 BA 1 94 288 REALI D et al 1991 Riflessioni sull uso dei batteriofagi come indici di contaminazione fecale L Igiene Moderna 95 820 834 BA 1 94 289 DE MATTIA M et al 1991 Sulla possibile causa dei caratteri organolettici di un acqua potabile JA Ingegn Amb XX 11 12 675 677 BA 2 94 296 DeL Veccuio G 1992 Studi moderni sul potere autodepu rativo del mare e sul destino dei batteri specialmente gli enterici in esso riversati giene e San Pubbl nov dic 92 BA 2 94 297 Indice 1987 1996 Abstracts LEGNANI P et al 1991 La qualit igienica delle acque mine rali naturali una responsabilit nei confronti del consuma tore Riv Sc Alimentaz 22 3 293 301 BA 2 94 298 VOLTERRA L et al 1993 Nematodi nelle acque con particola re riguardo a quelle potabili ng Amb n 3 4 200 202 BA 2 94 299 Giovenco A et al 1992 Formazione di clorofenoli nei pro cessi di potabilizzazione delle acque nquinamento XXXIV 5 72 76 BA 5 94 316 Mer Lo G et al 1993 I sottoprodotti della disinfezione nella potabilizzazione delle acque superficiali sviluppo di un mo dello previsionale JA Ing Amb XII 10 543 549 BA 5 94 317 SPECCHIARELLO M er al 1
73. are di infestazioni saltuarie BA 4 89 CAsARINI P Un dannosissimo defogliatore sta progressiva mente infestando il nostro paese Hyphantria cunea Drury BA 5 89 Pasini G Acque potabili e tularemia BA 5 90 GusMiNI M Tutela ambientale e informazione fitosanitaria BA 6 90 AzzoNI R Che cosa bevono i milanesi BA 3 4 91 L INTERVISTA AzzoNI R Legge 319 76 saggio di tossicit alcune domande al Prof R Marchetti BA 1 87 Manzini P Ambiente ed economia intervista a Livia Forna ciari Davoli BA 3 88 Indice 1987 1996 Attualit L intervista CoccHi M TAMBURRO A Aedes albopictus una zanzara venu ta da lontano BA 3 4 91 ZANICHELLI F Il laboratorio didattico naturalistico dei civici musei di Reggio Emilia BA 2 91 MaroLINI B Convegno internazionale sul ripristino fluviale BA 5 91 PETERSEN R C Conservation and preservation BA 6 91 VOLTERRA L Mancini L Laghi ed invasi italiani adibiti ad uso potabile BA 1 92 Gatti M Anisakiasi BA 6 92 BALDACCI G N Il progetto Pond Action BA 3 4 93 MONTANARI P Quale sviluppo sostenibile BA 3 4 94 Sanson G Approvata la legge anti alluvioni BA 1 94 Nau C Le piante e l inquinamento dell aria BA 5 94 A CURA DELLA REDAZIONE DI BIOLOGIA AMBIENTALE 1 L America in Italia BA 2 93 2 I sillabari delle foreste BA 2 93 3 Agenzia Nazionale per la Protezione dell Ambiente BA 5 93 4 Agenzia
74. ario 29 33 BA 2 94 304 MADONI P et al 1993 Comparative analysis of the activated sludge microfauna in several sewage treatment works Water Research 27 1485 1491 BA 5 94 320 DRUSIANI R et al 1993 Scelta dello schema di trattamento in funzione della tipologia dello scarico Trattamento finale e riuso delle acque ngegn San Amb mag giu 18 26 BA 5 94 321 NyBROE O et al 1992 Enzyme activities in waste water and activated sludge Water Research 26 579 584 BA 5 94 322 Foor R J et al 1992 Variable morphology of Microthrix parvicella in activated sludge systems Wat Res 26 7 875 880 BA 1 95 326 PusoL R et al 1991 Biological foams in activated sludge plants characterization and situation Wat Res 25 11 1399 1404 BA 1 95 327 ErTALA M et al 1992 Removal of chlorophenols in a muni cipal sewage treatment plant using activated sludge War Res 26 6 797 804 BA 1 95 328 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Abstracts CAVADORE A et al 1993 Acido Peracetico Oxymaster disin fezione acque reflue urbane di un depuratore cittadino Esperienze industriali all impianto di Cesena ngegn sanitaria ambientale gen feb 23 27 BA 6 95 348 BRANDI G et al 1993 Dispersione nell ambiente di aerosols microbici generati da impianti di depurazione a fanghi attivi Ing Amb XXII 11 12 BA 6 95 349 Casey T G et al
75. ater Research 28 119 124 BA 2 94 303 WERNER P 1991 Trattamento microbiologico dei terreni contaminati RS Rifiuti Solidi V 2 121 126 BA 5 94 319 Liu D et al 1993 Characterization of biofilm development on artificial substratum in natural water Water Research 27 361 367 BA 2 95 343 Draco L et al 1993 Adesione batterica e sviluppo di biofilm su superfici solide I parte ng Sanit amb genn febbr 31 43 BA 2 95 346 Draco L et al 1993 Adesione batterica e sviluppo di biofilm su superfici solide II parte ngegneria sanit amb mar apr 77 89 BA 2 95 347 Blais J F et al 1992 Indicator bacteria reduction in sewage sludge by a metal bioleaching process Wat Res 26 4 487 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 24 495 BA 5 96 372 Uri N D 199 Detecting a trend in water quality Res J Water Pollut Control Fed 63 868 872 BA 5 96 373 Suzuki Y et al 1992 Existence of stable Fe II complex in oxic river water and its determination Water Research 11 1421 1424 BA 5 96 374 Vegetazione riparia Kann J R et al 1978 Water resources and the land water interface Sc 201 229 234 BA 2 90 125 Lowrance R et al 1984 Riparian forests as nutrient filters in agricultural watersheds BioSc 34 6 374 377 BA 2 90 126 CAPORALI F 1985 Gli effetti della gestione agroforestale del territorio sul flusso di acqua e di el
76. ation on nontarget arthropods in a cornfield Environ Entomol 12 1171 1174 BA 3 4 90 138 Massor C et al 1986 Etude par l analyse en composantes principales de la m sofaune de la liti re sous h tre de quatre parcelles foresti res exploit es diff remment Rev Ecol Biol Sol 23 1 19 27 BA 3 4 90 139 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Abstracts ARPIN P et al 1984 Utilisation des n matodes Mononchida et des Collemboles pour caract riser des ph nom nes p do biologique Rev Ecol Biol Sol 21 2 243 268 BA 3 4 90 140 Pozo J et al 1986 Studies on the collembolan populations of several plant communities of the Basque Country Spain Rev Ecol Biol Sol 23 215 232 BA 3 4 90 141 Pozo J 1986 Ecological factors affecting collembola popu lations Ordination of communities Rev Ecol Biol Sol 23 3 299 311 BA 3 4 90 142 PaAoLETTI M G et al 1988 Pedofauna bioindicators and heavy metals in five agroecosystems in the north east Italy Rev Ecol Biol Sol 25 1 33 58 BA 3 4 90 143 Benctsson G et al 1989 Critical metal concentrations for forest soil invertebrates A review of the limitations Water Air and Soil Pollution 47 381 417 BA 3 4 90 144 Metodi Bowrzs N D et al 1985 Effective solvents and extraction periods employed in phytoplankton carotenoid and chlo rophyll determinations Can J Fish Aquat Sci 42
77. bre dicembre 1996 biologia ambientale Bollettino C I S B A n 6 1996 Autorizzazione del Tribunale di Reggio Emilia n 837 del 14 maggio 1993 proprietario Paola Manzini Presidente del Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale direttore responsabile Rossella Azzoni REDAZIONE Rossella Azzoni Giuseppe Sansoni responsabile grafico Roberto Spaggiari responsabile di segreteria responsabile di redazione Numero chiuso in redazione il 20 12 1996 Il C LS B A Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale si propone di divenire un punto di riferimento nazionale perla formazione e l informazione sui temi di biologia ambientale fornendo agli operatori pubblici uno strumento di documentazione di ag giornamento e di collegamento con interlocutori qualificati favorire il collegamento fra il mondo della ricerca e quello applicativo promuovendo i rapporti tecnico scientifici con i Ministeri il CNR l Universit ed altri organismi pubblici e privati interessati allo studio ed alla gestione dell ambiente orientare le linee di ricerca degli Istituti Scientifici del Paese e la didattica universitaria facendo della biologia ambientale un tema di interesse nazionale favorire il recepimento dei principi e dei metodi della sorve glianza ecologica nelle normative regionali e nazionale concer nenti la tutela ambientale Per iscriversi al C I S B A o per informazioni
78. ccHI Ceruti Modi di pensare postdarwiniani saggio sul pluralismo evolutivo Dedalo 1984 BA 2 89 Ceruti Il vincolo e la possibilit Feltrinelli 1986 BA 2 89 Gourr Il pollice del panda riflessioni sulla storia naturale Ed Riuniti 1983 BA 2 89 Gourp Quando i cavalli avevano le dita misteri e stranezze della natura Feltrinelli 1984 BA 2 89 Gourp Questa idea della vita la sfida di Charles Darwin Ed Riuniti 1985 BA 2 89 Gourp Il sorriso del fenicottero Feltrinelli 1987 BA 2 89 SERMONTI Fonpi Dopo Darwin critica all evoluzionismo Rusconi 1980 BA 2 89 BARBIERI La teoria semantica dell evoluzione Boringhieri 1985 BA 2 89 KaAnpuc Cenni di evoluzione biochimica Ed Adriatica 1979 BA 2 89 Laszro Evoluzione Feltrinelli 1986 BA 2 89 Monon Il caso e la necessit Mondadori 1970 BA 2 89 Agricoltura PERRERA Agricoltura Ambiente inquinamento e protezione in proprio 1988 BA 2 89 MurnuEAp THoMsoN Pesticide impact on stream fauna with special reference to macroinvertebrates Cambridge Univ Press 1987 BA 4 89 Carson Primavera silenziosa Feltrinelli 1962 BA 3 4 90 Commoner Il cerchio da chiudere Garzanti 1972 BA 3 4 90 Conti Che cos l ecologia Mazzotta 1977 BA 3 4 90 Conti Questo pianeta Ed Riuniti 1983 BA 3 4 90 Tiezzi Tempi storici tempi biologici Garzanti 1984 BA 3 4 90 Lapp Corus I miti dell agricolt
79. chiusa o successive Gli allevamenti di tipo controllato sono mantenuti come fonte diretta di neonati per 1 saggi tossicologici In questo caso le femmine di C dubia possono essere alleva te sia in piccoli gruppi che singolarmente ed in entrambi i casi ogni individuo deve avere a disposizione un volume di almeno 15 mL di mezzo La somministrazione del cibo quotidiana ed il trasferimento degli organismi deve essere effettuato almeno a giorni alterni ma preferibil mente anch esso con frequenza giornaliera Nel caso ven ga adottata la soluzione minima di tre cambi settimanali luned mercoled e venerdi sono i giorni consigliati Si tenga presente tuttavia che giornalmente si deve proce dere alla rimozione e alla conta dei neonati prodotti Se l allevamento in buone condizioni ogni femmi na dovrebbe produrre tre schiuse nell arco di 7 giorni 25 1 C con un numero medio di neonati pari o superiore a 15 nello stesso arco di tempo gli eventuali decessi non devono superare il limite del 20 In caso contrario sussistono dei problemi che sono solitamente dipendenti dalla qualit del mezzo o della dieta Dopo un massimo di 14 giorni le femmine adulte sono scartate e gli alleva menti riallestiti con giovani individui di terza schiusa o successive Anche nel caso degli allevamenti di tipo controllato consigliato mantenere piu gruppi di organismi o pi serie di singoli individui sfalsate nell allestimento di una settima
80. cniche di ingegneria naturalistica Video Reg Em Ro magna 1995 BA 1 96 Corso di formazione professionale di ingegneria naturalisti ca Reg Veneto 1996 BA 5 96 Varie SPALLANZANI M F La collezione naturalistica di Lazzaro Spal lanzani i modi e i tempi della sua formazione Comune Reggio Emilia 1985 BA 1 90 Sustainable use of groundwater RIVM RIZA 1991 BA 1 92 Mazor Applied chemical and isotopic groundwater hydro logy Wiley amp Sons 1990 BA 2 92 CASTELLANI ed La biblioteca della scienza italiana Bibl Panizzi RE 1994 BA 3 4 94 Fiuipri Io sto con le vipere Ricerche sui rettili italiani Ediemme Firenze 1995 BA 2 95 Indice 1987 1996 Inserti speciali INSERTI SPECIALI Guida Multizonali CISBA BA 5 89 In un limpido ruscello Min Amb e Sicur Nucleare dell As sia Rep Fed Tedesca BA 1 90 Compatibilit ambientale delle opere fluviali Relazioni con clusive della commissione ministeriale per il fiume Magra CISBA BA 2 90 Agricoltura e fauna selvatica Consiglio d Europa BA 3 4 90 Pesci delle acque interne italiane di Turin P CISBA BA 90 92 La gestione naturalistica dei fossi di Newbold C et al Nature Conservancy Council Association of Drainage Authori ties BA 1 6 93 Depurazione mediante lagunaggio naturale Guida tecnica per piccole comunit di Vuillot M et al Min Agriculture CEMAGREF Paris Lyon BA 3
81. d Water Conserv 48 1 65 70 BA 2 95 345 VITALI R 1993 Diversificazione degli habitat fluviali e peri fluviali Acqua Aria 7 731 733 BA 6 95 355 VANNOTE R L et al 1980 The River Continuum Concept Can J Fish Aquat Sci 37 130 137 BA 4 96 359 STATZNER B et al 1985 Question and comments on the River Continuum Concept Can J Fish Aquat Sci 42 1038 1044 BA 4 96 360 Brey R E et al 1980 Importance of organic debris dams in the structure and function of stream ecosystems Ecology 61 5 1107 1113 BA 4 96 361 MINSHALL G W et al 1985 Developments in stream ecosy stem theory Can J Fish Aquat Sci 42 1045 1055 BA 4 96 362 PETERSEN R C et al 1987 Stream management emerging global similarities Ambio 16 4 166 179 BA 4 96 363 Hopss RJ et al 1990 Nature conservation the role of corridors Ambio 19 2 94 95 BA 4 96 364 PENNAK R W 1971 Toward a classification of lotic habitats Hydrobiologia 38 2 321 334 BA 4 96 365 Karr J R et al 1978 Water resources and the land water interface Science 201 229 234 BA 5 96 366 Indice 1987 1996 Abstracts Lamberti G A et al 1991 Stream ecosystem recovery fol lowing a catastrophic debris flow Can J Fish Aquat Sci 48 196 208 BA 5 96 367 Dudgeon D 1991 An experimental study of abiotic distur bance effects on community structure and function in a tropical stre
82. d almeno 200 mL lampade fluorescenti ad ampio spettro controllate da un temporizzatore con il quale regolare il fotoperiodo e possibilmente anche da un dispositivo che permetta la transizione graduale tra le fasi di luce e di buio bagno o camera termostatati per il mantenimento della temperatura delle soluzioni da saggiare a 20 1 C per tutta la durata della sperimentazione analizzatore di ossigeno disciolto misuratore di salinit fonte di aria compressa a bassa pressione con diffusori a pietra porosa o cannule di vetro I compressori che comunemente alimentano gli impianti centralizzati immettono oli e altri contaminanti nella rete di distri buzione che vanno rimossi con cartucce di carbone attivo o dispositivo analogo 2 4 imbuti separatori con volume di 2 L per la schiusa di Artemia salina cisti di A salina che rispondono ai requisiti indicati in Appendice miscela di sali per la preparazione di acqua di mare artificiale La miscela commercializzata con il mar chio Forty Fathoms ha dato buoni risultati nella conduzione dei saggi e nella coltura di M bahia cfr Appendice 3 2 ORGANISMI PER IL SAGGIO Gli organismi appartenenti alla specie M bahia devono avere et compresa tra e 5 giorni In tale ambito l et degli organismi saggiati non pu differire per pi di 24 ore I giovani crostacei rispondenti a questi requisiti sono facilmente ottenibili da femmine adulte le cui uova most
83. d il numero dei giovani prodotti per ogni schiusa dipendono in modo diretto dalle condizioni ambientali e dalle dimensioni della femmina che ha una schiusa ogni 4 7 giorni Femmine adulte 8 9 mm mante nute in acqua naturale o sintetica Forty Fathoms produ cono mediamente 11 6 larve allo stadio III l ultimo prima della nascita L attivit riproduttiva dei misidacei pu risultare Fig 3 Femmina adulta di M bahia con uova in sviluppo negli ovidotti modificata da Lussier ef al 1987 1 antennula 2 occhio peduncolato 3 carapace 4 statoci sti 5 telson 6 antenna 7 marsupio in sviluppo 8 pleopodi 9 uropode 10 statocisti 11 telson 12 uropo di 13 ovidotti con uova 14a marsupio in sviluppo Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 33 Fig 4 Femmina adulta di M bahia con uova negli ovidotti ed embrioni in sviluppo nella sacca a marsupio modificata da Lussier et al 1987 1 antennula 2 occhio peduncolato 3 carapace 4 statocisti 5 telson 6 antenna 7 marsupio con embrioni 8 pleopodi 9 uropo de 10 statocisti 11 telson 12 uropodi 13 ovidotti con uova 14b marsupio con embrioni inibita se nelle vasche si raggiungono condizioni di so vraffollamento Pertanto fatta eccezione per 1 periodi di massima necessit di neonati opportuno rimuovere con cadenza regolare una parte degli individui presenti nelle
84. da che sia noto saggio definitivo o no saggio preliminare l ambito di concentrazioni entro cui ci si aspetta di rilevare l effetto tossico dell acqua di scarico o degli estratti da analizzare Per campioni poco tossici o per corpi idrici superficiali si consiglia invece di adottare la procedura di saggio al 100 3 3 1 Saggio preliminare Quando sia ignota la tossicit del campione da analizzare occorre procedere saggiando un ampio inter vallo di diluizioni Si consiglia di saggiare oltre alla soluzione di controllo si utilizza la soluzione diluente 2 2 1 il campione tal quale e almeno quattro diluizioni successive 1 10 con la soluzione diluente 2 2 1 pari al 100 10 1 0 1 e 0 01 del campione Si prepara no le diluizioni nelle cuvette e si incubano le cuvette per circa 15 minuti a 15 C In altre cuvette due per ciascuna diluizione si preparano le soluzioni batteriche riattivate 500 uL come descritto in 3 2 Si lasciano termostatare le cuvette con la sospensione batterica per circa 15 minuti e si misura l intensit luminosa emessa dai batteri per ciascuna cuvetta con il luminometro Tale misura viene indicata come I Immediatamente dopo la determinazio ne dell I si aggiungono 500 uL di campione o di soluzio ne controllo alle cuvette Il campione venendo ad essere diluito 1 1 con la sospensione batterica sar quindi sag giato alle concentrazioni equivalenti a 50 5 0 5 0 05 e 0 005 A 15 e 30 minuti
85. dati di letteratura relativi al saggio acuto con C dubia Una serie di 7 prove condotte da un unico laboratorio sullo scarico di un impianto di depurazione civile diede un valore medio della 48hLC di 26 16 v v con un coeffi ciente di variazione del 28 5 in RUE et al 1988 Una analoga serie di 15 saggi diede un valore medio di 48hLC pari a 60 0 v v con un CV del 31 1 Il confronto tra il saggio acuto con C dubia e quello con il ciprinide Pime phales promelas condotti in parallelo sui medesimi cam pioni di acqua di scarico forni una 48LC media di 78 4 per il crostaceo e di 75 896 per il pesce con CV rispettivamente di 33 1 e 19 6 NorBerc Kina 1989 memorandum Il saggio acuto con C dubia stato oggetto di due studi di intercalibrazione entrambi con lo stesso tossico di riferimento il KCI 25 C durezza 80 100 mg L CaCO US EPA 1991 AI primo parteciparono 11 laboratori e risult una 48hLC media di 264 mg KCI L con un CV del 48 5 Al secondo studio parteciparono 171 laborato ri consentendo la valutazione di una 48hLC media di 432 mg KCI L e di un CV pari a 39 8 7 ANALISI DEI RISULTATI 7 1 CALCOLO DELLA LC Il saggio per la valutazione della tossicit acuta descritto in questa procedura si propone non solo l identi ficazione delle sorgenti di contaminazione capaci di effet ti tossici acuti ma anche la quantificazione della loro potenziale tossicit mediante la stima della concentrazio ne
86. dei licheni nel biomonitoraggio dell inquinamento atmosferico BA 2 90 TuniN P WEGER M Le macrofite acquatiche come indicatori biologici di qualit delle acque BA 3 4 91 MERCORELLI S Valutazione della presenza di ozono troposfe rico nel versante narnese della Conca ternana mediante l uso di Nicotiana tabacum L cv Bel W3 BA 6 92 BRAGALONI M Garrou E PuccineLLI P Verifica di una metodica di monitoraggio dell inquinamento atmosferico con piante di interesse forestale in ambiente urbano e subur bano BA 3 4 93 SiuGARDI M MaroLINI B L inventario delle caratteristiche ambientali dei corsi d acqua alpini Guida all uso della scheda RCE 2 BA 2 93 BELTRAME V SPAGGIARI R TURINA G Prima definizione di una scheda per l inventario delle caratteristiche ambientali dei corsi d acqua mediante fotointerpretazione BA 6 93 GenonI P CERANA D Qualit biologica del Naviglio Grande a valle di alcuni scarichi in due diverse condizioni di por tata BA 6 95 Morpurco M Descrizione sintetica del Saprobienindex BA 2 3 96 Morpurco M Confronto fra Indice Saprobico Friedrich e DIN 1990 e Indice Biotico Esteso Ghetti e IRSA 1995 BA 2 3 96 CesaroNI D D ErcHIA V Attivit perossidasica in conifere utilizzate per il monitoraggio dell inquinamento in ambien te urbano BA 1 96 Depurazione MONTANINI E ANTONIETTI R Allevamento di organismi acqua tici detritivori con i fanghi d
87. della giornata 3 7 OSSIGENO DISCIOLTO In presenza di valori elevati di BOD e alle concen trazioni pi elevate di acqua di scarico maggiore il rischio che l ossigeno disciolto scenda a livelli critici non Biologia Ambientale n 6 1996 26 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia compatibili con la sopravvivenza degli organismi Si rac comanda pertanto di controllare questo parametro e con maggior frequenza durante le prime ore di sperimentazio ne Se la concentrazione di O disciolto scende al di sotto del 60 del valore di saturazione Tab 1 si rende necessario aerare le soluzioni di effluente facendo gorgo gliare aria nei beaker di saggio mediante cannule in vetro 0 pipette pasteur Nel caso si debba procedere all aerazio ne di una diluizione del campione tutte le restanti devono essere aerate in modo analogo includendo anche i reci pienti di controllo Il flusso d aria deve essere mantenuto ad un livello minimo che non arrechi disturbo agli organi smi Usando delle cannule di vetro o delle pipette pasteur si pu considerare come indicativo un flusso pari a 100 bolle minuto 4 PROCEDURA DI SAGGIO CON DILUIZIONE EFFLUENTE 4 1 SAGGIO PRELIMINARE Nel caso di campioni a tossicit completamente sconosciuta o sospettati di essere particolarmente tossici pu essere vantaggioso effettuare una prova preliminare per definire l intervallo di tossicit entro cui condurre succ
88. deve protrarsi oltre 1 5 10 minuti in quanto l elevata concentrazione di organismi raggiunta sul fondo del contenitore fa si che sospeso il gorgoglia mento l ossigeno disciolto venga rapidamente esaurito provocando la morte dei naupli L apertura alterna del rubinetto dell imbuto separatore consente di rimuovere a piu riprese i naupli appena schiusi Questi verranno filtra ti e se necessario risciacquati o concentrati in mezzo fresco con l aiuto di un contenitore col fondo di rete maglie di 150 um Il nauplio di artemia incapace di nutrirsi di fonti di cibo esterne per un periodo di circa 24 ore dalla schiusa 25 C durante le quali utilizza le riserve di tuorlo di cui provvisto In questo arco di tempo il valore nutrizionale e calorico del nauplio decadono progressivamente e per tanto si consiglia di utilizzarlo subito dopo la schiusa o comunque entro le 2 6 ore dal T e cio da quando il 90 delle cisti schiuso ASTM 1992 Grazie alla ripeti bilit del tempo necessario alla schiusa delle numerose variet di Artemia a temperatura costante l idratazione delle cisti pu essere effettuata in base al momento giudi cato piu opportuno per la raccolta e la somministrazione dei naupli appena schiusi A parit di altre caratteristiche tossicologiche e nutrizionali la ridotta dimensione del nauplio deve costituire il criterio guida nella scelta della fonte commerciale di A salina pena l impossibilit per i giovani di
89. di C affinis Durante gran parte dell anno la popolazione di C dubia consiste pressoch esclusivamente di individui di t i 0 05 mm Fig 2 Postaddome di Ceriodaphnia dubia 1 femmina partenogenetica 2 dettaglio dell artiglio terminale 3 maschio BERNER 1986 sesso femminile che si riproducono con uova partenoge netiche Queste sono deposte nella camera dorsale di incubazione Fig 1 in numero da 4 a 10 o pi e schiuse anche di 20 neonati non sono infrequenti I giovani indi vidui sono pressoch identici agli adulti e pertanto si accrescono senza un vero processo di metamorfosi svi luppo diretto L accrescimento che ha maggiore velocit nel periodo giovanile ha luogo subito dopo ogni evento di muta quando il nuovo carapace ancora elastico e l orga nismo pu aumentare la sua taglia Nei laghi e nelle raccolte d acqua permanenti gli individui di sesso maschile schiudono dalle uova parteno genetiche nel solo periodo autunnale in risposta verosi milmente a stimoli ambientali quali il raffreddamento delle acque la diminuita disponibilit di cibo e l abbre viarsi della fase luminosa del fotoperiodo Il risultato della riproduzione sessuata la fecondazione di un unico uovo che viene racchiuso in uno spesso involucro del carapace noto come efippio Tale struttura si sviluppa nella regione dorsale in corrispondenza della camera di incubazione Fig 1 L efippio protegge l
90. duzione del saggio E utile disporre dei risultati dopo 24 48 72 e 96 h di esposizione e pu essere anche utile ai fini della caratte rizzazione del campione registrare ogni altra alterazione che sia osservabile negli organismi esposti Gli esemplari di M bahia sopravvissuti alla speri mentazione non possono essere riutilizzati ed inoltre appartenendo ad una specie non indigena non devono essere assolutamente dispersi nell ambiente 5 PROCEDURA DI SAGGIO SENZA DILUIZIONE CORPO IDRICO 5 1 SAGGIO DEFINITIVO La soluzione che viene comunemente adottata per individuare la presenza di effetti tossici acuti nelle acque del corpo idrico consiste nell esporre dei giovani di M bahia ad un campione non diluito di tali acque Se l acqua di allevamento ha salinit diversa da quella del campione da saggiare si procede ad acclimata re i crostacei secondo le indicazioni date in Appendice Si tenga presente che il saggio acuto pu essere condotto entro un intervallo di salinita molto ampio e cio 5 35 o L acqua usata per completare l acclimatazione degli or ganismi sia che si tratti di acqua naturale che di acqua sintetica verr anche utilizzata per allestire il controllo A differenza del saggio su effluenti il campione di acqua del corpo idrico saggiato in quattro repliche ed altrettante devono essere quelle preparate con l acqua di controllo In ogni replica avente il volume di 200 mL vengono trasferiti 10 giovani indi
91. e mai perfettamente aderente a tutti 1 segmenti toracici per la presenza nelle femmine di un marsupio formato da Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 29 alcuni oostegiti porzione setolosa di arti addominali e per la mancanza di una vera e propria metamorfosi Cor TIGLIA 1983 L ordine dei Misidacei rappresentato nelle acque nazionali da varie specie Tra quelle che si possono catturare in ambienti lagunari la pi comune Mysis slabberi che unitamente ad altre come Diamysis bayren sis sostano poco sopra il substrato o in rapporto con questo potendo rappresentare una frazione notevole del popolamento planctonico solo nelle ore notturne di inten sa attivit natatoria CoTTIGLIA 1983 La riproduzione avviene in primavera ed estate I Misidacei costituiscono negli ambienti estuariali e marini un importante anello della catena trofica essendo predati da numerose specie di pesci spesso di valore commerciale M bahia una specie estuariale che si riscontra principalmente in acque con salinit superiori al 15 o originaria della costa atlantica dell America del nord e del Golfo del Messico in particolare Similmente agli organismi del genere Daphnia an che in Mysidopsis gli stadi giovanili si sono spesso dimo strati come i pi sensibili alle sostanze tossiche Quando i giovani schiudono e abbandonano la camera di incubazio ne a marsupio
92. e of a small woodland stream Hydrobiologia 157 231 240 BA 3 4 91 197 Pinay G et al 1986 Une station d puration naturelle des nitrates transportes par le nappes alluviales l aulnaie gluti Indice 1987 1996 Abstracts neuse C R Acad Sc Paris serie III 302 17 BA 5 91 209 Hiscock K M et al 1991 Review of natural and artificial denitrification of groundwater Water Research 25 1099 1111 BA 1 93 256 Havcock N E et al 1993 Groundwater nitrate dynamics in grass and poplar vegetated riparian buffer strips during the winter J of Environ Quality 22 2 273 278 BA 1 95 335 Bnacco F et al 1993 Vegetazione perifluviale conservazio ne degli habitat e dei loro meccanismi genetici l esempio del Po in Lombardia Acqua Aria 7 761 765 BA 6 95 352 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996
93. el corpo idrico superficia le Si tenga presente inoltre che l assenza degli effetti tossici che si manifestano a breve termine acuti non preclude che lo stesso corpo idrico o lo stesso effluente di scarico possano causare quegli effetti tossici che si mani festano invece solo dopo esposizione prolungata cronici 2 GENERALIT SUL METODO In questo tipo di saggio giovani individui di Cerio daphnia dubia sono esposti per un tempo massimo di 48 h eventualmente prolungabile a 96 h a campioni dei quali si voglia misurare la tossicit acuta Generalmente un campione di acqua di scarico saggiato ad almeno 5 diluizioni a ciascuna delle quali esposto un numero definito di giovani organismi Elaborando i dati di morta lita osservati alle diverse diluizioni possibile ottenere per un dato campione 1l valore di diluizione letale per il 50 degli individui LC per il tempo di esposizione prescelto Una procedura analoga applicabile allo studio degli effetti tossici acuti delle acque dei corpi idrici tuttavia raro che in questo caso le concentrazioni degli inquinanti raggiungano livelli tali da permettere l osser vazione di effetti superiori al 50 di mortalit Molto piu spesso l esame di un corpo idrico si limita a valutare la significativit statistica di pochi eventuali decessi osser vati per esposizione di C dubia ad un campione non diluito Biologia Ambientale n 6 1996 12 IRSA CNR Metodi Analitic
94. elle specie animali delle acque lagunari e costiere italiane In Guide per il riconoscimento delle specie animali nelle acque interne italiane CNR P F Promozione della Qualit dell Ambiente n 10 AQ 11225 pp 149 GoopFELLow W L e W J Rue 1989 Evaluation of a chronic estimation toxicity test using Mysidopsis bahia In Aquatic Toxicology and Hazard Assessment 12th vol ASTM STP 1027 U M Cowgill and L R Williams Eds American Society for Testing and Materials Philadelphia 333 344 IRSA 1994 8020 Metodi di valutazione della tossicit con Daphnia In Metodi analitici per le acque Quad Ist Ric Acque 100 336 342 Lussier S M A KUHN e J SEWALL 1987 Guidance manual for conducting seven day mysid survival growth reproduction study using the estuarine mysid Mysidopsis bahia Contribution No X106 In Schmmel S C ed Users guide to the conduct and interpretation of complex effluent toxicity tests at estuarine marine sites Environmental Research Laboratory U S Envi ronmental Protection Agency Narragansett Rhode Island Con tribution No 796 265 pp Lussier S M A KuHn M J Chammas e J SEWALL 1988 Techniques for the laboratory culture of Mysidopsis species Crustacea Mysidacea Environ Toxicol Chem 7 969 977 Rerrsema L A e J M Nere 1980 A recirculating artificial seawater system for the laboratory culture of Mysidopsis bahia Crustacea Pericaridea Estuaries 3
95. ementi minerali Atti Congr S I T E 5 127 130 BA 2 90 127 CAPORALI F 1981 Relazione tra uso del territorio e contenuti di azoto nelle acque superficiali di bacini agricoli e forestali della Toscana 5 7 T E ATTI 1 109 116 BA 2 90 128 Pinay G et al 1988 The role of riparian woods in regulating nitrogen fluxes between the alluvial aquifer and surface water a conceptual model Regulated rivers res and manag Vol 2 507 516 BA 2 90 129 PETERJOHN W T et al 1984 Nutrient dynamics in an agricul tural watershed observations of the role of a riparian forest Ecology 65 5 1466 1475 BA 2 90 130 Jacoss T C et al 1985 Headwater streams losses of nitrogen from two costal plain watersheds J Environ Qual 14 4 BA 2 90 131 Zuou QI et al 1983 The activity of nitrifying and denitri fying bacteria in paddy soil Soil Sc 135 1 31 34 BA 2 90 132 GuTHRIE T F et al 1978 Nitrogen mineralization and deni trification in organic soils Soil Sci Soc Am J 42 908 912 BA 2 90 133 Reppy K R er al 1983 Nitrogen and phosphorus fluxes from a flooded organic soil Soil Sc 136 5 300 307 BA 2 90 134 DecamPs H et al 1987 The importance for birds of the riparian woodslands within the alluvional corridor of the River Garonne S W France Regulated Rivers Res and Manag vol 1 301 316 BA 2 90 135 WARWICK J et al 1988 Nitrate depletion in the riparian zon
96. era no complessivamente la concentrazione di 0 3 ug g peso fresco le cisti di Artemia non dovrebbero essere utilizza te US EPA 1988 quindi buona norma effettuare le necessarie analisi su un piccolo quantitativo di cisti e nel caso si ottengano 1 risultati attesi si pu procedere all ac quisto di un lotto di notevoli dimensioni che potr servire per diversi anni ASTM 1992 Biologia Ambientale n 6 1996 32 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia A6 Preparazione della dieta Un imbuto separatore con un volume di 2 L costitui sce un pratico contenitore per la schiusa delle cisti Si utilizza 1 L di acqua di mare naturale o sintetica ma anche una soluzione contenente 35 g di NaCl si presta allo scopo Si aggiungono 10 mL di cisti di Artemia e si area intensamente con un tubetto di vetro posizionato in modo che la sua estremit sia sul fondo dell imbuto Il tempo di schiusa varia in relazione all area geografica di prove nienza e alla temperatura di incubazione Tuttavia con una temperatura di 27 C le uova dovrebbero schiudere in circa 24 h Dopo tale periodo si arresta l aerazione e 1 gusci ormai vuoti si portano in superficie mentre i naupli si raccolgono sul fondo dal quale vengono prelevati me diante apertura del rubinetto dell imbuto Sfruttando la fototassia positiva delle larve la raccolta pu essere age volata oscurando la parte superiore dell imbuto Tale operazione non
97. essivamente il saggio definitivo Un saggio preliminare consiste in un prova abbre viata e semplificata per la quale si preparano 5 diluizioni del campione in serie geometrica e piuttosto spaziate tra loro La serie 100 10 1 0 1 96 0 01 v v pu essere suggerita per questo scopo Ad ogni diluizione vengono esposti 5 neonati di M bahia e dopo un periodo non superiore alle 24 h si registrano gli effetti Se con lo stesso campione si dovr in seguito con durre la prova definitiva si raccomanda di procedere nel rispetto dei limiti di conservabilit del campione stesso Se viceversa le due prove sono condotte con campioni prelevati in momenti diversi a causa della variabilita piu o meno elevata della tossicit dello scarico o del recettore i risultati del saggio preliminare e di quello definitivo potranno essere tra loro anche molto differenti 4 2 SAGGIO DEFINITIVO Per la conduzione della prova definitiva si allesti scono 5 diluizioni del campione da esaminare La sequen za 100 96 50 9o 25 12 5 e 6 25 v v caratterizza ta da un fattore di diluizione 0 5 applicabile a gran parte delle situazioni Viceversa basandosi anche sulle infor mazioni eventualmente ottenute dal saggio preliminare si potr adottare un diverso intervallo di sperimentazione un diverso fattore di diluizione o anche un maggior nume ro di concentrazioni Se stato necessario refrigerare i campioni di scari co o di acqua di di
98. et al 1987 The impact of planktivourous fish on the structure of a plankton community Freshwater Biology 17 79 89 BA 3 89 84 De Haan H et al 1988 Manipolation of chemistry and phytoplancton by hydrological intervention a whole lake experiment in the northern Netherlands Freshwater biolo gy 20 395 406 BA 3 4 92 226 Macs Guiwicz Z 1990 Why do cladocerans fail to control algal blooms Hydrobiologia 200 201 83 97 BA 3 4 92 221 Dawipowicz P 1990 Effectiveness of phytoplankton control by large bodied and small bodied zooplankton Hydrobiolo 13 gia 200 201 43 47 BA 3 4 92 228 Tuelss J et al 1990 Biomanipulation by introduction of herbivorous zzoplankton A helpful shock for eutrophic lakes Hydrobiologia 200 201 59 68 BA 3 4 92 229 OzimeK T et al 1990 Can macrophytes be useful in bioma nipulation of lakes The Lake Zwemlust example Hydrobio logia 200 201 399 407 BA 6 92 245 SANNI S et al 1990 Oligotrophication as a result of plankti vorous fish removal with rotenone in the small eutrophic Lake Mosvatn Norway Hydrobiologia 200 201 263 274 BA 6 92 246 GALANTI G et al 1990 Biomanipulation of Lago di Candia Northern Italy a three year experience of aquatic ma crophyte management Hydrobiologia 200 201 409 417 BA 6 92 247 GoeHEN M 1990 Summary of the workshop on perspectives of biomanipulation in inland waters Hydrobiologia 191 315 3
99. evamento Una fonte di acqua di mare non contaminata e filtrata 0 45 1 um dovrebbe essere usata per l alleva mento di M bahia tuttavia alcune miscele artificiali di sali sono state utilizzate con pieno successo come ad esempio quella commercializzata come Forty Fathoms Se si utilizza quest ultima soluzione importante atte nersi alle istruzioni fornite con le confezioni di sali che verranno solubilizzati in acqua Milli Q deionizzata di buona qualit o equivalenti in contenitori dedicati a questo scopo e non direttamente nelle vasche di coltura Prima dell impiego preferibile che l acqua sintetica sia aerata moderatamente per 24 h e lasciata in quiete per alcuni giorni Per la coltura degli organismi si pu adotta re una salinit compresa tra 20 e 30 o ed consigliato il valore di 25 o da preferire una salinit pi bassa ma pur sempre 20 o se si prevede che larga parte dei saggi sar condotta con salinit inferiori al 25 o Come gi accennato un processo molto importante nell allevamento di organismi in sistemi chiusi la con versione dell ammoniaca in nitriti e di questi in nitrati per azione dei batteri nitrificanti Per la corretta conduzione dell allevamento di M bahia le concentrazioni da non superare sono pari indicativamente a 0 05 0 1 mg L di NH totale 0 05 mg NO L e 20 mg NO L US EPA 1988 Lussier et al 1988 Alcuni prodotti distribuiti come kit colorimetrici si prestano
100. genze dell operatore 4 RISULTATI 4 1 ELABORAZIONE DEI RISULTATI Nell elaborazione dei risultati occorre calcolare il fattore di correzione dei valori di I Il fattore f si calcola in base alla risposta della soluzione di controllo come 1 K t 15 o 30 minuti dove I l intensit luminosa dei batteri misurata dopo l aggiunta della soluzione di controllo a 15 o 30 minuti mentre I l intensit luminosa prima dell aggiunta della stessa soluzione Si calcola la media dei fattori di corre zione per le due repliche del controllo e si calcolano per ciascuna cuvetta i nuovi valori di I corretti per il fattore f nel seguente modo Nel caso del saggio al 100 non essendo stati misurati i valori di I per ciascuna cuvetta non viene eseguita alcuna correzione rispetto alle variazioni tempo rali della luminescenza emessa dalla soluzione di control lo Per il saggio standard l inibizione percentuale di ciascuna diluizione H del campione si calcola come segue H E 100 la dove i valori di I derivano dalla precedente equazione mentre quelli di I rappresentano i valori di intensit luminosa a 15 o 30 minuti delle cuvette dopo l aggiunta del campione e delle sue diluizioni Si calcolano le medie delle inibizioni percentuali delle repliche di ciascuna diluizione del campione e 1 coefficienti di variazione tra le repliche Per il saggio al 100 l inibizione percentuale di ciascun campione e delle sue dilui
101. ggio e nome dell operatore indicazioni relative a eventuale pretrattamento del campione per esempio correzione per cloro attivo totale filtrazione centrifugazione diluizione origine dei batteri utilizzati ed eventuali indicazioni della data di preparazione o del numero di lotto tipo di procedura utilizzata nel saggio e risultati delle analisi elaborazioni dei risultati espresse come EC Gi risultati dei test con sostanze di riferimento EC 0 50 APPENDICE A Test con campioni torbidi o colorati Per campioni torbidi o colorati soprattutto di colore rosso giallo o blu si rende necessario il controllo della luminescenza emessa dai batteri senza che questi vengano a contatto con il campione Ci possibile utilizzando una cuvetta a doppia camera Nella camera interna viene posta una quantit nota di soluzione batterica generalmente 0 2 mL o comunque una quantit tale da riempirla mentre nella camera esterna si aggiunge la soluzione di controllo 1 mL si attende 5 10 minuti e si misura la luminescenza emessa dai batteri Successivamente viene sostituita nella camera esterna la soluzione di controllo con il campione da saggiare 1 mL si misura quindi la luminescenza batterica L eventuale inibizione misurata permette il cal colo del fattore di correzione da adottare nel calcolo dell EC dell EC o della diluizione di non effetto Si considerano significative inibizioni superiori al 10 mentre inib
102. gini precedentemente condotte sia sospettata la presenza di elevate concentrazioni di metalli e o ammoniaca 2 REAGENTI E MATERIALI 2 ORGANISMO TEST E REPERIBILIT Per il saggio viene utilizzato il ceppo NRRL B 11177 della specie marina Vibrio fischeri depositato pres so il DSM Mascheroder Weg 16 38124 Braunschweig Germany o presso l American Type Culture Collection 12301 Parkiand Drive Rockville Maryland U S A Il batterio pu essere coltivato e conservato come descritto in appendice C oppure pu essere acquistato come prepa rato commerciale In tutti 1 casi devono essere rispettati per ciascun lotto di batteri 1 criteri di validazione riportati nel paragrafo 4 2 2 2 REAGENTI E MATERIALI 2 2 1 Soluzione diluente Sciogliere 20 g di sodio cloruro in 1 litro di acqua distillata Aggiustare il pH a 7 0 2 con sodio idrossido NaOH 1 M o con acido cloridrico HCl 1 M Questa soluzione pu essere conservata per quattro settimane a 4 C ma il pH della soluzione deve sempre essere controlla to e se necessario aggiustato ogni giorno al momento d uso 2 2 2 Soluzione ricostituente Per i batteri coltivati in laboratorio cfr Appendice C si utilizza la seguente soluzione da sciogliere in agita zione per trenta minuti 8g di D glucosio monoidrato C H 0 H O 20 g di NaCl 2 035 g di magnesio cloruro esaidrato MgCl 6 H 0 0 30 g di potassio cloruro KCI in litro di acqua dist
103. gio Emilia P Madoni e L Cingolani a cura di 1988 Atti del corso convegno I PROTOZOI CILIATI COME INDICATORI DI QUALITA DEI PROCESSI DI DEPURAZIONE A FAN GO ATTIVO Dipart Studi Territoriali ed Ambientali del Centro di Studio Ricerca e Formazione L Bazzucchi Perugia P Turin 1990 1992 PESCI DELLE ACQUE INTERNE ITALIANE Schede descrittive CISBA inserti di Biologia Ambientale Atti della giornata di studio 1991 SAGGIO DI TOSSICITA CON Daphnia Istituto di Ricerca sulle Acque USL 75 III Milano CISBA G Spigoni C Davoli D Davoli 1992 I PRINCIPALI MICRORGANISMI FILAMENTOSI DEL FANGO ATTIVO CARATTERISTICHE ECOLOGICHE E METODI DI IDENTIFICAZIONE Azienda Gas Acqua Consorziale Reggio Emilia Autori Vari 1994 Introduzione alla BIOCORROSIONE CISBA Atti del Workshop 1995 SALMONIDI ITALIANI Workshop dell Associazione Italiana Ittiologi di Acqua Dolce Trieste 8 aprile 1994 A LLA D CISBA n speciale di Biologia Ambientale suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 12 ABSTRACTS Alghe FamcuiL p W G et al 1985 Algal periphyton growth on nutrient diffusing substrates an in situ bioassay Ecology 66 2 465 472 BA 1 87 2 GEELEN J F M et al 1986 Impact of acidification on phyto plankton communities Experientia 42 486 494 BA 2 87 19 Harman D et al 1986 Impact of atrazine on periphyton in freshwater enclosures and some ecological consequences
104. gitatore magnetico a 20 1 C per 20 1 ore a 180 rpm AI termine del periodo di incubazione preleva re in sterilit 1 mL di soluzione colturale e diluirlo con 9 mL di soluzione di cloruro di sodio 20 g L in acqua distillata e misurare la torbidit in FAU a 578 nm secondo la norma ISO 7027 1984 cfr C 4 Inoculare quindi in 50 mL di terreno liquido un volume di coltura primaria tale che la torbidit iniziale sia pari a 10 FAU Incubare sotto agitazione a 20 1 C per 201 ore Al termine del periodo di incubazione misurare la torbidit della coltura diluita 1 10 Il valore atteso dovrebbe essere compreso tra 700 e 1800 FAU per la coltura non diluita Raffreddare quindi in un bagno freddo una soluzio ne con cloruro di sodio al 2 in acqua distillata e il mezzo di conservazione cfr C 3 Centrifugare la brodocoltura in centrifuga refrigerata a 4 2 C per 15 20 minuti a 6000 2000 G Decantare il surnatante e riprendere il residuo con 5 10 mL della soluzione di cloruro di sodio fredda Centrifugare come prima Decantare il surnatante risospendere il residuo con 0 5 mL della soluzione di cloruro di sodio trasferendo la sospensione in un beaker freddo da 100 mL e porre in bagno freddo Aggiungere lentamente agitando 4 mL di mezzo di conservazione C 3 Diluire 1 100 una aliquota di 100 uL e misurare la torbidit come precedentemente descritto Aggiungere un volume di mezzo di conservazione tale che la torbidit defi
105. hiede che le proporzioni di decessi osservati nelle repliche siano distri buite normalmente Se i dati soddisfano questo requisito necessario procedere anche alla verifica di omogeneit della varianza dei due gruppi di risultati e solo in caso affermativo lecito passare all esame della significativit dei decessi osservati Se i dati non fossero distribuiti normalmente il problema viene comunemente risolto me diante opportune trasformazioni dei dati stessi La con versione delle proporzioni di organismi deceduti nella radice quadra del loro arc sen la trasformazione pi comune Se non si rivelasse risolutiva necessario proce Biologia Ambientale n 6 1996 16 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia dere all esame dei risultati con metodi non parametrici Se a sua volta la condizione di omogeneit della varianza non fosse rispettata il test t rimane valido ma deve essere applicato in forma modificata Il valore calcolato per la funzione t infine confrontato con il valore critico di t individuabile in apposite tabelle in base al numero di gradi di libert ed al livello di probabilit prescelto Se il valore di t calcolato supera il valore tabellare le due mortalit sono significativamente diver se Fortunatamente sono disponibili in commercio dei programmi per personal computer che sono espressamen te dedicati all analisi statistica di risultati tossicologici e
106. i Prima che l alimento composito possa essere utiliz zato per la coltura di C dubia necessario che ne venga determinato il contenuto di solidi sospesi Tale contenuto calcolato come media del valore di due repliche di 5 mL ciascuna essiccate a 105 C per 24 ore deve essere aggiustato se necessario ad un valore di 1 8 g L L ali mento pu essere suddiviso in aliquote di 50 100 mL che verranno congelate e in tal modo conservate fino al mo mento dell uso Il cibo scongelato e conservato in frigori fero potr essere usato per un massimo di 2 settimane ma rinnovato preferibilmente dopo una sola settimana In alcuni laboratori il processo di preparazione periodica e congelamento limitato al solo mangime di pesce che viene pertanto miscelato con aliquote prepara te al momento dell uso tanto di lievito che di Cerophy1 Il periodo massimo d impiego resta invariato AS 3 DIETA SEMPLIFICATA Presso i laboratori IRSA CNR in uso una dieta semplificata rispetto a quella proposta nei metodi USEPA 1989 o ASTM 1989 e descritta nei paragrafi preceden ti Nella dieta semplificata l alga S capricornutum somministrata giornalmente in modo da garantire densit di 300 000 cell mL mentre l alimento composito stato sostituito con una sospensione di cellule di lievito S cerevisiae ed una soluzione di tre vitamine La prima preparata con i panetti di lievito com mercializzati per la panificazione Nell ac
107. i BA 2 91 Newton I Topi e uomini BA 2 91 JEFFREY D W Le discariche BA 5 91 ROELANTS DU VIVIER F Una politica di gestione BA 6 91 SALMAN A Stato critico delle dune BA 6 92 BrinkHorst L J Zone costiere prospettive di strategia co munitaria BA 6 92 MARKHAM A Ricreare la diversit e mantenerla BA 3 4 93 Barprocu D Comprensione redditivit BA 3 4 93 GIARDIN P Disposto a pagare pi caro BA 3 4 93 Piante progenitrici delle specie coltivate BA 5 93 Heywoop V H Conservazione della flora europea BA 5 93 CASARINI P Il suolo questo grande sconosciuto Intervista a M G Paoletti BA 3 4 92 Sansoni G Gestione delle risorse idriche Intervista a P G Cannata BA 1 92 AZZONI R Fonti di approvvigionamento idrico Intervista a S Galassi BA 1 92 ARDEMAGNI A Quale futuro per l acquario civico di Milano Intervista al direttore M Mariani BA 2 94 Convenzione di Berna e flora BA 5 93 GLUTZ von BLoTzHEM U N Una speranza di sopravvivenza BA 6 93 LuManEr R Storie botaniche BA 3 4 94 RaymonD R Un centro internazionale al servizio dello svi luppo BA 3 4 94 Hopczs J Anche gli animali BA 3 4 94 Hyver Y sou M A Le riserve biogenetiche BA 2 94 Harremoes E Una nuova convenzione responsabilit civile per i danni all ambiente BA 2 94 SrERLING S Per un ambiente vivibile BA 5 94 Bos P Educazione all ambiente unire gli sforzi BA 5 94 VajpovrrcH
108. i Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia Si tenga presente che il metodo basato sull uso di questo stesso crostaceo ma destinato alla stima della tossicit cronica 7 giorni pu consentire anche la valu tazione della tossicit acuta a patto che le diluizioni del campione da saggiare coprano un intervallo di valori sufficientemente amplo Si raccomanda di conseguenza di privilegiare l applicazione del saggio a 7 giorni ogni qualvolta sia possibile Nel caso si voglia esaminare la relazione esistente tra la tossicit acuta e quella cronica di un effluente o di un corpo idrico i due dati di tossicit dovranno essere prodot ti nelle stesse condizioni sperimentali e cio quelle del saggio cronico 7 giorni 3 CONDUZIONE DEL SAGGIO 3 1 MATERIALI E STRUMENTAZIONE La conduzione del saggio di tossicit richiede un minimo di 12 contenitori del tipo beaker in vetro borosilicato con volume utile di 30 mL Numerosi laboratori usano con successo dei contenitori a perde re in polistirene che sono normalmente commercia lizzati per alimenti Sistema di lampade fluorescenti ad ampio spettro con un temporizzatore per il controllo del fotoperiodo e possibilmente un dispositivo che simuli la transizione graduale tra le fasi di luce e di buio dispositivo per il controllo della temperatura delle diluizioni da saggiare nell ambito di 20 1 C e 25 1 C per tutta la durata della sperimentazione analizzatore di ossige
109. i con il crostaceo marino Mysidopsis bahia I risultati ottenibili da un saggio acuto costituiscono solitamente il primo passo nella valutazione di rischio per la vita acqua tica L assenza di effetti acuti non preclude la possibilit di effetti cronici Inoltre un risultato negativo con un dato campione non esclude il riscontro di effetti tossici acuti in campioni prelevati in diversi momenti e ci a causa ad esempio della possibile variabilit di uno scarico come anche della capacit di diluizione delle acque recettrici 2 GENERALIT SUL METODO Dei giovani esemplari del crostaceo marino Mysi dopsis bahia sono esposti per un tempo massimo di 96 ore ad uno scarico acquoso o all acqua di mare dell area indagata con lo scopo di evidenziare la presenza di sostanze tossiche in concentrazioni tali da causare effetti di tipo acuto La procedura di saggio per un effluente prevede che un minimo di cinque gruppi di organismi coetanei aventi et compresa tra 1 e 5 giorni sia mante nuto a cinque diluizioni in acqua di mare dell effluente da saggiare I decessi osservati sono poi elaborati per calcolare il valore di diluizione che si rivela letale per il 50 degli organismi LC a un determinato tempo di esposizione 24 48 o 96 h La validit del risultato giudicata osservando la risposta di un ulteriore gruppo di controllo che stato mantenuto per lo stesso tempo di esposizione e nella medesima acqua di mare ma senza aggiunta
110. i depuratori biologici BA 1 90 Maponi P I Protozoi Ciliati dei fanghi attivi aggiornamenti tassonomici e di nomenclatura BA 1 91 Ecappi F Ruolo della fitodepurazione nell abbattimento dei nutrienti BA 6 91 AZZONI R Contributo alla conoscenza della microfauna che colonizza il fango attivo BA 6 95 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 FACCHINI S SARRA P G Tipizzazione dei microrganismi fila mentosi nei sistemi di trattamento SBR Sequencing Batch Reactor BA 5 96 Ecologia FeLETTI M GAITER S Appunti sulle comunit biologiche delle acque sotterranee BA 4 96 Bopon M GAITER S Considerazioni sul popolamento macro bentonico delle acque sorgive BA 2 89 Gestione ambientale OLIVIERI E Uso del suolo e qualit delle acque correnti i corsi d acqua della costa centrale toscana BA 3 89 ANTONIETTI R Elementi di ecologia per la gestione ed il controllo degli ambienti lacustri BA 5 90 NATURE CONSERVANCY CounciL La conservazione dei fossi e degli stagni agricoli BA 6 90 MANCINI L VoLTERRA L Il controllo delle macrofite acquati che infestanti BA 2 92 BALDINI U BELTRAME V LuPATELLI G Un atlante al servizio dell agricoltura BA 1 93 Simmons S A BARKER A Zone umide urbane per il controllo delle acque meteoriche e per la conservazione della natura BA 1 94 ANTONIETTI R LUCCHETTI M MARCHIANI C MONTANINI E ZUC cHELLI M V Confronto tra approcci idra
111. i di T pari a 0 25 e rispettivamente Il calcolo di EC richiesto nei casi in cui non sia possibile determinare il valore di EC_ mentre si definisce non tossico il campione che saggiato con il test definitivo al 100 determina alla massima concentrazione consi derata un inibizione inferiore al 20 4 2 CRITERI DI VALIDAZIONE La verifica delle condizioni sperimentali relative a ciascun batch o lotto di batteri va effettuata ricorrendo a tre composti di riferimento 3 5 diclorofenolo bicromato di potassio e solfato di zinco ottenendo i seguenti risulta ti 30min EC per il 3 5 diclorofenolo inferiore a 6 mg L 30min EC peril K Cr 0 espresso come Cr inferiore a 24 mg L 30min EC per il ZnSO 7H O espresso come Zn inferiore a 28 mg L Inoltre il valore di f per esposizioni sia a 15 che a 30 minuti deve essere compreso tra 0 7 e 1 4 e 1 coefficien ti di variazione tra le repliche non devono essere superiori al 10 Il saggio di ciascun campione deve essere inoltre validato verificando l effetto di inibizione della biolumi nescenza del 3 5 diclorofenolo 4 3 RISULTATI DEL SAGGIO Il risultato finale condotto con il presente metodo deve contenere informazioni relative a identit del campione con dati sul campionamento data ora luogo tipologia del campione sul tempo di stoccaggio in laboratorio pHesalinita naturale del campione ed eventuali modi ficazioni apportate data di esecuzione del sa
112. i di esposizione per il 90 91 Giorn Igienisti Ind 17 1 61 73 BA 5 93 279 VAN DER Hoeven 1991 LC50 estimates and their confidence suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 Indice 1987 1996 Abstracts intervals derived for tests with only one concentration with partial effect Water Research 25 401 408 BA 1 94 290 CoMsaER M H I et al 1993 The effects of nonylphenol on Daphnia magna Water Research 27 273 276 BA 1 94 291 Lupvawskiv M L et al 1992 A system for water toxicity estimation Water Research 26 689 694 BA 1 94 292 Mincazzini M 1993 Comparison of different methods for quantitative toxicity measurements on natural waters using S capricornutum Water Research 27 1055 1062 BA 3 4 94 309 Lee K S et al 1993 Effects of dissolved humic materials on acute toxicity of some organic chemicals to aquatic organi sms Water Research 27 9 204 BA 3 4 94 310 McCanon C P et al 1991 Lethal and sub lethal toxicity of field simulated farm waste episodes to several freshwater invertebrate species Wat Res 25 6 661 671 BA 3 4 94 311 WAGNER C et al 1991 Estimation of ecotoxicological protec tion levels from NOEC toxicity data Water Research 25 1237 1242 BA 5 94 323 Vigan L 1993 Reproductive strategy of Daphnia magna and toxicity of organic compounds Water Research 27 903 909 BA 5 94 324 EASTERLY C et al 1993 Biotesting wastewa
113. i negli articoli firmati non rispecchiano necessariamente le posizioni del C I S B A Stampa ROTOPACK via Degola 7 A REGGIO EMILIA IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Editoriale 1 EDITORIALE ome avrete immediatamente notato questo numero di Biologia Ambientale riproduce integralmente un fasci colo del Notiziario dei metodi analitici dell Istituto di Ricerca sulle Acque intenzione del Consiglio CISBA infatti dare la massima diffusione all intera serie dedicata aia metodi biologici Tale scelta oltre ad avere il chiaro fine di aggiornare i Soci finalizzata alla richiesta di pareri circa l effettiva applicabilit di tali metodi nelle strutture pubbliche deputate al controllo ambientale Pur essendo stata richiesta la partecipazione del CISBA al Grup po di Lavoro C N R incaricato di predisporre metodi biologici per la tutela delle acque infatti i delegati assegnati ai vari sottogruppi hanno rilevato che le osservazioni connesse con le difficolt organiz zative sono state spesso trascurate e che nel contempo sono state lasciate irrisolte le questioni relative alla rappresentativit dei cam pioni saggiati Queste parole che possono risultare eccessivamente dure vo gliono solamente esprimere il disagio del veder imbrigliata l attivit di laboratorio in un ufficialit che potrebbe rendere inattuabile la maggior parte delle iniziative Attendiamo quindi per ogni metodo le
114. icit Ceriodaphnia dubia v v I valori sono in serie geometrica con un fattore di diluizione pari a 0 5 In casi particolari come quelli individuati da un eventuale saggio preliminare si posso no adottare altre sequenze con un diverso fattore di diluizione o anche un maggiore numero di diluizioni Se stato necessario refrigerare 1 campioni le ali quote destinate al saggio sono prelevate dopo accurato mescolamento e portate alla temperatura scelta per la prova Si procede quindi alla misurazione della concen trazione di O disciolto in accordo alle indicazioni date in precedenza cfr par 3 7 Solo quando le 5 o piu diluizio ni hanno raggiunto le condizioni indicate per il test vengono immessi gli organismi Analoga procedura vale anche per il gruppo di organismi di controllo Nei saggi di tossicit acuta l allestimento di piu repliche per ogni concentrazione risponde prevalente mente a necessit di tipo pratico infatti 1 singoli risultati che esse forniscono sono solitamente combinati in un unico dato riferito al corrispondente valore di concentra zione Questa consuetudine rende pressoch inutile l alle stimento di pi repliche a meno che vengano utilizzati pi organismi di quanti ne sono previsti nello schema di base qui proposto In accordo con quest ultimo per ogni diluizione di effluente o di acqua del recettore si utilizza no almeno 10 neonati di C dubia di et lt 24 h in soluzioni di volume pari a
115. ig 1 Visione laterale e dorsale di un misidaceo modi ficata da US EPA 1991 1 antennula 2 processo dorsa le 3 statocisti 4 antenna 5 lamina dell antenna 6 marsupio 7 ottavo arto toracico 8 pleopodi 9 carapace 10 segmenti addominali 11 uropode 12 telson 13 endopodite 14 esopodite 15 segmenti toracici 16 pro cesso dorsale Fig 2 Principali caratteristiche morfologiche utili al l identificazione di Mysidopsis bahia A maschio B femmina si noti la sacca ventrale a marsupio e la minore lunghezza dei suoi pleopodi rispetto a quelli del maschio 1 secondo arto toracico 2 telson 3 uropode destro con statocisti visto dal dorso si notino le tre spine sull endo podite 4 visione dorsale di individuo maschio Biologia Ambientale n 6 1996 30 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia flusso continuo che in sistemi chiusi provvisti di ricircolo del mezzo acquoso Quest ultima soluzione probabil mente la piu diffusa Il sistema di mantenimento dovrebbe consistere di almeno 3 4 vasche di circa 200 L ciascuna Tuttavia possono essere utilizzate anche vasche pi piccole aventi un volume di circa 80 100 L Disporre di pi di una unit di mantenimento tutela dal rischio di perdere l organismo in caso di possibili incidenti e garantisce un adeguato numero di individui per la sperimentazione L intensit della luce ed il fotoperiodo non sembrano avere un ruo
116. illata e si porta a pH 7 0 2 Questa soluzione pu essere conservata a 20 C per almeno tre mesi Per i batteri disponibili commercialmente deve esse re garantita una concentrazione salina finale sotto forma di NaCl della sospensione del 2 mentre si sconsiglia l utilizzo di qualsiasi tipo di tampone che potrebbe inve ce interferire sul risultato dell analisi 2 3 STRUMENTAZIONE E VETRERIA Per la conduzione del saggio sono necessari congelatore per la conservazione delle colture batteri che a 20 C termostato per mantenere le cuvette del saggio a 15 1 C bagno termostatico a 20 C per riattivazione opziona le luminometro funzionante a 490 nm di lunghezza d on da con una cella di misura termostatata a 15 1 C pH metro cronometro salinometro opzionale micropipetta a volume variabile da 10 a 200 uL e una da 200 a 5000 uL con adeguati puntali appropriate cuvette di misura della luminescenza scel te in base alle caratteristiche del luminometro e di materiale chimicamente inerte Tutti gli accessori destinati a venire in contatto con la sospensione batterica non devono rilasciare sostanze tossiche 3 PROCEDURA 3 1 CAMPIONAMENTO E PREPARAZIONE DEL CAMPIONE Per quanto concerne il campionamento delle acque di scarico si rinvia alle metodiche previste dall IRSA IRSA 1995 Il volume di campione necessario per il saggio di circa 10 mL Si consiglia per eventuali
117. imensioni adegua tamente ridotte delle giovani larve US EPA 1988 An che altre aree di provenienza possono comunque rivelarsi adeguate ma in ogni caso l unico modo di valutare l accettabilit di una variet di cisti di condurre prove di alimentazione grazie alle quali si possono esaminare gli effetti su sopravvivenza crescita e attivit riproduttiva di M bahia Analogamente anche se il fornitore rimane lo stesso necessario che ciascun nuovo lotto di cisti venga saggiato per verificarne l idoneit In entrambi i casi si procede come segue si conducono in parallelo due saggi cronici di 7 giorni per ciascuno dei quali sono utilizzate 8 repliche di 5 organismi ognuna Il primo gruppo di 40 misidacei viene alimentato con i naupli di Artemia giudi cati a suo tempo idonei e che hanno pertanto valore di riferimento il secondo gruppo viene invece nutrito con i naupli schiusi dal lotto in esame La frequenza di sommi nistrazione del cibo la sua quantit il volume dei reci pienti e dell acqua di mare in essi contenuta e tutto quanto caratterizza il saggio non deve essere modificato rispetto alla procedura di saggio cronico La nuova fonte di cibo viene considerata idonea se non si osservano differenze statisticamente significative tra i due trattamenti relativa mente a sopravvivenza crescita e riproduzione Ogni nuovo lotto dovrebbe anche essere analizzato per il conte nuto di pesticidi organoclorurati e PCB Se questi sup
118. ini Alghe del golfo di Trieste Guida allo studio suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 in proprio 1992 BA 3 4 92 Il bacino idrografico come unit di analisi ecologica Comita to difesa Ledra Udine 1992 BA 6 92 Martino ed Tutela e gestione degli ambienti fluviali WWF Roma 1992 BA 1 93 Guetti Manuale per la difesa dei fiumi Fondaz G Agnelli Torino 1993 BA 2 93 Regulated rivers Research and management Wiley amp Sons 1993 BA 5 93 CANNATA Governo dei bacini idrografici Strumenti tecnici e pianificatori ETAS Milano 1994 BA 2 94 SANSONI GARUGLIERI Il Magra Analisi tecniche e proposte per la tutela del fiume e del suo bacino idrografico WWF Lunigiana 1994 BA 2 94 CAMPAIOLI et al Manuale per il riconoscimento dei macroin vertebrati delle acque dolci italiane vol 1 Prov Aut Tren to 1994 BA 5 94 Studi sulle artropodocenosi terrestri di ambienti umidi Museo St Nat Ferrara 1994 BA 1 95 Boretti et al I fontanili di Corte Valle Re Una riserva orientata Reg Em Romagna Prov RE 1994 BA 2 95 Sansoni Idee per la difesa dai fiumi e dei fiumi Il punto di vista ambientalista Centro Doc Pistoia 1995 BA 6 95 AIPIN Sistemazioni in ambito fluviale Verde Ed Varese 1995 BA 1 96 CaLow P Petrs G E eds The rivers handbook Blackwell Oxford 1994 BA 5 96 Depurazione MADONI et al eds Analisi della microfauna per i
119. io Protezione Ambiente Atti del 1 corso di formazione ANALISI DELLA MICROFAUNA PER IL CONTROLLO DI QUALITA DEGLI IMPIANTI BIOLOGICI DI DEPURAZIONE Reggio Emilia 7 12 ottobre 1985 USL n 9 Azienda Gas Acqua Consorziale di Reggio Emilia P F Ghetti 1986 Manuale di applicazione I MACROINVERTEBRATI NELL ANALISI DI QUALITA DEI CORSI D ACQUA Indice Biotico E B I modif Ghetti 1986 Provincia Autonoma di Trento Stazione Sperimentale Agraria Forestale Servizio Protezione Ambiente Atti del corso di formazione UTILIZZAZIONE DI Daphnia magna IN TOSSICOLOGIA AMBIENTALE Reggio Emilia 4 9 maggio 1987 USL n 9 Amministrazione Provinciale di Reggio Emilia Atti del convegno LA QUALITA DELLE ACQUE SUPERFICIALI Sessione poster Le indagini sulla qualit biologica dei corsi d acqua italiani Mostra dei risultati Riva del Garda 28 29 aprile 1988 Provincia Autonoma di Trento Atti del convegno LA QUALITA DELLE ACQUE SUPERFICIALI criteri per una metodologia omogenea di valutazione Riva del Garda28 29 aprile 1988 Provincia Autonoma di Trento G Sansoni 1988 ATLANTE PER IL RICONOSCIMENTO DEI MACRO INVERTEBRATI DEI CORSI D ACQUA ITALIANI Provincia Autonoma di Trento Stazione Sperimentale Agraria Forestale Servizio Protezione Ambiente P Madoni 1988 Atti del corso di formazione I PROTOZOI CILIATI NEL CONTROLLO DI EFFICIENZA DEI FANGHI ATTIVI USL n 9 Azienda Gas Acqua Consorziale di Reg
120. ioni di illuminazione alle quali sono allevati gli orga nismi Il sistema di lampade fluorescenti ad ampio spet tro deve fornire a livello dell area di sperimentazione un intensit luminosa compresa tra 500 e 1000 lux con un fotoperiodo di 16 h di luce e 8 h di buio 3 5 TEMPERATURA La temperatura a cui devono essere mantenute le soluzioni sottoposte a saggio fissata in 20 1 C Questa condizione raggiunta immergendo i beaker del saggio in un bagno termostatato o operando all interno di un am biente interamente condizionato alla temperatura voluta Nel caso il risultato tossicologico debba essere usato per indagare il rapporto tra la tossicit acuta e cronica dell ef fluente in esame il saggio acuto deve essere condotto alla stessa temperatura di 26 27 C prevista per il saggio cronico 3 6 ALIMENTAZIONE I giovani di M bahia sono alimentati con naupli di A salina schiusi preferibilmente da alcune ore e non oltre le 24 h cfr A4 I naupli sono somministrati sia durante il periodo di mantenimento precedente il saggio massimo 5 giorni che durante il saggio stesso Nel corso della prova l alimentazione quotidiana e pu essere quantificata sulla base di circa 100 naupli per ogni misi daceo Se la somministrazione dell intera quantit di cibo causasse un deficit significativo della concentrazione di O disciolto essa pu essere ripartita in due tempi 50 naupli misidaceo adeguatamente distanziati nell arco
121. ismo di interesse minore se non quan do posto in relazione con i dati di tipo cronico Per questo motivo la grande maggioranza dei saggi acuti condotta alla temperatura di 25 C invece che a 20 C e per lo stesso motivo gran parte dei dati sulla riproduzione e sull allevamento di C dubia proviene da colture mante nute a 25 C Se tuttavia si decide di allevare l organi smo a 20 1 C si tenga presente che la sua longevit aumenta da circa 30 a 50 giorni che diminuisce la frequenza delle schiuse prodotte e che il numero medio di neonati per schiusa maggiore che non alla temperatura superiore CowaiLL et al 1985 Il fotoperiodo consigliato di 16 ore di luce e 8 di buio All opposto una consistente riduzione delle ore di luce potrebbe stimolare una indesiderata produzione di individui di sesso maschile al punto che il mantenimento della stessa coltura diverrebbe problematico Cooney et al 1992a Per quanto riguarda l intensit luminosa i livelli comunemente riscontrabili in laboratorio possono essere accettabili e in ogni caso si consigliano valori che siano compresi nell ambito di 500 1000 lux Si tenga presente che le elevate intensit luminose possono indurre un attivit fotosintetica del Selenastrum somministrato come alimento tale da aumentare il pH del mezzo sino a valori che potrebbero rivelarsi dannosi o anche letali per il crostaceo pH 9 Compatibilmente con il potere tampone del
122. isteri il CNR l Universit ed altri organismi pubblici e privati interessati allo studio ed alla gestione dell ambiente orientare le linee di ricerca degli Istituti Scientifici del Paese e la didattica universitaria facendo della biologia ambientale un tema di interesse nazionale favorire il recepimento dei principi e dei metodi della sorve glianza ecologica nelle normative regionali e nazionale concer nenti la tutela ambientale Per iscriversi al C I S B A o per informazioni scrivere al Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale via Amendola 2 42100 Reggio Emilia o telefonare al Segretario Roberto Spaggiari tel 0522 295460 0338 6252618 fax 0522 295446 Quote annuali di iscrizione al Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale socio ordinario 70 000 socio collaboratore 50 000 socio sostenitore 600 000 conto corrente postale n 10833424 intestato a CISBA RE I soci ricevono il bollettino Biologia Ambientale e vengono tempe stivamente informati sui corsi di formazione e sulle altre iniziative del C I S B A Gli articoli originali e altri contributi vanno inviati alla Redazione Rossella Azzoni Gastaldi via Cola di Rienzo 26 20144 Milano Idattiloscritti compreso il materiale illustrativo saranno sottoposti a revisori per l approvazione e non verranno restituiti salvo speci fica richiesta dell Autore all atto dell invio del materiale Le opinioni espresse dagli Autor
123. ivi et al Mappaggio biologico di qualita dei corsi d acqua della Versilia La Versilia nei dati del catasto scarichi Amm Prov LU 1986 BA 3 87 Sansoni Speciale Magra come si devasta un parco fluviale in proprio 1987 BA 4 88 BALDACOCINI BIANuccl eds La palude del lago di Massaciuc coli indagine idrobiologica in relazione all attivit di esca vazione Parco Migliarino S Rossore Massaciuccoli 1988 BA 4 88 Brookes Recommendations bearing on the sinuosity of Da nish stream channels Nat Agency Envir Protection 1984 BA 1 89 I fiumi italiani e le calamit artificiali Reg Piemonte 1988 BA 4 89 Prov Roma Acque imprigionate Impatto ambientale ed alternative alla canalizzazione dei corsi d acqua Coop Eco logia 1988 BA 1 89 Comrrato Diresa LEDRA Progetto Ledra Convegno sulla con servazione e manutenzione degli ecosistemi fluviali Comita to Difesa Ledra 1988 BA 1 89 Forneris Gli incubatoi di valle Problemi connessi con i ripopolamenti tradizionali e nuove proposte metodologiche Prov Torino 1989 BA 3 89 La qualit delle acque superficiali Atti convegno Riva del Garda 28 29 apr 1988 Prov Aut Trento 1989 BA 5 89 CorER Rockwoop Water pollution biology a laboratory field handbook Technomic Publ 1990 BA 2 90 Naturalizzazione dei fiumi protezione e difesa dei corsi d acqua Patron Bologna 1990 BA 2 92 Gorpon et al Stream hydrology An intr
124. izioni superiori al 50 normalmente impedi scono una corretta elaborazione dei risultati Per il calcolo del fattore di correzione si rimanda a software di elabora zione dati gi esistenti Microtox Software Program 7 11 oppure LUMISsoftII Nel caso del saggio preliminare o di quello al 100 il campione viene analizzato alla massima concentrazio ne saggiata Nel caso del metodo standard viene analizza ta soltanto la concentrazione di campione che si avvicina maggiormente al valore di EC o di EC a seconda dell effetto che si intende considerare Nel caso di campioni molto torbidi si consiglia di centrifugare o filtrare il campione prima dell analisi APPENDICE B Neutralizzazione del cloro attivo totale con tiosolfato In presenza di cloro libero si pu provvedere alla sua titolazione IRSA 1995 e alla conseguente inattivazione calcolando i millilitri di una soluzione a titolo noto di tiosolfato pentaidrato da aggiungere ad un volume presta bilito dell acqua in esame mediante la seguente equazio ne mL di scarico F conc di CL mL di tiosolfato conc di tiosolfato dove mL di tiosolfato mL della soluzione a titolo noto da aggiungere all acqua di scarico F 6 7 per il tiosolfato anidro e 10 52 per quello pentai drato conc di Cl concentrazione del cloro attivo totale pre Biologia Ambientale n 6 1996 8 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti
125. l acqua di coltura e con la densit di alghe presenti pu essere preferibile mantenere valori di intensit lumi nosa prossimi al limite inferiore dell intervallo consiglia to ASTM 1989 Alla temperatura di 25 1 C C dubia produce 3 schiuse in 7 giorni con una sequenza secondo la quale la prima schiusa prodotta al quarto giorno di vita ed costituita da 3 6 neonati la seconda prodotta al quinto o anche al sesto giorno e si compone mediamente di 5 10 neonati la terza schiusa infine ha luogo al settimo giorno e pu comprendere da 7 a 14 individui I valori minimi e massimi sopra riportati che peraltro hanno valore indicativo si riferiscono rispettivamente ad un at tivit riproduttiva accettabile ed ad una ottimale Valori inferiori a un totale di 15 neonati nelle prime tre schiuse indicano la presenza di problemi nella coltura AT Organismi per il saggio Per l allestimento del saggio devono essere utilizza ti i neonati di C dubia aventi et lt 24 h e appartenenti alla terza schiusa o successive Se l acqua del corpo idrico da saggiare o l acqua usata per le diluizioni di effluente hanno caratteristiche sostanzialmente diverse dall acqua usata per la coltura degli organismi necessario che i neonati da utilizzare nel saggio siano prodotti da femmi ne allevate per almeno 7 giorni nella stessa acqua usata per le diluizioni del saggio di tossicit o in un acqua con caratteristiche simi
126. l controllo di qualit degli impianti biologici di depurazione USL 9 RE AGAC RE CISBA 1987 BA 2 87 Maponi I Protozoi Ciliati nel controllo di efficienza dei fanghi attivi CISBA USL 9 RE AGAC RE 1988 BA 4 88 Approccio biologico alla depurazione dei liquami stato at tuale e prospettive Centro L Bazzucchi CISBA IAPWPRC 1990 BA 6 90 SPIGONI et al ed I principali microrganismi filamentosi del fango attivo Caratteristiche ecologiche e metodi di identifi cazione AGAC Reggio Emilia 1992 BA 3 4 92 Beccari et al Rimozione di azoto e fosforo dai liquami Hoepli Milano 1993 BA 5 93 VISMARA et al La regolazione dei processi biologici per im pianti a fanghi attivi Manuale operativo e guida alla dia gnosi Ing Amb 1991 BA 5 93 Bonaponna et al Valutazione della contaminazione micro Indice 1987 1996 Segnalazioni biologica di fanghi di depurazione di reflui civili problemi legati alle metodiche di analisi stisan Roma 1994 BA 2 95 Tossicologia Revised report on fish toxicity testing procedures E F A C 1983 BA 3 87 RAND PETROCELLI eds Fundamentals of aquatic toxicology Methods and applications Hemisphere McGraw Hill 1985 BA 4 88 Peters DE BERNARDI Daphnia Ist It Idrobiologia 1987 BA 4 89 New horizons in Ecotoxicology Blackwell Oxford 1991 BA 3 4 91 Hutson ed Environmental fate of pesticides Wiley amp Sons 1990 BA 2 92 Ca
127. l ecology of terrestrial plants microorganisms and invertebrates Water Air and Soil Pollution 47 189 215 BA 3 4 92 232 BLum D J W et al 1991 A database of chemical toxicity to environmental bacteria and its use in interspecies compari sons and correlations J Water Pollut Control Fed 63 8 207 BA 3 4 92 233 CaLow P 1989 The choise and implementation of environ mental bioassays Hydrobiologia 188 189 61 64 BA 6 92 236 Munawar M et al 1989 A sensitive screening bioassay technique for the toxicological assessment of small quanti ties of contaminated bottom or suspended sediments Hydro biologia 176 177 497 507 BA 6 92 237 Lewis M A 1991 Chronic and sublethal toxicities of sur factants to aquatic animals a review and risk assessment Water Research 25 101 113 BA 1 93 251 HarL W S et al 1991 Acute toxicity of wastewater treat ment polymers to Daphnia pulex and the fathead minnows Pimephales promelas and the effects of humic acid in polymer toxicity Research J WPCF 63 895 899 BA 1 93 252 MunzinceER A 1990 Effects of nickel on Daphnia magna during chronic exposure and alterations in the toxicity to generations pre exposed to nickel Water Research 24 845 852 BA 1 93 253 PARKHURST B R et al 1991 Water quality based approach to toxic control Water Environ amp Technol 3 12 45 47 BA 1 93 254 Tuomas V F et al 1992 IBE Indici biologic
128. la stessa dieta usata per le colture Il rinnovo solitamente effettuato allo scadere delle 48 h di saggio 3 7 OSSIGENO DISCIOLTO Raggiunta la temperatura prevista per il saggio necessario misurare la concentrazione di ossigeno disciol to nel campione destinato alla prova Se tale concentrazio ne risulta prossima o inferiore al 40 del valore di saturazione necessario aerare l aliquota del campione da saggiare L aerazione deve essere moderata in modo da minimizzare i cambiamenti del campione quali ad esem pio quelli relativi al valore di pH al contenuto di sostanze facilmente ossidabili o volatili L importanza e la necessi t di intervenire prima dell allestimento della prova dovuta al fatto che successivamente sarebbe pressoch impossibile aerare i piccoli volumi delle soluzioni di saggio senza arrecare disturbo agli organismi Se tutta via durante il saggio si osserva che il consumo di ossige no tale da rischiare di invalidare la prova si pu intervenire con rinnovi pi frequenti delle soluzioni ri correndo a nuove aliquote di campione preventivamente aerato Considerazioni analoghe valgono anche per 1 trat tamenti di controllo 4 PROCEDURA DI SAGGIO CON DILUIZIONE EFFLUENTE 4 1 SAGGIO PRELIMINARE Generalmente la misura degli effetti tossici acuti di un effluente o di un corso d acqua effettuata senza acquisire dei dati preliminari sulla loro tossicit In taluni casi qua
129. lari Gli organismi da saggiare devono provenire da un gruppo di femmine mantenute in condizioni di alleva mento controllato Non si devono utilizzare i neonati prodotti da femmine che non rispondono ai criteri di qualit indicati per la sopravvivenza e l attivit riprodut tiva o che comunque manifestino sintomi di condizioni colturali scadenti Come ulteriore criterio guida si pu suggerire l utilizzabilit di neonati appartenenti a schiuse composte da almeno 7 8 individui I neonati prodotti nelle 24 h immediatamente precedenti all allestimento del sag gio hanno l et richiesta per la conduzione della prova tossicologica preferibile che essi siano nutriti se non utilizzati entro 2 3 ore dalla raccolta BIBLIOGRAFIA ASTM 1989 Standard guide for conducting threebrood re newal toxicity tests with Ceriodaphnia dubia American Society for Testing and Materials ASTM E 1295 89 Biologia Ambientale n 6 1996 22 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia Berner D B 1986 The taxonomy of Ceriodaphnia Crusta cea Cladocera In U S Environmental Agency cultures Environmental Monitoring and Support Laboratory U S Envi ronmental Protection Agency Cincinnati OH 45268 EPA 600 4 86 032 Cooney J D G M DEGRAFVE E L Moore B J LENOBLE T L PoLLock E G J SMITH 19922 Effects of environmental and experimental design factors on culturing and toxicity testing of Cerioda
130. le n 6 1996 10 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti Tab 2 Laboratori Metodica 3 5 diclorofenolo cromo totali media d s media d s 5 Microtox Microtox lavat Lumistox hepes Lumistox hepes Lumistox tamp fosf Lumistox prep lab 2 63 3 45 4 52 4 37 4 84 3 69 Sono state utilizzate quali sostanze test il 3 5 diclo rofenolo il bicromato di potassio K_Cr O e il solfato di zinco ZnSO 7 H O Per ciascuna di queste sostanze stata determinata EC a 30 minuti utilizzando le se guenti concentrazioni mg L 0 81 0 26 0 59 0 39 4 5 0 60 0 11 MICROTOX LUMISTox 3 5 diclorofenolo 10 5 2 5 1 25 10 5 2 5 1 25 K Cr O come Cr 20 10 5 2 5 10 5 2 5 1 5 ZnSO 7H 0 come Zn 2 5 1 25 0 62 0 31 40 20 10 5 Ciascuna concentrazione stata saggiata conducen do da un minimo di tre ad un massimo di sei repliche mediamente sono state condotte cinque repliche per con centrazione Ciascuna replica stata elaborata separata mente al fine di ottenere per ciascun laboratorio un valore medio di EC a 30 minuti Il saggio stato condotto 19 00 4 8 13 18 0 56 4 90 0 43 1 25 19 27 0 9 3 73 0 18 seguendo la metodica qui riportata con alcune variazioni Per il Microtox stata condotta anche una prova lavando dopo riattivazione per tre volte i batteri con la soluzione ricostituente 2 2 2 e centrifugando la so
131. letale al 50 degli organismi LC per un dato tempo di esposizione 24 48 h La determinazione della LC puo essere effettuata con diversi metodi la cui applicabili t in buona parte dipendente dal tipo di risultati ottenuti e piu precisamente dal numero di effetti parziali osservati intermedi cio tra la mortalit 100 e la mortalit nulla La valutazione della LC dovrebbe basarsi sui risultati relativi ad almeno 5 concentrazioni di campione ed un controllo sebbene molti metodi di analisi possano essere utilizzati con un numero di dati inferiore Se la massima concentrazione saggiata ha causato una mortalit inferio re al 50 non si dovrebbe procedere al calcolo della LC il cui valore sarebbe in tal caso poco attendibile Meglio ripetere il saggio se possibile cercando di migliorare la serie delle concentrazioni saggiate In caso contrario la LC sar pi correttamente espressa come maggiore della massima concentrazione sperimentata es 48hLC gt 8094 Nel metodo di saggio dedicato alla valutazione della tossicit acuta con Daphnia magna IRSA 1994 sono stati proposti tre diversi metodi ampiamente validati atti alla valutazione della LC Si tratta del metodo di Litch field e Wilcoxon del test binomiale e del metodo probit Essi sono adeguatamente illustrati nell ambito del metodo per D magna al quale si rinvia Infine opportuno segnalare che sono disponibili in commercio alcuni pro grammi per pe
132. lo chiave su accrescimento e riproduzione Sono adottabili pertanto intensit luminose comprese tra 500 e 1000 lux con l alternanza di 16 h luce e 8 h di buio e cio quei valori gi impiegati con successo per l allevamento in laboratorio di altri organismi acquatici M bahia non sopravvive per lunghi periodi a concentrazioni di ossige no disciolto inferiori a 5 mg L Se l ossigeno disciolto approssima tali valori necessario aerare le vasche di allevamento con diffusori a pietra porosa ed aria priva di contaminanti Gli acquari devono essere provvisti sia di un tipo di filtro interno posizionato sotto lo strato di ghiaietto dolomite con cui si copre il fondo detto filtro sotto sabbia che di una unit filtrante esterna alla vasca la cui pompa deve essere dimensionata in modo da garan tire un flusso orario minimo pari ad almeno il volume dell acquario nell arco di un ora tutta l acqua contenuta nell acquario deve essere stata trattata dall unit di filtra zione Tra i vari materiali di riempimento impiegati nell unit filtrante esterna carbone fibre sintetiche etc si consiglia di includere uno strato di sbriciolato di con chiglie reperibile in commercio che sciogliendosi lenta mente contribuisce al potere tampone del mezzo acquoso Il flusso di ritorno dal filtro esterno dovr formare una corrente moderata all interno della vasca rispetto alla quale gli organismi che sono caratterizzati da una reotas sia positiva
133. luizione i volumi necessari alla condu zione del saggio vengono prelevati dai contenitori previo accurato mescolamento e portati alla temperatura di 20 C Preparate le diluizioni previste con le eventuali corre zioni di salinit si misura la concentrazione di ossigeno disciolto e se questa risultasse prossima al limite del 6096 del valore di saturazione si procede ad aerare i contenitori cfr 3 7 Ossigeno disciolto Quando le soluzioni hanno raggiunto le condizioni indicate si introducono i giovani di M bahia Nel saggio di tossicit acuta 1 risultati ottenuti dalle diverse repliche vengono solitamente combinati ai fini del calcolo della LC Ci rende inutile l allestimento di piu repliche della stessa concentrazione che pertanto non verr suggerito a meno che non venga saggiato un nume ro di organismi superiore a quello minimo indicato Per ogni diluizione di effluente si utilizzano almeno 10 giovani organismi in soluzioni di 200 mL di volume Gli organismi vengono distribuiti secondo una sequenza casuale nei diversi contenitori sino al completamento del numero richiesto Per evitare diluizioni significative delle soluzioni del saggio opportuno minimizzare il volume d acqua trasferito con gli organismi Questi sono trasferi bili piu facilmente se la pipetta provvista di bulbo elastico mantenuta verticale sopra l organismo da prelevare piuttosto che frontalmente o posteriormente allo stesso Quando il saggio p
134. meno 5 concentrazioni di campione ed un controllo sebbene molti metodi di analisi possono essere utilizzati con un numero di dati inferiore Se la massima concentrazione saggiata ha causato una mortalit inferio re al 50 non si dovrebbe procedere al calcolo della LC il cui valore sarebbe in tal caso poco attendibile Meglio ripetere il saggio se possibile cercando di miglio rare la serie delle concentrazioni saggiate In caso contra rio la LC sara pi correttamente espressa come maggio re della massima concentrazione sperimentata es 48hLC gt 80 Nel metodo di saggio dedicato alla valutazione della tossicit acuta con Daphnia magna IRSA 1994 sono stati proposti tre diversi metodi ampiamente validati atti alla valutazione della LC Si tratta del metodo di Litch field e Wilcoxon del test binomiale e del metodo probit Essi sono adeguatamente illustrati nell ambito del metodo per D magna al quale si rinvia Infine opportuno segnalare che sono disponibili in commercio alcuni pro grammi per personal computer espressamente dedicati a diversi metodi di analisi statistica di risultati tossicologi ci a questi prodotti parimenti si rinvia 7 2 EFFETTI DA CONCENTRAZIONE UNICA L esame dei risultati ottenuti saggiando un campio ne non diluito del corpo idrico riconducibile alla teoria del confronto tra due campioni Nel presente schema sperimentale 1 decessi osservati nelle repliche del corpo idrico e in
135. mensioni adeguate si pongono i contenitori usati per la coltura dell alga in un frigorifero e si lasciano in quiete per diversi giorni in modo che le cellule possano sedimentare i residui del mezzo di coltura sono poi rimossi per sifonamento ASTM 1989 US EPA 1989 Il volume finale della sospensione per i cui aggiustamenti si ricorre alla stessa acqua dei lavaggi deve essere tale da approssimare una densit di circa 100 milioni cell mL La sospensione algale cos ottenuta conservabile per alcuni mesi al buio ed alla temperatura di 4 C e potr essere la fonte dell inoculo della successiva coltura Le operazioni descritte per la coltura di S capricor nutum devono essere condotte rispettando alcune precau zioni elementari volte a prevenire la contaminazione della coltura da parte di altre specie algali e non Si deve operare pertanto in condizioni di massima pulizia me glio se in condizioni asettiche sterilizzazione dei reci pienti con autoclave cappe a flusso laminare etc anche se una limitata contaminazione batterica non sembra influire negativamente sul risultato finale ASTM 1989 AS 2 ALIMENTO COMPOSITO L alimento composito che in letteratura spesso indicato con la sigla YTC ASTM 1989 US EPA 1989 viene preparato secondo le seguenti indicazioni La preparazione a base di cibo di pesce richiede una settimana Ad 1 L di acqua Milli Q vengono aggiunti e miscelati 5 g di mangime pellettizzat
136. ment 10th vol ASTM STP 971 W J Adams G A Chapman and W G Landis Eds American Society for Testing and Materials Philadelphia 190 203 US EPA 1989 Cladoceran Ceriodaphnia dubia survival and reproduction tests Method 1002 In Short term methods for estimating the chronic toxicity of effluents and receiving waters to freshwater organisms C I Weber W H Peltier T J Norberg King W B Horning F A Kessier J Menkedick et al EMSL US Environmental Protection Agency Cincinnati OH EPA 600 4 89 001 US EPA 1991 Methods for measuring the acute toxicity of effluents to freshwater and marine organisms C I Weber U S Environmental Protection Agency Report EPA 600 4 90 027 Cincinnati OH Vigan L 1991 Suitability of commercially available spring waters as standard for culturing Daphnia magna Bull Environ Contam Toxicol 47 775 782 Vigan L 1992 Prime applicazioni del saggio a 7 giorni con Ceriodaphnia dubia allo studio della tossicit di acque superfi ciali In Atti del 5 Congresso Nazionale S It E Marchetti R e Cotta Ramusino M eds Milano 21 25 sett 1992 677 682 Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 23 METODO PER LA VALUTAZIONE DELLA TOSSICITA ACUTA CON Mysidopsis bahia RIASSUNTO In queste note sono descritti dei metodi standardiz zati per condurre dei saggi di tossicita acuta con il cro
137. metrica della luce emessa dai batteri invali dando l analisi Per saggiare campioni colorati o torbidi Biologia Ambientale n 6 1996 4 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti Occorre eseguire una prova preliminare utilizzando la cuvetta a camera doppia cfr appendice A Un elevata umidit relativa dell ambiente di labora torio in cui viene effettuato il saggio pu impedire la corretta lettura delle cuvette La presenza di cloro attivo utilizzato per la disinfe zione delle acque pu interferire con il risultato del saggio diminuendo la vitalit dei batteri Tale interferen za puo essere eliminata procedendo ad una neutralizza zione con tiosolfato cfr appendice B Valori di pH inferiori a 6 o superiori a 9 cosi come valori di salinit inferiori a 20960 o superiori a 5096o possono influire sulla sopravvivenza dei batteri inibendo ne la naturale luminosita Nel caso di saggio con campioni d acqua dolce pu essere utile impiegare come diluente una soluzione di saccarosio 200 g L anzich ricorrere alla soluzione salina Tale soluzione riproduce la pressione osmotica minima per la sopravvivenza del batterio La sostituzione del saccarosio al cloruro sodico consigliata quando per la natura stessa del campione es scarichi di industrie galva niche siderurgiche meccaniche elettroniche chimiche per la produzione di materie plastiche o catalizzatori ecc o a causa di inda
138. n Bull 18 2 87 91 BA 1 88 36 Tuomas J M et al 1986 Characterization of chemical waste site contamination and determination of its extent using bioassays Environ Toxicol and Chem 5 487 501 BA 3 88 50 RAscHKE R L et al 1987 The use of the algal growth poten tial test for data assessment J W P C F 59 4 222 227 BA 3 88 51 SHERMAN E R et al 1987 A comparison of toxicity tests conducted in the laboratory and in experimental ponds using cadmium and the fathead minnow Pimephales pro melas Water Research 3 317 323 BA 3 88 52 DeviLLers J et al 1987 A predictive structure toxicity mo del with Daphnia magna Chemosphere 16 6 1149 1163 BA 4 88 62 NyBERG H 1988 Growth of Selenastrum capricornutum in suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 22 the presence of synthetic surfactants Water Research 22 2 217 223 BA 4 88 63 CARLINE R F et al 1987 Long term effects of treated dome stic wastewater on brown trout Water Research 21 11 1409 1415 BA 4 88 64 CowaiLL U M et al 1986 The influence of water on repro ductive success and chemical composition of laboratory rea red populations of Daphnia magna Water Research 20 n 5 579 582 BA 2 89 77 Harcesy A et al 1988 Effects of low pH and humus on the survivorship growth and feeding of Gammarus pulex L Amphipoda Freshwater Biology 19 235 247 BA 2 89 78 Doumi Di
139. n overall review Wat Sci Tech 19 12 25 31 BA 5 93 269 AL SALEM S S et al 1987 An initial evaluation of Al Sumbra waste stabilization ponds Jordan Wat Sci Tech 19 12 33 37 BA 5 93 270 Gomez De Sousa J M 1987 Wastewater stabilization lagoon design criteria for Portugal War Sci Tech 19 12 7 16 BA 5 93 271 Mara D D et al 1990 The design and operation of waste stabilization ponds in tourist areas of mediterranean Euro pe Wat Sci Tech 22 3 4 73 76 BA 6 93 280 Rocers K H et al 1991 Nitrogen removal in experimental wetland treatment systems evidence for the role of acquatic plants Research Journal WPCF Vol 63 7 BA 3 4 94 312 TsIPRUAN V I et al 1987 Wastewater treatment in stabiliza tion ponds with higher aquatic plants Wat Sci Techn 19 12 287 288 BA 2 94 302 ELLIS K V et al 1993 Parasite ova and cysts in waste stabilization ponds Water Research 27 1455 1460 BA 1 95 329 Destino ambientale Ho ysu M et al 1986 Assessment of the environmental fate of linear alkylbenzene sulphonates Chemosphere 15 1 3 20 BA 2 88 42 Ross L J et al 1986 Fate of thiobencarb and molinate in rice fields J Environ Qual 15 3 220 225 BA 2 88 43 Woop L W et al 1987 Sediment desorption of PCB conge ners and their bio uptake by dipteran larvae Water Resear ch 21 875 884 BA 2 88 44 Nm A J et al 1986 Biologic
140. na e ci per garantire una disponibilit pratica mente continua di neonati A3 Acqua di allevamento C dubia pu essere allevata con successo in acque di vario tipo quali acque di falda e acque superficiali non contaminate ed anche in acque di rete purch non clorate Al fine di non esporre gli organismi in coltura a continue e talvolta eccessive variazioni delle caratteristiche del mezzo sono da preferire quelle fonti che dimostrano nel tempo la maggiore stabilit dei parametri chimico fisici In considerazione dei molteplici aspetti che debbono esse re soddisfatti dal mezzo di allevamento tossicologico nutrizionale di riproducibilit dei risultati di facilit di approvvigionamento etc l impiego di un acqua minera le o piu esattamente l impiego di un acqua sintetica preparata a partire da un acqua minerale di tipo commer ciale si pu configurare come una soluzione ottimale Un acqua di questo tipo infatti facilmente disponibile al trettanto facilmente preparabile di qualit nota e poco variabile permette buoni risultati in termini di accresci mento e attivit riproduttiva e assicura la riproducibilit di tali risultati Sono possibili due modi di impiego di un acqua minerale scelta tra quelle disponibili in com mercio Nel primo caso ci si serve di un acqua con un elevato contenuto di sali e ad una certa aliquota di acqua minerale viene aggiunta acqua Milli Q o di qualit equi valente in modo d
141. nch essa effettua ta con acqua bidistillata o Milli Q filtrata attraverso membrane con porosit di 0 22 um Il mezzo viene inocu lato con un volume di sospensione algale tale da ottenere una densit di circa 200 000 cell mL Il mezzo inoculato posto in incubazione alla temperatura di 20 2 C con un fotoperiodo di 16 h di luce 8 h di buio e una intensit Biologia Ambientale n 6 1996 20 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia luminosa di circa 4000 lux fornita da lampade fluorescen ti del tipo cool white Nel corso dell incubazione il mez zo e aerato insufflando aria filtrata attraverso cannule in vetro con un flusso sufficiente a mantenere le cellule algali continuamente disperse La scarsa agitazione pu rendere inutilizzabile la coltura Dopo 5 6 giorni di incu bazione la biomassa algale raggiunge una densit prossi ma ai 9 10 milioni di cell mL e si procede alla sua separazione dai residui del mezzo di coltura Tale opera zione si effettua per centrifugazione della sospensione a circa 400 RCF per 5 10 minuti Il sovranatante scartato mentre le alghe vengono ridisperse in acqua utilizzando preferibilmente quella di allevamento del cladocero ma con durezza ridotta a 30 50 mg CaCO L Si procede quindi ad una seconda centrifugazione ed alla raccolta delle cellule algali in un unico contenitore nel quale verranno conservate In mancanza di una centrifuga o di un rotore di di
142. ndice sono dettagliate le condi zioni colturali necessarie al mantenimento del crostaceo 1 cui neonati vengono utilizzati per la conduzione dei saggi SUMMARY In this document standardized methods are descri bed to undertake acute toxicity tests with the freshwater crustacean Ceriodaphnia dubia Procedures are outlined to assess whether toxic chemicals are present at toxic concentrations in effluents and receiving waters and mea sured toxicity is usually reported in terms of concentration which is lethal to 50 of the organisms LC Included as an appendix are instructions on culturing conditions and requirements of the crustacean whose neonates are used to perform the tests Il metodo stato discusso ed approvato dal sottogruppo Metodi con Crostacei del Gruppo Metodi Biologici composto da Amodei M Bacci E Baudo R Buffagni M De Marco M Ferraro M Marchetti R Marchini S Pasini M Rampa P Sbrilli G e Vigano L a cura di L Vigan IRSA CNR Brugherio Milano 1 INTRODUZIONE Il metodo descrive la procedura con la quale indaga re se effluenti di scarico o acque superficiali contengono inquinanti a concentrazioni tali da causare effetti tossici acuti sul crostaceo d acqua dolce Ceriodaphnia dubia La mancata osservazione di effetti tossici acuti per un dato campione non esclude che essi si manifestino saggiando campioni prelevati in altri momenti e ci in dipendenza della variabilita dello scarico o d
143. ndo ad esempio si sospetta che un campione sia molto tossico pu essere tuttavia vantaggioso disporre di informazioni preliminari per meglio impostare i saggi tossicologici definitivi In queste eventualit si allestisce una prova prelimi nare semplificata e di durata inferiore a quella definitiva Si preparano 5 diluizioni del campione con volume di 20 mL ciascuna scelte in modo da coprire un ampio interval lo di concentrazioni La sequenza 100 96 10 1 96 0 1 e 0 01 v v pu essere adottata a questo scopo In ogni contenitore sono introdotti 5 neonati di C dubia e dopo un massimo di 24 h si registrano 1 risultati Se il campione della prova preliminare dovr essere saggiato anche nella prova definitiva si raccomanda di procedere nel rispetto dei limiti di conservabilit del campione stesso Se viceversa le due prove sono condotte con cam pioni prelevati in momenti diversi si tenga presente che a causa della variabilit pi o meno accentuata della tossicit dello scarico o del recettore i risultati del saggio preliminare e di quello definitivo possono essere anche molto diversi 4 2 SAGGIO DEFINITIVO Per la conduzione del saggio definitivo necessario preparare almeno 5 diluizioni del campione in esame Una serie che si dimostrata applicabile a gran parte delle situazioni la seguente 100 50 25 12 5 e 6 25 Biologia Ambientale n 6 1996 14 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di toss
144. nfluence of sediment phospho rous release Freshwater biology 21 139 162 BA 3 4 91 192 Lassini P et al 1989 Recupero a verde forestale della discarica controllata di Carate Brianza Acer 5 21 25 BA 2 91 186 Bezzi A et al 1991 Piante insetticide e pesticide Prodotti naturali di origine vegetale attivi contro i parassiti delle piante coltivate Erboristeria Domani ottobre 65 79 BA 6 91 213 ImHorr K R 1990 Alcune esperienze riguardo ai bacini artificiali e loro relazione con l ambiente e la qualit dell ac qua Ingegneria Sanitaria XIX 2 87 93 BA 6 91 214 Crisp D T 1990 Simplified methods of estimating daily mean stream water temperature Freshwater Biology 23 457 462 BA 6 91 217 SincH U P et al 1989 Computer modeling for water quality planning a case study J WPCF 61 87 94 BA 1 93 255 Maniatis K et al 1992 Risultati e prospettive per gli im pianti di compostaggio realizzati come attivit dimostrative della CEE Acqua Aria 10 969 975 BA 1 93 257 Moss B 1990 Engineering and biological approaches to the restoration from eutrophication of shallow lakes in which aquatic plant communities are important components Hydro biologia 200 201 367 377 BA 1 93 250 MoseLLo R et al 1991 Il recupero del Lago d Orta Le Scienze 280 38 47 BA 3 4 94 315 HespanHoL I et al 1994 WHO guidelines and national standard for reuse and water quality W
145. nitiva prevista sia compresa tra 2000 e 3000 FAU II volume complessivo di mezzo di conservazione da ag giungere non deve comunque essere inferiore a 5 mL Mantenere la sospensione in bagno freddo ancora per 15 minuti Distribuire aliquote di 100 uL in provette munite di tappo Congelare a 20 o a 80 C La stabilit dei batteri preparati di almeno un mese a 20 C e di sei mesi a 80 C Per evitare alterazioni genetiche del ceppo bene preparare nuove colture ogni sei mesi C 1 Terreno liquido Il terreno liquido si prepara sciogliendo in acqua distillata 30 g di NaCl 6 1 g di fosfato monosodico monoidrato NaH PO H O 2 75 g di fosfato bipotassico triidrato K_HPO 3 H 0 0 204 g di magnesio solfato eptaidrato MgSO 7 HO 0 5 g di fosfato biammonico NH HPO 3mL di glicerolo Sg peptone di caseina 0 5 g di estratto di lievito Si porta la soluzione ad litro con acqua distillata e si aggiusta il pH a 7 2 0 2 con NaOH 1 M o HCI 1 M Si suddivide la soluzione in aliquote da 50 mL in beute da 250 mL e si sterilizza in autoclave a 121 C per 20 minuti C 2 Terreno solido Il terreno solido si prepara impiegando la stessa soluzione del terreno liquido allo stesso pH ma aggiun gendo 12 g di agar per litro Il terreno contenente l agar aggiunto a freddo va sciolto a caldo autoclavato e distri buito su piastre Petri sterili Biologia Ambientale n 6 1996
146. no disciolto con sensore di di mensioni adeguate alla misura nei contenitori di sag gio microscopio binoculare da dissezione provvisto di illuminazione laterale fonte di aria compressa a bassa pressione con cannule in vetro o pipette pasteur per far gorgogliare l aria nelle soluzioni da aerare L applicazione di un piccolo compressore del tipo usato in acquariologia pu costi tuire una soluzione adeguata L aria distribuita dai grossi impianti centralizzati spesso contaminata da vapori di oli o altri inquinanti che vanno rimossi con opportuni dispositivi di filtrazione 3 2 ORGANISMI PER IL SAGGIO La specie utilizzata in questo saggio di tossicit il crostaceo cladocero Ceriodaphnia dubia che allevato in laboratorio seguendo le indicazioni fornite in Appendice A2 Il saggio allestito con i neonati appartenenti alla terza schiusa o alle successive prodotte da femmine man tenute in condizioni di allevamento controllate e rispon denti ai requisiti di buone condizioni colturali descritti in Appendice I giovani organismi da utilizzare sono quelli schiusi entro e non oltre le 24 h precedenti l allestimento della prova 3 3 ACQUA DI DILUIZIONE Generalmente le diverse diluizioni del campione da saggiare sono preparate usando come acqua di diluizione e controllo la stessa in cui sono allevati 1 riproduttori Tuttavia in funzione delle finalit del saggio opportuno distinguere tra diverse possibili s
147. nte di NaCl tale da ottenere una salinit pari al 20 o Quando necessa rio paragrafo 1 4 il saggio va eseguito utilizzando il saccarosio invece del sale Per campioni d acqua di mare salmastra o a salinit superiore a quella di mare non necessario alterare la salinit del campione se questa si trova nell ambito di sopravvivenza dell organismo para grafo 1 4 Per campioni d acqua di scarico afferenti in acque di mare il saggio va condotto alla salinit del corpo recettore 3 2 RIATTIVAZIONE DELLA SOSPENSIONE BATTERICA Le sospensioni congelate dei batteri siano esse col tivate in laboratorio o acquistate devono essere riattivate prima dell uso aggiungendo la soluzione ricostituente 2 2 2 La quantit da aggiungere pu variare in considera zione della procedura del saggio tenendo presente che la quantit di batteri nella cuvetta finale del saggio non deve comunque essere inferiore a 10 cellule per cuvetta Dopo la riattivazione necessario attendere circa 30 minuti prima di procedere al saggio La sospensione batterica pu essere utilizzata nelle 4 5 ore successive alla riattiva zione o comunque finch siano rispettati 1 criteri di validazione riportati in 4 2 Se si conduce il test con una soluzione diluente in saccarosio par 1 4 anche i batteri devono essere riattivati nelle stesse condizioni 3 3 PROCEDURE DI CONDUZIONE DEL SAGGIO Varie procedure di conduzione possono essere adot tate a secon
148. o 4 5 mm e provvista di bulbo elastico per l aspirazione si trasferiscono le femmine prescelte in un bicchiere 4 L con il fondo di rete 1 2 mm a sua volta sospeso in un imbuto separatore a bocca larga Fig 5 Grazie a questo dispositivo 1 neonati appena schiusi cadono attraverso la rete nell im buto sottostante dal quale aprendo il rubinetto potranno venire raccolti in un cristallizzatore o in un recipiente provvisto a sua volta di un fondo di rete 300 um utile per concentrare o risciacquare gli organismi Un altra soluzione simile alla precedente consiste nel trasferire le femmine gravide in un ampio retino maglia di 2 3 mm del tipo usato in aquariologia che mantenuto sospeso in una vasca di 8 L contenente almeno 4 L di acqua In entrambi i casi gli adulti vengono nutriti un paio di volte al giorno con naupli di A salina secondo Fig 5 Dispositivo per l isolamento di femmine gravide e la raccolta di neonati modificata da Lussirr et al 1987 1 deflusso 2 bicchiere con fondo di rete 3 imbuto separatore 4 cristallizzatore 5 recipiente con fondo e pareti di rete i criteri gi descritti Generalmente necessario aerare le vasche di schiusa sia per mantenere la concentrazione di ossigeno disciolto al di sopra del 60 della saturazione e sia per mantenere il cibo in sospensione I neonati schiusi nell arco di 24 h dall isolamento delle femmine hanno et 24 h e possono essere usati per i saggi di
149. o Indice di resa cromatica 90 il fotoperiodo di 16 ore di luce e 8 di buio Un intensit luminosa che al piano di lavoro sia compresa tra 500 e 1000 lux si generalmente dimostrata adeguata 3 5 TEMPERATURA Il campione da saggiare o le sue diluizioni sono mantenute per tutta la durata della sperimentazione a 20 1 C Se invece i risultati ottenuti dal saggio acuto do vranno essere esaminati in relazione a dati di tossicit cronica prodotti con lo stesso organismo la tossicit acuta del campione deve essere misurata a 25 1 C e cio alla temperatura prevista per la conduzione del saggio croni co Per entrambi i valori di temperatura il risultato conseguibile immergendo i contenitori del saggio in un bagno termostatato o condizionando la temperatura del l intero ambiente in cui condotto il lavoro sperimentale 3 6 ALIMENTAZIONE In generale i giovani individui di C dubia non vengono nutriti durante la prova Tuttavia se essi non sono utilizzati entro 2 3 ore dall isolamento dai recipienti in cui sono schiusi pu essere suggerita la somministra zione di cibo fino al loro trasferimento nelle soluzioni test nei quantitativi indicati per l allevamento del clado cero cfr Appendice A4 Similmente se si intende pro lungare il saggio fino alle 96 h di esposizione 20 1 C circa 2 h prima del rinnovo delle soluzioni e quindi del trasferimento degli organismi cfr par 4 si somministra
150. o per trota o mangi me in scaglie Tetramin La sospensione viene mante nuta in aerazione per una settimana a temperatura am biente compensando l evaporazione con acqua Milli Q e tenendo il contenitore preferibilmente sotto una cappa aspirante a causa dell odore sgradevole che si sviluppa durante il processo di digestione Al termine il contenitore viene posto in un frigorifero e lasciato in quiete in modo che la sospensione digerita possa sedimentare per un minimo di 1 ora Si procede quindi alla filtrazione attra verso un retino con maglie di apertura di 100 150 ume si scarta il particellato Per la preparazione delle foglie di cereali 5 g del prodotto in polvere Cerophyl vengono dispersi in 1 L di acqua Milli Q Mediante un agitatore magnetico la so spensione viene mantenuta in agitazione a velocit mode rata per un massimo di 24 ore e lasciata poi sedimentare per almeno 1 ora ed eventualmente filtrata attraverso un retino con maglie da 100 150 um scartando il materiale particolato Per la preparazione a base di lievito si disperdono energicamente 5 g di lievito disidratato Saccharomyces cerevisiae in acqua Milli Q sino alla completa sospen sione del prodotto L alimento composito ottenuto per miscelazione di uguali volumi circa 300 mL dei tre preparati e cio della sospensione di lievito della fase decantata od otte nuta per filtrazione dal mangime di pesce e di quella ottenuta dalle foglie di cereal
151. oduction for ecologi sts Wiley amp Sons 1992 BA 2 92 CARLING ed Lowland floodplain rivers Geomorphological perspectives Wiley amp Sons 1992 BA 2 92 GARDINER ed River project and conservation A manual for holistic appraisal Wiley amp Sons 1991 BA 2 92 RHEINHEIMER Aquatic microbiology Wiley amp Sons 1991 BA 2 92 Warp Aquatic insect ecology I Biology and habitat Wiley amp Sons 1992 BA 2 92 Boow et al ed River conservation and management Wiley amp Sons 1991 BA 2 92 Petts ed Historical change of large alluvial rivers Wiley amp Sons 1989 BA 2 92 Domenico Physical and chemical hydrogeology Wiley amp Sons 1991 BA 2 92 Brookes Channelized rivers Perspectives for environmen tal management Wiley amp Sons 1988 BA 2 92 WaLESH Urban surface water management Wiley amp Sons 1989 BA 2 92 STARKEL ed Temperate palaeohydrology Fluvial processes in the temperate zone during the last 15000 years Wiley amp Sons 1991 BA 2 92 SruMM ed Aquatic chemical kinetics Reaction rates of processes in natural waters Wiley amp Sons 1990 BA 2 92 Bu ed Dynamic of gravel bed rivers Wiley amp Sons 1992 BA 2 92 MirscH ed Ecological engineering An introduction to ecotechnology Wiley amp Sons 1989 BA 2 92 NRiAGU ed Aquatic toxicology and water quality manage ment Wiley amp Sons 1988 BA 2 92 Bressan Gop
152. oluzioni a Selo scopo di evidenziare la presenza di effetti tossici acuti e il loro andamento nel tempo o di confronta re la tossicit di diversi effluenti come diluente si adotter un acqua sintetica standard avente durezza di circa 150 mg L CaCO per la cui preparazione si aggiungono dei sali di grado analitico ad acqua Milli Q o deionizzata di qualit equivalente Per preparare 1 L di acqua standard i sali ed i quantitativi da aggiungere sono nell ordine i seguenti 10 mg di KCI 192 mg di NaHCO 53 mg di MgSO e 183 mg di CaSO 2H O La soluzione risultante ha durezza compresa nell ambito 140 160 mg CaCO L alcalinit 110 120 mg CaCO L e pH 7 5 8 5 L acqua standard pu anche essere preparata a partire da un acqua minerale scelta tra quelle disponibili in commercio preferibilmente la stessa eventualmente usata per allevare l organismo e adeguata se necessario nelle concentrazioni di alcuni costituenti maggiori a dare i valori di durezza e alcalinit indicati cfr Appendice A3 b Selo scopo del saggio di valutare la tossicit acuta determinata dall immissione di uno scarico nelle acque del recettore come diluente si user l acqua non contami nata di quest ultimo prelevata a monte dell immissione o comunque al di fuori dell area esposta a fonti di contami nazione Nel caso essa non sia disponibile si pu utilizza re un acqua prelevata da un altro corpo idrico superficiale o un acqua sintetica cfr
153. on le seguenti caratteristiche durezza 140 160 mg CaCO L alcalinit 110 120 mg CaCO L Ca Mg gt 1 e prossimo a 4 N K gt 1 e prossimo a 10 L acqua semisintetica viene preparata in volumi dell ordine di alcune decine di litri e conservata in recipienti di vetro o polietilene dedicati esclusivamente a questo scopo I reci pienti devono essere mantenuti al riparo da fonti di conta minazione e preferibilmente anche dalla luce per evitare crescite algali o batteriche indesiderate Se viene utilizzata un acqua naturale necessario filtrarla attraverso membrane da 0 22 um minimizzando in questo modo l eventualit di un apporto incontrollato di cibo o comunque di particelle aventi valore nutriziona le come pure l introduzione di agenti patogeni o di altri organismi indesiderati Se necessario si pu correggere il contenuto di alcuni dei costituenti maggiori aggiungendo sali di grado analitico MgSO CaCl NaHCO KCl o diluendo con acqua Milli Q Il passaggio su una colonna di carbone attivo pu avere un netto effetto migliorativo sulla qualit del mezzo e tuttavia si raccomanda il con trollo analitico periodico di alcuni parametri Tab 1 Qualora si voglia adottare un nuovo mezzo di coltu ra opportuno verificarne preliminarmente l idoneit su un numero limitato di organismi La procedura consiglia ta quella del confronto con un mezzo di idoneit com provata e a tale scopo si allestisce un saggio della durata
154. on lines Water Research 20 8 1023 1029 BA 5 90 154 Haas C N et al 1986 Statistics of enumerating total colifor ms in water samples by membrane filter procedures Water Research 20 4 525 530 BA 5 90 155 BELLINI R et al 1989 Lotta biologica con parassitoidi contro le mosche degli allevamenti zootecnici L Informatore Agra rio 33 87 89 BA 6 90 162 Sauis A et al 1990 Studio su alcuni insetticidi antilarvali per l ambiente del canale di Terramaini Acqua Aria 3 241 247 BA 2 91 182 GALASSI S et al 1990 Erbicidi e esteri fosforici in acque di superficie e di falda destinate al consumo umano Acqua Aria 3 231 240 BA 2 91 188 Auticino F A et al 1991 Studio di un caso di corrosione batterica in un acquedotto di una regione italiana Rapporto ISTISAN n 91 4 91 pp BA 6 91 216 Casson L W et al 1990 Giardia in wastewater Effect of treatment J Water Pollut Control Fed 62 670 675 BA 3 4 92 230 Bricanti V 1991 L impiego dell acqua ossigenata per la suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 20 rimozione dei composti organici alogenati nei trattamenti di potabilizzazione delle acque Biologi Italiani 9 13 15 BA 2 92 219 Bernagozzi M et al 1990 Caratteristiche microbiologiche di acque destinate ad uso potabile sottoposte a trattamento con apparecchi a resine scambiatrici di ioni giene Moderna 93 891 901 BA 2 92 220 Bucci R
155. one Reg Em Romagna Ass Amb pp 166 BA 3 4 91 193 VitousEK P M et al 1979 Nitrate losses from disturbed 19 ecosystems Sc 204 469 474 BA 3 4 91 198 Comin F A et al 1990 Proposals for macrophyte restoration in eutrophic coastal lagoons Hydrobiologia 200 201 427 436 BA 1 93 249 Henprix W G et al 1992 Use of a geographic information system for selection of sites for land application of sewage waste J of Soil and Water Conserv 47 271 275 BA 2 95 344 PAGNOTTA R 1993 Criteri per la classificazione delle acque superficiali ai fini della determinazione delle aree sensibili Ing Sanit Amb mag giu 11 17 BA 6 95 354 Igiene ambientale Lewis G D et al 1986 Enterovirus removal from sewage The effectiveness of four different treatment plants Water Research 20 10 1291 1297 BA 2 87 12 Sartory D P 1986 Membrane filtration enumeration of faecal clostridia and Clostridium perfringens in water Water Research 20 10 1255 1260 BA 2 87 13 Nunizzo C et al 1988 Denitrificazione biologica di acque ad uso potabile Risultati della prima serie di prove sperimen tali ng Amb 17 n 2 feb BA 3 89 88 VOLTERRA L et al 1988 Pesci come vettori di microrganismi rassegna bibliografica L Igiene Moderna 90 782 795 BA 5 90 153 McCoy W C et al 1986 Relationship among turbidity particle counts and bacteriological quality water distribu ti
156. per ciascuna cuvetta per cui si procede aggiungendo direttamente al campione 1 mL per ciascuna diluizione una quantit molto contenuta di sospensione batterica normalmente compresa tra 10 50 uL in maniera da ridurre al minimo la diluizione del campione e si misura dopo 15 e 30 minuti rispettivamente l I e PL del campione delle sue dilui zioni e della soluzione di controllo Per migliorare la rilevanza statistica del saggio il numero delle repliche e quello delle diluizioni utilizzate per ciascun campione pu essere aumentato a piacere in base alle esigenze dell operatore AVVERTENZE Si consiglia di mescolare frequente mente la sospensione batterica prima dell aggiunta al campione al fine di ottenere un omogenea distribuzione dei batteri nelle cuvette 3 3 3 Saggio definitivo di tipo standard Quando l inibizione misurata nel test preliminare per il campione saggiato alla massima concentrazione 50 del campione superiore al 50 o quando sia noto l intervallo di tossicit necessario condurre il saggio standard Si preparano cinque diluizioni successive esem pio 1 2 del campione in base all intervallo di tossicit noto e si saggiano tali diluizioni come nel saggio prelimi nare in duplicato insieme alla soluzione controllo Per migliorare la rilevanza statistica del saggio il numero delle repliche e quello delle diluizioni utilizzate per ciascun campione pu essere aumentato a piacere in base alle esi
157. phnia dubia Environ Toxicol Chem 11 839 850 Cooney J D G M DEGRAEVE E L Moore W D PALMER e T L PorLock 1992b Effects of food and water quality on culturing of Ceriodaphnia dubia Environ Toxicol Chem 11 823 837 CowaiLL U M K L KEATING e L T TAKAHASHI 1985 Fecundity and longevity of Ceriodaphnia dubia affinis in relation to diet at two different temperatures J Crust Biol 5 420 429 IRSA 1994 8020 Metodi di valutazione della tossicit con Daphnia In Metodi analitici per le acque Quad Ist Ric Acque 100 336 342 Knicut J T e W T WALLER 1992 Influence of the addition of Cerophyl on the Selenastrum capricornutum diet of the cladoce ran Ceriodaphnia dubia Environ Toxicol Chem 11 521 534 MaRGARITORA F 1983 Cladoceri Crustacea Cladocera In Guide per il riconoscimento delle specie animali nelle acque interne italiane CNR P F Promozione della Qualita del l Ambiente n 22 CNR AQ 1 197 pp 169 Mount D L e T J NonBERG 1984 A seven day lifecycle cladoceran toxicity test Environ Toxicol Chem 3 425 434 PATTERSON P W K L Dickson W T WALLER e J H RODGERS 1992 The effects of nine diet and water combinations on the culture health of Ceriodaphnia dubia Environ Toxicol Chem 11 1023 1035 Rue J W J A Fava e D R Grotue 1988 A review of inter and intralaboratory effluent toxicity test method variabi ity In Aquatic Toxicology and Hazard Assess
158. pportune trasformazioni dei dati stessi La con versione delle proporzioni di organismi deceduti nella radice quadra del loro arc sen la trasformazione piu comune Se non si rivelasse risolutiva necessario proce dere all esame dei risultati con metodi non parametrici Se a sua volta la condizione di omogeneit della varianza non fosse rispettata il test t rimane valido ma deve essere applicato in forma modificata Il valore calcolato per la funzione t infine confrontato con il valore critico di t individuabile in apposite tabelle in base al numero di gradi di libert ed al livello di probabilit prescelto Se il valore di t calcolato supera il valore tabellare le due mortalit sono significativamente diverse Fortunatamente sono disponibili in commercio dei pro grammi per personal computer che sono espressamente dedicati all analisi statistica di risultati tossicologici e possono svolgere tutte le operazioni necessarie A questi prodotti pertanto si rinvia APPENDICE Al Note sulla sistematica e biologia di Mysidopsis bahia I Misidacei sono piccoli crostacei che popolano le acque marine le estuariali e con un numero ridotto di specie anche le acque dolci Sono confondibili a prima vista con degli stadi giovanili di gamberi e quindi con i Crostacei Decapodi Essi appartengono tuttavia a un diverso superordine quello dei Peracaridi ed essenzial mente si differenziano dai Decapodi per avere il carapac
159. qua usata per l allevamento di C dubia con durezza ridotta a 30 50 mg Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia 21 CaCO L viene dispersa una quantit di lievito tale da approssimare la densit di 100 milioni cell mL Come nel caso dell alga anche la sospensione di lievito conserva bile al buio a 4 C ed somministrata giornalmente in volumi tali da garantire un densit di 300 000 cell mL Le vitamine sono preparate in una unica soluzione contenente tiamina cloridrato vit B 75 ug L biotina vit H 0 75 ug L e cianocobalamina vit B 1 ug L Per agevolare l impiego di quantitativi cosi modesti si consi glia di ricorrere a una o piu soluzioni intermedie concen trate La soluzione di vitamine che conservabile conge lata per tempi pressoch indefiniti viene aggiunta al momento dell uso all acqua di allevamento del crostaceo e nella quantit di 1 mL L A6 Riproduzione L attivit riproduttiva di C dubia amp largamente dipendente dalla temperatura dalla qualit dell acqua e dalla qualit e quantit del cibo ASTM 1989 La tempe ratura dell acqua delle colture deve essere mantenuta al valore cui saranno condotte le prove di tossicit e pertan to a 20 1 C o 25 1 C C dubia ha ricevuto grande attenzione soprattutto perch permette di condurre una saggio cronico in 7 giorni a 25 C mentre il saggio acuto con questo organ
160. rati N Per un modello matematico di inquinamento am bientale in corsi d acqua BA 6 91 BERETTA G P I trattamenti biologici in sito nel disinquina mento degli acquiferi e nella bonifica delle aree contamina te BA 3 4 92 Viani I Nuovi percorsi formativi nella scuola secondaria superiore l indirizzo biologico BA 6 93 Atos Toraro E FerrILLo R GALLo T Lucapamo L Rete di monitoraggio delle piogge in provincia di Cosenza grazie all utilizzo di modelli previsionali BA 5 94 suppl a Biologia Ambientale n 6 1996 ATTUALIT Riveruzzi L Come formarsi un opinione obiettiva sui rischi reali dell uso pacifico del nucleare BA 1 87 Barni M Atrazina usi chimismo e tossicologia BA 2 87 CAVALLARO A Riflessioni sul problema dei microinquinanti nelle acque BA 3 87 VorrERRA L Microbiologia delle acque potabili Corsi al l Istituto Superiore di Sanit BA 1 88 CASARINI P Un approccio alla valutazione biologica dell in quinamento del suolo BA 2 88 Kumer E BONALBERTI L Utilizzazione dei licheni quali bioin dicatori di inquinamento BA 3 88 Damiani G Programma di rilevamento dei fenomeni eutrofi ci delle acque di mare BA 1 89 Mazzorri S Erpetofauna questa sconosciuta Approccio scien tifico ad Anfibi e Rettili BA 2 89 Mapont P Ring test sull analisi microscopica del fango atti vo BA 3 89 Casarini P Lymantria dispar L si pu ancora parl
161. rie settimane di funziona mento si verifica anche un evidente aumento del numero di giovani di M bahia i quali apparentemente si nutrono nel o del feltro di alghe che riveste le pareti e che pertanto non dovrebbe mai essere rimosso completamente nei pe riodici interventi di pulizia Alcune diatomee del genere Skeletonema sono state somministrate come integratore della dieta ed il rotifero Brachionus plicatilis si dimo strato a sua volta una ottima fonte di cibo per 1 giovani di M bahia Lussier et al 1989 La frequente somministrazione di cibo vivo asso lutamente necessaria per prevenire fenomeni di cannibali smo I naupli di Artemia salina si prestano ottimamente a questo scopo Almeno una volta al giorno 1 misidacei devono essere nutriti con naupli vivi di A salina La quantit di artemie deve essere tale da assicurare che nelle vasche ve ne siano sempre presenti per evitare che gli adulti di M bahia predino la propria prole o gli altri individui della vasca Sono state utilizzate con successo quantit di cibo pari a 2 3 artemie per mL di acqua o anche pari a 150 artemie per individuo ogni giorno Se com consigliabi le si somministra il cibo due volte al giorno si dimezza il numero di artemie fornite circa 75 individuo Viceversa se dopo poche ore non residuassero naupli nella vasca preferibile aumentarne la quantit adeguandola alla den sit ed alla velocit riproduttiva della coltura L incre men
162. rino la macchia oculare degli embrioni in corso di sviluppo Esse vengono isolate dalle vasche della coltura di laboratorio almeno 24 h prima dell allestimento del saggio come descritto in Appendice 3 3 ACQUA DI DILUIZIONE In base alle finalit del saggio opportuno scegliere il tipo di acqua di diluizione pi adeguato a Se l obiettivo di stimare la tossicit acuta di un effluente producendo un dato assoluto indipendente dalle caratteristiche delle acque recettrici verr utilizzata un ac qua di diluizione sintetica standard A titolo di esempio in Tab 1 sono elencati i sali con 1 rispettivi dosaggi necessari per la preparazione di acqua di mare sintetica con salinit pari a circa 31 o Salinit maggiori o minori sono ottenute con quantit della miscela salina adeguate in proporzione Per la preparazione dell acqua di mare si usa acqua MilliQ o deionizzata di qualit equivalente alla quale vengono aggiunti i nove sali elencati in Tab 1 singolarmente secondo la sequenza indicata e assicuran dosi che ciascuno si sia sciolto prima dell aggiunta del successivo Per la preparazione dell acqua di mare sintetica sono utilizzabili anche le miscele di sali gi pronte e disponibili in commercio quali Forty Fathoms o altre purch soddi sfino 1 criteri di validit del saggio L accrescimento l attivit riproduttiva e le altre manifestazioni vitali forte mente dipendenti dalla qualit dell acqua sono difficil
163. ripeti zioni di riempire sino all orlo con il campione d acqua un contenitore da 100 mL in materiale chimicamente inerte preferibilmente in vetro scuro Tale procedura consente di evitare eventuali perdite di sostanze volatili presenti nel campione Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti 5 Il campione cosi prelevato deve essere conservato al buio e alla temperatura di 4 C per non pi di 72 ore Per tempi maggiori si consiglia di congelare il campione a 20 C in quest ultimo caso tuttavia non possibile assicu rare la totale conservabilit delle caratteristiche chimiche originali del campione ai fini del risultato del saggio tossicologico Prima di condurre il saggio si porta a temperatura ambiente il campione si misura il pH e in caso di campioni d acqua di mare o salmastra la salinit IRSA 1995 Nel caso che il valore del pH si collochi al di fuori dell ambito di sopravvivenza dell organismo paragrafo 1 4 il saggio va eseguito sia al pH originale del campione sia a pH 7 0 0 2 previa aggiunta di NaOH e HCl 1 M Nel caso invece che il pH del campione sia compreso tra 6 e 9 unit non occorre modificare il pH Se il campione d acqua stato sottoposto a disinfe zione necessario misurare la quantit di cloro attivo presente cfr appendice B Nel caso di campioni d acqua dolce necessario aggiungere al campione una quantit equivale
164. rotratto a 96 h dopo 48 h di esposizione si deve provvedere al rinnovo delle soluzioni del campione saggiato Il rinnovo quotidiano si pu ren dere necessario se l effetto tossico causato da sostanze facilmente degradabili o quando l eventuale aerazione dei campioni causa una riduzione significativa degli effetti tossici Per preparare le soluzioni fresche si procede se condo le condizioni precisate a proposito dell allestimen to della prova I giovani di M bahia sono trasferiti nelle soluzioni corrispondenti a quelle in cui sono gi stati esposti nelle precedenti 24 48 h di saggio In generale opportuno limitare l evaporazione delle soluzioni di saggio per non causare variazioni della salinit oltre che della concentrazione degli inquinanti Per controllare il fenomeno si possono usare dei fogli di polietilene trasparenti o altri dispositivi vetro d orolo gio con i quali coprire i recipienti di saggio Almeno quotidianamente si ispezionano i giovani crostacei e si provvede alla rimozione e registrazione degli organismi eventualmente deceduti Sono considera ti deceduti quegli organismi che non reagiscono ad una leggera stimolazione Per evitare di disturbare gli anima li si pu fare coincidere l osservazione degli effetti con la somministrazione del cibo e le altre operazioni collegate Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Mysidopsis bahia 27 alla con
165. rsonal computer espressamente dedicati a diversi metodi di analisi statistica di risultati tossicologi ci a questi prodotti parimenti si rinvia 0 7 2 EFFETTI DA CONCENTRAZIONE UNICA L esame dei risultati ottenuti saggiando un campio ne non diluito del corpo idrico riconducibile alla teoria del confronto tra due campioni Nel presente schema sperimentale i decessi osservati nelle repliche del corpo idrico e in quelle del controllo rappresentano i due cam pioni di dati posti a confronto Di fatto se la mortalit degli organismi esposti al corpo idrico supera il valore del 10 e cio quel limite di decessi accettato come naturale in un gruppo di indivi dui di controllo si pu gi concludere che il campione contiene inquinanti a concentrazioni tossiche Tuttavia puo essere opportuno dare supporto statistico al risultato del saggio verificando la cosiddetta ipotesi nulla o zero e cio che le medie dei decessi osservati nei due trattamenti siano uguali Smentire l ipotesi con un certo grado di probabilit solitamente P 0 05 equivale a verificare che la mortalit osservata per gli organismi esposti al corpo idrico significativa Il test t utilizzato per confrontare i due campioni e dal momento che vi un attesa di contaminazione o di mortalit maggiore per il campione del corpo idrico piut tosto che per il controllo un test unilaterale generalmen te adeguato L applicazione del test t ric
166. sono immobili Essi conducono vita plan ctonica per le prime 24 48 h dopo le quali raggiungono il fondo si orientano verso la corrente e si cibano di detrito e di piccoli organismi che da questa sono trasportati Gli individui adulti di M bahia hanno lunghezza compresa tra 4 4 e 9 4 mm misurata dal margine anterio re del carapace sino al termine degli uropodi aventi aspetto laminare Fig 1 Le femmine adulte sono nor malmente di dimensioni maggiori dei maschi ed 1 loro pleopodi appendici addominali hanno dimensioni mi nori Fig 2 Il corpo solitamente trasparente ma pu presentare colorazioni tendenti al giallo bruno o nero A2 Allevamento degli organismi Per ottenere un rifornimento adeguato dei giovani individui per i saggi la coltura di M bahia deve essere attivata almeno quattro settimane prima del periodo di utilizzo Gli organismi necessari ad iniziare la coltura di laboratorio devono provenire da centri specializzati che ne garantiscano l identit specifica Sono trasportabili in bottiglie di polietilene ad una densit consigliata di circa 50 individui in 700 mL di acqua di mare in contenitore da 1 L Per evitare crescite batteriche ed eccessive riduzioni dell ossigeno disciolto durante il trasporto che non deve prolungarsi oltre le 24 h gli animali non vengono alimen tati e si area a saturazione il mezzo acquoso prima della loro immissione Le colture massive possono essere mantenute sia in F
167. spensione in centrifuga refrigerata a 5 C per 30 minuti Tale operazio ne stata condotta per allontanare dalla sospensione batterica eventuali residui di mezzo colturale Per il LU MIStox il test stato condotto seguendo a la metodica DIN 38412 teil 341 b utilizzando per la riattivazione la soluzione 2 2 2 che a differenza di quella prevista dalla metodica DIN non contiene il tampone biologico HE PES c utilizzando per la riattivazione una soluzione senza l HEPES ma con tampone fosfato cos come viene utilizzata per le metodiche AFNOR T90 320 e NVN 6516 stata infine condotta una prova con i batteri preparati in laboratorio I risultati sono mostrati in detta glio nella tab 1 e riassunti nella tab 2 BIBLIOGRAFIA IRSA 1995 Metodi analitici per le acque Quad Ist Ric Acque 100 342 pp Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Ceriodaphnia dubia 11 METODO PER LA VALUTAZIONE DELLA TOSSICITA ACUTA CON Ceriodaphnia dubia RIASSUNTO In questo documento sono descritte delle procedure standardizzate per condurre dei saggi di tossicit acuta con il crostaceo d acqua dolce Ceriodaphnia dubia I saggi descritti permettono di valutare se effluenti di scari co o acque superficiali contengono sostanze tossiche a concentrazioni capaci di effetti tossici i quali sono misura ti ed espressi come concentrazione letale per 11 5096 degli organismi LC In appe
168. sta ceo marino Mysidopsis bahia Questi metodi sono utiliz zati per evidenziare in acque di mare e in effluenti di scarico la presenza di sostanze a concentrazioni capaci di effetti tossici e per misurare la loro tossicit acuta solita mente espressa come concentrazione letale per il 50 degli organismi LC In appendice sono ampiamente descritte le condizioni di allevamento in laboratorio del crostaceo e come ottenere 1 giovani individui necessari alla conduzione dei saggi SUMMARY This paper describes standardized methods to con duct acute toxicity tests with Mysidopsis bahia a marine crustacean These methods are used to assess the presence of toxic chemicals in toxic amounts in effluents and marine waters and to measure their acute toxicity usually reported as lethal concentration to 5096 of the organisms LC Also included is an appendix which describes in details the culture conditions of the crustacean and how to obtain the juveniles which are necessary to perform the tests Il metodo e stato discusso ed approvato dal sottogruppo Metodi con Crostacei del Gruppo Metodi Biologici composto da Amodei M Bacci E Baudo R Buffagni M De Marco M Ferraro M Marchetti R Marchini S Pasini M Rampa P Sbrilli G e Vigan L a cura di L Vigan IRSA CNR Brugherio Milano 1 INTRODUZIONE Viene descritta la procedura standard per saggi di tossicit acuta su campioni di acque di scarico o di corpi idric
169. stinate al consumo umano BA 3 4 93 Sanson G Il lisciamento esponenziale centrato proposta di un semplice metodo di perequazione delle curve per l analisi di serie storiche di dati BA 2 93 Rinaturalizzazione PETERSEN JR R C The building block approach to stream restoration theory and practice BA 1 91 Importante direttiva della Regione Emilia Romagna sulla rinaturalizzazione degli ambienti fluviali BA 2 95 Saggi tossicologici AZZONI R Alla riscoperta del saggio di tossicit BA 4 88 FRANCALANCI C Martini G Saggio di tossicit acuta con Daphnia magna su reflui industriali di aziende orafe nella provincia di Arezzo BA 4 89 AMODEI M AzzonI R ARDEMAGNI A Pasquini P Daphnia magna nel controllo tossicologico delle acque superficiali Problemi relativi alla nutrizione degli organismi del saggio BA 1 93 AMODEI M Azzoni R Daphnia magna nel controllo tossicolo gico delle acque superficiali II Risultati relativi al primo anno d indagine BA 5 93 Tossine algali VOLTERRA L Alghe produttrici di biotossine BA 5 89 VOLTERRA L Alghe produttrici di biotossine bibliografia BA 2 90 Bruno M VorrERRA L La primnesina BA 5 90 Varie Massa F D Ampra R Bettini P Attivit di acquacoltura nell area dei comuni di Orbetello e Capalbio BA 5 90 Festanti M Lo zoo di carta Animali tra realt e fantasia nelle antiche edizioni illustrate della biblioteca Panizzi BA 6 91 P
170. te in fase di prelievo dopo aver eseguito la sedimentazione sul posto o in laboratorio sempre sul surnatante dopo la determinazione dei solidi sedimentabili Detto quesito riveste una notevole importanza nell ambito del terri torio pisano in virt dell elevato numero di controlli da eseguire nei confronti degli insediamenti conciari nei cui scarichi viene sistematicamente effettuata la determinazione del cromo trivalente Si ritiene che l operazione di stabilizzazione possa essere condotta in laboratorio dopo l esecuzione dei solidi sedimenta bili entro 24 ore dal momento del prelievo Intervalli di tempo superiori sono sconsigliati in quanto potreb bero comportare alterazioni dei campioni con varia zioni significative dei solidi sedimentabili e quindi delle concentrazioni dei metalli sul surnatante portan do a determinazioni non rispondenti allo spirito della norma Tali indicazioni discendono da considerazioni di ordine pratico e dalla consapevolezza della difficol t di fornire condizioni standardizzate che tengano conto delle differenti caratteristiche di stabilit pro prie delle diverse tipologie di effluente Biologia Ambientale n 6 1996 Centro Italiano Studi di Biologia Ambientale piologia amolentale BOLLETTINO C I S B A Spediz abbon post comma 27 art 2 L 549 95 filiale RE Tassa pagata Taxe per ue Bimestrale anno X suppl al n 6 novembre dicembre 1996 suppl al n novem
171. ter for hazard evaluation Water Research 27 1145 1152 BA 5 94 325 Nar S et al 1992 Differential sensitivity of pigmented and non pigmented marine bacteria to metals and antibiotics Water Research 26 431 434 BA 1 95 331 GUZZELLA L et al 1992 Metodi biologici per la valutazione del rischio da microinquinanti organici in ambienti acquati ci Atti V Congr SItE Milano 21 25 sett 92 643 646 BA 2 95 340 GoopricH M S et al 1991 The toxicity bioaccumulation metabolism and elimination of dioctyl sodium solfosuccinate DSS in rainbow trout Oncorhynchus mykiss Wat Res 25 2 119 124 BA 2 95 341 Durka B J et al 1998 Use of microbial and toxicant scree ning test for priority site selection of degraded areas in water bodies Wat Res 22 4 503 510 BA 2 95 342 Varie PAVAN G 1989 La bioacustica e l ambiente acquatico Ac qua Aria 5 573 580 BA 5 89 114 BARBERIS R et al 1990 Criteri per la valutazione della qualit dei compost I Parametri Chimici Acqua Aria 2 157 164 BA 3 4 90 145 Nappi P et al 1990 Criteri per la valutazione della qualit 23 dei compost II Parametri Biologici Acqua Aria 2 261 268 BA 3 4 90 146 REIMER P 1989 Concentration of lead in aquatic macrophytes from Shoal Lake Manitoba Canada Environ Pollut 56 77 64 BA 6 90 164 ManspEN M W 1989 Lake restoration by reducing exster nal phosphoros loading the i
172. ti 1 8 g di solidi sospesi sommini strato giornalmente in volumi pari a 100 uL per 15 mL di mezzo acquoso o anche in ragione di 12 mg di solidi per ogni litro di coltura di C dubia Sia nel caso in cui la sospensione venga preparata di fresco o sia ottenuta da una aliquota scongelata se ne consiglia il rinnovo con frequenza settimanale Nei laboratori IRSA CNR in uso una dieta sempli ficata secondo la quale l alga S capricornutum sommi nistrata ad una densit di poco superiore a quella della dieta originale unitamente a una sospensione di lievito e a una soluzione di vitamine cfr A5 3 AS Preparazione della dieta AS 1 SOSPENSIONE ALGALE L alga S capricornutum viene coltivata in un mez zo di coltura preparato a partire da quattro soluzioni composte dai sali di seguito elencati Soluzione 1 NaNO 25 500 g L MgCl 6 H O 12 164 g L CaCl 2H O 4 410 g L H BO 185 520 mg L MnCl 4H 0 415 380 mg L ZnCl 3 270 mg L CoC 6H O 1 428 mg L CuCl 2H 0 0 012 mg L Na M00 2H O 7 260 mg L FeCl 6H O 160 000 mg L Na EDTA 2H O 300 000 mg L Soluzione 2 MgSO 7H 0 14 700 g L Soluzione 3 K HPO 1 044 g L Soluzione 4 NaHCO 15 000 g L I sali di grado analitico vengono solubilizzati in acqua bidistillata o Milli Q filtrata su membrane da 0 22 um Il mezzo di coltura ottenuto per diluizione delle quattro soluzioni in ragione di 2 mL di ciascuna di esse per ogni litro di mezzo La diluizione a
173. tial distribution of nematodes in percolating filters Hydrobiologia 160 249 255 BA 1 90 124 SALVADO H et al 1988 Estudio de la poblacion de microor ganismos en una planta depuradora urbana de fangos acti vados P Dept Zool Barcelona 14 21 29 BA 6 90 160 Rivera F et al 1988 Protozoa of a rotating biological con tactor treatment plant in Mexico Water Air and Soil Pollu tion 42 281 301 BA 6 90 161 Jan S K et al 1990 Azolla pinnata R Br and Lemna minor L for removal of lead and zinc from polluted water Water Research 24 177 183 BA 3 4 91 199 PERRONE S 1989 Lo smaltimento delle acque di vegetazione delle olive nquinamento XXXI 6 42 45 BA 2 91 184 CARDINALETTI M et al 1990 Dinamiche di popolazione della microfauna in un impianto di trattamento urbano indu striale a fanghi attivati Inquinamento 2 62 68 BA 5 91 206 BALICE V et al 1990 Biodegradabilit e destino di microin quinanti organici negli impianti di trattamento delle acque Aspetti generali e necessit di ricerca Ing Amb 19 41 68 BA 5 91 207 Muna F et al 1990 Influenza degli inibitori sui processi di nitrificazione negli impianti convenzionali di depurazione dei liquami Acqua Aria 9 769 774 BA 2 92 223 ANDREOTTOLA G et al 1990 Tecniche avanzate di rimozione Indice 1987 1996 Abstracts biologica di azoto e fosforo dalle acque di scarico Ing Amb XIX 5 287 300
174. to della quantit di cibo non deve causare tuttavia la riduzioni della concentrazione dell ossigeno disciolto n intorbidamento da crescite batteriche diffuse o altri eventi che indichino il decadimento della qualit dell ambiente di allevamento altres importante controllare che l uni t di filtrazione non abbia un flusso tale da rimuovere essa stessa i naupli di artemia prima che questi possano essere predati AS Idoneit della dieta In particolari condizioni ambientali A salina pro duce delle uova cisti quiescenti che permangono vitali per lunghi periodi di tempo purch conservate all asciut to e in condizioni anaerobie ASTM 1992 La resistenza dello stadio quiescente fa si che esso possa essere facil mente trasportato e commercializzato e grazie alla sua praticit venire ampiamente utilizzato in acquacoltura e in acquariologia per nutrire molti organismi acquatici Reidratando le cisti in acqua di mare dopo circa 24 h ne schiudono i naupli al primo stadio di sviluppo Le variet geografiche e le corrispondenti fonti commerciali di uova di Artemia sono numerose tuttavia stato osservato che il contenuto di contaminanti le dimensioni del nauplio e la composizione in acidi grassi differiscono ampiamente influendo sulla idoneit del prodotto quale fonte di cibo Warp 1987 ASTM 1992 Le cisti provenienti dal Brasile o dalla Columbia si sono dimostrate idonee sia per la modesta contaminazione che per le d
175. tossicit acuta fino al compimento del quinto giorno di eta Il numero di femmine gravide da isolare pu essere conteggiato adot tando una stima prudenziale di un adulto ogni due neonati richiesti Al fine di accelerare il rilascio della prole pu essere vantaggioso mantenere nelle camere di schiusa una temperatura leggermente pi elevata rispetto a quella di allevamento preferendo valori di 26 27 C Dopo un massimo di 48 h di permanenza nella camera di schiusa le femmine vengono riportate alla vasca di coltura massi va Si possono citare altre due tecniche per ottenere i neonati necessari al saggio anche se offrono minori ga ranzie sull et degli organismi rispetto alle due preceden ti La prima descritta da NEITSEMA e NEFF 1980 o anche da Lussier et al 1988 consiste nell applicazione di una sorta di aspiratore per sifonamento ad un vasca di allevamento Il retino posto sulla presa di questo sifone ha maglie tali da escludere gli individui adulti che per tanto non vengono rimossi dalla vasca permettendo inve ce la raccolta dei soli stadi giovanili Questo sistema che talvolta indicato come mysid generator mette a dispo sizione giornalmente un certo numero di neonati raccol ti in una apposita camera esterna alla vasca di allevamen to Il secondo metodo per ottenere dei giovani esempla ri di M bahia consiste semplicemente nel prelevare con un retino un gruppo di organismi dalla vasca di allev
176. ulico ingegneristici ed ecologici nella definizione del deflusso minimo vitale il caso del torrente Gotra BA 2 95 ScoccianTI C Metodi di salvaguardia delle migrazioni di anfibi minacciate dal traffico stradale BA 2 3 96 TINARELLI R MARCHESI F Inserto Zone Umide BA 5 96 SiLIGARDI M CADONNA M Ciurri F Indagine sulla capacit demolitiva della sostanza organica del fiume Adige attraver so l uso di leafpack BA 1 96 Igiene ambientale RivoseccHI L Artropodi di interesse sanitario e protezione della natura in Italia BA 2 88 Pasini G ERCOLINI C PALMIERI F FISICHELLA S Moria ittica nel fiume Magra 1990 cause e concause BA 5 91 CELLI G BeLLINI R Impatto ambientale e sanitario di due insetticidi comunemente impiegati nella lotta contro le larve di zanzara temephos e Bacillus thuringiensis var israelen sis BA 3 4 92 Indice 1987 1996 Articoli VoLTERRA L La potabilizzazione delle acque eutrofiche BA 1 92 VENIER P Gli inquinanti genotossici in ambiente marino BA 3 4 94 Costi C Romani F Effetto della disinfezione su Aeromonas hydrophila in acque da destinarsi al consumo umano BA 2 94 Bopon M GAITER S Nuovi criteri di valutazione basati sulla componente biologica per la captazione di acque destinate al consumo umano BA 1 95 Tessari P CiurTI F GasPERINI M Indagine sulla dermatite del bagnante nel lago di Garda BA 2 95 ERCOLINI C FISICHELLA S SE
177. ura industriale Libr Ed Fiorentina 1977 BA 3 4 90 GEORGE Paice Storia della fame CLESAV 1984 BA 3 4 90 Fukuoka La rivoluzione del filo di paglia Libr Ed Fiorenti na 1977 BA 3 4 90 Nuovo corso di aggiornamento agro bionomico Assoc Suolo e Salute 1975 BA 3 4 90 Koepr et al Agricoltura biodinamica Antroposofica 1980 BA 3 4 90 Quaderni di biodinamica Antroposofica varie pubblicazio ni BA 3 4 90 PFEIFFER Riese Manuale di orticoltura biodinamica Libr Ed Fiorentina 1985 BA 3 4 90 Assoc BAVARESE TUTELA NATURA L orto giardino ecologico Red studio redazionale 1983 BA 3 4 90 TRINGALE La difesa delle colture ortive con prodotti non tossici La Casa Verde 1986 BA 3 4 90 Mooney I semi della discordia CLESAV 1985 BA 3 4 90 CNR Prospettive di controllo biologico degli insetti in agri coltura CNR 1980 BA 3 4 90 Franz KRIEG La lotta biologica Edagricole 1976 BA 3 4 90 Bircu Haynes Introduzione ai feromoni CLESAV 1984 BA 3 4 90 VALLI Metodologie di lotta biologica e integrata CLESAV 1978 BA 3 4 90 ViGGiANI Lotta biologica e integrata Liguori 1977 BA 3 4 90 Gli insetti utili in agricoltura Reg Em Romagna 1984 BA 3 4 90 VAN DE BoscH AESCHLIMANN La minaccia dei pesticidi Muz zio 1989 BA 3 4 90 WEIR SHAPIRO La congiura del veleno Dedalo 1982 BA 3 4 90 Agricoltura biologica in Europa La Malalingua 198
178. vidui di M bahia di et 5 giorni Fatta eccezione per questa parte della metodo logia di saggio tutti gli altri aspetti procedurali quali l aerazione il rinnovo delle soluzioni o l alimentazione sono da considerare invariati e si rimanda pertanto ai paragrafi precedenti Nel saggio senza diluizione 1 risultati delle quattro repliche non vengono cumulati e vengono utilizzati per determinare con metodi statistici se sono significativa mente diversi da quelli osservati nel controllo Se il campione saggiato tal quale causa una mor talita superiore al 50 degli organismi si pu eventual mente procedere alla stima della LC In questo caso il campione di acqua del recettore deve essere saggiato secondo la procedura descritta per il saggio con effluente cfr par 4 6 VALIDIT DEL SAGGIO Il risultato del saggio considerato accettabile se la sopravvivenza degli organismi di controllo 2 90 e se la concentrazione di ossigeno si mantenuta in tutti i tratta menti a livelli gt 60 del valore di saturazione Pur senza vincolare la validit del risultato si consi glia la conduzione periodica di saggi in condizioni stan dard con un tossico di riferimento quale ad esempio il bicromato di potassio o il pentaclorofenolo Questa prati ca dovrebbe consentire di evidenziare condizioni speri mentali o lotti di organismi per qualche motivo anomali In condizioni normali disponendo di una congrua serie di LC il
179. vostre opinioni e speria mo che il nostro pessimismo venga sconfessato dalla vostra operosita Biologia Ambientale n 6 1996 2 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Editoriale SAGGI DI TOSSICIT Metodi riprodotti dal Notiziario dei Metodi Analitici dell Istituto di Ricerca sulle Acque IRSA CNR suppl al Quaderno n 100 EDITORIALE IRSA Il Notiziario dei Metodi Analitici propone in questo quarto numero della nuova serie tre metodi biologici per la determinazione della tossicit acuta che utilizzano rispettivamente un batterio biolumine scente un crostaceo di acqua dolce e uno di acqua marina I metodi frutto dell attivit del Gruppo di La voro incaricato di predisporre metodi biologici per la tutela delle acque si aggiungono a quelli ufficiali gi pubblicati e che utilizzano come organismi test il salmonide Salmo gairdnerii attualmente denomi nato Onchorhynchus mykiss ed il crostaceo Daph nia magna I metodi proposti ampliano quindi in maniera significativa il ventaglio di possibilit di utilizzo di metodi per la valutazione della tossicit acuta e in particolare introducono un metodo per l analisi di effluenti o acque superficiali ad elevato contenuto salino Si tratta di metodi ampiamente utilizzati in diverse nazioni i metodi con crostacei in particola re sono da alcuni anni metodi ufficiali della norma tiva USA Per quanto riguarda invece il territorio nazion
180. zioni si calcola cosi I Tt I 0 H t 100 4 1 1 Calcolo diluizione di non effetto Il calcolo della diluizione di non effetto viene con dotto solamente nel caso di campioni di acque di scarico e comunque non sostitutivo del calcolo dell EC Il calco percentuale misurati a 30 minuti per ciascuna diluizione del campione Si considera diluizione di non effetto la piu elevata tra quelle saggiate che determina una inibizione luminosa inferiore al 20 Il valore reciproco della dilui zione di non effetto rappresenta il valore di G per ciascun campione esempio diluizione 1 4 G 4 4 1 2 Calcolo EC ed EC Per il calcolo delle EC ed EC occorre trasformare i valori di inibizione percentuale H in valori gamma I con la seguente equazione H t 100 H Normalmente vengono utilizzati per le successive elaborazioni soltanto i valori di H compresi tra 10 e 90 I valori I cos ottenuti vengono messi in relazione con le concentrazioni di campione analizzate c con la seguente equazione t log c blogI loga dove b rappresenta la pendenza della curva di tossicit e a Biologia Ambientale n 6 1996 IRSA CNR Metodi Analitici Saggi di tossicit Batteri bioluminescenti 7 l intercetta con l asse delle ordinate Con il metodo statistico dei minimi quadrati possi bile calcolare i valori di EC ed EC con i relativi limiti di confidenza che corrispondono a valor

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