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Manuale di sicurezza - Dipartimento di Biologia e Biotecnologie

1. Acido p Idrossibenzoico Irritante 1 2 4 estere etilico 8 Idrossichinolone Nocivo 12 3 Igromicina B Molto tossico 1 2 3 lodoacetamide Pericoloso se inalato 123 Alcol Isoamilico Pericoloso per inalazione e contatto Irritante 1 2 Alcol isopropilico soproparolo Esplosivo Irritante 1 2 Acido Jasmonico acido Irritante 1 2 4 10 2B 3 oxo 2 cis 2 pentil ciclopentan acetico 199 anuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Composto Rischio PREVENZIONE Magnesio cloruro soluzione Irritante 1 2 4 Acido DL Malico Irritante 1 2 4 Manganese solfato Nocivo 1 2 3 Materiale Fotografico Pericoloso per inalazione cute e occhi irritante allergenico 1 2 4 MES acido 2 N Morfolino Irritante 1 2 4 etansulfonico Metanolo alcol metilico Infiammabile 1 2 3 Tossico per nervo ottico e retina Metotrexate Ametopterina Molto tossico 1 2 3 Metil jasmonato acido Nocivo 1 2 3 ciclopentan acetico 3 oxo 2 pentmetil estere Mitomicina C Molto tossico 1 2 3 MOPS acido 4 Morfolino Irritante 1 2 4 propansulfonico MTT Tiazol blu 3 4 5 Nocivo 1 2 3 dimetiltiazol 241 2 5 difeniltetrazolio bromuro Nicotinamide vitamina PP Irritante 1 2 4 Acido Nicotinico vitamina B Irritante 1 2 4 Acido Nitrico 65 Corrosivo L2 gt 65 Ossidante NP40 un detergente 12 E o
2. CH H CH CH Metanolo Acido Dimetil solfato Acido Metil metilsolforico metilsolforico DNA Figura 8 Reazione di dimetilsolfato con DNA o acqua 2 Reazione con l ossigeno Sono possibili due tipi di reazioni con ossigeno O reazioni vio lente possono portare ad esplosioni ed incendi o reazioni lente come sono le reazioni di auto ossidazione Le reazioni esplosive sono piuttosto rare nei laboratori di biologia Di solito esse riguardano derivati dell acido perclorico HCIO CIO derivati dell acido azotidrico HN N e derivati del perossido d idrogeno H O O O R O OH R O O R come spiegato nel capitolo A 1 Tuttavia le reazioni di auto ossidazione il cui meccanismo di tipo radicalico viene trasferito un solo elettrone alla volta sono piuttosto frequenti e possono essere sorgente di esplosioni Cos i solventi eterei come letere dietilico letere letere diisopropilico iso etere 1 4 90 Rischio chimico diossano etere ciclico presente in alcuni liquidi scintillanti possono essere rischiosi se sono conservati all aria e alla luce possono perossidarsi e formare perossidi pi o meno complessi idroperossidi perossidi polimeri Questi prodotti molto instabili possono esplo dere quando si cerca di purificarli mediante distillazione il rischio di esplosione sorge specialmente alla fine della distillazione quando que sti derivati di perossidi instabili sono concentrati C Pv CH
3. 86 Rischio chimico Ad esempio il punto di accensione dell isopentano solvente usato in biologia come solvente liquido per crioscopia 49 C Ci lo rende una sostanza chimica altamente infiammmabile pi rischiosa dell etere etilico il quale punto di accensione 44 C e Temperatura di auto accensione Per una percentuale di gas aria nel limite di infiammabilit l ac censione pu essere provocata da una fiamma o una scintilla ma anche da un aumento di temperatura La temperatura di auto accensione corrisponde quindi alla tempe ratura alla quale una sostanza chimica diventa infiammabile senza al cuna sorgente di accensione Per esempio il disolfuro di carbonio CS un tempo usato per l estrazione dei lipidi diventa spontaneamente infiammabile quando scaldato a una temperatura superiore a 90 C mentre l etere etilico di venta spontaneamente infiammabile sopra 160 C S C S Disolfuro di carbonio f Alcuni suggerimenti per maneggiare e conservare le sostanze chimiche In un laboratorio dove si usano sostanze chimiche infiammabili i rischi di incendio devono essere presi continuamente in considerazio ne Inoltre alcuni semplici principi devono essere applicati Mai usare sostanze chimiche infiammabili vicino a una fiamma 0 ad una fonte di calore Le sostanze chimiche molto infiamma bili devono essere usate in piccole quantit e quando possibile sotto una cappa chimica ben ventilata Non c
4. Etere dub Diisopropil etere 1 4 Diossano Vetere diisopropilico un solvente facilmente perossidabile Esso prima si auto ossida in un diidroperossido abbastanza stabile poi si trasforma lentamente nei perossidi ciclici dell acetone dimero e trimero e in polimeri estremamente instabili Questi polimeri sono re sponsabili delle esplosioni osservate durante la manipolazione di lotti vecchi di questo solvente Figura 9 C HC H HC Z H H 0 H H a T A gt gt gt gt H CH H CH Q B H H 3 H HC CH H Etere Diidroperossido Dimero Trimero diisopropilico diisopropilico Polimeri esplosivi Figura 9 Auto ossidazione dell etere isopropilico in composti perossidici instabili Gli eteri perossidabili possono essere sostituiti in modo vantaggio so dal metilterbutil etere MBTE che molto meno sensibile all ossi geno HC Etere Metil Terbutilico MTBE 91 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica 3 Reazioni rischiose miscela di sostanze chimiche incompatibili Le sostanze chimiche sono incompatibili quando provocano reazio ni incontrollabili e violente se miscelate tra loro Come stato detto prima ci sono quattro tipi di reazioni che condu cono a miscele estremamente rischiose sostanze chimiche che reagiscono con l acqua potenti ossidanti potenti riducenti e monomeri facilmente polimerizzabili a Reazioni violente con l acqua Questo tipo d
5. Numerosi sono gli agenti biologici con i quali i ricercatori nel settore delle biotecnologie possono entrare in contatto i processi lavorativi in fatti impongono spesso l utilizzo o l esposizione a materiale organico con presenza di agenti infettivi o potenzialmente infetti virus che inclu dono ceppi oncogeni batteri parassiti funghi culture cellulari campio ni umani e biologici animali da laboratorio DNA ricombinante ecc La direttiva 2000 54 CE concerne la tutela dei lavoratori che mani polano microorganismi culture cellulari e parassiti umani capaci di causare infezioni effetti tossici e allergie includendo quelli impiegati nelle biotecnologie L articolo 14 prevede la sorveglianza sanitaria dei lavoratori esposti ad agenti senza fornire specifici esami medici L al legato IV specifica che il medico responsabile della sorveglianza sani taria occupazionale deve essere consapevole di tali condizioni di lavo ro e circostanze di esposizione e che la sorveglianza sanitaria deve comprendere la valutazione della salute dei lavoratori e se necessario il monitoraggio biologico con lo scopo di accertare effetti precoci e reversibili I rischi per la salute umana relativi all esposizione occupa zionale a microorganismi geneticamente modificati concernono tre aree principali immunopatologie specialmente allergie effetti tossici specialmente quelli relativi alla produzione di com plessi proteine specie specifiche
6. esposizione saltuaria a bassis Un incidente pud ture procedure di emergenza sime dosi generarsi dalla con chiare sistemi di estinzione pas Radiazioni ionizzanti esposi comitanza di alme siva corretto addestramento de zione saltuaria a bassissime dosi no due eventi indi gli operatori adeguate procedu Agenti biologici bassa o scono pendenti poco pro re e presenza di vie di fuga sciuta trasmissibilit per l uomo babili Agenti chimici assenza di Allergeni esposizione saltua reattivit con acqua e o con sol ria venti Identificazione e corretta ge stione di depositi di agenti biologici pericolosi e di com posti radiochimici Possibile noto qualche epi Presenza di apparecchiature con Agenti chimici cancerogeni sodio in cui si veri ficato un incidente Il verificarsi di un incidente suscita moderata sorpresa generazione di calore apparec chiature che necessitano di decontaminazione solventi usa ti e conservati in modo inadegua to sostanze infiammabili in con gelatori Agenti chimici presenza di cor rosivi irritanti reazioni di effer Vescenza con acqua generazio ne di calore reazione a solventi volatili possibilit di intossica zione teratogeni mutageni polie sposizione discontinua a livel li intorno al TLV TWA pos sibilit di disseminazione di polveri ed aereosol Radiazioni non ionizzanti esposizione abituale Radiaz
7. quaternario e sali fenolici d ammonio quaternario De Di cellulari pregiudicandone la permeabilit lipidi utilizzabile su superfici generalmente non tossico per i mammiferi ROIBOJOLOSI0I eoJeo Ip Lo3eJoqe rep ejeuosJed II Jed ezzeunors Ip ALNULW cel Calore umido sotto pressione autoclave St denatura proteine ed acidi nucleici attivo su batteri micobatteri funghi e virus migliore sistema sporicida strumenti e piccole attrez zature resistenti ad alte pres sioni 1 3 bar e ad alte tem perature 120 130 C distrugge i materiali termolabili inefficace contro organismi resistenti al vapore Calore secco stufa ad aria calda Di 100 C per 1 h St 160 C per 2 h 170 C per 1 h St denatura proteine ed acidi nucleici attivo su batteri micobatteri spore funghi e virus sterilizzazione di materiali impermeabili o danneggiabili dall umidit vetro stru menti affilati metallo distruttivo per materiali che non resistono alle alte temperature per lunghi periodi di tempo Luce ultravioletta St agisce sul DNA e crea dimeri di timidina poco costoso ampio spettro sterilizzazione di superfici acqua aria agisce in superficie agisce in uno spazio estre mamente limitato e richiedono una corretta manu tenzione con frequenti pulizie della lampada basta un sottile strato di polvere per vanificare il funzionamento
8. 1 0E 7 uCi cc Se questa concentrazione fosse inalata continuamente per oltre un anno il risultato TEDE potrebbe essere 50 mrem Limite di Superficie Controllata a seguito di decontaminazione 2 200 dpm 100 cm e Esame delle urine Urynalysis Byproduct License richiesto quan do si manipola una quantit maggiore o uguale a 100 mCi H INFORMAZIONI SULLA SICUREZZA RADIOLOGICA GENERALE e Volatilit relativa a STP Sostanziale e Le applicazioni sperimentali includono i dati precisi dell acqua 148 Rischio radiologico totale del corpo e la marcatura in vivo delle cellule proliferative mediante iniezione di composti marcati con trizio es timidina La marcatura con trizio anche utilizzata in una variet di studi metabolici Ossidazione del gas H in aria di solito lenta 149 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica CARBONIO 14 4C DATI FISICI Energia Beta 156 keV massima 49 keV media 100 abbon danza e Emivita Fisica 5730 anni Emivita Biologica 12 giorni e Emivita Effettiva 12 giorni Limite e Emivita Effettiva 40 giorni Non limite e Emissione Attivit Specifica 4460 mCi gram Emissione Massima Beta in Aria 24 00 cm Emissione Massima Beta in Acqua Tessuto 0 28 mm Emissione Massima in Plexiglas Lucite Plastica 0 25 mm Frazione di particelle beta di C trasmesse attraverso lo strato morto della pelle alla profondit di
9. 131 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica CONTAMINAZIONI ACCIDENTALI CON SOSTANZE CHIMICHE CANCEROGENE E PROCEDURE DI EMERGENZA Marcel Castagnaro In caso di versamento accidentale i primi obiettivi sono proteggere 1 lavoratori e isolare l area solo successivamente si procede alla decontaminazione dell area In caso di versamento devono essere pre se in considerazione due alternative 1 rovesciamento di un composto volatile 2 rovesciamento di un composto sotto forma di polvere In tutti i casi le persone che hanno provocato l incidente devono mante nere il proprio controllo Tutte le persone che lavorano con gli agenti cancerogeni devono ricevere un addestramento riguardo ai possibili incidenti Una persona spaventata pi soggetta ad incidenti di una persona che stata ben istruita su come affrontare le conseguenze di un incidente Nota la strategia descritta di seguito teorica e deve essere adattata ad ogni singolo caso Deve essere prevista durante la pianificazione di un esperimen to la corretta procedura di emergenza Versamento di composti volatili Nel caso di rovesciamento di composti volatili il rischio principale per il lavoratore respirare l atmosfera inquinata ed essere contamina to per penetrazione cutanea della sostanza In questi casi il lavoratore deve immediatamente lasciare l area inquinata togliendosi tutti gli abiti contaminati nell area adiacente
10. Le superfici esterne delle fiale cosi conservate devono essere disinfettate quando si rimuovono dal luogo di conservazione Indossare i dispositivi di protezione per gli occhi e per le mani quando si rimuovono le fiale dal luogo di conservazione e refri gerazione e Usare la cappa quando si lavora con agenti infettivi colture cel lulari o tessuti potenzialmente contaminati con agenti biologici e o cancerogeni e Avvisare immediatamente il responsabile del laboratorio e se guire le procedure di emergenza sorveglianza e trattamento medico previste dall Ente di appartenenza in caso di contami nazione ed esposizione presunta o manifesta dell operatore con materiale infetto e Applicare la regola del lavoro in coppia ovvero nessun indivi duo dovr lavorare da solo all interno del laboratorio quando si opera con agenti pericolosi 48 Rischio biologico Norme igieniche Indossare il camice o indumenti protettivi prima di entrare in laboratorio Le seguenti raccomandazioni possono essere prese in considera zione per la propria salvaguardia durante l impiego di agenti bio logici non mangiare bere fumare conservare cibo truccarsi portare anelli e bracciali o maneggiare lenti a contatto Indossare i guanti quando si lavora con materiale potenzialmen te patogeno o contaminato con sostanze tossiche mutagene o cancerogene Non indossare il camice o indumenti protettivi nella zona desti nata al cibo e al di fuori de
11. Ory D Mulligan R Gare F H Verma I M and Trono D In vivo gene delivery and stable transduction of nondiving cells by a lentiviral vector Science 272 263 7 1996 27 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica VALUTAZIONE DEL RISCHIO BIOLOGICO Paola Bet Mariangela Miele Bernardetta Ledda Dimitri Sossai Le procedure da seguire per una corretta valutazione del rischio per l impiego di agenti biologici sono definite dalla direttiva 2000 54 CE La Direttiva 98 81 CE che modifica la precedente 90 219 CEE regolamenta invece l impiego confinato dei Microrganismi Geneticamente Modificati MOGM Per impiego confinato si intende ciascuna attivit nella quale i microrganismi sono modificati geneticamente e nella quale tali MOGM sono messi in coltura conservati trasportati distrutti smaltiti o altri menti utilizzati e per la quale vengono usate specifiche misure di contenimento al fine di limitare il contatto degli stessi con la popola zione e con l ambiente La valutazione del rischio un processo complesso che richiede l identificazione di numerosi fattori Nel caso specifico di attivit che possono comportare un rischio di esposizione ad agenti biologici si deve determinare la natura del rischio il grado di esposizione e la dura ta dell esposizione in modo da poter valutare i rischi per la salute o la sicurezza dei lavoratori e determinare le misure da adottare I rischi connessi
12. essere molto grave causando attacchi gastrointestinali epatici renali e polmonari e pu portare al coma e successivamente al decesso Oltre alle classiche irritazioni delle mucose nasali e oculari sono stati osservati anche danni pi gravi a lungo termine come patologie croniche del sistema respiratorio bronchiti La formaldeide rico nosciuta altres come un potente allergene che pu portare a ipersensibilit cutanee eczema urticaria e respiratorie riniti asma seguite talvolta da un potente shock anafilattico Gli effetti sulla riproduzione in particolare le complicazioni duran te la gravidanza sono gi stati menzionati Sperimentalmente questo un composto genotossico e mutageno per diversi sistemi biologici cancerogeno sui ratti Nell epidemiologia umana i risultati delle ricerche sono molto vari con localizzazione dei 107 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica tumori assai diversa organi ematopoietici cervello colon laringe prostata pertanto la classificazione attuale di questa sostanza pro babile cancerogeno per l uomo gruppo 2A IARC Lione 1995 Un utilizzo pericoloso stato descritto in ospedale l aggiunta di acido cloridrico ad una soluzione acquosa di formaldeide allo scopo di incrementare il suo potere disinfettante essa porta alla formazione di bis clorometiletere una sostanza volatile cancerogena per l uomo clas sificat
13. provoca tumori alla pelle Radiazioni gamma St denatura il DNA le proteine e le pareti cellulari rapido ampio spettro strumenti e piccole attrez zature richiede attrezzature costose Decontaminazione distruzione della maggior parte dei microorganismi sempre integrata con sterilizzazione odisinfezione dei materiali venuti a contatto con i patogeni Disinfezione Sterilizzazione eliminazione della maggior parte o di tutti i microorganismi patogeni tranne le spore da oggetti inanimati L agente utilizzato detto disinfettante quando applicato su oggetti ed ambienti antisettico per tessuti viventi cute mucose e generalmente ha un suo specifico organismo bersaglio Di solito il processo per la disinfezione si utilizzano di sostanze chimiche o la pastorizzazione completa eliminazione o distruzione di tutte le forme di vita microbiche Ha un azione ad ampio spettro agendo su microorganismi patogeni e non spore e forme vegetative L agente utilizzato detto sterilizzante battericida germicida Si applica sia negli ospedali che nei laboratori di ricerca con processi chimici o fisici Le pi comuni applicazioni sono sterilizzazione con vapore autoclave calore secco stufa ad aria calda sterilizzazione con gas ossido di etilene ozono agenti chimici eao jou eoJeo Ip Lo3eJoqe rep ejeuosJed Jed ezzeunors Ip ejenugj col TabellaV Principali fonti di rischio biol
14. Italia vx Centro de Seguridad e Higiene en el Trabajo CSHT Consejera de Empleo y Desarrollo Tecnol gico Junta de Andalucia Cordoba Espa a v Istituto Superiore Prevenzione e Sicurezza del Lavoro ISPESL Roma Italia Unit de Pr vention du risque Chimique CNRS Gif sur Yvette France f Azienda Ospedaliera San Martino di Genova e Cliniche Universita rie Convenzionate Genova Italia Consorzio Interuniversitario per la Biologia Molecolare delle Pian te CIBMP Genova Italia O Azienda USL 3 Genovese Genova Italia INDICE pag PREFAZIONE al 9 VALUTAZIONE DEL RISCHIO 11 RISCHIO BIOLOGICO x 19 AGENTE BIOLOGICI 2 iE et 19 Bibliografia x sen eai ente ee redi ie n 26 VALUTAZIONE DEL RISCHIO BIOLOGICO 28 Bibliograf a iaia 35 PREVENZIONE DEL RISCHIO BIOLOGICO 37 Bibliograf a eiie aan 33 CONTAMINAZIONE ACCIDENTALE CON AGENTI BIOLOGICI ischia 54 BUDO QV GIG Cd 58 SPEDIZIONE DI MATERIALI BIOLOGICI DEPERIBILI E O POTENZIALMENTE INFETTI 59 Bibliografia i n E eie ERES 61 SPERIMENTAZIONE ANIMALE in 63 Bibliografia sse da RISCHIO CHIMICO Kriteriene a 73 SOSTANZE CHIMICHE NEI LABORATORI DI BIOTECNOPLOQGIA 2 ettet er Eee en or REPOS tdds Tf IMPIEGO DEI COMPOSTI GENOTOSSICI MUTAGENI B CANCEROGENI alia 116 Bibliografia eic rtr oti at e e e edendo 128 CONTAMINAZIONI ACCIDENTALI CON SOSTANZE CHIMI
15. Paola Tomao Introduzione La sorveglianza sanitaria dei lavoratori un termine generico che include procedure ed indagini per valutare la salute dei lavoratori al fine di scoprire ed identificare precocemente qualunque anormalit I risultati della sorveglianza devono essere usati per tutelare e promuo vere la salute di tutti 1 lavoratori e di altre persone nei luoghi di lavoro Le procedure di valutazione della salute possono includere ma non sono limitate a esami medici monitoraggio biologico esami radiologici questionari o dati sanitari La sorveglianza sanitaria dei lavoratori deve essere una componen te essenziale dei programmi mirati alla protezione dei lavoratori e tali programmi devono stabilire gli esami medici previsti dalla legge Un sistema completo di sorveglianza sanitaria dei lavoratori include valu tazioni individuali e collettive danni professionali protocolli e denun ce delle malattie denunce di casi sentinella perizie indagini ed esami Principi della sorveglianza sanitaria Obiettivi e organizzazione La sorveglianza sanitaria viene considerata come uno strumento fi nalizzato al mantenimento della salute del lavoratore e alla sua prote zione anche attraverso la valutazione dell esposizione e degli eventuali effetti biologici precoci La valutazione della salute del lavoratore una delle componenti principali di qualunque programma di prevenzione nel luogo di lavoro Gli esami medici sono i metodi
16. Toxic chemical and explosives facilities Ralph A Scott Jr Ed 1979 Castegnaro M Sansone E B Chemical carcinogens some guidelines for handling and disposal in the laboratory Spinger Verlag Berlin 1986 Castegnaro M Van Egmond H P Paulsch W E Michelon J Limitations in protection afforded by gloves in laboratory handling of aflatoxins J Assoc Off Anal Chem 65 1520 1523 1982 Charous B L Schuenemann P J Swanson M C Passive dispersion of latex aeroallergen in a healthcare facility Ann Allergy Asthma Immunol 85 285 290 2000 Colligan S A Horstman S W Permeation of cancer therapeutic drugs through glove materials under static and flexed conditions Applied Occupationnal and Environmental Hygiene 5 848 852 1990 Conf rence internationale du travail Recommandation 147 Recommandation concernant la pr vention et le contr le des risques professionnels caus s par les substances et agents canc rog nes 24 juin 1974 Connor T H et al Permeability of latex and polivinyl glove to carmustine American Journal of Hospital Pharmacy 41 676 679 1984 Connor T H Permeability of nitrile rubber latex polyurethane and neoprene gloves to 18 antineoplastic drugs American Journal of Health System Pharmacy 56 2450 2453 1999 De Groot H De Jong N W Duijster E Gerth Van Wijk R Vermeulen A Van Toorenenbergen A W Geursen L Van Joost T Prevalence of natural rubber latex allergy type
17. cs IST DH ManUaletdiisicurezza per il personale dei laboratoni di ricerca biotecnologica A cura di Dimitri Sossai Mariangela Miele Paola Bet Erga edizioni Manuali Tutti i diritti riservati ISBN 88 8163 280 2 Finito di stampare nel mese di agosto 2001 nello stabilimento litografico della Erga edizioni Via Biga 52 canc 16144 Genova Tel 010 83 28 441 Fax 010 83 28 799 www erga it edizioni erga it IST Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica A cura di Dimitri Sossai Mariangela Miele Paola Bet i rea P edizioni Questo volume stato realizzato con il contributo della Comunit Europea Direzio ne Generale Lavoro e Affari Sociali A cura di Dimitri Sossai Mariangela Miele Paola Bet Gli autori desiderano ringraziare per il prezioso contributo alla realizzazione di questo manuale Luisa Albinelli Maria Giuseppina Campi Michele Cilli Chiara Colagiacomo Milvia Formentera Jennifer Mc Dermott Cecilia Melani Romina Picollo Paolo Romano Autori e affiliazioni Paola Bet Marcel Castegnaro Francesca Cavalli Modesto Roman Delgado x Silvia Franchello Bernardetta Ledda Ubaldo Leoncini O Mariangela Miele 4 Rosa Montero Sim X Bruno Papaleo Andr Picot 4 Stefano Signorini v Dimitri Sossai se Paola Tomao Cinzia Lucia Ursini V Nicoletta Vonesch stituto Nazionale per la Ricerca sul Cancro IST Genova
18. e La sorveglianza sanitaria del personale e Le modalit di acquisto e di immagazzinamento di materiale ra dioattivo 139 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica e Le modalit di smaltimento dei rifiuti radioattivi Ogni Istituto deve adattare tale manuale in modo che fornisca le informazioni specifiche sulle stanze autorizzate per l impiego di mate riale radioattivo sulle aree autorizzate come deposito per i rifiuti radio attivi sulla lista dei composti e delle attivit autorizzate in ogni stanza Tutti i radioisotopi devono essere ordinati direttamente dall Ufficio Responsabile della Sicurezza Radiologica secondo la legislazione in vigore I singoli lavoratori sono anche responsabili della pulizia della loro area di lavoro della decontaminazione delle attrezzature e della vetreria e del deposito sicuro di rifiuti radioattivi in accordo con le normative nazionali Un apposito registro di carico e di scarico dovr essere rigorosa mente compilato e aggiornato quotidianamente dagli utilizzatori Quando si lavora con la radioattivit si deve indossare un camice da laboratorio guanti e un dosimetro fornito dall ente di controllo na zionale e rilasciato dall Esperto qualificato aziendale Occhiali protet tivi o visiere dovranno essere disponibili per le operazioni a rischio Ogni laboratorio autorizzato dovrebbe avere specifiche aree per l im piego dei radioisotopi Le massime
19. et al 1995 Ortiz et al 1995 Hunt et al 1999 Estlander et al 1996 Katelaris et al 1996 Liss et al 1997 Ylitalo et al 1997 Lai et al 1997 De Groot et al 1998 Vila et al 1999 Levy et al 1999 Charous et al 2000 Tarlo 2001 Tabella 1 Diffusione delle ammine aromatiche attraverso i guanti da Week amp Dean 1987 MOCA Bis metilene 2 cloroanilina AMMINE AROMATICHE CONCENTRAZIONE PRIMO VALORE DI CONCENTRAZIONE TEMPO DI DIFFUSIONE DOPO LA DIFFUSIONE U ML ORE Anilina 2 400 22 18 0 2 0 Anilina 11 000 8 1 75 1 0 Anilina Pura 67 0 50 0 25 MOCA 1 900 29 2 00 0 50 MOCA 9 800 37 1 5 0 5 Tabella 2 Guanti e N nitrosammine diffusione attraverso due paia di guanti separati da uno strato di talco TEMPI NITROSAMMINE ESAMINATE DI DIFFUSIONE MIN NDMA NDEA NDPA NDBA NMPA NPIR NPIP 2 0 1 n d n d n d n d n d n d 8 04 0 1 n d n d n d n d n d 15 23 0 4 n d n d n d 03 0 15 20 2 5 0 4 n d n d n d 0 4 0 2 30 4 1 0 7 n d n d n d 19 0 3 127 anuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica NDMA N nitrosodimetilammina NDEA N nitrosodietilammina NDPA N Nitrosodipropilammina NDBA N nitrosodibutilammina NPIP N nitrosopiperidina NPIR N nitosopirrolidina Bibliografia Barbeito M S Laboratory design and operation procedures for chemical carcinogen use ACS symposium series N 96
20. il sesso lo stato di salute la gravidanza e le vaccinazioni eseguite Per i microrganismi non ancora classificati se noto almeno il genere di appartenenza vengono analizzati i gruppi di rischio cui appartengono altre specie del genere Qualora non fosse noto il gene re di appartenenza pu venire valutata la possibilit in base alle ca ratteristiche dell operazione di incontrare specie patogene nei substrati utilizzati e quindi analizzare i gruppi di rischio cui appartengono queste specie La valutazione del rischio di MOGM deve inoltre tener conto del la pericolosit dell organismo ricevente ospite dell organismo do natore dell inserto e del costrutto finale Il rischio dell attivit relativo alla tipologia delle manipolazio ni svolte col microrganismo Gli operatori manipolano diversi tipi di campioni fluidi biologici urine sangue siero tessuti che possono essere contaminati con agenti biologici colture cellulari colture li quide o in agar di batteri virus Il livello di rischio a cui gli operatori sono esposti dipende dalla natura del campione Campioni di sangue siero o tessuti probabilmente contengono una concentrazione pi bassa di agente infettivo e di conseguenza rappresentano un minor rischio Le colture purificate e concentrate di cellule batteriche o virus in so luzione sono a pi alto rischio In laboratorio la contaminazione pu avvenire tramite aerosol ingestione esposizione delle muco
21. infezioni legate a microorganismi wild type oggetto di manipo lazioni 173 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Valutazione del rischio Se da una parte la percezione del rischio di tipo biologico gene ralmente molto elevata tra i lavoratori in particolare in seguito al l emergere delle patologie da HIV dall altra esiste frequentemente una scarsa sensibilit alle misure di prevenzione per tale rischio soprattut to se confrontate con quanto accade per gli altri tradizionali rischi di origine professionale quali quelli di tipo chimico e fisico e con i fattori di rischio delle pi comuni malattie cronico degenerative Per comprendere l importanza della valutazione del rischio e dell at tuazione di misure di controllo e di prevenzione del rischio biologico necessario fare alcune osservazioni sulle caratteristiche ed i meccanismi delle malattie infettive L instaurarsi di un processo infettivo si verifica quando la consistenza numerica dell agente infettante sia tale da interes sare direttamente o attraverso l elaborazione di sostanze tossiche un numero sufficientemente elevato di cellule o comunque cellule dotate di peculiari o insostituibili funzioni in modo da indurre la malattia La consistenza numerica dell agente infettante necessaria a tradurre un infezione in malattia conclamata espressa come carica infettante quantit minima di agente biologico che penetra nell organismo
22. vari motivi In primo luogo l industria biotecnologica giovane ri spetto a quelle pi tradizionali ad esempio l industria meccanica e chimica pertanto anche la comprensione dei problemi della sicurezza basata su meno esperienza e ci impone cautela In secondo luogo i rischi sono qualitativamente diversi da quelli degli ambienti indu striali pi tradizionali Dopo 25 anni di ingegneria genetica possiamo dire che per fortuna i paventati incidenti o bombe biologiche non sono esplose ma innegabile che operazioni che modificano il genoma di qualsiasi organismo ispirano sentimenti di preoccupazione che non possiamo ignorare Si potrebbe dire che il bioterrorismo sta alla microbiologia come una bomba termonucleare sta alla fisica ma for se ancor pi che nel caso della fisica il pubblico preoccupato di eventuali incidenti Passando ai laboratori di ricerca esiste poi un terzo motivo Teori camente sono proprio i ricercatori che potrebbero generare nuovi pro blemi e allora quis custodiet custodes E doppiamente importante che i ricercatori si dimostrino attivamente solleciti a proteggere il pub Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica blico e se stessi nel corso della sperimentazione La prima esplicita espressione delle preoccupazioni in merito data alla pubblicazione nel 1976 negli Stati Uniti dopo la famosa confe renza di Asilomar del primo documento di biosicurezza fina
23. 0 007 cm 1 DATI RADIOLOGICI Organo Critico Tessuto adiposo Vie di penetrazione Ingestione Inalazione Contatto cutaneo Esposizione esterna dose da particelle beta deboli di C non genera un processo radiologico Esposizione interna e contaminazione processi radiologici pri mari Committed Dose Equivalent CDE 2 08 mrem uCi ingestione Tessuto adiposo 2 07mrem uCi puntura 2 09 mrem uCi inalazione Committed Effective Dose Equivalent CEDE 1 54 mrem uCi ingestione Limite Annuale sull Immissione ALI 2 mCi ingestione di un composto organico marcato 2000 mCi inalazione monossido di carbonio marcato 200 mCi inalazione di biossido di carbonio marcato 1 0 ALI 2 mCi ingestione del composto organico C 14 2 5 000 mrem CEDE Percentuale di Dose di Contaminazione della pelle 1090 1180 150 Rischio radiologico mrem per 1 0 uCi cn 7 mg cm profondit Percentuale di Dose delle Cellule Basali della Pelle Contamina ta 1 0 uCi cm 1400 mrad ora Immersione nell Aria Contaminata da C 2 183E7 mrem anno per uCi cm alla profondit di 70 um di tessuto e 4 07E6 mrem anno per uCi cm valore medio sopra il derma SCHERMI PROTETTIVI Nessuna richiesta 0 1 mm plexiglas o vetro ATTREZZATURA DI INDAGINE Un contatore di indagine G M con sportello sottile pu indivi duare C ma la sonda del contatore deve essere di circa 1 cm I contatori di indagine G M hanno una bassa efficie
24. 1978 Segal A Loewwengart G Laboratory of organic chemistry and carcinogenesis Institute of environmental medecine New York N Y 10016 Development of personnel monitoring device for the detection of direct acting alkylating agents Slevin M L Ang L M Johnston A et al Permeability of latex and polyvinyl gloves used in handling cytotoxic drugs Cancer Chemotherapy and Pharmacology 12 151 153 1984 Stoikes M E Carlson J D Farris FF et al Permeability of latex and polyvinyl gloves to fluorouracil and methotrexate American Journal of Hospital Pharmacy 44 1341 1346 1987 Soci t Fran aise de Toxicologie G n tique D Marzin ed Training module No 2 WHO publication WHO PCS 98 9 1998 Soci t Francaise de Toxicologie G n tique Manipulation des produits mutag nes et canc rog nes au laboratoire D Marzin diteur Edition INSERM s rie Pr vention en laboratoires de recherche 1998 130 Rischio chimico Swanson M C Bubak M E Hunt L W Yunginger J W Warner M A Reed C E Quantification of occupational latex aeroallergens in a medical center J Allergy Clin Immunol 94 445 451 1994 Tarlo S M Natural rubber latex allergy and asthma Curr Opin Pulm Med 7 27 31 2001 Tarlo S M Sussman G Contala A Swanson M C Control of airborne latex by use of powder free latex gloves J Allergy Clin Immunol 93 985 989 1994 Thomas P H Fenton May V Protection afforded by v
25. 3 TIBA TRIS Tris idrossimetil Irritante 1 2 4 amminometano 2 Ammino 2 idrossil metil 1 3 propan diolo e TRIS HCI Urea Nocivo per inalazione contatto cutaneo e ingestione 1 2 3 Irritante per occhi sistema respiratorio e pelle Non respirare la polvere Xilene Solvente pericoloso infiammabile e tossico anche con 1 2 4 Mantenere per quanto possibile in assenza di agenti ossidanti in un area ventilata Zinco solfato Irritante Usare sotto cappa chimica Indossare guanti Indossare mascherina Indossare occhiali o visiera DSUIINH 202 1 2 4 Precauzioni per l uso di agenti biologici e chimici Bibliografia David J C l ments de s curit en biologie mol culaire Flammarion M dicine Sciences 1997 Sambrook J Fritsch E F Maniatis T Molecular cloning A laboratory manual 2 edition 1989 203 ALLEGATOI Classificazione degli agenti biologici Direttiva 2000 54 CE allegato IIT Gli agenti biologici che non sono stati classificati nei gruppi 2 3 e 4 dell elenco non sono implicitamente inseriti nel gruppo 1 Quando un ceppo attenuato o ha perso geni notoriamente virulenti il contenimento richiesto dalla classificazione del ceppo parentale non deve necessariamente essere applicato salvo valutazione appro priata del rischio potenziale da esso rappresentato sul luogo di lavoro Gli Stati Membri provvedono a che tutti i virus che sono gi stati iso la
26. Anche per la visita dermatologica potr risultare utile l indagine fotografica e un esame alla luce di Wood 187 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Bibliografia Albertini R J Anderson D Douglas G R et al IPCS guidelines for the monitoring of genotoxic effects of carcinogens in humans Mutations Research 463 111 172 2000 Alessio L Porru S Criteri e metodi di controllo periodico dei lavoratori esposti a rischio biologico 62 Cong Naz Soc It Med Lav Ig Ind Genova 29 settembre 2 ottobre 1999 Alessio L Apostoli P Crippa M Esposizioni multiple 56 Cong Naz Soc It Med Lav Ig Ind Venezia 20 23 ottobre 1993 Cordier S Mousel M L Le Goaster C et al Cancer risk among workers in biomedical research Scand J Work Environ Health 21 450 9 1995 Franco G Alessio L Saia B La sorveglianza sanitaria Scopo strumenti effica cia prospettive G Ital Med Lav Erg 21 2 108 113 1999 Mosconi G Barbieri G Cantoni S et al La sorveglianza sanitaria dalla presun zione del rischio alla valutazione del rischio G Ital Med Lav Erg 22 2 156 161 2000 Rachet B Partanen T Kauppinen T Sasco A J Cancer Risk in Laboratory Workers An Emphasis on Biological Research American journal of industrial medicine 2000 38 651 665 2000 Pira E Piolatto P G Scansetti G Criteri e metodi per il controllo periodico dei lavoratori espo
27. Encefalite B giapponese V Foresta di Kyasanur Louping ill Omsk a Powassan Rocio Encefalite verno estiva russa a Encefalite di St Louis Virus Wesselsbron Virus della Valle del Nilo Febbre gialla Altri flavivirus noti per essere patogeni Hepadnaviridae Virus dell epatite B 3 FF VD Virus dell epatite D Delta b x VID Herpesviridae Cytomegalovirus Virus dell Epstein Barr Herpesvirus simiae B virus Herpes simplex virus tipi 1 e 2 Herpesvirus varicella zoster Virus linfotropo B dell uomo HBLV HHV6 Virus herpes dell uomo tipo 7 2 Virus herpes dell uomo tipo 8 2 D Orthomyxoviridae Virus influenza tipi A Be C 2 V c Orthomyxoviridae trasmesse dalle zecche Dhori amp Thogoto 2 Papovaviridae Virus BK e JC 2 D d Papillomavirus dell uomo D d Paramyxoviridae Virus del morbillo Virus degli orecchioni Virus della malattia di Newcastle Virus parainfluenzale tipi 1 4 Virus respiratorio sinciziale V 9 Gr N WWW WWW WW LI LI R2 b2 C29 P2 WN 99 N N B2 b2 b2 b2 WY 212 Allegato I Agente biologico Parvoviridae Parvovirus dell uomo B 19 Picornaviridae Virus della congiuntivite emorragica AHC Virus Coxsackie Virus Echo Virus dell epatitis A enterovirus dell uomo tipo 72 Virus della poliomelite Rhinovirus Poxviridae Buffalopox virus e Cowpox virus Elephantpox virus f Virus del nodulo dei mungitori Molluscum contagiosum virus Monkey
28. Engineering Dream or Nightmare The Brave New World of Bad Science and Big Business Gateway Books Bath 2nd ed Gateway Gill amp Macmillan Dublin 1998 1999 Ho M W Traavik T Olsvik R Tappeser B Howard V von Weizsacker C and McGavin G Gene Technology and Gene Ecology of Infectious Diseases Microbial Ecology in Health and Disease 10 33 59 1998b Hoffman R M The hair follicle as a gene therapy target Nature Biotechnology 18 20 1 2000 Khavar P A Cutaneous gene therapy Advances in Clinal Research 15 27 35 1997 Kunik T Tzfira T Kapulnik Y Gafni Y Dingwall C Citowsky V Genetic transformation of HeLa cells by Agrobacterium Proc Natl Acad Sci USA 98 1871 1876 2001 Lorenz M G Wackernagel W Bacterial gene transfer by natural genetic transformation in the environment Microbiol Rev 58 563 602 1994 Mercer D K Scott K P Bruce Johnson W A Glover L A Flint H J Fate of free DNA and transformation of the oral bacterium Streptococcus gordonii DL1 by plasmid DNA in human saliva Applied and Environmental Microbiology 65 6 10 1999 Noisakran S Campbel I L Carr D J Ecotopic expression of DNA encoding 35 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica IFN alpha 1 in the cornea protects mice from herpes simplex virustype 1 induced encephalitis J Immunol 162 4184 90 1999 Schubbert R Lettmann C
29. L instabilit di una sostanza chimica o di una miscela pu condur re a due generi di incidenti esplosione incendio Esplosione ed incendio sono i rischi maggiori spesso molto di struttivi per le strutture e per gli operatori coinvolti in questi incidenti Il rischio di esplosione dipende da tre parametri stabilit dei composti e reattivit e dominio di esplosivit che situato tra il limite inferiore di esplosivit Lower Explosivity Limit LEL e il limite superiore di esplosivit Upper Explosivity Limit UEL LEL e UEL sono riportati nelle tabelle successive In chimica le fonti di esplosione sono molto numerose In un labo ratorio di biologia esse sono limitate all uso imprudente di prodotti o miscele instabili o ad operazioni pericolose come la brutale polimerizzazione di monomeri usati nelle inclusioni e nei gel Alcune sostanze chimiche possono reagire tra di loro il caso di alcuni monomeri organici la cui polimerizzazione pu essere violenta Pertanto meglio non lavorare su quantit elevate di sostanze chimi che come l acrilamide usata per fare gel di poliacrilamide gli acrilati o metacrilati gli epossidi che sono usati per preparare delle resine RE R HC P kk Acrilamide Acrilati Metacrilati Epossidi 81 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Alcuni monomeri cosi come l acrilamide o lo stirene polimerizzano con una violenta reazione qua
30. Legarsi i capelli se sono lunghi e Non conservare cibi o bevande nel frigo destinato alla conserva zione delle sostanze chimiche E vietato mangiare bere specialmente nella vetreria di laborato rio o fumare al lavoro Se possibile deve essere riservata una stanza per le pause e una zona per 1 fumatori Una pulitura giornaliera dei pavimenti evita l accumularsi di spor cizia carica di pericoli chimici B MISURE INDIVIDUALI Per lavorare in laboratorio con la massima sicurezza devono esse re rispettate diverse misure per la protezione individuale l Protezione degli occhi Spruzzi ed esplosioni sono spesso inaspettate Fra gli incidenti di laboratorio quelli agli occhi sono i pi frequenti e seri In laboratorio 113 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica bisogna indossare occhiali protettivi In caso di manipolazione ad alto rischio necessario lavorare sotto una cappa chimica ventilata delimi tata da un pannello frontale scorrevole di policarbonato per la prote zione dell operatore 2 Protezione delle mani I prodotti chimici corrosivi acidi e basi forti potenti agenti ossi danti e i composti che facilmente penetrano attraverso la pelle deri vati dei nitrati ammine aromatiche devono essere maneggiati con i guanti corrispondenti al tipo di sostanza chimica utilizzata guanti di cotone lattice vinile fluorocarbonato La scelta dei guanti dipende dal tipo di sost
31. NaN reagisce con gli acidi formando l acido azotidrico HN che un gas pericoloso quanto l acido cianidrico Aggiungendo degli acidi anche deboli come l acido citrico dal limone ad una soluzione di ipoclorito di sodio si libera cloro molecolare CL Questo fenomeno pu avere luogo quando si mescolano detersi vi acidi alla candeggina ipoclorito di sodio Il cloro un gas molto corrosivo che pu rapidamente divenire mortale in uno spazio confina to toilettes figura 19 104 Rischio chimico 2Na0Cl 2H P gt CI 2Na0H Figura 19 Formazione di cloro a partire da ipoclorito di sodio in ambiente acido Nei laboratori di biologia la manipolazione di alcune sostanze a tossicit acuta come le tossine tossina botulinica micotossina alcaloidi stricnina brucina molecole farmacologicamente attive digitotossina deve avvenire con estrema attenzione Le tossine classificate come veleni ed etichettate con l icona del teschio devono essere conservate in un armadio chiuso a chiave b Tossicit a medio termine Nelle sperimentazioni su animali la tossicit a medio termine chia mata tossicit subacuta in un periodo inferiore ai tre mesi pu dare informazioni sugli organi bersaglio che sono di preferenza coinvolti Il tetracloruro di carbonio CCI un solvente utilizzato per estrarre i lipidi Ora vietato a causa della sua azione distruttiva sullo strato di ozono e per i suoi effett
32. Providencia alcalifaciens Providencia retigeri Providencia spp Pseudomonas aeruginosa Rhodococcus equi Rickettsia akari Rickettsia canada Rickettsia conorii Rickettsia montana Rickettsia typhi Rickettsia mooseri Rickettsia prowazekii Rickettsia rickettsii Rickettsia tsutsugamushi Rickettsia spp Salmonella arizonae Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi A B C Salmonella typhi Salmonella altre variet serologiche Serpulina spp Shigella boydii Shigella dysenteriae tipo 1 Shigella dysenteriae diverso dal tipo 1 Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Streptobacillus moniliformis Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Strepfococcus suis Streptococcus spp Treponema carateum Treponema pallidum 209 Classificazione NVNNNNNNNNNNWNNNWNNNYNNNWWWWWWWWNNNN qj b2 b2 b2 WV 7 Cr p Cr e Rilievi Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Agente biologico Treponema pertenue Treponema spp Vibrio cholerae incluso El Tor Vibrio parahaemolyticus Vibrio spp Yersinia enterocolitica Yersinia pestis Yersinia pseudotuberculosis Yersinia spp VIRUS Agente biologico Classificazione N NINWNNINNN Classificazione Rilievi Rilievi Adenoviridae Arenaviridae LCM virus complex Arenavirus del Vecchio mondo Virus Lassa Virus della coriomeningite linfocitaria ceppi ne
33. Stockage des produits chimiques INRS ND 1313 103 81 Travaux dans les laboratoires de chimie 1 Donn es de bases relatives aux travaux dans les laboratoires de chimie INRS ND 1320 103 81 Affiches consignes avis et pancartes r glementaires INRS ND 1543 120 85 Pr vention des cancers d origine profesionnelle Circulaire du 14 mai 1985 J O du 6 juin 1985 Katelaris C H Widmer R P Lazarus R M Prevalence of latex allergy in a dental school Med J Aust 164 711 714 1996 Lai C C Yan D C Yu J Chou C C Chiang B L Hsieh K H Latex allergy in hospital employees J Formos Med Assoc 96 266 271 1997 Liss G M Sussman G L Deal K Brown S Cividino M Siu S Beezhold D H Smith G Swanson M C Yunginger J Douglas A Holness D L Lebert P Keith P Wasserman S Turjanmaa K Latex allergy epidemiological study of 1351 hospital workers Occup Environ Med 54 335 342 1997 Laidlow J Connors T H Theiss J C Anderson R W Matney T S Permeability of latex and polyvinyl glove to 20 antineoplastic agents American Journal of Hospital Pharmacy 41 2613 2623 1984 Levy D Allouache S Chabane M H Leynadier F Burney P Powder free protein poor natural rubber latex gloves and latex sensitization JAMA 281 988 1999 Moneret Vautrin D A Debra J C Kohler C STringini R Kanny G Guillaumot A Buthmann D Occupational rhinitis and asthma to latex Rhinology 32 198 202 1994 Mo
34. a basse temperature Indumenti protettivi Gli indumenti protettivi proteggono dalla contaminazione gli abiti da lavoro e devono essere indossati quando si svolgono attivit con agenti infettivi sangue o altri liquidi organici o materiali biologici Devono essere sempre indossati prima di accedere ai laboratori e ripo sti prima di uscire Essi devono avere le seguenti caratteristiche essere sufficientemente aerati avere l apertura dietro e i polsini elastici per garantire una prote zione adeguata essere in cotone per poter essere sterilizzabili effettuare un cambio giornaliero quando si opera con microrganismi particolarmente pericolosi e utilizzare tute monouso testate al X174 copriscarpe cuffia mascherina e occhiali quando si compiono operazioni in labora tori con livello di contenimento 3 DPI del viso degli occhi o delle vie respiratorie I DPI del viso degli occhi o delle vie respiratorie devono Limitare il meno possibile il campo visivo e la vista dell utiliz zatore e sistemi oculari di queste categorie di DPI devono avere un gra do di neutralit ottica compatibile con la natura delle attivit pi o meno minuziose e o prolungate dell utilizzatore Se necessa rio devono essere trattati o dotati di dispositivi che consentano di evitare la formazione di vapore Si devono utilizzare occhiali con protezioni laterali o visiera 52 Rischio biologico facciale di sicurezza in tutte le operazioni c
35. accettabili per maneggiare i 18 farmaci considerati entro 30 minuti tempo massimo oltre il quale necessario cambiarsi i guanti Questi studi hanno dimostrato che tutti i composti inclusi i cancerogeni possono diffondere attraverso i guanti quando sono dis solti in un solvente che in grado di reagire con il materiale dei guanti In pi diverse sostanze allo stato liquido possono diffondere attraver so i guanti Quindi necessario essere molto prudenti quando si ma neggiano questi composti e soprattutto cambiarsi immediatamente i guanti non appena si verifichi una contaminazione Gi nel 1987 Turjanmaa aveva riferito di gravi casi di reazioni al lergiche ai guanti in lattice da parte del personale sanitario in Finlan 126 dia Questa notizia fu la prima di una lunga serie riguardante diverse professioni mediche ricercatori medici infermieri tecnici di labora torio ma anche pazienti negli Stati Uniti in Canada Francia Belgio Spagna Olanda Israele Taiwan Le manifestazioni cliniche compren devano orticaria dermatiti shock anafilattico problemi respiratori come asma riniti congiuntiviti La prevenzione dovrebbe comprendere l uso di sottoguanti in cotone o vinile desensibilizzazione l uso di guanti privi di talco e per alcuni il cambio di lavoro Hudgins et al 1993 Salkie 1993 Yassin et al 1994 Tarlo et al 1994 Swanson et al 1994 Moneret Vautrin et al 1994 Rustmeyer et al 1994 Vandenplas
36. al deposito deve essere limita to alle persone autorizzate e adeguatamente formate per lavorare con questi composti L area dovr essere classificata come A rea control lata e dovr essere contrassegnata da uno specifico simbolo vicino alla scritta Pericolo sostanze cancerogene Il responsabile dell area o del deposito dovr consegnare la chiave solo alle persone autorizzate e dovr accertarsi che venga adeguata mente compilato il registro di carico scarico Nel caso in cui l istituto sia provvisto di un sistema di accesso a codice a barre alle varie aree dell edificio l accesso al magazzino e all area di pesata di questi composti dovr dipendere da tale sistema consentendo quindi l apertura della porta solo al personale autorizzato Comunque un simbolo speciale fuori dal laboratorio dovr segnalare 117 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica il possibile pericolo al personale ed alle persone di passaggio I composti cancerogeni mutageni genotossici e pi in generale tut ti 1 tossici allo stato gassoso dovranno essere utilizzati in laboratori appositamente attrezzati Dopo averle prese in consegna e registrate queste sostanze do vranno essere conservate nelle confezioni originali in locali speciali adeguatamente ventilati dotati di un sistema di ventilazione forzata che permetta l aspirazione dei gas la cui efficienza sia stata testata e certificata Tutti gli apparati elettric
37. alla manipolazione di agenti biologici sono gene ralmente associati ad un possibile contatto tra l operatore o la comuni t in generale ed il microrganismo Pertanto si devono prendere in considerazione i seguenti parametri e il rischio proprio del microrganismo il rischio dell attivit Per il rischio proprio del microrganismo si deve in primo luogo prendere in considerazione la classificazione degli agenti biologici ri portata in Allegato I e quindi determinarne la pericolosit Tale perico losit influenzata da molteplici fattori tra cui e Il potere patogeno cio la capacit di un agente di causare ma 28 Rischio biologico lattie che varia a seconda del sottotipo ceppo o resistenza del l agente biologico Ad esempio il virus Ebola considerato di massima pericolosit ed quindi collocato in gruppo 4 Il cep po pericoloso per Ebola Zaire mentre Ebola Reston sembra non causare malattia nell uomo Escherichia Coli un norma le saprofita della flora intestinale per il ceppo 0157H7 mor tale per l uomo e La virulenza che rappresenta il grado di patogenicit La viru lenza dipende dall infettivit e dalla gravit della malattia pro vocata dall agente biologico ed influenzata dalla modalit di trasmissione dell infezione Ad esempio le spore del bacillo antrace quando sono inalate possono causare una polmonite fatale ma se introdotte attraverso la pelle causano una lesione cu
38. caso per caso i problemi posti tenendo con to che si hanno a disposizione una serie di strumenti da considerare parte integrante della sorveglianza sanitaria a b Sorveglianza delle esposizioni accidentali dei lavoratori Tale azione comporta la valutazione dell incidenza ed il follow up degli incidenti a rischio biologico Con apposita inchiesta epidemiologica possibile infatti registrare i dati identificativi del l infortunato le modalit di accadimento puntura taglio contatto con cute sana o lesa o con mucose Informazioni derivanti dalla sorveglianza sanitaria dei lavoratori Costituiscono il cardine delle attivit preventive In questa fase pu essere necessario effettuare accertamenti approfonditi ed ad ampio spettro nel caso sia la visita di assunzione o venga richiesta una idoneit lavorativa ad una mansione che comporti esposizione a molteplici agenti biologici Questa situazione riscontrabile ad esempio nelle attivit sanitarie In altre situazioni laddove il ri schio biologico circoscritto e ben identificabile gli accertamenti potranno essere pi mirati 176 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori c Anamnesi Gli accertamenti medici in tale occasione cominciano evidentemente con l anamnesi mirata che integra quella familiare fisiologica e patologica gi raccolta nell ambito della cartella sanitaria gene rale del lavoratore A nostro parere essa deve essere condotta attraverso l ausilio
39. con risposta attiva del sistema immunitario dell ospite Solo dopo che l infezione riesce ad interessare un certo numero di cellule o determinati organi vitali si ha la comparsa della sintomatologia clinica e l inizio della malattia superamento del periodo di incubazione Le vie di trasmissione degli agenti infettivi che rappresentano un aumentato rischio negli operatori sanitari sono trasmissione per contatto trasmissione per via aerea droplet nuclei trasmissione per contatto mediante particelle droplet e trasmissione per via parenterale trasmissione oro fecale La valutazione dei rischi costituisce quindi la necessaria premessa alla sorveglianza sanitaria e ne rappresenta uno dei criteri fondamenta li La valutazione del rischio biologico peraltro presenta aspetti pecu liari rispetto a quella relativa a fattori di rischio chimico e fisico i qua li al contrario dei biologici sono misurabili Problematiche di sorveglianza sanitaria Le considerazioni sopraesposte inducono a predisporre un program ma di sorveglianza sanitaria che tenga conto di Caratteristiche di pericolosit intrinseca dell agente biologico molto variabili in relazione a modalit di trasmissione infettivit patogenicit trasmissibilit neutralizzabilit e Oggettiva difficolt nel misurare l esposizione ad agenti biolo gici Infatti la determinazione quantitativa e qualitativa delle spe cie batteriche virali o fungine aerodisp
40. contro i pericoli derivanti dalle radiazioni ionizzanti Direttiva del Consiglio 4 466 EURATOM che stabilisce le misure fonda mentali relative alla protezione radiologica delle persone sottoposte ad esami e a trattamenti medici Direttiva del Consiglio 4 467 EURATOM che modifica la direttiva 80 836 EURATOM Direttiva del Consiglio 89 618 EURATOM concernente l informazione della popolazione sui provvedimenti di protezione sanitaria applicabili e sul com portamento da adottare in caso di emergenza radioattiva Direttiva del Consiglio 90 641 EURATOM concernente la protezione ope rativa dei lavoratori esterni esposti al rischio di radiazioni ionizzanti nel corso del loro intervento in zona controllata Direttiva del Consiglio 92 3 EURATOM relativa alla sorveglianza ed al controllo delle spedizioni di residui radioattivi tra Stati membri e di quelle verso la Comunit e fuori da essa TRASPORTO Direttiva del Consiglio 92 118 C EE concernente condizioni sanitarie per gli scambi e le importazioni dei patogeni e dei prodotti non soggetti a normative comunitarie specifiche Direttiva del consiglio 93 75 CEE relativa alle condizioni minime necessa rie per le navi dirette a porti marittimi della Comunit o che ne escono e che trasportano merci pericolose o inquinanti 223 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Direttiva del Consiglio 94 55 C EE concernente il ravvicinamento delle legi slazioni degl
41. controllare le gabbie senza entrare nello stabulario Avere nel magazzino porte di dimensione adatta per permettere il passaggio dei mezzi di trasporto a chiusura automatica in caso di allarme antincendio nelle aree di maggior traffico sono da preferirsi larghe porte automatiche 1 80 m ad es in aree per il lavaggio delle gabbie aree dedicate agli animali in arrivo ed in partenza 68 Sperimentazione animale Avere corridoi larghi almeno 2 10 m liberi da oggetti e o rin ghiere protettive con bordi in acciaio o altro materiale resisten te Essere dotati di ascensori ad utilizzo esclusivo dei laboratori e sufficientemente spaziosi da poter contenere 3 5 tipi differenti di gabbie possedere possibilmente ascensori diversi per le gab bie sporche per quelle pulite e per i rifornimenti Essere dotati di una o pi prese della corrente elettrica con un potenza minima di 200 W in ogni stanza o cella le zone di ser vizio dovrebbero essere dotate di un quadro elettrico generale a cui collegare tutte le apparecchiature e dovrebbe essere presente un gruppo elettrogeno capace di attivarsi automaticamente in caso di un eventuale interruzione dell erogazione elettrica dalla rete principale Possedere prese e tubi fluorescenti sigillati o situati ad almeno 10 cm dal soffitto in modo da poterli pulire necessario instal lare un sistema di illuminazione automatica in modo da regolare i ritmi di luce giornalieri in ogni stanza
42. da evitare inutili doppioni di tali tossici nello stesso istituto Ogni com posto verr identificato da un numero in modo da facilitarne il ritrova mento che dovr essere registrato su un apposito registro contenente almeno le seguenti informazioni e Nome comune del prodotto Origine commerciale 116 Rischio chimico Data di arrivo Quantit in entrata Nominativo di chi ha ordinato il composto Quantit prelevata quando e da chi Numero assegnato al composto e la sua collocazione nel magaz zino In pi dovranno essere conservate le schede prodotto con le prin cipali caratteristiche Nome ufficiale formula chimica numero di CAS per facilitarne la registrazione su computer Propriet chimico fisiche tossicologiche e tossicit per l ambiente Metodo di conservazione e modalit d impiego I composti sia allo stato liquido che solido ricevuti nei loro conte nitori originali e registrati dovranno essere conservati in contenitori resistenti agli urti e alle sostanze che dovranno contenere A questo scopo risulta molto vantaggioso utilizzare contenitori in acciaio inossi dabile per la facilit con cui possono essere decontaminati Il deposito di sostanze dovrebbe essere un locale chiuso a chiave e situato in un area ben ventilata all interno verranno posizionati arma di ventilati con un sistema di filtrazione dell aria frigoriferi o congela tori a seconda delle necessit L accesso
43. delle attivit da svol gere e dei rischi associati e del grado di protezione necessaria Tutti i dispositivi di protezione individuale devono essere indossati prima di iniziare qualsiasi attivit considerata a rischio per evitare la contaminazione personale e vanno tolti solo a fine lavoro importante notare che l operatore che utilizza tali dispositivi deve conoscere bene il loro utilizzo e rendersi conto della necessit di adot 50 Rischio biologico tare determinati DPI per salvaguardare la propria integrit fisica Tutti i DPI devono riportare dichiarazione di conformit CE con la relativa norma EN di riferimento marcata direttamente sul dispositivo forniti di informazioni sul corretto modo di indossarli e i relativi limiti di protezione alcuni Dispositivi di Protezione Individuale sono sog getti a scadenza pertanto necessario controllarli accuratamente prima dell uso Guanti I guanti sono dispositivi atti a proteggere l operatore da una grande variet di pericoli tra i quali sostanze chimiche caldo freddo microrganismi tossine materiale radioattivo morsi e graffi di animali Non esistono guanti idonei per qualsiasi tipologia di intervento o per proteggere da qualunque rischio ogni volta dovranno essere indossati guanti adeguati alla tipologia di rischio e il livello di protezione individuabile dalla norma europea di riferimento Per il rischio biologico si utilizzano normalmente guanti monouso in latti
44. destrezza mentre lavorano dietro a uno schermo e cosi ridurre la durata dell esposizione 3 migliorare la loro precisione nella cam pionatura delle varie soluzioni Deposito Il materiale radioattivo deve essere posto in armadietti sicuri o chiusi a chiave frigoriferi congelatori o nel caso dei rifiuti nei locali auto rizzati come deposito o in circoscritte aree del laboratorio in attesa del 141 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica la rimozione Il materiale radioattivo deve essere contenuto in reci pienti sigillati in modo tale da prevenire versamenti rotture accidenta li o il rilascio nell aria Se necessario il nuclide deve essere contenuto in recipienti sigillati al fine di prevenire radiazioni al personale che accede nelle aree di deposito I composti radioattivi contenenti sostanze cancerogene dovranno essere conservati separatamente da eventuali altri cancerogeni e debitamente etichettati come Sostanze carcinogene radioattive Per entrambi i composti radioattivi cancerogeni e non dovr essere predisposto un elenco delle sostanze affisso direttamente sui frigoriferi con il segnale di pericolo di radioattivit L aerosol che deriva da materiale radioattivo non adeguatamente immagazzinato pu causare contaminazioni delle aree adiacenti e del personale Nell operazione di scongelamento di materiale radioattivo che stato conservato in freezer o in congelatore pu formarsi a
45. di questionari per valutare attentamente Anamnesi lavorativa in cui importante descrivere il tipo di mansioni o attivit a rischio biologico nonch le modalit di lavoro classificandole in base al rischio alto medio basso ed in base alla frequenza occasionale frequente continuativa Cia scun lavoratore potr dunque essere classificato sulla base del reale rischio cui esposto Attivit extralavorative esponenti a rischio biologico ad esempio agricoltura allevamento volontariato del soccorso caccia pesca e Presenza di abitudini o situazioni a rischio biologico ad esem pio tossicodipendenza endovenosa piercing tatuaggi viaggi e soggiorni all estero in zone ritenute a rischio e Anamnesi patologica infettivologica con la quale si intende ve rificare eventuali patologie infettive pregresse se il soggetto stato sottoposto ad interventi chirurgici maggiori o procedure diagnostiche invasive dialisi emotrasfusioni agopuntura cure odontoiatriche rilevanti e Ricerca delle condizioni di ipersuscettibilita un elemento fon damentale delle visite preventive In generale possono costitui re condizioni di ipersuscettib lit individuale nei confronti del RB le patologie della cute e delle mucose che ne riducono le propriet di barriera le flogosi in atto i deficit immunologici congeniti ed acquisiti la gravidanza la non effettuazione di im munoprofilassi d Valutazione dello stato di immunizzazi
46. dispositivi di sicurezza Il posizionamento dei dispositivi di sicurezza del laboratorio deve essere conosciuto estintori che devono essere operativi e controllati periodicamente maschere antigas con le cartucce adatte coperte ignifughe prive di amianto docce di sicurezza e sistemi per il lavaggio degli occhi puliti ed operativi I dispositivi per fermare i fluidi acqua gas e l erogazione di cor rente devono essere accessibili e facilmente localizzabili 110 Rischio chimico Le fonti di pericolo associate ai fluidi dispositivi a gas fornelletti Bunsen e all elettricit apparecchiature imperfette spine non a nor ma devono essere al pi presto eliminate E importante partecipare alle sessioni di prova antincendio e impa rare come usare gli estintori e le maschere antigas 5 Buone pratiche di laboratorio e Unlaboratorio deve essere pulito e ordinato installazioni dispositivi e strumenti devono essere tenuti in condizioni ottime e puliti Gli spazi riservati alla manipolazione le vie di circolazione e le uscite di emergenza devono rimanere liberi e puliti Le porte tagliafuoco devono rimanere chiuse e I pavimenti devono rimanere puliti e sgombri da ogni ostruzione Gli spazi di lavoro devono essere mantenuti in perfette condizioni di pulizia e La postazione di lavoro deve essere mantenuta costantemente libe ra da dispositivi e contenitori non necessari al momento Alla fine della manipo
47. esami specifici per scoprire il prima possibile alcuni disturbi organici o esposizioni potenzialmente danno se che sono validi e ampiamente usati In molti casi sono parte inte grante degli esami medici Nella maggior parte dei casi questi esami sono parte integrante degli esami medici e necessitano del consenso informato del lavoratore inoltre devono essere condotte in base agli standard professionali migliori con il minimo rischio possibile 171 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica I test biologici e gli altri esami medici devono essere eseguiti sotto la supervisione di un medico e sono soggetti a riservatezza medica devono essere relativi alla protezione della salute del lavoratore con debito riguardo alla loro sensibilit specificit e valore predittivo Quando possible e appropriato scegliere devono sempre essere adottati metodi non invasivi ed esami che non mettano in alcun perico lo la salute del lavoratore Un esame invasivo o che comporti un rischio per la salute del lavo ratore pu essere suggerito solo dopo una valutazione dei benefici per il lavoratore e dei rischi conseguenti e non pu essere giustificato in relazione ad una richiesta di assicurazione I test di monitoraggio bio logico che sono semplici ed hanno raggiunto livelli di massima effica cia sono particolarmente utili per la sorveglianza sanitaria dei lavora tori quando opportunamente usati e sono efficaci quan
48. facciale e grem biule per evitare le ustioni da freddo Inoltre i contenitori con azoto liquido devono essere tenuti in ambiente abbondantemen te ventilato in modo da prevenire possibili incidenti determinati da asfissia per spostamento dell ossigeno da parte dell azoto e Conservare i prodotti pericolosi in un frigorifero o congelatore dotato di chiave che deve essere custodita da un solo responsabile e Conservare le soluzioni infiammabili in appositi frigoriferi per solventi privi di luce interna e Apporre all esterno di ogni frigorifero o congelatore il nome della persona da contattare in caso di guasto e Pulirli periodicamente per i frigoriferi e i congelatori accertarsi che sia stata staccata la spina Durante questa operazione indos sare una protezione per il viso e guanti di gomma Il materiale privo di etichetta dovrebbe essere eliminato previa sterilizzazio ne Utilizzare pinze per asportare contenitori rotti o frammenti di vetro e plastica Disinfettare la superficie interna dei frigoriferi e dei congelatori con etanolo al 70 Incubatori Gli incubatori umidificati sono una fonte di contaminazione molto alta sia per i campioni biologici che per l ambiente circostante dovreb bero quindi essere puliti regolarmente Prima della pulizia rimuovere il 44 Rischio biologico contenuto fiasche piastre ripiani vassoi etc dall incubatore pulire poi la parte interna con un detergente non tossico e rimuovere le t
49. idrosolubili e solubili nei grassi sostanze liposolubili figura 14 SOSTANZE CHIMICHE Y SOLUBILIT SOLUBILE INSOLUBILE n SOLUBILE ACQUA nel GRASSI IDROSOLUBILE z LIPOSOLUBILE Figura 14 Principali tipologie di solubilit delle sostanze chimiche La maggior parte degli xenobiotici si ripartiscono tra l acqua il maggior costituente dei fluidi bilogici ed i lipidi importanti molecole delle membrane biologiche questo fenomeno pu essere quantificato per mezzo del coefficiente di partizione solubile in acqua solubile nei grassi Coefficiente di partizione Il coefficiente di partizione pu dare informazioni sul destino di uno xenobiotico in un organismo vivente dal suo ingresso alla sua usci ta b Principali vie di penetrazione negli organismi viventi degli xenobiotici Di solito uno xenobiotico pu entrare nell organismo umano attra verso tre vie principali orale polmonare e cutanea Pi raramente esso pu penetrare attraver so la via nasale e quella oculare La via principale di penetrazione di uno xenobiotico in laboratorio attraverso il tratto respiratorio In effetti un grande numero di sostan 98 Rischio chimico ze chimiche possono entrare nell organismo sotto forma di e gas o vapore rilasciati in particolare da liquidi volatili come i solventi organici solidi finemente suddivisi polveri aerosol aria solidi o liquidi finemente suddivisi Non bisogna trascurare
50. in grado di innescare il processo patogeno naturalmente variabile sia in fun zione delle caratteristiche di patogenicit dell agente infettante sia in funzione della capacit di difesa immunitaria dell organismo ospite L in fezione si traduce costantemente in malattia conclamata tutte le volte che la patogenicit dell agente infettante sia tale da superare le capacit di fensive dell organismo oppure quando le difese antiinfettive dell orga nismo siano compromesse al punto da impedirgli di contrapporsi all azio ne patogena anche di modeste cariche infettanti La contagiosit delle malattie infettive dipende soprattutto dalla quan tit di agenti eliminati all esterno dell organismo malato o presenti nel l ambiente dalla via di eliminazione dalla via di trasmissione e dalla capa cit di sopravvivenza dell agente infettante al di fuori dell organismo in fetto o dalla presenza dell agente infettante e dalla sua concentrazione in liquidi biologici sangue trasmissibili ad opera di particolari vettori Nella dinamica del processo infettivo si riconoscono alcune tappe contaminazione da parte di microrganismi di superfici cutanee o di mucose penetrazione dei microrganismi nei tessuti profondi ed acces 174 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori so al circolo ematico e linfatico localizzazione in determinati organi e o tessuti infezione rapporto dinamico tra microrganismo patogeno ed organismo
51. in materia di ispezione e verifica della buona pratica di laboratorio Decreto Legislativo 626 94 attuazione delle direttive riguardanti il migliora mento della sicurezza e della salute dei lavoratori durante il lavoro Decreto Legislativo 242 del 19 marzo 1996 riguardante modifiche ed integrazioni al decreto legislativo 626 del 19 settembre 1994 recante attua zione di direttive comunitarie riguardanti il miglioramento della sicurezza e della salute dei lavoratori sul luogo di lavoro D M del 5 agosto 1999 disposizioni relative all ispezione e verifica della buona prassi di laboratorio in recepimento delle direttive 1999 11 CE e 1999 12 CE Decreto del 12 novembre 1999 del Ministero del lavoro e prevenzione socia le che modifica l allegato XI del decreto legislativo 242 del 19 3 96 concer nente modifiche ed integrazioni al decreto legislativo 626 del 19 settembre 1994 recante attuazione di direttive comunitarie riguardanti il miglioramento della sicurezza e della salute dei lavoratori sul luogo di lavoro Decreto Legislativo 66 del 25 febbraio 2000 attuazione delle direttive 97 42 CE e 99 38 CE in materia di protezione dei lavoratori contro i rischi deri vanti da esposizione ad agenti cancerogeni o mutageni durante il lavoro SEGNALETICA DI SICUREZZA Decretevo Legislativo 493 del 14 agosto 1996 attuazione della direttiva 92 58 CEE concernente le prescrizioni minime per la segnaletica di sicurezza e o di salute sul luogo di lavo
52. ingestione di S elementa re 8 mCi ingestione di solfuri o solfat LLI 10 mCi inalazione di vapori di S 20 mCi inalazione di solfuri o sol fati 2 mCi inalazione di S elementare 1 0 ALI 10 mCi vapori di S inalati 5 000 mrem CEDE 1 0 ALI 8 mCi ingestione solfuri solfati LLI 50 000 mrem CDE 158 Rischio radiologico Percentuale di Dose di Contaminazione della pelle 1 170 1 260 mrem 1 0 uCi cm profondit 7 0 mg cm Percentuali di Dose Beta per S 14 94 rad h contatto in aria per 1 0 mCi 0 20 rad h 6 pollici in aria per 1 0 mCi SCHERMI PROTETTIVI Non richiesti la protezione di 1 cm di plexiglass fermer com pletamente le radiazioni la protezione di 0 3 mm di plexiglass e 0 2 mm di vetro sono adeguate ma non hanno le stesse propriet meccaniche STRUMENTO DI INDAGINE Il contatore di indagine GM ha bassa efficienza di solito 4 646 Il contatore a liquido di scintillazione per strofinare per unge re pu essere usato secondariamente ma non scoprir la conta minazione non rimovibile DISPOSITIVI PER MONITORARE LE RADIAZIONI Dosimetro non necessario perch l energia S beta troppo bassa e non un pericolo di radiazioni esterne Percentuale di Dose da una fonte del punto isotropico non pro tetto di 1 mCi di S Distanza rad Hr 1 0 cm 1173 6 2 5 cm 93 7 15 24 cm 0 2 and 20 00 cm 0 01 INFORMAZIONI GENERALI SULLE RADIAZIONI Esame urine non richiesto ma
53. modificare il patrimonio genetico delle cellu le bersaglio Jones 1995 I prodotti per terapia genica comprendono acidi nucleici liberi o complessati cellule geneticamente modificate e vettori virali Attualmente i vettori virali risultano essere tra i pi efficaci metodi per il trasferimento genico Essi agiscono attraverso una vera infezio ne delle cellule bersaglio trasferendo il gene terapeutico attraverso i loro naturali meccanismi biologici Kay et al 2001 I vettori utilizzati in terapia genica sono prevalentemente difettivi per replicazione ovvero possono infettare una sola volta e non possono moltiplicarsi dentro la cellula bersaglio a meno di una ricombinazione genica accidentale Oltre ad essere incapaci di replicare questi vettori sono privi di atti vit litica 22 Rischio biologico I vettori virali utilizzati in terapia genica derivano da retrovirus adenovirus parvovirus herpervirus e poxvirus I vettori pi utilizzati derivano da retrovirus di tipo aviario e muri no Miller et al 1990 Le caratteristiche principali dei retrovirus sono una relativa semplicit genetica e la propriet di infettare ad alta efficienza una vasta serie di tipi cellulari e il materiale genetico costituito da RNA a singola elica L RNA contenuto nel retrovirus si integra nel genoma della cellula ospite sotto forma di DNA DNA provirale La trasformazione dell RNA in DNA avviene ad opera di una pol
54. o ossigeno che sono onnipresenti nell ambiente Altre sostanze chimiche interagiranno in una maniera incontrollabile e spesso violenta La figura 6 riassume le possibili incompatibilit tra due o pi so stanze chimiche REATTIVI Y Y REAZIONI VIOLENTE REAZIONI VIOLENTE REAZIONI VIOLENTE CONL ACQUA CON L OSSIGENO FRA COMPOSTI CHIMICI 21 nell aria REAZIONI DA INCOMPATIBILIT Figura 6 Principali tipi di reazioni da incompatibilit 88 Rischio chimico In laboratorio si dovr evitare di mettere in contatto fra loro sostan ze chimiche incompatibili Se questo deve essere fatto sar opportuno usare piccole quantit per aumentare la sicurezza L immagazzinamento delle sostanze chimiche deve essere sicuro e ben organizzato prendendo in considerazione la compatibilit chimica dei vari prodotti 1 Reazioni con l acqua Alcune sostanze chimiche reattive possono violentemente reagire con l acqua reazioni di idrolisi L idrolisi sviluppa pi o meno calore e qualche volta viene prodotto gas infiammabile come l idrogeno che in alcuni casi pu incendiarsi L idrolisi di alcune sostanze chimiche reattive pu rilasciare sostanze chimiche corrosive dette idracidi l acido cloridrico ne un esempio Il dimetildiclorosilano usato come trattamento anti adesivo per la vetreria di laboratorio tubi di emolisi o come agente impermeabi lizzante In presenza d acqua il dimetildiclorosil
55. pi comuni di valutazione della salute dei singoli lavoratori Esami medici e consultazioni o come parte dei programmi di pro tezione o sulla base delle necessit che si presentano rispondono a 165 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica cinque scopi principali e Valutazione della validit delle misure di controllo nel luogo di lavoro Individuazione di anormalit pre cliniche e cliniche in un mo mento nel quale l intervento sia benefico per la salute del singo lo individuo Prevenzione di un ulteriore peggioramento della salute del lavo ratore e Rafforzamento di metodi di lavoro sicuro e di metodi di mante nimento della salute e Valutazione dell idoneit ad un particolare tipo di lavoro si auspica attualmente l adattamento al luogo di lavoro per il lavoratore La sorveglianza sanitaria universalmente considerata come una composita attivit di prevenzione secondaria si basa sul controllo sa nitario periodico dei lavoratori con l obiettivo di proteggere la loro salute e prevenire le malattie correlate al lavoro Mira ad identificare precocemente possibilmente quando sono ancora in fase subclinica le alterazioni dello stato di salute mediante lo studio della funzionalit degli organi e apparati che possono essere alterati a causa dei fattori di rischio presenti negli ambienti di lavoro Inoltre essa rivolta a eviden ziare quelle alterazioni delle condizioni di sal
56. profilassi e cura e Modalit di eliminazione dell agente patogeno da parte dell ani male escrementi urine saliva aerosol ecc Modalit di trasmissione aerosol vettori ecc Potenziale pericolo legato alla manipolazione siringhe tagli con tatto aerosol Lavorare con gli animali pu essere causa di ferite come morsi e graffi che possono essere evitati mediante Somministrazione di sedativi agli animali quando possibile e Uso di gabbie provviste di sistemi di immobilizzazione per gli ani mali di grandi dimensioni e Conoscenza delle tecniche di immobilizzazione e Uso degli appropriati guanti protettivi Inoltre alcuni lavoratori possono essere allergici a certi animali e c la possibilit di un esagerata e inappropriata risposta immunitaria Tutto ci pu essere causa scatenante di un processo allergico conside rato una vera e propria malattia professionale Un laboratorio nel quale hanno luogo esperimenti su animali deve essere strutturato in modo da garantirne l efficienza la funzionalit dal punto di vista sanitario e permettere la cura e la sorveglianza degli animali Il progetto di tale laboratorio deve essere principalmente ba sato sull applicazione di precise procedure di sicurezza microbiologica in modo da garantire i migliori risultati e le condizioni ottimali di man tenimento degli animali Ogni operazione dovrebbe essere adeguatamente pianificata in base alle attivit che si
57. pu essere richiesto dallo staff dei medici autorizzati dopo un versamento o una contaminazio ne del personale con S Volatilit STP Significativa per metionina S e cisteina 5S La Radiolisi degli amminoacidi cisteina e metionina S duran te la conservazione e l utilizzo pu portare al rilascio di impurit volatili Le impurit volatili sono insignificanti Il comportamento metabolico dei composti organici di zolfo cisteina e metionina differisce considerevolmente dal compor tamento metabolico dei composti inorganici I composti organici dello zolfo cisteina e metionina vengono 159 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica incorporati in vari metaboliti Infatti quando lo zolfo entra nel l organismo come composto organico viene fissato e assorbimento frazionale di zolfo dal tratto gastrointestinale normalmente gt 60 per i composti organici di zolfo Lo zolfo nella forma elementare molto meno assorbito dal tratto GI ri spetto ai composti inorganici 80 per tutti i composti inorgani ci e 10 per lo zolfo nella sua forma elementare Lo zolfo elementare trattenuto dall organismo per settimane Lo zolfo entra nei polmoni in forma di gas SO COS H S e CS ed il suo metabolismo lo stesso di ogni altro composto organico in cui sia presente lo zolfo Si pu presentare contaminazione di contenitori e di superfici interne in zone per la conservazione Le fial
58. quantit usate in queste aree devo no essere indicate in posizione visibile Queste aree dovrebbero essere chiaramente segnalate e non dovrebbero essere usate per altri scopi Un foglio di carta assorbente plastificato su un lato pu essere usato per coprire la superficie del banco con la parte impermeabile appog giata sul tavolo L uso di grandi quantit di P es gt 100 uCi deve essere confinato in una apposita stanza L accesso di questa camera deve essere limitato soltanto a personale autorizzato Ogni operatore che inizia un esperimento deve controllare la contaminazione dell am biente e delle attrezzature deve compilare e firmare un apposito regi stro della stanza scrivendo l ora di inizio e di fine esperimento ed even tuali osservazioni Alla fine dell esperimento dovr ovviamente effet tuare un controllo su possibili contaminazioni ambientali ed eventual mente decontaminare l ambiente di lavoro Ogni infortunio o incidente dovr essere rigorosamente segnalato al personale addetto alla sicurez Za radiologica e qualora si trattasse di una contaminazione sull opera tore al medico incaricato alla sorveglianza sanitaria Tutte le operazio 140 Rischio radiologico ni con soluzioni liquide che coinvolgono isotopi dovrebbero essere ese guite utilizzando un doppio contenitore Quando si utilizzano P P C o S si devono utilizzare schermi protettivi di plexiglass di 1cm di spessore vedi schede di sicurezza per ogni s
59. raggruppati per grandi famiglie acidi minerali forti basi minerali forti potenti agenti ossidanti potenti agenti riducenti sostanze che reagiscono con l acqua sostanze che reagiscono con l ossigeno Per la conservazione delle sostanze chimiche devono essere utilizzati e vaschette fatte di plastica resistente scaffali di acciaio ricoperte con una protezione contro le sostan ze chimiche Tutti i contenitori devono avere una etichetta conforme alla legge in buone condizioni Tutte le sostanze chimiche immagazzinate devono essere elencate Lo stato dei lotti deve essere controllato regolarmente Bisogna evitare di conservare quantit troppo ingenti di liquidi in fiammabili in laboratorio la quantit conservata deve essere minore del corrispondente consumo di una o due giornate di lavoro 112 Rischio chimico I solventi infiammabili devono essere conservati in armadi per sol venti equipaggiati in modo specifico materiali non combustibili vas soio di ritenzione ventilazione permanente impianto elettrico anti de flagrazione meccanismo di estinzione automatico I grandi istituti di ricerca devono avere un sistema centrale di depo sito dei solventi costruito e installato secondo gli standard di legge 7 Misure igieniche Le misure igieniche elementari devono essere rispettate n laboratorio indossare un camice confezionato con fibre non sintetiche e Lavarsi le mani dopo ogni manipolazione e
60. seguire le regole IATA Precauzioni nell uso di cancerogeni chimici Le procedure d uso dei cancerogeni chimici dovrebbero essere ade guate alle propriet fisico chimiche dei composti Possiamo prefigurare tre possibilit 1 Composti volatili lavorare sotto cappa ed usare incubatori 2 Composti non volatili 3 Polveri elettrostatiche Campionamento di cancerogeni volatili Il prelievo di aliquote di un cancerogeno volatile da contenitore 121 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica principale deve essere sempre fatto sotto cappa dotata di filtro a carbo ne attivo e mantenuta ad una pressione inferiore rispetto a quella del laboratorio La velocit minima raccomandata dal U S Department of Health and Welfare amp di 0 5 m s E molto importante assicurarsi che il piano di lavoro sotto cappa sia occupato solo dalle attrezzature stretta mente indispensabili al prelievo Troppi strumenti potrebbero generare delle turbolenze che possono essere causa di un ritorno di vapori del cancerogeno ed esporre quindi l operatore agli effetti nocivi di questi L operatore deve indossare abiti di protezione di un colore diverso da quello usato negli altri laboratori degli occhiali protettivi e guanti adatti al tipo di composto utilizzato Il flacone contenente il cancerogeno viene poi messo in una baci nella bene che sia di acciaio inossidabile perch ha il vantaggio di poter essere facilm
61. uno o pi elettroni nel suo strato periferico I cationi sono ioni caricati positivamente e gli anioni negativemen te come rappresentato nella figura 1 ANIONI y IONI NEGATIVI ATOMI a x IONI MOLECOLE CATIONI IONI POSITIVI Figura 1 Da atomi e ioni a molecole A partire da Lavoisier 1743 1794 uno dei fondatori della chimica si distinguono composti minerali dal mondo minerale e composti organici scoperti negli organismi viventi I composti organici hanno come costituente principale il carbonio e l atomo di carbonio legato a s stesso C C o all idrogeno C H come negli idrocarburi la famiglia di composti organici pi semplice Le sostanze chimiche atomi ioni o molecole possono mostrare una maggiore o minore reattivit chimica che essenziale e deve esse re presa in considerazione L acido nitrico concentrato altamente nitrante in grado di portare uno o pi nitrogruppi in una molecola e fortemente ossidante in grado di trasformare una molecola per ossidazione Ad esempio scal dare fino alla fusione un prodotto minerale molto reattivo come l acido nitrico concentrato con un prodotto organico facilmente ossidabile come un alcool metanolo etanolo glicerolo pericoloso e porter ad una esplosione seguita da un incendio Si deve in particolare fare attenzione alla conservazione delle so stanze chimiche bisogna evitare di
62. utilizzati in laboratorio hanno propriet cancerogene nei confronti di tali sostanze la sorveglianza sanitaria rap presenta una delle misure di prevenzione che costituiscono la strategia Tab VI la cui efficacia dipende da una completa e contemporanea adozione di tutti i provvedimenti l adozione di una parte soltanto di essa non da ritenere soddisfacente dal punto di vista preventivo 182 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori Tabella VI Strategie di prevenzione per esposti ad agenti cancerogeni Valutazione del grado natura e durata dell esposizione dei lavoratori Sostituzione o riduzione dell uso di un agente cancerogeno Adozione di sistemi chiusi Riduzione del livello di esposizione al pi basso valore tecnicamente possibile Limitazione della quantit di un agente cancerogeno e Massima riduzione possibile dei lavoratori esposti Evacuazione alla fonte degli agenti cancerogeni Applicazione di procedura e metodi di lavoro adeguati Misure di protezione collettiva e o individuale Divieti di mangiare bere e fumare nelle aree di lavoro in cui esiste rischio di contaminazione ad opera di agenti cancerogeni Ogni lavoratore deve inoltre essere sottoposto ad un idonea sorve glianza sanitaria prima dell inizio dell esposizione e in seguito ad in tervalli regolari sconsigliato il ricorso a test per effetti biologici precoci in quanto la predittivit di questi effet
63. 19 CEE Direttiva della Commissione 94 51 CEE del 7 novembre 1994 recante ade guamento al progresso tecnico della direttiva 90 219 CEE del consiglio sul l impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati Decisione della Commissione 96 134 CE che modifica la decisione 91 448 CEE concernente orientamenti per la classificazione di cui all articolo 4 della direttiva 90 219 CEE del Consiglio sull impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati Direttiva del Consiglio 98 81 CE del 26 ottobre 1998 che modifica la diret tiva 90 219 CEE sull impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati Decisione della Commissione 2000 608 CE del 27 settembre 2000 che mo 222 Allegato II difica la direttiva 90 219 CEE sull impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati Decisione del consiglio 2001 204 CE dell 8 marzo 2001 che integra la di rettiva 90 219 CEE relativamente ai criteri per stabilire la sicurezza per la salute umana e per l ambiente di alcuni tipi di microrganismi geneticamente modificati RADIOPROTEZIONE Direttive del Consiglio 59 221 CEE che fissano le norme fondamentali rela tive alla protezione sanitaria della popolazione e dei lavoratori contro i peri coli derivanti dalle radiazioni ionizzanti Direttiva del Consiglio 80 836 EURATOM che modifica le direttive che fissano le norme fondamentali relative alla protezione sanitaria della popola zione e dei lavoratori
64. 3 1998 3 23 Brun A Montero R Perez J A Roman M Manual de Higiene del Trabajo para T cnicos en Prevenci n de Riesgos Laborales IDEOR C rdoba 2000 308 Costela C Manejo marcaje e identificaci n de animales II Curso de formaci n avanzada en protecci n y experimentaci n animal C rdoba 2000 Hospital General de Valencia Animales de laboratorio m s utilizados Caracter sticas fundamentales Research in Surgery sup 1 1989 3 19 Hospital General de Valencia L neas directrices relativas al alojamiento y a los cuidados de animales Research in Surgery sup 1 1989 25 36 Manual de Bioseguridad en el Laboratorio 2 Edici n O M S Ginebra 1994 149 p Marti M C et al Prevenci n de Riesgos Biol gicos en el Laboratorio I N S H T 1997 169 p Luque L Los roedores en experimentaci n animal enfermedades infecciosas y zoonosis transmisibles II Curso de formaci n avanzada en protecci n y experimentaci n animal C rdoba 2000 Martin J Unidades de producci n y o experimentaci n Construcci n distribuci n de locales y reas funcionales Tipo de establecimientos II Curso de formaci n avanzada en protecci n y experimentaci n animal C rdoba 2000 Tarradas C et al Zoonosis transmitidas por animales de experimentaci n I par te Informaci n Veterinaria 7 2000 39 47 75 RISCHIO CHIMICO SOSTANZE CHIMICHE NEI LABORATORI DI BIO TECNOLOGIA Andr Picot I
65. 997 determinazione dei criteri minimi di accettabilit delle apparecchiature radiologiche ad uso medico ed odontoiatrico nonch di quelle di medicina nucleare ai sensi dell art 112 comma 3 del decreto legislativo 230 del 17 marzo 1995 e D M del 14 febbraio 1997 determinazione del tipo modalit e periodicit del controllo di qualit da parte del fisico specialista o dell esperto quali ficato delle apparecchiature radiologiche e di medicina nucleare ai sensi dell art 113 comma 2 del decreto legislativo 230 del 17 marzo 1995 IMPIEGO CONFINATO DI Mocm Decreto Legislativo 91 del 3 marzo 1993 attuazione della direttiva 90 219 CEE concernente l impiego confinato di microrganismi geneticamente modi ficati Decreto del 20 maggio 1993 tariffe e modalit relative alle prestazioni forni te dal Ministero della Sanit in applicazione dell art 19 del decreto legislativo 91 del 3 marzo 1993 che attua la direttiva 90 219 CEE in materia di impiego confinato dei microrganismi geneticamente modificati Decreto del 1 marzo 1995 in G U 16 5 95 n 112 attuazione della direttiva 94 51 Decreto del 25 settembre 1996 disposizioni aggiuntive sulle modalit di versamento dei diritti relativi alle prestazioni fornite dal Ministero della Sani t in applicazione dell art 19 del decreto legislativo 91 del 3 marzo 1993 disciplinate dal decreto del Ministro della sanit 20 5 1993 Decreto del 10 aprile 1997 aggiornamento delle disposizi
66. Adenina emisolfato Irritante 1 2 4 Alluminio cloruro Irritante 1 2 4 Amiprophos metile Nocivo 1 2 4 Ammonio acetato Irritante 1 2 4 Ammonio cloruro Irritante 1 2 4 Ammonio diidrogeno fosfato Irritante 1 2 4 Ammonio idrogeno carbonato Nocivo 1 2 Ammonio nitrato Irritante 1 2 4 Ossidante Provoca reazioni violente con sostanze riducenti Ammonio perossodisolfato Nocivo ossidante allergenico 12 3 ammonio persolfato APS Provoca reazioni violente con sostanze riducenti Ammonio solfato Irritante 1 2 4 Amfotericina B Nocivo 1 2 3 Amsacrina Molto tossico 1 2 3 Antibiotici Nocivo 1 2 3 Irritante allergenico Rischi legati all antibiotico resistenza Argento nitrato Corrosivo Inquinante ambientale 1 2 4 L Arginina Irritante 1 2 4 BES acido N N bis Irritante 1 2 4 2 idrossimetil 2 amminoetansulfonico 195 anuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica 196 Composto Riscuio PREVENZIONE Bleomicina solfato Nocivo irritante 1 2 3 Acido Borico Nocivo 1 2 3 5 Bromo 4 cloro 3 indolil Tossico 12 3 fosfato BCIP X Phos Blu di Bromofenolo Nocivo 1 2 3 9 37 5 5 tetrabromofenol sulfonftaleina sale di sodio Cesio cloruro Nocivo 1 2 3 Calcio cloruro Irritante 1 2 4 Calcio nitrato Irritante 1 2 4 Provoca reazioni violente con sostanze riducenti Carboxin 5 6 diidro 2 metil Nocivo 1 2 3 1 4 oxatiin 3 carb
67. Avere nelle aree in cui abitualmente si usano manichette per la pulizia e la decontaminazione i pavimenti con un inclinazione di almeno 0 64 cm m nelle aree dove soggiornano i cani l incli nazione dovrebbe essere di 0 64 0 3 cm m Possedere scarichi nei pavimenti a livello del pavimento e con un diametro di almeno 10 2 cm 15 3 cm nelle aree dove si lava no abitualmente le gabbie e dove stazionano i cani gli scarichi utilizzati solo occasionalmente dovrebbero essere dotati di un coperchio ed essere sigillati in modo da evitare la fuoriuscita di eventuali gas Essere dotato di sistemi di comunicazione come i telefoni che non disturbino gli animali segnale di chiamata luminoso o a vibrazione Avere una buona ventilazione se la ventilazione meccanica l aria deve essere inviata dall atmosfera e il flusso d aria all in terno deve essere regolare e continuo senza turbolenze Possedere aree di contaminazione separate aree di isolamento e dei residui da quelle pulite aree per le pause di lavoro e per il 69 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica lavoro di amministrazione il limite di accesso deve essere chia ramente indicato sulle porte Per il notevole valore delle sperimentazioni su animali e la possibi lit di atti vandalici sono richieste specifiche misure di sicurezza Que ste misure dipendono da come sono strutturati i laboratori e dalla loro posizione nell edificio G
68. Biosafety II Facility Design Considerations American Biological Safety Association Richmond Y PhD Ed 2000 Richmond Y Anthology of Biosafety I Perspectives on Laboratory Design American Biological Safety Association Richmond Y PhD Ed 1999 Rodricks J V Calculated risks Cambridge University Press Cambridge 1994 53 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica CONTAMINAZIONEACCIDENTALE CON AGENTI BIOLOGICI Mariangela Miele Dimitri Sossai Silvia Franchello Paola Bet Rosa Mantero Sim Modesto Rom n Delgado In tutti i laboratori si devono stabilire procedure di emergenza da adot tare in caso di incidenti Campi et al 1998 Manuale di biosicurezza 1995 Ogni laboratorio deve definire le norme di sicurezza adatte alle pro prie esigenze in modo tale da rendere operativo quanto previsto dalle normative vigenti e pertanto dovr essere redatto un piano di emergen Za Il piano di emergenza dovrebbe essere reso noto a tutto il personale programmando appositi corsi di formazione Il piano d emergenza deve contenere informazioni su valutazione dei rischi localizzazione delle aree a rischio e identificazione precisa degli agenti biologici chimici e fisici pe ricolosi procedure di emergenza da adottare in caso di esposizioni acci dentali e di decontaminazione identificazione delle persone a rischio e identificazione dei responsabili nei diversi settori respon
69. CF A WWNNNN WW WW WN W NNN PN 3 8 3 COS 3 3 3 3 F 3 Rilievi D d D d D d D d D d PARASSITI Agente biologico Acanthamoeba castellani Ancylostoma duodenale 214 Classificazione Rilievi Allegato I Agente biologico Angiostrongylus cantonensis Angiostrongylus costaricensis Ascaris lumbricoides Ascaris suum Babesia divergens Babesia microti Balantidium coli Brugia malayi Brugia pahangi Capillaria philippinensis Capillaria spp Clonorchis sinensis Clonorchis viverrini Cryptosporidium parvum Cryptosporidium spp Cyclospora cayetanensis Dipetalonema streptocerca Diphyllobothrium latum Dracunculus medinensis Echinococcus granulosus Echinococcus multilocularis Echinococcus vogeli Entamoeba histolytica Fasciola gigantica Fasciola hepatica Fasciolopsis buski Giardia lamblia Giardia intestinalis Hymenolepsis diminuta Hymenolepsis nana Leishmania brasiliensis Leishmania donovani Leishmania ethiopica Leishmania mexicana Leishmania peruviana Leishmania tropica Leishmania major Leishmania spp Lea lea 215 Classificazione N 9 9 p e Cy NNNYNNYNNYNWWNYNNYNNYNNWWWNYNNYNNYNNNYNNNNYNNYNYNYNYWNY LY Rilievi Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Agente biologico Mansonella ozzardi Mansonella persians Naegleria fowleri Necator americanus Onchocerca volvu
70. CHE CANCEROGENE E PROCEDURE DI EMERGENZA eta cheeses tete cette Dante esit de dee 132 RISCHIO RADIOLOGICO 1 eere 139 Bibliografid alia 145 Schede tecniche aceite Ionen deett in ae eden dee 147 LA SORVEGLIANZA SANITARIA DEI LAVORATORI 165 Bibliografid ica 188 PRECAUZIONI PER L USO DI AGENTI BIOLOGICI ECHIMICI a E 189 Bibliografia unsere Doriana aida 203 ALLEGATO L erae fn Fee eee e de ette 205 ALLEGATO ll eerte ia 219 LEGISLAZIONE EUROPEA 4 eere 219 LEGISLAZIONE ITALIANA te 226 PREFAZIONE Migliorare la sicurezza sui luoghi di lavoro deve essere un obiettivo centrale in qualunque paese e a maggior ragione in quelli pi indu strializzati la categoria a cui tutta l Europa appartiene Nella storia recente l impatto sociale della carenza di sicurezza stato impressio nante basti pensare alle migliaia di incidenti mortali sul lavoro nel l edilizia civile da quando si costruiscono ponti tunnel e ferrovie alle migliaia di lavoratori periti per silicosi nella prima met del XX seco lo agli innumerevoli disastri minerari in tutto il mondo Si potrebbe pensare che questa sia storia passata ma basta ricordare la tragedia della diossina a Seveso 1976 o quella del metilisocianato a Bhopal 1984 per ravvedersi Al confronto la sicurezza nei laboratori biologici potrebbe sem brare una questione di dettaglio La questione invece importante per
71. Doerfler W Ingested foreign phage M13 DNA survives transiently in the gastrointestinal tract and enters the bloodstream of mice Molecular and General Genetics 242 495 504 1994 Traavik T Too early may be too late Ecological risks associated with the use of naked DNA as a biological tool for research production and therapy Reported to the Directorate of Nature Management Norway 29 31 19992 Yamasoba T Yagl M Roessler B J Miller J M Rapheal Y Inner ear transgene expression after adenoviral vecotr inoculation in the endolymphatic sac Hum Gene Ther 10 744 69 1999 Yei S Mittereder N Wert S Whitsett J A Wilmott R W Trapnell B C In vivo evaluation of the safety of adenovirus mediated transfer of the human cystic fibrosis transmembrane conductance regulator cDNA to the lung Hum Gene Ther 15 731 744 1994 36 Rischio biologico PREVENZIONE DEL RISCHIO BIOLOGICO Paola Bet Mariangela Miele Modesto Roman Delgado Rosa Montero Simo Dimitri Sossai La valutazione del rischio biologico ha lo scopo di individuare le diverse tipologie di pericoli connessi alla manipolazione degli agenti biologici al fine di rimuovere o ridurre ad un livello accettabile il rischio di contaminazione degli operatori dei campioni dell ambiente e della comunit in genere Rodricks 1994 Il controllo del rischio viene effettuato attraverso la definizione e l adozione di adeguate mi sure di prevenzione qu
72. Gif sur Yvette 1988 Picot A Zerbib J C Castegnaro M Risques li s la manipulation des produits canc rog nes et r glementation fran aise sur les produits canc rog nes Partie D listes r actualis es des principaux produits g notoxiques utilis s dans les laboratoires L actualit chimique Juillet Aout Septembre 1993 44 49 1993 Rappaport S M Campbell E E The interpretation and application of OSHA carcinogen standards for laboratory operations Am Ind Hyg Assoc J 37 December 1976 1976 Rousselin X Dayan Kenigsberg J Pleven C Castegnaro M Picot A Zajdela F Manipulation des substances g notoxiques utilis es au laboratoire pr vention et s curit Publication INRS Ligne Pr vention 1994 Rustemeyer T Pilz B Frosch P J Contact allergies in medical occupations Hautarzt 45 834 844 1994 Salkie M L The prevalence of atopy and hypersensitivity to latex in medical laboratory technologists Arch Pathol Lab Med 117 897 899 1993 Sansone E B Poiley J A Pienta R J Lebherz W B Potential hazard of tissue culture assays arising from carcinogenic compounds incompletely removed by washing Cancer Research 36 2455 2458 III 1976 Sansone E B Tewari Y B The permeability of laboratory gloves to selected nitrosamines In Environmental aspects of N nitroso compounds Walker E A Castegnaro M Griciute L Lyle R E Editors IARC Scientific Publication N 19 535 543
73. I and type IV in laboratory workers in The Netherlands Contact Dermatitis 38 159 163 1998 DHEW Laboratory chemical carcinogen safety standards subcommittee of the DHEW comittee to coordinate toxicology and related programs Guidelines for the laboratory use of chemical substances posing a potential occupational carcinogenic risk May 2 1979 1979 ECETOC Monograph N 2 Septembre 1980 A contribution to the strategy for the identification and control of occupational carcinogens 1980 ECETOC Monograph N 3 Janvier 1982 Risk assesment of occupational chemical carcinogens 1982 128 Rischio chimico Estlander T Jolanki R Kanerva L Rubber glove dermatitis a significant occupational hazard prevention Curr Probl Dermatol 25 170 176 1996 Gough T A Webb K S McPhail M F Diffusion of nitrosamines through protective gloves In Environmental aspects of N nitroso compounds Walker E A Castegnaro M Griciute L Lyle R E Editors IARC Scientific Publication N 19 531 534 1978 Hudgins LB Hamdy RC Miller MP Anaphylaxis due to latex South Med J 86 948 949 1993 Hunt L W Fransway A F Reed C E Miller L K Jones R T Swanson M C Yunginger J W An epidemic of occupational allergy to latex involving health care workers J Occup Environ Med 37 1204 1209 1999 INRS ED 490 S curit dans les manipulations scientifiques 1982 INRS ND 1178 95 79 Travaux dans les Laboratoire de Chimie 2
74. Nessun rischio Rischio molto alto Nessun rischio Non abbastanza combustibile con una scintilla fiamma Troppo combustibile Troppo ossidante Non abbastanza ossidante eredi I o __ gas 0 vapore nell aria 0 LFL UFL 100 o o LEL UEL Figura 5 Domini di infiammabilit e di esplosivit I limiti di esplosivit LEL e UEL di miscele gassose non sono molto differenti dai limiti di infiammabilit LFL e UFL d Punto di accensione Il punto di accensione un parametro sperimentale Esso rappre senta la temperatura alla quale l emissione di vapore sufficiente a raggiungere una composizione corrispondente al limite inferiore di in fiammabilit LFL Ad una concentrazione corrispondente al LFL una scintilla pu provocare un esplosione La temperatura misurata in una vaschetta aperta da 5 a 10 C pi alta che la temperatura ottenuta con la vaschetta chiusa Il punto di accensione il parametro essenziale per determinare il rischio di incendio Nella zona di rischio figura 5 una scintilla prodotta in modo mec canico attrito o di origine elettrica o l elettricit statica risultano es sere particolarmente rischiose Pi basso il punto di accensione pi il liquido infiammabile e quindi pericoloso PUNTO DI ACCENSIONE CARATTERISTICHE DI INFIAMMABILIT Meno di 0 C Altamente infiammabile Tra 0 C e 25 C Facilmente infiammabile Tra 25 C e 55 C Infiammabile
75. P me diante la formazione di polveri e Monitorare le zone di lavoro a seguito di contaminazioni me diante wipe test strofinare usando una garza imbevuta con liquido di scintillazione e leggere eventuali emissioni residue 157 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica ZOLFO 35 58 DATI FISICI Energia Beta 167 keV massima 53 keV media 100 ab bondanza Emivita Fisica 87 4 giorni Emivita Biologica 623 giorni S libero Emivita Effettiva 44 76 giorni S libero Attivit Specifica 42 400 Ci g Emissione Massima Beta in aria 26 00 cm 10 2 in Emissione Massima Beta in Acqua Tessuto 0 32 mm 0 015 in Emissione Massima Beta in plexiglass o Lucite 0 25 mm 0 01 in Frazione di S beta trasmesso attraverso lo strato morto della pelle 12 DATI RADIOLOGICI Organo Critico Testicolo Vie di immissione ingestione inalazione puntura ferita conta minazione della pelle assorbimento Esposizione esterna dose profonda alle particelle deboli S beta non un fattore radiologico Esposizione interna e contaminazione sono i principali fattori radiologici Committed dose equivalent CDE 10 00 mrem uCi ingerita 0 352 mrem uCi puntura Committed Effective Dose Equivalent CEDB 2 6 mrem l uCi ingerita Suppone una emivita biologica di 90 giorni Limite Annuale sull immissione ALD 10 mCi ingestione di composti inorganici di S 6 mCi
76. VC spessi permeabili a 4 prodotti carmustina tiotepa mecloretamina e daunorubicina leggermente permeabili a doxorubicina e mercaptopurina Guanti in lattice permeabili a 4 prodotti carmustina tiotepa mecloretamina e ciclofosfamide Guanti chirurgici in lattice permeabili al tiotepa Connor et al 1999 ha dimostrato l efficienza nella protezione dei guanti in nitrile spessore di 0 1 0 15 mm in lattice spessore di 0 18 0 22 mm in poliuretano spessore di 0 13 0 15 mm contro il passag gio di 18 soluzioni di farmaci antineoplastici preparati in accordo alle specifiche dei fornitori Il test amp stato eseguito per diversi intervalli di tempo 30 60 90 e 120 minuti Nel caso dei guanti in nitrile si veri ficata la diffusione di pi del 5 di tiotepa in 30 minuti ma questo fenomeno stato attribuito alla presenza di microfori Quindi molto importante verificare visivamente 1 guanti per evitare questo tipo di problemi Per gli altri 11 guanti in nitrile non si verificato nessun passaggio di farmaci Per un campione di ciascun tipo di guanti latti ce poliuretano e vinile stata notata una permeabilit 1 Un solo campione di guanti in lattice si dimostrato permeabile alla carmustina dopo 90 minuti di contatto Il tassotere diffonde attraverso il poliuretano in 60 minuti ed attraverso il neoprene in 120 minuti Si pu quindi dedurre che a parte il problema dei microfori i 4 tipi di guanti esami nati sono
77. a Usare siringhe ad ago autobloccante o bloccabile Riempire lentamente la siringa al fine di ridurre la formazione di bolle d aria e schiuma nel fluido da inoculare Non usare una siringa per mescolare fluidi infetti ed assicurarsi che solo la punta dell ago sia immersa sotto il livello del fluido nel contenitore evitando di esercitare una forza eccessiva Avvolgere l ago e il suo sistema di bloccaggio in un batuffolo di cotone inumidito con disinfettante adatto prima di estrarre l ago da un tappo di gomma Espellere il liquido in eccesso e le bolle d aria dentro ad un batuffolo di cotone inumidito con un disinfettante adatto o in una boccetta contenente cotone sterile tenendo la siringa in posi zione verticale Preparare le piastre batteriche sotto cappa durante tale attivit si possono formare aerosol potenzialmente pericolosi in particola re quando si utilizzano agenti patogeni trasmissibili per via ae rea Spegnere la luce UV alla fine dell esperimento Dispositivi di protezione individuale I dispositivi di protezione individuale DPI sono definiti dalla Di rettiva 89 686 CEE come qualsiasi dispositivo o articolo destinato ad essere indossato o tenuto da una persona affinch essa sia protetta nei confronti di uno o pi rischi che potrebbero mettere in pericolo la salute e la sicurezza La scelta dei dispositivi di protezione individuale pi appropriati pu essere fatta solo successivamente all analisi
78. a 1990 che probabilmente ver r aumentato Come esempio in una popolazione di 1200 donne che sono state Tabella 1 Rischio random di danno in varie zone esposte ORGANI ESPOSTI Riscuio RANDOM x 107 Sv Gonade 04 Midollo osseo 0 2 Polmone 0 2 Mammella 0 25 Tiroide 0 05 Osso 0 05 esposte a 50 nSv si pu attendere un caso di cancro o disordine geneti co dovuto alle radiazioni Dagli elementi dell elenco sopra il maggior rischio atteso con l uso di P Monitoraggio Ogni spazio o area di laboratorio deve essere monitorato settima nalmente per il confinamento della radioattivit A tal scopo si dovreb be nominare un responsabile per ogni area e tenere un registro del mo nitoraggio Per isotopi come I P S e C pu essere usato il moni tor appropriato per H il controllo dovr essere effettuato mediante una garza inumidita con liquido di scintillazione sulle superfici e veri ficando con l apposita strumentazione la contaminazione delle super fici stesse In particolare le aree da controllare includono 144 Rischio radiologico lavandini compresi i rubinetti scarico e sifoni attrezzature varie attrezzature usate comunemente es microcentrifughe centrifu ghe da banco strumentazioni per i gel e i monitors stessi Ogni area trovata contaminata dovrebbe essere pulita con adeguati detergenti e ricontrollata dopo questa operazione Procedure di emergenza Nel caso della fuoriusc
79. a nei test con animali un sostituto accet tabile della benzidina ma deve essere usata con attenzione Oe Op Benzidina HC CH NH NH d Com H CH 3 3 5 5 Tetrametilbenzidina 3 5 Diaminobenzidina Per la manipolazione delle sostanze chimiche facilmente assorbite per via cutanea sono richieste adeguate procedure e protezioni guanti monouso occhiali protettivi cura nel lavarsi le mani distruzione dei residui dopo l uso c Destino degli xenobiotici all interno dell organismo Una volta entrati nell organismo gli xenobiotici si diffondono in esso attraverso la circolazione sanguigna A seconda se la sostanza solubile in acqua o nei grassi il suo destino sar differente In generale le sostanze chimiche idrosolubili vengono rapidamen te eliminate dall organismo per via renale attraverso l urina dopo aver subito o meno biotrasformazioni I prodotti xenobiotici molto solubili nei grassi vengono generalmente accumulati nel compartimento lipidico sistema nervoso fegato reni mi dollo osseo grasso da dove possono essere rilasciati dopo un periodo di tempo variabile probabilmente dipendente dalla sostanza stessa Di solito le sostanze chimiche xenobiotiche lipofile devono essere metabolizzate per essere eliminate dall organismo I solventi organici lipofili vengono metabolizzati nel fegato essi vengono trasformati in 100 Rischio chimico metaboliti solubili in acqua ed escreti attraverso le urine tram
80. a nel gruppo 1 dallo IARC L esempio della formaldeide riassume la molteplicit dei bersagli biologici per un unico xenobiotico tossico Per ci la protezione da applicare per una tale sostanza volatile deve includere non solo norme generali ventilazione ma anche protezioni individuali maschere guanti protettivi e occhiali Prevenzione del rischio chimico Uno degli obiettivi essenziali della prevenzione del rischio chimico evitare ogni interazione delle sostanze chimiche con altre acqua os sigeno sostanze incompatibili o con elementi vitali costituenti l or ganismo Di regola i prodotti chimici devono essere considerati sostan ze potenzialmente pericolose A fine di controllare il rischio bisogna stabilire misure preventive collettive e rispettare misure individuali di sicurezza di ordine generale Prima di tutto devono essere prese misure di prevenzione collettiva esse devono avere la priorit sulle misure di protezione individuale Un primo intervento di prevenzione quello di identificare il peri colo e l eventuale rischio leggendo dati sulla sicurezza nella manipo lazione di sostanze chimiche pure o sotto forma di preparazioni Regole generali sulla prevenzione del rischio chimico sono scritte nelle direttive 80 1107 CEE e 88 642 CEE I principi fondamentali della prevenzione sono applicati al rischio chimico ed essi sono descritti nel Capitolo sulla manipolazione di agenti genotossici 108 Rischi
81. a norma dell articolo 38 della legge 128 del 24 aprile 1998 Decreto Legislativo 66 del 25 febbraio 2000 attuazione delle direttive 97 42 CE e 99 38 CE in materia di protezione dei lavoratori contro i rischi deri vanti da esposizione ad agenti cancerogeni o mutageni durante il lavoro 228 Allegato II RADIOPROTEZIONE Decreto del Presidente della Repubblica 185 del 13 febbraio 1964 sicurez Za degli impianti e protezione sanitaria dei lavoratori e delle popolazioni con tro i pericoli delle radiazioni ionizzanti derivanti dall impiego pacifico del l energia nucleare Decreto Presidente della Repubblica 1704 del 30 dicembre 1965 modifiche ed integrazioni alla Legge 1860 del 31 dicembre 1962 sull impiego pacifico dell energia nucleare G U 9 5 66 n 112 Decreto Legislativo del Governo 230 del 17 marzo 1995 attuazione delle direttive Euratom 80 836 84 467 84 466 89 618 90 641 e 92 3 in materia di radiazioni ionizzanti Decreti applicativi che hanno modificato in parte il decreto legislativo 230 del 17 3 95 D M del 6 marzo 1998 con cui sono stabilite le procedure per l inoltro delle istanze di deroga ai divieti di cui al presente articolo D M del 21 novembre 1997 definizione delle procedure per l inoltro delle richieste di approvazione di programmi di ricerca clinica compor tanti l esposizione di persone a radiazioni ionizzanti D M del 21 febbraio 1997 titoli di studio e qualificazioni professionali richies
82. a sul suo assorbimento al carbone attivo e dalla quantit versata in questo caso pu essere sufficiente una maschera a conchiglia usa e getta del tipo FFP3SL Copriscarpe Rotolo di plastica adesiva ampio circa 0 5 m e La prima cosa da fare dopo aver indossato i Dispositivi di Pro tezione Individuale quando si entra nell area contaminata lo calizzare esattamente l area da decontaminare tracciando un cer chio sul pavimento Il cerchio dovr essere pi grande dell area effettivamente contaminata per un piccolo versamento dovr 136 Rischio chimico essere almeno della misura di due braccia e per grossi versamen ti tanto quanto necessario Durante questo periodo di delimitazione deve essere osservato se gli arredi armadi frigo riferi devono essere decontaminati Decontaminazione dell area raccogliere tutti i pezzi di vetro rotto e metterli nel contenitore ad ampia apertura usato per la decontaminazione Cambiarsi i guanti esterni ad ogni pezzo di vetro raccolto e in caso di segni di danneggiamento dei guanti esterni cambiarsi anche quelli interni Nota Se l area troppo grossa perch sia possibile l accesso ad ogni sua parte allungando il braccio si pu posizionare sul pavimento un tappeto pla stico adesivo al fine di facilitare l accesso Questo pu essere fatto pulendo con degli stracci in tessuto l area davanti al rullo di tappeto adesivo La super ficie di questo tappeto da considerarsi
83. a tra 320 e 400 nm Per la componente UV di provenienza solare la porzione assorbita dall ozono degli strati superiori dell atmosfera e zona middle tra 320 e 280 nm trasmesse attraverso il vetro e zona far tra 280 e 160 nm assorbite dal vetro e trasmesse at traverso l aria e il quarzo zona vacum sotto i 160 nm che possono esistere solo nel vuo to o in un gas inerte confinato In laboratorio una esposizione a raggi UV pu accadere in diverse circostanze nel corso della sterilizzazione degli ambienti con lampade a luce UV nella evi denziazione di composti chimici utilizzando lampade UV con una lunghezza d onda di 366 nm nel corso di analisi di cromatografia su strato sottile su carta e nell utilizzo di tecniche elettroforetiche I pi comuni effetti osservabili nelle esposizio ni professionali sono eritema cutaneo cheratocongiuntivite dicheratosi cronica delle pareti esposte tumori della pelle La sorveglianza medica per il rischio radiazioni ottiche e da laser comprende essenzialmente visite oculistiche e dermatologiche oltre all accertamento dello stato generale di salute del soggetto effettuate secondo i criteri della medicina preventiva La visita oculistica dovr comprendere tra l altro l esame dell acutezza visiva e del fondo non ch la biomicroscopia con lampada a fessura la retinografia soprattut to se a colori costituir una interessante integrazione della documenta zione clinica
84. a un esposizione ad agenti biologici durante il lavoro settima direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 39 1 CEE Direttiva della commissione 95 30 CE del 30 giugno 1995 al progresso tec nico della direttiva 90 679 CEE del consiglio relativa alla protezione dei la voratori contro i rischi derivanti da un esposizione ad agenti biologici durante il lavoro Direttiva della Commissione 97 59 CE che adatta al progresso tecnico la direttiva 90 679 CEE del Consiglio relativa alla protezione dei lavoratori contro 1 rischi derivanti da un esposizione ad agenti biologici durante il lavoro set tima direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE Direttiva della Commissione 97 65 CE del 26 novembre 1997 recante terzo adattamento al progresso tecnico della direttiva 90 679 CEE del Consiglio relativa alla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da un esposi zione ad agenti biologici durante il lavoro Direttiva della Commissione 2000 54 CE del 18 settembre 2000 relativa alla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da un esposizione ad agenti biologici durante il lavoro IMPIEGO CONFINATO DI MOGM Direttiva del Consiglio 90 219 CEE sull impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati Decisione della Commissione 91 448 CEE del 29 luglio 1991 concernente orientamenti per la classificazione di cui all articolo 4 della direttiva 90 2
85. agire per almeno 30 minuti e prelevare la stoffa o la carta e il materiale danneggiato con una paletta ed eliminare in appositi contenitori per rifiuti biologici maneggiare i frammenti di vetro con pinze pulire e disinfettare la superficie contaminata autoclavare o immergere per 24 ore nel disinfettante tutto il ma teriale utilizzato copiare le informazioni su un altro foglio e gettare l originale nel contenitore per rifiuti biologici se si verifica contaminazione di documenti In caso di rottura o sospetto di rottura di provette contenenti mate riale potenzialmente pericoloso durante il funzionamento delle centri fughe adottare le seguenti procedure 55 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica fermare il motore e lasciare la centrifuga chiusa per almeno 30 minuti indossare guanti possibilmente di gomma spessa aprire sotto cappa di sicurezza biologica i rotori o i contenitori a tenuta recuperare i frammenti di vetro o di plastica usando le pinze autoclavare o immergere in un disinfettante per 24 ore tutte le provette rotte i frammenti di vetro i contenitori gli accessori e il rotore non usare ipoclorito per disinfettare 1 metalli perch corrosivo pulire l interno della centrifuga e lasciare agire un disinfettante per tutta la notte quindi lavare con acqua e asciugare trattare come rifiuti biologici tutti i materiali contaminati In caso di iniezioni tagli e a
86. ali adeguati livelli di contenimento adeguate attrezzature adeguate norme di comportamento in laboratorio adeguate misure di protezione collettive e o individuali Per la rimozione o la riduzione del rischio di contaminazione risulta inoltre di fondamentale importanza la professionalit l addestramento l esperienza ed il buon senso dell operatore fanno quindi parte integran te del programma di prevenzione la formazione e l aggiornamento pe riodico del personale e l elaborazione di un manuale con l indicazione di apposite procedure da adottare durante le attivit o in caso di incidente Il manuale di biosicurezza dovrebbe necessariamente essere pre sentato e consegnato a tutti coloro che intraprendono per la prima volta una qualsiasi attivit con agenti biologici Livelli di contenimento dei laboratori I livelli di contenimento definiscono i requisiti minimi necessari per fornire un adeguata protezione al personale che lavora con agenti biologici ed impedire la contaminazione dell ambiente circostante Qualunque siano le attivit svolte in un laboratorio si devono tenere 37 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica comunque presenti le seguenti indicazioni e Il laboratorio dovrebbe essere dotato di spazi sufficientemente ampi in modo da operare senza possibilit di scontri accidentali tra le persone e contro le apparecchiature Muri soffitti e pavimenti dovrebbero essere
87. alina dopo 4 minuti di contatto di minuisce di circa 0 5 mg cio di un fattore gt 10 Se invece le due paia di guanti sono separate da uno strato di crema non si rilevato alcun passaggio Similmente la diffusione di NMDA in soluzione di cloruro 124 Rischio chimico di metilene ridotto da circa l 896 in 10 minuti a circa lo 0 5 usando un paio di guanti in lattice separati da uno strato di crema Questo permette di aumentare il periodo di tempo utile per cam biarsi i guanti esterni quando vengano contaminati Gough et al 1978 hanno scoperto che le N nitroso ammine in soluzione di esano diffon dono attraverso i guanti in vinile e lattice mentre le N nitroso pirrolidine passano rapidamente in ogni caso Sansone e Tewari 1978 hanno inol tre dimostrato che i guanti di lattice PVC e neoprene sono permeabili alle nitrosammine Per se queste sostanze sono sciolte in cloruro di metilene diffondono attraverso tutti i tipi di guanti se sciolte in acetone i guanti in lattice permettono una protezione migliore ma non completa Per le soluzioni di etanolo i guanti in nitrile e neoprene rappresen tano la protezione migliore Infine si visto che per quanto riguarda le soluzioni acquose solo i guanti in nitrile sono permeabili ad esse Dal momento che le N nitrosammine in soluzione sono molecole piccole ci si potrebbe stupire del fatto che ci sia il rischio di passaggio di molecole pi grandi Castegnaro et al 1982 hanno
88. anismi geneticamente modificati OGM devono essere tenuti in considera zione i test diagnostici indicanti esposizione contatto e possibile colonizzazione e o infezione da OGM e loro prodotti Per esempio per i lavoratori che manipolano OGM di classe II le infezioni causate da vettori retrovirali possono essere scoperte monitorando l espressione delle proteine retrovirali cercando il virus infettante e identificando la risposta immunologica a questi La manipolazione di OGM di classe I quelli a basso rischio per effetti avversi alla salute umana potrebbe provocare un rischio di contaminazione con prodoti genetici e poich alcuni di questi possono essere utilizzati come vettori per il trasferi mento di geni nelle cellule eucariotiche questi potrebbero anche se ci improbabile essere inseriti nel genoma dei lavoratori esposti Tabella IV Agenti biologici per i quali disponibile un vaccino Bordetella pertussis Febbre gialla Clostridium tetani Virus dell epatite B Corynebacterium diphtheriae Virus dell epatite D Haemophilus influenzae Virus influenzale tipi A B Mycobacterium africanum Virus del morbillo Mycobacterium bovis Virus della parotite Mycobacterium tuberculosis Virus dell epatite A Neisseria meningitis Virus della poliomielite Salmonella paratyphi A B C Monkeypox virus Salmonella typhi Variola mayor amp minor virus Yersinia pestis Withepox virus variola virus Febbre della Valle del Rift Vi
89. ano si idrolizza libe rando acido cloridrico molto corrosivo e alcuni derivati ossigenati organici di silicio dimetilsilanoli e polimeri metil o dimetilsilossano figura 7 H H H 2 2 HO gt 2 HCI i H vi H H I H HC Dimetildiclorosilano Dimetilsilanolo Polimero del dimetilsilossano Figura 7 Idrolisi del dimetildiclorosilano Alcuni composti instabili in presenza d acqua possono rilasciare sostanze chimiche molto tossiche Alcuni agenti alchilanti usati in biologia molecolare venuti a con tatto con l acqua possono rilasciare prodotti molto reattivi In caso di penetrazione nell organismo l acqua dell ambiente bio 89 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica logico circa il 75 96 nell organismo umano idrolizzer queste mole cole questo implica la formazione di alcuni agenti intermedi reattivi All interno della cellula questi reagenti possono legarsi con protei ne e acidi nucleici come il DNA Nel caso del legame con il DNA le mutazioni talvolta irreversibili possono iniziare un processo di cresci ta tumorale Nel caso del dimetilsolfato o DMS reattivo usato per identificare se quenze interattive come DNA proteine nella tecnica Mobility Shift Assay ci sono due reazioni competitive da una parte una reazione di metilazione che pu danneggiare il DNA dall altra un idrolisi Figura 8 HC OH ge M DNA f E DEL LI
90. anza usata Tuttavia non sicuro che essi assicurino una protezione totale contro la penetra zione cutanea Lavorare con la vetreria porta spesso ad incidenti tagli ai tendini Occorre essere sufficientemente protetti durante queste atti vit guanti e stracci 3 Protezione delle vie respiratorie I lavori con gas tossici fosgene cloro solfuro di idrogeno monos sido di carbonio devono essere svolti se possibile con una maschera di protezione delle vie respiratorie possibilmente usando un auto respiratore Non necessario indossare maschere con cartucce quando la percentuale di vapori tossici nell aria sotto il 2 Si deve conoscere dove posizionata la maschera di protezione e bisogna conoscerne il modo di impiego Per migliorare le condizioni di lavoro e prevenire gli incidenti importante fissare i valori limite di esposizione l americano TLV TWA il tedesco MAC e i francesi VME e VLE Riguardano tuttavia in particolare i prodotti chimici puri Queste condizioni sono spesso assai lontane dalla realt lavorativa del laboratorio dove i prodotti chimici sono spesso associati ad altri fattori dannosi fisici radioattivi microbiologici psicologici 114 Rischio chimico 4 Protezione generale del corpo Si deve indossare un camice pulito di cotone non sintetico e ri spettare un igiene personale rigorosa lavarsi le mani Come regola generale mai lavorare da soli specialmente di notte o durante i gi
91. apore A questa pressione c un equilibrio dinamico tra la fase liquida e la gassosa Dalla pressione di vapore nell aria all equilibrio l operatore pu dedurre se c un rischio di accensione o intossicazione Per il rischio di accensione le concentrazioni in volume sono in dicate in percentuale e per il rischio tossico le concentrazioni sono in parti per milione ppm 1 10 000 ppm b Percentuale di evaporazione La percentuale di evaporazione pu essere quantificata confrontan do la velocit di evaporazione dei composti liquidi con quella dell ete re dietilico comunemente chiamato etere considerato come il solven te pi volatile v 1 Velocit evaporazione della sostanza chimica Volatilit Ta Velocit di evaporazione dell etere c Limiti di infiammabilit Per avere accensione e propagazione dell incendio di un gas o va pore da un liquido volatile la sostanza chimica volatile combustibi le deve essere miscelata con aria ossidante in una speciale percen tuale La concentrazione deve essere tra due limiti e il limite superiore di infiammabilit Upper Flammability Limit UFL e il limite inferiore di infiammabilit Lower Flammability Limit LFL I valori dei limiti di infiammabilit FL e di esplosivit EL sono calcolati in percentuale di gas o vapori nell aria figura 5 85 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica
92. are gravi malattie in soggetti uma ni e costituisce un serio rischio per i lavoratori pu propagarsi nella comunit ma di norma sono disponibili efficaci misure profilattiche o terapeutiche Gruppo 4 Agente biologico che pu provocare gravi malattie in soggetti uma ni e rappresenta un serio rischio per i lavoratori pu presentare un elevato rischio di diffusione nella comunit non sono disponibili di norma efficaci misure profilattiche o terapeutiche In Allegato I riportata la classificazione degli agenti biologici Tale classificazione riflette lo stato delle conoscenze al momento in cui stata concepita e dovr essere aggiornata non appena non rifletter pi lo stato delle conoscenze L Allegato I include unicamente gli agenti che possono provocare malattie in soggetti umani non sono presi in considerazione gli agenti patogeni di animali e piante di cui non sono noti gli effetti sull uomo Microrganismi geneticamente modificati Un microrganismo geneticamente modificato MOGM secondo la Direttiva 98 81 CE un microrganismo entit microbiologica 20 Rischio biologico cellulare e non cellulare capace di replicarsi o trasferire materiale genetico compresi virus viroidi cellule animali e vegetali in coltura il cui materiale genetico stato modificato in un modo non naturale mediante moltiplicazione o ricombinazione naturale Sono considerate non naturali Tecniche di ricombinaz
93. area pulita su cui camminare e Raccogliere la polvere versata con uno straccio inumidito ini ziando ogni raccolta al margine della contaminazione e finendo nella parte maggiormente contaminata Ad ogni azione cambia re straccio e guanti esterni Continuare la pulizia dell area con stracci di tessuto che devono essere bagnati con una soluzione acida o basica cambiarsi i guanti ad ogni operazione Controllare la superficie cercando eventuali punti non decontaminati perfettamente La zona maggiormente contami nata verr sottoposta al Wipe test strofinare su una superficie determinata una garza e verificare il residuo di contaminazione mediante analisi chimico fisica e Sel arearisulta ancora contaminata posizionarvi sopra uno strac cio di tessuto imbevuto di soluzione decontaminante in quantit sufficiente ad inzuppare completamente lo straccio ma non tale da allagare l area e Lasciar reagire il tempo necessario rimuovere lo straccio e asciu gare Nota tutti i tessuti a questo punto devono essere considerati contaminati 137 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Decontaminazione degli arredi se stato osservato un versa mento anche sugli arredi questi dovranno essere decontaminati utilizzando la stessa procedura seguita per il pavimento usando stracci inumiditi di soluzioni acide o basiche se necessario Decontaminazione dei rifiuti questi dovranno o essere brucia ti n
94. ario rimuovere lo straccio e asciu gare Nota tutti i tessuti a questo punto devono essere considerati con taminati Decontaminazione degli arredi se stato osservato un versa mento anche sugli arredi questi dovranno essere decontaminati utilizzando la stessa procedura seguita per il pavimento usando stracci inumiditi di soluzioni acide o basiche se necessario e Decontaminazione dei rifiuti questi dovranno o essere brucia ti nell inceneritore o messi sotto cappa per il trattamento con le tecniche chimiche appropriate Solo a questo punto l area pu essere aperta ai lavoratori Versamento di composti in polvere Nel caso di versamento di composti in polvere i rischi principali per i lavoratori sono la contaminazione dei vestiti da parte di piccole parti celle e la disseminazione della polvere nell atmosfera attraverso il si stema di ventilazione I lavoratori dovranno lasciare l area inquinata immediatamente e togliersi i vestiti contaminati nell area adiacente e L accesso nell area contaminata e nella zona dove sono stati ab bandonati gli abiti contaminati sar proibito sino ad avvenuta decontaminazione e Il lavoratore coinvolto informer le persone del gruppo di sicu rezza facendo un rapporto sull incidente il luogo e le circostan ze che lo hanno determinato e Il rapporto dovr includere le seguenti informazioni Nome del composto versato Ammontare del composto versato L area potenzialmente i
95. arious gloves to carmustine exposure Pharmaceutical Journal 238 775 777 1987 Turjanmaa K Incidence of immediate allergy to latex gloves in hospital personnel Contact Dermatitis 17 270 275 1987 Vandenplas O Delwiche J P Evrard G Aimont P Van Der Brempt X Jamart J Delaunois L Prevalence of occupational asthma due to latex among hospital personnel Am J Respir Crit Care Med 151 54 60 1995 Vila L Sanchez G Ano M Uasuf C G Sanz M L Risk factors for latex sensitization among health care workers J Investig Allergol Clin Immunol 9 356 360 1999 Walkers E A Castegnaro M Garren L Pignatelli B Limitation of the protective effect of rubber gloves In Environmental aspects of N nitroso compounds Walker E A Castegnaro M Griciute L Lyle R E Editors IARC Scientific Publication N 19 535 543 1978 Weeks R W Deans B J Permeation of methanolic aromatic amine solutions through commercially available glove materials American Industrial Hygiene Association Journal 38 721 727 1977 Yassin M S Lierl M B Fischer T J O Brien K Cross J Steinmetz C Latex allergy in hospital employees Ann Allergy 72 245 249 1994 Ylitalo L Turjanmaa K Palosuo T Reunala T Natural rubber latex allergy in children who had not undergone surgery and children who had undergone multiple operations J Allergy Clin Immunol 100 606 612 1997
96. asmidico introduzione di DNA in cellule di mammifero vegetali e batteriche sequenziamento genico tecniche di ibridazione utilizzo di vettori nella preparazione di DNA a partire da lisati fagici Si ricorda comunque che prima di utilizzare un composto chimico bisogna leggere attentamente le schede tossicologiche ed informarsi sulle precauzioni da utilizzare 189 061 Tabella IV Principali agenti chimici e fisici usati per Decontaminazione De Disinfezione Di e Sterilizzazione S AGENTE CHIMICO 0 ATTIVITA VANTAGGI USO OSSERVAZIONI FISICO Alcoli denaturano le proteine basso costo eccellenti antisettici su pel inattivati dallo sporco etanolo inibiscono il metabolismo bassa tossicit le integra scarsamente inattivati da proteine materiali na alcol isopropilico cellulare alta attivit su batteri e turali materiali sintetici acqua dura De Di micobatteri facilmente infiammabili scarsa attivit su virus scarsa tossicit per gli occhi non interagiscono con detergenti attivit nulla su funghi e spore Aldeidi denaturano le proteine attivo su batteri micobatteri sterilizzazione di strumenta temperatura tempi di contatto e pH dipendenti St alchilano DNA ed RNA spore oltre 40 C la zione termolabile alta tossicit la formaldeide cancerogena Formaldeide oltre 20 C la scarsamente inattivati da proteine materiali na Glutaraldeide e fu
97. ateriale di cui sono fatti i guanti Il tempo di protezione legato sia alla resistenza ad agen ti chimici solventi del materiale di cui sono costituiti sia al loro spes sore I prodotti cancerogeni e o quelli mutageni possono anche diffonde re attraverso i guanti come dimostrato diversi studi Questa diffusione dipende dalla natura del composto ma anche dal solvente usato per la sua dissoluzione Nel 1977 Weeks e Dean hanno dimostrato che le ammine aromati che possono passare attraverso il materiale dei guanti come tali o in soluzione di metanolo Tabella 1 Dopo mezz ora di contatto con anilina non diluita si sono trovati 67 mg di anilina nella soluzione all interno di guanti chirurgici in lattice Diversi laboratori hanno studiato le N nitrosammine Gough et al 1978 Sansone amp Tewari 1978 Walkers et al 1978 Si visto che sono in grado di diffondere attraverso i guanti in lattice sia nella forma non diluita che in soluzione di cloruro di metilene Walkers et al 1978 In 4 minuti 5 15 mg di N nitroso dimetil ammina NDMA o di N nitroso dietil ammina depositate sul lato esterno di un paio di guanti in lattice sono passati nella soluzione salina posta all interno Per aumen tare la protezione si possono usare due paia di guanti separate da uno strato di talco Tabella 2 o da uno strato di crema Nello studio della NMDA si visto che usando due paia di guanti separati da uno strato di talco il passaggio alla soluzione s
98. ateriali cancerogeno St termolabili tossico mutageno infiammabile esplosivo Todio interrompe i meccanismi di sporicida antisettico chirurgico cuta tossico Di trasporto dell ossigeno cisticida neo attivo solo in certe forme Perossidi perossido di idrogeno gas pla dissolvono le pareti cellulari denaturano le proteine basso costo perossido di idrogeno sterilizzazione di strumenti di laboratorio e piccole at citotossici poco stabile sma non inquinante per l ambiente trezzature strumentazione costosa per il gas plasma St non tossico per i tessuti bio scarsa efficacia in presenza di materiale organico logici Ozono super ossigeno nativo si dissolve in acqua disinfettante dell acqua instabile Di ossida proteine e lipidi insaturi non lascia residui irritante Fenoli penetrano la parete cellulare penetrano i legni e le superfi antisettici topici tossici corrosivi Di denaturano le proteine ci porose disinfettanti ambientali minima attivit sporicida alta attivit su funghi batteri discretamente inattivati da materiali naturali e discreta attivit su micobatteri sintetici scarsa attivit su virus scarsamente inattivati da proteine e acqua dura penetrano facilmente attraverso la pelle irritanti Ammonio interagisce con Ie membrane surfattanti che distruggono i disinfettante ambientale inattivato dai lipidi
99. atii Paracoccidioides brasiliensis Penicillium marneffei Scedosporium apiospennum Pseudallescheria boydii Scedosporium prolificans inflatum Sporothrix schenckii Trichophyton rubrum Trichophyton spp NVWNNN WW NNNMNNN NNNNNON C f r Introduzione punto 3 C f r introduzione punto 4 a Encefalite trasmessa dalle zecche b Il virus dell epatite D esercita il suo potere patogeno nel lavoratore soltan to in casi di infezione simultanea o secondaria rispetto a quella provocata dal virus dell epatite B La vaccinazione contro il virus dell epatite B pro tegge pertanto 1 lavoratori non affetti dal virus dell epatite B contro il vi rus dell epatite D Delta c Soltanto i tipi A e B 217 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica d Raccomandato per i lavoratori che comportano un contatto diretto con questi agenti e Alla rubrica possono essere identificati due virus un genere buffalopox e una variante del virus vaccinia f Variante del Cowpox g Variante di Vaccinia h Non esiste attualmente alcuna prova di infezione dell uomo provocata da altri retrovirus di origine scimmiesca A titolo di precauzione si raccoman da un contenimento di livello 3 per i lavoratori che comportano un esposi zione a tali retrovirus i Nonesiste attualmente alcuna prova di infezione dell uomo provocata dagli agenti responsabili di altri TSE degli ani
100. ato rio La velocit minima raccomandata dal U S Department of Health and Welfare di 0 5 m s perch un flusso di aria troppo intenso favo risce la dispersione della polvere Troppi strumenti possono generare delle turbolenze possibile causa di un ritorno di vapori particelle del cancerogeno ed esporre quindi l operatore agli effetti nocivi di questi L operatore deve indossare abiti di protezione di un colore diverso da quello usato negli altri laboratori occhiali protettivi guanti di coto ne e una maschera L uso di guanti in lattice o vinile favorisce la di spersione della polvere per elettricit statica dovranno quindi essere indossati con sopra un paio di guanti monouso in cotone Dopo la dis soluzione della polvere si devono indossare guanti adatti al tipo di com posto usato 123 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Il flacone contenente il cancerogeno viene poi messo in un lavandi no di ritenzione bene che sia di acciaio inossidabile perch ha il vantaggio di poter essere facilmente decontaminato nel caso sia smal tato bisogna assicurarsi che lo smalto sia intatto coperto con carta as sorbente plastificata su un lato il lato resistente all acqua rivolto verso il lavandino quello adsorbente verso il flacone Rischi connessi al tipo di guanti Numerosi studi hanno dimostrato la permeabilit dei guanti a deter minate sostanze Questa permeabilit dipende dal m
101. atomiche fisiologiche e genetiche pi importanti degli animali che si pensa di utilizzare le condizioni am bientali per loro ottimali ed anche le caratteristiche che essi dovrebbe ro avere per il loro uso come modelli sperimentali Un obiettivo importante nella formazione del personale degli stabulari quello di far conoscere i rischi che il lavoro con animali pu comportare e le adeguate misure per la prevenzione di tali rischi In uno stabulario i principali fattori di rischio sono rappresentati da 1 animali e allergie e trasmissione di zoonosi e aggressivit ed eventi traumatici morsi e graffi e presenza di materiale biologico 2 condizioni ambientali tipo di procedure 4 condizioni fisiologiche del personale W 64 Sperimentazione animale I danni pi frequenti sono allergie causate da allergeni di origine animale processi infettivi causati da patogeni animali zoonosi morsi graffi ed altri incidenti causati dagli animali danni causati da uso improprio del materiale e delle strumenta zioni La maggior parte delle specie animali destinate alla ricerca sono potenziali fonti di microrganismi patogeni Gli animali presenti in stabulario dovrebbero sempre avere una certificazione sanitaria che attesti l assenza di agenti patogeni zoonotici Il personale di laborato rio comunque deve attenersi a procedure precauzionali per scongiurare eventi dannosi Infatti possono essere presenti rischi che deriva
102. avoro Si distinguono 4 livelli di contenimento a seconda delle operazioni svolte all interno del laboratorio 38 Rischio biologico Livello di contenimento 1 Il livello di contenimento 1 indicato quando si compiono opera zioni che presentano rischi nulli o trascurabili per la salute umana e per l ambiente Nel laboratorio devono essere applicate le misure minime di contenimento e di protezione La stanza dove si svolgono le opera zioni dovrebbe essere separata dall esterno tramite una porta che do vrebbe rimanere chiusa durante le attivit Si consiglia la presenza di un lavandino Livello di contenimento 2 Il livello di contenimento 2 indicato quando si compiono opera zioni che presentano basso rischio per la salute umana e per l ambien te Questo livello di contenimento prevede la presenza di una cappa di sicurezza biologica di classe I o II per proteggere il lavoratore da even tuali formazioni di aerosol Il segnale di rischio biologico deve essere esposto sulla porta del laboratorio Deve essere presente un autoclave nel laboratorio o nell edificio al fine di poter inattivare i rifiuti prima dello smaltimento Livello di contenimento 3 Il livello di contenimento 3 indicato quando si compiono opera zioni che presentano un rischio moderato per la salute umana e per l ambiente L accesso al laboratorio strettamente controllato ed ne cessaria la presenza di una cappa di sicurezza biologica di classe I
103. batteriche e le cellule vegetali I geni per la virulenza sono attivati in agrobatterio da sostanze fenoliche tra cui l acetosiringone prodotte da cellule vegetali lesionate I geni patogeni dei plasmidi Ti ed Ri non sono necessari per il pro cesso di trasferimento essi possono quindi essere rimossi e sostituiti con i geni da inserire nella pianta I plasmidi Ti e Ri sono troppo grandi e non sono adatti come vettori primari I geni estranei vengono quindi inseriti in questi vettori principalmente attraverso il sistema del vettore 25 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica binario Fraley et al 1986 Klee et al 1987 Altri sistemi disponibili per la produzione di piante geneticamente modificate quali l uso di virus come vettori l elettroporazione ed il bombardamento di microproiettili sono gli stessi di quelli utilizzati per la trasformazione di cellule animali Gli agrobatteri come altri fitopatogeni non sono compresi nella clas sificazione europea degli agenti biologici Allegato I i ricercatori che operano in tale campo sono forse meno a rischio ma hanno maggiori difficolt a reperire informazioni sulla pericolosit degli agenti biolo gici utilizzati Produzione di citochinine Sintesi delle opine Produzione delle auxine Bordo destro Bordo sinistro Trasferimento coniugativo PLASMIDE Ti Catabolismo delle opine Regione di virulenza Origine di replicazion
104. brasioni accidentali usare la seguente procedura togliersi i guanti e gli indumenti protettivi sciacquarsi le mani e la parte colpita abbondantemente applicare un disinfettante adatto per la pelle recarsi al pronto soccorso e informare il medico di turno sulla causa della ferita e se possibile fornire informazioni riguardo all agente microbiologico coinvolto In caso di ingestione accidentale di materiale potenzialmente peri coloso si devono togliere gli indumenti protettivi e recarsi al pronto soccorso informare il medico circa il materiale ingerito In caso di incidente con agenti biologici pericolosi che si trasmetto no per via aerea oltre ai normali dispositivi di protezione individuale si devono proteggere le vie respiratorie indossando facciali filtranti del tipo FFP3SL che forniscono protezione contro gli aerosol solidi e li quidi Quando s indossa la maschera facciale FFP3SL si devono segui re queste norme 56 Rischio biologico tenere il facciale nel cavo della mano lasciando pendere libera mente la bardatura porre il facciale sotto il mento con il sistema stringinaso rivolto verso l esterno portare l elastico inferiore dietro la nuca sistemandolo al di sotto delle orecchie premere il facciale contro il viso con una mano portare l elasti co superiore dietro la testa sistemandolo al di sopra delle orec chie regolare la tensione tirando i lembi di ciascun elastico la tensio ne si pu ridu
105. cambiamenti per la salute e per la sicurezza dei lavoratori che rendano sorpassata la precedente notifica Notifica per l uso di MOGM Coloro che intendano procedere per la prima volta in un determina to impianto ad un impiego confinato sono tenuti a sottoporre alle Auto rit Competenti del proprio Stato prima di iniziare tale impiego una notifica nei termini previsti dalla Direttiva 98 81 CE Allegato V parte A Dopo tale notifica il successivo impiego confinato della classe 1 pu aver luogo senza ulteriori notifiche Gli utilizzatori dei MOGM per impiego confinato di classe 1 devono per conservare i verbali relativi alla valutazione del rischio e devono metterli a disposizione delle autorit competenti Per l impiego confinato di classe 2 in impianti gi notificati deve essere presentata una notifica sia in occasione del primo impiego che di quelli successivi secondo le indicazioni contenute nell Allegato V parte B Anche per gli impieghi confinati di classe 3 e 4 in impianti gi no tificati deve essere presentata una notifica sia in occasione del primo impiego che di quelli successivi secondo le indicazioni contenute nel l Allegato V parte C Un impiego confinato della classe 3 o di una classe pi elevata non pu aver luogo senza l approvazione dell Autorit Competente che comunica la sua decisione per iscritto e Entroe non oltre 45 giorni dalla presentazione di una nuova notifi ca se gli impianti sono stati o
106. ce testati al PX174 il microrganismo di riferimento per i test relativi la permeazione biologica EN374 importante segnalare che fino ad oggi non esistono guanti capaci di dare una protezione assoluta I guanti monouso per rischio biologico devono avere marcatura EN374 richiesta per operazioni dove sono prevedibili elevate esposizioni a microrganismi biologici non essere indossati per un tempo superiore a 30 essere scartati se presentano difetti visibili ad occhio nudo essere sempre rimossi quando si esce dall area di lavoro o si toccano oggetti puliti e mal essere lavati e o riutilizzati I guanti sterili dovranno essere usati solo nei casi dove sia stretta mente necessario Si ricorda che il livello di protezione si attenua con il protrarsi del loro utilizzo infatti il guanto perde le sue propriet di elasticit e l effetto della sudorazione delle mani favorisce la permeazione dall esterno Al fine di prevenire possibili allergie ogni 51 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica qualvolta sia possibile consigliato utilizzare guanti in nitrile o in vinile evitando quindi i guanti in lattice Per operazioni di pulizia bene indossare guanti in gomma ispessiti oppure un doppio paio di guanti monouso I guanti devono essere indossati anche durante la manipolazione di provette in congelatori o in contenitori di azoto liquido sovrastati da guanti adeguati per la protezione
107. centrazione data di preparazione nome dell operatore Dopo aver preparato la soluzione madre chiudere il flacone del composto e riportarlo nel deposito adottando le stesse precauzioni di quando lo si prelevato Dopo la preparazione della soluzione madre i flaconi correttamen te etichettati devono essere messi in contenitori provvisti di un agente adsorbente ad es vermiculite e simili infrangibili e con chiusura a tenuta Questi contenitori possono essere trasportati nei laboratori ed utilizzati per conservare le sostanze nei frigoriferi antiesplosione e dotati di sistema di allarme Trasporto dei cancerogeni Consideriamo due possibili situazioni il trasporto di cancerogeni e mutageni all interno dell edificio dove verranno usati ed il trasporto da un istituto ad un altro per via aerea ferroviaria o su strada Trasporto dei cancerogeni all interno dei laboratori Il trasporto pu essere effettuato solo dai laboratori che sono attrez zati e strutturati per l uso di queste sostanze ed il cui personale sia consapevole della pericolosit dei cancerogeni e dei mutageni Per evitare che queste sostanze si disperdano nell ambiente di la voro i flaconi che le contengono devono essere messi in contenitori a tenuta ermetica e dotati di una chiusura che non si apra anche in caso di caduta All interno del contenitore come detto dovr essere presente un materiale adsorbente come la vermiculite Si preferisce trasportare queste s
108. chimiche dipendono dallo stato fisico del pro dotto gassoso o fase vapore liquido o solido Forme particolari come gli aerosol solidi o liquidi finemente suddi visi in sospensione nell aria sono da tenere nelle dovuta considerazione in quanto entrano nell organismo molto velocemente attraverso l appa rato respiratorio L uso di reagenti sotto forma di spray pu presentare considerevoli rischi a seconda della natura del prodotto polverizzato Ad esempio l acido solforico concentrato sotto forma di spray un potente cancerogeno bronco polmonare per l uomo Il rischio chimico fisico dipende da un lato dalle propriet fisico chimiche come l instabilit V infiammabilit la volatilit e dall altro lato dalla reattivit chimica ovvero dalla capacit delle sostanze di re agire con se stesse o con altre Esplosione incendio e alcuni rischi tossicologici relativi a sostan ze chimiche direttamente tossiche la cui reattivit sufficiente a per mettere l interazione con i costituenti biologici sono dipendenti dalle propriet fisico chimiche come indicato nel figura 3 PROPRIETA FISICO CHIMICHE TN I INSTABILIT INFIAMMABILIT VOLATILIT SOLUBILIT y Y Y y ESPLOSIONE INCENDIO TOSSICIT ME REATTIVIT CHIMICA Figura 3 Principali rischi associati alle sostanze chimiche 80 Rischio chimico 1 Rischio relativo all instabilit chimica
109. ci come il DNA Altre sostanze chimiche sono totalmente estranee agli organismi viventi e non partecipano alla loro attivit biologica questi sono i com posti esogeni detti xenobiotici ovvero estranei alla vita Le sostanze base della chimica materie prime monomeri sol venti ma anche sostanze pi sofisticate utilizzate nella chimica fine come reattivi di laboratorio medicinali pesticidi ecc sono xenobiotici Di conseguenza prenderemo in considerazione solo gli agenti tossi ci xenobiotici in particolar modo 1 solventi e le sostanze chimiche uti lizzate in biologia 1 Come definire un prodotto tossico Una sostanza chimica definita tossica quando dannosa per una o pi funzioni fisiologiche degli esseri viventi La tossicologia la scienza che studia le sostanze tossiche ed multidisciplinare in quanto deve integrare nozioni di chimica e di bio logia Grazie alla tossicologia chimica si possono studiare le interazioni fra le sostanze ad esempio uno xenobiotico tossico con il suo bersa glio biologico Quando avvengono queste interazioni possibile individuare il motivo per cui si produce un effetto dannoso sulla salute evidente che il comportamento di uno xenobiotico debba essere considerato nel suo ambiente e l impatto che pu avere su differenti ecosistemi deve essere considerato come parte di un quadro globale dei possibili effetti tossici Questo quadro globale delle informazioni derivanti
110. colt respiratorie o quando stato danneg giato od visibilmente sporco Tutti gli incidenti vanno registrati in modo appropriato seguendo le istruzioni fornite dal proprio Istituto di appartenenza Bibliografia Campi M G Bet P Ruzzon T Doria Miglietta G Sossai D Guida al corretto utilizzo degli agenti biologici ed EPC Libri 1998 Manuale di biosicurezza in laboratorio II Ed Annali dell Istituto Superiore di Sanit Istituto Superiore di Sanit 1995 58 Rischio biologico SPEDIZIONE DI MATERIALI BIOLOGICI DEPERIBILI E O POTENZIALMENTE INFETTI Paola Bet Silvia Franchello Le attivit connesse al trasporto e alla spedizione di materiali biolo gici deperibili di campioni diagnostici e di sostanze infette costitui scono un giustificato motivo di preoccupazione per tutti i soggetti inte ressati dai ricercatori agli analisti dal personale dei laboratori a quello addetto ai servizi di trasporto ed ai servizi postali Le Organizzazioni internazionali coinvolte nella problematica relativa alla manipolazione e trasporto di materiali biologici e sostanze deperibili Comitato esperti ONU sulle sostanze pericolose Organizzazione Mon diale della Sanit Organizzazione Internazionale dell Aviazione Civile Associazione Internazionale Trasporto Aereo Unione Postale Universale hanno nel tempo predisposto delle direttive che se da un lato garantiscono la rapidit del trasporto delle sostanze infette e dei campi
111. cupazionali del l impresa Questi esami possono anche essere effettuati 1 alla ripresa del lavoro dopo un assenza prolungata per ragioni di salute con lo scopo di evidenziare eventuali possibili cause occupazionali raccomandare azioni appropriate per proteggere i lavoratori e determinare l idoneit per il lavoro o la necessit di riassegnazione e riabilitazione 2 a richie sta del lavoratore per esempio quando lui lei cambia lavoro e in parti colare quando un lavoratore cambia lavoro per ragioni mediche In alcuni casi al medico addetto alla sorveglianza sanitaria pu essere richiesto di eseguire un esame medico ai lavoratori dopo la cessazione dei loro lavori o incarichi per stabilire le condizioni di salute e conside rando le informazioni fornite dagli esami periodici precedenti per valu tare gli effetti del lavoro assegnato sulla salute del lavoratore Potrebbe essere necessario effettuare la sorveglianza sanitaria anche al termine del 170 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori lavoro per persone che sono state esposte ad agenti con effetti a lungo termine con lo scopo di garantire una diagnosi precoce e un trattamento di malattie quali cancro alla cute ai polmoni e alla vescica Gli esami medici devono servire per prevenire e proteggere non solo la salute dei lavoratori ma anche a proteggere l accesso al lavoro garan tire un risarcimento e benefici di assicurazione della salute e di protezio ne sociale In nes
112. cuta nuove sequenze con nuovi e imprevedibili neo e gli aereosol Verificare l esistenza di speciali misure di sicurezza in rela metodi di auto propagazione zione all organismo trattato Creazione di un piano d emergenza Per quanto riguarda le maschere l efficienza nei confronti delle particelle submicroniche polveri ultrafini e aerosol i sistemi filtranti usati devono avere un efficienza di almeno il 99 99 su particelle di 0 3 micrometri classe P3 secondo la regolamentazione EN 143 si tratta delle uniche maschere efficaci per la protezione dal rischio biologico I guanti devono essere del tipo testato al PX174 per la protezione da micro organismi secondo EN 374 eoibojou2ajolq 2248911 Ip LOIEIOGE rep ajeuosJad Jad EZzaInoIs Ip ajenue Precauzioni per l uso di agenti biologici e chimici Tabella VI Principali fonti di rischio chimico nei laboratori di ricerca Composto RISCHIO PREVENZIONE Acido acetico glaciale Irritante 1 2 4 Sprigiona vapori fortemente irritanti Evitare l inalazione il contatto cutaneo e con gli occhi Anidride acetica Corrosivo infiammabile 1 2 4 Sprigiona vapori fortemente irritanti Evitare l inalazione il contatto con gli occhi Acetonitrile Infiammabile 1 2 3 Tossico Acrilamide Neurotossico allergenico cancerogeno neurotossico 1 23 quandosi trova in forma non polimerizzata Actinomicina D Molto tossica 1 2 3
113. derato 0 1 mCi L esame della tiroide post espo sizione dovr essere fatto almeno 24 ore dopo e comunque entro una settimana dopo l esposizione a I Inoltre tutti gli operato ri che assistono o effettuano delle sperimentazioni con i quantitativi indicati o che lavorano nella stessa stanza entro al cuni metri in modo da essere comunque esposti a I devono essere sottoposti agli esami sopra citati Il vetro scorrevole della cappa fornisce protezione adeguata per sperimentazioni con io dio Non sono consigliate ulteriori protezioni poich potrebbero ostacolare il flusso dell aria all interno della cappa E consigliato usare un ago cannula per aprire le fiale contenenti 125 Questo impedisce la formazione di spruzzi E bene dividere i rifiuti con iodurazione libera o legata I rifiuti 163 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica ermeticamente chiusi verranno momentaneamente immagazzi nati sotto cappa o armadi aspiranti comunque dovranno essere sempre conservati o in sacchetti sigillabili o in caso di liquidi in contenitori a chiusura ermetica Le provette per iodurazioni oltre ad essere chiuse dovranno es sere avvolte da una pellicola di parafilm in modo da impedire il rilascio accidentale durante le operazione di conta o nelle fasi di agitazione fuori dalla cappa aspirante 164 LA SORVEGLIANZA DEI LAVORATORI Bruno Papaleo Stefano Signorini Nicoletta Vonesch Cinzia Lucia Ursini
114. di un non corretto uso di materiale attrezzature e prodotti chimici e Addestramento su come maneggiare gli animali Attrezzature e dispositivi di protezione individuali gli abiti da lavoro dovrebbero essere lavabili e resistenti alle alte temperatu re le calzature comode e preferibilmente lavabili e si dovrebbero indossare guanti e maschere quando si lavano le gabbie e per tutte le operazioni che comportano produzione di polveri respirabili I Dispositivi di Protezione del personale devono essere tenuti in un posto specifico mantenuto pulito e sostituito quando necessario e Igiene personale Il personale deve farsi la doccia dopo il lavoro Gli operatori devono lavarsi le mani e cambiarsi d abito pri ma dei pasti e alla fine della giornata di lavoro Gli abiti da lavoro devono essere lavati quotidianamente Il personale dovrebbe evitare di ferirsi e quando capita copri re immediatamente i tagli Buone pratiche di laboratorio Non mangiare n bere nel laboratorio e non fumare Non toccarsi il naso o il viso mentre si lavora in laboratorio Norme di pronto soccorso Il personale dovrebbe essere in grado di utilizzare il kit di pronto soccorso che dovrebbe essere ben visibile e contene re sapone siero aghi sterili e siringhe acqua ossigenata io dio tamponi di cotone cerotti garze e bende sterili analgesici forbici un paio di pinzette ed un bisturi Il personale dovrebbe essere a conoscenza del t
115. disinfettati Essere provvisti di muri senza ringhiere protettive resistenti agli urti dei carrelli ed eventuali altri dispositivi mobili privi di fes sure e resistenti agli oggetti che vi sono appoggiati alle spazzo le ai prodotti disinfettanti ed alla pressione dell acqua i possi bili fori nei muri dovrebbero essere sigillati cos come le super fici di giunzione dei pavimenti e dei soffitti che dovrebbero avere una curvatura di 15 cm e Avere soffitti con le stesse caratteristiche dei muri quelli fatti di lastre ad incastro non sono consigliabili perch non sono pulibili con semplicit e possono costituire un facile nascondiglio per insetti e roditori E inoltre consigliabile non lasciare tubature o attrezzature scoperte se presenti quest ultime devono poter es sere facilmente lavate e disinfettate Salvo speciali richieste l al tezza dei soffitti dovrebbe essere non superiore a 2 70 m Essere provvisti di porte ad apertura verso l interno a meno che non ci sia un anticamera con le cerniere delle porte incassate nel muro e a chiusura automatica Le porte degli stabulari non dovrebbero avere dimensioni minori di 1 10 m di larghezza e 2 15 m di altezza e devono poter essere chiuse ermeticamente in modo da impedire ad insetti o a roditori selvatici di introdursi nelle gabbie sono da preferirsi porte in metallo con delle strisce protettive applicate sulla parte bassa e lungo i bordi e dotate di una finestrella per poter
116. do utilizzati per il monitoraggio individuale e collettivo dei lavoratori esposti Tuttavia essi non devono sostituire la sorveglianza dell ambiente di lavoro e la valutazione delle esposizioni individuali Precedenza assoluta deve essere data ai criteri ambientali limiti di esposizione su quelli biologici esposizione biologica e limiti I valori trovati comunemente nella collettivit devono essere presi in considerazione per valutare i risultati del monitoraggio biologico La sorveglianza sanitaria dei lavoratori pu essere prescritta dalla legge Tab III oppure no e pu essere obbligatoria o volontaria Tabella III Direttive principali relative alla sorveglianza sanitaria dei lavoratori NUMERO SOGGETTO ARTICOLO 89 391 Sicurezza occupazionale e miglioramento della salute art 14 90 304 Rischio cancerogeno art 14 all IT 90 679 Rischio biologico art 14 97 42 Rischio cancerogeno 90 304 Rischio cancerogeno modificato per la 1 volta art 14 all IT 98 24 Agenti chimici art 10 99 38 Rischio cancerogeno 90 304 Rischio cancerogeno modificato per la 2 volta art 14 all IT 172 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori Sorveglianza sanitaria nella ricerca biotecnologica I rischi potenziali in un laboratorio o industria biotecnologica inclu dono esposizione ad agenti biologici compresi microrganismi ricombinanti e non ricombinanti agenti chimici e una molteplicit di rischi fisici Rischi biologici
117. dovranno svolgere allevamento test tossicologici ricerca biomedica ecc anche se per ognuna di queste attivit bene che gli animali siano tenuti in condizioni ambientali costanti in assen Za di agenti fisici chimici e microbiologici Devono inoltre essere pre senti delle aree di servizio aree per gli animali e zone di interconnes 66 Sperimentazione animale sione o corridoi che garantiscano una corretta circolazione di persona le animali materiale ed apparecchiature Un laboratorio nel quale hanno luogo esperimenti su animali deve essere dotato almeno delle seguenti strutture area per la riproduzione e l allevamento degli animali area per la sperimentazione animale locali e strutture di supporto area di quarantena e aree di lavaggio delle gabbie area per uffici Le zone di riproduzione degli animali dovrebbero essere fisicamen te separate dalle aree dedicate al personale in modo da garantire la sicurezza per la salute pubblica il benessere del personale ed il con trollo delle regole ambientali Tutte le operazioni di laboratorio che riguardino gli animali dovrebbero tener conto delle appropriate condi zioni di vita per l animale una certa libert di movimento acqua e cure specifiche minime restrizioni per i loro bisogni fisiologici ecc e delle procedure di ricerca che dovrebbero garantire il raggiungimento degli obiettivi prefissati cercando di evitare o quanto meno ridurre pos sibili sofferenze
118. e Figura 2 Struttura del plasmide Ti dell Agrobacterium tumefaciens Bibliografia Berkner K L Expression of heterologous sequences in adenoviral vectors Curr Top Microbiol Immunolol 158 39 66 1992 Bern KL Linden R M The cryptic life style of adeno associated virus Bioessays 17 237 45 1995 Draper J Scott R Armitage P Walden R Plant Genetic Transformation and Gene Expression Eds Draper J Scott R Armitage P Blackwell Scientific Publications 1988 26 Rischio biologico Fraley R T Rogers S G amp Horsch R B Genetic transformation in higher plants CRC Critical Reviews in Plant Sciences 4 1 46 1986 Jones L K Tuddenhan E G Gene therapy for the haemophilias Gene Ther 2 699 701 1995 Kay M A Glorioso J C and Naldini L Viral vectors for gene therapy the art of turning infectious agents into vehicles of therapeutics Nature Medecine 7 33 40 2001 Klee H Horsch R amp Rogers S Agrobacterium mediated plant transformation and its further applications to plant biology Annual Review of Plant Phisiology 38 467 86 1987 Melchers L S and Hooykaas P J J Virulence of Agrobacterium Oxford Surveys of Plant Molecular and Cell Biology 4 167 220 1987 Miller D G Adam M A and Miller A D Gene transfer by retrovirus vectors occurs only in cells that are actyvely replicating at the time of infection Mol Cell Biol 10 4239 4242 1990 Naldini L Blomer U Gallay P
119. e L accesso nell area contaminata e nella zona dove sono stati ab bandonati gli abiti contaminati sar proibito sino ad avvenuta decontaminazione e Il lavoratore coinvolto informer le persone del gruppo di sicu rezza facendo un rapporto sull incidente il luogo e le circostan ze che lo hanno determinato e Il rapporto dovr includere le seguenti informazioni 132 Rischio chimico Nome del composto versato Ammontare del composto versato L area potenzialmente inquinata L esatta localizzazione dell incidente per esempio se il ro vesciamento nel mezzo di una stanza o all interno di un frigorifero o su una attrezzatura particolare e del posto dove 1 vestiti contaminati sono stati abbandonati La presenza od assenza di un solvente e in caso di presenza la natura del solvente questa informazione assolutamente necessaria in caso di decontaminazione chimica dell area in quinata Le persone incaricate della decontaminazione prima di interve nire dovranno acquisire tutta l attrezzatura necessaria Questa include Contenitori capienti abbastanza e con apertura ampia in gra do di contenere tutti i pezzi di vetreria rotta i guanti gli indu menti di tessuto utilizzati per pulire l area ecc Una scorta di stracci in tessuto Una scorta di guanti Soluzioni acquose lievemente acide o basiche a seconda del le propriet della sostanza rovesciata Soluzioni decontaminanti Le persone con il compito di dec
120. e clinica di eventuali controindicazioni all esposizione lavorativa al rischio specifico Facendo riferimento alle premesse iniziali opportuno sottolineare che la radioprotezione si va sempre pi delineando come un settore multidisciplinare a forte contenuto fisico medico biologico tecnico ed ecologico con un importante interfaccia verso le scienze sociali Le rac comandazioni dell ICRP sull argomento sono in genere riconosciute come il pi autorevole mezzo per fare il punto della situazione in questo setto re ove appare necessario dare maggiore impulso allo studio degli aspetti fondamentali dell interazione tra radiazione e materia biologica svilup pando una radiobiologia moderna attenta ai progressi nei settori affi ni inclusi quelli compiuti in tempi recenti dalla biologia molecolare 186 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori Le radiazioni non ionizzanti Tra le radiazioni non ionizzanti accenneremo alle radiazioni ultraviolet te tralasciando di parlare delle radiofrequenze e dei campi magnetici in quanto questi ultimi non sono rischi particolarmente presenti nei laboratori Iraggi ultravioletti sono la porzione dello spettro delle onde elettro magnetiche che stanno tra i raggi X a maggiore lunghezza d onda e la luce visibile a pi corta lunghezza d onda e quindi con l aumentare della frequenza nello spettro UV si distinguono 4 zone zona near cio vicina al visibile per raggi UV con lunghezza d ond
121. e di cisteina e metionina marcate con S dovrebbero esse re aperte e usate sotto cappa chimica autorizzata composti volatili di amminoacidi marcati con S dovrebbero essere aperti e usati sotto cappa chimica autorizzata e composti volatili di cisteina e metionina marcate con S si ri tiene che siano rispettivamente solfuro di idrogeno H S e mercaptano metilico CH SH rispettivamente e Vapori di S possono essere rilasciati quando si aprono fiale con tenenti amminoacidi marcati durante l incubazione di colture o cellule contenenti S e la conservazione di rifiuti contaminati di 3S Si pu verificare una contaminazione eccessiva sulle superfici interne e nelle riserve di acqua di incubatori utilizzati con mate riale marcato con S o sulle guarnizioni di gomma di incubatori e centrifughe Durante i processi di congelamento si pu avere rottura di fiale marcate con rilascio anche di 1 0 uCi di S per 8 0 mCi di fiala di amminoacido marcato con S durante il processo di sconge lamento e Il lavoro con amminoacidi marcati con S marcati dovrebbe es sere condotto in una cappa aspirante destinata per lavorare con radioisotopi Durante l apertura delle fiale contenenti amminoacidi marcati 160 Rischio radiologico sarebbe utile farle sfiatare assorbendo il vapore con una siringa monouso dotata di uno strato di carbone attivo con un alta affi nit per i vapori di S A fine di decontaminare gli incubatori in cui vi
122. e di sicurezza biologica poich proteggono il campione da eventuale contaminazione ma non l operatore Le attrezzature presenti nell area di lavoro o il posizionamento del la cappa in prossimit di fonti di calore o di correnti d aria pu alterare il funzionamento della cappa garantendo una minor protezione Le lam pade UV non sono necessarie nelle cappe di sicurezza biologica Se presenti le lampade UV dovrebbero essere pulite settimanalmente per rimuovere la polvere e lo sporco che possono diminuire l effetto germicida dei raggi UV Le lampade devono essere sempre spente du rante le attivit vanno tenute accese per 15 minuti alla fine e almeno 5 minuti prima dell inizio delle attivit L efficacia delle lampade deve essere periodicamente controllata Le cappe di sicurezza biologica di classe I sono utilizzate quando si lavora con agenti biologici a basso rischio proteggono l operatore e l ambiente circostante da eventuali contaminazioni ma non il campio ne L aria esterna viene aspirata all interno della cappa ed espulsa al l esterno dopo essere stata depurata da un filtro HEPA e qualora fosse ro impiegati anche solventi organici da un filtro a carbone attivo 41 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Le cappe di sicurezza biologica di classe II sono utilizzate quando si lavora con agenti biologici a rischio moderato proteggono l opera tore l ambiente circostante ed il campi
123. e il ravvicinamento delle disposizioni legislative regolamentari e amministrative relative alla classificazione all imballaggio e all etichettatura delle sostanze pericolose Direttiva del Consiglio 79 831 CEE recante la sesta modifica della direttiva 67 548 CEE 220 Allegato II Direttiva del Consiglio 80 1107 CEE sulla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da un esposizione ad agenti chimici fisici e biologici durante il lavoro Direttiva del Consiglio 88 642 CEE che modifica la direttiva 80 1107 CEE del Consiglio sulla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti dall espo sizione ad agenti chimici fisici e biologici sul luogo di lavoro Direttiva del Consiglio 90 394 CEE sulla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da un esposizione ad agenti cancerogeni durante il lavoro se sta direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE Direttiva della Commissione 91 322 CEE relativa alla fissazione di valori limite indicativi in applicazione della direttiva 80 1107 CEE del Consiglio sulla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti dall esposizione ad agenti chimici fisici e biologici sul luogo di lavoro Direttiva del Consiglio 92 32 CEE che modifica per la settima volta la diret tiva 67 548 CEE concernente il ravvicinamento delle disposizioni legislative regolamentari ed amministrative relative alla classificazione all imballaggio e all e
124. el lavoro e dell ambiente Prof Lucio Luzzatto Direttore Scientifico Istituto Nazionale per la Ricerca sul Cancro Genova 10 VALUTAZIONE DEL RISCHIO Dimitri Sossai Ubaldo Leoncini Paola Bet Mariangela Miele Il personale che lavora nei laboratori di ricerca esposto ad un rischio professionale che frequentemente sottovalutato dai diretti interessati i quali spesso prendono coscienza dell esistenza di tale rischio solo quando accadono incidenti gravi generalmente il ri schio nei laboratori invisibile quindi maggiormente pericoloso rispetto ad altre attivit lavorative Ne consegue che la pericolosit degli agenti utilizzati l adeguatezza dei dispositivi di protezione e le condizioni delle attrezzature non dovrebbero essere valutati se paratamente ma come facenti parte di un unica procedura Tutti i fattori di rischio che concorrono ad una determinata attivit dovreb bero essere identificati al fine di definire procedure standard per limitare quanto pi possibile il rischio correlato a tale attivit Il rischio amp definito come la probabilit che una sostanza un oggetto o una situazione possa creare pericolo in condizioni speci fiche Il pericolo una fonte o una situazione che pu creare un poten ziale danno alla salute all ambiente o ad entrambi Il rischio generalmente considerato come la combinazione di due fattori a probabilit che un incidente o evento avverso si verifichi a con
125. ell inceneritore o messi sotto cappa per il trattamento con le tecniche chimiche appropriate Solo a questo punto l area pu essere aperta ai lavoratori 138 RISCHIO RADIOLOGICO Marcel Castegnaro Introduzione Nei laboratori di tipo biologico biomedico e biotecnologico si uti lizzano numerose sostanze radioattive Le pi comuni sono e Carbonio 14 C usato nella ricerca per garantire che nuovi potenziali farmaci siano metabolizzati senza la formazione di prodotti nocivi Trizio CH usato per studi di biomedicina e metabolismo dei farmaci per garantire la sicurezza di potenziali nuovi farmaci odio 125 T usato in vitro per kit diagnostici Fosforo 32 P usato in biologia molecolare e nella ricerca ge netica Fosforo 33 P e Zolfo 35 5S sostituiscono spesso il P per ragioni di sicurezza perch la loro emissione Beta a bassa energia Trattamento del materiale radioattivo Prima di iniziare a lavorare con radioisotopi tutti gli operatori de vono ottenere l autorizzazione per il loro utilizzo da parte dell Esperto qualificato al Rischio Radiologico il quale si incaricher di registrarli al Servizio di Sicurezza Radiologica fornir il manuale di sicurezza e provveder alla formazione del personale Il manuale dovr trattare i seguenti punti Le precauzioni necessarie per impedire contaminazioni alle per sone e alle strutture e per minimizzare ogni effetto delle radia zioni
126. emia gGT elettroforesi delle proteine sieriche esame delle urine completo Visite mediche periodiche L attuale legislazione non prevede esplicitamente alcuna sorveglian za sanitaria periodica per i lavoratori a rischio biologico pertan to sar il medico a decidere quali lavoratori sottoporre a sorve glianza sanitaria e con quali modalit Considerazioni conclusive Da quanto sopra esposto risulta evidente che la sorveglianza sani taria uno degli elementi che unitamente alla valutazione dei rischi condotta nei termini sopracitati concorre al controllo del rischio biolo gico negli ambienti di lavoro In questo contesto nella sorveglianza sanitaria assume rilievo fon damentale il sistema di sorveglianza epidemiologica inteso come os servatorio che deve essere istituito in ciascun ambiente di lavoro Ci comporta l obbligo di identificazione dei rischi la loro quantificazione la classificazione di aree mansioni o attivit secondo livelli di rischio 178 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori L osservatorio cosi costruito consente di utilizzare al meglio i dati sia della valutazione dei rischi che della sorveglianza sanitaria e di rag giungere una migliore qualit delle verifiche di efficacia della sorve glianza sanitaria Inoltre tale modalit di rilevazione potr fornire utili orientamenti per l attuazione di interventi preventivi secondo priorit Per il lavoro che implica la manipolazione di microorg
127. ente decontaminabile nel caso sia smaltato bisogna assicurarsi che lo smalto sia intatto coperto con carta assorbente plastificata su un lato il lato resistente all acqua rivolto verso la baci nella quello assorbente verso il flacone Quando si lavora con composti ad alta tensione di vapore meglio indossare una maschera pieno facciale collegata ad un autorespiratore Uso di cancerogeni volatili in un incubatore Quando si utilizza un cancerogeno in un incubatore per esempio un incubatore per piastre Petri per test di mutagenesi bisogna per prima cosa assicurarsi che sia collegato ad un sistema di aspirazione Prima di aprire l incubatore bisogna far aspirare l aria per almeno 30 minuti in modo da eliminare tutte le sostanze che possono essere eva porate L aspirazione deve essere lasciata in funzione anche durante il prelievo delle piastre L acqua deve essere considerata come un rifiuto inquinato e trattata come tale 1 La cappa dovrebbe essere lasciata sempre in funzione Se non fosse possibile l aspirazione dovr essere accesa almeno per un ora dopo il prelievo 2 Sentire il rumore del motore aspirante non sufficiente per ritenere che la cappa funziona correttamente E bene che nelle cappe siano installati dei misuratori di flusso dell aria con allarme acustico e visivo qualora non fosse garantito il corretto funzionamento 3 Vedere la sezione sottostante riguardante l uso dei guanti 122 Rischio chimico Uso di compost
128. er il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica te ma importante considerare il loro valore e la loro importanza De vono essere utilizzati mediante una serie di norme che includano selezionare test appropriati che siano accettabili per i lavoratori eliminare i test che non rispondono alle esigenze per pertinenza specificit e sensibilit rivedere periodicamente i programmi di sorveglianza sanitaria e modificarli alla luce delle migliori condizioni di lavoro Le procedure per gli esami medici includono la storia personale ed esami clinici Possono includere questionari test diagnostici misura zioni delle funzioni e test biologici dei livelli di esposizione ad agenti ambientali nel luogo di lavoro Questi esami sono rilevanti per indivi duare la natura del rischio I medici addetti alla sorveglianza sanitaria o i medici generici impegnati nell esercizio della sorveglianza sanitaria devono conservare una responsabilit totale per i test biologici per gli altri esami medici e per l interpretazione dei risultati sebbene 1 test possano essere fatti da infermieri tecnici e altro personale preparato sotto la loro supervisione Gli esami medici devono essere eseguiti dove necessario prima o poco dopo il lavoro o l incarico per raccogliere informazioni per la sorveglianza sanitaria futura Gli esami medici possono essere pianificati in intervalli periodici durante il lavoro e devono essere appropriati ai rischi oc
129. erato ovvero operazioni per le quali un livello 3 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Classe 4 Operazioni ad alto rischio ovvero operazioni per le quali un livello 4 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Qualora sussista un dubbio su quale classe sia appropriata per l im piego confinato proposto si devono applicare le misure di protezione pi rigorose a meno che esistano prove sufficienti d intesa con l auto rit competente a giustificare l applicazione di misure meno rigorose Notifica all Autorit Competente La notifica la presentazione delle informazioni richieste alle Au torit Competenti dello Stato di appartenenza ed prevista sia per gli agenti biologici che per i microganismi geneticamente modificati Notifica per l uso di agenti biologici Coloro che intendono lavorare per la prima volta con un agente biologico di gruppo 2 di gruppo 3 di gruppo 4 devono inviare una notifica all Autorit Competente del proprio Paese nei termini previsti dalla Direttiva 2000 54 CE art 13 33 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica La notifica deve essere eseguita almeno 30 giorni prima dell inizio del lavoro od in modo differente in conformit con l adozione della Direttiva Europea in ciascun Paese Un ulteriore notifica deve essere eseguita qualora si presentassero sostanziali
130. erosol pertanto obbligatorio che tale materiale venga scongelato aperto e utilizzato sotto cappa chimica o cappa per la sicurezza biologica o au torizzata anche per sostanze radioattive Tutto il materiale radioattivo quando viene immagazzinato eliminato o utilizzato deve essere eti chettato con il simbolo di pericolo radioattivo il tipo di isotopo la data la quantit di radioattivit in DPM o microcuries e deve riportare la frase Attenzione sostanze radioattive Il luogo di stoccaggio verr individuato dall esperto qualificato sentito il medico autorizzato Effetti biologici delle radiazioni ionizzanti Il danno dovuto all irradiazione causato principalmente dalla ionizzazione nei tessuti del corpo Quando la radiazione interagisce con una cellula vengono prodotte ionizzazioni ed eccitazioni nelle macromolecole biologiche o nel mezzo nel quale gli organelli cellulari sono sospesi in modo predominante nell acqua A seconda del sito di interazione tra radioisotopi e cellule si possono distinguere interazioni dirette o indirette Interazione diretta avviene quando una particella ionizzante interagisce o assorbita con le macromolecole della cellula DNA RNA proteine enzimi ecc Queste macromolecole diventano strut ture anormali che possono dare origine agli eventi che conducono ai 142 Rischio radiologico cambiamenti biologici Interazione indiretta implica l assorbimento di radiazioni ionizzanti nel m
131. errazioni cromosomiche e SCE ha dimo strato anzitutto la loro persistenza prolungata La loro quantificazione corretta tuttavia viene giudicata difficile Volendo dare una valutazione complessiva dei tre indicatori citogenetici pi utilizzati anzitutto possiamo dire che nel singolo in dividuo essi sono al minimo un marker di esposizione personale che in vitro e nell animale sono state stabilite correlazioni positive tra la loro comparsa e la citotossicit la mutazione la trasformazione e la formazione di un tumore Hanno un valore predittivo in senso tumorale se presenti in cellule germinali come si osserva in cancri assai rari quale il retinoblastoma Ne viene consigliato l uso in associazione con gli addotti prodotti di addizione ottenuti dalla reazione tra specie chi miche e macromolecole biologiche DNA e protezione con formazio ne di legami covalenti Se per qualcuno un riscontro marcato di aberrazioni cromosomiche 184 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori semprech sia dato di osservarlo potrebbe essere utilizzato non solo come indicatore di esposizione ma anche di effetto alla salute per altri esse hanno dato risultati contraddittori Riflettono l esposizione cumu lativa ed indicano un effetto genotossico di gruppo potendo avere se ripetutamente confermate rispetto agli indispensabili gruppi di controllo valore di segnale d allerta Questo soprattutto perch nella pratica questi effetti non sono mai c
132. erse risulta in genere com plessa e non sono standardizzati metodi e parametri di riferiment inoltre la variet biochimica e morfologica e l ubiquitariet dei microrganismi rendono problematico il monitoraggio ambientale e Non disponibilit di curve dose risposta Infatti per nessuno degli agenti biologici definibile tale relazione sia per gli effetti infet 175 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica tivi sia tossici sia allergici Quindi non possibile quantificare l entit del rischio ed il verosimile danno ad esso conseguente e Non conoscenza di una dose soglia al di sotto della quale non esista un rischio per la salute Infatti per molti microrganismi la dose minima infettante stimabile intorno all unit ovvero ritenuta sufficiente la contaminazione con l agente biologico per poter generare infezione e malattia e Mancata esistenza di valori limite di esposizione cui riferirsi per valutare il rischio e Fattori legati al lavoratore identificabili con condizioni che com portano un aumentato rischio di contrarre malattie infettive come le immunodeficienze congenite e acquisite tali condizioni van no comunque attentamente identificate valutate nella loro gra vit e monitorate caso per caso Si evince che non esiste per la patologia infettiva la possibilit di fissare a priori un rigido programma di visite mediche periodiche Si dovranno quindi risolvere
133. etti sull uomo Il diagramma 17 sintetizza i principali effetti tossici che 1 veleni diretti o gli agenti pre tossici possono avere dopo la metabolizzazione enzimatica Alcune sostanze chimiche usate nei laboratori biologici e biotecnologici possono presentare una variet di effetti sulla salute umana sia a breve che a lungo termine Vi sono molti esempi di seguito verr riportato quello della 106 Rischio chimico formaldeide La formaldeide un a deide della famiglia dei composto carbonilici con una funzione aldeidica molto reattiva comunemente utilizzata in laboratorio come fissativo istologico ibridazione in situ di geni o come disinfettante ele is Aldeide Formaldeide Si pu trovare come soluzione acquosa in concentrazione da 30 a 56 in peso di formaldeide contenente una quantit variabile di metanolo CH OH che stabilizza la soluzione Pu anche essere in forma solida come la para formaldeide HO CH O H un polimero lineare usato per la preparazione di formaldeide libera da metanolo Sotto forma di gas la formaldeide un agente irritante per gli occhi e le vie respiratorie che pu essere molto corrosivo alle alte concentrazioni A seconda delle persone della sensibilit individuale l effetto irri tante ha luogo gi alla concentrazione di poche ppm da 1 a 5 ppm e diventa assai aggressivo sopra le 10 20 ppm Le soluzioni acquose concentrate sono caustiche per la pelle la loro ingestione pu
134. ezzo nel quale le molecole sono sospese La molecola che pi comunemente interpone questa azione l acqua Attraverso un modo complesso di reazioni le molecole di acqua ionizzata formano radicali liberi che possono causare danno alle macromolecole Il pi importante bersaglio per la radiazione nella cellula il DNA nel nucleo Gli effetti biologici risultano quando il danno al DNA non riparato o riparato in modo improprio Un danno esteso al DNA pu portare alla morte cellulare Grandi numeri di cellule morenti possono portare al mal funzionamento degli organi e morte per l individuo Danno o riparazione impropria del DNA pu sviluppare linfoma e can cro nelle cellule somatiche Si possono verificare i seguenti effetti Effetti non random sono quelli per i quali una data esposizione produrr in un piccolo intervallo di variazione lo stesso tipo di effetto Nel caso di irradiazione globale a livelli di 1 2 grays Gy si ha una variazione nel numero di cellule del sangue es una diminuzione del livello di leucociti e piastrine e un basso grado di eritrociti Nel caso di irradiazioni locali della pelle si osserva eritema a dosi tra 4 e 8 Gy epidermidi secche a livelli eccedenti di 5 Gy epidermidi essudative tra 12 e 20 Gy e necrosi dopo 25 Gy Nel caso di irradiazione agli occhi si osserva opacizzazione della lente del cristallino sopra 10 Gy di raggi X o 0 8 Gy di neutroni e possono insorgere cateratte Per irradiazione dei
135. ggetto di una precedente notifica relativa a impieghi confinati della classe 3 o di una classe pi elevata e se sono stati rispettati gli obblighi previsti dall autoriz zazione per un impiego confinato della stessa classe o di una classe superiore a quella in cui si intende ricorrere 34 Rischio biologico Entro e non oltre 90 giorni dalla presentazione della notifica ne gli altri casi Per tutta la durata dell impiego confinato responsabilit dell uti lizzatore assicurarsi che siano applicate le misure di contenimento o le altre misure di protezione per la classe assegnata all impiego confina to nonch conservare i quaderni in cui vengono registrate le operazio ni eseguite L utilizzatore inoltre dovr riesaminare periodicamente la valutazione della classe di impiego e redigere un documento di riesame Bibliografia Brown P Naked DNA raises cancer fears for researchers New Scientist 6 October 17 1990 Budker V Zhang G Danko I Williams P and Wolff J The efficient expression of intravascularly delivered DNA in rat muscle Gene Therapy 5 272 6 1998 Collins C H Laboratory acquired infections History incidence causes and prevention Butter worths and Co Ltd Oxford England 1983 During M J Xu R Young D Kaplitt M G Sherwin R S Leone P Peroral gene therapy of lactose intolerance using an adeno associated virus vector Nat Med 4 1131 5 1998 Ho M W Genetic
136. gici sotto cappa e trasferirli ermeticamente chiusi in contenitori di maggiori dimen sioni Non usare Bunsen o altri tipi di bruciatori sotto le cappe di tipo II e HI l aria calda indotta infatti pu deviare il regolare flusso interno pu causare quindi contaminazione sia nell area di la voro che nell ambiente esterno e danni ai filtri HEPA e Pulire sempre con cura alla fine di ogni operazione il ripiano della cappa con disinfettante es alcool a 70 42 Rischio biologico Per ulteriori informazioni sulle cappe di sicurezza biologica consul tare la pubblicazione del CDC NIH Primary Containment for Biohazards Selection installation and Use of Biological Safety Cabinets 2000 Centrifughe Per un buon uso delle centrifughe occorre tener presente le seguenti considerazioni Posizionarle in modo che siano accessibili a tutto il personale Seguire le indicazioni riportate sul manuale di istruzioni ed ef fettuare periodica manutenzione Bilanciare i contenitori e gli accessori da centrifuga con liquidi non corrosivi Utilizzare provette da centrifuga di vetro a pareti spesse o di plastica nel caso si centrifughino agenti biologici che presenta no un medio o alto rischio e utilizzare preferibilmente provette per centrifuga con tappi a vite contrassegnate secondo un codice stabilito Sigillare debitamente le provette per evitare la diffusione di even tuali aerosol contaminanti Utilizzare centrifughe dotate di rotor
137. gli organismi viventi Ho et al 1998 La maggior parte dei costrutti che si producono non sono mai esistiti in natura e possono quindi essere potenziale causa di danno Traavik 19992 per l ambiente e per la salute Per molto tempo si pensato che il DNA fosse rapidamente de gradato nell ambiente esterno e quindi non in grado di essere assorbi to dalla pelle o dal tratto intestinale Queste supposizioni sono state superate da studi sperimentali che hanno evidenziato che il DNA per siste in tutti gli ambienti ed prontamente assorbito dalle cellule di tutti gli organismi Alte concentrazioni di DNA nudo sono state infat ti trovate in tutti gli ambienti naturali nel suolo nei sedimenti marini e di acqua dolce nell interfaccia aria acqua dove mantengono la ca pacit di trasformare i microrganismi Lorenz and Wackernagel 1994 Ho 1998 Ho et al 1998 Il DNA persiste anche nella bocca Mercer et al 1999 e nel tratto digestivo dei mammiferi Schubbert et al 1994 dove pu essere assorbito e incorporato dalla popolazione microbica e dalle cellule ospiti Mercer ha riportato che il DNA plasmidico parzialmente degradato in grado di trasformare lo streptococco gordonii che risiede normalmente nella bocca e nella faringe umana e che la saliva umana contiene fattori che aumentano la capacit dei batteri ad essere trasformati Mercer et al 1999 La capacit del DNA di penetrare nella pelle intatta nota dal 1990 quando alc
138. glianza sanitaria dei lavoratori Il medico addetto alla sorveglianza sanitaria per la valutazione del l idoneit di lavoratori esposti a vari fattori di rischio in occasione delle visite mediche preventive e successivamente delle visite periodi che ed eventualmente straordinarie si basa sui principi che disciplina no la medicina del lavoro provvedendo in particolare alla verifica del l effettiva compatibilit tra le condizioni psicofisiche del lavoratore e gli specifici rischi individuali connessi alla sua destinazione lavorativa ed alle sue mansioni In funzione delle differenti tipologie di rischio il medico addetto alla sorveglianza sanitaria considera con particolare attenzione ai fini della valutazione dell idoneit alla mansione specifica le seguenti con dizioni fisiopatologiche 168 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori e Condizioni suscettibili di essere attivate o aggravate dall esposi zione allo specifico fattore di rischio e Condizioni suscettibili di aumentare l assorbimento di agenti chi mici fisici o biologici o di ridurre l efficacia dei meccanismi fisiologici di depurazione e o escrezione Condizioni suscettibili di essere confuse con patologie derivanti dall esposizione a fattori chimici fisici o biologici o attribuite all azione lesiva di tali fattori In relazione alla natura e all entit del rischio ed alle caratteristiche dell attivit lavorativa dovranno inoltre essere considera
139. he e pro cedure da seguire in caso di incidente Informare adeguatamente il personale ogni qualvolta si introdu cano nuovi rischi Mantenere le porte chiuse durante la sperimentazione Apporre l apposito segnale di sicurezza biologica sulla porta d in gresso del laboratorio Mantenere il laboratorio e le gabbie per gli animali puliti in or dine e sgombri da qualsiasi oggetto non pertinente al lavoro Coprire la superficie di lavoro con carta assorbente plastificata Decontaminare la superficie di lavoro almeno una volta al gior no ed ogni qualvolta si verifichi un versamento di materiale po tenzialmente pericoloso rimuovere la carta assorbente contami nata e riporla in apposito contenitore per rifiuti biologici Non pipettare con la bocca usare pipettatori meccanici o elettrici Usare un pipettatore di facile decontaminazione e possibilmente autoclavabile Usare pipette o puntali con il filtro per proteggere i pipettatori da eventuali contaminazioni Condurre tutte le procedure tecniche in modo da ridurre al mini mo la formazione di aerosol Riporre le pipette contaminate in un contenitore con disinfettan te o direttamente nel contenitore per rifiuti biologici Indossare indumenti protettivi monouso o dispositivi di prote zione individuali adeguati alle operazioni che si compiono Indossare occhiali schermi protettivi od altri mezzi di protezio ne per proteggersi da schizzi o da oggetti contundenti Evitare l uso di siring
140. he ed aghi quando ci non possibile se guire le procedure riportate nel paragrafo seguente aghi ipodermici e siringhe non possono essere usati per rimescolare i fluidi infetti Indossare sempre i guanti durante la sperimentazione con agenti 47 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica biologici toglierli in modo corretto e depositarli nel contenitore per rifiuti biologici Pulire accuratamente i contenitori e le attrezzature contaminate da sangue o altro materiale biologico potenzialmente pericoloso con ipoclorito di sodio o altri sistemi di decontaminazione vedi tabella IV Mantenere gli animali che vengono utilizzati per la sperimenta zione separati da quelli che non vengono trattati Riporre i rifiuti solidi contaminati da autoclavare o incenerire in contenitori per rifiuti biologici a tenuta che devono essere richiusi prima di essere rimossi dal laboratorio Prestare attenzione alle fiale contenenti materiale liofilizzato il contenuto pu essere ad una pressione negativa e l improvviso ingresso d aria nella fiala pu essere causa di aerosol Le fiale contenenti materiali infetti non vanno mai immerse in azoto li quido perch se rovinate o mal sigillate possono esplodere quan do vengono rimosse Se sono necessarie basse temperature le fiale vanno conservate solo nella fase gassosa al di sopra dell azoto liquido o in congelatori o in anidride carbonica solida ghiaccio secco
141. he possono compor tare schizzi verso gli operatori come ad esempio l apertura di contenitori l apertura di centrifughe le operazioni di aspirazio ne forzata ecc e DPIper la protezione degli occhi e del volto dovranno avere marcatura EN166 In caso di schizzi accidentali si devono utilizzare i lavaocchi per eliminare prontamente ogni liquido potenzialmente pericoloso Maschera Facciale Filtrante FFP3SL Sono maschere a conchiglia adeguate per la protezione ai microrganismi con granulometria non inferiore a 0 02 Deve essere rispondente alla normativa europea EN143 Bibliografia Brun A Montero R P rez J A Roman M Manual de Higiene del Trabajo para T cnicos en Prevenci n de Riesgos Laborales 2 Edition IDEOR C maras de Comercio e Industria C rdoba 2001 CDC NIH BioSafety in Microbiological and Biomedical Laboratories US Department of Health and Human Services Pubblic Helth Service 4 th Edition Eds Richmond Y and McKinney R W 1999 CDC NIH Guidelines for research on Recombinant DNA Molecules 1976 CDC NIH Primary Containment for Biohazards Selection installation and Use of Biological Safety Cabinets 2 nd Edition Richmond Y and McKinney R W 2000 FreshneyR I Culture of animal cells Fanth Edition Willey Liss 2000 Manuale di biosicurezza in laboratorio II Ed Annali dell Istituto Superiore di Sanit Istituto Superiore di Sanit 1995 Richmond Y Anthology of
142. he se trattasi solo di morsi o graffi opportuno che il personale incaricato raccolga tutte le informazioni riguardanti l accaduto Il personale che ha il compito di lavorare a contatto con gli animali dovrebbe seguire corsi specializzati in modo da avere tutte le informa zioni utili sulle tecniche pi adatte da adottare durante il loro lavoro In questo modo si potrebbe salvaguardare non solo il benessere degli ani mali ma anche la buona riuscita delle procedure sperimentali Una delibera del Consiglio d Europa del 3 Dicembre 1993 ha sta bilito le classificazioni del personale che debba lavorare a contatto con gli animali in base alle categorie ai requisiti di capacit standard e specifici Questo tipo di personale diviso in quattro gruppi Classe A Persone addette alla cura degli animali Classe B Persone che rendono operative le procedure Classe C Persone addette alla direzione ed elaborazione delle pro cedure Classe D Specialisti della ricerca su animali Queste categorie sono state definite in base alle mansioni che il personale deve svolgere e lo specifico addestramento dovrebbe essere fornito in accordo con le leggi e regolamentazioni che il loro lavoro 72 Sperimentazione animale comporta Tuttavia ogni persona coinvolta dovrebbe ricevere un ap propriato insegnamento focalizzato a mantenere sicuro l ambiente di lavoro che comprende informazioni su e I possibili pericoli associati Leconseguenze
143. hiatura con una spatola metallica e I derivati dall acido azotidrico HN come molte azidi N pos sono essere molto instabili Cosi le soluzioni acquose di sodio azide NaN usate come battericida non devono essere conserva te in un contenitore metallico evitare specialmente il rame per ch si possono formare azidi esplosive come l azide di rame N5 Cu Q Q D_ 0 Q O N N N H N N M NN Cu 2 Acido azotidrico Azide di un Azide rameica metallo monovalente Qualche volta i biologi usano sostanze chimiche instabili Essi non conoscono i rischi perch le informazioni sono spesso difficoltose da trovare altamente necessario leggere l etichetta e la scheda di sicurezza Se ad esempio un po di dietil pirocarbonato DEPC conservato in un frigo senza areazione un lento aumento di temperatura potr in durre la decomposizione di DEPC per idrolisi con uno sviluppo violen to di anidride carbonica CO e la successiva esplosione del contenito re figura 4 H H or a HOS 2 0 C 0 2 CH CH OH Dietil pirocarbonato Anidride carbonica Etanolo Figura 4 Idrolisi del dietil pirocarbonato 83 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Si raccomanda di effettuare una ricerca bibliografica prima di usare sostanze chimiche instabili o sostanze chimiche con una stabilit scono sciuta o prima di preparare una miscela instabile Tuttavia non sempre facile effe
144. i Stati membri relative al trasporto di merci pericolose su strada Direttiva del consiglio 96 35 CE relativa alla designazione e alla qualifica zione professionale dei consulenti per la sicurezza dei trasporti su strada per ferrovia o per via navigabile di merci pericolose Direttiva della commissione 96 39 CE relativa alle condizioni minime ne cessarie per le navi dirette ai porti marittimi della Comunit o che ne escono e che trasportano merci pericolose o inquinanti Direttiva del consiglio 96 49 CE relativa al trasporto di merci pericolose per ferrovia Direttiva della Commissione 96 86 CE che adegua al progresso tecnico la direttiva 94 55 CEE del consiglio concernente il ravvicinamento delle legi slazioni degli Stati membri relative al trasporto di merci pericolose su strada Testo rilevante ai fini del SEE Direttiva della commissione 96 87 CE che adegua al progresso tecnico la direttiva 96 49 CE Direttiva della commissione 97 34 CE del 6 giugno 1997 che modifica la direttiva del consiglio 93 75 CEE riguardante i requisiti minimi per le navi Direttiva del Parlamento europeo e del Consiglio 2000 61 CE che modifi ca la direttiva 94 55 CE del Consiglio concernente il ravvicinamento delle legislazioni degli Stati membri relative al trasporto di merci pericolose su strada RIFIUTI Direttiva del Consiglio 75 442 CEE relativa ai rifiuti Direttiva del Consiglio 76 403 CEE relativa allo smaltimento dei policlorodifenili e dei policlor
145. i adatti e Corrosivo disporne lo smalti mento Fito ormoni auxine Nocivo 1 23 citochinine auxine simili e citochinine simili sintetici o meno Floroglucinolo 1 3 5 Irritante 1 2 4 Triidrossibenzene Fluoresceina isotiocianato Nocivo 1 2 3 FITC Acido 5 Fluoro orotico Nocivo 1 2 3 5 FOA 5 Fluorouracile Nocivo 1 2 3 Acido Folico sale di calcio Irritante 1 2 4 Formaldeide Molto tossico Molto irritante Allergenica eczema 1 2 3 asma M utagenica Raccogliere i rifiuti e Se inalata provoca tumori nasali nei ratti gestime lo smalti mento in modo opportuno 198 Precauzioni per l uso di agenti biologici e chimici Composto Acido Formico Riscuio Corrosivo Tossico facilmente assorbito dalla pelle PREVENZIONE 1 2 Raccogliere i rifiuti per gestire lo smaltimento Con servare in luogo fresco asciut to e ben ventilato Acido 6 Fosfonogluconico Irritante 1 2 4 6 Fosfo D gluconato 6 Pg Giemsa soluzione Azure Infiammabile 1 2 3 eosin methylene blue Tossico Glifosate N fosfonom Irritante 1 2 4 etilglicina Griseofulvin Nocivo 1 2 3 Guanidina idrocloruro Irritante 1 2 4 Guanidina isotiocianato Nocivo 1 2 3 HEPES N 2 idrossietil Irritante 1 2 4 piperazina N 2 etansulfonico acido Idrazide maleica Molto tossico 1 2 3 Idrazina Tossico 1 2 Esplosivo allo stato anidro Cancerogeno Raccogliere i rifiuti in bottiglie conte nenti Ferro cloruro 3M
146. i anti aerosol o di apposite chiusure di protezione anti aerosol nel caso si lavori con agenti biologici di gruppo 2 3 e 4 Centrifugare separatamente dagli altri materiali i liquidi conte nenti agenti biologici di gruppo 3 e 4 e aprire e chiudere le pro vette sotto cappa di sicurezza biologica Ispezionare dopo l uso i rotori e i contenitori delle centrifughe per accertare l assenza di corrosioni e di fessure capillari e ripor li capovolti per permettere la fuoriuscita della condensa Frigoriferi congelatori e contenitori di azoto liquido I frigoriferi i congelatori ed i contenitori di azoto liquido vengono utilizzati per conservare campioni biologici reagenti soluzioni etc Per un loro corretto utilizzo si devono tenere presenti le seguenti indicazio 43 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Non aprirli frequentemente ed inutilmente e Installare i frigoriferi e i congelatori lontano da fonti di calore e staccati dalla parete Utilizzare contenitori adatti a sopportare le basse temperature richieste per la conservazione del materiale Evitare di riempire eccessivamente i contenitori destinati al congelamento e Etichettare chiaramente tutti i contenitori con informazioni su contenuto operatore e data e Inaggiunta ai guanti per la protezione biologica indossare guan ti di protezione per basse temperature per estrarre i campioni conservati a 80 C e in azoto liquido visiera
147. i degli Stati Membri relative ai dispositivi di protezione individuale BUONA PRATICA DI LABORATORIO Direttiva del consiglio 88 320 CEE concernente l ispezione e la verifica della buona pratica di laboratorio BPL Direttiva della commissione 90 18 CEE del 18 dicembre 1989 che adatta al progresso tecnico l allegato della direttiva 88 320 CEE del Consiglio con cernente l ispezione e la verifica della buona prassi di laboratorio BPL Direttiva della Commissione 99 11 CE che adegua al progresso tecnico i principi di buona pratica di laboratorio di cui alla direttiva 87 18 CEE del Consiglio concernente il ravvicinamento delle disposizioni legislative rego lamentari e amministrative relative all applicazione dei principi di buona pra tica di laboratorio e al controllo della loro applicazione per le prove sulle sostanze chimiche Direttiva della Commissione 99 12 CE che adegua al progresso tecnico per la seconda volta l allegato della direttiva 88 320 CEE del Consiglio concer nente l ispezione e la verifica della buona prassi di laboratorio BPL SOSTANZE PERICOLOSE Direttiva del Consiglio 67 548 CEE concernente il ravvicinamento delle di sposizioni legislative regolamentari ed amministrative relative alla classifi cazione all imballaggio e all etichettatura delle sostanze pericolose Direttiva della Commissione 76 907 CEE recante adeguamento al progres so tecnico della direttiva del Consiglio del 27 giugno 1967 concernent
148. i dovranno essere collegati a terra inclusi frigoriferi e congelatori I contenitori devono essere chiusi ermeticamente e periodicamente controllati Devono essere tenuti lon tano da fonti di calore e di elettricit statica Cosi come per i composti solidi e liquidi l area sar classificata come A rea controllata responsabili di tale area dovranno conse gnare le chiavi solo al personale autorizzato e assicurarsi che il registro di carico e scarico sia stato adeguatamente compilato Un simbolo spe ciale dovr segnalare il possibile pericolo agli utenti ed alle persone esterne al laboratorio Preparazione e conservazione delle soluzioni madri Nelle aree in cui vengono conservati i composti cancerogeni non diluiti possono accedere solo le persone autorizzate dai responsabili Queste persone dovranno essere adeguatamente protette camice guanti maschere L adeguatezza dei Dispositvi di Protezione Individuale indossati dipender di volta in volta dallo stato fisico del composto utilizzato Dopo il prelievo dei composti dall armadio in cui sono conservati queste sostanze devono essere trasportate nel locale dove si preparano le soluzioni preferibilmente sotto cappa chimica o sotto cappa a flusso laminare con filtri a carbone attivo Bisogna prelevare un aliquota per la preparazione della soluzione madre Se il locale non vicino al ma 118 Rischio chimico gazzino le sostanze devono essere trasportate in contenito
149. i lavoro prima direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 39 1 CEE Direttiva del Consiglio 89 655 CEE relativa ai requisiti minimi di sicurezza e di salute per l uso delle attrezzature di lavoro da parte dei lavoratori durante il lavoro seconda direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE Direttiva del Consiglio 95 63 CE del 5 dicembre 1995 che modifica la diret tiva 89 655 CEE relativa ai requisiti minimi di sicurezza e di salute per l uso delle attrezzature di lavoro da parte dei lavoratori durante il lavoro seconda direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE SEGNALETICA DI SICUREZZA Direttiva 92 58 CEE recante le prescrizioni minime per la segnaletica di si curezza e o di salute sul luogo di lavoro nona direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE 219 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica DISPOSITIVI DI PROTEZIONE INDIVIDUALE Direttiva del Consiglio 89 656 CEE relativa alle prescrizioni minime in materia di sicurezza e salute per uso da parte dei lavoratori di attrezzature di protezione individuale durante il lavoro D P I terza direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE Direttiva del Consiglio 89 686 CEE concernente il ravvicinamento delle le gislazion
150. i malattie respiratorie pur tuttavia in rari casi si possono verificare malattie pi gravi Pertanto l uso di vettori da loro derivati in conside 23 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica razione anche del fatto che si trasmettono per via aerea richiede parti colare attenzione In terapia genica vengono utilizzati un sottogruppo dei parvovirus i virus adeno associati AAV Essi sono piccoli virus che si replica no in associazione con adenovirus difettivi e pertanto completamente dipendenti dagli adenovirus stessi Gli AAV sono piccoli virus a DNA a singola elica in colture cellulari il DNA di AAV si integra con alta frequenza nel genoma delle cellule ospiti e si replica con esso Bern 19951 Gli herpesvirus includono virus infettivi umani quali il virus dell herpes simplex di tipo 1 HSV 1 che il sistema vettore pi co munemente utilizzato HSV 1 comune nella popolazione ma in rari casi pu causare encefaliti la sua utilit come sistema vettore risiede nella sua ampia gamma di cellule ospiti tra cui i neuroni e nella sua capacit di accogliere grossi inserti Ipoxvirus sono altamente stabili e includono sia virus aviari avipox che non sono in grado di stabilire infezioni produttive negli umani che virus di mammiferi virus vaccinia e 1 virus vaccinia modificati che possono infettare l uomo Grazie alla loro forte immunogenicit que sti vettori virali sono stati usati c
151. i non volatili Il prelievo di un aliquota di un cancerogeno chimico non volatile dal contenitore originale dovr essere fatto sotto cappa con le precau zioni viste prima dotata di filtri HEPA e mantenuta ad una pressione inferiore rispetto al laboratorio La velocit minima raccomandata dal U S Department of Health and Welfare di 0 5 m s Troppi stru menti potrebbero generare delle turbolenze che possono essere causa di un ritorno di vapori particelle del cancerogeno ed esporre quindi l operatore agli effetti nocivi di questi L operatore deve indossare abiti di protezione di un colore diverso da quello usato negli altri laboratori degli occhiali protettivi e guanti adatti al tipo di composto utilizzato Il flacone contenente il cancerogeno viene poi messo in una baci nella di ritenzione bene che sia di acciaio inossidabile perch ha il vantaggio di poter essere facilmente decontaminato nel caso sia smal tato bisogna assicurarsi che lo smalto sia intatto coperto con carta as sorbente plastificata su un lato il lato resistente all acqua rivolto verso la bacinella quello adsorbente verso il flacone Prelevare polveri elettrostatiche Il prelievo di un aliquota di un cancerogeno chimico nella forma di una polvere con propriet elettrostatiche ad esempio le aflatossine dal contenitore originale deve sempre essere fatto sotto una cappa dotata di filtri HEPA e mantenuta ad una pressione inferiore rispetto al labor
152. i reazione esotermica particolarmente comune nei laboratori e sovente la fonte di schizzi di sostanze chimiche corrosive sulla pelle o negli occhi L aggiunta veloce di acqua ad acidi forti concentrati H SO o a basi forti NaOH KOH NH OH rischiosa e porta a schizzi violenti A fine di evitare un tale problema si raccomanda di versare lentamente l acido concentrato o la base in acqua fredda ma mai l opposto e facendo scendere lentamente l acido o la base lungo la parete del contenitore Al fine di assicurare una miscela omogenea quando si versa I acido o la base nell acqua e consigliabile l agitazione della stessa La soluzione in acqua di anidridi minerali anidride fosforica o organiche anidride acetica ma anche di alogenuri acido cloridrico e acido bromidrico alogenuri di fosforo e zolfo bromuro di cianogeno e di esteri inorganici dimetil solfato metansulfonati sovente molto rischiosa figura 10 C Os H 5 a Na H o 2Na0H gt o 5 2 CHOH CH Na Dimetil solfato Sodio solfato Metanolo neutro Figura 10 Scissione del dimetil solfato mediante idrolisi alcalina 92 Rischio chimico In quel tipo di reazione bisogna lavorare con piccole quantit dopo aver raffreddato l acqua Si deve lavorare sotto una cappa chimica ben ventilata con tutti i dispositivi individuali di protezione e attrezzature adeguate occhiali per la sicurezza con protezione laterale rispondenti all EN166 g
153. i registri di carico e scarico dei rifiuti ai sensi degli articoli 12 18 comma 2 lettera m e 18 comma 4 del decreto legislativo 22 del 5 febbraio 1997 Decreto Legislativo 372 del 4 agosto 1998 regolamento recante norme sulla riorganizzazione del catasto dei rifiuti Circolare Ministeriale GAB DEC 812 98 del 2 agosto 1998 Ministero del l Ambiente e Ministero dell Industria del Commercio e dell Artigianato cir colare esplicativa sulla compilazione dei registri di carico e scarico dei rifiuti e dei formulari di accompagnamento dei rifiuti trasportati individuati rispet tivamente dal decreto ministeriale 1 aprile 1998 n 145 e dal decreto mini steriale 148 del 1 aprile 1998 Decreto Legislativo 426 del 9 dicembre 1998 nuovi interventi in campo ambientale 227 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica SOSTANZE PERICOLOSE classificazione imballaggio ed etichettatura Legge ordinaria del Parlamento 256 del 29 maggio 1974 classificazione e disciplina dell imballaggio e dell etichettatura delle sostanze e dei preparati pericolosi Decreto del Ministero della Sanit del 17 dicembre 1977 classificazione e disciplina dell imballaggio e della etichettatura delle sostanze e dei preparati pericolosi in attuazione delle direttive emanate dal Consiglio e dalla Com missione della Comunit economica europea Decreto del Presidente della Repubblica 927 del 24 novembre 1981 recepimento de
154. i sulla salute umana Dopo inalazione raggiun ge molto rapidamente il fegato dove causa epatiti seguite da cirrosi Il cloroformio CHCI spesso usato i biologia per l estrazione del DNA miscele di fenolo CHCI a seconda delle specie animali ha due orga ni bersaglio che sono il fegato e i reni Di regola occorre essere cauti con tutti i solventi clorurati anche 1l cloruro di metilene anche chia mato diclorometano poich sono tutti sostanze irritanti e neurotossiche Inoltre essi sono spesso anche epatotossici neurotossici e dannosi per la riproduzione c Tossicit a lungo termine La tossicit a lungo termine valutata dopo una lunga esposizione a basse concentrazioni di una sostanza chimica per l intera durata della vita dell animale da esperimento 2 anni per i roditori come i topi e 1 ratti Gli effetti a lungo termine generalmente dipendono dalla dose tota le assorbita e pu essere fissata una dose soglia ovvero la dose massi ma che non causa danni irreversibili alla salute 105 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica I limiti di esposizione occupazionale sono determinati e pubblicati e devono essere rispettati durante il lavoro Si notato che generalmente non c relazione fra la tossicit acuta e quella a lungo termine Molti degli effetti tossici sono dovuti all interazione con gli ele menti costitutivi delle cellule e specialmente con le macromolecole es senzia
155. icati o agenti biologici come descritto nel capitolo dedicato Ogni irregolarit o incidente deve essere segnalata anche se essa viene considerata di poco conto Se possibile esso deve essere scritto in un registro speciale riservato agli incidenti Questo documento deve 109 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica essere disponibile alla consultazione da parte di qualsiasi impiegato 3 Sistema di aerazione Un laboratorio in cui si manipolano sostanze chimiche deve essere fornito di un sistema di aerazione al fine di garantire la qualit del l aria dell ambiente I sistemi di ventilazione sono essenziali per garantire la sicurezza in laboratorio Essi possono essere molto vari cappe chimiche ventilate cappe a flusso laminare cappe di terza classe a tenuta ermetica ecc La ventilazione rimane la migliore forma di protezione contro le sostanze inquinanti qualsiasi sia la loro natura In laboratori l installazione degli apparecchi di ventilazione non deve creare disagi ai lavoratori in particolare per quanto riguarda il rumore e le vibrazioni A prescindere dal tipo di ventilazione l impianto deve ricevere manutenzione ed essere controllato per lo meno una volta all anno Le cappe chimiche devono avere filtri compatibili con le sostanze inquinanti che devono essere filtrate Anche il controllo di questo tipo di dispositivo deve essere fatto almeno una volta all anno 4 Posizionamento dei
156. idrossibenzoico SDS Sodio dodecil solfato Nocivo 1 2 3 4 Raccogliere i rifiuti e disporre in modo opportuno per il loro smaltimento Non respirare la polvere Sodio carbonato Irritante per il sistema respiratorio e pelle Causa danni molto seri agli occhi Causa gravi irritazioni 1 2 4 Non respirare la polvere Sodio diidrogeno fosfato Irritante 1 2 4 Sodio idrossido Corrosivo 1 2 Si idrata molto facilmente con l umidit atmosferica A contatto con l acqua produce reazione esotermica prestare particolare attenzione quando si preparano le soluzioni specie se molto concentrate Sodio nitrato Ossidante 1 2 Solfato ferroso Nocivo 123 201 anuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica manifestazioni a lungo termine Nocivo per contatto Composto RiscHio PREVENZIONE Spermidina Corrosivo 1 2 N 3 amminopropil Irritante 1 4 diamminobutano Tampone Fosfato salino Irritante 1 2 4 pH 7 4 Tampone di Lisi Tris Vedi TRIS EDTA Glucosio EDTA Tamponi TE TAB TBE Vedi TRIS Ac Borico Ac Acetico glaciale EDTA N N N N tetrametilene Nocivo per inalazione e ingestione 1 2 4 tilendiammina TEMED Causa ustioni Non fumare Timerosal Molto tossico 12 3 Acido Tricloroacetico TCA Rischio di irritazioni cutanee Corrosivo ile Trietanolammina Irritante 1 2 4 Acido 2 3 5 Triiodobenzoico Nocivo 1 2
157. ili di P I tessuti con rapide percentuali di turnover cellulare evidenziano un alta ritenzione dovuta alla concentrazione di fosforo nelle nucleoproteine 153 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica e P eliminato dall organismo fondamentalmente per via urinaria e Metabolismo Fosforo vedi la scheda del P STRUMENTO DI INDAGINE e Il contatore di indagine GM e una sonda apposita La sonda di Nal a bassa energia usata solo per determinare Bremsstrahlung x rays e Il contatore del liquido di scintillazione conta indiretta pu es sere usato per individuare la contaminazione rimovibile della superficie contaminata di P su macchie o superfici gi pulite PERCENTUALI DI DOSI FROM UNSHIELDED 1 0 MCI ISOTROPIC POINT SOURCE Distanza Rads hr 1 00 cm 348 15 24 cm 1 49 10 00 ft 0 0015 780 000 mrad hr alla superfice di 1 0 mCi P in 1 ml liquido 26 000 mrad hr all apertura della fiala contenente 1 0 ml P in 1 0 ml liquido SCHERMI PROTETTIVI e Plexiglass acrilico lucite plastica legno spessi 8 mm e Non usare una lamina metallica di piombo o lamiere perch pe netrando sar prodotto Bremsstrahlung x ray e Usare lamiere di piombo o lamina metallica per proteggere Bremsstrahlung x rays solo dopo uno schermo a bassa densi t di plexiglas acrilico lucite legno PRECAUZIONI GENERALI e Poich si fissa alle ossa speciali precauzioni devono essere pre se per minim
158. ime necessarie per le navi dirette a porti ma rittimi della Comunit o che ne escono e che trasportano merci pericolose o inquinanti e 96 39 CE relativa alle condizioni minime necessarie per le navi dirette ai porti marittimi della Comunit o che ne escono e che trasportano merci pericolose o inquinanti Decreto del 14 ottobre 1998 del Ministero dei trasporti e della navigazione attuazione della direttiva europea 97 34 CE del 6 giugno 1997 che modifica la direttiva del consiglio 93 75 CEE riguardante i requisiti minimi per le navi Decreto legislativo 41 del 13 gennaio 1999 attuazione delle direttive euro pee 96 49 CE relativa al trasporto di merci pericolose per ferrovia e 96 87 CE che adegua al progresso tecnico la direttiva 96 49 CE Decreto legislativo 40 del 4 febbraio 2000 attuazione della direttiva europea 96 35 CE relativa alla designazione e alla qualificazione professionale dei consulenti per la sicurezza dei trasporti su strada per ferrovia o per via navi gabile di merci pericolose Decreto del 3 maggio 2001 recepimento della direttiva 2000 61 CE che mo difica la direttiva 94 55 CE del Consiglio concernente il ravvicinamento delle legislazioni degli Stati membri relative al trasporto di merci pericolose su strada SPERIMENTAZIONI SU ANIMALI Decreto Legislativo 116 del 27 gennaio 1992 attuazione della direttiva 86 609 CEE in materia di protezione degli animali utilizzati a fini sperimentali o ad altri fini scientifici Pubb
159. imerasi specifica chia mata trascrittasi inversa La forma provirale di un retrovirus ha un genoma costituito da due sequenze long terminal repeats LTR e da tre geni fondamentali che codificano le proteine del core nucleoproteico gene gag le proteine del pericapside gene env e la trascrittasi inver sa integrasi proteasi gene pol Il provirus integrato pu essere a tutti gli effetti considerato alla stregua di un qualsiasi gene cellulare la sua replicazione coincide con il processo di trascrizione che condotto dalla polimerasi II cellulare e regolato dai fattori di trascrizione cellu lari che si legano al LTR all estremit 5 del provirus I lentivirus sono una sottoclasse di retrovirus in grado di infettare anche cellule che non sono in attiva divisione o terminalmente diffe renziate come i neuroni Naldini et al 1996 I principali vettori a lentivirus derivano dal virus dell immunodeficienza felina virus del l anemia infettiva equina virus dell immunodeficienza della scimmia e virus umani fra i quali l HIV Gli adenovirus sono indicati in terapia genica quando richiesta un espressione ad alti livelli e per tempi brevi del gene trasferito dal momento che la forte immunogenicit delle proteine di struttura dell adenovirus inducono una potente risposta immunitaria che limita l efficacia del trasferimento del gene dopo la prima infezione Berkner 1992 Gli adenovirus sono virus umani infettivi che spesso causano liev
160. ingolo isotopo Non si deve tenere la singola provetta conte nente P tra le dita ma sempre utilizzarla contenuta in una scarabattola o in un adatto contenitore protettivo Castegnaro et al 1993 per limi tare l esposizione delle dita Le pipettatrici automatiche dovrebbero essere predisposte in modo da avere protezioni per le radiazioni E severamente vietato pipettare a bocca durante gli esperimenti con materiale radioattivo Durante tali operazioni devono essere compiuti regolari controlli di contaminazione delle mani dita e in caso di contaminazione cambiare i guanti immediatamente In ogni caso dopo aver terminato il lavoro che implica l uso di un radioisotopo si deve controllare l area di laboratorio ogni attrezzatura usata e la propria persona per evidenziare possibili contaminazioni usan do un apparecchio portatile di controllo della radioattivit idoneo all isotopo usato vedi schede tecniche allegate Formazione del personale Prima di iniziare un lavoro con composti radiomarcati in modo particolare P o grandi quantit mCi o pi di elementi radioattivi tutto il personale dovrebbe essere sottoposto a un periodo di formazio ne usando soluzioni di composti fluorescenti invece di composti radiomarcati Gli obiettivi di questi periodi di formazione sono 1 aiu tare il personale a distinguere i diversi tipi di incidenti e contaminazio ni che possono accadere e cosi migliorare il loro controllo 2 migliora re la loro
161. iologici e non sostanze infette Preparazione delle confezioni per la spedizione di agenti biologici Per le sostanze infette e i campioni diagnostici probabili fonti di sostanze infette richiesto un triplo imballaggio in accordo con le raccomandazioni delle Nazioni Unite della IATA e dell ICAO Pertanto la preparazione delle confezioni deve essere eseguita nel rispetto delle seguenti procedure Le sostanze infette e il materiale diagnostico dovrebbero essere posti in un imballaggio a tre strati un primo contenitore a tenuta stagna contenente il campione un secondo recipiente anch esso a tenuta stagna separato dal primo per mezzo di uno strato di materiale assorbente in quantit sufficiente a trattenere i liquidi presenti nel campione in caso di eventuale fuoriuscita un imbal laggio esterno protettivo ed impermeabile che permetta di evi tare danneggiamenti da parte di agenti fisici o dell acqua Sull esterno del secondo contenitore deve essere applicata in modo che non sia facilmente asportabile una scheda con i dati identifi cativi del contenuto una copia di questa scheda dovr essere im mediatamente trasmessa al laboratorio destinatario mentre una terza deve essere consegnata al responsabile della spedizione In tal modo gli addetti sia al trasporto che alla ricezione saranno in grado di adottare tutte le precauzioni necessarie Sull imballaggio esterno dei colli contenenti sostanze infette o potenzialmente tali deve esse
162. ione ai seguenti aspetti 70 Sperimentazione animale Il cibo dovrebbe essere preparato con attenzione in modo da evi tarne l inalazione Le cibarie dovrebbero essere impacchettate in sacchetti di almeno 25 kg Le gabbie le rastrelliere delle gabbie e l attrezzatura connessa come i dispositivi per l alimentazione e per l acqua dovrebbero essere regolarmente puliti e sterilizzati soprattutto quando si uti lizza cibo fresco o quando possono essere contaminati dalle uri ne o da escrementi In questi casi dovrebbero essere puliti ogni giorno Le gabbie e le attrezzature possono essere lavate a mano con acqua per immersione o con la manichetta dell acqua con de tersivi spazzole disinfettanti chimici ecc il personale dovreb be indossare un equipaggiamento protettivo calzature in gom ma e grembiuli resistenti all acqua Per proteggersi dagli schizzi d acqua e dai prodotti chimici ipoclorito fenolo ammoniaca formaldeide ecc gli operatori dovrebbero seguire le seguenti norme leggere attentamente le istruzioni indicate sia sull etichetta che nelle schede di sicurezza dei prodotti maneggiare i prodotti volatili sotto cappa aspirante indossare guanti occhiali di protezione o maschere quando si lavora con materiale corrosivo o pericoloso le lenti a con tatto sono sconsigliate Sarebbe opportuno utilizzare sistemi di abbeveraggio automati ci essenziale sterilizzare le gabbie e tutte le attrezzature in autoclave o co
163. ione di acido nucleico che comportano la formazione di nuove combinazioni di materiale genetico mediante inserimento di molecole di acido nucleico prodotte con qualsiasi mezzo diverso da un organismo in un virus in un plasmide batterico o in altro sistema vettore e il loro inserimento in un organismo ospite nel quale non si presentano in natura ma nel quale sono in grado di moltiplicarsi in maniera continuativa Tecniche che ricorrono all introduzione diretta in un microrganismo di materiale ereditabile preparato al di fuori del lo stesso comprese la microinoculazione la macroinoculazione e la microincapsulazione Tecniche di fusione cellulare o di ibridazione che producono cel lule vive con nuove combinazioni di materiale genetico ereditabile mediante la fusione di due o pi cellule con metodi non presenti in natura Fecondazione in vitro traduzione trasformazione coniugazione e induzione della poliploidia non sono considerate come il risultato di modificazioni genetiche Un MOGM teoricamente separabile in organismo ospite nel quale l informazione genica viene inserita organismo donatore dal quale l informazione viene ottenuta vettore che trasferisce l informazione tra questi organismi inserto che contiene uno o pi geni in grado di rivelare l attivit biologica Ciascuna di queste parti insieme al costrutto finale deve essere pre sa in considerazione al fine di ottenere un accurata e corretta valutazio ne del
164. ioni ionizzanti esposizio ne abituale a dosi controllate Agenti biologici media trasmis sibilit specificit dell ospite infettivit tramite vettore Allergeni esposizione abi tuale 13 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica segue Tabella I ASPETTI DI SICUREZZA RELATIVI FREQUENZA DEGLI ASPETTI DI SICUREZZA RELATIVI INCIDENTI ALL ORGANIZZAZIONE E ALLA ALLA SALUTE DEI LAVORATORI GESTIONE NELL AMBIENTE DI LAVORO Probabile Sisonogi verifica Presenza di apparecchiature vec Agenti chimici poliesposi ti incidenti chie senza regolare manutenzio zione abituale a concentrazio Il verificarsi di un ne assenza di protezione delle ni normalmente superiori al incidente non susci parti elettriche dell acqua TLV TWA ta alcuna sorpresa Agenti chimici reazione con sol Radiazioni non ionizzanti venti e generazione di miscele esposizione abituale ad alte esplosive dosi Radiazioni ionizzanti possi bilit di inalazione dissemi nazione Agenti biologici elevata tra smissibilit stabilit TLV Threshold Limit Value TWA Time weighted average TLV TWA valore limite di esposizione basato sulle 8 ore lavorative per 5 giorni alla settimana Il valore P viene associato ad un Indice di Probabilit IP nel modo seguente Improbabile IP 1 Possibile IP 2 Probabile IP 3 Qualora esistan
165. ita di una grande quantit di radioisotopo es rottura di un intero contenitore o fiala seguire questa procedura e Avvisare tutti gli operatori nell immediata vicinanza che non sono contaminati e se possibile fare abbandonare l area ed isolarla Rimuovere qualunque abito contaminato il pi rapidamente pos sibile e abbandonare il luogo dell incidente Informare l ufficio della sicurezza radiologica e Trattare il personale contaminato la cute dovrebbe essere lavata sotto l acqua corrente e pulita delicatamente con una soluzione saponosa qualunque ferita dovrebbe essere irrorata con abbon dante acqua corrente Usare apposito strumento per controllare la decontaminazione e Eseguire trattamento medico specialistico se ritenuto necessario dal Medico autorizzato e Decontaminare l area interessata una volta che gli individui con taminati sono stati trattati Bibliografia California State University http riso fullerton edu radiation_safety htm Castegnaro M Br sil H Manin J P Some safety procedures for handling P during postlabelling assays In Phillips D H Castegnaro M Bartsch H Postlabelling methods for detection of DNA adducts IARC scientifique publications N 124 IARC Lyon France 1993 Duke University safety manual http www safety duke edu SafetyManuals 145 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica International Commission on Radiological pr
166. ite i reni Alcuni xenobiotici con alto peso molecolare circa 300 vengono eliminati dal fegato tramite la bile ma attraverso il ciclo entero epatico una parte di essi pu essere riassorbita Questo ciclo pu aumentarne la tossicit come nel caso dei prodotti aromatici azotati essi vengono metabolizzati in ammine aromatiche nel fegato eliminate attraverso la bile e riassorbite dall intestino Esse manifestano la loro epatotossicita durante la metabolizzazione nel fegato La figura 15 riassume le differenti possibilit di eliminazione dal l organismo degli xenobiotici idrosolubili e di quelli liposolubili XENOBIOTICI INSOLUBILI SOLUBILI Y Y LIPOSOLUBIL SE IDROSOLUBILI METABOLIZZAZIONE A EPATICA METABOLITI CICLO LIPOSOLUBILI ENTERO EPATICO Y ELIMINAZIONE 1 ELIMINAZIONE ELIMINAZIONE INTESTINALE BILIARE RENALE Y y FECI URINE Figura 15 Eliminazione dall organismo dei composti xenobiotici Uno schema di questo tipo si adatta bene ad una sostanza organica come un solvente lipofilo ma anche ad una sostanza inorganica come il mercurio molecolare che abbastanza comune nei laboratori Il mer curio si trova negli strumenti di misura termometri manometri Sotto forma di vapore pu facilmente essere assorbito per inalazione 101 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica siccome esso leggermente ipofilo pu passare attraverso
167. iti attraverso tutti gli organi e tessuti del corpo dove essi sono trattenuti con una emivita biologica di 12 40 giorni 152 Rischio radiologico FOSFORO 32 P DATI FISICI Energia Beta 1 709 MeV massima 0 690 MeV media 100 abbondanza Emivita fisica 14 3 giorni Emivita Biologica 1155 giorni Emivita Effettiva 14 1 giorni osso 13 5 giorni tutto il cor po Emissione Specifica 285 000 Ci gm Emissione Massima in aria 610 cm Emissione Massima Beta in Acqua Tessuto 0 76 cm Emissione Massima in Plexiglass Lucite Plastica 0 61cm DATI RADIOLOGICI Organi critici destinazione biologica forme solubili Osso Organi critici forme insolubili o composti non trasportabili di P Polmone inalazione e tratto Intestino crasso ingestione Vie di penetrazione ingestione inalazione puntura ferita con taminazione della pelle assorbimento per esposizione sia esterna che interna a P Committed Dose Equivalent CDE 32 mrem mCi D midollo osseo Committed Effective Dose Equivalent CEDE 7 50 mrem mCi ingerito WB 5 55 mrem mCi inalato Classe D 13 22 mrem mCi inalato Classe W Percentuale di Dose di Contaminazione della pelle 8700 9170 mrem mCi cm 7 mg cm o 0 007 cm profondit nel tessuto Percentuale di Dose delle Cellule Basali della Pelle Contamina ta 1 0 mCi cm dose locale 9200 mrad hr L osso riceve approssimativamente il 20 della dose ingerita o inalata per composti solub
168. izzare ogni effetto dovuto all introduzione nell or ganismo La contaminazione per via aerea pu avvenire mediante essiccamento polvere rapida ebollizione o soluzioni espulse attraverso aghi di siringhe e puntali di pipette aerosol e I monitoraggi del personale dosimetro per il corpo e anelli dosimetrici sono richiesti quando si manipola P in quantitativi superiori a 1 0 mCi 154 Rischio radiologico Mai lavorare direttamente sopra un contenitore aperto evitare l esposizione diretta degli occhi a particelle penetranti di P beta emittente Indossare sempre un camice da laboratorio e i guanti monouso quando si manipola P Monitorare le aree di lavoro del personale e i pavimenti usando un contatore di indagine GM dotato di una sonda specifica beta per la contaminazione di superfici Monitorare la superfice dove il P stato usato e rimuovere l eventuale contaminazione Usare schermi protettivi a bassa densit numero atomico basso per schermarsi da P e ridurre la formazione di raggi x Bremsstrahlung I seguenti materiali hanno basso numero ato mico plexiglass acrilico lucite plastica legno o acqua Non usare lamina metallica di piombo lamiere di piombo o al tro materiale ad alta densit metalli per schermarsi diretta mente da P Materiale con numero atomico pi alto di quello dell alluminio Z 213 non dovrebbe essere usato Vengono ge nerati Raggi x Bremsstrahlung da piombo e da altri
169. l importa zione delle sostanze e Fornire al mittente i permessi di importazione necessari le lette re di autorizzazione o altri documenti richiesti dalle autorit na zionali del paese d origine dei campioni e Notificare immediatamente al mittente l avvenuta ricezione Bibliografia Guidelines for the Safe Transport of Infectious Substances and Diagnostic Specimens The World Health Organization WHO 1997 61 SPERIMENTAZIONE ANIMALE Modesto Rom n Delgado Rosa Montero Sim La sperimentazione con animali da laboratorio implica il contatto con vertebrati i quali per motivi diagnostici o di ricerca possono esse re trattati con agenti biologici Inoltre implica lo studio dei processi patologici scatenati nell animale esaminato al fine di trovare la causa e la cura corretta per una determinata malattia Lo stabulario una struttura autorizzata dall autorit competente del proprio paese per poter ospitare e utilizzare animali a fini speri mentali Il personale che si occupa degli animali deve avere le suffi cienti informazioni per poter lavorare con essi in condizioni di sicurez Za deve conoscere i livelli di rischio del gruppo degli agenti biologici utilizzati e saper applicare le eventuali misure di contenimento Proteggersi contro le patologie delle specie animali siano esse la tenti o conclamate una misura precauzionale obbligatoria per quanto riguarda il rischio biologico A causa della grande variet di
170. l laboratorio Lavarsi le mani spesso e per almeno venti secondi con sapone neutro dopo aver maneggiato animali o materiali infetti dopo essersi tolti i guanti e prima di lasciare il laboratorio Riporre i camici o gli indumenti protettivi in una zona separata da quella dove vengono riposti gli abiti personali Lavare i camici o gli indumenti protettivi contaminati separata mente da quelli non contaminati Norme per il corretto utilizzo della cappa di sicurezza biologica Spegnere la lampada UV o fluorescente se presente ed accen dere il flusso dell aria per almeno 5 minuti prima di iniziare a lavorare sotto cappa Aggiustare il saliscendi se presente in relazione alla propria altezza Lavare le mani con sapone neutro ed indossare guanti adatti Disinfettare la superficie interna e posizionare un contenitore per rifiuti in modo che non ostacoli il flusso dell aria Sistemare l occorrente necessario in modo da creare una zona pulita ed una zona contaminata Spostarsi sempre dalla zona pulita alla zona contaminata ed aspettare qualche minuto prima di ricominciare per stabilizzare il flusso dell aria Trasferire i rifiuti in apposito contenitore per rifiuti biologici e disinfettare la superficie interna alla fine delle operazioni 49 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Norme per il controllo della formazione di aerosol Usare centrifughe con coperchio di biosicurezz
171. la pneumoniae Klebsiella spp Legionella pneumophila 207 Classificazione R2 b2 b2 b2 b2 b2 b2 C29 b2 b2 b2 b2 b2 b2 b2 b2 b2 WN WY N B2 b2O b2 b2 b2 b2 b2O L2 pj pj hP2 WN b29 C2 Rilievi TV TV Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Agente biologico Legionella spp Leptospira interrogans tutti 1 serotipi Listeria monocytogenes Listeria ivanovii Morganella morganii Mycobacterium africanum Mycobacterium avium intracellulare Mycobacterium bovis ad eccezione del ceppo BCG Mycobacterium chelonae Mycobacterium fortuitum Mycobacterium kansasii Mycobacterium leprae Mycobacterium malmoense Mycobacterium marinum Mycobacterium microti Mycobacterium paratuberculosis Mycobacterium scrofulaceum Mycobacterium simiae Mycobacterium szulgai Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium ulcerans Mycobacterium xenopi Mycoplasma caviae Mycoplasma hominis Mycoplasma pneumoniae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Nocardia asteroides Nocardia brasiliensis Nocardia farcinica Nocardia nova Nocardia otitidiscaviarum Pasteurella multocida Pasteurella spp Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Porphyromonas spp 208 Classificazione t2 05 F2 P2 n5 r5 P2 n NNNNNNNNNNNNNNNNWWNNNN WNNWWNNNNW Rilievi Allegato I Agente biologico Prevotella spp Proteus mirabilis Proteus penneri Proteus vulgaris
172. laboratori pu influenzare il programma di sorveglianza sanitaria periodicit delle visite mediche tipo di accertamenti clinici indica zione a vaccinazioni ecc 167 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Tabella II Organizzazione della sorveglianza sanitaria e Visite mediche per l accertamento dello stato di salute dei lavoratori Test biologici ed altri accertamenti medici e Sistemi di notifica e di registrazione dei dati e Ricerca epidemiologica Sopralluoghi nei luoghi di lavoro Rispetto alle visite mediche ed ai test clinici gli strumenti attualmente a disposizione del medico del lavoro per tutelare la salute del lavoratore sono Accertamento preventivo da effettuare prima dell assunzione accertamento preventivo preassuntivo e Accertamento preventivo da effettuare prima del cambiamento di mansione accertamento preventi vo per cambio mansione e Accertamento preventivo da effettuare a cadenza definita dopo l assunzione accertamento preven tivo periodico Accertamento di fine rapporto Si sottolinea che la raccolta l elaborazione e la comunicazione dei dati sanitari deve avvenire nel rispetto della confidenzialit dei risultati e della protezione dei dati personali L uso dei dati sanitari finalizzato alla protezione della salute e l idoneit lavorativa viene definita solo in relazione al lavoro specifico Contenuti della sorve
173. lamorosi poi non si mai dimostrata in popolazioni professionalmente esposte una loro correlazione signifi cativa con la risposta vale a dire con l insorgenza di tumori Pertanto si apre il problema di come indirizzarci nella sorveglianza di questo ventaglio di rischi e di target Gi si profilano non una ma pi direttrici lungo le quali dipanare la traccia della sorveglianza sani taria Infatti il conoscere l oncogeno specifico ed il tumore che esso pu provocare consente di utilizzare una linea pi caratterizzata com prendente misure di dose interna dosimetria molecolare inclusa e una scelta razionale degli indicatori di dose biologica effettiva e degli effet ti biologici precoci in cellule somatiche o germinali Se invece non conosciamo l agente specifico di un determinato tipo di tumore profes sionale il problema diventa molto pi complesso e non si individuano soluzioni pratiche in quanto la prospettata applicazione di indicatori aspecifici quali la mutagenicit urinaria e le aberrazioni cromosomiche non offre risultati di univoca interpretazione Rischi fisici Alcuni rischi fisici che possono essere presenti nei laboratori di bio tecnologia sono rappresentati dalle radiazioni ionizzanti e non ionizzanti Radiazioni ionizzanti La sorveglianza medica nei confronti di radiazioni ionizzanti utiliz zate Raggi X P ecc consiste sinteticamente in una serie di atti medici specifici di natura diagnostica pr
174. lazione ogni cosa deve essere pulita e ogni operatore deve personalmente prendersi cura dei materiali che risultino con taminati o pericolosi e dei rifiuti e I contenitori devono essere riposti in armadi di deposito o su scaf fali riservati a questo uso e Le cappe non devono essere usate per depositare contenitori chimi ci o piccoli strumenti di laboratorio e La vetreria rotta o scheggiata deve essere immediatamente rim piazzata e Gli aghi e gli oggetti taglienti bisturi coltelli devono essere messi in contenitori riservati a queso uso e Gli aghi non devono mai essere rincappucciati 6 Deposito delle sostanze chimiche Il deposito delle sostanze chimiche in un laboratorio deve rispettare 111 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica misure rigorose specie per quanto riguarda le quantit di liquidi infiammabili evitare contenitori di vetro di pi di un litro di solventi molto infiammabili prodotti chimici corrosivi acidi e basi forti potenti ossidanti e acidi alogenidrico di sostanze chimiche corrosive acidi e basi forti potenti ossi danti di sostanze chimiche che reagiscono violentemente con l acqua metalli alcalini ibridi composti organometallici di sostanze chimiche che reagiscono violentemente con l ossi geno fosforo bianco Le sostanze chimiche incompatibili devono essere tenute separate e quando possibile i prodotti chimici devono essere
175. le membra ne degli alveoli polmonari Il mercurio in grado di attraversare la barriera emato encefalica loca lizzandosi nella sostanza grigia del cervello inoltre pu essere ossidato in sale di mercurio solubile in acqua che verr poi eliminato per via renale Gli ioni mercurio possono indurre processi infiammatori nel sistema nervoso encefaliti polinefriti e nei glomeruli renali glomerulonefriti Nell intestino gli ioni mercurio possono essere metilati ad ioni metilmercurio CH Hg ci facilita l assorbimento intestinale ma ne au menta anche il passaggio nel sistema nervoso come indicato nel figura 16 DETOSSICAZIONE Eliminazione renale biliare Ossidazioni enzimatiche Metilazione enzimatica HO catalasi flora intestinale ug Hg mS 2 E lt BEEN CH Hg Riduzioni enzimatiche Demetilazioni enzimatiche Mercurio molecolare Cationi di mercurio Cationi di metilmercurio AGENTE PRE TOSSICO TOSSICO FINALE TOSSICO FINALE Reni Sistema nervoso SNC SNP Neurotossicit Neurotossicit Glomerulonefriti Encefaliti Polinefriti INTOSSICAZIONE Figura 16 Differenti specie chimiche del mercurio in relazione al bersaglio e agli effetti tossici Nei laboratori biologici il mercurio si pu trovare sotto forma molecolare termometri ionica sali di mercurio e a volte sotto forma di composti organometallici come il dimetil
176. li proteine enzimi proteine di struttura proteine di trasporto e acidi nucleici RNA e specialmente DNA I fosfolipidi insaturi che sono i maggiori costituenti delle membrane biologiche sono anche bersagli sensibili alle aggressioni in special modo aggressioni ossi danti degli xenobiotici tossici Gli effetti dannosi su un organo fegato reni polmoni midollo os seo pelle o su un sistema nervoso digerente riproduttore pos sono portare ad una organotossicit spesso abbastanza specifica Gli effetti immunotossici possono apparire dopo un aggressione al sistema immunitario quali reazione di ipersensibilit allergie effetti immunodepressivi o immunosoppressivi e processi autoimmuni La rilevazione precoce di queste reazioni immunotossiche nella maggior parte dei casi difficile da effettuare mediante specifici test nell ambiente di lavoro le allergie sono spesso diagnosticate dal medi co del lavoro Le modificazioni del patrimonio genetico essenzialmente DNA da parte di xenobiotici genotossici portano a mutazioni che se non vengo no riparate o riparate male possono portare ad una proliferazione cellulare incontrollata tumore Se vengono colpite le cellule ripro duttive possono verificarsi delle malformazioni nei discendenti mol to importante tenere in considerazione questo effetto teratogeno sfor tunatamente solo pochi composti chimici possono essere considerati veramente responsabili di questi eff
177. li impianti dovrebbero essere isolati e le porte chiudersi auto maticamente quando necessario Nei laboratori dovrebbe entrare solo il personale autorizzato e munito di un codice di identificazione Econsigliabile utilizzare serrature in modo da limitare l accesso ai laboratori alle aree di quarantena e a quelle dedicate all alle vamento degli animali E opportuno praticare tacche nelle orecchie degli animali ese guite con speciali pinze Questa procedura dovrebbe essere regi strata con un codice speciale E sconsigliata l amputazione delle falangi Gli animali possono inoltre essere dotati di particolari targhette di plastica o metallo recanti numeri o lettere di identificazione Questa metodica sconsigliata nel caso dei roditori e Possono essere effettuati tatuaggi su zone chiare della pelle orec chie o coda usando penne elettroniche o particolari pinze marcatrici Possono inoltre essere iniettati microchips sottocutanei costitui ti da un materiale biocompatile a questo scopo dovrebbe essere utilizzata una siringa Gli animali potranno cos essere identifi cati mediante uno speciale apparecchio La cura degli animali consiste in una serie di operazioni quotidiane come ricevere gli animali pulire le gabbie eliminare i rifiuti ecc che possono essere pericolose per la salute e la sicurezza del personale in relazione ai materiali e agli animali utilizzati Per queste operazioni di routine bisognerebbe porre attenz
178. licato nel Supplemento ordinario alla G U 18 2 92 n 40 Tale norma lascia in vigore i soli comma 1 e 3 dell articolo 1 della precedente Legge 924 del 12 giugno 1931 cosi come modificata dalla Legge 615 del 1 maggio 1941 La norma stata modificata e integrata da 231 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Avviso di Rettifica in G U 15 12 92 n 294 D M 29 settembre 1995 Riconoscimento dei titoli di laurea idonei ed equivalenti ai fini della sperimentazione animale in Gazzetta Ufficiale 3 maggio 1996 n 102 e Circolari Ministeriali 32 92 17 93 e 18 93 in G U 25 5 93 n 120 8 94 in G U 14 7 94 n 163 Legge 413 del 12 ottobre 1993 norme sull obiezione di coscienza alla speri mentazione animale Pubblicata sulla G U 16 10 93 n 244 Decreto Legislativo 633 del 12 novembre 1996 attuazione della direttiva 92 65 CEE che stabilisce norme sanitarie per gli scambi e le importazioni nella Comunit di animali sperma ovuli e embrioni non soggetti per quanto ri guarda le condizioni di polizia sanitaria alle normative comunitarie specifi che di cui all allegato A sezione I della direttiva 90 425 CEE 232 233 ISBN 44 81b3 240 2 Edizione fuori commercio 917888811632800
179. lisci di facile puli zia Sono consigliabili pavimenti in PVC con giunzioni elettrosaldate e Tubi e condotti esterni dovrebbero essere evitati e nel caso fos sero presenti essere separati dai muri Le superfici dei banconi da lavoro dovrebbero essere imperme abili resistenti ai disinfettanti agli acidi ai solventi organici agli alcali e con alto grado di resistenza al fuoco e arredo del laboratorio dovrebbe essere resistente saldamente ancorato e facilmente accessibile alle operazioni di pulizia sia all esterno che tra 1 ripiani interni e Iripostigli dovrebbero essere utilizzati per contenere oggetti di uso immediato evitando cosi disordine sui banconi e nelle zone di passaggio Uno spazio idoneo alla conservazione a lungo termine del mate riale utilizzato in laboratorio convenientemente situato al di fuori dell area di lavoro dovrebbe essere contemplato e Un lavabo azionabile tramite il piede o il gomito in preferenza vicino all uscita dovrebbe essere presente Un apparato lavaocchi dovrebbe essere presente e prontamente accessibile e Le porte dovrebbero avere un adeguata resistenza al fuoco chiu dersi da sole ed avere pannelli trasparenti e Un autoclave per la decontaminazione dei rifiuti infetti dovreb be essere disponibile in ogni laboratorio o all interno dello stes so fabbricato Gli indumenti personali dovrebbero essere riposti in ambienti separati da quelli dove vengono riposti gli indumenti da l
180. lizzato alla prevenzione del rischio presente nei laboratori di ricerca biologica Per tutti questi motivi questo libro importante e tempestivo Esso nasce dalla collaborazione tra persone che operano nel mondo della ricerca e persone che si occupano di prevenzione a tutti i livelli della sanit pubblica Tenendo conto delle recenti normative europee sulla sicurezza questo volume vuole essere una guida pratica per la sicurez za chimica fisica e biologica dei ricercatori che operano nel campo delle biotecnologie compreso l uso di microorganismi geneticamente modificati Gli autori hanno sviluppato le loro esperienze professionali presso importanti centri europei di ricerca e di cura come l Istituto Nazionale per la Ricerca sul Cancro IST Genova l International Agency for Research on Cancer IARC Lyon l Istituto Superiore Per la Sicu rezza del Lavoro ISPESL Roma l Azienda Ospedaliera San Martino di Genova e Cliniche Universitarie Convenzionate Ge nova il Centre National pour la Recherche Scientifique et Technique CNRS Gif sur Yvette il Centro de Seguridad e Higiene en el Trabajo CSHT Consejeria de Empleo y Desarrollo Tecnologico Junta de Andalucia Cordoba Espafia e il Consorzio Interuniversitario Biolo gia Molecolare Piante CIBMP Genova Sono lieto che il libro sia nato qui e mi auguro che possa veramente risultare un utile strumento di lavoro per la salvaguardia della salute dei lavoratori della qualit d
181. lla direttiva del Consiglio delle Comunit europee 79 831 CEE del 18 settembre 1979 recante la sesta modifica della direttiva 67 548 CEE relativa alla classificazione imballaggio ed alla etichettatura delle sostanze e dei preparati pericolosi Circolare 21 del Ministero della Sanit del 24 marzo 1982 norme per l attua zione dell inventario CEE delle sostanze chimiche esistenti Decreto Ministeriale 4 del 23 febbraio 1988 etichettatura speciale da ap plicare su sostanze e preparati pericolosi Decreto Ministeriale del 28 gennaio 1992 Ministero della Sanit classifi cazione e disciplina dell imballaggio e della etichettatura dei preparati peri colosi in attuazione delle direttive emanate dal Consiglio e dalla Commissio ne della Comunit Europea Decreto Ministeriale del 16 febbraio 1993 Ministero della Sanit modificazioni ed integrazioni ai decreti ministeriali 3 dicembre 1985 e 20 dicembre 1989 sulla classificazione e la disciplina dell imballaggio e dell etichettatura delle sostanze pericolose in attuazione delle direttive ema nate dal Consiglio e dalla Commissione delle Comunit europee Decreto Legislativo 52 del 3 febbraio 1997 attuazione della direttiva 92 32 CEE concernente classificazione imballaggio ed etichettatura delle sostanze pericolose Decreto Legislativo 28 del 516 luglio 1998 attuazione di direttive comunita rie in materia di classificazione imballaggio ed etichettatura dei preparati pericolosi
182. lus Opisthorchis felineus Opisthorchis spp Paragonimus westermani Plasmodium falciparum Plasmodium spp uomo e scimmia Sarcocystis suihominis Schistosoma haematobium Schistosoma intercalatum Schistosoma japonicum Schistosoma mansoni Schistosoma mekongi Strongyloides stercoralis Strongyloides spp Taenia saginata Taenia solium Toxocara canis Toxoplasma gondii Trichinella spiralis Trichuris trichiura Trypanosoma brucei brucei Trypanosoma brucei gambiense Trypanosoma brucei rhodesiense Trypanosoma cruzi Wuchereria bancrofti Classificazione p o Cr NWWWWYINKNNNNWNNNNNNNNNNNWNNNNNNWNN Rilievi FUNGHI Agente biologico Classificazione Rilievi Aspergillus fumigatus Blastomyces dermatitidis Ajellomyces dermatitidis Candida albicans Candida tropicalis 216 2 N A Allegato I Agente biologico Classificazione Rilievi Cladophilophora bantiana anticamente xylophypha bantiana cladosporium bantianum o trichoides Coccidioides immunitis Cryptococcus neoformans var neofonnans Filobasidiella neofonnans var neoformans Cryptococcus neoformans var gattii Filobasidiella bacillispora Emmonsia parva var parva Emmonsia parva var crescens Epidermophyton floccosum Fonsecaea compacta Fonsecaea pedrosoi Histoplasma capsulatum var capsulatum Ajellomyces capsulatus Histoplasma capsulatum duboisii Madurella grisea Microsporum spp Neotestudina ros
183. m mCi puntura Committed Effective Dose Equivalent CEDE 90 mrem mCi ingerita 63 mrem mCi inalata Limite Annuale sull immissione ALI 80 mCi ingestione o inalazione 3H O 1 0 ALI 80 mCi CH 5 000 mrem CEDE Percentuale di esposizione della pelle contaminata 57 900 mrad hr mCi contatto Percentuale di esposizione unicamente per lo strato corneo della pelle 147 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica e Contaminazione della pelle di 1 0 j Ci cm2 0 mrad hr dose percentuale alle cellule basali e Regola di Thumb 0 001 uCi ml di H nel campione di urine indicativo di una totale dose integrata in tutto il corpo 10 mrem approssimativamente persona media se non stabilito il tratta mento es lavare per mezzo di un forte getto con fluidi SCHERMI PROTETTIVI Non necessari ATTREZZATURA PER CONTROLLO CONTAMINAZIONI e Non si pu rilevare H usando un G M o un contatore di sorve glianza Nal e I Contatore di liquido scintillante indiretto il solo metodo di monitoraggio DOSIMETRIE PER IL MONITORAGGIO DELLA RADIAZIONE e Nonoccorre dosimetro sul corpo o ad anello beta energia troppo bassa RirivTI RADIOATTIVI e Solidi liquidi fiale descintillazione materiale anatomico car casse di animali INFORMAZIONI DI CARATTERE NORMATIVO e Concentrazione Aria Derivata DAC 2 0E 5 uCi cc professio nale Limite Autorizzato di contaminazione aerea
184. ma ed all integrazione poi del DNA plasmidico funziona solo per le cellule vegetali Un recente lavoro ha invece riportato che l agrobatterio in particolari condizio ni sperimentali in grado di trasferire il proprio DNA plasmidico anche in cellule animali ed umane Kunik et al 2001 Ulteriori ap profondimenti sono necessari per verificare se un rischio effettiva mente esiste per gli operatori che utilizzano gli agrobatteri nel frat tempo si suggerisce di utilizzare questi microrganismi in laboratori con adeguati livelli di contenimento anche se non sono inclusi nella lista europea degli agenti biologici Allegato I Il processo di valutazione del rischio biologico che deve necessa riamente tener conto di quanto precedentemente riportato ha lo scopo di ridurre al minimo il rischio di esposizione durante la manipolazione di agenti biologici attraverso l uso di specifiche misure di contenimento A questo scopo le attivit che coinvolgono l uso di agenti biologici in particolare dei MOGM vengono distinte in 4 classi 32 Rischio biologico Classe 1 Operazioni che presentano rischi nulli o trascurabili ovvero operazioni per le quali un livello 1 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Classe 2 Operazioni a basso rischio ovvero operazioni per le quali un livello 2 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Classe 3 Operazioni che presentano un rischio mod
185. mali Tuttavia a titolo precauzio nale si consiglia di applicare nei laboratori il livello di contenimento 3 ad eccezione dei lavori relativi ad un agente identificato di scrapie per cui un livello di contenimento 2 sufficiente A Possibili effetti allergici D L elenco dei lavoratori esposti all agente biologico deve essere conserva to per di pi di dieci anni dalla fine dell ultima esposizione nota T Produzione di tossine V Vaccino efficace disponibile 218 ALLEGATO II LEGISLAZIONE EUROPEA SICUREZZA SUL LAVORO Direttiva 82 605 C EE sulla protezione dei lavoratori contro i rischi connessi ad un esposizione al piombo metallico ed ai suoi composti ionici durante il lavoro prima direttiva particolare ai sensi dell articolo 8 della direttiva 80 1107 CEE Direttiva del Consiglio 83 477 CEE sulla protezione dei lavoratori contro i rischi connessi con un esposizione all amianto durante il lavoro seconda di rettiva particolare ai sensi dell articolo 8 della direttiva 80 1107 CEE Direttiva del Consiglio 86 188 C EE in materia di protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti dall esposizione al rumore durante il lavoro Direttiva del Consiglio 89 391 CEE concernente l attuazione di misure vol te a promuovere il miglioramento della sicurezza e della salute dei lavoratori durante il lavoro Direttiva del Consiglio 89 654 CEE relativa alle prescrizioni minime di si curezza e di salute per i luoghi d
186. materiali di protezione ad alta densit Occhiali di sicurezza o schermi protettivi facciali sono consigliati quando si lavora con P L efficienza del tipico contatore GM di indagine con sonda spe cifica maggiore o uguale al 45 L efficienza calcolata dal tipico contatore a liquido di scintillazione per P finestra piena massima maggiore o uguale a 85 Il limite tipico di rilevazione di P nei campioni di urina usando un contatore a liquido di scintillazione 1 1 x 10 7uCi ml 155 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica FOSFORO 33 P DATI FISICI Energia Beta 0 249 MeV massima 100 abbondanza 0 085 MeV media Emivita Fisica 25 4 giorni Emivita Biologica 19 giorni 40 di immissione 30 rapida mente eliminata dall organismo il rimanente 30 decade Emivita Effettiva 24 9 giorni osso Specifica attivit 1 000 3 000 Ci millimole Emissione Massima Beta in aria 89 cm 35 pollici 3 piedi Emissione Massima Beta in Acqua Tessuto 0 11 cm 0 04 pollice Emissione Massima in Plexiglas Lucite Plastica 0 089 cm 0 035 pollice Half Value Layer HVL 0 30 mm acqua tessuto DATI RADIOLOGICI Organo critico destinazione biologica forme solubili Midol lo osseo Organi critici forme insolubili o composti non trasportabili P polmone inalazione e intestino ingestione Vie di immissione ingestione inalazione puntura ferita conta mina
187. mercurio CH Hg CH Il dimetilmercurio una molecola volatile che pu portare a morte 102 Rischio chimico per semplice penetrazione cutanea Siccome il pericolo molto eleva to l uso del mercurio e dei suoi composti deve essere limitato 3 Quali sono le principali forme di tossicit Uno xenobiotico pu determinare effetti tossici con due tipi di interazione azione diretta della sostanza sul suo bersaglio dipende molto dalla reattivit della sostanza per azione indiretta di un intermedio definito prodotto tossico finale Il prodotto tossico finale un derivato dello xenobiotico originale o agente pre tossico derivante da un processo idrolitico nell ambiente bio logico o da processi di biotrasformazione metabolizzazione enzimatica Tramite la sperimentazione amp possibile distinguere gli effetti imme diati cio gli effetti acuti a volte letali da quelli ritardati nel tempo che portano a effetti tossici pi o meno a lungo termine La figura 17 riassume questi differenti possibilit di azione TOSSICIT DIRETTA Reattivi chimici TOSSICITA lt TOSSICITA TOSSICITA__y TOSSICITA PIU O ACUTA IMMEDIATA RITARDATA MENO A LUNGO TERMINE Tossico finale Li IDROLISI CON ACQUA IN METABOLIZZAZIONE AMBIENTE BIOLOGICO ENZIMATICA A A Sostanze chimiche non reattive PRE TOSSICO Figura 17 Principali forme di tossicit e effetti to
188. mettere vicini prodotti incompati bili che insieme sono molto reattivi 78 Rischio chimico A tutt oggi pi di 2 milioni di sostanze chimiche sono elencate nel Chemical Abstract CAS on line Gennaio 2001 fra le quali 100 000 sono correntemente utilizzate ed in procinto di essere classificate dal l Unione Europea Ovviamente molte delle sostanze chimiche usate nelle biotecnologie sono sotto questa classificazione Nondimeno occorre fare molta attenzione nell uso di reagenti pi o meno sofisticati in quanto il loro reale comportamento non conosciuto e il loro impatto sulla salute dell uomo non stato ancora studiato Le sostanze chimiche propriet e rischi Per un esperimento di laboratorio la sicurezza dipende dall uso di strumentazioni adeguate dal tipo di prodotti chimici e dalle condizioni di utilizzo AI fine di valutare i rischi parecchi parametri devono essere presi in considerazione propriet fisico chimiche reattivit danno alla salu te umana o tossicit veterinaria o all ambiente ecotossicit figura 2 PROPRIETA DELLE SOSTANZE CHIMICHE Y STATO FISICO REATTIVITA CHIMICA EFFETTI SULLA SALUTE V PROPRIETA PROPRIETA PROPRIETA FISICO CHIMICHE CHIMICHE TOSSICHE Figura 2 Principali proprieta delle sostanze chimiche 79 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica A PROPRIET FISICO CHIMICHE E RISCHI ASSOCIATI Le propriet fisico
189. n prodotti chimici in modo da mantenerli sempre in condizioni ottimali per le sperimentazioni I materiali o le ap parecchiature per la sterilizzazione dovrebbero essere regolar mente controllati e calibrati in modo da garantirne l efficacia e la sicurezza Il personale dovrebbe essere informato dei rischi connessi al loro uso ustioni intossicazioni reazioni cutanee ecc Le lettiere sporche dovrebbero essere rimosse e sostituite in modo da mantenere gli animali in un ambiente asciutto e pulito La fre quenza secondo cui si effettuer questa mansione dipende da di 71 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica versi fattori tra cui il numero e la taglia degli animali il tipo e la qualit del materiale e sono consigliabili pompe aspiranti per ri muovere urine escrementi e microrganismi al fine di impedire la produzione di pulviscolo aereo e il conseguente rischio di inalazione rifiuti rappresentano un problema importante Gli animali mor ti fanno parte di questi rifiuti I laboratori che utilizzano animali dovrebbero essere dotati di un inceneritore o altrimenti dovreb be esserci un area dedicata allo stoccaggio dei rifiuti con degli speciali congelatori per gli animali morti I contenitori dei rifiuti dovrebbero essere resistenti agli strappi e dotati di chiusure er metiche Personale specializzato dovrebbe occuparsi dello smaltimento dei rifiuti e n caso di incidenti sul lavoro anc
190. nde solventi alchilanti intercalanti ammine aromatiche ormoni metalli pesanti ecc Molte sostanze quali solventi una volta erano considerate innocue ed erano manipolate senza precauzioni prima che venisse suggerito alla fine degli anni 70 che potevano avere effetti avversi a lungo termine Al contrario le sostanze conosciute con un elevata tossicit immediata erano manipolate con maggior attenzione ma i loro effetti a lungo termine a bassi livelli di esposi zione non erano conosciuti L uso di maschere in laboratorio divenne largamente diffuso dal 1970 cos come lo sviluppo di metodi strumentali che richiedevano minori quantit di sostanze chimiche Queste evoluzioni e probabilmente la migliore protezione della pelle con i guanti hanno concretamente ridotto i livelli di esposizio ne in laboratorio ma le sorgenti sono numerose Le esposizioni multiple considerate oggi introducono difficolt metodologiche ulteriori nella programmazione e implementazioni epidemiologiche In contrasto con i processi lavorativi dell industria chimica le persone che lavorano in laboratorio sono esposte ad una 180 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori maggiore variet di agenti da sorgenti diverse biochimiche fisiche o biologiche ma probabilmente ai pi bassi livelli Questo pu spie gare perch nessuno studio ha sinora stabilito quantitativamente l esposizione specifica Infatti la maggior parte degli studi non ha definito le e
191. ndo vengono scaldati Ma di solito la polimerizzazione iniziata da tracce di impurit acidi basi perossidi metalli I monomeri devono essere conservati in piccole quantit dopo la stabilizzazione mediante un antiossidante fenoli amine Tra le categorie di composti particolarmente instabili o esplosivi vi sono derivati del perossido di idrogeno come gli idroperossidi terbutil idroperossido perossidi benzoil perossido peracidi acido peracetico persali persolfato di ammo ni pe vol OL HC oe CH Perossido di idrogeno Terbutil idroperossido Benzoil perossido o HC m H Ne 90 Za NH J oTo Vix Acido peracetico Persolfato di ammonio Bisogna fare attenzione alla formazione di composti perossidici dalla auto ossidazione all aria di alcuni monomeri acrilati metacrilati stirene o di alcuni solventi come eteri etere dietilico 1 4 diossane perch questi derivati perossidici sono altamente instabili al calore La presenza degli idroperossidi pu essere evidenziata con una so luzione acquosa di ioduro di potassio leggermente acidificata CH COOH o con l utilizzo di una striscia di carta impregnata con amido iodurato 82 Rischio chimico 99 Acido perclorico Perclorato di un metallo monovalente derivati dall acido perclorico HCIO come i perclorati CIO sono per la maggior parte instabili e possono esplodere per rapido riscaldamento o per mezzo di una rasc
192. ne 1258 mrem mCi ogni organo puntura adulto Committed Effective Dose Equivalent CEDE 24 mrem mCi tutto l organismo inalazione PROTEZIONE Lamina di piombo 1 32 a 1 16 inch thick 0 152 mm lamina di piombo Strato di Valore medio 0 02 mm 0 008 pollici 162 Rischio radiologico STRUMENTI DI INDAGINE Il contatore di indagine provvisto di una sonda a bassa energia di scintillazione Nal necessario I contatori di indagine provvisti di dispositivi GM o sonde con finestra finale GM sono inefficienti Queste sonde non sono usa te per monitorare la contaminazione esse sono efficienti solo circa allo 0 146 Dosi PERCENTUALI dalla sorgente non protetta del punto isotropico 1 0 mCi Di stanza mrads hr 1 00 cm 156 275 10 00 cm 15 5 27 5 100 00 cm 0 156 0 28 6 00 in 6 5 Qualche autore indica 0 7 mrad hr per mCi a 100 cm I lavoratori che useranno I nella forma chimica Nal o KI do vranno essere sottoposti a esame della tiroide per avere un riferi mento iniziale rispetto all esposizione futura La ghiandola della tiroide accumula 20 30 dello iodio radio attivo solubile preso dall organismo Tutto lo iodio radioattivo assunto dall organismo potr essere eliminato completamente per via urinaria richiesto dalla legge un esame biologico della tiroide quando si manipola un quantitativo uguale o superiore a 1 mCi nella forma chimica di Nal o KI Il Limite soglia in base al principio ALARA consi
193. ne anche la possibilit di affezionarsi agli animali questo comportamento potrebbe ostacolare il lavoro di ricerca Monitorare attraverso controlli con frequenza almeno annuale la salute del personale e possibili contaminazioni da zootossine Il lavoro a contatto con gli animali implica il rischio di infezioni Questo tipo di rischio ha delle caratteristiche particolari differenti da quelle del pericolo di tipo chimico e fisico perch non possibile sa pere se un animale sia infetto o no senza effettuare delle analisi Ci sono molti agenti biologici che non attaccano gli animali Inoltre non si sa molto su come avvenga la trasmissione dei germi patogeni non esi ste una relazione dose effetto una reazione tipo tutto o niente o 74 Sperimentazione animale sono infettati tutti o nessuno Gli effetti di un infezione patogena non sono prevedibili dipendono dal singolo In pi questi agenti possono mutare specialmente 1 virus possono cambiare la loro struttura e patogenicit Tuttavia possibile applicare criteri di sicurezza e tutela della salu te del personale in modo da supportare le norme comportamentali di base dei laboratori dove si lavora a contatto con gli animali Bibliografia Blanchin N Abadia G Leprince A Risques infectieux li s la matenance et la manipulation des animaux de laboratoire pour le personnel travaillant dans les animaleries Documents pour le medicine du travail INRS 5
194. nghi turali materiali sintetici acqua dura non uti poco attivo su virus lizzare Glutaraldeide con le proteine scarsa tossicit per pelle occhi polmoni pos sibili effetti allergici e irritanti Clorexidina interagisce con le membra bassa tossicit antisettico topico su ferite incompatibile con detergenti anionici De Di ne cellulari attivo sullo sporco ed escoriazioni Ipoclorito di sodio De Di ossida i legami peptidici denatura le proteine basso costo ampio spettro facilmente reperibile alta attivit su batteri discreta attivit su micobatteri e spore scarsa attivit su virus e funghi igienizzante delle superfici trattabile con acqua pH sensibile si lega a sostanze organiche come le ammine scarsa tossicit per pelle occhi polmoni inattivato da proteine scarsamente inattivato da materiali naturali sin tetici acqua dura e detergenti cationici non utilizzabile con acidi e basi forti 22160 0U9AOIG 2343341 Ip LOIEIOGE rep ajeuosued Jad ezzaJnols p ajenuey T6L EDTA Ac Etilen aumenta la permeabilit di migliora l efficacia degli an Pseudomonas bassa attivit battericida Diammintetra Acetico pareti e membrane cellulari tibiotici Proteus non ad ampio spettro De Di Staphylococcus irritante Ossido di Etilene alchila gli acidi nucleici DNA alta attivit battericida sterilizzazione di m
195. no dal quotidiano contatto fisico con gli animali come pure dalle varie attivi t di laboratorio tra cui campionamento di sangue interventi chirurgi ci attivit di necroscopia o manipolazione di materiale biologico a ri schio correlato all animale Il certificato sanitario dell animale che entra in stabulario deve con tenere una dichiarazione che gli animali siano esenti da e Roditori virus della coriomeningite hantanvirus micosi tuber colosi e Primati non umani tubercolosi encefalite malattia di Malburgo febbre gialla e Ovini bovini e suini brucellosi tubercolosi Gatti e cani parassiti rabbia certificato di vaccinazione Il rischio biologico non pu essere calcolato ed molto difficile poter definire una linea di prevenzione necessario pertanto con trollare tutte le possibili variabili per poter definire l appropriato li vello di biosicurezza attraverso la selezione degli animali compiendo accurati controlli ed applicando le appropriate misure preventive Nel valutare il rischio biologico che deriva dalla trasmissione di materiale patogeno dagli animali utilizzati per sperimentazioni ospi ti devono essere considerate alcune caratteristiche 65 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Caratteristiche degli agenti infettivi virulenza stabilit biologi ca ecc Caratteristiche delle malattie gravit disponibilit di immuno
196. non soltanto dalla chimica ma anche dalla biologia porta a definire la tossicologia chimi ca come un nuovo approccio molecolare alla tossicologia riassunto nella figura 13 96 Rischio chimico CHIMICA BIOLOGIA SOSTANZE ORGANISMI VIVENTI XENOBIOTICHE Oo ECOSISTEMI Affinit riconoscimento o molecolare Reattivit INTERAZIONI MOLECOLARI Reazioni degli organismi viventi TOSSICOLOGIA TOSSICOLOGIA UMANA EFFETTI TOSSICI AMBIENTALE E ANIMALB N ECOTOSSICOLOGIA TOSSICOLOGIA CHIMICA l Figura 13 Comparsa di effetti tossici dall interazione molecolare fra una sostanza xenobiotica e il suo bersaglio biologico Tralasciando gli effetti locali effetti corrosivi o irritanti al sito di contatto delle sostanze chimiche aggressive la prima condizione indi spensabile affinch uno xenobiotico possa agire su un organismo vi vente la possibilit di penetrarvi 2 Come pu uno xenobiotico penetrare nell organismo e diffonder si La volatilit e la solubilit sono due propriet chimico fisiche de terminanti per la valutazione dei rischi di tossicit di una sostanza a Ruolo della solubilit Per quanto riguarda la solubilit le sostanze chimiche sono distinte in insolubili in acqua e nei grassi solubili in acqua sostanze chimi 97 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica che
197. nquinata L esatta localizzazione dell incidente per esempio se il ro vesciamento nel mezzo di una stanza o all interno di un frigorifero o su una attrezzatura particolare e del posto dove 1 vestiti contaminati sono stati abbandonati 135 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica La presenza od assenza di un solvente e in caso di presenza la natura del solvente questa informazione e assolutamente necessaria in caso di decontaminazione chimica dell area in quinata Le persone incaricate della decontaminazione prima di interve nire dovranno acquisire tutta l attrezzatura necessaria Questa include Contenitori capienti abbastanza e con apertura ampia in gra do di contenere tutti i pezzi di vetreria rotta i guanti gli indu menti di tessuto utilizzati per pulire l area ecc Una scorta di stracci in tessuto Una scorta di guanti Soluzioni acquose lievemente acide o basiche a seconda del le propriet della sostanza rovesciata Soluzioni decontaminanti Le persone con il compito di decontaminare dovranno proteg gersi prima di iniziare la decontaminazione La protezione in cluder Tuta intera Occhiali protettivi Visiera Guanti durante la decontaminazione indossare sempre due paia di guanti cambiandosi il paio pi esterno dopo ogni azio ne Protezioni per le vie respiratorie queste dipendono dal tipo di sostanza dalla nostra conoscenz
198. nsiglia inoltre di e Istallare il bagno termostatato lontano da derivazioni elettriche sotto tensione prese cavi apparecchi Riempireil bagno termostatato con acqua distillata con l aggiunta di antimuffa o antimicrobico non utilizzare azide sodica poich pu formare composti altamente esplosivi a contatto con ottone piombo rame e Sostituire l acqua almeno ogni 15 giorni e in caso di rovescia mento di campioni in tal caso smaltirla come rifiuto biologico e Periodicamente procedere alla pulizia del bagno termostatato uti lizzando guanti 45 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Evitare di immergere la mani nude nell acqua e Verificare sempre prima di procedere ad un incubazione la termoresistenza dei contenitori ci permette di evitare la disper sione di materiale biologico potenzialmente infetto Nel caso si compiano operazioni con agenti biologici cellule e tes suti di origine umana o animale con attrezzature ad es omogeneizzatori agitatori per coltura liofilizzatori sonicatori che possono generare aerosol si raccomanda di lavorare sotto cappa biologica di sicurezza quando ci non possibile utilizzare appositi dispositivi di protezione individuale ed aprire i contenitori sotto cappa dopo circa 10 minuti per permettere il depositarsi dell aerosol I contenitori devono essere di plastica o di vetro spesso in ogni caso prima dell uso accertarsi che siano in bu
199. ntesano R Bartsch H Boyland E Della Porta G Fishbein L Griesemer G Swan A B Tomatis L IARC Handling chemical carcinogens in the laboratory Problems of safety Editors IARC scientific publications N 33 Pp 32 1979 NIH National cancer institute safety standards for research involing chemical carcinogens DHEW Publication N NIH 75 900 2 june 1975 1975 NIH guidelines for the laboratory use of chemical carcinogens US department of health and human services National Institutes of Health Washington Pp 15 1981 OMS Manuel de s curit biologique en laboratoire 1984 1984 Ortiz J R Garcia J Archilla J Criado A Latex allergy in anesthesiology Rev Esp Anestesiol Reanim 42 169 174 1995 129 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Picot A Castegnaro M Risques li s la manipulation des produits canc rog nes Partie B L Actualit Chimique Janvier F vrier 79 85 1989 Picot A Grenouillet P La s curit en laboratoire de chimie et biochimie Technique et Documentation Lavoisier Paris 2nd Ed 1992 Picot A Information Toxicologique n 4 Liste provisoire de quelques canc rog nes chimiques pour l Homme CNRS Institut de Chimie des Substances Naturelles Gif sur Yvette 1988 Picot A Information Toxicologique n 5 les agents alkylants canc rog nes potentiels pour l Homme CNRS Institut de chimie des substances naturelles
200. ntroduzione Le sostanze chimiche non sono usate soltanto dai chimici molti biologi possono avere necessit di usarle continuamente nella biolo gia di base o in campi applicati come le biotecnologie Una sostanza chimica pu essere fonte di pericolo i relativi rischi devono essere controllati in modo da aumentare la qualit e la sicurez za delle attivit di laboratorio La sicurezza associata ad un alta qualit del lavoro pertanto importante conoscere precisamente i rischi relativi alle sostanze chimi che che devono essere utilizzate in laboratorio In biologia come in chimica o fisica ogni volta che si intende lavo rare con sostanze chimiche si deve prima di tutto prendere in conside razione la valutazione e la prevenzione dei rischi che possono essere di tipo chimico fisico chimico o ambientale Nel settore dei rischi relativi alle sostanze chimiche il linguaggio cos importante che sar fornita una breve rassegna dei termini pi importanti Come si definisce una sostanza chimica In chimica la pi piccola forma individuata l atomo Gli atomi pos sono essere associati per formare strutture pi complesse e molecole L ambiente biologico principalmente l acqua 75 per l uomo cos gli atomi agiscono come ioni caricati negativamente o positiva 77 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica mente cosa che corrisponde ad un guadagno o ad una perdita di
201. nza nel cal colare per C 5 Contrariamente strofinando una garza inumidita con liquido di scintillazione sulle superfici si pu effettuare una lettura indi retta della radioattivit residua da C DosIMETRIE PER IL MONITORAGGIO DELLA RADIAZIONE Non occorre beta energia troppo bassa Percentuale di Dose Beta C 6 32 rad hr a 1 0 nell aria per 1 0 mCi C Percentuale di Dose di Contaminazione della pelle 13 33 mrad hr per uCi sulla pelle Percentuale di Dose da un 1 mCi isotopico punto di origine del C Distanza Rad Hr 1 0 cm 1241 4 2 0 cm 250 4 15 2 cm 0 126 20 0 cm 0 0046 INFORMAZIONI SULLA SICUREZZA RADIOLOGICA GENERALE Analisi delle urine Non Richiesto comunque usare prudenza dopo un versamento di C radioattivo o un emissione sospetta Volatilit relativa a STP Non Significativa Si deve prestare particolare attenzione a non generare lo svilup po di gas CO che potrebbe essere inalato E possibile che solventi marcati C vengano assorbiti attraverso 151 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica 1 guanti cambiare frequentemente i guanti monouso e possibil mente lavorare con doppio strato di guanti e La Dose interna riguarda contaminazione della pelle ingestione inalazione e puntura e Indossare sempre un camice da laboratorio e i guanti monouso quando si lavora con C Laconcentrazione di carbonio nel tessuto adiposo e nel midollo giallo ci
202. o II Il segnale di rischio biologico deve essere esposto sulla porta del labo ratorio Deve essere presente un autoclave in laboratorio oppure nel piano In quest ultimo caso si devono adottare procedure che consenta no il trasferimento sicuro del materiale in un autoclave al di fuori del laboratorio L accesso a tali laboratori deve avvenire attraverso una zona filtro fig 3 Il lato della zona filtro esente da contaminazione deve essere separato dalla parte ad accesso limitato da uno spogliatoio o da impianti doccia e preferibilmente da porte autobloccanti All interno dei laboratori la pressione deve essere negativa L aria emessa dal la boratorio deve essere sottoposta ad ultrafiltrazione HEPA La zona di lavoro deve essere sigillabile in modo da consentire la fumigazione Richmond 1999 Richmond 2000 39 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Figura 3 Livello di contenimento 3 Livello di contenimento 4 Il livello di contenimento 4 indicato quando si compiono opera zioni che presentano un alto rischio per la salute umana e per l ambien te Il laboratorio deve essere separato dalle altre zone dello stesso edi ficio o deve trovarsi in un edificio separato L accesso al laboratorio strettamente controllato ed necessaria la presenza di una cappa di sicurezza biologica di classe I II o III Deve essere presente un autoclave a doppia entrata L accesso a tali lab
203. o chimico A MISURE COLLETTIVE In biotecnologia devono essere applicate le regole generali riguar danti l organizzazione del laboratorio 1 Regole generali di funzionamento L elaborazione di regole generali di funzionamento deve essere com piuta rigorosamente e con precisione Devono essere coinvolte diffe renti figure professionali i responsabili scientifici i servizi di sicurez za e medicina del lavoro i comitati di igiene e sicurezza e gli addetti del laboratorio Ogni rilevante trasformazione del laboratorio deve essere studiata tenendo conto di un aumento della sicurezza I dirigente del laboratorio direttore capo servizio sono respon sabili della sicurezza dei loro impiegati Essi devono far rispettare le istruzioni sulla sicurezza Il materiale per la protezione necessario deve essere accessibile ai lavoratori Ogni lavoratore si assume la personale responsabilit per la propria sicurezza e per quella delle altre persone presenti nel laboratorio 2 Istruzioni sulla sicurezza Le istruzioni sulla sicurezza generali e specifiche piano di evacua zione numeri di telefono di emergenza devono essere messe in la boratorio in un punto ben visibile ed accessibile Queste istruzioni de vono essere chiare e brevi Sulla porta del laboratorio deve essere visibile un icona con il sim bolo corrispondente al pericolo specifico Per esempio pericolo biolo gico se il laboratorio manipola organismi geneticamente modif
204. o dubbi sul numero da associare alla P calcolata si suggerisce di scegliere il valore pi alto In tabella II sono riportati a titolo di esempio l effetto e la durata dell esposizione che possono essere utili ai fini di identificare la gravi t del Danno 14 Valutazione del rischio Tabella II Valore del Danno associato all effetto e alla durata dell esposizione DANNO EFFETTO DURATA Lieve esposizione acuta con invalidit temporanea pochi giorni esposizione cronica con effetti omeostatici stress psicofisico infortunio con inabilit temporanea Grave esposizione acuta con effetti gravi esposizione cronica con effetti reversibili e o parzialmente invalidanti infortunio con inabilit permanente Gravissimo esposizione acuta con effetti letali o gravemente invalidanti esposizione cronica con effetti irreversibili La gravit del danno viene associata ad un Indice di Danno ID nel modo seguente Lieve ID 1 Grave ID 2 Gavissimo ID 3 L analisi dell indice di Probabilit e dell indice di Danno pu por tare a calcolare l Indice di Criticita L Indice di Criticit pu essere calcolato per ogni tipologia di ri schio e permette di definire le misure di prevenzione da adottare per ridurre o comunque controllare il rischio L Indice di Criticit pu essere calcolato con la seguente formula Indice di Criticit Indice di Probabilit Indice di Danno Nella figu
205. ogico nei laboratori di ricerca ATTIVITA RISCHIO PREVENZIONE Ibridazione Natura delle sonde e dei tessuti umani ani mali o vegetali Il rischio legato all uso delle sonde limitato all impiego degli oligonucleotidi Classiche precauzioni applicate per i campioni potenzialmente infetti Per evi tare possibili infezioni manipolare in condizioni di sterilit Immortalizzazione di cellule tramite vettori virali Il contatto con la pelle pu essere causa di tumori Formazione di aereosol Precisa determinazione del rischio Utilizzare il maggior livello di sicurezza disponibile Ridurre la formazione di aereosol Manipolazione di liquidi biologici sangue plasma siero e cellule o tessuti provenienti da materiale infetto Rischi legati ai campionamenti Formazione di aereosol Manipolare considerando tutto come infetto Evitare il contatto cutaneo con cellule o tessuti Ridurre la formazione di aereosol Gestire 1 rifiuti in modo adeguato Natura delle colonie batteriche e delle cel lule umane animali e vegetali utilizzate Rischio di contaminazione colonie batteriche e di possibile infezione cellule umane animali e vegetali I rischi possono essere dovuti alla natura dell inserto delle cellule o di siero od altri agenti che possano stimolare proliferazioni indesiderate della coltura Formazione di aereosol Manipolare con guanti testati per la protezione da micro organismi ma
206. ognostica e terapeutica e vie ne effettuata mediante valutazioni di varia natura che riguardano com plessivamente 185 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica l accertamento preventivo e la verifica periodica dell idoneit al lavoro in base al rischio specifico cui il dipendente esposto nonch la programmazione e la valutazione degli accertamenti specialistici e di dosimetria biologica con trasmissione per iscritto dei giudizi di idoneit al datore di lavoro l ativit di intervento diagnostico e terapeutico in caso di sovraesposizione o contaminazione accidentale l attivit medico legale concernente gli archivi sanitari e dosimetrici obbligatori per legge nonch le valutazioni denun ce e segnalazioni per eventuali infortuni e malattie professionali Per l impostazione razionale di un programma di sorveglianza me dica preventiva e periodica sui lavoratori esposti al rischio da radiazioni ionizzanti si possono seguire almeno tre approcci e di tipo clinico rivolto all individuazione nel singolo lavoratore di alterazioni dello stato di salute attribuibili alle radiazioni stes se mediante accertamenti diagnostici mirati e di tipo epidemiologico fondato sull osservazione clinica di grup pi omogenei di soggetti esposti ad analoghi rischi con modalit equivalenti di tipo preventivo finalizzato alla valutazione dell idoneit al lavoro e quindi rivolto all evidenziazion
207. on successo in protocolli di terapia immunogenetica permettendo l attivazione di risposte immunitarie contro antigeni tumorali trasportati in cellule dendritiche Il personale di laboratorio che utilizza i vettori sopra descritti espo sto a rischio nel momento in cui i dispositivi di protezione individuale o collettiva non vengano utilizzati adeguatamente o quando non ven gano seguite le procedure di lavoro volte a proteggere l operatore dal contatto con tali microrganismi Le problematiche legate alla sicurezza nell utilizzo e nella manipo lazione dei vettori virali sono ovviamente acuite nel momento in cui si utilizzano virus in grado di infettare le cellule umane La pericolosit di un vettore dipende comunque anche dallo stato di competenza immunologica dell ospite Piante transgeniche Il metodo di elezione per la produzione di piante geneticamente modificate la trasformazione mediata da agrobatteri Gli agrobatteri sono batteri Gram negativi comuni abitanti del suolo 24 Rischio biologico in grado di infettare un gran numero di specie vegetali L Agrobacterium tumefaciens e lA rhizogenes sono le specie maggiormente sfruttate e quindi le pi studiate essi causano il tumore del colletto e la malattia della radice capelluta rispettivamente Gli effetti patogeni sono me diati da plasmidi batterici Ti tumor inducing o Ri root inducing plasmidi piuttosto grandi le cui dimensioni variano da 140 a 235 Kb Melchers and Ho
208. one Pu essere effettuato valutando lo stato di immunizzazione del sog getto attraverso test di laboratorio da calibrare a seconda dell am biente di lavoro specifico Va rilevato a questo proposito che attualmente esistono vaccini ef ficaci Tab IV per quei lavoratori che non sono gi immuni al 177 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica f g l agente biologico presente nella lavorazione da somministrare a cura del medico addetto alla sorveglianza sanitaria Caso per caso a seconda del rischio biologico il medico dovr considerare l opportunit di effettuare un vaccino in base alla sua efficacia alla durata della copertura anticorpale ad eventuali controindicazioni alla somministrazione Visita medica certamente importante in quanto oltre a valutare lo stato di salu te generale consente di rilevare le condizioni dei vari organi ed apparati che possono essere bersaglio degli agenti biologici non ch i segni clinici di patologie che possono condizionare l ipersuscettibilit individuale Bisogna tuttavia riconoscere la scarsa sensibilit dell esame clini co ai fini della evidenziazione precoce degli effetti biologici Esami di laboratorio In fase di accertamenti preventivi proponibile l effettuazione di esami che consentano di valutare lo stato di salute in generale quali esame emocromocitometrico con formula leucocitaria glicemia creatininemia transaminas
209. one condizioni Quando si usano sonicatori indossare anche dispositivi per protezione dell udito tappi cuffie Norme di comportamento in laboratorio La maggior parte delle contaminazioni con agenti infettivi che si verificano in laboratorio sono la conseguenza di un errore umano Per eliminare o limitare il rischio di contaminazione stata definita una serie di norme igieniche ed operative che tengono in considerazione ogni aspetto del lavoro dall organizzazione del laboratorio alle condi zioni in cui questo viene pianificato e il comportamento che ciascun operatore deve adottare durante le attivit CDC NIH Guidelines 1976 CDC NIH Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1999 Manuale di biosicurezza in laboratorio 1995 Per norme generali di comportamento si intende l applicazione del le Buone pratiche di laboratorio ovvero una serie di regole che ogni operatore deve seguire al fine di eliminare o limitare i rischi presenti nell ambiente di lavoro e garantire la qualit del proprio operato Le principali norme vengono riportate di seguito Norme generali e l accesso ai laboratori compresi gli stabulari deve essere stret 46 Rischio biologico tamente controllato Fornire adeguata formazione ed informazione sulla sicurezza bio logica a chi svolge attivit di laboratorio Adottare un manuale di sicurezza o un protocollo operativo che identifichi rischi noti o potenziali e che specifichi pratic
210. one da eventuali contaminazio ni L aria esterna viene aspirata e convogliata nella zona di lavoro dopo essere stata depurata da un filtro HEPA L aria in uscita prima di essere inviata all esterno passa nuovamente attraverso un filtro HEPA Le cappe di sicurezza biologica di classe HI sono utilizzate quando si lavora con agenti biologici ad alto rischio sono ermeticamente chiu se e mantengono sotto pressione negativa l ambiente interno Tutte le operazioni nell area di lavoro della cappa avvengono attraverso guanti a manicotto posizionati frontalmente Questo tipo di cappe garantisce protezione pressoch totale per l operatore per l ambiente e per il cam pione L aria che entra passa attraverso un filtro HEPA attraversa il piano di lavoro e quindi passa attraverso due filtri HEPA oppure un filtro HEPA ed un inceneritore prima di essere emessa all esterno Le cappe di classe III sono generalmente installate nei laboratori con il massimo livello di contenimento con accesso strettamente controllato Per un buon uso delle cappe di sicurezza biologica si raccomanda la seguente procedura e Accendere la cappa e la lampada UV se presente 15 minuti pri ma dell inizio delle operazioni e Accertarsi che il saliscendi se presente non permetta un apertu ra superiore ai 20 cm salvo diverse disposizioni della casa pro duttrice Ridurre al minimo gli strumenti e i reagenti sottocappa e Posizionare piccoli contenitori per rifiuti biolo
211. oni aggiuntive sul le modalit di versamento dei diritti relativi alle prestazioni fornite dal Mini stero in applicazione dell art 19 del decreto legislativo 91 del 3 marzo 1993 disciplinate dal decreto ministeriale 20 5 93 Decreto Legislativo 206 del 12 aprile 2001 attuazione della direttiva 98 81 CE che modifica la direttiva 90 219 CE concernente l impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati Decreto del 2 maggio 2001 tariffe relative alle notifiche per l impiego con finato di microrganismi geneticamente modificati TRASPORTO Circolare ministeriale 16 del 20 luglio 1994 D M del 4 settembre 1996 recepimento della direttiva 94 55 CEE concer 230 Allegato II nente il ravvicinamento delle legislazioni degli Stati Membri relative al tra sporto di merci pericolose su strada Decreto Legislativo 674 del 13 dicembre 1996 in G U 7 1 97 n 4 attuazio ne della direttiva 92 118 CEE concernente condizioni sanitarie per gli scambi e le importazioni dei patogeni e dei prodotti non soggetti a normative comuni tarie specifiche D M del 15 maggio 1997 recepimento della 96 86 CEE che adegua al pro gresso tecnico la direttiva 94 55 CEE del consiglio concernente il ravvicina mento delle legislazioni degli Stati Membri relative al trasporto di merci peri colose su strada testo rilevante ai fini del SEE D P R 268 del 19 maggio 1997 recepimento delle direttive europee 93 75 CEE relativa alle condizioni min
212. oni biologici dall altro si propongono di tutelare non solo la sicurezza della popolazio ne ma anche quella dei lavoratori professionalmente esposti Queste organizzazioni si sono anche accordate su definizioni co muni e su requisiti di imballaggio ed etichettatura Definizioni in vigore dal 1991 Sostanze infette sostanze che contengono microrganismi vitali quali batteri virus rickettsie parassiti funghi o organismi ricombinanti ibridi o mutati geneticamente che sono noti o ra gionevolmente sospettati di causare malattie nell uomo o negli animali In questo gruppo non sono incluse le tossine Campioni diagnostici materiali umani o animali ad esempio escreti secreti sangue e suoi componenti tessuti e fluidi dei tessuti che vengono spediti a scopo diagnostico Non fanno par te di questa categoria gli animali infetti vivi Prodotti biologici possono essere prodotti biologici finiti per uso umano o veterinario fabbricati in ottemperanza alle norme delle autorit nazionali e che viaggiano con speciale approva 59 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica zione o licenza di queste autorit oppure prodotti biologici finiti spediti prima dell ottenimento della licenza per scopi di svilup po e studio Ne fanno parte anche prodotti biologici non finiti preparati secondo le procedure di agenzie governative specializ zate I vaccini vivi animali e umani sono considerati prodotti b
213. onservare contenitori di solventi infiammabili flaconi ecc su scaffali o ripiani o sopra il piano di lavoro Essi devono essere collocati in un armadio ventilato o in un mobiletto che sar apposi tamente localizzato in modo da non ostruire le uscite di sicurezza Non conservare altresi rilevanti quantit di sostanze chimiche infiammabili nel laboratorio La quantit di sostanze chimiche 87 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica infiammabili non dovr superare il consumo di 1 o 2 giorni per ridurre i rischi in caso di incendio Non conservare liquidi volatili infiammabili in contenitori non chiusi in frigo Tutti i frigoriferi del laboratorio devono avere un termostato esterno e nessuna luce interna frigo sicuro In caso di incendio si devono usare gli appositi estintori E necessario conoscere dove sono localizzati gli estintori e quale genere di estintore debba essere utilizzato estintore specifico secondo la sostanza chimica importante organizzare esercitazioni anti incendio per padroneg giare particolarmente l uso degli estintori B PROPRIET DELLE SOSTANZE CHIMICHE E RISCHI ASSOCIATI Molte reazioni chimiche definite reazioni pericolose sono respon sabili d incidenti dovuti alla reattivit delle sostanze coinvolte polimerizzazione violenta di monomeri sostanze chimiche incompa tibili miscelate assieme Alcune sostanze chimiche reagiranno violentemente con acqua
214. ontaminare dovranno proteg gersi prima di iniziare la decontaminazione La protezione in cluder Tuta intera Occhiali protettivi Visiera Guanti durante la decontaminazione indossare sempre due paia di guanti cambiandosi il paio pi esterno dopo ogni azio ne Protezioni per le vie respiratorie queste dipendono dal tipo di sostanza dalla nostra conoscenza sul suo assorbimento al carbone attivo e dalla quantit versata Copriscarpe Rotolo di plastica adesiva ampio circa 0 5 m 133 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica e La prima cosa da fare dopo aver indossato i Dispositivi di Pro tezione Individuale quando si entra nell area contaminata lo calizzare esattamente l area da contaminare tracciando un cer chio sul pavimento Il cerchio dovr essere pi grande dell area effettivamente contaminata per un piccolo versamento dovr essere almeno della misura di due braccia e per grossi versamen ti tanto quanto necessario Durante questo periodo di delimitazione deve essere osservato se gli arredi armadi frigo riferi devono essere decontaminati e Decontaminazione dell area raccogliere tutti i pezzi di vetro rotto e metterli nel contenitore ad ampia apertura usato per la decontaminazione Cambiarsi i guanti esterni ad ogni pezzo di vetro raccolto e in caso di segni di danneggiamento dei guanti esterni cambiarsi anche quelli interni Nota Se l area tro
215. oratori deve avvenire attraverso una zona filtro all interno della quale deve essere presente una doccia di decontaminazione All interno dei laboratori la pressione deve esse re negativa L aria immessa ed emessa dal laboratorio deve essere sot toposta ad ultrafiltrazione HEPA Le misure di contenimento e altre misure di protezione per le attivi t di laboratorio sono descritte nella tabella 1a della direttiva europea 98 81 CE 40 Rischio biologico Attrezzature e principali procedure per il loro utilizzo Le attrezzature dei laboratori devono avere l adeguata certificazio ne CE e possedere apposito manuale di sicurezza scritto nella lingua del Paese di utilizzo con informazioni chiare dovrebbero inoltre ga rantire semplicit d uso facilit di manutenzione facilit di accesso per la pulizia e la decontaminazione Cappe di sicurezza biologica Le cappe di sicurezza biologica sono un valido sistema di preven zione primaria in quanto impediscono la diffusione di materiale biolo gico potenzialmente pericoloso Le cappe sono classificate in tre cate gorie a seconda del livello di protezione che garantiscono agli operato ri ed all ambiente circostante La scelta della cappa di sicurezza biolo gica determinata dal rischio associato agli agenti biologici e MOGM che si utilizzano Le cappe a flusso laminare orizzontale che vengono prevalente mente utilizzate nei laboratori di biotecnologie vegetali non sono con siderate capp
216. orni festivi 115 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica IMPIEGO DEI COMPOSTI GENOTOSSICI MUTAGENI E CANCEROGENI Marcel Castegnaro Bisogna adottare precauzioni particolari quando si conservano si utilizzano o si trasportano sostanze chimiche genotossiche mutagene e o cancerogene Queste sostanze dovrebbero essere tenute separate dalle altre in un armadietto chiuso a chiave che sar contraddistinto dall indicazione Pericolo cancerogeni chimici I locali dove si conservano queste sostanze o dove queste vengono utilizzate dovreb bero essere identificate con la stessa dicitura Pericolo cancerogeni chimici Come ulteriore precauzione si potrebbe applicare un logo specifico per queste sostanze Acquisto e conservazione di grandi quantit di sostanze cancerogene In un istituto o edificio che fa parte di una struttura pi grande lo stoccaggio di queste sostanze deve essere fatto in un unico locale in fatti disperderle in pi edifici non solo inutile ma pu aumentare il fattore di rischio Dovr essere nominato un responsabile in ogni istitu to con l incarico di seguire gli ordini e le registrazioni riguardanti tali sostanze I depositi dovranno essere il pi vicino possibile ai laboratori dove verranno preparate le soluzioni madri per evitare la possibilit di dispersione dei composti durante il trasporto Il responsabile dovr redigere un inventario delle entrate in modo
217. ostanze in contenitori in acciaio inossidabile perch in caso di rottura accidentale dei flaconi durante il trasporto hanno il vantaggio di poter essere decontaminati facilmente 120 Rischio chimico con gli agenti chimici adatti Trasporto dei cancerogeni fuori dai laboratori Il trasporto deve garantire la sicurezza di tutte quelle persone che non possono essere a conoscenza del pericolo connesso a queste so stanze e per questo pi vulnerabili Pertanto si devono adottare tutte le precauzioni necessarie ad evitare incidenti e se questi dovessero acca dere si deve provvedere a minimizzare il rischio che tali persone ven gano coinvolte Di seguito sono riportate le precauzioni da adottare a Il composto deve essere messo in una provetta provvista di tappo a vite e per evitare l apertura accidentale assicurare con nastro ade sivo o parafilm arrotolato in senso contrario a quello di chiusura b La provetta poi messa in un recipiente di plastica a bocca larga provvisto di un agente adsorbente che ha 2 scopi il controllo dell adsorbimento e adsorbire il prodotto in caso di rottura della provetta C Il recipiente deve poi essere messo in una scatola che lo protegga dagli urti in polistirene o semplicemente riempita con trucioli di polistirene Il trasporto su strada deve essere effettuato in osservanza dell accordo Europeo del 30 Settembre 2000 riguardante il trasporto di merci peri colose su strada Il trasporto aereo deve
218. otection Recommandation of the International Commission on Radiological Protection Annals of ICPR publication N 26 1977 International Commission on Radiological protection Recommandation of the International Commission on Radiological Protection Annals of ICPR publication N 30 part 2 volume 4 1980 International Commission on Radiological protection Recommandation of the International Commission on Radiological Protection Annals of ICPR publication N 60 1990 146 Rischio radiologico SCHEDE TECNICHE IDROGENO 3 PH Dari FISICI Energia Beta 18 6 keV massima 5 7 keV media 100 ab bondanza Emivita fisica 12 3 anni Emivita biologica 10 12 giorni Emivita effettiva 10 12 giorni Attivit 9640 Ci gram Ampiezza massima Beta in Aria 6 mm Ampiezza massima Beta in Acqua 0 006 mm Penetrabilit nella sostanza o nel tessuto Insignificante 0 di energia di beta particella trasmessa attraverso lo strato morto della pelle DATI RADIOLOGICI La minima radiotossicit di tutti 1 radionuclidi Organo critico Acqua del Corpo o Tessuto Vie di immissione Ingestione Inalazione Puntura Ferita Con taminazione della pelle Assorbimento Debole l energia di espo sizione esterna essendo beta H non si ha un processo radio logico Esposizione interna e contaminazione sono processi radiologici primari Committed Dose Equivalent CDE 64 mrem mCi ingerita 64 mrem mCi inalata 64 mre
219. otezione che ridu cano il rischio 6 Occorre intervenire immediatamente per eliminare ridurre il pericolo Bibliografia Ozog H Hazard identification analysis and control Chem Ing 2 161 170 1985 Code of Federal Regulation 21 CFR 820 1986 17 RISCHIO BIOLOGICO AGENTI BIOLOGICI Mariangela Miele Paola Bet Dimitri Sossai Il rischio biologico amp un rischio difficilmente percepibile e analo gamente al rischio da radiazioni o da sostanze genotossiche provoca un danno nel tempo difficilmente associabile ad una particolare esposi zione Esistono numerose informazioni riguardo la pericolosit degli agenti chimici e fisici ma non si pu dire altrettanto per gli agenti biologici Gli agenti biologici sono agenti infettivi che comprendono batteri rickettsie virus lieviti muffe parassiti uni e pluricellulari e prioni Ciascuna specie di agente infettivo pu avere sottotipi ceppi e varianti che differiscono dal parentale in potenziale patogeno specificit del l ospite trasmissibilit sensibilit ad agenti antimicrobici ecc Inoltre nei laboratori di ricerca biotecnologica si produce una grande variet di vettori artificiali allo scopo di aumentare la probabilit di trasferi mento genico tra specie non correlate Questi nuovi frammenti di DNA possono ricombinarsi e dare origine a prodotti pericolosi In conclusione sebbene gli agenti biologici siano ben definiti dalle normative vigenti difficile effe
220. otrifenili Direttiva del Consiglio 78 319 CEE relativa ai rifiuti tossici e nocivi Direttiva del Consiglio 91 156 CEE sui rifiuti Direttiva del Consiglio 91 689 CEE sui rifiuti pericolosi Direttiva del Parlamento Europeo e del Consiglio 94 62 CEE sugli imbal laggi e sui rifiuti da imballaggio ANIMALI Direttiva 86 609 CEE del Consiglio del 24 novembre 1986 concernente il ravvicinamento delle disposizioni legislative regolamentari e amministrative 224 Allegato II degli Stati Membri relative alla protezione degli animali utilizzati a fini speri mentali o ad altri fini scientifici Decisione del Consiglio 1999 575 CE del 23 marzo 1998 relativa alla con clusione da parte della comunit della convenzione europea per la protezione degli animali vertebrati utilizzati a fini sperimentali o ad altri fini scientifici 225 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica LEGISLAZIONE ITALIANA SICUREZZA SUL LAVORO DPR 547 del 27 aprile 1955 Norme generali per la prevenzione degli infortu ni Decreto Legislativo 277 del 15 agosto 1991 attuazione delle direttive 80 1107 CEE 82 605 CEE 83 477 CEE 86 188 CEE e 88 642 CEE in materia di pro tezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da esposizione ad agenti chimici fisici e biologici durante il lavoro a norma dell art 7 della legge 212 90 Decreto Legislativo 120 del 27 gennaio 1992 attuazione delle direttive 88 320 CEE e 90 18 CEE
221. oxanilide Cellulasi polvere Nocivo 1 2 3 N Cetil N N N Nocivo 1 2 3 trimetilammonio bromuro CHAPS 3 3 colamidopropil Nocivo 12 3 dimetil ammonio propansulfonato Acido Cloridrico Corrosivo 1 2 3 4 Sprigiona vapori fortemente irritanti Acido p clorofenossiacetico Nocivo 12 3 Cloroformio Pericoloso per inalazione e contatto specialmente quando 1 2 3 lo si trova in miscela con il Fenolo Cloruro ferrico anidro idrato Nocivo 1 2 3 tetraidrato esaidrato Corrosivo Cobalto cloruro Nocivo 1 2 3 Colcemide N deacetil N Tossico i23 metilcolchicina Colchicina Molto tossico 1 2 3 Rame solfato anidro Nocivo 1 2 3 pentaidrato Pericoloso per l ambiente Disporre in modo Irritante opportuno dello smaltimento dei rifiuti Precauzioni per l uso di agenti biologici e chimici Composto Rischio PREVENZIONE Destomicina A Irritante 1 2 4 Dietil etere Altamente infiammabile I Pu formare perossidi esplosivi Conservare in luogo Ha effetti anestetici ben ventilato lonta no da fiamme e scin4 tille Non fumare Evitare l accumulo di cariche elettro statiche Non gettare 1 ri fiuti nelle fognature Dietilpirocarbonato DEPC Sostanza molto instabile e che pu auto decomporsi 1 2 4 esplodendo e liberando CO Disporre in modo Sospetto cancerogeno opportuno dello smaltimento dei rifiuti Dimetil etere Altamente volatile 1 Estremamente infiammabile Maneggiare sotto cappa Conservare in luogo ven
222. oykaas 1987 L importanza dell agrobatterio risie de nella sua capacit di trasferire parte del DNA plasmidico nel cromo soma della cellula ospite vegetale La regione trasferita T DNA del plasmide Ti e Ri viene integrata ed espressa nel genoma della pianta l espressione di questi geni induce lo sviluppo del tumore del colletto e la malattia delle radici capellute rispettivamente Il T DNA induce an che la produzione e la secrezione delle opine derivati amminoacidici che l agrobatterio utilizza come nutrimento Il T DNA ha una lunghezza di 14 42 Kb ed delimitato da sequen ze border conservate di 25 pb LB bordo sinistro e RB bordo de stro Tutte le sequenze comprese tra LB e RB si integrano nei cromo somi della cellula vegetale Altri geni presenti nel plasmide non vengo no trasferiti ma sono necessari per la produzione di proteine trans regolatrici essenziali per la trasformazione Tra questi si trovano i geni vir virulenza che producono proteine responsabili del taglio trasferi mento ed integrazione del T DNA nel genoma della cellula vegetale ed i geni responsabili del catabolismo delle opine che permettono all agrobatterio di utilizzare le opine secrete in tumori e radici capellu te In fig 2 schematizzata la struttura del plasmide Ti Draper et al 1988 Un altro gruppo di geni coinvolto indirettamente nella trasforma zione presente nel cromosoma batterico ed responsabile del legame tra le cellule
223. per gli animali Inoltre 1 laboratori che usano animali dovrebbero unire l organizzazione strutturale con le risorse tecniche e l addestramento del personale in modo da permettere un corretto svol gimento delle metodiche di ricerca Le varie aree dovrebbero essere collocate nell edificio a seconda delle necessit ad esempio potrebbe essere necessario collocare un area in prossimit di un laboratorio tenendo conto anche della struttura del l edificio stesso Gli stabulari dovrebbero essere collocati in un piano indipendente tuttavia in alcuni casi possono occupare diversi piani purch questi siano collegati da un ascensore dedicato utilizzabile solo dal personale In alternativa anche possibile creare pi unit indipen denti sotto un controllo centrale ed avere gabbie per animali situate in parti diverse dell edificio Comunque gli stabulari dovrebbero rispettare i seguenti requisiti in modo da garantire condizioni di lavoro ottimali per il personale e appropriate condizioni di vita per gli animali 67 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica e Avere superfici di lavoro robuste e lavabili e Avere pavimenti solidi resistenti alle macchie e agli agenti chi mici anti scivolo senza giunzioni pur con un aspetto estetico adeguato senza necessit di utilizzare prodotti lucidanti o cere avere i sifoni degli scarichi dei pavimenti contenti acqua questi dovranno essere regolarmente lavati e
224. pertussis Bordetella pertussis Borrelia burgdorferi Borrelia duttonii Borrelia recurrentis Borrelia spp Brucella abortus Brucella canis Brucella melitensis Brucella suis Burkholderia mallei Pseudomonas mallei Burkholderia pseudomallei Pseudomonas pseudomallei Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Campylobacter spp Cardiobacterium hominis Chlamydia pneumoniae NNNNNNN U9 Q9 Q2 Q9 Q2 b2 DO P2 b2 DO P2 DO 2 P2 DO 2 WW lt UJ NNN WY 206 Allegato I Agente biologico Chlamydia trachomatis Chlamydia psittaci ceppi aviari Chlamydia psittaci ceppi non aviari Clostridium botulinum Clostridium perfringens Clostridium tetani Clostridium spp Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium minutissimum Corynebacterium pseudotuberculosis Corynebacterium spp Cariella brunetii Edwardsiella tarda Ehrlichia sennetsu Rickettsia sennetsu Ehrlichia spp Eikenella corrodens Enterobacter aerogenes cloacae Enterobacter spp Enterococcus spp Erysipelothrix rhusiopathiae Escherichia coli ad eccezione dei ceppi non patogeni Escherichia coli ceppi verocitotossicogenici es 0157 H7 oppure 013 Flavobacterium meningosepticum Fluoribacter boiemanac Legionella Francisella tularensis tipo A Francisella tularensis tipo B Fusobacterium necrophorum Gardnerella vaginalis Haemophilus ducreyi Haemophilus influenzae Haemophilus spp Helicobacter pylori Klebsiella axytoca Klebsiel
225. piano dato probabilit danno P D le coordinate P D individua no giudizi sulla situazione in esame Nel caso specifico in cui si valuti il rischio presente nei labora tori si suggerisce l utilizzo di una matrice che prende in considera zione tre livelli di probabilit e tre livelli di gravit del danno fig 1 In tabella I sono riportate a titolo di esempio alcune considera zioni rispetto alla frequenza degli incidenti all ambiente di lavoro e alla salute del lavoratore che possono essere utili ai fini di identi ficare la probabilit che un determinato evento dannoso si verifichi 12 Valutazione del rischio Tabella I Valore della Probabilit in diverse situazioni FREQUENZA DEGLI ASPETTI DI SICUREZZA RELATIVI ASPETTI DI SICUREZZA RELATIVI SUNT INCIDENTI ALL ORGANIZZAZIONE E ALIA ALLA SALUTE DEI LAVORATORI GESTIONE NELL AMBIENTE DI LAVORO Improbabile Non sono noti inci Sicurezza elettrica presenza di Agenti chimici esposizione denti o si sono ve connessioni dispersione a terra occasionale a concentrazioni rificati con frequen distanza e o adeguato isolamen inferiori del 25 rispetto al za bassissima to della parte elettrica dall acqua TLV TWA non sono note Il verificarsi di un Fuoco esistenza di precauzioni azioni irritanti incidente suscita generali buona installazione e Radiazioni non ionizzanti grande sorpresa manutenzione delle apparecchia
226. pox virus Orf virus Rabbitpox virus g Vaccinia virus Variola major amp minor virus White pox virus Variola virus Yatapox virus Tana amp Yaba Reoviridae Coltivirus Rotavirus umano Orbivirus Reovirus Retroviridae h Virus della sindrome di immunodeficienza umana Virus delle AIDS leucemie umane e cellule T HTLV tipi 1 e 2 SIV h Rhabdoviridae Virus della rabbia Virus della stomatite vescicolosa Togaviridae 213 Classificazione NNN NAANNNUOUNNNINN NNN WY 3 Qs 3 3 E 3 Ces Rilievi Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Agente biologico Alphavirus Encefalomielite equina dell America dell est Virus Bebaru Virus Chikungunya Virus Everglades Virus Mayaro Virus Mucambo Virus Ndumu Virus O nyong nyong Virus del Fiume Ross Virus della Foresta di Semliki Virus Sindbis Virus Tonate Encefalomielite equina del Venezuela Encefalomielite equina dell America dell ovest Altri alphavirus noti Rubivirus rubella Toroviridae Virus non classificati Moribillivius equino Virus dell epatite non ancora identificati Agenti non classici associati con le encefaliti spongiformi trasmissibili TSE Malattia di Creutzfeldt Jakob Variante del morbo di Creutzfeldt Jakob Encefalite spongiforme bovina BSE ed altre TSE degli animali a questa associate 1 Sindrome di Gerstmann Gerstmann Str ussler Scheinker Kuru Classificazione Cr
227. ppo grossa perch sia possibile l accesso ad ogni sua parte allungando il braccio si pu posizionare sul pavimento un tappeto pla stico adesivo al fine di facilitare l accesso Questo pu essere fatto pulendo con degli stracci in tessuto l area davanti al rullo di tappeto adesivo La super ficie di questo tappeto da considerarsi area pulita su cui camminare e Raccogliere il liquido versato con uno straccio di tessuto ini ziando ogni raccolta al margine della contaminazione e finendo nella parte maggiormente contaminata Ad ogni azione cambia re straccio e guanti esterni Per grandi volumi di liquido versato usare un agente assorbente quale la vermiculite e successiva mente raccoglierlo sempre cambiando guanti dopo ogni fase Continuare la pulizia dell area con stracci di tessuto che devono essere bagnati con una soluzione acida o basica cambiarsi i guanti ad ogni operazione Controllare la superficie cercando eventuali punti non decontaminati perfettamente La zona maggiormente contami nata verr sottoposta al Wipe test strofinare su una superficie determinata una garza e verificare il residuo di contaminazione mediante analisi chimico fisica Sel arearisulta ancora contaminata posizionarvi sopra uno strac cio di tessuto imbevuto di soluzione decontaminante in quantit 134 Rischio chimico sufficiente ad inzuppare completamente lo straccio ma non tale da allagare l area e Lasciar reagire il tempo necess
228. pportuno evitare il contatto cutaneo Pectinasi polvere Nocivo 1 2 3 Evitare 1l contatto cutaneo e l inalazione Pectoliasi polvere Evitare 1l contatto cutaneo e l inalazione 1 2 3 PIPES acido Piperazin N N Irritante 1 2 4 bis 2 etansulfonico acido 1 A piperazin dietansulfonico Piperidina Tossico se inalato irritante 1 2 3 Polietilen glicole PEG Irritante 1 2 4 monometil eter mesilato 2 000 e 5 000 Pomodoro polvere Irritante 1 2 4 200 Precauzioni per l uso di agenti biologici e chimici Sodio lauril solfato Dannoso per inalazione pu causare sensibilizzazioni e ingestione Irritanate per occhi pu causare gravi danni sistema respiratorio e pelle Composto Rischio PREVENZIONE Potassio acetato soluzione Irritante 1 2 4 Potassio carbonato anidro Nocivo 1 2 3 Potassio cloruro polvere Irritante 1 2 4 Potassio idrossido Corrosivo 1 2 Potassio ioduro Nocivo 1 23 Potassio nitrato Ossidante Irritante 1 2 Potassio permanganato Ossidante 1 2 4 Nocivo Mantenere lontano Inquinante ambientale dai materiali combu Corrosivo stibili Tossico per inalazione contatto e ingestione Proteinasi K polvere Nocivo per inalazione Pu provocare sensibilizzazione 1 2 3 anche per contatto cutaneo Irritante per occhi pelle e sistema respiratorio Putrescina 1 4 Irritante 1 2 4 diamminobutano diidrocloruro Ribavirin Nocivo 1 2 3 Acido Salicilico acido 2 Nocivo 1 2 3
229. ra sottostante viene rappresentata una matrice di rischio proposta da Sossai e Leoncini Comunicazione personale 2000 dove le coordinate sono rappresentate da Indice di Probabilit e Indice di Danno La casella in alto a destra corrisponde a probabilit massima e 15 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica a danno maggiore mentre la casella in basso a sinistra corrisponde a probabilit minima e a danno minore GS 3 BS S 2 1 ber Indice di Danno Figura 1 Matrice di rischio Sulla base del risultato ottenuto Indice di Criticit si valutano gli interventi necessari ai fini di ridurre al minimo il rischio associato ad una determinata operazione come riportato nella tabella III Tabella III Interventi necessari in base all Indice di Criticit INDICE DI CRITICITA INTERVENTI NECESSARI 2 Sono da valutare interventi specifici in fase di program mazione non si ravvisano interventi urgenti 3 Occorre mantenere sotto controllo i rischi valutando ipotesi di interventi migliorativi in fase di programma zione 4 Occorre monitorare costantemente i rischi valutando la necessit di interventi migliorativi nel breve medio periodo 16 segue Tabella III Valutazione del rischio INDICE DI CRITICITA INTERVENTI NECESSARI 5 Occorre intervenire con urgenza per individuare ed at tuare gli interventi di prevenzione e pr
230. racce di detergente con alcol 70 che dovrebbe essere fatto evaporare com pletamente prima di riporre ripiani vassoi fiasche e piastre Se si lavo ra con cellule che possono essere pericolose si consiglia di riporre le fiasche o le piastre in contenitori di plastica trasparente sandwich boxes Freshney 2000 con coperchio sigillabile Il contenitore deve es sere aperto sotto cappa In caso di versamento delle colture cellulari autoclavare l acqua contenuta nell incubatore prima di eliminarla Per operazioni con microrganismi di classe 4 o di classe 3 trasmissibili per via aerea sono consigliati incubatori con sistema di aspirazione dell aria e relativa espulsione esterna attraverso filtri HEPA oppure posizionare gli incubatori sotto sistemi aspirati con filtrazione dell aria attraverso filtri HEPA Bagni termostatati I bagni termostatati sono costituiti da vasche che contengono acqua riscaldata da resistenze elettriche Per rendere omogenea la temperatu ra nella vasca viene installato un sistema di riciclo o agitazione dell ac qua pertanto occorre immergere solo contenitori su supporti adeguati e ben chiusi per evitare schizzi o fuoriuscite accidentali dei campioni preferibile utilizzare bagni termostati con coperchio inclinato al fine di impedire che le gocce di vapore condensato vadano a finire sui con tenitori immersi Non appoggiare mai il coperchio in vicinanza di cavi prese o apparecchi elettrici sotto tensione Si co
231. rattamento base delle ferite Lavare con acqua e usare il sapone quando necessario Applicare il siero ed eliminare corpi estranei con le pin zette le forbici o il bisturi 73 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Applicare un disinfettante Coprire la ferita La valutazione dei rischi che comporta il lavoro a contatto con ani mali dovrebbe tenere conto delle condizioni fisiche e psichiche del per sonale A questo scopo sarebbe utile programmare un controllo medico al fine di e Identificare il personale a rischio persone con diminuzione del le difese immunitarie donne in stato di gravidanza persone mag giormente sensibili alla contaminazione per esempio per ferite cutanee o ad infezioni persone allergiche agli animali e alle sostanze ad essi connesse come persone che soffrono di asma o riniti e persone predisposte agli allergeni e Proteggere gli animali dai parassiti tipici della loro specie non accettare animali affetti da micosi tubercolosi portatori di salmonella o amebe ecc in modo da non spargere zootossine nel laboratorio e Vaccinazioni obbligatorie e immunizzazioni dopo incidenti e specifiche chemioprofilassi e Valutare le condizioni psicologiche del personale che dovr la vorare con animali come gatti cani e primati Aver paura degli animali o tenere un comportamento aggressivo significa aumen tare il rischio di incidenti E da tenere in considerazio
232. rca 3 volte la media della concentrazione di tutto lor ganismo Nessun altro organo o tessuto dell organismo concen tra carbonio stabile in modo cosi significativo L assorbimento frazionale di carbonio mediante la dieta assorbito dal sangue sovente in eccesso di 0 90 Tre principali classi di composti di carbonio possono essere ina lati composti organici gassosi CO o CO e aerosol di carbonio contententi composti come carbonati e carburi Composti Organici la maggior parte dei composti organici non sono molto volatili in circostanze normali la probabilit che que sti possano essere inalati come vapori pertanto bassa Si devo no comunque prendere le precauzioni necessarie lavorare sotto cappa usare Dispositivi di Protezione Individuale per impedir ne l inalazione se inalati una volta entrate nel sistema respira torio sono immediatamente trasportate nel sistema circolatorio senza cambiare la loro forma chimica e Gas l inalazione di CO e la sua ritenzione nei tessuti dell orga nismo stata ampiamente studiata Dal momento che il gas ha una bassa solubilit nell acqua dei tessuti dosi causate dal gas assorbito nei tessuti sono insignificanti in confronto con le dosi causate dalla ritenzione del legame CO all emoglobina CO nel sangue esiste principalmente come un bicarbonato Carbonati e Carburi Si assume che composti marcati con C siano inalati o ingeriti sono immediatamente e uniformemente distribu
233. re apposta un etichetta con il sim bolo di rischio biologico Se il confezionamento del pacco prevede la presenza di materia li quali azoto liquido o ghiaccio secco devono essere scelti con tenitori e imballaggi resistenti a temperature molto basse inol tre il primo e il secondo contenitore dovranno poter sostenere 60 Rischio biologico una pressione differenziale di almeno 95 kPa Sela sostanza deperibile deve essere segnalato sui documenti di accompagnamento Spedizione dei pacchi Per essere efficiente il trasferimento delle sostanze infette richiede un buon coordinamento fra il mittente il trasportatore e il laboratorio destinatario Pertanto le sostanze infette non devono essere spedite senza preli minare accordo fra questi tre interlocutori o prima che il destinatario abbia avuto conferma dalle autorit nazionali sulla possibilit di im portare tali sostanze legalmente e che quindi non vi sar alcun ritardo nella consegna a destinazione del pacco Il mittente dovr pertanto seguire le seguenti procedure e Prendere accordi in anticipo con il trasportatore e il destinatario per assicurarsi che il campione venga ricevuto e analizzato pron tamente e Preparare i documenti di spedizione nformarsi del percorso del viaggio e Inviare una comunicazione tempestiva di tutti i dati di spedizio ne al destinatario E responsabilit del destinatario Ottenere le autorizzazioni dalle autorit nazionali per
234. ri con il loro contenitore provette beute chiuse all interno di un ulteriore conteni tore infrangibile a chiusura ermetica in grado di garantire adeguata pro tezione anche in caso di caduta al suolo All interno di questo conteni tore verr messo del materiale assorbente come ad esempio la vermiculite capace di limitare la diffusione di aerosol al momento del l apertura del contenitore a seguito di incidente Se queste sostanze sono conservate in frigoriferi o congelatori utile prelevarle in anticipo in modo da portarle a temperatura ambiente senza aprire i flaconi Questo accorgimento evita la formazione di con densa che potrebbe comportare un errore di pesata soprattutto per i composti igroscopici o la decomposizione di quelle sostanze che sono instabili in presenza di acqua Per permettere ai flaconi di raggiungere la temperatura ambiente si deve posizionarli in un bacino di contenimento si possono usare a tale scopo lavandini in acciaio inossidabile perch hanno il vantaggio di essere facilmente decontaminati si possono usare anche lavandini smal tati purch la loro superficie sia intatta coperto con della carta assor bente plastificata su un lato il lato resistente all acqua rivolto verso la superficie del lavandino quello assorbente verso il flacone Se il com posto fotosensibile si deve riparare il flacone dalla luce Durante tutte queste operazioni la cappa aspirante deve essere mantenuta chiusa Quando si prele
235. rischio I vettori sono per definizione plasmidi batteriofagi virus ed altri elementi di DNA con capacit di replicazione autonoma in cui viene inserito un frammento di DNA estraneo inserto Un vettore contiene 21 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica uno o pi siti di replicazione e geni che conferiscono un qualche carat tere fenotipico alle cellule che li ospitano es resistenza ad antibiotici Il vettore pu integrarsi o meno nel DNA dell ospite I vettori utilizzati nei laboratori di ricerca biotecnologica sono mol teplici qualsiasi elenco risulterebbe quindi incompleto Si riportano di seguito solo alcune considerazioni relative ai vettori utilizzati nella spe rimentazione in terapia genica e nella produzione di piante transgeniche in quanto rappresentano le applicazioni pi recenti delle tecnologie del DNA ricombinante Terapia genica Il termine terapia genica definisce una serie di in terventi volti a modificare intenzionalmente il materiale genetico allo scopo di prevenire o curare una patologia La modificazione serve a correggere un difetto genetico determina to dall assenza o alterazione di una proteina o ad aggiungere un infor mazione genica che modifica le caratteristiche della cellula La modificazione genetica si pu ottenere su cellule in vitro op pure direttamente in vivo attraverso l impiego di vettori capaci di trasferire geni e quindi di
236. ro 226 Allegato II DISPOSITIVI DI PROTEZIONE INDIVIDUALE DPR 303 del 19 marzo 1956 prevenzione degli infortuni sul lavoro e igiene norme generali per l igiene del lavoro Decreto Legislativo 475 del 4 dicembre 1992 attuazione della direttiva 89 686 CEE del Consiglio del 21 dicembre 1989 in materia di ravvicinamento delle legislazioni degli Stati membri relative ai dispositivi di protezione indi viduale Decreto Ministeriale del 22 marzo 1993 determinazione dei requisiti che devono essere posseduti dagli organismi di controllo dei dispositivi di prote zione individuale Decreto del 2 maggio 2001 criteri per l individuazione e l uso dei Dispositivi di Protezione Individuale SMALTIMENTO RIFIUTI DPR 915 del 10 settembre 1982 attuazione direttive 75 442 CEE relativa ai rifiuti 76 403 CEE relativa allo smaltimento dei policlorodifenili e dei policlorotrifenili e 78 319 CEE relativa ai rifiuti tossici e nocivi Decreto Legislativo 22 del 5 febbraio 1997 attuazione delle direttive 91 156 CEE sui rifiuti 91 689 CEE sui rifiuti pericolosi e 94 62 CEE sugli im ballaggi e sui rifiuti di imballaggio Decreto Legislativo 389 del 8 novembre 1997 modifiche ed integrazioni al decreto legislativo 22 del 5 febbraio 1997 in materia di rifiuti di rifiuti peri colosi di imballaggi e di rifiuti di imballaggio Decreto Ministeriale 148 dell 1 aprile 1998 Ministero dell Ambiente re golamento recante approvazione del modello de
237. rre premendo sul retro della fibbia mentre si tiene in posizione il facciale modellare la zona del naso sulla forma del viso facendo scorre re le dita dalla cima del sistema stringinaso lungo i due lati e premendo contemporaneamente verso l interno Inoltre bisogna tenere presente le seguenti avvertenze indossare il facciale e verificarne la tenuta prima di iniziare la preparazione indossare il facciale per tutta la durata dell esposizione ai conta minanti eliminare il facciale e sostituirlo con uno nuovo quando l ecces sivo intasamento causa difficolt respiratoria o disagio o il facciale subisce danneggiamenti utilizzare il facciale solamente per l uso per il quale stato for nito non utilizzare in atmosfera carente di ossigeno irequisiti relativi alla tenuta non sono soddisfatti se capelli o peli di barba passano sotto il bordo di tenuta del facciale e il facciale pu essere utilizzato per un numero di ore corrispon dente ad un turno di lavoro 7 30 ore avendo cura di riporlo in un contenitore sigillato lontano da zone contaminate identificare il facciale scrivendo il proprio nome sul coperchietto di plastica posta sopra la valvola di espirazione fare sullo stesso un segno ogni 30 minuti di utilizzo dopo 15 57 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica segni eliminarlo sostituire il facciale quando presente un eventuale intasamento che pu causare diffi
238. rus della rabbia Virus dell encefalite da zecca dell Europa Centrale Encefalomielite equina dell America dell est Encefalite B giapponese Encefalomielite equina del Venezuela Foresta di Kyasanur Encefalomielite equina dell America dell ovest Omsk Rubivirus rubella Encefalite verno estiva russa 179 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Rischi chimici I lavoratori impegnati nella ricerca biotecnologica sono esposti ad una variet di sostanze chimiche potenzialmente nocive I tipi di espo sizione differiscono da quelli in altri ambienti lavorativi in diversi punti essi includono molti agenti conosciuti per la loro azione genotossica Per l uomo non pu essere pienamente valutata la tossicit di alcuni agenti chimici e delle loro miscele e una adeguata decontaminazione o tecniche distruttive non sono sempre valide n frequentemente usate Le tecniche cambiano velocemente nella ricer ca biotecnologica specialmente con lo sviluppo della biologia molecolare e i conseguenti cambiamenti nei prodotti usati Queste caratteristiche unite ad un lavoro ambientale veramente competitivo spiegano perch la sorveglianza oggettiva delle condizioni di lavoro essenzialmente basata sul grado di osservanza delle Buone Tecni che di Laboratorio e la sorveglianza sanitaria specifica siano estre mamente difficili La serie di agenti manipolati oggi nella ricerca biotecnologica com pre
239. sabile della sicurezza responsabile del laboratorio ecc recapiti telefonici delle strutture di pronto intervento collocazione del materiale di pronto soccorso abiti di protezio ne disinfettanti attrezzatura per la decontaminazione trattamenti medici d emergenza in caso di persone contaminate o ferite e sorveglianza medica delle persone contaminate Procedure di emergenza in caso di esposizione accidentale ad agenti biologici In caso di fuoriuscita di aerosol potenzialmente pericoloso al di fuori 50 Rischio biologico della cappa di sicurezza biologica adottare le seguenti procedure tutte le persone devono immediatamente evacuare l area conta minata e il responsabile del laboratorio deve essere immediatamente in formato attivare le procedure previste dal proprio Istituto chiudere la stanza ed applicare sulla porta avvisi di zona conta minata e di divieto di ingresso non entrare nel laboratorio per almeno un ora per permettere all aerosol di depositarsi indossare indumenti protettivi e protezioni delle vie respiratorie adeguati e procedere alla decontaminazione sotto la supervisione del responsabile della sicurezza biologica consultare un medico se necessario In caso di spargimento accidentale di materiale liquido contenente agenti biologici adottare le seguenti procedure indossare due paia di guanti coprire con un pezzo di stoffa o di carta assorbente imbevuto di disinfettante e lasciare
240. schere facciali parziali o totali per la protezione del tratto respiratorio e maschere con auto respiratori Natura del DNA batterico animale vegetale plasmidi geni codificanti per tossine se quenze di natura sconosciuta DNA da sequenziare e vettori Formazione di aereosol Manipolare con guanti e maschera sotto cappa Eliminare in modo adeguato i rifiuti anche per la tutela dell ambiente Evitare il contatto con la pelle e l ingestione 19112 2 12180 01q 1u28D ip osn 42d 1uo2np224d Tel ATTIVIT RISCHIO PREVENZIONE Natura dell RNA Cellule possibile infezione Evitare il contatto cutaneo maneggiare coi guanti e l ingestione Eliminare in Animali possibili infezioni modo adeguato i rifiuti anche a tutela dell ambiente Batteri rischio di contaminazione Natura del vettore e dell inserto Pericolosi per contatto e per l ambiente Evitare il contatto cutaneo e l ingestione Adottare tutte le precauzioni a tutela ambientale Pericoli specifici per l utilizzo dei retrovirus Possibilit di contaminazione tramite aero Utilizzare adeguati livelli di contenimento sol Vettori batteriofagi contenenti un inserto Possibilit di contaminazione tramite aero Precisa determinazione del livello di contenimento gt L1 per evitare la diffu modificato rischi dovuti all inserimento di sol sione Mantenere l immunodeficienza sotto controllo Evitare il contatto
241. se inoculazione parentale L ae rosol considerato il modo di trasmissione pi a rischio di un agente infettivo Gli aerosol si possono generare attraverso la manipolazio ne di liquidi la frammentazione di tessuti la preparazione di piastre batteriche l uso improprio di attrezzature di laboratorio es centrifu ghe o la rottura di contenitori con colture cellulari Collins 1983 Altre modalit con cui un operatore pu entrare in contatto con un agente biologico possono essere e Inoculazione accidentale ad esempio per puntura o taglio del la cute con strumenti infetti od oggetti acuminati quali aghi bisturi o vetreria rotta 30 Rischio biologico Ingestione accidentale ad esempio pipettare a bocca o mangiare e bere all interno del laboratorio Contatto diretto con parti del corpo esposte faccia occhi ad esempio tramite schizzi generati da agitazioni violente dall uso di siringhe o per versamento di liquidi Si devono inoltre considerare ai fini della valutazione del rischio le attivit di manipolazione genetica degli agenti biologici finalizza te al trasferimento di geni esogeni in animali piante o uomo durante le quali viene prodotta una grande variet di acidi nucleici costrutti I costrutti generalmente contengono geni marcatori per la resi stenza agli antibiotici e a seconda dei casi un gran numero di geni derivanti da batteri patogeni virus ed altri parassiti appartenenti a tutti i regni de
242. seguenza dell incidente danno Per incidente si intende un evento non pianificato che ha la po tenzialit di produrre un danno alla salute all ambiente o ad en trambi La formula che definisce il rischio la seguente R rischio P probabilit x D danno 11 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica La valutazione del rischio il processo complessivo di stima dell entit del rischio e di decisione se un rischio sia o meno tolle rabile od accettabile Per la valutazione del rischio devono essere considerati i seguenti elementi caratteristiche del pericolo e o della sua sorgente identificazione del bersaglio e della sua importanza natura del danno e vulnerabilit del bersaglio caratterizzazione della via di trasmissione del pericolo dalla sor gente al bersaglio La valutazione del rischio consiste quindi nel processo di rico noscimento del tipo di pericolo esistente della quantificazione del la gravit del danno prodotto da tale pericolo e della probabilit che un determinato evento dannoso si verifichi Il processo di ricono scimento del pericolo e di conseguenza la valutazione del rischio non sono azioni semplici A tal riguardo si suggerisce l utilizzo del la matrice di rischio che nasce proprio come strumento per l anali si dei rischi Ozog 1985 Code of Federal Regulation 1986 La matrice di rischio una semplificazione delle curve iso rischio nel
243. si iniziali del processo di cancerogenesi o per lo meno nel periodo preclinico Si tratta piuttosto di valutarne il significato Negli anni recenti sono stati proposti e resi in parte disponibili stru menti atti a rilevare effetti precoci di cui opportuna una disamina sul piano del loro significato prima di valutarne la fattibilit pratica Una serie di marcatori denominati complessivamente citogenetici riguarda pi da vicino alterazioni a carico del patrimonio genetico cellulare rappresentate principalmente dalle aberrazioni cromosomiche dagli scambi fra cromatidi fratelli SCE e dai micronuclei tutti markers non specifici di risposta biologica Per i carcinogeni chimici si utilizzano soprattutto le SCE il loro studio cominciato sui pazienti in trattamento con chemioterapici in dotte cosi acutamente scompaiono pochi mesi dopo il termine della terapia Sono aberrazioni pi localizzate cromatidiche risentono di confondenti et e fumo di sigaretta in testa ma vengono valutate pi sensibili e di determinazione pi rapida e semplice delle aberrazioni cromosomiche Sono marcatori di lesioni precoci non specifici di una sostanza chimica pertanto non in condizione di portare ad identificare e quindi a quantificare l agente che li determina Pertanto hanno solo valore di gruppo semprech siano ben testati 1 confondenti Il conteggio dei micronuclei nei linfociti periferici una tecnica molto pi rapida dell esame per ab
244. sia stata fuoriu scita di radioisotopi bene predisporre una piastra o un conteni tore con carbone in polvere omogeneamente distribuito questo per assorbimento passivo garantir la decontaminazione Il car bone a sua volta dovr essere smaltito come prodotto radioattivo solido 161 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica IODIO 125 I DATI FISICI Energie Gamma 35 5 keV 7 abbondanza 93 internamente gamma convertita Non emette beta 27 0 keV 113 x rag gi 27 32 keV 14 x raggi 31 0 keV 26 x raggi Costante Specifica dei Raggi Gamma da 0 27 a 0 70 mR hr per mCi a 1 contatore letteratura corrente indica 0 27 mR hr per mCi a 1 contatore Emivita Fisica 60 1 giorni Emivita Biologica 120 138 giorni iodio libero eliminato dal la tiroide Emivita Effettiva 42 giorni iodio libero ghiandola della tiroi de Attivit Specifica 17 400 Ci gm teorica carrier libero Attivit Specifica Intrinseca 22 0 Ci millimole DATI RADIOLOGICI Organo Critico Destinazione Biologica Tiroide Vie di immissione ingestione inalazione molto probabile pun tura ferita contaminazione della pelle assorbimento Vi pu essere esposizione e contaminazione esterna ed interna con l utilizzo di I Committed Dose Equivalent CDE 814 mrem mCi tiroide inalazione classe D Dosi Organo 1185 mrem mCi tiroide ingestione forma Nal 910 mrem mCi tiroide inalazio
245. specie animali utilizzate nella ricer ca gli stabulari devono adattarsi ad ognuna di esse Ci sono tre diffe renti tipi di stabilimenti in virt della Decisione del Consiglio 1999 575 CE del 23 Marzo 1998 in riferimento alla Convenzione Europea per la protezione degli animali vertebrati utilizzati nella ricerca e per altri scopi scientifici OJ EC 24 Agosto 1999 Essi sono Stabilimenti per la riproduzione dove gli animali sono allevati con l intento di mantenerli prima di darli all utilizzatore finale Stabilimenti di rifornimento dove gli animali sono allevati al solo scopo di rifornire altri stabilimenti che poi ne faranno uso per la ricerca Stabilimenti di utilizzo dove gli animali sono impiegati nelle sperimentazioni scientifiche La lista anche se incompleta delle specie animali utilizzate nella 63 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica ricerca include e Topi Mus musculus Ratti Rattus norvegicus e Cavie Cavia porcellus e Criceti Mesocricetus auratus e Conigli Oryctolagus cuniculus e Quaglie Coturnix coturnix e Maiali Sus scrofa familiaris preferibilmente la specie pig mic e Cani Canis familiaris soprattutto i beagles e Gatti Felix Catus e Primati incluso scimpanz mandrilli rhesus scimmie africa ne mangabey titi ecc Per poter elaborare adeguate procedure sperimentali necessario conoscere le caratteristiche an
246. sposizioni multiple Le pi comuni sostanze utilizzate nei laboratori possono esercita re il loro effetto in forma acuta o cronica Gli effetti sono in rapporto con i tempi di esposizione e con la quantit della sostanza presente nell aria o nell ambiente con la via di ingresso e con le propriet fisico chimiche degli inquinanti presenti Gli effetti possono essere influenzati dalla presenza di altri composti chimici o dall uso di me dicinali o di sostanze voluttuarie Le caratteristiche di esposizioni multiple e a basse dosi di diversi agenti chimici rendono estremamente complicato identificare nel l ambito di un programma di sorveglianza sanitaria degli indicatori specifici che possano fornire segni preclinici provocati da un partico lare agente chimico Per alcune sostanze chimiche la stima di esposizione mediante monitoraggio basata su molti studi con risultati uniformi ed atten dibili mentre per altri c ancora una grande incertezza La valutazione del rischio della salute mediante l utilizzo di biomarcatori di esposizione possibile solo per pochi agenti chimici La Tab V riporta alcune delle sostanze chimiche usate nei laboratori di ricerca biotecnologica ed i relativi biomarcatori Un aspetto particolare amp quello relativo alla possibilit di utilizza re appropriati test definiti come indicatori di esposizione integrata utili particolarmente quando non si conosca l esatta composizione delle sostanze a cui il sogge
247. ssici degli xenobiotici 103 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica a Tossicit acuta La tossicit acuta si ha dopo la somministrazione di un unica dose o pi dosi in 24 ore che determina la morte del 50 degli animali dell esperimento Il valore della dose letale 50 LD o della concentrazione letale 50 LC un parametro molto usato per i foglietti illustrativi La LC il risultato di un inalazione continuativa a varie concentrazioni I simboli associati molto tossico tossico nocivo devono essere presenti sull etichetta Si deve tenere presente che la tossicit acuta strettamente dipen dente dalla specie animale dal sesso dalla via di introduzione e che di conseguenza la semplice estrapolazione all essere umano molto rischiosa Tecniche alternative possono portare alla determinazione della tossicit acuta sulle cellule animali test di citotossicit evitando un uso eccessivo di animali Le intossicazioni acute sono rare nei laboratori e di solito dovute a miscele di sostanze chimiche incompatibili che rilasciano gas molto tossici Ad esempio trattare una soluzione acquosa di cianuro di potassio KCN con un acido anche se debole libera acido cianidrico un gas inodore ed estremamente tossico figura 18 K99N C H c X CN HK c Figura 18 Formazione di acido cianidrico per azione dell acido cloridrico sul cianuro di potassio La sodioazide
248. ssono dare origine ad un esplo sione in presenza di ossidanti Ma un forte ossidante come il permanganato di potassio pu non decomporre direttamente l idrazina H N NH sotto forma idratata HN NH H O usato per sequenziare il DNA Questo tipo di reazio ne esotermica molto violenta e inoltre si possono sviluppare dei gas tossici come l ossido di azoto d Reazioni di polimerizzazione esplosive Molti monomeri specialmente quelli non stabilizzati possono co stituire delle miscele estremamente instabili In particolare la presenza di impurezze acidi basi altri iniziatori di reazioni radicaliche come gli idroperossidi i perossidi i sali di me talli di transizione che possono iniziare una violenta polimerizzazione dei monomeri come certi composti etilenici etilene stirene acrilati metacrilati acrilamide o i loro derivati epossidi Cos l ossido di etilene utilizzato per la sterilizzazione pu polimerizzarsi in maniera esplosiva per semplice riscaldamento e pre senza di tracce di basi minerali figura 12 A n ETE ofcn cn ooa n Ossido etilenico Ossido polietilenico Figura 12 Polimerizzazione dell ossido etilenico in ossido polietilenico Infatti l ossido di etilene deve essere usato ad una concentrazione inferiore al 10 diluito con anidride carbonica Alcune delle sostanze chimicamente incompatibili che possono es sere utilizzate in un laboratorio di biotecnologie sono elenca
249. sti a cancerogeni 62 Cong Naz Soc It Med Lav Ig Ind Geno va 29 settembre 2 ottobre 1999 188 PRECAUZIONI PER L USO DIAGENTI BIOLOGICI E CHIMICI Mariangela Miele Bernardetta Ledda Francesca Cavalli Dimitri Sossai Nei laboratori di ricerca biotecnologica si manipola una grande vari et di agenti biologici e composti chimici che essere pericolosi per la salute e l ambiente Un elenco di tutti gli agenti ed i composti utilizzati e di conseguenza dei rischi presenti in un laboratorio risulterebbe poco esau riente Il presente manuale si limita a fornire alcune informazioni per per mettere ai ricercatori di definire le precauzioni da prendere anche quando non esistano precise indicazioni dalle normative in vigore Nella tabella IV sono mostrati i principali agenti chimici e fisici usati per decontaminazione disinfezione e sterilizzazione Nelle tabelle V e VI si riportano le principali fonti di rischio biologico e chimico rispettivamente Le tabelle forniscono indicazioni utili al fine di evitare o diminuire la contaminazione durante le operazioni che pi fre quentemente si svolgono nei laboratori David 1997 Sambrook et al 1989 amplificazione e Polymerase Chain Reaction PCR per DNA ed RNA analisi e manipolazione di DNA RNA e oligonucleotidi creazione di banche di DNA ricombinante preparazione di in serti per il clonaggio estrazione di DNA da cellule animali vegetali e batteriche estrazione di DNA pl
250. studiato il com portamento di aflatossine sciolte in dimetilsolfossido o in cloroformio Quando vengono sciolte in dimetilsolfossido le aflatossine passano attraverso i guanti in lattice ma non attraverso quelli in vinile mentre se vengono sciolte in cloroformio passano attraverso entrambi i tipi di guanti perch il cloroformio scioglie il materiale di cui sono costituiti Due studi americani hanno dimostrato che una serie di agenti antineoplastici alcuni dei quali sono cancerogeni o potenzialmente cancerogeni per l uomo diffondono attraverso i guanti Ci che Connor et al 1984 ha dimostrato con due metodi diversi analisi chimiche e test di mutagenesi che la carmustina diffonde sia attraverso i guanti in lattice che quelli in vinile e che effettivamente indossare due paia di guanti garantisce una protezione migliore Laidlow et al 1984 ha studiato il comportamento di 20 agenti neoplastici carmustina ciclofosfamide ifosfamide mercaptopurina melphalan tiotepa mitoxantrone dacarbazina etoposide teniposide 5 fluoro uracile floxuridina cisplatino daunorubicina mecloretamina doxorubicina bleomicina verso 4 tipi di guanti Il test durato 90 minuti utilizzan do le soluzioni raccomandate dai fornitori I risultati sono i seguenti e Guanti in PVC sottili permeabili a tutti i composti saggiati 125 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Rischio chimico Guantiin P
251. suna circostanza gli esami medici devono essere utiliz zati per sostituire le misure di prevenzione e controllo dei rischi di espo sizione ma devono essere usati per migliorare le condizioni di lavoro in modo tale da facilitare l adattamento del lavoratore al lavoro I risultati degli esami periodici insieme alle informazioni sui livelli di esposizione ambientale possono essere usati per verificare il livello di protezione fornito dai limiti di esposizione e per contribuire alla loro revisione Inoltre tali esami potrebbero essere usati frequentemente per identificare 1 possibili effetti sanitari della variazione dei metodi di la voro dell organizzazione del lavoro delle condizioni di lavoro delle nuove tecnologie o dei processi lavorativi o dei nuovi prodotti Nel caso di esposizione a specifici rischi occupazionali in aggiunta agli accertamenti sanitari descritti sopra la sorveglianza sanitaria dei lavoratori deve includere dove appropriato alcuni esami che potreb bero essere necessari per scoprire i livelli di esposizione i primi effetti biologici e le reazioni Quando esiste un metodo di monitoraggio biologico della salute dei lavoratori valido e generalmente accettato per diagnosi precoci degli effetti sulla salute dell esposizione a specifici rischi occupazionali questo pu essere usato per identificare i lavoratori che necessitano di approfondimenti diagnostici Test biologici ed altri esami Esistono test biologici e altri
252. tanea Fino a quando non si conosce con certezza la virulen za di un ceppo isolato sarebbe bene considerare tale ceppo patogeno e virulento e La dose infettiva Generalmente campioni diluiti di agenti con bassa infettivit sono pi pericolosi di campioni concentrati di agenti con elevata infettivit La gravit della malattia e la disponibilit di trattamenti terapeutici efficaci Ad esempio lo stafilococco aureo che un comune abitante della cute umana e pu causare una grande variet di patologie generalmente curabili con antibiotici clas sificato come agente biologico di gruppo 2 il bacillo antrace seppure fatale per inalazione appartiene al gruppo 3 in quanto sensibile agli antibiotici virus capaci di determinare gravis sime patologie come HIV e HCV rientrano nel gruppo 3 in quanto non trasmissibili o poco trasmissibili per via aerea e Il metodo di trasmissione dell agente infettivo La via di tra smissione di un determinato agente pu essere singola o multi pla Alcuni agenti infettivi possono essere trasmessi attraverso vie multiple Vi sono inoltre altri fattori che partecipano al processo infettivo e sono la resistenza o la suscettibilit dell ospite la via di esposizione e la dose di agenti infettanti Inoltre la suscettibilit dell ospite de 29 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica terminata da molti fattori tra i quali l et l origine etnica
253. te le condi zioni psicofisiche suscettibili di porre problemi in ordine alle condizio ni di sicurezza del lavoro nonch l eventuale esistenza di anomalie e o di condizioni patologiche che possano limitare l utilizzazione di dispositivi di protezione individuale Durante gli esami e le consultazioni mediche il medico addetto alla sorveglianza sanitaria Informa i lavoratori dei potenziali danni o malattie e delle misu re necessarie per prevenirle Informa i lavoratori delle potenziali malattie e delle condizioni di lavoro o di esposizione che possono essere controindicate da un punto di vista medico e dei luoghi nei quali possono ottenere indicazioni per terapie o correggere le proprie condizioni Informa i lavoratori e i loro datori di lavoro dell efficacia o meno delle misure di controllo Collabora con il datore di lavoro per collocare i lavoratori in occupazioni che tengano conto delle loro capacit per un parti colare lavoro e Formai giovani a fare attenzione alle proprie attitudini fisiche e men tali allo scopo di agevolare un appropriata guida professionale e Previene la totale esclusione di ogni lavoratore dall impiego e provvede all impiego di tutti i lavoratori nonostante alcune controindicazioni nel lavoro nel quale lui lei sia competente tenendo in considerazione le opportunit di impiego disponibili Gli esami medici e i test non devono essere eseguiti superficialmen 169 Manuale di sicurezza p
254. te nella tabella 1 Questa lista non completa pertanto si consiglia di consulta re manuali specializzati 94 Rischio chimico Tabella 1 Principali sostanze e gruppi incompatibili SOSTANZE CHIMICHE SOSTANZE REAZIONI VIOLENTE COMBUSTIONE RILASCIO DI GAS 0 GRUPPI INCOMPATIBILI ESOTERMICHE SPONTANEA TOSSICI Acqua Basi forti Acidi minerali forti Cianuri HCI HS0 HNO Azidi H Solfuri Ipocloriti Materiali organici combustibili legno cotone HCIO carta Alcoli metanolo etanolo glicoli glicerolo Basi minerali forti Acqua NaOH KOH Acidi forti NHOH Potenti ossidanti Idrocarburi etilenici KMn0 CrO 0 Potenti riducenti materiale organico HO combustibile grassi concentrato Alcoli Acetone Acidi NaClO Ammine Formaldeide C RISCHIO ASSOCIATO ALLE PROPRIET TOSSICHE Per un organismo vivente le sostanze chimiche possono essere ele menti costitutivi e composti endogeni A questa categoria appartengo no molecole di piccola e media taglia che sono molecole inorganiche come l acqua l urea il cloruro di sodio o sostanze organiche come il glucosio gli acidi grassi le vitamine 95 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Gli organismi viventi possiedono anche molecole di grandi dimen sioni chiamate macromolecole quali le proteine i fosfolipidi insaturi e gli acidi nuclei
255. te per l esercizio professionale della radiodiagnostica della radioterapia della medicina nucleare nonch per le attivit diagnostiche complementari all esercizio clinico e per quelle di competenza del fisico specialista e D M del 21 febbraio 1997 linee guida per l accertamento e l acquisizione delle conoscenze radioprotezionistiche per il personale medico che svolge attivit specialistica di radiodiagnostica di radioterapia e di medicina nucle are nonch attivit radiodiagnostica complementare all esercizio clinico ivi compresa quella in campo odontoiatrico D M del 21 febbraio 1997 modalit per l acquisizione di adeguate co noscenze radioprotezionistiche nell ambito dei corsi di laurea in medicina e chirurgia e in odontoiatria e protesi dentaria nonch dei corsi di specia lizzazione in radiodiagnostica radioterapia e medicina nucleare D M del 14 febbraio 1997 determinazione delle modalit affinch i do cumenti radiologici e di medicina nucleare e i resoconti esistenti siano resi tempestivamente disponibili per successive esigenze mediche ai sen si dell art 111 comma 10 del decreto legislativo 230 del 17 marzo 1995 D M del 14 febbraio 1997 individuazione degli impianti complessi di radioterapia e di medicina nucleare ai sensi dell art 111 comma 11 del decreto legislativo 230 del 17 marzo 1995 229 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica e D M del 14 febbraio 1
256. testicoli 0 3 Gy porta a riduzione degli spermatozoi e sopra i 2 Gy la loro completa eliminazione questi effetti sono reversibili nel caso delle ovaie dosi di irradiazioni di 12 15 Gy saranno causa irreversibile di sterilit in una donna di 25 anni mentre solo 7 Gy produrr lo stesso effetto in una donna di circa 40 anni Effetti random ricadono nell incremento di rischio relativo di morte per cancro o l evento di effetti di ereditariet gravi nelle prime due generazioni dopo un esposizione uniforme a tutto il corpo Per questi effetti si riconosce che la stessa dose pu non produrre lo stesso effetto in persone diverse La probabilit di rischio di sviluppare un cancro dopo irradiazione uniforme a tutto il corpo stata espressa dalla Com missione Internazionale sulla Protezione Radiologica 1977 1980 nella seguente formula 143 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Numero di attesa di casi Rischio calcolato per lo Dimensione della di cancro da irradiazione sviluppo di cancro x Esposizione x popolazione dove i rischi calcolati possono essere espressi per l intero corpo a seconda del sesso 1 65 x 10 Sv per femmina o 1 40 x 10 Sv per maschio o per organi diversi la cui suscettibilit alla irradiazione diversa vedi Tabella 1 da notare che stato proposto il nuovo valore del rischio calcolato per le donne 5 x 10 Sv Commissione Internazionale di Sicurezza Radiologic
257. ti nei confronti della successiva comparsa di un tumore tuttora oggetto di discussione e non sono disponibili criteri validati che consentano di attribuire le variazioni dall ambito di normalit a specifici agenti presenti nell ambiente di lavoro Inoltre si sottolinea che nel caso di risultati negativi con i test utilizzati non si pu in alcun modo escludere che vi siano stati effetti di altro genere Comunque il quadro normativo impone la sorveglianza sanitaria sugli esposti a cancerogeni e pertanto vengono fornite indicazioni generiche sulla necessit di un controllo sanitario accurato a cadenza almeno annuale eventualmente corredato da accertamenti complemen tari utile soprattutto quale occasione per fornire ai lavoratori le infor mazioni sul significato e sui limiti della sorveglianza sanitaria stessa nonch sulle norme generali e specifiche di prevenzione evidente che questa impostazione privilegia correttamente la prevenzione primaria e non attribuisce forse troppo categoricamente particolare importanza alla prevenzione secondaria Questa impostazione non tiene per conto della necessit etica di provvedere una volta definita la figura dell esposto a cancerogeni la miglior sorveglianza scientificamente possibile e in quest ottica ap pare riduttivo il rifiuto aprioristico di test precoci che consentano di 183 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica intervenire in fa
258. ti nell uomo e non sono ancora stati valutati e classificati nel pre sente allegato figurino come minimo nel gruppo 2 salvo il caso in cui gli Stati Membri abbiano la prova che non possono provocare malattie nell uomo Taluni agenti biologici classificati nel gruppo 3 e indicati con due asterischi nell elenco allegato possono costituire per i lavoratori un rischio d infezione limitato perch normalmente con sono veicolati dall aria Gli Stati Membri valutano le misure di contenimento da applicare a tali agenti biologici tenendo conto della natura delle attivit speci fiche in questione e della qualit dell agente biologico interessato per determinare se in circostanze particolari possibile rinunciare a talune di queste misure 205 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica BATTERI e organismi simili NB Per gli agenti che figurano nel presente elenco la menzione spp si riferisce alle altre specie riconosciute patogene per l uomo Agente biologico Classificazione Rilievi Actinobacillus actinomycetemcomitans Actinomadura madurae Actinomadura pelletieri Actinomyces gereneseriae Actinomyces israelii Actinomyces pyogenes Actinomyces spp Arcanobacterium haemolyticum Corynebacterium haemolyticum Bacillus anthracis Bacteroides fragilis Bartonella bacilliformis Bartonella quintana Rochalimae quintana Bartonella Rhochalimea spp Bordetella bronchiseptica Bordetella para
259. tichettatura delle sostanze pericolose Direttiva della Commissione 96 94 CE che fissa un secondo elenco di valo ri limite indicativi in applicazione della direttiva 80 1107 CEE Direttiva del Consiglio 97 42 CE che modifica per la prima volta la direttiva 90 394 CEE Direttiva del Consiglio 98 24 CE sulla protezione della salute e della sicu rezza dei lavoratori contro i rischi derivanti da agenti chimici durante il lavo ro quattordicesima direttiva particolare ai sensi dell articolo 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE Direttiva del Consiglio 99 38 CE che modifica per la seconda volta la diret tiva 90 394 CEE Direttiva della Commissione 2000 39 CE relativa alla messa a punto di un primo elenco di valori limite indicativi in applicazione della direttiva 98 24 CE del Consiglio sulla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti dal l esposizione ad agenti chimici sul luogo di lavoro AGENTI BIOLOGICI Direttiva del Consiglio 90 679 CEE del 26 novembre 1990 relativa alla pro tezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da un esposizione ad agenti biologici durante il lavoro settima direttiva particolare ai sensi dell art 16 paragrafo 1 della direttiva 89 391 CEE 221 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Direttiva del Consiglio 93 88 CEE del 12 ottobre 1993 che modifica la di rettiva 90 679 CEE relativa alla protezione dei lavoratori contro rischi deri vanti d
260. tilato e a a prova d esplosione Dimetilformamide DMF e Tossico e teratogeno penetra facilmente attraverso la 1 2 3 Formamide pelle causando malformazioni negli animali Utilizzare contenito ri di vetro o polipropi lene la dimetilfor mamide scioglie le comuni plastiche Disporre in modo opportuno dello smaltimento dei rifiuti Conservare in luogo ventilato ed asciutto Dimetil solfato DMS Mutageno Corrosivo Cancerogeno 1 2 3 Raccogliere 1 rifiuti in bottiglie conte nenti NaOH SN Dimetil solfossido DMSO Evitare contatti penetra attraverso la pelle Non tossico 1 2 3 197 anuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Composto Riscuio PREVENZIONE 3 5 dimetossi 4 Irritante per occhi vie respiratorie e pelle 1 2 4 idrossiacetofenone Acetosiringone Doxorubicina HCI Tossico 12 3 Etidio Bromuro BET Polvere mutagena moderatamente tossica 1 2 Evitare l inalazione Irritante Decontaminare le soluzioni con un ossidante forte Etilendiammina ferrica Nocivo 1 2 3 Fe EDDHA Acido Etilendiammintetrace Irritante 1 2 4 tico EDTA sale ferrico sodico e disodico Alcol Etilico etanolo Facilmente infiammabile Irritante Neurotossico 1 Fenolo Neurotossico 1 2 3 Pericoloso per inalazione e contatto cutaneo specialmente Raccogliere 1 rifiuti quando lo si trova in miscela con il cloroformio in contenitor
261. tto esposto o le concentrazioni di alcu ne di esse siano particolarmente basse e pertanto difficilmente misurabili Tra gli indicatori di esposizione integrata possono essere considerati quei test che permettono di valutare la funzionalit degli enzimi microsomiali epatici proposti per il monitoraggio biologico di molti solventi 181 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Tabella V Principali agenti chimici utilizzati in laboratorio loro eventuale cancerogenicit e biomarcatori SOSTANZE CHIMICHE UTILIZZATE IN LABORATORIO MARCATORI DI ESPOSIZIONE Acetone Acetone nelle urine Arsenico Metaboliti dell arsenico inorganico nelle urine Benzene Acido S enilmercapturico nelle urine Luminolo M xilene Acido metil ippurico nelle urine Mercurio Mercurio totale nel sangue nelle urine Metanolo Metanolo nelle urine O xilene Acido metil ippurico nelle urine P xilene Acido metil ippurico nelle urine Fenolo Fenolo nelle urine Fenilmetilsulfonil fluoride Fluoride nelle urine Tetraidrofurano Toluene O cresol nelle urine acido ippurico nelle urine e toluene nel sangue Tricloro etilene Acido Tricloroacetico e tricloroetanolo nelle uri ne tricloroetanolo nel sangue tricloroetilene nel l aria espirata tricloroetilene nel sangue Xilene Acido metil ippurico nelle urine Cancerogeno Rischi cancerogeni Alcuni degli agenti chimici
262. ttuare la ricerca bibliografica a causa della dispersione dei dati 2 Rischi relativi alle sostanze chimiche infiammabili L infiammabilit di una sostanza chimica o di una miscela una caratteristica importante Il rischio corrispondente l accensione e la propagazione degli incendi Sono necessari tre elementi e Combustibile o carburante e Un ossidante che generalmente l ossigeno 21 nell aria e Una fonte di innesco per iniziare la reazione di combustione Essa pu essere una scintilla una fiamma un eccessivo calore ecc Parecchi parametri fisico chimici devono essere presi in considera zione per valutare i rischi di infiammabilit Tre di loro sono essenziali e i limiti di infiammabilit il punto di infiammabilit e la temperatura di auto accensione Inoltre per valutare il rischio di infiammabilit e il rischio tossicologico di una sostanza chimica devono essere considerate la volatilit e la pres sione di vapore massima parametri che danno informazioni sulla quantit di vapore emesso e sulla percentuale di evaporazione Le sostanze chimiche infiammabili possono essere gassose vapori di liquidi volatili o di solidi sostanze chimiche solide come metalli finemente polverizzati zinco magnesio nickel a Pressione di vapore La pressione di vapore di un liquido un importante parametro di 84 Rischio chimico sicurezza essa corrisponde alla pressione esercitata su un liquido dal suo v
263. ttuare una completa valutazione dei rischi associati alla loro manipolazione Numerosi fattori quali la di versit biologica la complessit chimica delle molecole la molteplici t delle vie di diffusione e la specificit delle interazioni con l ospite come pure la possibile produzione di nuove sequenze codificanti de vono essere considerati per valutare l effetto di questi organismi sulla salute e l ambiente Un agente biologico amp definito secondo la normativa vigente Direttive europee 90 679 CEE 93 88 CEE e 2000 54 CE come un qualsiasi microrganismo anche se geneticamente modificato coltura cellulare ed endoparassita umano che potrebbe provocare infezioni allergie o intossicazioni in lavoratori esposti 19 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Unmicrorganismo e definito come un entit microbiologica cellulare o meno in grado di riprodursi o di trasferire materiale genetico Gli agenti biologici sono stati classificati in quattro gruppi a secon da del livello di rischio di infezione 2000 54 CE Gruppo 1 Agente biologico che presenta poche probabilit di causare ma lattie in soggetti umani Gruppo 2 Agente biologico che pu causare malattia in soggetti umani e costituire un rischio per i lavoratori poco probabile che si pro paghi nella comunit sono disponibili efficaci misure profilattiche o terapeutiche Gruppo 3 Agente biologico che pu caus
264. turo ag gravamento in seguito all espletamento della mansione assegnata e la definizione di un quadro iniziale per avere un confronto con le condizioni future Tabella I Propositi e principi generali della sorveglianza sanitaria e La sorveglianza sanitaria appartiene alla disciplina della salute e sicurezza occupazionale Il proposito centrale la prevenzione primaria degli infortuni e delle malattie professionali e lavoro correlate Deve essere correlata ai rischi specifici dell attivit svolta dal lavoratore Deve essere periodicamente rivalutata nelle sue procedure e non deve essere intesa come mera attivit di routine Si svolge preferibilmente all interno di servizi di salute occupazionale organizzati secondo la conven zione n 171 riguardanti appunto 1 servizi di salute occupazionale adottate dall ILO nel 1985 La sorveglianza sanitaria viene attuata a seguito del processo di va lutazione dei rischi Premesso che prima dell assunzione deve essere effettuato l accertamento preventivo per la formulazione del giudizio di idoneit alla mansione specifica e che a prescindere dalle successi ve valutazioni dei rischi gi all atto di tale visita potr emergere la necessit di effettuare visite successive dello stato di salute gli opera tori devono essere controllati periodicamente sulla base della valuta zione dei rischi Tab II La modificazione dei rischi lavorativi presen ti nei
265. tuttavia la penetrazione attraverso la pelle e le mucose siccome alcune sostanze entrano pi facilmente attraver so questa via che non per inalazione A questa categoria di sostanze chimiche appartengono alcuni solventi quali fenolo e dimetilsulfossido DMSO formammide e dimetilformammide DMF e N metilpirrolidone NMP toT bob V Lob Lb ow H C S CH H C S H C lt ds H 3 Fenolo Dimetilsulfossido Formammide Dimetilformammide N DMSO DMF Metilpirrolidone NMP Alcuni reagenti utilizzati nei laboratori biologici sono particolar mente pericolosi in quanto essi sono facilmente assorbiti attraverso la pelle e sono molto tossici E il caso delle ammine aromatiche e delle benzidine Nel passato la benzidina era spesso utilizzata per rilevare l attivit perossidasica perossido di idrogeno perossidasi e oggi viene impie gata per l immunorilevazione nel test ELISA Essa una potente mole cola cancerogena che causa tumori alla vescica nell uomo molti casi di questo tipo di tumore sono stati riscontrati in persone che hanno lavorato in laboratorio con questi reattivi chimici In alcuni casi la benzidina viene sostituita con la 3 3 5 5 99 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica tetrametilbenzidina TMB una molecola che non n mutagena ne cancerogena In altre applicazioni la 3 5 diaminobenzidina DAB che risultata essere cancerogen
266. uanti di protezione appropriati b Reazioni violente di ossidazione Le sostanze chimiche fortemente ossidanti specialmente se solide o finemente suddivise risultano essere facilmente ridotte quando ven gono in contatto con agenti riducenti combustibili come gli idrocarburi La stessa cosa si pu dire per i composti del cromo esavalente aci do cromico cromati dicromati e per il permanganato di potassio KMn0O I composti del cromo esavalente sono dei potenti mutageni e cancerogeni per l uomo Anche il permanganato di potassio non privo di rischi pur essendo utilizzato come prodotto detergente l ag giunta di acido solforico concentrato ad una soluzione concentrata di permanganato di potassio ancora peggio se si usano 1 cristalli pu innescare una violenta esplosione a causa della formazione di un intermedio l acido permanganico HMnO e della sua anidride l anidride permanganica Mn O che sono particolarmente instabi li figura 11 2 0 Mn 0 9 xy 2 odo g ES mi E Permanganato Acido permanganico Anidride permanganica di potassio instabile instabile Figura 11 Formazione dell anidride permanganica da permanganato di potassio in ambiente fortemente acido 93 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica c Reazioni violente di riduzione Gli agenti fortemente riducenti meno comuni nei laboratori biolo gici di quelli fortemente ossidanti po
267. uni ricercatori hanno messo in evidenza che l appli 31 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica cazione di DNA clonato di un oncogene umano sulla schiena di un topo induce lo sviluppo di tessuti tumorali Brown 1990 Infine studi recenti hanno dimostrato come acidi nucleici possano prontamente entrare in ogni tipo di cellule umane e di mammiferi Acidi nucleici possono infatti con successo essere somministrati per aerosol Yei et al 1994 tramite applicazioni locali agli occhi Noisakran et al 1999 attraverso l orecchio interno Yamasoba et al 1999 e 1 follicoli del cuoio capelluto Hoffman 2000 per inie zione intramuscolare diretta Budker et al 1998 attraverso la pelle Khavari et al 1997 o per bocca During et al 1998 Gli studi riportati precedentemente si riferiscono alla manipola zione genetica dei microrganismi utilizzati per la trasformazione del le cellule o organismi animali o nella terapia genica Per quanto ri guarda la manipolazione genetica delle piante 1 rischi che vengono maggiormente presi in considerazione sono relativi all ambiente ed al trasferimento orizzontale dei geni per la resistenza agli antibiotici alla microflora del suolo L uso degli agrobatteri sistema di elezione per la trasformazione genetica delle piante vedi in precedenza non considerato a rischio per l operatore in quanto opinione diffusa che il processo che porta all escissione pri
268. ute che pur non essendo conseguenti all esposizione possono essere aggravate dalla specifica attivit lavorativa o comunque possono interagire con il normale svol gimento della stessa La sorveglianza sanitaria deve costituire parte integrante di un pi ampio programma di promozione della salute occupazionale che in particolare prevede l identificazione dei fattori di rischio e la cono scenza delle modalit di esposizione La valutazione del rischio il presupposto indispensabile per una corretta programmazione degli accertamenti sanitari come viene peraltro sottolineato dalle direttive comunitarie in materia obiettivo della sorveglianza sanitaria Tab I la protezione della salute e prevenzione della malattia lavorativa in una accezione ampia che comprenda la prevenzione del danno ma anche la prevenzione del 166 La sorveglianza sanitaria dei lavoratori malessere e ove attuata con strumenti adeguati possa fornire una pre visione del benessere L obiettivo viene raggiunto qualora il lavoratore sia assegnato a una mansione confacente alle proprie capacit senza pregiudizio per la salute propria e altrui attraverso e la determinazione di una generica idoneit al lavoro tenendo in considerazione anche i possibili cambiamenti di mansione a valutazione di eventuali condizioni che possano costituire controindicazioni a mansioni che comportino rischi particolari a valutazione di eventuali condizioni suscettibili di fu
269. utrotopi Virus della coriomeningite linfocitaria altri ceppi Virus Mopeia Altri LCM Lassa virus complex Virus complex Tacaribe Arenavirus del Nuovo mondo Virus Guanarito Virus Junin Virus Sabia Virus Machupo Virus Flexal Altri virus complex Tacaribe Astroviridae Bunyaviridae Belgrado noto anche come Dobrava Bhanja Virus Bunyamwera Germiston 210 2 N N NU a a AA IO NNN WwW Allegato I Agente biologico Virus Oropouche Sin Noumbre ex Muerto Canyon Virus dell encefalite californiana Hantavirus Hantaan febbre emorragica coreana Seoul virus Puumala virus Prospect Hill virus Altri hantavirus Nairovirus Virus della febbre emorragica di Crimea Congo Virus Hazara Phlebovirus Febbre della Valle del Rift Febbre a flebotomi Sandfly fever Virus Toscana Altri Bunyavirus noti come patogeni Caliciviridae Virus dell epatite E Norwalk Virus Altri Caliciviridae Corohaviridae Filoviridae Virus Ebola Virus di Marburgo Flaviviridae Encefalite d Australia encefalite della Vallede Murray Virus dell encefalite da zecca dell Europa centrale Absettarov Hanzalova Hypr Kumlinge Virus della Dengue tipo 1 4 Virus dell epatite C Virus dell epatite G 211 Classificazione NINNUW WLW N Aa NNNWwW 3 N CF 3 3 Rilievi Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Agente biologico Classificazione Rilievi Uo
270. va un aliquota non si deve tentare di prenderne una quantit esatta se ne preleva una quantit approssimativa e poi si ag giunge il volume di solvente necessario a raggiungere la concentrazio ne desiderata Cercare di aggiustare il peso aggiungendo o togliendo aliquote del composto aumenta il rischio di contaminazione L aliquota prelevata viene messa in un recipiente di volume suffi ciente alla prima diluizione Questo recipiente deve essere provvisto di un tappo a vite e pesato con il tappo prima di aggiungere il prodotto desiderato In alcuni laboratori le procedure di sicurezza suggeriscono di mettere la bilancia sotto cappa ci sono per 2 svantaggi 1 molto dif ficile se non impossibile pesare sotto una cappa in funzione 2 in caso di incidenti ad esempio stravasi la bilancia ne risulter contaminata ed molto difficile decontaminarla Comunque consigliabile posizionare la bilancia il pi vicino possibile alla cappa ma non sotto di essa 119 Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica Dopo aver trasferito il campione nel recipiente lo si deve chiudere immediatamente Determinare il peso dell aliquota per doppia pesata e quindi calcolare la quantit di solvente necessaria alla prima diluizione le procedure di sicurezza vanno adattate al tipo di prodotto usato Sul flacone viene apposta un etichetta riportante le seguenti infor mazioni nome del composto natura del solvente con
271. zione cutanea assorbimento Esposizione interna e contaminazione sono i principali fattori radiologici Committed Dose Equivalent CDE 0 5 mrem mCi inalazione Percentuale di Dose di Contaminazione della pelle 2 910 mrem hr uCi cm 7 mg cm o 0 007 cm profondit nel tessuto La frazione di particelle P beta trasmesse mediante lo strato morto della pelle circa il 14 I tessuti con rapide percentuali di ricambio cellulare evidenziano un alta ritenzione dovuta alla concentrazione di fosforo nelle nucleoproteine 3P eliminato dall organismo principalmente per via urinaria 156 Rischio radiologico Metabolismo del Fosforo 30 rapidamente eliminato dall organismo 40 ha una emivita biologica di 19 giorni 60 di P ingerito escreto dall organismo nelle prime 24 ore PROTEZIONE Nonrichiesta comunque consigliato materiale a bassa densit es plexiglass spesso 3 8 pollici acrilico lucite plastica o com pensato STRUMENTO DI INDAGINE Contatore GM di indagine con sonda specifica Contatore a liquido di scintillazione pu essere usato per indivi duare la contaminazione rimovibile dalla superficie DosiMETRI PERSONALI e Non richiesti poich non rilevano questo nuclide di bassa ener gia PRECAUZIONI GENERALI e Volatilit inerente STP Insignificante e Proteggere la cute da possibili contaminazioni guanti camice e L essiccazione pu portare a contaminazione aerogena di

Manuale di sicurezza - Dipartimento di Biologia e Biotecnologie

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