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Guida Utente

1. rin 68 Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 4 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Introduzione alla tecnologia DMS 1 Nota Per istruzioni sulla sicurezza fare riferimento alla Guida per l utente del sistema dello spettrometro di massa AVVERTENZA Pericolo di scosse elettriche Non rimuovere il coperchio n tentare di eseguire la manutenzione sul modulo di controllo SelexiON Non contiene parti riparabili dall utente Questa sezione descrive la tecnologia di spettrometria a mobilit differenziale DMS i suoi benefici e il ruolo dei modificatori Viene discussa anche la modalit di funzionamento DMS Off La tecnologia DMS DMS un metodo per separare gli ioni basato sulla differenza di mobilit degli ioni nei campi elettrici ad alta e bassa intensit con gas alla pressione atmosferica o a una pressione prossima a questa DMS una variante della spettrometria di mobilit ionica IMS Nella tecnologia DMS le tensioni di separazione SV vengono applicate al canale di trasporto ionico perpendicolarmente al flusso del gas di trasporto come mostrato in Figura 1 1 A causa della differenza tra i coefficienti di mobilit ionica nei campi elettrici ad alta o bassa intensit gli ioni migrano verso le pareti lasciando la traiettoria iniziale La loro traiettoria viene corretta da una tensione CC di contro bilanciamento chiamata tensione di compensazione COV Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 06
2. Mass List List View or TOr N O Max 65 0 Cannot ceste the IDA Explorer Certicidm Timefenn Scan CE JUS 8753 TO 0 J 1000764 8320 TO 1000765 8651 TO 1000767 8532 TO 1000769 8567 TO 1000772 8549 TO 1000773 8413 TO 100077 8438 TO 1010230 6075 TO 10010572 9017 TO 1010592 8225 TO 1658 008 Y Axis 200000000000000005055707000 O 101 0597 8081 TO 200 eg 1500 2000 3 ie zs n XIC of TOF MS Max 104 0 cos H Max 0 0 Cannot creste the IDA Explorer 1010600 7 997 TO JNM 7 921 TO 1010600 8022 TO 1010600 8124 TO 080 _J101 0602 8481 TO 2 _J101 0605 8159 TO e 0 Jum 7839 TO A 5 1010607 7 964 TO gt 040 _ 1071 0507 8039 TO E 1010610 7 895 TO 020 110 611 8242 rn x Tree View List View 90 0 0 10 20 e 00 1000 1500 2000 COV Vols mz Da Si aprir la finestra IDA Explorer Nel lato sinistro del riquadro viene mostrato un elenco di masse inviate alla scansione dipendente con una visualizzazione ad albero o una visualizzazione elenco Passare da una vista all altra facendo clic su Tree View o List View in fondo al riquadro Mass List Nella sezione destra del riquadro sono visualizzati graficamente i dati IDA acquisiti Invece del tempo sull asse x dei grafici TIC e XIC viene visualizzato l intervallo COV a incremento graduale 5 Utilizzare i due pulsanti sopra al grafico per passare dalla visualizzazione a singolo grafico a quella a pi grafici Per visualizzar
3. Scan type TOFMS v TOF Masses Da Accumulation time 0 250006 secs Mn 100 Max 2000 Polary Display Mass Q Positive V Center Width y lu Genin oa wan oo EE Period Duration 4 998 mins Cycles 1086 Delay Time 0 secs Nella modalit di funzionamento DMS Off avvengono le seguenti modifiche e La maggior parte dei parametri DMS non sono pi disponibili Fare riferimento alla Stato dei parametri DMS nella modalit DMS Off a pagina 65 Solamente il parametro DMS Temperature DT visibile nella modalit DMS Off e lo si pu ottimizzare in questa modalit al fine di ottenere la massima sensibilit e parametri DMS SV COV e DMO vengono rimossi dall elenco dei parametri nella finestra Ramp Parameter Settings e Il tempo di assestamento predefinito diventa 19 974 ms Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 8 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION 2 Un sistema SCIEX TripleTOF 5600 o 6600 con tecnologia SelexION include un modulo di controllo installato da un responsabile dell assistenza tecnica FSE e l elettronica associata assieme a un dispositivo di interfaccia installato dal cliente Figura 2 1 Sistema 6600 con tecnologia SelexION Modulo di controllo con vassoio laterale Aggiornamento FSE 2 Sorgente di ionizzazione La fotografia mostra la sorgente di ionizzazione lonDrive Turbo V su un sistema TripleTOF 6600 Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 0
4. o meno tracce nella legenda Nella legenda sono visualizzate solo le tracce XIC superiori alla freccia blu 7 Fare clic sull icona Show File Info 8 Espandere la sezione Period quindi fare clic sul numero dell esperimento del passo 6 Nel riquadro destro vengono visualizzate le informazioni sulla combinazione selezionata di periodo ed esperimento Viene inoltre visualizzato il valore COV insieme ad altri parametri DMS Visualizzazione di un contour plot per i dati acquisiti con il parametro COV incrementato gradualmente solo opzione Ramp COV for Cycle Il software Analyst TF pu visualizzare un contour plot per i dati acquisiti utilizzando un metodo di acquisizione con il parametro COV incrementato gradualmente e un tipo di scansione completa contour plot forniscono la visualizzazione della separazione dei composti Per maggiori informazioni sui contour plot fare riferimento a Contour Plotnella sezione Analisi ed elaborazione dei dati della Guida Introduttiva Analyst TF e in Analisi qualitativa dei dati della Guida avanzata per l utente Analyst TF 1 Nella barra di navigazione sotto Explore fare doppio clic su Open Data File Nella finestra di dialogo Select Sample nell elenco Data Files selezionare un file di dati file wiff Selezionare un campione nel riquadro Samples awy Fare clic su OK Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 49 di 68 Analisi ed elaborazione dati Figura 5 7 TIC
5. La temperatura applicata al riscaldatore ceramico installato sulla parte posteriore dello scambiatore termico della piastra Curtain Per ogni modifica del valore DT lasciare che il sistema raggiunga l equilibrio per almeno 10 15 minuti prima di ottimizzare qualsiasi parametro DMS Quando si raggiunge la nuova temperatura viene visualizzato DMS Temperature reached sopra al campo DT Un prodotto chimico che viene aggiunto nel flusso di Curtain Gas per migliorare la separazione degli ioni Se il valore MD impostato a None i parametri MDC MDD e MDW non sono disponibili Se il valore MD impostato a un valore diverso da None il parametro MDC diventa disponibile Se si imposta MD sul valore Custom i parametri MDC MDD e MDW diventano disponibili Il parametro che controlla la concentrazione del modificatore Il software Analyst TF utilizza la densit e il peso molecolare del modificatore selezionato e la velocit di flusso del Curtain Gas per calcolare la velocit di flusso della pompa del modificatore quindi applica tale velocit in modo automatico alla velocit di flusso della pompa La densit di un modificatore personalizzato Il software Analyst TF utilizza questa densit in aggiunta al valore Modifier MW e alla velocit di flusso di Curtain Gas per determinare la velocit di flusso della pompa del modificatore Software Analyst TF 1 7 1 62 di 68 Descrizione Possibili valori Predefinito Low 150
6. parametri DR Off Low Medium e High vengono configurati durante l installazione e non devono essere cambiati Software Analyst amp TF 1 7 1 64 di 68 Predefinito 3 0 volt in polarit positiva 3 0 volt in polarit negativa Intervallo da 100 a 100 Predefinito Off 0 Low 10 Medium 25 High 40 Guida Utente RUO IDV 05 0689 IT C Parametri DMS Stato dei parametri DMS nella modalit DMS Off Parametri DMS DMS Temperature DT Modifier MD Separation Voltage SV Compensation Voltage COV DMS Offset DMO DMS Resolution Enhancement DR Modalit DMS Off Visibile su UI interfaccia Low impostazione utente predefinita fon sn Nascosto 3 0 volt in polarit positiva 3 0 volt in polarit negativa Valori dei parametri DMS e della sorgente utilizzati durante l eliminazione del modificatore Nome del parametro Modifier Pump Flow Rate Temperature TEM DMS Temperature DT DMS Resolution Enhancement DR Separation Voltage SV Compensation Voltage COV DMS Offset DMO lon Source Gas 1 GS1 lon Source Gas 1 GS2 Curtain Gas CUR lonSpray Voltage Floating ISVF Collision Gas CAD Guida Utente RUO IDV 05 0689 IT C Valore impostato durante l eliminazione del modificatore 1000 L min E We o OOo CNN EE 0m I E Predefinito del sistema Software Analyst TF 1 7 1 65 di 68 Parametri DMS Valori dei parametri DMS e della sorgente dopo
7. 2340 m 2390 2396 00 M 40 290 208 300 308 309 2316 De Lo spettro per l intervallo COV selezionato viene mostrato sotto la finestra del contour plot Mostra l intensit asse y di tutti i valori m z asse x nell intervallo COV selezionato Nel titolo dello spettro aperto visualizzato l intervallo COV selezionato Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 51 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo dei parametri DMS in IDA 6 Questa sezione descrive come e Creare un metodo di acquisizione dipendente dalle informazioni IDA per incrementare gradualmente Compensation Voltage COV durante la modalit di acquisizione batch e Visualizzare i dati IDA acquisiti con l incremento graduale di COV nella finestra Explorer e Visualizzare i dati IDA acquisiti con l incremento graduale di COV in IDA Explorer Prerequisiti TM _ x La tecnologia SelexION installata sullo strumento e il modulo di controllo acceso Utilizzare il metodo di acquisizione IDA per creare e inviare batch per acquisire dati Fare riferimento all Esercitazione IDA Guida per l utente del sistema dello spettrometro di massa o alla Guida avanzata per l utente Analyst TF Creazione di un metodo di acquisizione IDA per l incremento graduale di COV durante l acquisizione batch Invece di utilizzare la cromatografia liquida LC per analizzare i campioni utilizzare il dispositivo SelexION con l infusione per separare i compos
8. Acquire quando il dispositivo SelexION acceso 1 Assicurarsi che il modulo di controllo SelexION sia acceso quindi attivare un profilo hardware Fare riferimento a Creazione di profili hardware e progetti nella Guida per l utente del sistema 2 Collegare alla pompa del modificatore il contenitore contenente l altro modificatore 3 Compiere una delle seguenti operazioni e Seil software in modalit Acquire con campioni nella coda di acquisizione fare riferimento a Eliminazione di modificatori dalla modalit di acquisizione con campioni nella coda di acquisizione a pagina 33 e Seil software gi in modalit Manual Tuning o Acquire andare al passo 4 e Seil software non nella modalit Manual Tuning o Acquire fare clic su Acquire o su Tune and Calibrate sulla barra di navigazione 4 Fare clic sull icona Purge Modifier nella barra degli strumenti Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 30 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Ottimizzazione dei parametri DMS Figura 3 5 Finestra di dialogo Purge Modifier P Purge Modifier to e Es 096 10096 Status Durations Ready Expected 00 00 00 ce Si aprir la finestra di dialogo Purge Modifier Per la voce Status sar visualizzato Ready a indicare che il sistema pronto a iniziare la procedura Purge 5 Fare clic sul pulsante Purge Inizia il processo di eliminazione Se l eliminazione del modificatore stata avviata dalla modalit Manual Tuning il sistema
9. C Medium 225 C High 300 C Predefinito None 2 propanolo Acetonitrile Methanol Acetone Custom Off 0 Predefinito Low 1 5 o pi High 3 0 Indicare la densit del modificatore in g mL Guida Utente RUO IDV 05 0689 IT C Parametri DMS Nome del parametro Descrizione Possibili valori Modifier MW MDW Il peso molecolare in g mol di un modificatore Indicare il peso molecolare personalizzato Il software Analyst TF utilizza g mol del modificatore il valore di questo parametro in aggiunta al valore Modifier Density e alla velocit di flusso del Curtain Gas per determinare la velocit di flusso della pompa del modificatore Separation Voltage SV L ampiezza da picco a picco della forma Indicare il valore di Separation d onda della tensione di separazione Voltage da applicare e Predefinito 0 0 e Intervallo da 0 al massimo valore SV in base ai parametri DT e TEM in ciascun metodo Compensation Voltage COV Un potenziale di offset CC tra i due elettrodi Indicare il valore di del dispositivo di mobilit Per esempio se Compensation Voltage da COV misura 5 volt uno dei due elettrodi ha applicare un potenziale applicato pi elevato di 5 volt e Predefinito 0 0 rispetto all altro elettrodo e Intervallo da 100 a 100 Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 63 di 68 Parametri DMS Nome del parametro DMS Offset DMO DMS Resolution Enhanceme
10. COV e DMO come descritto in Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza un modificatore a pagina 23 10 Se necessario ottimizzare il parametro DR come descritto in Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza un modificatore a pagina 23 11 Salvare il metodo di acquisizione Controllo Parametri del Modificatore in Tempo Reale Se i dati vengono acquisiti in Manual Tuning utilizzando il metodo di acquisizione creato nell argomento precedente e l utente cambia il valore MDC da Low a High o da High a Low durante l acquisizione il software calcola immediatamente la velocit di flusso necessaria della pompa del modificatore e regola la pompa del modificatore di conseguenza In modo analogo se durante l acquisizione l utente modifica il peso molecolare o la densit molecolare del modificatore personalizzato specificato nel metodo di acquisizione il software calcola immediatamente la velocit di flusso necessaria della pompa del modificatore e regola la pompa del modificatore di conseguenza Eliminazione del modificatore Prima di utilizzare un nuovo modificatore eliminare il modificatore attualmente in uso dalla pompa del modificatore L eliminazione del modificatore richieder circa quattro minuti durante i quali lo spettrometro di massa non sar utilizzabile Un modificatore pu essere eliminato o rimosso dalla pompa del modificatore dalla modalit Manual Tuning o
11. COVRamo ForCP wif DuoSorey 0 Max 7 804 cos 7 824 0 064 4 0e4 Inte Visualizzazione dei dati IDA acquisiti con l incremento graduale del parametro COV in IDA Explorer Quando i dati vengono acquisiti con un metodo IDA i dati non saranno aperti nell IDA Viewer finch l acquisizione non terminata ma saranno mostrati nella finestra Explore durante l acquisizione Per visualizzare i dati IDA in modo semplice impostare l IDA Explorer come visualizzatore predefinito Utilizzare la scheda IDA Explorer nella finestra di dialogo Appearance Options per utilizzare l IDA Explorer per visualizzare i dati IDA Gli utenti possono anche selezionare le colonne del riquadro Mass List List View L IDA Explorer preimpostato per visualizzare i campioni IDA Per maggiori informazioni fare riferimento a Visualizzazione dei dati IDA in Esercitazione IDA 1 Aprire la cartella del progetto contenente i dati IDA acquisiti 2 Nella barra di navigazione sotto Explore fare doppio clic su Open Data File Si aprir la finestra di dialogo Select Sample Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 58 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo dei parametri DMS in IDA 3 Dall elenco Data Files selezionare il file wiff che contiene i dati IDA acquisiti da visualizzare 4 Nell elenco Samples fare clic sul campione necessario quindi fare clic su OK Figura 6 8 IDA Explorer Mass Tolerance 50000 mDa Aui Meam ng Mas Window Da 5000
12. all intervallo SV massimo consentito mentre si incrementa gradualmente COV nell intervallo COV completo Fare riferimento alla Incremento graduale dei valori di Separation Voltage e Compensation Voltage a pagina 26 Nota L intervallo COV completo va da 100 volt a 100 volt Tuttavia la maggior parte dei composti viene ottimizzata tra 20 volt e 30 volt in assenza di modificatore Alcuni composti potrebbero essere ottimizzati anche oltre i 30 volt Qualora sia presente un modificatore si consiglia di utilizzare un intervallo COV che sia compreso almeno tra 60 volt e 20 volt poich gli spostamenti COV negativi per alcuni composti possono essere molto grandi Il valore massimo di SV legato ai parametri DT e TEM d DMS Offset DMO incrementare gradualmente DMO per la combinazione SV e COV ottimizzata Fare riferimento a incrementare gradualmente DMO per la combinazione SV e COV ottimizzata a pagina 26 e DMS Resolution Enhancement DR per un singolo composto per DR utilizzare il valore Off senza aggiunta di gas acceleratore Quando necessario migliorare la separazione dei composti possono essere utilizzati altri valori di DR come Low Medium o High Per esempio quando due composti hanno COV simili e devono essere separati a livello basale provare i valori DR Low Medium o High per ottenere la separazione migliore Selezionare il valore desiderato Low Medium o High per il parametro DR e fare clic su Start per incrementare g
13. analisi di massa e l accuratezza quantitativa riducendo il rumore chimico e separando anticipatamente gli ioni di massa simile e Fornisce tempi rapidi di passaggio degli ioni e propone un funzionamento trasparente simile a quando il dispositivo SelexION non installato nel sistema che permette la trasmissione di tutti gli ioni senza discriminazione quando SV e COV sono impostati a zero e Supporta trasmissioni contemporanee di ioni di entrambe le polarit e separa ogni ione in base alla sua costante di mobilit differenziale e Riduce le interferenze negli spettri degli ioni dei prodotti Ruolo dei modificatori nella tecnologia DMS modificatori possono essere aggiunti al gas di trasporto degli ioni attraverso il dispositivo SelexION per aumentare la capacit di picco e efficienza di separazione di questo dispositivo La presenza di questi modificatori solitamente comuni solventi cromatografici ad esempio alcol isopropilico 2 propanolo acetonitrile o metanolo influenza la mobilit degli ioni in questo dispositivo Gli ioni che entrano nella cella di mobilit formano dei complessi con le molecole del modificatore che ne alterano le caratteristiche di mobilit complessi possono formarsi in condizioni di campo elettrico a bassa intensit ma si disgregano nuovamente con campi elettrici ad alta intensit in base al modello dinamico cluster decluster L effetto netto della formazione di complessi l amplificazione delle dif
14. cps Figura 6 4 TIC W riCot TOF MS Exp 1 fom Sampie 1 Sampie001 cf ICA COVRamo ForCP wif OuoSpray 0 Max 1 e8 aos 510 1 996 1 606 a E E 107 c 2 0e3 00 25 20 15 10 5 3 5 10 15 2 25 30 TIC Exp 2 Exp 3 from Sampie Sampie001 of IDA COVRamo ForCP wifi DuoSpray 78394 323 7 004 004 5 Oes 4 004 a e Fi s Ss 5 Selezionare l intervallo COV necessario in uno dei due TIC fare clic con il pulsante destro del mouse quindi fare clic su Show Spectrum Sotto TIC viene visualizzato lo spettro per l intervallo COV selezionato con l intensit sull asse y e le masse in Da sull asse x Visualizza l intensit di tutti i composti che compaiono nella cella di mobilit ionica SelexiON nell intervallo COV selezionato Nel titolo dello spettro aperto verr visualizzato l intervallo COV selezionato Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 56 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo dei parametri DMS in IDA Figura 6 5 Spettro EE TIC ot TOF MS Exp 1 tom Sample 1 Sample001 of IDA COVRaemo ForCP mit DuoSprey 0 1966 10 1 508 1 076 3 008 TOF MS Exp 1 3 9000 to 6 4000 Volts tom Sample 1 Sample001 of IDA COVRamo ForCP wiff different 829 5391 TIC Exp 2 Exp 3 tom Sample 1 Sample001 of IDA COVRamo ForCP witt DuoSeray 0 7 8e4 0004 4 004 2 004 00 6 Selezionare una massa nello spettro fare clic con il pulsante des
15. entra automaticamente in una modalit non Tuning e viene deselezionata sulla barra degli strumenti l icona Reserve Instrument for Tuning Fare riferimento alla Processo di eliminazione a pagina 31 6 Fare clic su X per chiudere la finestra di dialogo Purge Modifier Al termine dell eliminazione equilibrare il sistema per circa 30 minuti Per equilibrare il sistema aprire il metodo di acquisizione da eseguire e avviarlo Dopodich arrestare l acquisizione Attendere 30 minuti Processo di eliminazione Se l eliminazione del modificatore stata avviata in modalit Manual Tuning il sistema entra automaticamente in una modalit non Tuning e viene deselezionata sulla barra degli strumenti l icona Reserve Instrument for Tuning Figura 3 6 Finestra di dialogo Purge Modifier P Purge Modifier e e Ex 096 10096 Status Durations Ready Expected 00 00 00 La procedura di eliminazione accede alla modalit Initializing Equilibrating Nella modalit Initializing vengono creati in background un metodo di acquisizione e un file batch Durante la modalit Equilibrating il sistema si sta equilibrando Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 31 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS Figura 3 7 Finestra di dialogo Purge Modifier P Purge Modifier 0 Ex 0 100 Status Durations Initializing Equilibrating Expected 00 04 00 Abort Elapsed 00 00 00 Nella finestra di dialogo Purge Modifier lo stato
16. il completamento o l interruzione dell eliminazione del modificatore Nome del parametro Valore dopo il completamento o l interruzione dell eliminazione del modificatore DMS Temperature DT 150 GS1 GS2 CUR CAD Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 66 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Infusione T del campione nel flusso LC B a terra La giunzione di messa a terra fornisce una protezione tra lo spettrometro di massa e il sistema di introduzione del campione A AVVERTENZA Pericolo di scosse elettriche Non bypassare la giunzione di messa AA AVVERTENZA Pericolo di contaminazione da radiazioni o esposizione ad agenti tossici chimici e biologici Per evitare perdite assicurarsi che il dado del tubo di campionamento sia stretto correttamente prima di usare questa apparecchiatura Nota L infusione T infusione separata pu essere eseguita anche utilizzando un raccordo a T esterno per collegare le tre linee flussi della siringa e LC si collegano al raccordo a T che a sua volta collegato alla giunzione di messa a terra a due vie 1 Sostituire la giunzione di messa a terra a due vie con una giunzione di messa a terra a tre vie raccordo di giunzione con alesatura 0 15 mm cod art 018786 anello a T per montaggio cod art 018786 sulla sorgente di ionizzazione 2 Collegare il tubo in PEEK rosso dalla pompa a siringa fino alla giunzione di messa a terra posta sulla sorgente di ionizzazione 3 Collegare la giu
17. installato correttamente Suggerimento Per serrare le viti sull anello NanoSpray utilizzare un cacciavite Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 14 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION Figura 2 5 Cella di mobilit ionica SelexION Descrizione Vite a testa piatta Elettrodi 9 Posizionare la cella di mobilit ionica SelexION sul separatore di vuoto SelexION tenendo la cella di mobilit ionica in verticale perpendicolare al piano del separatore di vuoto e verificando che i connettori siano allineati con gli attacchi presenti sul separatore di vuoto Nota Mantenere pulite le superfici del separatore di vuoto e della cella di mobilit ionica e non graffiare il sigillo ceramico della cella di mobilit ionica Figura 2 6 Installazione della cella di mobilit ionica Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 15 di 68 Utilizzo della tecnologia SelexION Descrizione Cella di mobilit ionica Interfaccia di vuoto con l anello installato Installazione della cella di mobilit ionica Figura 2 7 Cella di mobilit ionica posizionata correttamente sinistra e non correttamente destra gt gt i Elemento Descrizione Posizione corretta verticale Posizione non corretta angolata 10 Serrare le viti in modo uniforme applicando una pressione costante Nota Non allentare i dadi sui perni vicini alle viti 11 Allineare i perni del separatore di i
18. manutenzione Alcune superfici dell interfaccia di vuoto e della sorgente di ionizzazione raggiungono temperature considerevoli durante il funzionamento Attenzione Rischio di danni al sistema Maneggiare con cura i componenti dellnterfaccia di vuoto Sono fragili e costosi Attenzione Rischio di danni al sistema Assicurarsi che le componenti dell interfaccia di vuoto siano tenute pulite e non abbiano contaminazione chimica n polvere Indossare sempre guanti senza polvere per evitare contaminazioni quando si maneggiano i componenti dell interfaccia di vuoto Seguire questa procedura per installare la cella di mobilit ionica l anello adattatore e il separatore di interfaccia SelexION Procedure preliminari Verificare che sia la cella di mobilit ionica che l interfaccia di vuoto siano pulite Per pulire le superfici usare del metanolo Se i componenti dell interfaccia NanoSpray sono installati rimuoverli e installare i componenti dell interfaccia standard Per istruzioni dettagliate fare riferimento alla Guida per l operatore della sorgente di ionizzazione NanoSpray Nota Prima di cambiare i componenti dell interfaccia necessario spegnere e spurgare lo spettrometro di massa Materiali richiesti e Guanti senza polvere consigliati in neoprene o nitrile 1 Completare le scansioni in corso o fare clic su Acquire gt Abort Sample per interromperle 2 Arrestare il flusso del campione verso lo spettrometro di ma
19. molecolare g mol Densit g cm Acetonitrile 41 05 0 7822 Methanol 32 04 0 7918 Acetone 58 08 0 7925 Il software Analyst TF utilizza la formula seguente per calcolare la velocit di flusso in uL min della pompa del modificatore 0 1636 x CUR 1 7726 x MDC x 0 04089 x MDW x 1000 Modifier Pump Flow Rate 100 MDC x MDD dove e MDW il peso del modificatore in g mol e MDC la composizione del modificatore e MDD la densit del modificatore in g mL e CUR il valore del flusso di Curtain Gas Esempio di calcolo del consumo di modificatore Come esempio in Tabella 4 3 viene visualizzato il consumo approssimativo del modificatore calcolato per tutti i modificatori predefiniti nel software Analyst TF con un flusso di Curtain Gas di 20 psi e a diverse concentrazioni di modificatore per un batch di 24 ore Tabella 4 3 Consumo approssimativo del modificatore in mL con una velocit di flusso del Curtain Gas di 20 psi per un batch di 24 ore Modificatore Concentrazione Low 1 596 mL 240re High 3 0 mL 24ore 2 propanolo 240 2 487 8 Acetonitrile 164 9 334 8 Methanol 127 1 258 1 Acetone 230 2 467 5 Calcolo del consumo adeguato del modificatore per un batch 1 Determinare la durata del batch Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 42 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Creazione e invio dei batch 2 Determinare la velocit di flusso della pompa del modificatore dalla finestra di dialogo Mass Sp
20. pulsante Abort cambia nuovamente in Purge Il sistema automaticamente accede di nuovo alla modalit Manual Tuning se l eliminazione del modificatore era stata avviata da tale modalit Vengono reimpostati i valori di alcuni parametri DMS e della sorgente Per visualizzare i valori reimpostati fare riferimento a Valori dei parametri DMS e della sorgente dopo il completamento o l interruzione dell eliminazione del modificatore a pagina 66 Informazioni sul processo Purge Nella finestra di dialogo Purge Modifier fare clic su Abort Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 32 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Ottimizzazione dei parametri DMS Il ciclo di eliminazione viene interrotto e vengono reimpostati i valori di alcuni parametri DMS e della sorgente Per visualizzare i valori reimpostati fare riferimento a Valori dei parametri DMS e della sorgente dopo il completamento o l interruzione dell eliminazione del modificatore a pagina 66 L opzione Status cambia in Aborted e il pulsante Abort cambia in Purge Se l eliminazione del modificatore era stata avviata dalla modalit Manual Tuning dopo l interruzione il sistema torna alla modalit Manual Tuning Dopo l interruzione dell eliminazione del modificatore attendere che il sistema raggiunga l equilibrio per circa 10 minuti con le condizioni della sorgente desiderate e il nuovo modificatore in uso prima dell acquisizione di nuovi campioni Eliminazione di modificatori dalla modalit di acq
21. 5 0689 IT C 9 di 68 Utilizzo della tecnologia SelexION Nota La sorgente di ionizzazione NanoSpray pu essere installata su un sistema TripleTOF dotato di tecnologia SelexION Tuttavia non possibile utilizzare il modificatore Gli utenti possono creare metodi di acquisizione che comprendono i flussi e le informazioni del modificatore ma quando verranno eseguiti la pompa del modificatore sar disattivata Il dispositivo SelexION comprende i seguenti componenti sostituibili dal cliente e Cella di mobilit ionica e Anello adattatore Sono disponibili due anelli adattatore l anello NanoSpray utilizzato con la sorgente di ionizzazione NanoSpray e l anello standard utilizzato con tutte le altre sorgenti di ionizzazione supportate e SelexlON piastra Curtain Figura 2 2 Tecnologia SelexION Elemento esso Emme o Alloggiamento dell interfaccia di vuoto Aggiornamento FSE 2 Gruppo del doppio scarico 5600 aggiornamento FSE 6600 pre installato Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 10 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION Cella di mobilit ionica Installabile dal cliente Anello adattatore Installabile dal cliente L SelexION piastra Curtain Installabile dal cliente Installazione della tecnologia SelexION TM AVVERTENZA Pericolo di superfici calde Lasciar raffreddare la sorgente di ionizzazione e l interfaccia di vuoto per almeno 30 minuti prima di iniziare qualsiasi procedura di
22. 89 IT C 5 di 68 Introduzione alla tecnologia DMS Figura 1 1 tecnologia DMS Descrizione Specie ioniche nel flusso del gas Separation Voltage SV loni positivi Allo spettrometro di massa loni negativi Compensation Voltage COV Invece di registrare la durata del passaggio di uno ione nel canale di trasporto ionico la tecnologia DMS registra il valore COV necessario per correggere la traiettoria di un determinato ione per un intervallo di ampiezze SV La COV pu essere scansionata per far passare ioni in serie secondo la loro mobilit differenziale o impostata a un valore fisso per far passare esclusivamente le specie ioniche con una precisa mobilit differenziale Alcune combinazioni dei campi SV e COV permettono allo ione target di passare attraverso la zona analitica del dispositivo SelexION senza entrare in collisione con gli elettrodi Pertanto scansionando o fissando SV e COV il dispositivo SelexION pu funzionare nelle seguenti modalit e possibile selezionare una precisa combinazione di SV e COV che produce il filtraggio continuo di particolari specie ioniche Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 6 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Introduzione alla tecnologia DMS e Fissando SV e scansionando COV si pu registrare uno spettro DMS lineare Benefici della tecnologia DMS La tecnologia SelexION introduce una dimensione di separazione supplementare nel sistema TripleTOF e Aumenta la qualit dell
23. C a pagina 67 3 Nella barra di navigazione fare clic su Tune and Calibrate fare doppio clic su Manual Tuning 4 Selezionare un tipo di scansione quindi digitare i range di massa e le altre informazioni richieste Ottimizzare i parametri del composto e della sorgente di ionizzazione Dopodich ottimizzare la velocit di flusso LC per la configurazione del metodo cromatografico Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 5 Fare clic sulla scheda DMS Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 23 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS Figura 3 1 Impostazioni predefinite del parametro DMS Source Gas Compound pus Resolution Detector DMS Temperature Reached DMS Temperature DT laici Modifier MD None Separation Voltage SV aa Compensation Voltage COV 0 0 DMS Offset DMO wE DMS Resolution Enhancement off DR Tutti i parametri DMS hanno dei valori predefiniti Per Separation Voltage SV e Compensation Voltage COV il valore predefinito zero 6 Ottimizzare i parametri DMS per ottenere una migliore separazione e una maggiore sensibilit seguenti parametri devono essere ottimizzati nell ordine specificato a DMS Temperature DT fare clic su Start per verificare questo parametro con il valore predefinito Low Per la verifica utilizzare i valori predefiniti per altri parametri DMS SV 0 COV 0 Modifier None o passare alla modalit DMS Off sel
24. D ca p ni i KS 45 P amp APP v 7 Software Analyst TF 1 7 1 Tecnologia SelexION M per sistemi TripleTOF Guida Utente AL RUO IDV 05 0689 IT C Maggio 2015 Il presente documento fornito ai clienti che hanno acquistato le apparecchiature SCIEX come guida per l uso e il funzionamento di queste ultime Il presente documento protetto da copyright e la sua riproduzione parziale o integrale severamente vietata salvo autorizzazione scritta da parte di SCIEX Il software menzionato nel presente documento viene fornito con un contratto di licenza La copia le modifiche e la distribuzione del software attraverso qualsiasi mezzo sono vietate dalla legge salvo diversa indicazione presente nel contratto di licenza Inoltre il contratto di licenza pu vietare che il software venga disassemblato sottoposto a reverse engineering o decompilato per qualsiasi fine Le garanzie sono indicate nel presente documento Alcune parti di questo documento possono far riferimento a produttori terzi e o ai loro prodotti che possono contenere parti i cui nomi siano registrati e o siano usati come marchi registrati dai rispettivi proprietari Tali riferimenti mirano unicamente a designare i prodotti di terzi forniti da SCIEX e incorporati nelle sue apparecchiature e non implicano alcun diritto e o licenza circa l utilizzo o il permesso concesso a terzi di utilizzare i nomi di tali produttori e o dei loro prodotti come marchi registrati Le g
25. Direttore dormi a MA Ens t ml al ne N 4 PP v so v ES eno Si aprir TIC per il file di dati selezionato Sull asse x mostrato COV in volt sull asse y l intensit in cps 5 Evidenziare l intervallo da visualizzare nel contour plot Quando non si effettui una selezione appare l intervallo intero 6 Fare clic con il pulsante destro del mouse in TIC quindi fare clic su Show Contour Plot Figura 5 8 Contour plot Wi ric ot TOF MS tom Sampie Samgie002 of TOFMS_RampCOV_FulRange 2 wiff DuoSprey 0 Max Ces po ffe 2004 4004 3064 Intensity cps 2004 Il contour plot per il campione selezionato viene mostrato sotto la finestra TIC Sull asse x mostrato COV in volt sull asse y m z in Da Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 50 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Analisi ed elaborazione dati 7 Per visualizzare lo spettro selezionare un area nel contour plot fare clic con il pulsante destro del mouse e fare clic su Show Spectrum Figura 5 9 Spettro Wl ncc TOF MS fom Sample 1 Samete002 cf TOFS RamcCOV F fiange 2 wit DuoSpray I 0004 4 ded s E 20 c0 COV Volt Contour Piot of TOFMIS_RameCOV_FuliRange 2 wif 21 109 Vol to 13 000 Volts cu COV Vo ED TOF MS 0 9000 te 2 0000 Volts Fom Sampie 1 Sample002 of TOFMS RampCOV Fullange 2 wiff different Max 4017 4 aps 3642372 320 329 No 23349 mo 340 300 2300 30 36 370 370
26. M 1 Attivare un profilo hardware contenente i dispositivi necessari Fare riferimento a Creazione di un profilo hardware nella Guida per l utente del sistema per lo spettrometro di massa 2 Nella barra di navigazione sotto Acquire fare doppio clic su Build Acquisition Method 3 Fare clic su Mass Spectrometer nel riquadro del metodo di acquisizione 4 Selezionare un tipo di scansione e immettere se disponibili il range di massa il tempo di acquisizione e le altre informazioni richieste per tutti i composti Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 5 Fare clic su Edit Parameters Si apre la finestra di dialogo Parameter Settings 6 Digitare i valori ottimizzati dei parametri del composto nella scheda Compound Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 7 Digitare i valori ottimizzati dei parametri della sorgente di ionizzazione e del gas nella scheda Source Gas Assicurarsi che la temperatura della sorgente TEM specificata corrisponda al valore utilizzato per l ottimizzazione dei parametri DMS Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 8 Fare clic sulla scheda DMS e procedere come segue a Selezionare i valori desiderati per i parametri DMS Temperature DT Modifier MD e DMS Resolution Enhancement DR Assicurarsi che la temperatura DMS specificata sia la stessa utilizzata per l ottimizzazione dei parametri DMS b Digitare il valore SV ottimizzato per tutti i comp
27. ON i 9 Installazione della tecnologia SelexIONTM iiiiieee eee nine ene 11 Rimozione della tecnologia SelexlON sss enne nere nine neces nen 17 Pulizia e allineamento degli elettrodi della cella di mobilit ionica ssssssseeennnnn 19 Riempimento del contenitore del modificatore iii 21 Pulizia delle superfici della tecnologia SelexION iii 21 Uso della tecnologia SelexION con il CDS nennt nnne nnn nnne nnn 21 Capitolo 3 Ottimizzazione dei parametri DMS in 22 Ottimizzazione dei parametri DMS in Manual Tuning tnnt nnns 22 Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS sernza umn modificatore 5 tein Sene aii oh eene eaa deecen da duo ceo a aat 23 Creazione di un metodo di acquisizione con un modificatore selezionato e ottimizzazione dei parametri DMS sssssssssssseseeeeeeeeeeeneeeeneeene nennen eene nennen 27 Controllo Parametri del Modificatore in Tempo Reale essent nnne nnns 30 Eliminazione del modificatore eeeeeeennnnnnnennnnennn netten tnter tnter tentant 30 Ottimizzazione dello StrUMENtO nnne nnne nre rte tnnt 34 Capitolo 4 Creazione e invio dei batch essen eene nnne 35 Ottimizzazione del parametro COV utilizzando l opzione Ramp COV in LC Mode s
28. S dal momento che si osserva un aumento del potere di separazione per una ampia quantit di composti Regolazione dello strumento Prima di installare il dispositivo SelexION sullo spettrometro di massa assicurarsi che sia stato regolato e calibrato Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 7 di 68 Introduzione alla tecnologia DMS Modalit di funzionamento DMS Off Quando si installa il dispositivo SelexION sullo spettrometro di massa in alcune situazioni gli utenti possono avere la necessit di acquisire dati di spettro senza utilizzare il dispositivo SelexION Invece di rimuovere il dispositivo SelexION dal sistema gli utenti possono utilizzare la modalit di funzionamento DMS Off per acquisire dati Il software Analyst TF fornisce una modalit di funzionamento DMS Off che consente all utente di lavorare in un ambiente simile a quello precedente all installazione del dispositivo SelexION sullo spettrometro di massa Tuttavia nella modalit DMS Off le intensit del segnale saranno notevolmente inferiori se paragonate a quelle dei dati acquisiti rimuovendo il dispositivo SelexION dallo spettrometro di massa Per lavorare nella modalit di funzionamento DMS Off selezionare la casella di controllo DMS Off disponibile nella scheda MS nella finestra Acquisition method o sulla scheda MS nella finestra Tune Method Editor Figura 1 2 Casella di controllo DMS Off in Tune Method Editor MS Advanced MS
29. TF 1 7 1 Guida Utente 38 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Figura 4 3 Ramp COV for Cycle nella scheda MS Acquesibon method M Acquisitton Method 49 Mass Spectrometer 0 143 mins Period 0 143 mins 8 TOF MS Creazione e invio dei batch Expenment 1 X DA Epenmert CmatelDA bp Creste SWATH Exp Scan type TOF MS TOF Masses Da Accumulaticn time 0 249966 secs Ma 100 Max 2000 Polarty 9 Poste Negative Edt Parameters Penod Duration 0 143 mns Cycles 31 z Delay Time 0 secs Cycle time 02750 secs Pesod 1 DMS Of OMS V Ramp COV for Cycle Ramp COV in LC Mode Rae Stop 10000 20 000 10 Se necessario fornire i valori dei parametri delle periferiche incluse nel profilo hardware Nota Quando per l acquisizione viene utilizzato un metodo di acquisizione con l opzione Ramp COV for Cycle viene eseguito un solo ciclo di incremento graduale di COV Se sono necessari altri cicli di incremento graduale di COV utilizzare l opzione Ramp COV in LC Mode 11 Salvare il metodo di acquisizione Si pu utilizzare per acquisire dati e incrementare gradualmente COV durante l acquisizione batch dei campioni e l acquisizione di dati Guida Utente RUO IDV 05 0689 IT C Software Analyst TF 1 7 1 39 di 68 Creazione e invio dei batch Creazione di un metodo di acquisizione MRM con parametri DMS Il software Analyst TF supporta l utilizzo di parametri DMS in un flusso di lavoro MRM per ottenere la migliore separazion
30. a del modificatore Fare riferimento a Eliminazione del modificatore a pagina 30 Prerequisiti e Nel contenitore del modificatore presente un quantitativo di modificatore sufficiente per l acquisizione Per maggiori informazioni sul calcolo del consumo del modificatore fare riferimento a Esempio di calcolo del consumo di modificatore e Per riempire il contenitore del modificatore fare riferimento a Riempimento del contenitore del modificatore a pagina 21 1 Eseguire l infusione T del campione nel flusso LC Infusione T del campione nel flusso LC a pagina 67 2 Nella barra di navigazione sotto Tune and Calibrate fare doppio clic su Manual Tuning 3 Selezionare un tipo di scansione quindi digitare il range di massa e le altre informazioni richieste Ottimizzare i parametri del composto e della sorgente Ottimizzare quindi la velocit di flusso LC secondo la configurazione del metodo cromatografico Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale Suggerimento Come punto di partenza possibile utilizzare un metodo di acquisizione esistente che sia stato ottimizzato per i composti da analizzare Il metodo esistente non pu utilizzare alcun modificatore oppure pu utilizzarne uno diverso da quello attualmente in uso Il metodo utilizzato come punto di partenza fornisce dei parametri di sorgente e composto ottimizzati e una velocit di flusso LC parametri DMS devono essere modificati per il modificatore richies
31. ametri della sorgente di ionizzazione e del gas nella scheda Source Gas Assicurarsi che la temperatura della sorgente TEM specificata corrisponda a quella utilizzata per l ottimizzazione dei parametri DMS Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 7 Digitare i valori ottimizzati dei parametri del composto nella scheda Compound Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 8 Selezionare la scheda DMS e procedere come segue a Selezionare i valori desiderati per i parametri DMS Temperature DT Modifier MD e DMS Resolution Enhancement DR Assicurarsi che la temperatura DMS specificata sia la stessa utilizzata per l ottimizzazione dei parametri DMS b Digitare il valore SV ottimizzato per tutti i composti nel campo Separation Voltage SV c Digitare il valore DMO ottimizzato per tutti i composti nel campo DMS Offset DMO Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 54 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo dei parametri DMS in IDA Figura 6 3 Finestra di dialogo Parameter Settings 6 Parameter Settings Source Gas Compound Dms DMS Temperature DT ow y Modifier MD None Separation Voltage SV 3500 Compensation Voltage COV o0 DMS Offset DMO 30 DMS Resolution Enhancement Low DR Apply the following parameters to all other experiments Source Gas Compound DMS Cancel 9 Fare clic su OK Viene visualizzato un messaggio ch
32. aranzie di SCIEX sono limitate alle garanzie espresse fornite al momento della vendita o della licenza dei propri prodotti e costituiscono le uniche ed esclusive dichiarazioni garanzie e obblighi di SCIEX SCIEX non concede altre garanzie di nessun tipo n espresse n implicite comprese a titolo esemplificativo garanzie di commerciabilit o di idoneit per uno scopo particolare derivanti da leggi o altri atti normativi o dovute a pratiche ed usi commerciali tutte espressamente escluse n si assume alcuna responsabilit o passivit potenziale compresi danni indiretti o conseguenti per qualsiasi utilizzo da parte dell acquirente o per eventuali circostanze avverse conseguenti Solo per scopi di ricerca Non usare nelle procedure diagnostiche AB SCIEXTM utilizzato su licenza 2015 AB SCIEX AB Sciex Pte Ltd BIk 33 04 06 Marsiling Ind Estate Road 3 Woodlands Central Indus Estate SINGAPORE 739256 Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 2 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Contenuto Capitolo 1 Introduzione alla tecnologia DMS iii 5 Ea tecnologia DM Scrl 5 Benefici della tecnologia DMS 4 notes etaient aee dde da e ecu ed dee 7 Ruolo dei modificatori nella tecnologia DMS sess nnne nnne nnne nnn nnns 7 Regolazione dello strumento ttt e n ni 7 Modalit di funzionamento DMS Off i 8 Capitolo 2 Utilizzo della tecnologia Selexl
33. are Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 52 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo dei parametri DMS in IDA Utilizzare questa procedura dopo aver ottimizzato tutti i parametri DMS ad eccezione di COV Creazione di un metodo di acquisizione IDA per lincremento graduale di COV durante la modalit di acquisizione batch 1 Attivare un profilo hardware Fare riferimento alla Guida per l utente del sistema dello spettrometro di massa 2 Creare un metodo IDA con una scansione TOF MS come scansione di indagine Fare riferimento a Esercitazione IDA 3 Nell Acquisition Method Editor nel metodo IDA aperto fare clic su TOF MS nel riquadro Acquisition Method Figura 6 1 Metodo TOF MS Acquabon method Ms Advanced MS Swtch Osteria Include Exclude IDA Advanced 5 B Acquisition Method Boerert 1 VIDA Expenment Create IDA Exp Create SWATH Exo 49 Mass Spectrometer 5 001 mins TOF M 2 Sean t F Masses Da Period 5 001 mins scan ape TOF MS z TOF MS Accumuaticn t 0 249966 c Me 100 Mex 2000 Product lon IDA Acoumation tme 3 secs olarty 9 Postrve lega Edt Parameter Penos Juratio X mn ydes Gi ey Tme secs je tme 195 becs enod 1 DMS ON DIS Ramp COV for Cycle Ramo COV in LC Mode Sut Stop Step 4 Selezionare la casella di controllo Ramp COV for Cyclenella scheda MS e fornire i seguenti valori COV nell intervallo COV consentito compreso tra 100 volt e 100 volt Tabella 6 1 Valori COV Campo Des
34. aselle di controllo Source Gas Compound e DMS per copiare gli stessi valori di questi parametri in tutti gli esperimenti 10 Fare clic su OK 11 Selezionare l esperimento TOF MS 12 Fare clic su Edit Parameters 13 Fare clic sulla scheda DMS e impostare i seguenti valori e Peri parametri Separation Voltage SV e Compensation Voltage COV digitare 0 e Peril parametro DMS Resolution Enhancement DR selezionare Off 14 Per cambiare il parametro COV per i singoli esperimenti Product lon fare clic sull esperimento e digitare il valore Compensation Voltage COV desiderato 15 Fare clic su OK Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 40 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Creazione e invio dei batch 16 Se necessario fornire i valori dei parametri delle periferiche incluse nel profilo hardware 17 Salvare il metodo di acquisizione Separazione dei composti isobarici utilizzando la tecnologia SelexION composti isobarici hanno la stessa massa nominale e per questo non possono essere distinti dallo spettrometro A TM RISO A 2 A i 3 sa di massa La tecnologia SelexION elimina automaticamente l interconnessione e separa i composti isobarici Quando si crea un metodo di acquisizione MRM esperimento TOF MS con esperimenti Product lon per pi composti isobarici si consiglia di alternare se possibile le masse isobariche con le masse degli ioni dei prodotti di altri composti e di evitare masse isobariche ioni dei prodotti in scans
35. cambia quindi da Initializing Equilibrating a Purging a indicare che si sta eliminando il modificatore dalla pompa del modificatore Durante l eliminazione del modificatore lo spettrometro di massa effettua una scansione e raccoglie i dati nella cartella API Instrument Data Al termine dell eliminazione il metodo di acquisizione eliminazione il file batch e i dati vengono automaticamente rimossi Durante l eliminazione il pulsante Purge cambia in Abort Vengono visualizzati il tempo stimato per l eliminazione quattro minuti e il tempo trascorso nel ciclo Purge Il software Analyst TF imposta automaticamente i parametri DMS e della sorgente a nuovi valori per quattro minuti tempo stimato per l eliminazione Per visualizzare questi valori fare riferimento a Valori dei parametri DMS e della sorgente utilizzati durante l eliminazione del modificatore a pagina 65 Suggerimento Gli utenti possono visualizzare l avanzamento della procedura di eliminazione nella finestra di dialogo Mass Spec Detailed Status Per visualizzare questa finestra di dialogo fare doppio clic sull icona Mass Spec nella barra di stato Figura 3 8 Finestra di dialogo Purge Modifier p Purge Modifier ko c ea O mM 1007 Status Durations Complete Expected 00 04 00 L eliminazione del modificatore dalla pompa del modificatore richiede circa quattro minuti Al termine della procedura Purge nella finestra di dialogo Purge Modifier lo stato cambia in Complete Il
36. crizione Start Inizio digitare la tensione alla quale iniziare l incremento graduale Fine digitare la tensione alla quale interrompere l incremento graduale Step Operazione impostare l ampiezza degli intervalli di ogni ciclo Guida Utente Software Analyst amp TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 53 di 68 Utilizzo dei parametri DMS in IDA Nota La maggior parte dei composti viene ottimizzata tra 20 volt e 30 volt in assenza di modificatore Alcuni composti potrebbero essere ottimizzati anche oltre i 30 volt Qualora sia presente un modificatore si consiglia di utilizzare un intervallo COV che sia compreso almeno tra 60 volt e 20 volt poich gli spostamenti COV negativi per alcuni composti possono essere notevoli Figura 6 2 Parametri MS Acquison method MS Advanced MS Sutch Catena include Exclude IDA Advanced M Acquisition Method Epenmert 1 hd T IDA Epomert Create IDAE Creste SWATH Exp Mass Spectrometer 3673 mins PETE TOF Masses Dai Period 3573 mins Scan type TOF MS TOF MS Accumulation ti 0245966 secs Me 1 Max 20 Product lon IDA ie Polarty 9 Postve ege Edt Parameton Porod Duae 3673 mns Ode 501 z Delay Tiene 0 sec Cycle time 0 4398 becs Period 1 B OMS OF DMS V Rame COV for Cyce Ramp COV in LC Mode Sut too Step 120 000 30 000 0 100 5 Fare clic su Edit Parameters Si apre la finestra di dialogo Parameter Settings 6 Digitare i valori ottimizzati dei par
37. del mouse quindi fare clic su Extract lons Use Range Figura 5 3 XIC Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 46 di 68 Analisi ed elaborazione dati Viene aperto XIC per la massa selezionata Il COV a incremento graduale visualizzato sull asse x l intensit sull asse y Riesame di un file di dati acquisito con l opzione Ramp COV in LC Mode 1 Aprire la cartella del progetto contenente i dati acquisiti 2 Nella barra di navigazione sotto Explore fare doppio clic su Open Data File Si aprir la finestra di dialogo Select Sample Seleziona campione 3 Dall elenco Data Files selezionare il file wiff che contiene i dati acquisiti 4 Se necessario nell elenco Samples fare clic sul campione necessario quindi fare clic su OK Figura 5 4 TIC Imensity cps 2 i g I i MM S MA TL WP d m oot u 2 8 10 4 12 14 1e 18 20 Time mia Viene aperto TIC per il file di dati selezionato L asse x visualizza il tempo in minuti l asse y visualizza l intensit in cps 5 Selezionare un area in TIC fare clic con il pulsante destro del mouse quindi fare clicsu Show Spectrum Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 47 di 68 Analisi ed elaborazione dati Figura 5 5 Spettro Wl ric tom Sampie 1 Sample001 of TOFMSMS RamoCOV LC 1 watt DuoSsray Max 4 det ops 4 det e Intensity cps T
38. della sorgente sia installato completamente e che non ci sia dello spazio vuoto tra l anello adattatore e l interfaccia di vuoto Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 12 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION Figura 2 3 Anello adattatore SelexION e doppio scarico Descrizione Anello adattatore standard Alloggiamenti per i perni guida della sorgente di ionizzazione Vite a testa piatta Connettore dell interfaccia Piastra caricata a molla Doppio scarico Anello adattatore NanoSpray Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 13 di 68 Utilizzo della tecnologia SelexION Figura 2 4 Anello installato correttamente sinistra e non correttamente destra r Installato correttamente senza spazio vuoto oao Installato non correttamente spazio vuoto in evidenza 8 Serrare le viti in modo uniforme alternando le due viti applicando una pressione costante Suggerimento Dopo aver serrato completamente le viti tirare l anello di prolunga per verificare che sia fissato correttamente Se compare dello spazio vuoto serrare l anello ulteriormente Suggerimento Per verificare che l anello sia installato correttamente installare la sorgente di ionizzazione quindi aprire il software Analyst TF In modalit Manual Tune impostare GS1 e GS2 su 80 Se nella parte anteriore dello strumento si avverte un forte sibilo significa che c dello spazio vuoto L anello non
39. e e la migliore analisi quantitativa dei composti di interesse in un campione 1 Attivare un profilo hardware Fare riferimento a Creazione di un profilo hardware nella Guida per l utente del sistema per lo spettrometro di massa 2 Nella barra di navigazione sotto Acquire fare doppio clic su Build Acquisition Method Si aprir la finestra Acquisition Method Fare clic su Mass Spectrometer nel riquadro del metodo di acquisizione Creare un esperimento con il tipo di scansione TOF MS Creare il numero desiderato di esperimenti con il tipo di scansione Product lon Selezionare il Period quindi fare clic su Edit Parameters Mo uw a Digitare i valori ottimizzati dei parametri del composto nella scheda Compound Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 8 Immettere i valori ottimizzati dei parametri della sorgente di ionizzazione e del gas nella scheda Source Gas Assicurarsi che la temperatura della sorgente TEM specificata corrisponda al valore utilizzato per l ottimizzazione dei parametri DMS Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 9 Fare clic sulla scheda DMS e digitare i seguenti valori a Selezionare i valori necessari per i parametri DMS Temperature DT Modifier MD Separation Voltage SV Compensation Voltage COV e DMS Resolution Enhancement DR Assicurarsi che la temperatura DMS specificata sia la stessa utilizzata per l ottimizzazione dei parametri DMS b Selezionare le c
40. e indica che le modifiche ai valori dei parametri DMS per un esperimento IDA saranno automaticamente applicate a tutti gli altri esperimenti IDA 10 Se necessario fornire i valori dei parametri delle periferiche incluse nel profilo hardware 11 Salvare il metodo di acquisizione Pu essere utilizzato per incrementare gradualmente COV come parametro dipendente dal ciclo durante l acquisizione batch e l acquisizione dei dati Visualizzazione dei dati IDA acquisiti con l incremento graduale di COV nella finestra Explore Si consiglia di utilizzare il software PeakView per la visualizzazione dei file di dati IDA Nel software Analyst TF il file di dati IDA con il parametro COV a incremento graduale viene aperto per impostazione predefinita nella finestra Explore 1 Aprire la cartella del progetto contenente i dati IDA acquisiti 2 Nella barra di navigazione sotto Explore fare doppio clic su Open Data File Si aprir la finestra di dialogo Select Sample 3 Dall elenco Data Files selezionare il file wiff che contiene i dati IDA acquisiti da visualizzare Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 55 di 68 Utilizzo dei parametri DMS in IDA 4 Nell elenco Samples fare clic sul campione necessario quindi fare clic su OK Il file di dati viene aperto nella finestra Explore Vengono visualizzati i TIC per gli esperimenti di indagine e dipendenti L asse x visualizza COV in volt e l asse y visualizza l intensit in
41. e solamente il grafico attivo fare clic su Show only active graph e Per tornare alla visualizzazione a pi grafici fare clic su Show all the graphs Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 59 di 68 Utilizzo dei parametri DMS in IDA e Per visualizzare tutti i grafici in Explorer fare clic su Export all the graphs to Explorer Figura 6 9 Pulsanti nell Explorer IDA WLL ix zi DE Mass Wow Da 5000 i ono i Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 60 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Risoluzione dei problemi 7 Problema Viene visualizzato un messaggio di errore che segnala il rilevamento di una scarica nella cella di mobilit ionica SelexION durante il bilanciamento o l acquisizione del campione Quando il modulo di controllo SelexION viene acceso o spento l icona dello spettrometro di massa nel software Analyst TF diventa rossa e rimane tale Guida Utente RUO IDV 05 0689 IT C Azioni da intraprendere Abbassare SV di 100 volt quindi ottimizzare nuovamente i parametri DMS Quando viene rilevata una scarica nella cella di mobilit ionica SelexION durante l acquisizione del campione il software interrompe l acquisizione del campione e registra l errore nel file di registro eventi Per vedere un messaggio di errore fare doppio clic sul campione interrotto nella coda Se viene rilevata una scarica nella cella di mobilit ionica SelexION per evitare di ripetere la scarica quando si util
42. e superfici dell interfaccia di vuoto e della sorgente di ionizzazione raggiungono temperature considerevoli durante il funzionamento Attenzione Rischio di danni al sistema Assicurarsi che le componenti dell interfaccia di vuoto siano tenute pulite e non abbiano contaminazione chimica n polvere Indossare sempre guanti senza polvere per evitare contaminazioni quando si maneggiano i componenti dell interfaccia di vuoto 1 Rimuovere la cella di mobilit ionica Eseguire i passi da 1 a 8 in Rimozione della tecnologia SelexION a pagina 17 2 Utilizzando un cacciavite a taglio piccolo allentare le viti di regolazione finch gli elettrodi non si muovano liberamente nella cella di mobilit ionica quindi rimuovere gli elettrodi dalla cella di mobilit ionica Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 19 di 68 Utilizzo della tecnologia SelexION Figura 2 8 Cella di mobilit ionica SelexION Fiemento Deine emmme 3 qme 0 LLL E Vite di regolazione Nota Se le viti di regolazione vengono completamente rimosse dalla cella di mobilit ionica assicurarsi che le rondelle curve siano riposizionate nel verso originale 3 Utilizzando la carta vetrata numero 600 strofinare leggermente la superficie piatta di ciascun elettrodo quindi lavare gli elettrodi con una soluzione metanolo acqua 1 1 4 Attendere che gli elettrodi si asciughino quindi inserirli nella cella di mobilit ionica 5 Spostare i
43. ec Detailed Status facendo clic sull icona Mass Spec nella barra di stato nell angolo in basso a destra della finestra del software Analyst TF mentre si esegue il metodo dal software Analyst TF Nota Si consiglia l utilizzo di 2 L di modificatore da quando si eseguono batch lunghi a valori CUR elevati e alta concentrazione di modificatore 3 Moltiplicare la velocit di flusso uL min della pompa del modificatore per la durata del batch minuti per ottenere il volume approssimativo del modificatore necessario per un batch Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 43 di 68 Analisi ed elaborazione dati 5 Questa sezione descrive come eseguire le seguenti operazioni e Visualizzare i parametri DMS in File Information mentre si visualizzano i file di dati e Riportare dati e Riesaminare un file di dati acquisito con il parametro COV incrementato gradualmente e Visualizzare un contour plot per i dati acquisiti con il parametro COV incrementato gradualmente Analisi dei dati quantitativi Visualizzazione dei parametri DMS utilizzati per lacquisizione in File Information durante la visualizzazione dei file di dati Le condizioni sperimentali usate per raccogliere i dati sono conservate nei file di dati assieme ai risultati Nel riquadro File Information del file di dati si possono vedere i parametri DMS utilizzati per acquisire campioni 1 Nella barra di navigazione sotto Explore fare doppio clic su Open Data Fi
44. el campione verso lo spettrometro di massa 3 Disattivare il profilo hardware attivo Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 17 di 68 Utilizzo della tecnologia SelexION Nota La mancata disattivazione del profilo hardware attivo prima di accendere o spegnere il modulo di controllo SelexiON per aggiungere o rimuovere temporaneamente la tecnologia SelexION dal sistema pu provocare uno stato di instabilit dello spettrometro di massa e la conseguente perdita di controllo nel software Analyst TF Qualora il profilo hardware non venga disattivato e lo spettrometro di massa diventi in questo modo instabile il controllo pu essere recuperato rimuovendo e riposizionando la sorgente di ionizzazione o spegnendo e riaccendendo lo spettrometro di massa e il modulo di controllo e riattivando il profilo hardware 4 Spegnere la tecnologia SelexION L interruttore situato sulla parte posteriore del modulo di controllo SelexION 5 Rimuovere l anello adattatore allentando le viti quindi estraendo l anello adattatore dall interfaccia di vuoto 6 Rimuovere la cella di mobilit ionica SelexION allentando le viti quindi estraendo la cella di mobilit ionica dal separatore di vuoto Fare riferimento alla Figura 2 5 a pagina 15 7 Installare la piastra Curtain standard Nota Non necessario rimuovere il separatore di vuoto SelexION e il gruppo di scarico duplice lonDriveLa sorgente di ionizzazione funziona con
45. el vassoio laterale quindi ricollegare la linea del liquido Pulizia delle superfici della tecnologia SelexION Pulire le superfici esterne della tecnologia SelexION dopo un eventuale fuoriuscita di liquido o quando divengono sporche e Strofinare le superfici esterne con acqua calda sapone e un panno morbido Uso della tecnologia SelexiON con il CDS La tecnologia SelexION pu essere usata con il sistema opzionale di erogazione del calibrante CDS Per usare la tecnologia SelexION con il CDS 1 Accertarsi che il CDS sia installato sopra il vassoio del modificatore 2 Collegare la sorgente di ionizzazione e il CDS come descritto nell Appendice Configurazione a singola sonda nella Guida per l operatore del sistema di erogazione del calibrante 3 Usare i kit della soluzione di calibrazione ESI Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 21 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS 3 Per ottenere il segnale migliore e la separazione dei composti di interesse necessario ottimizzare i parametri DMS Per maggiori informazioni sui parametri DMS fare riferimento a Descrizione dei parametri DMS a pagina 62 Ottimizzare i parametri DMS con o senza modificatore nella modalit Manual Tuning parametri DMS possono essere ottimizzati nella modalit Tune and Calibrate in uno dei seguenti modi e Iniziare da un metodo di acquisizione esistente che sia stato creato per i composti da analizzare e che con
46. ema dello spettrometro di massa Ottimizzazione del parametro COV utilizzando l opzione Ramp COV in LC Mode Con l opzione Ramp COV in LC Mode possibile creare un metodo di acquisizione a periodo singolo e con pi esperimenti dove ogni esperimento usa un valore COV diverso Questo metodo di acquisizione pu essere eseguito con un gradiente LC per determinare il valore COV ottimale per gli analiti che eluiscono durante un esecuzione LC dati acquisiti utilizzando questo metodo genereranno una mappa COV su una scala temporale LC Ramp COV in LC Mode utilizzabile per i tipi di scansione TOF MS o Product lon Utilizzare questa procedura dopo aver ottimizzato i valori o i valori predefiniti accettabili per tutti i parametri DMS ad eccezione di COV 1 Attivare un profilo hardware contenente i dispositivi necessari Fare riferimento a Creazione di un profilo hardware nella Guida per l utente del sistema per lo spettrometro di massa 2 Nella barra di navigazione sotto Acquire fare doppio clic su Build Acquisition Method Guida Utente Software Analyst amp TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 35 di 68 Creazione e invio dei batch 3 Selezionare il tipo di scansione TOF MS o Product lon immettere l intervallo di massa il tempo di acquisizione e le altre informazioni richieste 4 Fare clic su Edit Parameters Si apre la finestra di dialogo Parameter Settings 5 Digitare i valori ottimizzati dei parametri del composto nella scheda Comp
47. ervallo richiesta quindi fare clic su OK La casella di controllo Ramp Parameter selezionata Fare clic su Start dati sono mostrati nei riquadri sotto Tune Method Editor Annotare l intensit massima del segnale Il valore COV al quale viene raggiunta questa sensibilit massima deve essere zero Modificare il valore SV in un numero tra 0 e l intervallo SV massimo consentito per esempio 2000 Utilizzare SV con incrementi di 500 o pi poich l intervallo SV ammesso ampio Utilizzare lo stesso intervallo COV per l incremento graduale e fare clic su Start per effettuare una nuova misurazione del segnale dati sono mostrati nei riquadri sotto Tune Method Editor Annotare l intensit massima del segnale e il valore COV al quale viene raggiunto il segnale massimo 10 Ripetere la procedura di incremento graduale di SV e COV quindi annotare il valore SV che restituisce la migliore intensit del segnale Dopo che l intensit del segnale inizia a diminuire interrompere il processo Regolare ulteriormente il valore SV ripetendo la suddetta procedura con intervalli SV inferiori nell intervallo da 100 volt a 200 volt utilizzato sopra e incrementando gradualmente COV Successivamente all identificazione della coppia SV e COV ottimale impostare questi valori per i parametri SV e COV nel metodo incrementare gradualmente DMO per la combinazione SV e COV ottimizzata Un Pe sso m3 Fare clic su Edit Ramp Si apre la finest
48. ezionando la casella di controllo DMS Off nella scheda MS Figura 3 2 Tune Method Editor con impostazioni predefinite del parametro DMS ScurcelGas Compound OUS Resotee Detector MS Adwanced MS DMS Temperature Reached Scan type Product TO Masses Da DUS Temperature DT s m Me V Max 2000 Product Of 3 Da Modifier VO Nose z 9 Hop Resciubon Separaton Votage SV Accumuietion time 0100091 becsi High Sensibvty Compensation Votape COV 50 _ Dispisy Mass i E Posty J Certer AN 9 Fostw RENE 375 CT wm os Gi DUS Resoluton Enhancement ogg DR Oraon 5000 Fra Cycles 2968 Delay Time 0 becs dati sono mostrati nei riquadri sotto Tune Method Editor Se non si reputa soddisfacente il segnale ottenuto per il picco di interesse modificare il valore di DT in Medium o High ed effettuare una nuova misurazione del segnale fino a ottenere il segnale migliore Nota Per ogni modifica del valore DT attendere che il sistema raggiunga l equilibrio per almeno 30 minuti prima di ottimizzare i parametri DMS b Modifier MD assicurarsi che il valore di questo parametro sia None Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 24 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Ottimizzazione dei parametri DMS c Separation Voltage SV e Compensation Voltage COV SV e COV vengono verificati insieme ripetutamente al fine di trovare la combinazione SV e COV che restituisca miglior segnale e separazione Aumentare SV da 0
49. ferenze tra le mobilit nel campo elettrico ad alta o bassa densit producendo efficienza di separazione superiore e un aumentata capacit di picco Inoltre dal momento che la formazione di complessi dipende dall interazione specifica tra lo ione di un analita e un modificatore selezionato dall utente l utilizzo dei modificatori fornisce una dimensione ulteriore di separazione rispetto agli approcci tradizionali della cromatografia e della spettrometria di massa Ulteriori informazioni sugli effetti dei modificatori sono disponibili nel seguente articolo B B Schneider T R Covey S L Coy E V Krylov and E G Nazarov Anal Chem 2010 82 1867 1880 Dal momento che l uso del modificatore coinvolge la chimica di ionizzazione in fase gassosa possono essere previsti alcuni comportamenti generali Nella modalit ione positivo se il modificatore ha una maggiore affinit protonica rispetto allo ione dell analita la carica pu essere rimossa dall analita producendo un segnale pi basso ma non necessariamente un rapporto segnale rumore pi basso In alternativa se il modificatore ha una acidit di fase gassosa maggiore rispetto all analita la corrente dello ione negativo verr ridotta La conoscenza delle caratteristiche dell analita e del modificatore pu favorire la scelta del modificatore adeguato Utilizzare il 2 propanolo come modificatore un buon punto di inizio per studiare gli effetti dei modificatori su una specifica separazione DM
50. il separatore di vuoto e utilizza il foro di scarico del gruppo di scarico duplice pi prossimo all alloggiamento dell interfaccia Turbo V SelexION 8 Assicurarsi che i due fermi sulla sorgente di ionizzazione puntino verso l alto in posizione aperta ore 12 9 Posizionare la sorgente di ionizzazione sull anello adattatore SelexION Assicurarsi che i perni guida sulla sorgente di ionizzazione siano allineati con gli alloggiamenti nell anello adattatore spingere la sorgente di ionizzazione verso l interfaccia fino ad inserirla completamente quindi ruotare i fermi della sorgente verso il basso nella posizione di blocco ore 6 30 per bloccare la sorgente di ionizzazione in posizione Fare riferimento alla Figura 2 3 a pagina 13 Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 18 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION Pulizia e allineamento degli elettrodi della cella di mobilit ionica Pulire e allineare gli elettrodi della cella di mobilit di ionizzazione quando si osserva contaminazione sulle superfici o quando si verificano ripetutamente errori di scariche ad alta tensione Materiali richiesti Guanto senza polvere Cacciavite a taglio piccolo Carta vetrata numero 600 soluzione 1 1 di metanolo acqua Distanziale AVVERTENZA Pericolo di superfici calde Lasciar raffreddare la sorgente di ionizzazione e l interfaccia di vuoto per almeno 30 minuti prima di iniziare qualsiasi procedura di manutenzione Alcun
51. ime min UN LTOFM Exp t 8 9089 19 9 1373 min bom Sample 1 SamoieQ01 of H TOFLSMS_RampCOV_LC 1 wiff difiere 09 2812 e a E Sotto TIC viene visualizzato lo spettro per l intervallo di tempo selezionato con l intensit sull asse y e le masse in Da sull asse x Lo spettro visualizza l intensit di tutti i composti che compaiono nella cella di mobilit ionica SelexION nell intervallo di tempo selezionato Nel titolo dello spettro aperto visualizzato l intervallo di tempo selezionato Eseguire lo zoom sul range di massa richiesto nello spettro Nello spettro sono visualizzati i picchi per tutti gli analiti che eluiscono durante l intervallo di tempo selezionato Figura 5 6 Picchi visualizzati nello spettro Wl nC tom Sampie 1 Sampled01 ot P TOFMSMS_RampCOV_LC 1 watt QuoSpray Max 4 Set cos 4996 ss Intensity cps Time min WB TOF MS Exp 1 83659 10 9 1373 min from Sample 1 Samgie001 of TOFMSMS RamoCOV LC ef differe InMensity cps Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 48 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Analisi ed elaborazione dati 6 Prendere nota del colore del picco pi alto fare clic con il pulsante destro del mouse sulla legenda rettangolo piccolo nell angolo superiore sinistro dello spettro quindi prendere nota del numero dell esperimento per il colore relativo al picco pi alto Suggerimento Aumentare la soglia freccia blu piccola sull asse y per mostrare pi
52. ioni Product lon consecutive Figura 4 4 mostra un esempio di come creare un esperimento contenente due composti isobarici e due composti non isobarici in un flusso di lavoro MRM 1 Immettere la massa degli ioni prodotto di un composto isobarico 2 Immettere la massa degli ioni prodotto di un composto non isobarico 3 Immettere la massa del secondo composto isobarico 4 Immettere la massa del secondo composto non isobarico Figura 4 4 Disposizione non consecutiva di composti isobarici in un metodo MRM HR Epement bd DA Epermert Ceste DAGE Create SWATH bp Scan type TOF M TOF Masses Dai In un metodo di acquisizione MRM il software prende le precauzioni per evitare l interconnessione a spese di una durata del ciclo leggermente superiore I campo del tempo di assestamento viene compilato per evitare l interconnessione provocando una durata del ciclo leggermente superiore Calcolo del consumo di modificatore La velocit di flusso della pompa del modificatore per i modificatori predefiniti nel software Analyst TF viene calcolata dal software utilizzando la densit del modificatore e il suo peso molecolare La densit e il peso molecolare dei modificatori predefiniti nel software Analyst TF sono elencati in Tabella 4 2 Guida Utente Software Analyst amp TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 41 di 68 Creazione e invio dei batch Tabella 4 2 Densit e peso molecolare dei modificatori predefiniti Modificatore Peso
53. izza lo stesso metodo diminuire i valori Separation Voltage SV o DMS Temperature DT nel metodo di acquisizione parametri DMS dovranno essere nuovamente ottimizzati per i nuovi valori SV o DT Se si verificano delle scariche con combinazioni SV e DT che funzionavano in passato pulire e allineare gli elettrodi della cella di mobilit ionica SelexION Fare riferimento alla Pulizia e allineamento degli elettrodi della cella di mobilit ionica a pagina 19 Una volta cancellato l errore lo strumento va in modalit Standby Prima che il modulo di controllo SelexION venga acceso o spento per aggiungere o rimuovere temporaneamente dal sistema la tecnologia SelexION disabilitare il profilo hardware attivo all interno del software Una procedura differente da quella appena descritta pu provocare uno stato di instabilit dello spettrometro di massa e la conseguente perdita di controllo nel software Qualora il profilo hardware non fosse disattivato e lo spettrometro di massa divenisse in questo modo instabile il controllo pu essere recuperato rimuovendo e riposizionando la sorgente di ionizzazione o spegnendo e riaccendendo lo spettrometro di massa e il modulo di controllo SelexION e riattivando il profilo hardware Software Analyst TF 1 7 1 61 di 68 Parametri DMS Descrizione dei parametri DMS Nome del parametro DMS Temperature DT Modifier MD Modifier Composition MDC Modifier Density g mL MDD
54. l distanziale nello spazio davanti gli elettrodi quindi utilizzare il cacciavite a taglio piccolo allineare gli elettrodi nella cella di mobilit ionica in modo che il distanziale risulti centrato nella cella di mobilit ionica Assicurarsi che il distanziale sia alloggiato tra gli elettrodi quindi regolare le viti su ciascun lato della cella di mobilit ionica per centrare gli elettrodi 6 Posizionare la cella di mobilit ionica SelexION sul separatore di vuoto SelexION poi serrare le viti Fare riferimento alla Installazione della tecnologia SelexIONTM a pagina 11 Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 20 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION Riempimento del contenitore del modificatore AVVERTENZA Pericolo di esposizione ad agenti chimici tossici prestare attenzione durante il riempimento dei contenitori del modificatore Fare riferimento alle schede tecniche di sicurezza delle sostanze chimiche e adottare le precauzioni appropriate Non riempire il contenitore del modificatore quando si trova nel vassoio laterale Scollegare la linea del liquido dal contenitore riempire il contenitore in un luogo sicuro e reinstallare il contenitore e la linea del liquido nel vassoio laterale 1 Scollegare la linea del liquidi dal contenitore del modificatore nel vassoio laterale 2 Riempire il contenitore del modificatore in un luogo sicuro con la dovuta cautela 3 Reinstallare il contenitore del modificatore n
55. la sua funzione di generazione report basata sul software Reporter pu essere utilizzata per creare report Analisi dei dati qualitativi Riesame di un file di dati acquisito con l opzione Ramp COV for Cycle 1 2 Aprire la cartella del progetto contenente i dati acquisiti Nella barra di navigazione sotto Explore fare doppio clic su Open Data File Si aprir la finestra di dialogo Select Sample Seleziona campione Dall elenco Data Files selezionare il file wiff che contiene i dati acquisiti Se necessario fare clic su un campione nell elenco Samples quindi fare clic su OK Figura 5 1 TIC T m i L LA tnt Y Viene aperto TIC per il file di dati selezionato L asse x visualizza COV in volt e l asse y visualizza l intensit in cps 5 Selezionare un intervallo COV in TIC fare clic con il pulsante destro del mouse quindi selezionare Show Spectrum Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 45 di 68 Analisi ed elaborazione dati Figura 5 2 Spettro Latte sat Sotto TIC viene visualizzato lo spettro per l intervallo COV selezionato con l intensit sull asse y e le masse in Da dalton sull asse x Visualizza l intensit di tutti i composti che compaiono nella cella di mobilit ionica SelexION nell intervallo COV selezionato Nel titolo dello spettro aperto verr visualizzato l intervallo COV selezionato 6 Selezionare una massa nello spettro fare clic con il pulsante destro
56. le Si aprir la finestra di dialogo Select Sample Seleziona campione r2 Nel riquadro Data Files selezionare un file wiff da visualizzare UJ Nel riquadro Samples selezionare il campione da visualizzare quindi fare clic su OK Vengono mostrati i dati acquisiti dal campione 4 Per visualizzare le informazioni sul file fare clic sull icona Show File Info Si aprir il riquadro File Information sotto al grafico 5 Estendere il periodo desiderato nel riquadro sinistro del riquadro File Information e fare quindi clic sul link all esperimento del periodo desiderato Tutti i parametri DMS eccetto COV SV e DMO e i parametri del modificatore utilizzati durante l acquisizione del campione vengono registrati nella sezione per l esperimento e il periodo selezionati valori di inizio e fine per COV SV e DMO di ogni composto vengono registrati nella sezione del periodo e dell esperimento valori di inizio fine e intervallo del parametro COV a incremento graduale utilizzati durante l acquisizione del campione vengono registrati nella sezione del periodo Fare riferimento alla sezione Analisi ed elaborazione dei dati nella Guida Introduttiva Analyst TF o alla Guida per l utente del sistema dello spettrometro di massa Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 44 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Analisi ed elaborazione dati Generazione di rapporti sui dati Il software MultiQuant utilizzato per quantificare i dati e
57. metri Prerequisiti TM x e La tecnologia SelexlON installata sullo spettrometro di massa e il modulo di controllo acceso Nota Prima che il modulo di controllo SelexION venga acceso o spento per aggiungere o rimuovere temporaneamente dal sistema la tecnologia SelexION disattivare il profilo hardware attivo all interno del software Analyst TF Diversamente si potrebbe provocare uno stato di instabilit dello spettrometro di massa e la conseguente perdita di controllo nel software Analyst TF Qualora il profilo hardware non venga disattivato e lo spettrometro di massa diventi in questo modo instabile il controllo pu essere recuperato rimuovendo e riposizionando la sorgente di ionizzazione o spegnendo e riaccendendo lo spettrometro di massa e il modulo di controllo e riattivando il profilo hardware Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza un modificatore Utilizzare questa procedura per creare un metodo di acquisizione e ottimizzare i parametri DMS per il composto nella modalit Manual Tuning Per questa procedura non necessario un modificatore 1 Attivare un profilo hardware che contenga una pompa a siringa Fare riferimento a Creazione di profili hardware e progetti nella Guida introduttiva o nella Guida per l utente del sistema 2 Eseguire l infusione T o l infusione separata del campione nel flusso LC Fare riferimento alla nfusione T del campione nel flusso L
58. nt DR Descrizione Possibili valori Specificare il valore DMS Offset La tensione applicata ai due elettrodi della cella di mobilit ionica SelexION relativa al potenziale del separatore Per esempio se il potenziale offset DMS misura 5 volt e il potenziale del separatore 100 volt i due elettrodi di fronte all ingresso del separatore hanno un potenziale di 105 volt Il DMS Offset un modo per regolare la trasmissione fuori dalla cella di mobilit ionica SelexION nello spettrometro di massa L utilizzo del parametro DR fa aumentare il tempo di residenza degli ioni nella cella di mobilit ionica SelexION con conseguente riduzione della sensibilit dovuta alla consistente perdita di segnale diffusionale Modificando il valore di DR verranno aggiornati il tempo di assestamento e la durata totale della scansione per tenere conto del trasporto di ioni attraverso la cella di mobilit ionica SelexION Durante le scansioni RF DC scansioni quadripolari verranno aggiornati il tempo di assestamento e la durata totale della scansione Controlla il flusso del gas azoto che pu essere attivato tra l uscita del dispositivo SelexION e l ingresso del separatore nello spettrometro di massa Quando il valore di DR impostato su Low Medium o High il flusso del gas attivo e aumenta la risoluzione del dispositivo SelexION DR si riferisce anche al gas accelerante punti di regolazione per i diversi valori dei
59. nterfaccia SelexION con i fori nella cella di mobilit ionica poi premere il separatore di interfaccia SelexION sulla cella di mobilit ionica 12 Assicurarsi che i due fermi sulla sorgente di ionizzazione puntino verso l alto in posizione aperta ore 12 13 Posizionare la sorgente di ionizzazione sull anello adattatore SelexION Assicurarsi che i perni guida sulla sorgente di ionizzazione siano allineati con gli alloggiamenti nell anello adattatore spingere la sorgente di ionizzazione verso l interfaccia fino ad inserirla completamente quindi ruotare i fermi della sorgente verso il basso nella posizione di blocco ore 6 30 per bloccare la sorgente di ionizzazione in posizione Fare riferimento alla Figura 2 3 a pagina 13 14 Accendere la tecnologia SelexION L interruttore situato sulla parte posteriore del modulo di controllo SelexION Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 16 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Utilizzo della tecnologia SelexION AVVERTENZA Pericolo di esposizione ad agenti chimici tossici prestare attenzione durante il riempimento dei contenitori del modificatore Fare riferimento alle schede tecniche di sicurezza delle sostanze chimiche e adottare le precauzioni appropriate Non riempire il contenitore del modificatore quando si trova nel vassoio laterale Scollegare la linea del liquido dal contenitore riempire il contenitore in un luogo sicuro e reinstallare il contenitore e la linea del liquido nel vassoio late
60. nzione di messa a terra sulla sorgente di ionizzazione a una pompa LC 4 Collegare il dado del tubo di campionamento alla giunzione di messa a terra attraverso un pezzo di tubo in PEEK rosso Fare riferimento all argomento Collegamento di tubi e cavi nella Guida per l operatore della sorgente di ionizzazione Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 67 di 68 Cronologia delle revisioni Motivazione della modifica Data Prima versione del documento Settembre 2014 Aggiornato per TripleTOF 6600 Migliorata procedura Installazione della Gennaio 2015 tecnologia SelexION a pagina 11 In base a RUO IDV 05 0689 D Aggiornamento dei Tempi di stabilizzazione Maggio 2015 Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 68 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C
61. o strumento si consiglia di rimuovere la cella di mobilit ionica SelexION dalla sorgente di ionizzazione prima di effettuare l ottimizzazione dello strumento Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 34 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Creazione e invio dei batch 4 Questa sezione descrive come eseguire le seguenti operazioni e Creare un metodo di acquisizione nella modalit Acquire per ottimizzare COV con un incremento graduale in due diversi modi durante l acquisizione batch Ulteriori informazioni sulla capacit della tecnologia SelexION di separare composti isobarici e Creare un metodo di acquisizione MRM con parametri DMS e Ulteriori informazioni sul calcolo del consumo di modificatore Prerequisiti TM x e La tecnologia SelexlON installata sullo spettrometro di massa e il modulo di controllo acceso Per la separazione dei composti con il metodo a cromatografia liquida il dispositivo SelexION pu essere utilizzato con l opzione Ramp COV in LC Modeper incrementare gradualmente COV durante l acquisizione batch Per l analisi di campioni per infusione ad esempio nel metabolismo con l uso di tecniche di campionamento di superficie il dispositivo SelexION pu essere utilizzato per separare i composti insieme all opzione Ramp COV for Cycle per simulare il gradiente LC Utilizzare i metodi creati in questa sezione per inviare batch per acquisire dati Fare riferimento alla Guida per l utente del sist
62. osti nel campo Separation Voltage SV c Digitare il valore DMO ottimizzato per tutti i composti nel campo DMS Offset DMO d Fare clic su OK Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 37 di 68 Creazione e invio dei batch Figura 4 2 Finestra di dialogo Parameter Settings Parameter Settings Source Gas Compound DMS DMS Temperature DT Low Modifier MD None v Separation Voltage SV 40000 E Compensation Voltage COV 00 DMS Offset DMO 30 DMS Resolution Enhancement Low DR Apply the following parameters to all other experiments Source Gas Compound DMS Cancel Nota La maggior parte dei composti viene ottimizzata tra 20 volt e 30 volt in assenza di modificatore Alcuni composti potrebbero essere ottimizzati anche oltre i 30 volt Qualora sia presente un modificatore si consiglia di utilizzare un intervallo COV che sia compreso almeno tra 60 volt e 20 volt poich gli spostamenti COV negativi per alcuni composti possono essere notevoli 9 Selezionare la casella di controllo Ramp COV for Cycle nella scheda MS e fornire i seguenti valori COV nell intervallo COV consentito compreso tra 100 volt e 100 volt Tabella 4 1 Valori COV Start Inizio digitare la tensione alla quale iniziare l incremento graduale digitare la tensione alla quale interrompere l incremento graduale Step Operazione Impostare le dimensioni dell intervallo Software Analyst
63. ound Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 6 Digitare i valori ottimizzati dei parametri della sorgente di ionizzazione e del gas nella scheda Source Gas Assicurarsi che la temperatura della sorgente TEM specificata corrisponda al valore utilizzato per l ottimizzazione dei parametri DMS Fare riferimento a Esercitazione di ottimizzazione manuale 7 Fare clic sulla scheda DMS e procedere come segue a Selezionare i valori desiderati per i parametri DMS Temperature DT Modifier MD e DMS Resolution Enhancement DR Assicurarsi che la temperatura DMS specificata sia la stessa utilizzata per l ottimizzazione dei parametri DMS b Digitare il valore DMO ottimizzato per tutti i composti nel campo DMS Offset DMO c Fare clic su OK 8 Fare clic su Ramp COV in LC Mode e fornire i seguenti valori COV nell intervallo COV consentito compreso tra 100 volt e 100 volt Figura 4 1 Finestra di dialogo Ramp COV Settings Ramp COV Settings Ramp COV Start E volts Stop 30 volts Step 1 volts Campo Descrizione Start Inizio digitare la tensione alla quale iniziare l incremento graduale digitare la tensione alla quale interrompere l incremento graduale Step Operazione Impostare le dimensioni dell intervallo Digitare la tensione di separazione da utilizzare per eseguire l incremento graduale del valore COV 9 Fare clic su OK 10 Digitare i gradienti LC e le velocit di fl
64. ra di dialogo Ramp Parameter Settings Selezionare DMS Offset nel campo Parameter Digitare 30 nel campo Start Digitare 30 nel campo Stop Utilizzare il valore predefinito nel campo Step o immettere un numero quindi fare clic su OK Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 26 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Ottimizzazione dei parametri DMS 6 Fare clic su Start dati sono mostrati nei riquadri sotto Tune Method Editor L intervallo consentito per DMO va da 100 volt a 100 volt Creazione di un metodo di acquisizione con un modificatore selezionato e ottimizzazione dei parametri DMS Nota Non si possono utilizzare dei modificatori con la sorgente di ionizzazione NanoSpray Gli utenti possono creare metodi di acquisizione che comprendono i flussi e le informazioni del modificatore ma quando verranno eseguiti la pompa del modificatore sar disattivata Se il composto di interesse non venisse separato adeguatamente nella modalit DMS si potrebbe introdurre un modificatore per coadiuvare la separazione dei composti Un modificatore un prodotto chimico che viene aggiunto nel flusso di Curtain Gas per aumentare la separazione dei composti Selezionare un modificatore e ottimizzare i parametri DMS nella modalit Manual Tuning quindi creare un metodo di acquisizione per salvare le impostazioni ottimizzate dei parametri Prima di selezionare un modificatore per la prima volta o quando si cambia il modificatore svuotare la line
65. radualmente COV a un valore SV particolare per valutare il segnale e la separazione dei composti Provare diversi valori DR fino a ottenere una separazione dei composti soddisfacente La Tabella 3 1 mostra i diversi valori di DR e i tempi di assestamento corrispondenti Tabella 3 1 Valori DR e tempi di assestamento corrispondenti Valori DR Tempi di assestamento 5600 6600 Low Nota Le letture di ritorno di DR mostrano la pressione attuale nella finestra di dialogo Mass Spec Detailed Status Per aprire questa finestra di dialogo fare doppio clic sull icona Mass Spec nella barra di stato Nota Quando il valore di DR impostato su Low Medium o High il flusso del gas attivo tra l uscita del dispositivo SelexION e l ingresso del separatore nello spettrometro di massa e aumenta la risoluzione del dispositivo SelexION Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 25 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS 7 Salvare il metodo di acquisizione dopo aver ottimizzato correttamente tutti i parametri DMS Incremento graduale dei valori di Separation Voltage e Compensation Voltage gx la cog Iniziare con un valore SV uguale a 0 Fare clic su Edit Ramp Si apre la finestra di dialogo Ramp Parameter Settings Selezionare Compensation Voltage nel campo Parameter Digitare 20 nel campo Start Digitare 30 nel campo Stop Utilizzare il valore predefinito nel campo Step o immettere la dimensione dell int
66. rale 15 Se vengono eseguiti degli esperimenti SelexION utilizzando i modificatori spurgare la pompa del modificatore Fare riferimento alla Eliminazione del modificatore a pagina 30 n LI n TM Rimozione della tecnologia SelexION Seguire questa procedura per rimuovere il separatore di interfaccia SelexION l anello adattatore e la cella di mobilit ionica nonch per installare il separatore di interfaccia standard Questa procedura ripristina le prestazioni standard del sistema TripleTOF Materiali richiesti e Guanti senza polvere consigliati in neoprene o nitrile AVVERTENZA Pericolo di superfici calde Lasciar raffreddare la sorgente di ionizzazione e l interfaccia di vuoto per almeno 30 minuti prima di iniziare qualsiasi procedura di manutenzione Alcune superfici dell interfaccia di vuoto e della sorgente di ionizzazione raggiungono temperature considerevoli durante il funzionamento Attenzione Rischio di danni al sistema Maneggiare con cura i componenti dellnterfaccia di vuoto Sono molto fragili e costosi Attenzione Rischio di danni al sistema Assicurarsi che le componenti dell interfaccia di vuoto siano tenute pulite e non abbiano contaminazione chimica n polvere Indossare sempre guanti senza polvere per evitare contaminazioni quando si maneggiano i componenti dell interfaccia di vuoto 1 Completare le scansioni in corso o fare clic su Acquire gt Abort Sample per interromperle 2 Arrestare il flusso d
67. seeennnne 35 Ottimizzazione del parametro COV utilizzando l opzione Ramp COV for Cycle enne 37 Creazione di un metodo di acquisizione MRMHR con parametri DMS sssssssseeeeeeennennnnnnnnnnnnnnns 40 Separazione dei composti isobarici utilizzando la tecnologia SelexlON sssssseeeeennnnnnnnnn 41 Calcolo del consumo di modificatore eene nnne tenerent n 41 Esempio di calcolo del consumo di modificatore essere nennen 42 Calcolo del consumo adeguato del modificatore per un batch 42 Capitolo 5 Analisi ed elaborazione dati ueeeeeseeessseeeeesseeee eene eene nennen nnne 44 Analisi deirdati quantitatiVl radere tente eter dete tet err dr den dra dedero d rt t ra e rna 44 Visualizzazione dei parametri DMS utilizzati per l acquisizione in Information durante la visualizzazione dei file di dati 44 Generazione di rapporti sui dati ctetu aae a ooo e orna ora 45 Analisi dei dati qualitatiVl 23 vetro terrere end de en a Te p TR ER THER Te RD T P Te rr E 45 Riesame di un file di dati acquisito con l opzione Ramp COV for Cycle seen 45 Riesame di un file di dati acquisito con l opzione Ramp COV in LC Mode enne 47 Visualizzazione di un contour plot per i dati acquisiti con il parametro COV incrementato gradualmente solo opzione Ramp COV for Guida Utente Software Anal
68. ssa Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 11 di 68 Utilizzo della tecnologia SelexION 3 Disattivare il profilo hardware attivo Nota La mancata disattivazione del profilo hardware attivo prima di accendere o spegnere il modulo di controllo SelexION per aggiungere o rimuovere temporaneamente la tecnologia SelexION dal sistema pu provocare uno stato di instabilit dello spettrometro di massa e la conseguente perdita di controllo nel software Analyst TF Qualora il profilo hardware non venga disattivato e lo spettrometro di massa diventi in questo modo instabile il controllo pu essere recuperato rimuovendo e riposizionando la sorgente di ionizzazione o spegnendo e riaccendendo lo spettrometro di massa e il modulo di controllo e riattivando il profilo hardware 4 Sbloccare la sorgente di ionizzazione girando i due fermi di sicurezza verso la posizione ore 12 5 Staccare delicatamente la sorgente di ionizzazione dall interfaccia di vuoto 6 Rimuovere la piastra Curtain estraendola direttamente dall interfaccia di vuoto La piastra tenuta ferma da tre nottolini a sfera montati sul separatore di vuoto 7 Posizionare l anello adattatore SelexION nell alloggiamento dell interfaccia di vuoto allineando il connettore sull anello con il connettore della sorgente sull interfaccia di vuoto e allineando le due viti sull anello adattatore negli alloggiamenti dell interfaccia di vuoto Accertarsi che il connettore
69. tenga i parametri del composto i parametri della sorgente e la velocit di flusso LC ottimizzati quindi ottimizzare i parametri DMS e Creare un metodo di acquisizione ottimizzando i parametri del composto i parametri della sorgente e la velocit di flusso LC quindi ottimizzando i parametri DMS In questa sezione descritto il secondo metodo per l ottimizzazione dei parametri DMS Il primo metodo un sottoinsieme del secondo metodo descritto in questa sezione Ottimizzazione dei parametri DMS in Manual Tuning Questa sezione descrive come e Creare un metodo di acquisizione in modalit Manual Tuning e ottimizzare i parametri DMS senza modificatore e Eliminare il modificatore e Creare un metodo di acquisizione e ottimizzare i parametri DMS nella modalit Manual Tuning con un modificatore selezionato Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 22 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Ottimizzazione dei parametri DMS Nota Per acquisire dati utilizzando un modificatore necessario creare il metodo di acquisizione quindi ottimizzare i parametri DMS con il modificatore selezionato nel metodo parametri DMS Separation Voltage SV Compensation Voltage COV e DMS Offset DMO sono influenzati dalla scelta di un modificatore Di conseguenza l aggiunta o la modifica del modificatore o della concentrazione del modificatore successiva all ottimizzazione dei parametri SV COV e DMO richieder una nuova ottimizzazione di questi para
70. ti di interesse e filtrare interferenze o disturbi chimici Con il dispositivo SelexION la funzione di incremento graduale di COV per l opzione Cycle del software Analyst TF pu essere utilizzata per simulare il gradiente LC Oltre alla modalit Manual Tuning il parametro COV pu essere incrementato gradualmente anche durante l acquisizione batch selezionando l opzione Ramp COV for Cycle in un metodo di acquisizione nell Acquisition Method Editor Il parametro COV viene trattato come un parametro dipendente dal ciclo La funzione di incremento graduale di COV funziona per un metodo di acquisizione DMS a singolo periodo metodi IDA senza incremento graduale del parametro saranno eseguiti per la durata necessaria al metodo mentre i metodi IDA con incremento graduale di COV saranno eseguiti per il numero di cicli necessari in base ai valori di inizio fine e intervallo di COV a incremento graduale L esecuzione del metodo si arrester con l acquisizione dell ultimo intervallo di COV e non quando verr raggiunta la durata del metodo Il valore di COV calcolato in modo dinamico e viene impostato per ogni ciclo valori COV SV DT e DMO nella scansione di indagine o in qualsiasi altra scansione di indagine IDA supportata vengono propagati automaticamente alle scansioni dipendenti in un metodo IDA Anche il modificatore utilizzato nella scansione di indagine di un metodo IDA viene automaticamente propagato alle scansioni dipendenti Softw
71. to 4 Fare clic sulla scheda DMS Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 27 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS 5 Ottimizzare il parametro DT come descritto in Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza un modificatore a pagina 23 6 Nel parametro Modifier MD selezionare un modificatore dall elenco Selezionare uno dei modificatori predefiniti Per utilizzare un modificatore diverso selezionare Custom Figura 3 3 Impostazioni parametro DMS Source Gas Compound DMS Resolution Detector DMS Temperature Reached DMS Temperature DT Low Z Modifier MD Noe w None Separation Voltage SV 2 Propano Acetonitrile Compensation Voltage COV Methanol Acetone DMS Offset DMO Custom SI DMS Resolution Enhancement ort _ DR Il parametro Modifier Composition MDC mostrato con il suo valore predefinito impostato su Low 7 Nel parametro MDC se necessario selezionare High per provare la concentrazione del modificatore che dovrebbe fornire la separazione ottimale Low 1 5 o pi mentre High 3 0 della concentrazione del modificatore Il software utilizza il valore della velocit di flusso del Curtain Gas e la densit e il peso molecolare del modificatore selezionato per calcolare la velocit di flusso del modificatore quindi applica tale velocit in modo automatico 8 Se stata selezionata l opzione Custom per il parame
72. tore personalizzato Suggerimento Per visualizzare la velocit di flusso della pompa del modificatore nella finestra di dialogo Mass Spec Detailed Status fare doppio clic sull icona Mass Spec sulla barra di stato 9 Per il modificatore selezionato e per il valore MDC regolare i parametri SV COV e DMO come descritto in Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza un modificatore a pagina 23 finch non si ottengono un segnale e una separazione soddisfacenti Nota Per ogni modifica del tipo o della concentrazione del modificatore attendere che il sistema raggiunga l equilibrio per almeno 30 minuti prima di ottimizzare i parametri DMS Per provare una concentrazione differente High o Low dello stesso modificatore selezionato nel passaggio 6 selezionare un valore MDC diverso Low o High e ottimizzare nuovamente i parametri SV COV e DMO come descritto in Creazione di un metodo di acquisizione e ottimizzazione dei parametri DMS senza un modificatore a pagina 23 Per utilizzare un modificatore diverso procedere come segue Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 29 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS a Eliminare la linea del modificatore Fare riferimento alla Eliminazione del modificatore a pagina 30 b Selezionare un altro modificatore nel metodo di acquisizione quindi specificare il valore MDC per il nuovo modificatore c Ottimizzare nuovamente i parametri SV
73. tro Modifier MD nel passaggio 6 fornire la densit e il peso molecolare del modificatore personalizzato come indicato in Figura 3 4 in modo che il software possa calcolare la velocit di flusso del modificatore per l impostazione specificata Low o High quindi applicarla Software Analyst TF 1 7 1 Guida Utente 28 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Ottimizzazione dei parametri DMS Figura 3 4 Impostazioni parametro DMS Source Gas Compound DMS Resolution Detector DMS Temperature Reached DMS Temperature DT Low Modifier MD Custom Modifier Composition MDC Low Modifier Density g mL MDD 0 0000 Modifier MW MDW Separation Voltage SV ool Compensation Voltage COV 99 DMS Offset DMO 30 DMS Resolution Enhancement ort n DR Parametro Descrizione Modifier Density g mL Specificare la densit del modificatore personalizzato Il software utilizza MDD questa densit in aggiunta al peso molecolare del modificatore Modifier Molecular Weight MDW e al valore della velocit di flusso del Curtain Gas per determinare la velocit di flusso del modificatore personalizzato Modifier MW MDW Specificare il peso molecolare del modificatore personalizzato in g mol Il software utilizza il valore di questo parametro in aggiunta alla densit del modificatore Modifier Density MDD e al valore della velocit di flusso del Curtain Gas per determinare la velocit di flusso del modifica
74. tro del mouse quindi fare clic su Extract lons Use Range Viene aperto XIC per la massa selezionata Il COV per la massa selezionata visualizzato sull asse x l intensit sull asse y Figura 6 6 XIC ED riCct TOF MS Exp 1 tom Sample 1 Sample001 of IDA_COVRamp_ForCP witt DvoScemy 0 Max 1 908 cos 190 eu 4 ee d ls WF roms Exp 1 3 9000 to 6 4000 Volt fom Sample 1 Sampie001 of IDA COVRamp ForCP witt different Max 2 364 cos 29 5391 2004 WB ric Exp 2 Exp 3 fom Sample 1 SamoleQ01 of IDA COVRamo ForCP mit DuoSpray 0 Max 7 804 cp 7 804 sp 8 004 12 Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 57 di 68 Utilizzo dei parametri DMS in IDA 7 Nel TIC delle scansioni dipendenti o della scansione di indagine evidenziare il range da visualizzare nel contour plot Fare clic con il pulsante destro del mouse quindi fare clic su Show Contour Plot Quando non si effettui una selezione appare l intervallo intero Si apre il contour plot per il campione selezionato sotto la finestra TIC Il COV in volt visualizzato sull asse x mentre il valore m z in Da sull asse y Figura 6 7 Contour plot ED TIC ot TOF MS Exp 1 tom Sample Sample001 of IDA COVRamo ForCP mit DuoSpray Max 1 908 cos 1 966 Inte Contour Piot of IDA COVRAamo ForCP iff Exp 1 3 300 Volts to 700 Volts 00 2 603 604 eos 608 0607 oos WB ric Exp 2 Exp 3 tom Sample 1 Sample001 ot IDA
75. uisizione con campioni nella coda di acquisizione Se il sistema in modalit Acquire con campioni nella coda di acquisizione e l utente seleziona l icona Purge Modifier viene visualizzato un messaggio Queue Busy nella finestra di dialogo Purge Modifier Figura 3 9 Finestra di dialogo Purge Modifier P Purge Modifier balos 0 100 Status Durations Queue Busy Expected 00 00 00 Facendo clic sul pulsante Purge viene visualizzato un messaggio a indicare che in corso l acquisizione Per continuare l eliminazione completare o annullare il processo di acquisizione e assicurarsi che non ci siano altri campioni in attesa nella coda Stato di eliminazione del modificatore Stato di eliminazione Descrizione Ready Il sistema pronto ad avviare il processo Purge Initializing Equilibrating Durante la modalit Initializing vengono creati un metodo di acquisizione e dei file batch Il sistema si equilibra durante la modalit Equilibrating Il ciclo di eliminazione terminato L acquisizione in esecuzione L eliminazione non consentita Guida Utente Software Analyst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 33 di 68 Ottimizzazione dei parametri DMS Ottimizzazione dello strumento L ottimizzazione dello strumento con il dispositivo SelexION installato dovrebbe essere utilizzata esclusivamente per la risoluzione di problemi o per correggere piccoli problemi di risoluzione o calibrazione Per l ottimizzazione completa dell
76. usso secondo la configurazione del metodo cromatografico desiderato Software Analyst amp TF 1 7 1 Guida Utente 36 di 68 RUO IDV 05 0689 IT C Creazione e invio dei batch 11 Se necessario fornire i valori dei parametri delle periferiche incluse nel profilo hardware 12 Salvare il metodo di acquisizione Pu essere utilizzato per incrementare gradualmente COV nella modalit LC durante l acquisizione batch di campioni e l acquisizione dei dati Ottimizzazione del parametro COV utilizzando l opzione Ramp COV for Cycle Utilizzare questa procedura quando sono gi stati ottenuti i valori ottimizzati o valori predefiniti accettabili per tutti i parametri DMS ad eccezione di COV L opzione Ramp COV for Cycle pu essere utilizzata per creare un metodo di acquisizione DMS a periodo singolo e con un singolo esperimento valori COV da incrementare gradualmente vengono inseriti automaticamente durante il processo di acquisizione batch Il numero di valori COV determina il numero di cicli eseguiti dallo spettrometro di massa Il parametro COV viene trattato come un parametro dipendente dal ciclo pertanto ogni ciclo utilizzer un valore diverso per il parametro COV Nel caso di un metodo IDA viene eseguito un valore COV per ciclo per entrambi gli esperimenti di indagine e dipendenti L opzione Ramp COV for Cycle utilizzabile con i tipi di scansione TOF MS o Product lon Sono supportati anche i flussi di lavoro IDA acquisizione SWATH e MR
77. yst TF 1 7 1 RUO IDV 05 0689 IT C 3 di 68 Contenuto Capitolo 6 Utilizzo dei parametri DMS in IDA in 52 Creazione di un metodo di acquisizione IDA per l incremento graduale di COV durante l acquisizione batch 52 Creazione di un metodo di acquisizione IDA per l incremento graduale COV durante la modalit di acquisizione batch nennen 53 Visualizzazione dei dati IDA acquisiti con l incremento graduale di COV hell finestra EXDIore e cet ht ien hehe nd e p e De Yet 55 Visualizzazione dei dati IDA acquisiti con l incremento graduale del parametro COV in IDA Explorer nennen nennen nennt nnne nennen tenente nnne nnne tnnt OR 58 Capitolo 7 Risoluzione dei problemi iii 61 Appendice A Parametri DMS iii ilaele 62 Descrizione dei parametri DMS sssssssseseseseseeeeeeennnnnnnnennnnnnnnnnnnnnnnnn nennen tnnt netten tnnt tenete tenete tnnt tnn 62 Stato dei parametri DMS nella modalit DMS Off nnne nnne nnne nennen 65 Valori dei parametri DMS e della sorgente utilizzati durante l eliminazione del modificatore sse nre tnter tentent teret tenens 65 Valori dei parametri DMS e della sorgente dopo il completamento o l interruzione dell eliminazione del modificatore sssssseeeeeeene tenentes 66 Appendice B Infusione T del campione nel flusso LC ii 67 Cronologia delle revisioni

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