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MOGM e sicurezza in laboratorio

1. Envelope Figura 11 Vettore virale di terza generazione 27 28 VETTORI CON VIRUS HERPES SIMPLEX HSV Caratteristiche virus a RNA enzima trascrittasi inversa permette di sintetizzare un DNA complementare non c integrazione del DNA tropismo specifico per sistema nervoso centrale possono instaurare nei neuroni infezioni latenti che durano anche tutta la vita applicazione nella terapia di patologie neurologiche quali il morbo di Parkinson di Alzheimer e di Huntington veicolano inserti di DNA lunghi sino a 20kb Vantaggi non possibile avere un espressione a lungo termine dei geni inseriti per mancanza di integrazione VETTORI ADENOVIRALI Caratteristiche virus a DNA tropismo particolare per l epitelio respiratorio la cornea ed il tratto gastrointestinale infettare un ampia gamma di tipi cellulari non c integrazione del DNA veicolano inserti di DNA lunghi sino a 7 8kb Vantaggi Svantaggi possono essere prodotti con titoli elevati non possibile avere un espressione a lungo termine dei geni applicazione nella terapia genica per inseriti per mancanza di integrazione patologie genetiche ereditarie difficile applicazione in terapia genica contro il cancro potendo infettare ogni tipo di cellula non possibile avere una azione di tossicit selettiva solo per cellule cancerogene inducono forti risposte immunitarie VETTORI CON VIRUS ADENOASSOCIATI AAV
2. E SICUREZZA IN LABORATORIO RESPONSABILI SCIENTIFICI DEL PROGETTO INGIL DIPARTIMENTO INSTALLAZIONI iets delle Falietiz DI PRODUZIONE Dipartimento Prevenzione e Comunicazione E INSEDIAMENTI ANTROPICI Direzione Generale della Prevenzione Sanitaria INGIL DIPARTIMENTO INSTALLAZIONI DI PRODUZIONE E INSEDIAMENTI ANTROPICI Direttore della Direzione Generale della Prevenzione Sanitaria Fabrizio Oleari Ministero della Salute Ex Commissario Straordinario dell ISPESL Antonio Moccaldi Ex Direttore Generale dell ISPESL Umberto Sacerdote Ex Direttore del Dipartimento Installazioni di Produzione e Insediamenti Antropici dell ISPESL Mario Mariani Referenti Scientifici Elena Sturchio INAIL DIPIA Ex ISPESL Grazia Ballacci Ministero della Salute Autori Elena Sturchio Elisabetta Bemporad Giorgio Mari Barbara Ficociello Miriam Zanellato Coordinamento Editoriale Fabio Cassandra Collaborazione alla realizzazione Laura Casorri Giuditta Simoncelli Isabella Marchionni INAIL Dipartimento Installazioni di Produzione e Insediamenti Antropici Ex ISPESL Via Urbana 167 00184 Roma Stampa SI S COM S r l Il Manuale relativo alla sicurezza nei laboratori che fanno uso di microrganismi geneticamente modificati il risultato di attivit di studio e di ricerca di un progetto del Centro Nazionale per la prevenzione e il controllo delle malattie CCM finanziato dal Ministero della Salute e realizzat
3. Fonte ESCO WORLD CLASS WORLDWIDE Classe Il Tipo B1 Figura 18 Protezione e Operatore e ambiente esterno e prodotto La protezione dell operatore assicurata dal flusso frontale di aria esterno convogliato come flusso laminare al di sopra del piano di lavoro che viene filtrato attraverso un filtro HEPA in modo da minimizzare la possibilit di contaminazioni crociate per il prodotto L ambiente protetto da un filtro HEPA che filtra l aria emessa dalla cappa Tale aria priva di particolato espulsa per le cappe del tipo B1 e B2 al di fuori dell edificio attraverso il sistema di ventilazione protetto Principale utilizzo Adatta all impiego confinato di MOGM di classe 2 e 3 e all utilizzo di concentrazioni maggiori di sostanze tossiche volatili o radioattive rispetto alle cappe di classe Il tipo A Caratteristiche e Velocit di flusso almeno 0 4 m s e Il 70 dell aria immessa nella cappa viene emessa attraverso la griglia posteriore dopo passaggio nel filtro HEPA di scarico e viene scaricata dall edificio tramite un condotto dedicato connesso con l impianto di ventilazione e ll restante 30 dell aria viene ricircolata passando attraverso il filtro HEPA di entrata e plenum contaminati biologicamente sono a pressione negativa rispetto alla stanza o sono circondati da pressione negativa Classe Il Tipo B2 Fonte ESCO WORLD CLASS WORLDWIDE Classe Il Tipo B2 Figura 19 Protezione e Operatore e
4. Esempi di autoclavi con caratteristiche diverse Autoclavi a dislocamento per gravit Il vapore entra sotto pressione nella camera sposta verso il basso l aria pi pesante ed esce attraverso la valvola dello sca rico equipaggiata con filtro HEPA Autoclavi a prevuoto Applicazioni 130 180 min Metallo vetro olio talco Metallo vetro tessuti gomma che tollerino i 134 C Oggetti che non tollerino i 120 C o l eccessiva umidita Oggetti che non tollerino i 134 C Plastica prodotta in serie Raccomandazioni Frequenti controlli Creare il vuoto prima della partenza Completa saturazione e perfetta asciugatura Impacchettamenti speciali Aerazione necessaria per oggetti di materiale assorbente Controlli sui residui Impacchettamento che permetta la penetrazione di formalina Oggetti a perdere Svantaggi Non adatto per i tessuti L evacuazione dell aria difficile se la pompa inadeguata Gas tossico ed infiammabile Poca capacit penetrante alla umidit relativa 90 Usati per prodotti industriali Risterilizzazioni problematiche Queste macchine permettono la rimozione di aria dalla camera prima di immettere vapore L aria viene evacuata attraverso una valvola dotata di filtro HEPA Alla fine del ciclo il vapore viene allontanato automaticamente Queste autoclavi possono operare a 134 C e di conseguenza il ciclo di sterilizzazi
5. WFI Questa precauzione permette di operare con maggiore tranquillit in tutte le operazioni successive al lavaggio A tal proposito il costruttore dovr prestare una particolare attenzione alla facilit di drenaggio delle superfici dell isolatore 86 e alla loro finitura superficiale a specchio Altro step richiesto nei casi in cui si debba operare nell isolatore subito a valle di un lavaggio l essiccamento Tale operazione deve essere condotta con aria a bassissima umidit quindi deumidificata coi sistemi tipici del condizionamento raffred damento condensazione e separazione delle gocce e post riscaldamento finale Nei casi in cui si debba procedere molto velocemente si utilizza un gruppo di condizionamento dedicato In casi meno critici baster riscaldare l aria con resistenze elettriche per ottenere un effetto di essiccamento In alcuni casi il semplice lavaggio dell isolatore pu non essere sufficiente e pu richiedere operazione di sterilizzazione Tale operazione dovr essere compatibile con quanto installato all interno dell isolatore stesso L attuale tecnologia propone sempre pi spesso sistemi funzionanti con vapori di acqua ossigenata spesso indicati con l acronimo inglese VHP Vaporized Hydrogen Peroxide Tali sistemi funzionano con un piccolo sistema di vaporizzazione da una bottiglietta di acqua ossigenata che garantisce una sorta di nebbia di vapori di acqua ossigenata stessa in concentr
6. re infusione delle cellule Figura 6 Schema di protocollo di terapia genica ex vivo La scelta di uno o dell altro approccio condizionata da una serie di fattori come la natura o la disponibilit delle cellule bersaglio e le caratteristiche della malattia da curare Alcune cellule sono pi facili da prelevare come le cellule del sangue 19 che possono anche essere manipolate e trattate ex vivo Per altri organi come il fegato si pu utilizzare un approccio in vivo nel quale il vettore contenente il transgene viene iniettato per via endovenosa e tramite il circolo sanguigno raggiunge Il fegato La Tabella 5 fornisce una panoramica dei tipi di medicinali sperimentali per terapia genica attualmente in uso ESEMPI DI MEDICINALE SPERIMENTALE PER TERAPIA GENICA con adiuvanti Acidi nucleici complessati plasmidi complessati con policationi proteine altri polimeri oppure incapsulati in vettori non virali come liposomi oppure veicolati da particelle colloidali Vettori virali derivati da adenovirus retrovirus virus adeno associati lentivirus herpes virus virus vaccinico in alcuni casi competenti per la replicazione in vivo ma di solito resi difettivi Tabella 5 Il medicinale sperimentale di terapia genica deve essere preparato e caratterizzato in modo tale da avere le informazioni chi mico molecolari biologiche necessarie per una corretta valutazione del rapporto rischio beneficio in relazione all uso clinic
7. Allegato IV della Direttiva Le due procedure da seguire per effettuare una corretta valutazione del rischio sono specificate nel Decreto Ministeriale 13 25 settembre 2001 Gli elementi per la valutazione del rischio specificati nei paragrafi 1 e 2 dell Allegato Ill comprendono tra l altro la valutazione degli effetti potenzialmente nocivi per la salute umana e l ambiente Sono ritenuti potenzialmente nocivi quegli effetti suscet tibili di causare malattie vanificarne la profilassi o la terapia e promuovere l insediamento e o la diffusione nell ambiente di microrganismi che possono produrre effetti negativi su popolazioni naturali o effetti dannosi in seguito al trasferimento di geni in altri organismi La valutazione comporta l analisi dei rischi collegati agli effetti potenzialmente nocivi per ciascuna attivit e la loro attribuzione alle diverse classi definite nell articolo 5 tenendo conto sia della natura che della portata delle operazioni per stabilire quali siano le attrezzature di contenimento finale necessarie Il grado di rischio connesso agli impieghi confinati e ai processi di costruzione di microrganismi geneticamente modificati MOGM dipende dalla gravit degli effetti potenzial mente nocivi per la salute umana o l ambiente e dalla possibilit che questi effetti si verifichino realmente In sede di valu tazione del rischio si considera l esposizione di soggetti umani o dell ambiente ai MOGM durante le normali opera
8. Quando esiste un dubbio sull assegnazione della classe di un impiego confinato viene scelta la classe con misure di pro tezione pi rigorose Si noti che mentre a norma del D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 si classificano in gruppi di rischio gli agenti biologici ed fornita nell Allegato XLVI allo stesso decreto una lista positiva di tutti i patogeni umani conosciuti con l assegnazione al relativo gruppo di rischio qui l oggetto della classificazione non sono i MOGM poich impossibile elencare tutti i possibili MOGM bensi gli impieghi previsti compito del notificante quello di valutare seguendo le linee indicate nell Allegato III al D Lgs 206 01 quali siano le misure di contenimento minime adeguate al caso scegliendole tra i quattro progressivi livelli di contenimento specificati nell Allegato IV allo stesso decreto Nel processo di valutazione delineato nell Allegato III si tiene conto anche della presenza o meno nei pressi dell impianto di specie animali o vegetali suscettibili ad una eventuale azione patogena del MOGM Allegato III Principi da seguire per la valutazione dell impiego confinato A Elementi di valutazione 1 Sono considerati gli effetti potenzialmente nocivi 2 Tale valutazione si deve basare sull identificazione dei possibili effetti nocivi per l uomo e per l ambiente associati con il microrganismo ricevente materiale genetico inserito proveniente da un organismo donatore il vettore il m
9. cessit al fine di assicurare l evacuazione in sicurezza degli operatori Dove risulti necessario in presenza di attrezzature come incubatori cappa di sicurezza biologica e congelatori deve essere assicurata in caso di black out dell impianto principale la fornitura continua di energia elettrica mediante un gruppo elet trogeno Impiantistica gas Deve esistere una fornitura di gas affidabile ed adeguata obbligatorio avere una buona installazione e una manutenzione continua Inoltre devono essere presenti sistemi meccanici di ventilazione che forniscano un flusso d aria verso l interno senza ricircolo In caso di utilizzo di gas tecnici 05 COd No Ho acetilene per evitare all interno dei laboratori la presenza di bombole di gas compresso deve essere predisposto un impianto centralizzato di distribuzione da deposito esterno con sistema di sicurezza dotato di elettrovalvole per il blocco dell erogazione in caso di emergenza Inoltre devono essere installati i relativi rivelatori di fuga di gas e di presenza di ossigeno alla concentrazione idonea collegati al suddetto sistema di sicurezza nel caso sia presente ed all impianto di allarme Sistema antincendio Deve essere installato un impianto automatico di rivelazione di incendio e fumo con relativo sistema di allarme ed eventuale sistema di spegnimento dell incendio Planimetria laboratori devono avere spazio sufficiente al fine di garantire gli spostamenti
10. barriera primaria Equipaggiamento di progettazione barriera secondaria e Il grado di protezione dipende dalla natura dell agente infettivo e dai rischi associati alla produzione aerosols All aumentare del rischio di trasmissione via aerosol maggiori devono essere i livelli di contenimento primario e secondario Definire dei flussi di percorso per il materiale e il personale per ottimizzare l efficienza e minimizzare potenziali cross contaminazioni tra fasi dello stesso processo e tra processi diversi Cappe biologiche Glove box Altre modalit per minimizzare aerosols Impianto progettato per trattamento asettico v Superfici lisce senza soluzione di piastrelle ecc v Facile pulizia con rifiniture non articolate Y Ridotta capacit di diffusione Aria filtrata tramite filtri HEPA attraverso unit di trattamento separato Separazione della produzione da altre zone della struttura Ingresso separato zona pulita controllata Equipaggiamento utilizzato per la produzione non dovrebbe essere usato in attivit non legate alla produzione Laboratori con contenimento dell aria Nessun movimento di personale tra area di produzione del vettore e area di trasduzione Stanze per aree di supporto v preparazione buffer terreni lavaggio vetreria v aree di stoccaggio per materie prime banche cellulari adiacenti alla area di produzione se possibile per ridurre al minimo il traffico in entrata e in uscita dalla struttura Aree di produ
11. di materiale lasciando spazi per permettere la circolazione dell aria provvedere ad una manutenzione di pulizia decontaminazione e rimozione della polvere dal sistema di ventilazione controllare giornalmente la temperatura dell incubatore con un termometro oppure qualora ne sia dotato controllare la temperatura indicata dal termometro permanente installato sull apparecchiatura la deviazione tra la temperatura impostata e quella rilevata non dovr essere superiore a 1 C per i termostati frigotermostati impostati a 20 C a 36 C ea 44 C provvedere alla taratura del termometro permanente attraverso un termometro di riferimento certificato tarato annualmente da un centro SIT CAPITOLO NONO Flusso del personale e procedure operative Procedura di accesso all impianto di classe 3 Solo il personale che deve eseguire operazioni con MOGM di classe 3 relative a programmi di ricerca o diagnostici ha l au torizzazione all accesso Tale personale deve essere istruito sulle procedure operative in modo da essere in grado di operare correttamente nel laboratorio di livello di contenimento 3 Ingresso e controllare il manometro per assicurarsi che nel laboratorio esista pressione negativa e davanti la prima porta di accesso pu essere presente un tappeto decontaminante indispensabile a ridurre l inquinamento degli ambienti e delle superfici soggette a rischio microbico come all ingresso di ogni ambiente dove richiesta un
12. 1 e 2 NIH guidelines qualsiasi processo che distrugge la capacit di uno specifico agente microbiologico o cel lula eucariotica di auto replicarsi processo attraverso cui agenti microbiolo gici trasmissibili o cel lule eucaristiche sono ridotti ad un livello tale da rendere improba bile induzione di ma lattie in uomini sani animali o piante DHHS CDC NIH PMI rende un area un di spositivo un articolo o un materiale sicuro da manipolare riducendo il livello di contaminazio ne microbica in modo da eliminare la trasmis sione delle infezioni processo meno letale della sterilizzazione che elimina quasi tutti i microrganismi rico nosciuti come pato geni ma non necessariamente tutte le forme microbi che ad es spore bat teriche presenti su oggetti inanimati processo per uccidere tutti i microrganismi in cluso un elevato nu mero di endospore batteriche non cos categoricamente defi nibile da un punto di vista operativo se non come un processo a seguito del quale la probabilit che un mi crorganismo sia so pravvissuto su un og getto sottoposto al trat tamento inferiore ad 1 su 1 milione 10 6 definizione di SAL esente da qualsiasi microrganismo vi vente o virus La defi nizione categorica e assoluta TERMINE Sterilizzatrici Validazione convalida DPR 15 7 2003 apparecchiature dedi cate esclusivamente alla sterilizzazione dei ri
13. 28 29 30 31 32 33 34 35 36 Saponi corpi grassi cere di origine animale o vegetale Sostanze organiche non alogenate non utilizzate come solventi Sostanze inorganiche senza metalli n composti metallici Scorie e o ceneri Terre argille o sabbie compresi i fanghi di dragaggio Sali per rinvenimento non contenenti cianuri Polveri metalliche Materiali catalitici usati Liquidi o fanghi contenenti metalli o composti metallici Rifiuti provenienti da trattamenti disinquinanti ad esempio polveri di filtri dell aria ecc salvo quelli previsti ai punti 29 30 e 33 Fanghi provenienti dal lavaggio di gas Fanghi provenienti dagli impianti di depurazione dell acqua Residui di decarbonazione Residui di colonne scambiatrici di ioni Fanghi residuati non trattabili o non utilizzabili in agricoltura Residui della pulitura di cisterne e o di materiale Materiale contaminato Recipienti contaminati ad esempio imballaggi bombole di gas ecc che abbiano contenuto uno o pi dei costituenti elencati nell Allegato H Accumulatori e pile elettriche Oli vegetali Oggetti provenienti da una raccolta selettiva di rifiuti domestici e aventi una delle caratteristiche elencate nell Allegato Qualunque altro rifiuto contenente uno qualunque dei costituenti elencati nell Allegato H e aventi una delle caratteristiche elencate nell Allegato alcune ripetizioni rispetto alle voci dell Allegato H sono fatte intenziona
14. CONSUMATORI UTENTI La ricerca e le tecnologie basate sulla genetica e sulla biologia molecolare lasciano intravedere sostanziali prospettive d in novazione in molti e differenti settori economici pur continuando ad alimentare diffuse inquietudini SISTEMA FORMULATI SANITARIO PAZIENTI Le tecniche e le tecnologie di base sono Fermentazione processo chimico anaerobio e aerobio realizzato da un microrganismo che permette di ottenere un prodotto di trasformazione a partire da un substrato iniziale vino dal mosto d uva aceto dal vino yogurt dal latte Le fermentazioni anaerobie ed aerobie sono largamente usate da tempo per la produzione di metaboliti secondari da parte di una coltura di microrganismi nel momento di massima crescita Lo sfruttamento industriale dei processi fermentativi ha permesso la produzione su larga scala di antibiotici enzimi lieviti starter microbici acidi organici amminoacidi vitamine possibile per produrre composti specifici impiegare microrganismi geneticamente modificati ottenuti mediante l inge gneria genetica Bioconversione modificazione della struttura chimica di una sostanza mediante l uso di singoli enzimi o del sistema en zimatico cellulare di un agente biologico microrganismo cellula vegetale o cellula animale Colture cellulari le cellule appartenenti a tessuti di organismi superiori piante o animali si possono isolare e coltivare in laboratorio per ottenere molecole e comp
15. E Accendere il sistema di aspirazione della cappa almeno 10 min prima di iniziare il lavoro in modo da stabilizzare il flusso e consentire l eliminazione del particolato presente al suo interno Lasciare la cappa in funzione per circa 20 min al termine del lavoro per eliminare eventuali con taminazioni 78 Pulire le superfici della cappa ad ogni inizio e fine lavoro con etanolo EtOH al 70 o una soluzione diluizione 1 100 di ipoclorito di sodio 0 05 o altri disinfettanti Pulire con EtOH al 70 le superfici di tutti i materiali e contenitori immessi nella cappa per ridurre l immissione di contaminanti microbici nell area di lavoro Iniziare la manipolazione dei materiali dopo circa 1 min dall immissione delle mani braccia all in terno della cappa in modo da far stabilizzare il flusso d aria nella cappa ed effettuare l air sweep delle mani e delle braccia per rimuovere i contaminanti microbici presenti sulla loro superficie Non poggiare le braccia sulla parte anteriore della griglia della cappa il flusso di aria della stanza potrebbe convergere nell area di lavoro invece di essere aspirata attraverso la griglia frontale Evitare movimenti bruschi degli avambracci all interno della cappa per non alterare il flusso la minare della cortina d aria e spostare le braccia lentamente e perpendicolarmente al fronte di apertura della cappa Rispettare durante l attivit lavorativa un flusso da pulito a contamin
16. MOGM anche radioattivi i quali sono per esclusi dalla disciplina ordinaria dei rifiuti in quanto regolamentati da normativa speciale ovvero dal D Lgs n 230 1995 come modificato ed integrato dal D Lgs n 241 2000 Sono definiti rifiuti radioattivi quei materiali di scarto che contengono o sono contaminati da radionuclidi e la cui concentrazione o attivit specifica maggiore di un valore di soglia In particolare il decreto sopra citato stabilisce che i rifiuti radioattivi possono essere smaltiti nell ambiente conferiti a terzi e riciclati o riutilizzati come rifiuti speciali qualora rispettino le seguenti condizioni e tempo di dimezzamento lt 75 giorni e concentrazione di radionuclidi lt 1 Ba g fissando cos di fatto le condizioni di soglia di radioattivit per i rifiuti Per quanto riguarda le caratteristiche di pericolosit occorre individuare le tipologie di rifiuti prodotti durante l uso confinato Un elenco esemplificativo della merceologia dei rifiuti che possono essere prodotti da un laboratorio di ricerca di una struttura sanitaria riportato nella Tabella 16 Organici Cartacei Plastica Plastica Metalli Tessili Cuoio e Liquidi biologici leggera pesante gomme asporti chirurgici carta da involucri provette aghi garze guanti sangue stampa contenitori siringhe monouso cartone da pipette imballo carta uso ufficio sangue coagulato tovagliolini strumenti mascherine pompette urina da pulizia facciali
17. SOP o un piano di emergenza e g smaltimento dei rifiuti o incidenti da punture accidentali La valutazione del rischio ambientale deve indicare se misure speciali al di fuori di procedure standard cliniche devono essere prese affinch i rischi ambientali siano tollerabili Trattamento dei rifiuti Pu essere necessario utilizzare disinfettanti e successivo trattamento dei rifiuti Le questioni ambientali che derivano valutazione di rischio ambientale Dovrebbe anche essere considerata la disinfezione dei materiali utilizzati per il trasporto la preparazione o la somministrazione comprese superfici strumenti cappe abbigliamento e guanti l efficacia dei metodi di disinfezione proposta le misure adottate a seguito di un rilascio Monitoraggio Di seguito devono essere considerati anche post commercializzazione effetti attesi su altri individui su animali e o delle piante in materia di ambiente un piano di monitoraggio o motivazioni per non realizzarlo istituzione di metodi di monitoraggio per prevenire la diffusione al personale medico o persone per l ambiente Tabella 12 DETERMINAZIONE DEL RISCHIO GENERALE DELL OGM Una valutazione del rischio generale dell OGM deve essere effettuata tenendo conto delle strategie di gestione dei rischi che vengono proposte Sulla base delle fasi individuate in precedenza dovrebbe essere valutato se l impatto ambientale accettabile o meno Questa valutazione finale dovrebbe es
18. altri effetti tossici ma che non ne rappresentano una conseguenza secondaria aspecifica tuttavia tali elementi comprovanti sono insufficienti per classificare la sostanza nella categoria 2 altri dati pertinenti Sostanze che potrebbero produrre alterazioni negli esseri umani a causa dei loro probabili effetti tossici sullo sviluppo In genere le sostanze si reputano tali sulla base di risultati di adeguati studi su animali che forniscono prove sufficientemente valide da corroborare il forte sospetto di tossicit sullo sviluppo in assenza di segni di forte tossicit materna a livelli di dose approssimativamente analoghi a quelli correlati ad altri effetti tossici ma che non ne rappresentano una conseguenza secondaria aspecifica tuttavia riscontri sono insufficienti per classificare la sostanza nella categoria 2 altri dati pertinenti Xn Nocivo Sostanze che potrebbero avere effetti sulla fertilit umana R62 Possibile rischio di ridotta fertilit Sostanze che potrebbero produrre danni sugli esseri umani a causa dei loro probabili effetti tossici sullo sviluppo R63 Possibile rischio di danni al bambini non ancora nati 45 H11 Mutageno sostanze e preparati che per inalazione ingestione o penetrazione cutanea possono produrre difetti genetici ereditari o aumentarne la frequenza per maggior chiarezza si riportano in Tabella 19 le categorie di mu tagenicit previste dalla n
19. con carta assorbente imbevuta di disinfettante versare altro disinfettante intorno all area dello sversamento il materiale versato dovra rimanere in contatto con il disinfettante per almeno 20 minuti autoclavare tutta la carta usata i guanti ed altro materiale utilizzato per pulire lo sversamento Sversamento e o rottura di provette in area di lavoro Indossare indumenti protettivi e i guanti due paia nel corso di tutta l operazione ricoprire prima di indossare i guanti eventuali tagli abrasioni piccole ferite ecc indossare una maschera facciale usare spazzola e palette per togliere i frammenti di vetro inserire i pezzi di vetro in un contenitore ermetico che a sua volta deve essere inserito in un contenitore per la sterilizzazione utilizzare carta assorbente per rimuovere il materiale e disinfettare la superficie con una soluzione di ipoclorito di sodio al 2 5 o altro tipo di disinfettante aspettare per almeno 30 minuti rimuovere delicatamente la carta assorbente e gli eventuali pezzi di vetro con pinzette sanificare ripetendo l operazione di asciugatura con carta alternata con disinfettante autoclavare tutti i materiali utilizzati Sversamento del materiale all interno di una centrifuga ispezionare sempre i tubi per verificare la presenza di rotture o fessure prima di centrifugare bilanciare i tubi e posizionarli in modo adeguato facendo attenzione ad utilizzare l adattatore idoneo per i tubi specifici e a n
20. contaminato in contenitori chiusi e a tenuta perfettamente puliti all esterno ed etichettati con il segnale di rischio biologico e non chiudere al di fuori della cappa il sacchetto per rifiuti a rischio biologico da autoclavare e decontaminare le superfici di tutti i contenitori e le attrezzature prima di essere rimossi dalla cappa quando il lavoro stato completato e non portare fuori della cappa i materiali potenzialmente contaminati se non dopo essere stati decontaminati sulla superficie esterna in alternativa i materiali contaminati possono anche essere messi in un contenitore a chiusura e trasferiti in incubatore in autoclave o in altro dispositivo per la decontaminazione e lasciare la cappa in funzione per circa 20 minuti al termine del lavoro per eliminare eventuali contaminazioni e pulire e disinfettare la cappa ad ogni fine lavoro con prodotti idonei La superficie di lavoro le pareti interne e la superficie interna del vetro devono essere puliti con etanolo EtOH al 70 o una soluzione diluizione 1 100 di ipo clorito di sodio 0 05 o altri disinfettanti Quando viene utilizzato ipoclorito necessario effettuare un secondo la vaggio con acqua sterile per eliminare il cloro residuo che pu corrodere le superfici in acciaio inossidabile Se ne cessario la cappa deve essere monitorata per la radioattivit e la decontaminazione e chiudere l apertura frontale quando la cappa biologica non utilizzata eventualmente accen
21. del sistema immunitario lungo termine bassa produzione applicazione in tumori di tessuti infettano solo cellule in attiva non proliferanti dove solo cellule replicazione non adatti nelle cancerogene sono in attiva patologie con tessuti con replicazione replicazione consentendo una cellulare ridotta o nulla es tessuto infezione selettiva rispetto al nervoso tessuto circostante Retrovirus sono classificati in 7 subgeneri alfa beta gamma delta e epsilon retrovirus pi i lentivirus e gli soumavi rus Gammaretrovirus conosciuti come oncoretrovirus ad es murine leukaemia viruses MuLV feline leukaemia virus FeLV e gibbon ape leukemia virsus GALV sono stati per 12 anni i virus pi utilizzati per lo sviluppo di vettori e per le applicazioni cliniche vettori retrovirali che derivano principalmente dall oncoretrovirus Moloney Leukemia Virus MoLV sono stati tra i primi ad essere sviluppati grazie alla relativa semplicit di costruzione alla loro capacit di trasdurre un ampia variet di tipi cellulari integrandosi all interno del genoma e alla loro non patogenicit per l uomo Questi vettori sono in grado di accogliere fino a circa 7Kb di DNA esogeno contenente il transgene Nonostante questi vantaggi la divisione cellulare un requisito indi spensabile per permettere a questi vettori di trasdurre la cellula e di integrare il genoma e questo limita il loro utilizzo a bersagli cellulari che naturalmente o artifici
22. della Legge n 123 del 3 agosto 2007 rappresenta un traguardo importante per la tutela della salute sul posto di lavoro La novit del Testo Unico sta innanzi tutto nel principio di fondo che lo ispira ossia nella ferma volont di un riordino armonico e uniforme del complesso disorganico delle leggi promulgate negli ultimi cinquant anni in materia di tutela del lavoro Tali normative risultavano spesso contraddittorie fra loro e non sufficienti alla tutela dei lavoratori mentre il nuovo testo unico ne integra i deficit con nuove norme allarga il campo di applicazione a qualsiasi tipologia di lavoratore e parifica il settore pubblico e quello privato in modo conforme alla Costituzione italiana e alle direttive europee tenendo conto delle autonomie regionali e degli statuti speciali STRUTTURA DEL DECRETO LEGISLATIVO 81 08 GU N 101 DEL 30 04 08 Art 298 303 Art 304 306 Il decreto diviso in dodici titoli e cinquantuno allegati Tabella 4 Le disposizioni e le definizioni generali comuni a tutte le attivit lavorative nell ambito dell organizzazione di un datore di lavoro sono contenute nel Titolo successivi sono i Titoli speciali ognuno dei quali tratta un settore di attivit e una tipologia di rischio sul lavoro La normativa premia e incentiva l osservanza e la diffusione di una cultura della sicurezza sin dalla scuola in cui viene inserita come materia Il decreto stabilisce e definisce infatti gli organi is
23. delle biotecnologie Il presente cd rom evidenzia in maniera chiara ed esaustiva processi lavorativi e le misure di controllo atte ad evitare o minimizzare il rilascio di MOGM nei luoghi di lavoro e nell ambiente ed espone dettagliatamente la procedura di valutazione dei rischi correlati con l impiego confinato di MOGM in conformit alla Direttiva 98 81 CE recepita in Italia con il D Lgs n 206 del 12 aprile 2001 Il Commissario Straordinario Prof Antonio Moccaldi edi ST L Istituto Superiore per la Prevenzione e la Sicurezza del Lavoro ISPESL un organo tecnico scientifico del Servizio Sanitario Nazionale SSN Esso un ente di diritto pubblico con funzioni tecnico scientifiche di ricerca sperimentazione controllo consulenza documentazione assistenza informazione e formazione in materia di prevenzione degli infortuni sicurezza sul lavoro tutela della salute negli ambienti di vita e di lavoro L ISPESL svolge le sue funzioni in numerosi ambiti di ricerca e sperimentazione autonomamente o in collaborazione con altre strutture del S S N e con Enti pubblici e privati di riconosciuto valore scientifico In collaborazione col Ministero della Salute l ISPESL partecipa a progetti di ricerca finalizzata all elaborazione di proposte normative nazionali ed internazionali attraverso personale altamente qualificato nel controllo di specifici settori lavorativi Fra gli importanti compiti istituzionali affidati all ISPESL
24. e le attivit in sicurezza durante le operazioni di lavoro pulizia e manutenzione evitando possibili urti accidentali contro le apparecchiature o tra gli operatori Deve essere previsto lo spazio sufficiente per conservare in ordine i materiali in uso e per evitarne l accumulo sui banconi e nei corridoi deve essere previsto uno spazio opportunamente posto al di fuori delle aree di lavoro del laboratorio per l im magazzinamento dei materiali Inoltre devono essere previsti spazi e mezzi adeguati per l impiego in sicurezza e la conser vazione di solventi materiali radioattivi gas compressi e liquefatti Per quantitativi limitati di sostanze pericolose comprese quelle infiammabili sufficiente l installazione di armadi ventilati di sicurezza con elevate caratteristiche antincendio ca ratteristiche di sicurezza passiva resistenza al fuoco fino a REI 180 di sicurezza attiva ante dotate di sistema di chiusura a battente con ritorno automatico elettroaspiratore con motore esterno termoprotetto canale di espulsione con serranda tagliafuoco le quali assicurino che il flusso d aria in espulsione aspirazione forzata sia convogliato verso l esterno Per quan titativi superiori a 20 litri di infiammabili lo stoccaggio deve essere realizzato in un deposito esterno o interno al volume dell edificio avente specifiche caratteristiche di sicurezza Le superfici dei piani di lavoro devono essere impermeabili resistenti ai disinfettanti acid
25. elevata asepsi e accesso controllato ad esempio mediante lettore di un badge elettronico nelle vicinanze della porta di ingresso e la porta di ingresso pu aprirsi solo dopo aver ottenuto l abilitazione Spogliatoio La vestizione avviene prima della riga gialla o eventuale panca e indossare cuffia all interno della quale inserire i capelli che devono essere legati e lavare le mani consigliato sapone sterile a base di etanolo o materiale di equivalente efficacia i tempi e le modalit di applicazione del sapone devono essere quelli riportati dal produttore e indossare il primo paio di guanti e solo successivamente il camice Come regola generale il primo paio di guanti deve essere indossato per primo e tolto per ultimo usare preferibilmente guanti di vinile a contatto con la pelle e indossare il sovracamice in tyvek azzurro verde con polsi elasticizzati e proteggere delle membrane mucose mediante l uso di mascherina e di occhiali di protezione o schermo antischizzi e indossare i sovrascarpe stando seduti sulla panca passare una gamba alla volta nella zona pulita solo dopo aver messo il corrispondente sovrascarpe evitando di calpestare la zona sporca e superare la linea gialla o la panca e accedere alla camera di compensazione Air lock camera di compensazione e accedere alla camera di compensazione dallo spogliatoio e attendere che la porta si chiuda per poter accedere al laboratorio nel caso le due po
26. generazione a differenza dei loro predecessori i vettori oncoretrovirali stanno raggiungendo solo adesso le prime fasi di sperimentazione clinica ma rappresentano una promessa di cura per molte malattie genetiche 25 Recetors Cmoplasma vettore contenente Transge rie Gene terapeutico Il gene terapeutico mene incorporato nel genoma della cellula ee Il gene vie ne tradotta Il gene terapeutico in proteina vien espresso Figura 10 Fasi della trasduzione mediata da vettori retrovirali Il vettore contenete il transgene attraversa lamembrana plasmatica della cellula bersaglio Il genoma virale a RNA viene ri lasciato all interno della cellula dove viene retrotrascritto in DNA a doppio filamento dalla trascrittasi inversa Il pro virus entra nel nucleo si integra nel genoma della cellula ospite dove utilizza i meccanismi propri della cellula e il transgene integrato viene trascritto in MRNA e tradotto in proteina come un normale gene cellulare VETTORI LENTIVIRALI Caratteristiche virus a RNA enzima trascrittasi inversa permette di sintetizzare un DNA complementare mediano il trasferimento e l espressione di geni eterologhi transgeni in una variet di cellule veicolano inserti di DNA lunghi sino a 8kb lunghezza dell inserto limitata a permettono espressione a 8Kb lungo termine del transgene difficolt nel produrre particelle di possono mediare il vettore stabile ad alto titolo trasf
27. gerarchia dei rischi sono fornite dagli accordi europei sul trasporto internazionale delle merci pericolose su strada ADR di cui si riportano le disposizioni di interesse nell Appendice X Ove sia comunque presente il ri schio di infettivit o di presenza di materiale contaminato da MOGM per cui prescritta l inattivazione se il rifiuto viene co dificato sulla base di altri rischi prevalenti va indicata sul contenitore la necessit della sterilizzazione e o dell inattivazione La separazione dei rifiuti alla fonte ha il duplice obiettivo di e ridurre il rischio di esposizione ai microrganismi degli operatori che manipolano i rifiuti e prevenire la contaminazione di altri rifiuti riducendo la quantit complessiva dei rifiuti a rischio biologico prodotti Inoltre opportuno rammentare che ai sensi dell art 187 del D Lgs n 152 2006 vietato miscelare categorie diverse di rifiuti pericolosi di cui all Allegato G del decreto ovvero rifiuti pericolosi con rifiuti non pericolosi a meno che ci non rechi alcun pregiudizio all ambiente e sia finalizzato a rendere pi sicuro il recupero e lo smaltimento La miscelazione deve essere comunque autorizzata Ai fini della corretta differenziazione dei rifiuti che influenzer anche l eventuale deposito presso la struttura di produzione pu essere utile riportare lo schema di compatibilit chimica tra diversi gruppi di sostanze tradotto dall IPPC Reference Do cument on Best Availab
28. i sviluppo di tumori cancro per inalazione Categoria 2 Sostanze che dovrebbero T Tossico R 45 PU considerarsi cancerogene per provocare i l uomo Esistono elementi cancro sufficienti per ritenere verosimile R 49 PU che l esposizione dell uomo alla provocare il sostanza possa provocare lo cancro per sviluppo di tumori in generale inalazione sulla base di adeguati studi a lungo termine effettuati su animali altre informazioni specifiche Categoria 3 Sostanze da considerare con Xn Nocivo R 40 Possibilit di sospetto per i possibili effetti effetti cancerogeni sull uomo per le cancerogeni quali tuttavia le informazioni prove insufficienti disponibili non sono sufficienti per procedere ad una valutazione soddisfacente Esistono alcune prove ottenute da adeguati studi sugli animali che non bastano tuttavia per classificare la sostanza nella Categoria 2 Tabella 17 Corrosivo sostanze e preparati che a contatto con tessuti vivi possono esercitare su di essi un azione distruttiva Infettivo sostanze contenenti microrganismi vitali o loro tossine conosciute o ritenute per buoni motivi come cause di malattie nell uomo o in altri organismi viventi Teratogeno ora Sostanza tossica per il ciclo riproduttivo sostanze e preparati che per inalazione ingestione o penetrazione cutanea possono produrre malformazioni congenite non ereditarie o aumentarne la frequenza
29. inserito nel circuito dei rifiuti pericolosi a rischio infettivo non dovrebbe in ogni caso essere sottoposto a disinfezione in quanto i disinfettanti potrebbero generare problemi di carico emissivo presso gli impianti bens sarebbe opportuno che fosse sottoposto a sterilizzazione Non bisogna dimenticare poi che l infettivit e la mutagenicit indotta da microrganismi sono le uniche caratteristiche di pe ricolo verso le quali l inattivazione pu essere efficace opportuno inoltre ricordare due fattori fondamentali ai fini della corretta individuazione del destino finale del rifiuto e il rifiuto pur se inattivato continua a conservare altre caratteristiche di pericolo in funzione della sua natura e della sua origine ed molto importante tenerne conto ai fini della sicurezza degli operatori in tutte le fasi di gestione del rifiuto e l articolo 6 del decreto legislativo n 36 2003 stabilisce che non possono essere ammessi in discarica rifiuti che rientrano nella categoria 14 dell Allegato G1 al D Lgs n 22 1997 ora abrogato e sostituito dalla parte IV del D Lgs n 152 2006 ovvero sostanze chimiche non identificate e o nuove provenienti da attivit di ricerca di sviluppo o di insegnamento i cui effetti sull uomo e o sull ambiente non sono noti es rifiuti di laboratorio Quindi il rifiuto sulla base del rischio residuo a seguito dell inattivazione pu essere consegnato ad una ditta specializzata Considerando la gerar
30. ispezionare l interno della camera e del portello dell autoclave per controllarne lo stato di conservazione pulire le superfici interne con detergente idoneo per superfici in acciaio rimuovendo eventuali residui e incrostazioni CENTRIFUGHE Tipologie differenti di centrifughe si differenziano in base a specifici parametri di centrifugazione come la velocit massima l accelerazione il tempo di centrifugazione il volume massimo il profilo di frenata Un microprocessore riconosce il rotore montato e ne inserisce automaticamente le caratteristiche come raggio di centrifugazione valore della velocit massima etc Tabella 28 Per un adeguato contenimento le centrifughe hanno bisogno di accessori aggiuntivi quali i contenitori di sicurezza o rotori di contenimento Alcune centrifughe e altre attrezzature quali cell sorting usati con cellule infette per un contenimento ef ficiente possono necessitare di una ventilazione aggiuntiva a scarico locale con filtraggio HEPA Tipologia Velocit rpm Microcentrifuga Low high speed 2 000 20 000 Ultracentrifuga 120 000 Tabella 28 Procedure operative e Controllare l efficace funzionamento meccanico della centrifuga e Seguire le indicazioni riportate sul manuale di istruzioni ed effettuare periodica manutenzione e Collocarle in modo che siano accessibili e che i lavoratori possano ben vedere l interno della camera del rotore per posizionare correttamente portacestelli e c
31. l Allegato della direttiva 67 548 CEE sostituendolo con la tabella 3 2 dello stesso regolamento CLP e dal 12 dicembre 2010 le direttive 2006 12 CE relativa ai rifiuti e 91 689 CE relativa ai rifiuti pericolosi saranno integralmente sostituite dalla direttiva 2008 98 CE comunque gi recante modifiche alla 91 689 CE La direttiva 2008 98 CE apporta le seguenti novit alle caratteristiche di pericolo 50 v definisce la caratteristica H10 in conformit all Allegato VI della direttiva 67 548 CE come consolidato dal 28 adeguamento direttiva 2001 59 CE ovvero Tossico per la riproduzione y sostituisce la caratteristica H13 con la seguente utilizzabile se disponibili metodi di prova Sensibilizzanti sostanze e preparati che per inalazione o penetrazione cutanea possono dar luogo ad una reazione di ipersen sibilizzazione per cui una successiva esposizione alla sostanza o al preparato produce effetti nefasti caratteristici attualmente infatti la decisione 2000 532 CE che ha introdotto l Elenco Europeo dei Rifiuti non si allinea con la di rettiva 88 379 CEE sui preparati pericolosi come modificata dalla direttiva 99 45 CE per tale categoria che non risulta riconducibile a nessuna delle caratteristiche di pericolo individuate nella direttiva 91 689 CE v l attuale caratteristica H13 diventa H15 Caratterizzazione e raccolta Per la caratterizzazione si forniranno le indicazioni delle norme UNI EN 12461 e 12470 chiar
32. la categoria A Se invece i materiali non rispondono alla definizione di materie infettanti ma possono causare agli animali ai vegetali o alle materie microbiologiche modifiche che normalmente non risultano dalla naturale riproduzione sono assegnati alla classe 9 Materie ed oggetti pericolosi diversi N ONU 3245 Il titolo della classe 9 prevede 11 tipologie di cui la M8 tra quelle relative a sostanze pericolose per l ambiente riservata ai microrganismi e organismi geneticamente modificati I MOGM e gli OGM non sono sottoposti alle disposizioni dell ADR quando le autorit competenti dello Stato di origine di transito e di destinazione ne autorizzano l utilizzazione autorizzazione di disseminazione volontaria nell ambiente Essi devono essere trasportati conformemente alle condizioni specificate dall autorit competente del paese di origine Se invece rientrano nella definizione di sostanze infettanti e nei criteri per l inclusione nella Classe 6 2 devono essere trasportati come UN 2814 2900 o 3373 Relativamente alla caratteristica infettante l ADR fornisce un ordine di precedenza per la classificazione della materia so luzione o miscela nella classe o gruppo di materie corrispondente al pericolo preponderante La lista di priorit dei rischi la seguente e si evidenzia che le materie infettanti della classe 6 2 sono all ultimo posto 1 Materiale di Classe 7 radioattive eccetto i materiali in imballaggi esentati per c
33. la stesura delle leggi correndo inoltre il rischio di cristallizzare la tecnologia al momento della stesura della legge Un altro aspetto importante in questa introduzione consiste nel ricordare i continui richiami della normativa di legge all obbligo di mettere in pratica tutte le misure possibili per favorire la salute e la sicurezza dei lavoratori e della popolazione Si trovano infatti frequenti citazioni ai concetti di utilizzo della migliore tecnologia disponibile ed al contenimento del pericolo alla fonte A seguito di questo nuovo atteggiamento del Legislatore quindi i progettisti ed i gestori degli impianti si trovano di fronte a scelte difficili da una parte hanno indicazioni meno dettagliate che provengono dalla normativa dall altra si trovano richieste molto pressanti a favore della sicurezza del lavoro Le tecnologie che sono illustrate rispondono ai requisiti di buona tecnica richiesti dalla legge Si tratta di contenere la polvere pericolosa all interno di un volume che normalmente il pi piccolo possibile ed sempre costruito attorno alla fonte di emissione della polvere stessa Inoltre l isolatore costituisce una vera e propria barriera fisica che si interpone tra l operatore ed il pericolo e costituisce fino ad oggi la migliore tecnologia per agenti biologici pericolosi o per raggiungere valori bassissimi di concentrazione di polvere fortemente attiva nell ambiente di lavoro 93 3
34. lavaggio di queste macchine L utilizzo di tali isolatori trova applicazione nell industria chimica farmaceutica nei laboratori di ricerca e sviluppo e in campo ospedaliero e delle forze dell ordine Sostanze in polvere Una doverosa premessa riguarda il fatto che in tale approfondimento si far riferimento quasi sempre a sostanze pericolose in polvere tuttavia gli isolatori come sopradetto sono utilizzati ad es durante la manipolazione di farmaci citotossici for temente attivi per esigenze di salvaguardia dell operatore e del prodotto o per impieghi con microrganismi ad alto rischio Informazioni su prodotto e processo Come in tutti i casi in cui si deve affrontare un problema molto complesso anche nel contenimento di composti fortemente attivi occorre procurarsi tutta una serie di informazioni inerenti il prodotto da trattare ed il processo chimico e tecnologico per ottenere il prodotto stesso Quanto pi dettagliate e precise saranno queste informazioni e tanto pi sar possibile studiare un impianto che soddisfi tutte le esigenze create dalla manipolazione della sostanza pericolosa e sar evitato anche il sovradimensionamento di tutto Il sistema dai costi elevati dati importanti riguardano i parametri chimico fisici del prodotto ed i dati che riguardano la solubilit e l inattivazione delle sostanze trattate Occorre insomma una conoscenza dettagliata della lavorazione che si dovr effettuare per potere indi
35. le varie apparecchiature di impianto per mezzo di vari sistemi che forniscono diversi gradi di contenimento C M Wagner J E Akers Isolator Technology applications in the pharmaceutical and biotechnology industries Interpharm press circa 360 pagg Testo molto completo con grafici schemi e fotografie Sono rappresentati dettagli costruttivi delle porte speciali per tra sferimento di materiali molto attento all applicazione degli isolatori qualora occorra preservare la sterilit del prodotto in impianti di farmaceutico secondario Tuttavia anche chi interessato all applicazione di isolatori per la salvaguardia degli operatori trover utili indicazioni 9 Conclusioni Anche se notevolmente anticipata nella trattazione precedente comunque opportuno ribadire la conclusione che nono stante il loro costo gli isolatori sono sicuramente quanto di meglio la tecnologia offra oggi per risolvere il problema dell espo sizione degli operatori ad agenti chimici o biologici potenzialmente pericolosi 101 9 788889 415979
36. menti professionali consultabile dagli operatori in modo interattivo Il Direttore Generale Gli sviluppi in campo biomedico genomica neuroscienze oncologia molecolare ecc e l innovazione tecnologica diagno stica medica biotecnologie informatica sanitaria ecc indirizzano sempre pi la sperimentazione e le sue applicazioni te rapeutiche verso l utilizzo dei microrganismi geneticamente modificati MOGI In materia di prevenzione e di sicurezza per la salvaguardia della salute umana e dell ambiente le relative misure da adottare nascono da un accurata valutazione di rischio correlata con la produzione e o con la commercializzazione dei prodotti bio tecnologici MOGM compresi Infatti tutti gli impieghi di MOGM ottenuti con tecniche di trasferimento di informazioni ge netiche in Italia sono attualmente soggetti a severe procedure di notifica e di autorizzazione ed avvengono sotto il controllo dell Autorit Competente ovvero il Ministero della Salute Il Manuale relativo alla sicurezza nei laboratori che fanno uso di microrganismi geneticamente modificati il risultato di attivit di studio e di ricerca di un progetto CCM finanziato e realizzato da esperti ricercatori dell ISPESL il cui intento quello di offrire agli operatori biotecnologici un valido strumento operativo che riassume in s la formazione l informazione la di vulgazione e l interattivit delle principali problematiche attinenti al settore
37. nell ambiente 14 e effetti negativi dovuti al trasferimento per via naturale ad altri organismi del materiale genetico inserito Tali informazioni si evidenziano da una disamina delle singole caratteristiche biologico molecolari dell organismo ricevente dell organismo donatore dell inserto del sito di inserzione e del relativo vettore importante rilevare che la modificazione genetica di un microrganismo pu modificare le sue caratteristiche biologiche e quindi pu diminuire aumentare o lasciare inalterato il potenziale di danno di un MOGM sulla salute umana e sull ambiente Organismo ricevente e la patogenicit e virulenza infettivita allergenicit tossicit e possibilit di fungere da vettore di agenti patogeni e la natura dei vettori indigeni e degli agenti avventizi laddove sussiste il rischio di una mobilizzazione del materiale genetico inserito e la frequenza della mobilizzazione del materiale genetico inserito se presente e lanaturae stabilit delle eventuali mutazioni disabilitanti e le eventuali modificazioni genetiche precedenti e lagamma degli organismi ospiti se pertinenti e gli eventuali tratti fisiologici significativi che potrebbero essere alterati nel MOGM finale o la relativa stabilit se pertinenti e l habitat naturale e la distribuzione geografica e la partecipazione significativa in processi ambientali naturali ad es fissazione dell azoto regolazione del pH e l interazi
38. o misure di organizzazione dell attivit lavorativa La scelta di adeguati DPI deve avvenire sulla base dell analisi e della valutazione del rischio Essi devono essere specifici per le diverse tipologie di rischio essere corredati di marcatura CE per la protezione da agenti biologici ai sensi del D Lgs 475 92 e o della Direttiva 686 89 CE Inoltre devono essere classificati in III categoria ed avere la conformit alla EN 14126 Nel caso di protezione da patologie infettive emergenti di rilievo devono essere monouso La protezione da agenti biologici deve rispondere a delle regole quali 1 proteggere parti anatomiche esposte base del collo busto braccia gambe 2 la lunghezza dei camici deve essere almeno al di sotto del ginocchio le maniche devono essere lunghe con i polsini prov visti di elastici per aderire ai polsi ed impedire l esposizione della parte interna delle braccia 3 la progettazione di indumenti costituiti da pi parti deve essere tale da garantire protezione in tutte le prevedibili posture di lavoro 4 qualsiasi indumento deve assicurare un adeguata protezione lungo le parti di chiusura 5 gli indumenti devono essere indossati per tutto il tempo in cui permane il rischio di esposizione 6 ogni indumento di protezione deve essere accompagnato da una nota informativa nella quale deve essere evidenziato il possesso delle proprie caratteristiche e specifiche tecniche 7 gli indumenti di protezione per gli agenti
39. per maggior chiarezza si riportano in Tabella 18 le categorie di tossicit per il ciclo riproduttivo previste dalla nor mativa vigente su classificazione ed etichettatura delle sostanze pericolose 43 44 TOSSICIT PER IL CICLO RIPRODUTTIVO CATEGORIA Categoria 1 Categoria 2 DESCRIZIONE SIMBOLO E INDICAZIONI PERICOLO Sostanze che danneggiano la T Tossico fertilit negli esseri umani Esistono prove sufficienti per stabilire un nesso causale tra l esposizione umana alla sostanza e un calo della fertilit Sostanze con effetti tossici sullo sviluppo umano Esistono prove sufficienti per stabilire un nesso causale tra l esposizione umana alla sostanza e successivi effetti tossici nel corso dello sviluppo della progenie Sostanze che dovrebbero essere T Tossico considerate in grado di danneggiare la fertilit negli esseri umani Esistono prove evidenti per sospettare che l esposizione umana alla sostanza possa incidere sulla fertilit sulla base di prove evidenti di danno della fertilit negli animali in assenza di effetti tossici oppure elementi comprovanti danni della fertilit riscontrati a livelli di dose approssimativamente analoghi a quelli correlati ad altri effetti tossici ma che non ne rappresentano una conseguenza secondaria aspecifica altri dati pertinenti Sostanze che dovrebbero essere considerate in grado di provocare effetti tossici sullo sviluppo umano Esistono prove suf
40. proteggere il lavoratore da eventuale formazione di aerosol Deve essere presente un autoclave nell edificio al fine di poter inattivare i rifiuti prima dello smalti mento Livello 3 laboratorio di contenimento indicato quando si compiono operazioni che presentano un rischio moderato ovvero operazioni per le quali un livello 3 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Destinato a dia gnostica specialistica o ricerca Devono essere applicate le misure di contenimento e di protezione previste dall Allegato IV del D Lgs 206 01 gli operatori devono essere forniti di dispositivi di protezione individuale l accesso deve essere controllato il laboratorio deve essere in depressione necessaria la presenza di una cappa di sicurezza biologica di classe Il il cui utilizzo necessario in tutte le operazioni effettuate Livello 4 laboratorio di contenimento indicato quando si compiono operazioni che presentano un rischio alto ovvero ope razioni per le quali un livello 4 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Destinato a diagnostica specialistica o ricerca con materiali infetti e o microrganismi con un rischio potenziale o accertato elevato per l operatore e la comunit Devono essere applicate le misure di contenimento e di protezione previste dall Allegato IV del D Lgs 206 01 gli operatori devono essere forniti di dispositivi di protezione individuale l accesso deve esse
41. ridurre l immissione di contaminanti microbici nell area di lavoro rispettare durante l attivit lavorativa un flusso da pulito a contaminato introdurre i materiali nella cappa limitando il movimento di materiale sporco verso aree o oggetti pi puliti stilare prima di iniziare a lavorare una lista del materiale da introdurre nella cappa strettamente necessario all attivit lavorativa per evitare di interrompere pi volte il flusso dell aria con l introduzione di nuovo materiale ridurre al minimo indispensabile il materiale o le attrezzature sul piano di lavoro per non diminuire il flusso di aria ed evitare turbolenze possibili contaminazioni incrociate e o violazioni del grado di contenimento iniziare la manipolazione dei materiali dopo circa un minuto dall immissione delle mani braccia all interno della cappa in modo da far stabilizzare il flusso d aria nella cappa ed effettuare l air sweep delle mani e delle braccia per rimuovere i contaminanti microbici presenti sulla loro superficie Quando le braccia dell operatore sono poggiate sulla parte anteriore della griglia della cappa il flusso di aria della stanza potrebbe convergere nell area di lavoro invece di essere aspirata attraverso la griglia frontale Alzare leggermente le braccia potr in parte risolvere il problema non bloccare con pipette fogli o altro materiale la griglia frontale dell aria per evitare potenziali contaminazion
42. riportano schematicamente nella Tabella 23 i principali obblighi relativi a tutte le attivit coinvolte dalla produzione allo smaltimento finale obbligo si applica nei casi segnalati in grigio Deposito temporaneo Commercio ed intermediazione per FIR senza detenzione raccolta e trasporto controfirma Stoccaggio 8 smaltimento recupero 9 controfirma Tabella 23 Sistema di controllo della tracciabilit dei rifiuti istituito con i DM Ambiente 17 12 2009 e 15 02 2010 entrata in vigore 14 1 2010 primo termine iscrizione per alcune categorie entro 75 gg L iscrizione necessaria per essere abilitati ad accedere al SISTRI soggetti obbligati Ma prevista anche un adesione volontaria dovranno comunicare quantit e caratteristiche dei rifiuti oggetto della loro attivit attraverso il SISTRI utilizzando dei dispositivi elettronici tipo chiavette USB collegati ad un centro raccolta dati La responsabilit del produttore dei rifiuti per il corretto recupero o smaltimento degli stessi esclusa in caso di conferimento di rifiuti al servizio pubblico di raccolta o a seguito dell invio da parte del SISTRI alla casella di posta elettronica attribuitagli automaticamente dal sistema della comunicazione di accettazione dei rifiuti medesimi da parte dell impianto di recupero o smaltimento 1 soltanto per rifiuti pericolosi e rifiuti non pericolosi derivanti da lavorazioni industriali e artigianali ed i ri
43. rubinetti lampade UV ove presenti 69 Misura della velocita di aspirazione con anemometro secondo norma UNI EN 12469 Verifica periodica della presenza di microrganismi nell aria filtrata esoonendo per 30 minuti delle capsule Petri aperte contenenti terreni di coltura per la crescita di batteri eterotrofi e di miceti disposte in punti rappresentativi della su perficie di lavoro o in alternativa usare contatori di particelle Cappe biologiche di classe III glove box Verifica e sostituzione dei filtri come previsto dal libretto d uso e manutenzione Verifica e pulizia delle tubazioni di scarico ove presenti Verifica del funzionamento elettrico e meccanico del motore dell elettroventilatore ove presente Verifica ore funzionamento dei filtri Ove possibile Verifica generale di parti strutturali ad es aperture alle quali vanno applicate i guanti ecc indicatori e allarmi ove presenti impianto elettrico rubinetti lampade UV ove presenti Verifica della depressione interna secondo norma UNI EN 12469 Verifica della velocit dell aria entrante da ciascuna delle aperture alle quali vanno applicate i guanti secondo norma UNI EN 12469 Verifica della portata d aria secondo norma UNI EN 12469 filtri sostituiti devono essere eliminati come rifiuto speciale utilizzando il Codice CER 15 02 02 Regole pratiche per l uso delle cappe biologiche L uso delle cappe biologiche di sicurezza deve essere spiegat
44. scientifici In particolare andranno considerati i seguenti punti a motivazione della necessit della competenza per la replicazione del vettore virale ai fini dell efficacia del medicinale sperimentale b dimostrazione dell assenza di elementi genetici potenzialmente coinvolti in processi oncogenetici se non giustificati dall approccio sperimentale c se il virus parentale ha propriet patogenetiche indicazione del tipo di manipolazioni genetiche effettuate per eliminare l effetto patogenetico dal prodotto finito oppure delle misure terapeutiche disponibili d indicazione dei tessuti dove ci si aspetta la replicazione del vettore fornendo evidenze che confermino l ipotesi valutazione della sicurezza d uso oltre che per il paziente anche per gli operatori sanitari e per la popolazione umana in generale Nel caso di vettori virali non competenti per la replicazione questi devono necessariamente essere prodotti attraverso l espressione delle funzioni difettive nel vettore in adatte linee cellulari packaging cells Saranno quindi richieste l origine e le caratteristiche delle packaging cells nonch la descrizione caratterizzazione e sequenziamento quest ultimo solo nel caso di vettori retrovirali e lentivirali di tutti i costrutti molecolari che forniscono le funzioni difettive al vettore virale Particolare attenzione dovr essere rivolta nel ridurre al minimo la possibilit di eventi di ricombinazione in grado di g
45. sicurezza per la manipolazione di azoto liquido e guanti per autoclave Norme di comportamento e indossare sempre i dispositivi di protezione individuale DPI e evitare l uso di recipienti in vetro aghi o forbici al fine di ridurre il rischio di ferite o abrasioni con materiale infetto Tali materiali non devono essere presenti se non strettamente necessari e non portare oggetti alla bocca non toccarsi occhi e viso vietato l uso di pipettare a bocca utilizzare i pipettatori e manipolare agenti biologici utilizzando sempre le cappe di sicurezza biologica e etichettare correttamente tutti i recipienti in modo che si possibile riconoscerne il contenuto anche a distanza di tempo e prima di manipolare qualsiasi agente biologico non noto raccogliere tutte le informazioni possibili e comunicarle al proprio responsabile e utilizzare due contenitori per il ghiaccio uno che risieder stabilmente nel laboratorio e un altro che servir per il prelievo del ghiaccio dalla macchina posta al di fuori del laboratorio L acqua che rimane dopo l utilizzo del ghiaccio che po trebbe essere venuta a contatto con materiale infetto deve essere inattivata con ipoclorito di sodio e quindi smaltita tra i rifiuti liquidi e lavorare con calma soprattutto durante la manipolazione di materiale biologico e nonlavorare mai soli in laboratorio specialmente fuori dai normali orari di lavoro ed in caso di operazioni complesse o pericolose Si ricord
46. stessa classe o di una classe superiore Tutti i termini temporali decorrono dalla data di ricevimento da parte del Ministero della Salute della notifica di impiego completa di attestato di pagamento della relativa tariffa e si intendono sospesi durante i periodi in cui il Ministero in attesa di ulteriori informazioni eventual mente richieste impiego 3 16 5 impiego 2 324 95 IMPIEGHI NOTIFICATI FINO AL 2009 IN ITALIA Figura 3 Situazione degli impieghi notificati fino al 2009 in Italia Ulteriori obblighi dell utilizzatore Per tutta la durata dell impiego confinato responsabilit dell utilizzatore art 6 comma 1 lettera a assicurarsi che siano pienamente applicate le misure di contenimento e le altre misure di protezione specificate nell Allegato IV per la classe as segnata all impiego confinato nonch conservare i quaderni o i file in cui vengono registrate le operazioni eseguite art 6 comma 1 lettera b L utilizzatore dovr inoltre riesaminare periodicamente annualmente per impieghi di classe 3 e 4 e almeno ogni 3 anni per impieghi di classe 1 e 2 la valutazione della classe di impiego e redigere un documento di riesame che dovr essere con segnato al titolare dell impianto Altrettanto avviene nelle occasioni indicate all art 6 comma 2 Per impieghi di classe 3 e 4 l utilizzatore dovr inviare al Ministero della Salute una relazione in proposito con cadenza annuale mod relazione annuale impie
47. una sufficiente velocit di ingresso dell aria dall esterno verso l interno dell isolatore tale da evitare la fuoriuscita di polvere Nel caso ad esempio della rottura di un guanto dovr essere predisposto un sistema rapido e semplice per la sostituzione dello stesso Il sistema di mantenimento della depressione costituito da uno o pi ventilatori che lavorano con l ausilio di una serie di filtri di valvole e di strumenti Si tratta infatti di stabilire pressioni portate differenze di pressione OP sequenze operative interblocchi tempi delle varie situazioni di normale processo o di emergenza In particolare il sistema di filtrazione dell aria espulsa deve essere oggetto di particolare attenzione nel caso della sostituzione dei filtri esausti in sicurezza ci significa fare passare il filtro sporco all interno dell isolatore in modo da potere sfruttare i sistemi di contenimento e di espulsione di cui questo dotato F Press Neg Figura 23 Schema semplificato di isolatore a pressione negativa 85 Figura 24 Dettaglio del sistema di filtrazione dell aria espulsa e del relativo ventilatore che mantiene la depressione in un isolatore Sistemi di pulizia Poich gli isolatori sono utilizzati quando si in presenza di sostanze fortemente attive materiale biologico oppure polveri risulta immediata l importanza di dotarsi di un adeguato sistema di pulizia dell interno dell isolat
48. 4 Figura 35 A che una volta disaccoppiate le RTP si verranno a trovare sulla parte esterna dell isolatore e sulla parte esterna del contenitore quindi affacciate all ambiente di lavoro In Figura 35 B queste superfici sono indicate con la parola PULITO proprio per sottolineare il concetto di funzionamento della porta RTP Alloggiamento di un sacchetto guia pasato dentro un contenitore RTF Pulito CONTENITORE RIP TSOI ATORE TSOI ATORE Figura 35 A e B Funzionamento del contenitore RTP Figura 36 Foto di un contenitore RTP agganciato sulla parete di un isolatore Una volta trasferito il prodotto all interno del contenitore RTP possibile agganciarlo ad un altro isolatore e trasferirlo in piena sicurezza e rapidit contenitori RIP sono abbastanza diffusi e consentono lo scambio di prodotti anche tra aziende o enti diversi che si trovano in localit distanti tra di loro Isolatore a doppia camera Un modo per superare le rigidit operative che impone un isolatore a camera singola anche se in parte attenuate dagli ac cessori sopra descritti quello di dotare il proprio impianto di un isolatore a doppia camera In questo tipo di isolatore Figure 37 38 accanto alla camera principale e collegata ad essa per mezzo di una porta viene installata una vera e propria camera di servizio o precamera dotata anch essa di finestra guanti sistema di lavaggio e di ventilazione La fun
49. Caratteristiche virus a DNA a singolo filamento di solito non in grado di effettuare infezione produttiva senza la collaborazione di un virus helper coinfettante es adenovirus 0 HSV senza coinfezione DNA virale si integra nel DNA cromosomico in un sito specifico solo una successiva coinfezione attiva il DNA del virus integrato veicolano inserti di DNA piccoli fino a 4 5kb Vantaggi fornisce espressione genica a lungo termine con un elevato grado di sicurezza poich si integrano nel cromosoma ma poich per inserire il gene esogeno occorre eliminare il 96 del loro genoma originario non possiedono quasi pi elementi virali CONSIDERAZIONI SULLA BIOSICUREZZA IN CASO DI UTILIZZO DI COSTRUTTI VIRALI PER TERAPIA GENICA I vettori virali non competenti per la replicazione devono essere necessariamente prodotti attraverso l espressione delle funzioni difettive nel vettore in adatte linee cellulari packaging cells necessario fornire informazioni sull origine e le caratteristiche delle packaging cells nonch la descrizione caratterizzazione e sequenziamento quest ultimo solo nel caso di vettori retrovirali e lentivirali di tutti i costrutti molecolari che forniscono le funzioni difettive al vettore virale Replication Competent Virus RCV Particolare attenzione dovr essere rivolta a ridurre al minimo la possibilit di eventi di ricombinazione in grado di generare particelle virali competenti per la rep
50. DICI O DI MEDIA TAGLIA Herpes simplex Cytomegalovirus Virus respiratorio sinciziale HBW GCV Hantavirus Ebola Figura 13 Ordine discendente di resistenza ai germicidi chimici Note ci sono eccezioni alla lista Gli Pseudomonas spp sensibili ai disinfettanti se formano biofilm le cellule protette possono approssimare la loro resistenza a quella delle spore batteriche Sterilizzazione Si riportano in sintesi le disposizioni della norma UNI 10384 94 cui fa riferimento il DPR 215 2003 La norma prevede innanzi tutto la classificazione dei rifiuti per cui si individua la necessit della sterilizzazione in base alle disposizioni di legge in funzione delle caratteristiche merceologiche dei materiali che li compongono e dei reparti di pro venienza secondo un codice alfanumerico contenuto in 2 stringhe di cui la prima contiene informazioni sul rifiuto e la seconda sull ente La norma prevede poi che rifiuti siano raccolti in sistemi di contenimento con dimensioni nominali e requisiti stabiliti con trattualmente che non compromettano efficacia funzionalit e sicurezza del processo di sterilizzazione e siano marcati e o corredati con informazioni specifiche di carattere sia amministrativo che tecnico Nel caso venga utilizzato un dispositivo di caricamento questo non deve creare interferenze tra la bocca di carico ed i con tenitori n danneggiare quest ultimi n creare impedimenti alla sterilizzazione Eventuali pretrattamenti dei rifi
51. ECESSARIE A CONTROLLARE IL RISCHIO LIVELLO 2 ALCUNE MISURE ADDIZIONALI DEL kE CLASSE DI IMPIEGO BASSE APPLICATO LIVELLO 3 O SE L AUTORIT COMPETENTE CON CORDA UN LIVELLO Z MISURE ADDIZIONALI DEL LIVELLO 3 IDENTIFICATE DALLA VALUTAZIONE DEL RISCHIO La richiesta di applicare un contenimento pi basso rispetto alla classe di impiego deve essere fatta dal notificante al mo mento della notifica e un adeguata valutazione del rischio deve essere effettuata per giustificare tale richiesta Senza l autorizzazione dell Autorit Competente e fino a quando non si ottiene non si pu applicare un livello di contenimento pi basso della corrispondente classe di impiego Obiettivo primario quindi selezionare le misure fisiche di contenimento e le procedure di sicurezza associate in base al livello di rischio per la salute umana e per l ambiente Alcuni esempi di contenimenti misti e unimpiego pu richiedere un livello 2 di contenimento ma poich si fa uso di patogeni delle piante presenti nei pressi dell impianto necessario che il laboratorio si doti di un sistema di ventilazione del ricircolo del flusso di aria verso interno e un impiego pu necessitare di un livello di contenimento 3 ma dall esame dettagliato della valutazione del rischio si pu evidenziare ad esempio che non sia necessario che il laboratorio sia sigillabile per la fumigazione Se la sperimentazione prevede di testare i MOGM in animal
52. GT 15 16 Idrocarburi HF 16 aromatici 17 Organoalogenat H HF H HG H H 17 l GT GT GT GF 18 i HG H F HG HP HP HG HP HG JU 18 socianati GT G 19 Chetoni H HF HG H H 19 20 Mercaptani e GT HF HG H H H 20 solfuri organici GF IGT Metalli 21 GF IGF GF GF IGF GF IGF GF IGF GF GF GFG GF HE GF GF GF 21 elementari alcali terre alcal HF IHF HF HF HF H H H H H H TH H H H H og rale s is 18 s fs 24 composti metallici tossici 25 Nitruri GF HF HG GF IGF U HG U GF GFH GF GF U GF GF JE 25 HF E F HE H H H H H JH 26 Nitriti GSFH 26 227 Nitro composti GEE ad 28 Idrocarburi 28 alifatici 30 Perossidi e HGFE HP HP 30 idroperossidi GT 31 Fenoli e cresoli GFH H 31 32 Organofosfati U 32 fosfotioati e fosfoditioati 2 Solfuri inorganici HG 99 T 34 Epossidi HP HP HP U HP 34 101 Combustibili ed HFGF HF 101 infiammabili GT 102 Esplosivi HE HE HE HE HE HE HE E JE HE HE HE HE HE 102 103 Composti ip PH PH PH PH PH u PH PH PH PH PH PH HE 103 polimerizzabili 104 Agenti ossidanti H H HF HF HF HF JHE HG HF HFGT HF HF HF H HF HF HF HFE HFE HF HE HF HG HF HF HF HF HF HE HF 104 fomi GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT G G GT 105 Agenti riducenti HG HF JH HF IGF GF HG HG HGT HF HE GF GF GF HG HE HE GF GT H GF HE HP HFE 105 forti F GT GF GF HF H fF H H JH F H GF H GF H log H JH G HG GF S GFH GT GF 106 soluzioni acquose H GF GT 107 Sostan
53. Lgs n 91 del 1993 La revisione della Direttiva ha portato ad un diverso approccio nella valutazione del rischio che non pi basata solo sul si stema biologico isolato deve considerare l agente biologico nella realt del laboratorio o dell impianto attraverso una va lutazione complessiva Secondo la Direttiva modificata infatti la valutazione del rischio del microrganismo costituisce solo una parte della valutazione del rischio complessivo Secondo la Direttiva 90 219 CEE recepita in Italia con il D Lgs 91 93 la valutazione del rischio riferita ai MOGM classificava questi ultimi in due soli gruppi di rischio In sostanza ricadevano nel gruppo quei MOGM per i quali non era da attendersi alcun rischio per la salute umana o per l ambiente e che presentavano le seguenti caratteristiche e il microrganismo RICEVENTE o parentale non in grado di conferire patologie a persone animali o piante e la natura del VETTORE INSERTO tale da non conferire al MOGM un genotipo in grado di causare patologie per uomo animali o piante e il MOGM non in grado di conferire patologie a persone animali o piante e non in grado di causare effetti negativi nell ambiente Nel gruppo Il invece ricadevano tutti gli altri microrganismi geneticamente modificati Inoltre non veniva indicato alcun criterio per scegliere nel caso dei MOGM di gruppo II il livello di contenimento adeguato tra i tre presentati nel vecchio Allegato IV La discordanza
54. M dal luogo di lavoro come v disinfettare le superfici secondo procedure specifiche y prevedere adeguate strutture per lavaggio cambio e conservazione di vestiti incluse le modalit per lavare i vestiti contaminati v vietare di mangiare fumare etc v vietare di pipettare a bocca v fornire i mezzi per una raccolta sicura conservazione trattamento ed eliminazione dei rifiuti incluso l uso di contenitori sicuri ed identificabili anche il livello minimo di contenimento richiede l inattivazione dei rifiuti solidi e liquidi v utilizzare sistemi sicuri per il trasporto di MOGM all interno dei luoghi di lavoro Y elaborazione di piani di emergenza per eventuali incidenti con i MOGM Y monitorando se necessario e tecnicamente possibile la presenza di MOGM fuori dal contenimento fisico primario v evitando l uso di taglienti eccetto se necessario usare pipette in plastica o simili se indicato dalla valutazione del rischio v esponendo il segnale di rischio biologico Y se appropriato effettuando le vaccinazioni necessarie CAPITOLO SECONDO Decreto Legislativo 12 aprile 2001 n 206 Il Decreto Legislativo 206 2001 attuazione della Direttiva 98 81 CE che modifica la Direttiva 90 219 CE concernente l impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati stabilisce le misure per l impiego confinato dei microrganismi geneticamente modificati MOGM volte a tutelare la salute dell uomo e dell ambiente Definizio
55. MENT Appendix G specifies physical containment for standard laboratory experiments and defines Biosafety Level 1 through Biosafety Level 4 For large scale over 10 liters research or production Appendix K Physical Containment for Large Scale Uses of Organisms Containing Recombinant DNA Molecules supersedes Appendix G Appendix K defines Good Large Scale Practice through Biosafety Level 3 Large Scale For certain work with plants Appendix P Physical and Biological Containment for Recombinant DNA Research Involving Plants supersedes Appendix G Appendix P defines Biosafety Levels 1 through 4 Plants For certain work with animals Appendix Q Physical and Biological Containment for Recombinant DNA Research Involving Animals supersedes Appendix G Appendix Q defines Biosafety Levels 1 through 4 Animals 39 CAPITOLO SETTIMO Rifiuti Il Decreto Legislativo n 206 2001 che disciplina l impiego confinato dei MOGM all art 5 stabilisce che la valutazione del l impiego confinato al fine di evitare i rischi per la salute umana e per l ambiente deve tenere in considerazione il problema dello smaltimento dei rifiuti e degli effluenti Infatti nell Allegato IV Misure di contenimento ed altre misure di protezione tra i requisiti minimi e le misure necessarie per ciascun livello di contenimento in attivit di laboratorio e per altre attivit vi sono delle indicazioni specifiche in materia che si riassumono di segu
56. Nell introduzione del presente capitolo si visto che a seguito del nuovo atteggiamento del Legislatore le Norme Tecniche hanno assunto sempre maggiore importanza e dignit Esse pur non essendo strettamente obbligatorie semplificano no tevolmente il lavoro dei progettisti e dei gestori di macchine ed impianti Grazie infatti alla presunzione di conformit sufficiente indicare di avere seguito una Norma Tecnica accreditata per evitare di dovere dimostrare di avere seguito punto per punto i Requisiti Essenziali di Sicurezza RES Si elencano qui di seguito con brevi commenti le norme tecniche inerenti la materia emesse da organismi normatori pubblici europei od internazionali Si elencheranno infine alcune pubblicazioni relative agli isolatori L importanza della normativa tecnica richiamata pi volte nella legislazione e viene indicata come una guida da seguire per essere sicuri di ottemperare i requisiti di buona tecnica e conformit pretesi dalla legislazione stessa In pratica il seguire le norme tecniche ove presenti diventa un mezzo sicuro per il progettista e per il datore di lavoro per poter affermare di avere soddisfatto gli obblighi derivanti dalle leggi in materia di sicurezza e ambiente Segue l elenco delle norme e delle pubblicazioni ove ISO significa lente mondiale di armonizzazione delle norme con sede a Ginevra e sito internet www iso org ISO 10648 1 Containment enclosures part 1 D
57. Oc corre dunque valutare la gravit degli effetti nocivi del MOGM in questione tenendo conto delle due dimensioni C Gravit degli effetti potenzialmente nocivi Il livello di rischio dei danni dovuti alle propriet nocive del MOGM viene stabilito dalla valutazione della gravit del danno e dalle altre caratteristiche biologiche ad es mutazioni disabilitanti suscettibili di limitarne la probabilit di accadimento L entit degli effetti nocivi deve essere valutata a prescindere dalla probabilit con cui essi si possano verificare nella realt quindi per realizzare una stima della gravit necessario valutare le possibili conseguenze in modo distinto dalla probabilit del verificarsi del danno Ad esempio nel caso di un agente patogeno occorre stimare la gravit della malattia partendo dal presupposto che la specie suscettibile possa essere effettivamente infettata L attribuzione del MOGM ad una classe iniziale implica una valutazione della gravit in questo senso Gli schemi di classificazione come quello contenuto nella Direttiva 2000 54 CE tengono conto della gravit delle conseguenze Occorre dunque valutare la gravit degli effetti nocivi del MOGM in questione tenendo conto delle due dimensioni D Probabilit che gli effetti potenzialmente nocivi si verifichino fattori da valutare nel determinare il grado di probabilit che si verifichi un evento dannoso riguardante un determinato MOGM sono il livello e la natura del
58. Riferimenti legislativi Principi Generali Sebbene la legislazione italiana in materia di sicurezza risalga agli anni 20 con consistenti capitoli aggiunti anche negli anni 50 DPR 547 55 si inizieranno le citazioni con la Direttiva Europea 89 391 EEC che ha dato vita col suo recepimento italiano al Decreto Legislativo 81 08 detto comunemente Testo Unico sulla sicurezza Si riportano alcuni punti ritenuti significativi per l argomento Isolatori Council Directive 89 391 EEC 12 June 1989 introduction of measures to encourage improvements in the sa fety and health of workers at work article 6 general obligations on employers par 2 general principles of prevention article 6 general obligations on employers par 3 the employer shall a evaluate the risk to the safety and health of workers inter alia in the choice of work equipment the chemical substan ces or preparation used and the fitting out of work places assure an improvement in the level of protection afforded to workers with regards to safety and health La trasposizione in legge italiana in questo caso quasi testuale D Lgs 81 08 art 15 misure generali di tutela a valutazione di tutti i rischi per la salute e la sicurezza c eliminazione dei rischi e ove ci non possibile loro riduzione al minimo in relazione alle conoscenze acquisite in base al progresso tecnico d rispetto dei principi ergonomici nell organizzazione
59. Spegnere il bunsen e permettere la completa evaporazione per un minimo di 3 h e Aprire il vano e il foro e rimettere in funzione la cappa AUTOCLAVE La sterilizzazione a vapore Processo comprovato rapido ed economico per uccidere microrganismi mediante l applicazione di calore umido vapore saturo sotto pressione Il calore danneggia diverse strutture cellulari compresa la membrana citoplasmatica rendendo le cellule non vitali L azione biocida deriva dall ossidazione dei costituenti cellulari con denaturazione degli enzimi e delle strutture proteiche La sensibilit al calore varia in rapporto al contenuto in Ho0O del materiale pi alta la concentrazione di H2O piu i micror ganismi risultano sensibili al calore Il tempo di sterilizzazione diminuisce con l aumentare della temperatura Caratteristiche tecniche e coperchio termoisolante e scaricamento automatico sul retro del vapore e istruzioni d uso sul frontale e valvola automatica per una distribuzione uniforme del vapore saturo e segnali di malfunzionamento e predisposizione per termosonda ai fini della validazione ciclo e valvola per lo sfiato del vapore e requisiti e norme per la sicurezza L Allegato IV del D Lgs 206 01 stabilisce che l autoclave e inlaboratorio a livello di contenimento 1 sia presente nel sito e inun livello di contenimento 2 sia presente nell edificio e inlivello di contenimento 3 sia sul piano in base a procedure convalidate che cons
60. a che copre in maniera sufficientemente dettagliata tutti gli aspetti relativi agli isolatori sia per utilizzo finalizzato alla protezione dell operatore che per utilizzo relativo alla sterilit del prodotto Vengono trattati i temi dei materiali di costruzione dell ergonomia della decontaminazione e della ventilazione degli isolatori Sono trattati anche i metodi di controllo della tenuta degli isolatori basati sul sistema di caduta della pressione Si forniscono anche indicazioni sui sistemi di decontaminazione e di controllo della sterilit AGS G001 1998 second edition 186 pagg American Glovebox Society Manuale molto completo sugli isolatori per scopi industriali Anche se principalmente orientato al settore nucleare tale pub blicazione riporta molti dettagli costruttivi e disegni delle soluzioni tecniche proposte La guida fornisce indicazioni sui materiali costruttivi sul dimensionamento dei filtri sulla ventilazione e su quasi tutta la gamma dei particolari Meccanici degli isolatori Sicuramente si tratta di uno dei migliori testi disponibili sull argomento ISPE Assessing the particulate containment performance of pharmaceutical equipment circa 70 pagg ISPE acronimo del vecchio nome dell associazione International Society Pharmaceutical Engineering ha redatto questo utile riassunto sui metodi di campionamento ed analisi delle polveri nell ambiente esterno ad isolatori valvole split but terfly e giunti gonfiabili a
61. a che restano valide tutte le norme previste dalla buona prassi di laboratorio ovvero e nei laboratori vitato fumare conservare ed assumere cibi e bevande incluso caramelle e chewing gum e rispettare le elementari norme igieniche per es lavarsi le mani prima nel caso si debbano manipolare cellule o materiale biologico potenzialmente infettabile da batteri o altro e alla fine del lavoro e leggere il manuale delle istruzioni prima di utilizzare qualsiasi apparecchio non utilizzare apparecchiature elettriche non a norma e tenerle il pi lontano possibile da fonti di umidit e o vapori di solventi infiammabili e non lasciare mai senza controllo reazioni in corso o apparecchi in funzione e nel caso munirli di opportuni sistemi di sicurezza e accertarsi prima di lasciare il laboratorio che il proprio posto di lavoro sia pulito ed in ordine e che tutti gli apparecchi eccetto quelli necessari siano spenti e informare tempestivamente il proprio responsabile di eventuali problemi incidenti e malfunzionamento degli strumenti presenti in laboratorio Attivit all interno del laboratorio Prima di iniziare il lavoro posizionare il vetro frontale se del tipo a scorrimento all altezza fissata per la protezione dell operatore 20 30 cm e regolare l altezza della sedia in modo che il volto dell ope ratore sia al di sopra dell apertura del vetro frontale Il vetro non deve essere aperto quando la cappa in uso Start
62. a da un processo di filtrazione con filtri HEPA con efficienza superiore al 99 997 po sizionati nella controsoffittatura L aria filtrata dopo aver lavato il locale viene ripresa dalla sezione di ventilazione attraverso apposite griglie poste alla base delle pareti perimetrali convogliata in un sistema di filtrazione prima di essere emessa al di fuori dell edificio L aria ripresa viene a sua volta filtrata in un contenitore canister che consente la sostituzione dell elemento filtrante mediante barriera di protezione con sacco di polietilene bag in bag out Questo tipo di soluzione evita una possibile contaminazione del canale d espulsione e dell espulsore stesso salvaguardando sia i tecnici addetti alla manutenzione dell impianto che l ambiente Anche le griglie a parete sono corredate di sezione filtrante HEPA con dispositivo canister per lo smontaggio il trasporto e lo smaltimento in condizioni di sicurezza per gli operatori Un sistema di allarme acustico in caso di malfunzionamento dell espulsore entrer in funzione permettendo al personale di lasciare immediatamente il laboratorio attraverso l uscita di sicurezza porta normalmente chiusa con maniglione anti panico Il sistema di ventilazione compensa automaticamente l espulsione dell aria dalla cappa di sicurezza biologica presente al interno del laboratorio L aria proveniente dalle cappe di sicurezza biologica dopo essere passata attraverso filtri HEPA deve es
63. a delle 4 classi La notifica per l inoltro della quale al Ministero della Salute si potr utilizzare uno dei moduli reperibili sul sito web mod notifica impiego MOGM classe 2 mod notifica impiego MOGM classe 3 e 4 dovr essere vistata dal titolare dell impianto cui essa viene consegnata in copia unitamente al documento di valutazione di cui sopra moduli sono concepiti in modo da poter essere utilizzati per impieghi tra loro assai diversi e non tutti i punti in essi contenuti si adatteranno ai singoli casi Nel caso di impieghi di laboratorio implicanti MOGM disegnati per terapia genica nei formulari si dovr indicare la linea di packaging utilizzata come ricevente il vettore virale o il plasmide se utilizzato ed il gene terapeutico inserito Per gli impieghi clinici di tali MOGM stato predisposto un modulo separato mod notifica impiego MOGM applicazioni cliniche terapia genica Per quanto riguarda le autorizzazioni solo per impieghi di classe 2 previsto un regime di silenzio assenso con termine di 60 giorni Se per sono gi stati autorizzati presso lo stesso impianto impieghi di classe pi elevata gli impieghi di classe 2 possono iniziare subito dopo la notifica Impieghi di classe 3 e 4 devono comunque attendere esplicita autorizzazione scritta che il Ministero della Salute rilascer entro 60 o 90 giorni a seconda che presso l impianto in cui si intende eseguirli siano gi stati autorizzati o meno impieghi della
64. a delle operazioni si sceglie nell Allegato IV la tabella che risulta essere pi adeguata all applicazione delle misure di contenimento e protezione Condizioni relative alle colture In molte attivit di impiego confinato le colture vengono realizzate in ambiente rigorosamente controllato Il tipo e la confi gurazione dei contenitori o di altre attrezzature utilizzate per la crescita delle colture influisce sul grado di rischio per la salute umana e l ambiente Risulta necessario inoltre prendere in considerazione l affidabilit e le possibili anomalie delle attrezzature poich eventuali malfunzionamenti possono comportare un aumento del rischio espositivo a tal fine importante prevedere eventuali misure di contenimento supplementari quando la probabilit di possibili disfunzioni sia elevata Procedure operative standard relative al personale che svolge lavori a contatto con le colture di MOGM quali centrifugazione o sonicazione hanno una influenza di rilievo sull efficacia delle misure di contenimento utilizzate Le condizioni colturali sono esse stesse misure di contenimento fisico e le misure biologiche e chimiche utilizzate per pro teggere i lavori svolti in laboratorio possono contribuire in maniera significativa al rafforzamento delle misure di contenimento Una possibile misura biologica di contenimento l uso di mutanti auxotrofi per i quali occorrono fattori di crescita specifici Esempi di misure di contenimento chimico
65. a possibili contaminazioni Inattivazione rifiuti liquidi il materiale liquido deve essere raccolto in contenitori di plastica in cui stata aggiunta una quantit di ipoclorito di sodio corrispondente al 20 del volume finale Quando il volume all interno del contenitore raggiunge la met o i due terzi della sua capacit procedere ad autoclavare il materiale Assicurarsi che il contenitore sia chiuso con un tappo prima di rimuoverlo dalla cappa Eliminazione rifiuti solidi i rifiuti solidi prodotti durante le attivit di lavoro devono essere eliminati in sacchetti autoclavabili per rifiuti ospedalieri sacchetti biohazard Le fiasche per colture cellulari e le piastre Petri devono essere chiuse prima del l eliminazione mentre le pipette devono essere inserite in un doppio sacchetto biohazard Non chiudere al di fuori della cappa il sacchetto per rifiuti a rischio biologico da autoclavare Conservare i campioni biologici 79 Chiudere l apertura frontale quando la cappa biologica non utilizzata eventualmente accendere lampada a raggi UV Autoclavare rifiuti eliminati o direttamente all interno del laboratorio se presente un autoclave passante o sul piano dove prevista l autoclave Uso DEI DISPOSITIVI DI PROTEZIONE L uso dei DPI deve avvenire quando i rischi non possono essere ridotti in modo sufficiente o evitati dall applicazione di tec niche di prevenzione da mezzi di prevenzione collettiva e da modalit
66. acchina deve essere progettata e costruita in modo da evitare qualsiasi rischio di esplosione provocato dalla macchina stessa o da gas liquidi polveri vapori ed altre sostanze prodotti utilizzati dalla macchina In questa situazione si fa notare come sia relativamente facile lussare l isolatore con azoto invece che con aria qualora si Manipoli una polvere potenzialmente esplosiva lo sono quasi tutti i composti farmaceutici o ancora contenente un solvente infiammabile oppure semplicemente della quale non si conoscano i parametri di esplosivit situazione molto frequente Nitrogen Figura 42 Rischi dovuti alla emissione di polvere gas ecc La macchina deve essere progettata costruita e o equipaggiata in moto tale da evitare i rischi dovuti a gas liquidi pol veri vapori ed altri residui prodotti Punto questo che sintetizza tutto il concetto dell isolatore che costruito proprio attorno al punto di emissione Pulitura delle parti interne La macchina deve essere progettata e costruita in modo che la pulitura delle parti interne della macchina che ha conte nuto sostanze o preparazioni pericolose sia possibile senza penetrare in tali parti interne lo stesso dicasi per l eventuale svuotamento completo che deve poter essere fatto all esterno Figura 43 98 Istruzioni per l uso a Ogni macchina deve essere accompagnata da un istruzione per l uso che fornisca almeno le seguenti informazioni le
67. ali specificate per la classe 1 al paragrafo 4 dell Allegato III anche degli opportuni ed aggiornati schemi di classificazione nazionali e internazionali inclusa la Direttiva 2000 54 CE Le corrispondenti misure di contenimento e le altre misure di protezione specificate nell Allegato IV possono fungere da riferimento per stabilire se occorrono provvedimenti pi severi di contenimento e protezione per limitare gli effetti nocivi identificati Per stabilire il livello di rischio dei danni dovuti alle propriet nocive del MOGM occorre valutare la gravit del danno e le altre caratteristiche biologiche ad esempio le mutazioni disabilitanti suscettibili di limitarne la probabilit La gravit degli effetti nocivi deve essere stimata a prescindere dalla probabilit con cui essi si potrebbero verificare realmente Per deter minare la gravit dei possibili danni occorre valutare le eventuali conseguenze e non la probabilit del verificarsi del danno Ad esempio nel caso di un agente patogeno occorre stimare la gravit della malattia partendo dal presupposto che la specie suscettibile stata effettivamente infettata L attribuzione del MOGM ad una classe iniziale implica una valutazione della gravit in questo senso Gli schemi di classificazione come quello contenuto nella Direttiva 2000 54 CE tengono conto della gravit delle conseguenze Tuttavia molti schemi sono basati solo su considerazioni relative o alla salute umana o all ambiente
68. allimento della sterilizzazione Pu essere dovuto a due fattori 1 Errori dell operatore uso improprio dei contenitori che bloccano l accesso del vapore al materiale caricato chiusura dei sacchetti di polipropilene non aggiunta di acqua al carico prima di autoclavare sacchetto di rifiuti troppo grande per l autoclave sacchetto eccessivamente riempito 2 Avaria Meccanica In questo caso rivolgersi al servizio tecnico di manutenzione Manutenzione E importante nell uso di un autoclave non ignorare i segnali delle funzioni di controllo della sicurezza se si sospetta un pro blema di performance contattare assistenza tecnica controlli dello stato di sicurezza devono essere effettuati dagli enti preposti secondo le disposizioni legislative vigenti La taratura va effettuata almeno con frequenza annuale controllando la correlazione tra pressione e temperatura tramite un manometro campione certificato oppure deve essere realizzata da ditte specializzate che rilascino idoneo documento di av venuta taratura La manutenzione richiede la valutazione di diversi parametri 74 efficienza del termometro nelle condizioni operative impostare la temperatura e il tempo di durata dei cicli richiesti e controllare che quando l autoclave in pressione il valore di temperatura sia conforme a quello riportato sulla tabella di correlazione pressione temperatura del vapore saturo efficienza del blocco del portello nelle c
69. almente siano in attiva proliferazione Per ovviare a questo problema sono stati realizzati dei costrutti derivati da lentivirus come l Human Immunodeficiency Virus HIV A differenza degli oncoretrovirus per i quali la divisione cellulare rappresenta un requisito indispensabile per l inte grazione nel genoma della cellula infettata i lentivirus hanno la capacit di integrare il proprio genoma in quello di una cellula ospite non in proliferazione grazie alla capacit del provirus di attraversare la membrana nucleare Progressive modifiche nella generazioni dei costrutti virali hanno permesso di ottenere un vettore lentivirale costituito da meno del 10 del genoma virale iniziale in cui sono presenti solo le sequenze necessarie a retrotrascrivere trasferire ed integrare la cassetta di espres sione nelle cellule bersaglio e sono assenti i geni per le proteine virali patogene La costruzione di questi vettori ha raggiunto buoni livelli di biosicurezza grazie anche all inattivazione del promotore virale originale presente nelle ong terminal repeat LTR vettori lentivirali hanno dimostrato una buona efficienza di trasduzione sia in vitro sia in vivo affiancando alle qualit dei vettori basati su oncoretrovirus la capacit di trasdurre cellule non in attiva proliferazione come ad esempio gli epatociti le cellule muscolari e le cellule staminali emopoietiche vettori retrovirali e lentivirali possono essere modificati geneticamente in mod
70. ambiente esterno e prodotto Caratteristiche e 0 aria ricircolata 100 aria emessa viene eliminata attraverso un condotto dedicato connesso con l impianto di ventilazione dopo essere stata filtrata da filtro HEPA e Velocit di flusso 0 5 m s e plenum contaminati biologicamente sono a pressione negativa rispetto alla stanza o sono circondati da pressione negativa 68 Principale utilizzo E indicata per impiego confinato di MOGM di classe 2 e 3 e per colture cellulari trattate con sostanze cancerogene e o mu tagene o marcate con isotopi radioattivi Possono essere usate quando richiesta la manipolazione di piccole quantita di sostanze chimiche volatili in studi microbiologici Cappe a sicurezza biologica di classe Ill glove box vedi sezione dedicata isolatore Fonte ESCO WORLD CLASS WORLDWIDE Figura 20 Protezione e Operatore e ambiente di lavoro esterno alla cappa nei confronti degli agenti biologici e materiale in lavorazione da contaminazioni esterne La cabina glove box ermeticamente chiusa con ingresso d aria filtrata attraverso filtri HEPA ed espulsa previa filtrazione attraverso doppi filtri HEPA in sequenza Opera in pressione negativa e assicura la protezione totale del prodotto opera tore ambiente Questo tipo di cappa garantisce il pi alto livello di protezione personale ed utilizzata per gli agenti patogeni appartenenti al gruppo 4 Il flusso dell aria garantito da uno specifico sist
71. anici esclusi i solventi alogenati C42 Composti organo alogenati escluse le sostanze polimerizzate inerti e le altre sostanze indicate nel presente Allegato C43 Composti aromatici composti organici policiclici ed eterociclici C44 Ammine alifatiche C45 Ammine aromatiche C46 Eteri C47 Sostanze di carattere esplosivo escluse le sostanze indicate in altri punti dell Allegato C48 Composti organici dello zolfo C49 Qualsiasi prodotto della famiglia dei dibenzofurani policlorati PCDF C50 Qualsiasi prodotto della famiglia delle dibenzo paradiossine policlorate PCDD C51 Idrocarburi e loro composti ossigenati azotati e o solforati non altrimenti indicati nel presente Allegato Tali allegati offrono preziose indicazioni per poter identificare la corretta classificazione dei rifiuti per i quali il solo riferimento alla normativa sulla classificazione ed etichettatura delle sostanze pericolose non sempre sufficiente Per quanto riguarda i PCB la cui presenza piuttosto diffusa a causa del massiccio utilizzo che ne fu fatto in apparecchiature elettriche si ritiene utile riportarne la definizione contenuta nel D Lgs n 209 99 Attuazione della direttiva 96 59 CE relativa allo smaltimento dei policlorodifenili e dei policlorotrifenili secondo cui per PCB si intendono oltre ai policlorodifenili i po liclorotrifenili il monometiltetraclorodifenilmetano il monometildiclorodifenilmetano il monometildibromodifenil metano e ogni
72. ati da retrovirus adenovirus virus adenoassociati ed herpes virus inoltre questi vengono suddivisi ulteriormente in integranti per la loro capacit di integrare il loro genoma nel genoma della cellula ospite retrovirus e adenoassociati e non integranti adenovirus e virus erpetici Il costrutto di un vettore virale prevede la delezione parziale o totale di alcuni geni virali solitamente responsabili dell attivit patologica o di attivit accessorie quindi non indispensabili per l inserimento del transgene nella cellula L eliminazione di parti del genoma virale originale consente anche di avere maggior spazio a disposizione per inserire la cosiddetta cassetta di espressione con tenente il transgene e possibilmente un promotore che guidi la sua espressione Non esiste un vettore ideale adatto per ogni situazione ma ognuno di essi caratterizzato da vantaggi e svantaggi da prendere in considerazione di volta in volta in relazione alle caratteristiche della patologia da trattare vettore Figura 9 24 VETTORI RETROVIRALI Caratteristiche virus a RNA enzima trascrittasi inversa perm ette di sintetizzare un DNA complementare capacit di integrazione del DNA complementare in quello cromosomico veicolano inserti di DNA lunghi sino a 8kb Vantaggi Svantaggi DNA integrato in modo stabile non applicabile a terapia genica in anche nella progenie cellulare vivo pe cleareance virale da parte permette una terapia genica a
73. ati scientifici o tecnici tali da inficiare la valutazione del rischio iniziale que st ultima deve essere rivista alla luce dei cambiamenti subentrati Per tutelare la salute umana e l ambiente occorre modificare immediatamente le condizioni di contenimento in base all esito della nuova valutazione del rischio La classificazione e le misure di contenimento e protezione che a seguito della valutazione del rischio sono ritenute neces sarie per contenere in misura adeguata il MOGM durante le operazioni proposte consentono di classificare l attivit di impiego confinato in quattro classi L Allegato IV della direttiva specifica le misure di contenimento e di protezione per ciascuna classe di impiego confinato Dalla classificazione delle attivit di impiego confinato relative ai MOGM dipendono anche i requisiti di carattere ammini strativo In caso di dubbio relativamente alla classificazione definitiva e alle condizioni di contenimento consigliabile contattare l au torit competente 18 CAPITOLO QUARTO Terapie avanzate e medicinali innovativi Le terapie avanzate in particolare la terapia genetica la terapia cellulare somatica e l ingegneria tessutale presentano nuove possibilit per il trattamento delle malattie umane medicinali per terapie avanzate sono nuovi e complessi e sono disciplinati da una regolamentazione adeguata per salvaguardare la sanit pubblica Per medicinale per terapia avanzata si intende uno dei
74. ato introdurre i materiali nella cappa limitando il movimento di materiale sporco verso aree o oggetti pi puliti Stilare prima di iniziare a lavorare una lista del materiale da introdurre nella cappa ridurre al minimo indispensabile il materiale o le attrezzature sul piano di lavoro per non diminuire il flusso di aria ed evitare turbolenze possibili contaminazioni incrociate e o violazioni del grado di contenimento Non usare bunsen o altri tipi di bruciatori sotto le cappe di tipo Il e III l aria calda indotta pu deviare il regolare flusso interno dell aria e causare contaminazione dell area di lavoro dell ambiente esterno e danni ai filtri HEPA Eseguire tutte le operazioni di lavoro nella parte mediana e posteriore del piano di lavoro ed in modo visibile attraverso il vetro frontale Le apparecchiature che generano aerosol vortex mixer centrifughe da tavolo devono essere situate nella parte posteriore della cappa per sfruttare il vantaggio dell air split Oggetti ingombranti contenitori per la raccolta di rifiuti liquidi e solidi dovrebbero essere collocati in un lato interno della cappa Evitare il passaggio di persone alle spalle dell operatore l apertura o la chiusura di porte nella stanza per non alterare il flusso laminare Non bloccare con pipette fogli o altro materiale la griglia frontale dell aria per evitare potenziali conta minazioni del materiale e non esporre l operatore
75. atteristiche sopra elencate H14 Ecotossico sostanze e preparati che presentano o possono presentare rischi immediati o differiti per uno o pi settori dell ambiente Note 1 L attribuzione delle caratteristiche di pericolo tossico e molto tossico nocivo corrosivo e irritante effettuata secondo i criteri stabiliti nell Allegato VI parte A e parte Il B della direttiva 67 548 CEE del Consiglio del27 giu gno1967 concernente il ravvicinamento delle disposizioni legislative regolamentari ed amministrative relative alla clas sificazione all imballaggio e all etichettatura delle sostanze pericolose nella versione modificata dalla direttiva 79 831 CEE del Consiglio 2 Per quanto concerne l attribuzione delle caratteristiche cancerogeno teratogeno e mutageno e riguardo all attuale stato delle conoscenze precisazioni supplementari figurano nella guida per la classificazione e l etichettatura di cui all Al legato VI parte Il D della direttiva 67 548 CEE nella versione modificata dalla direttiva 83 467 CEE della Commissione Metodi di prova I metodi di prova sono intesi a conferire un significato specifico alle definizioni di cui all Allegato III metodi da utilizzare sono quelli descritti nell Allegato V della direttiva 67 548 CEE nella versione modificata dalla direttiva 84 449 CEE della Commissione o dalle successive direttive della Commissione che adeguano al prog
76. averso manicotto ricircolata espulsa biosicurezza Il A2 70 30 Pressione negativa Condotto diretto attraverso manicotto BIO B1 MEZZE 70 70 Pressione negativa Pressione negativa Condotto diretto Ho 52 Condotto diretto All interno della stanza O O Tabella 25 Tipologia di Cappe di Sicurezza Biologica e loro specifiche tecniche Filtri HEPA High Efficiency Particulate Air Le cappe di sicurezza biologica sono provviste di filtri HEPA che prevengono la contaminazione particellare costituiti da fogli di microfibre di vetro ripiegati pi volte La loro efficienza filtrante rappresentata dalla capacit di trattenere particelle di 0 3 di diametro con un efficacia compresa tra il 99 97 e il 99 99 filtri HEPA sono raggruppati in 5 classi da H10 a H14 con caratteristiche prestazionali crescenti Cappe di sicurezza biologica di classe Cappa ventilata aperta frontalmente Aria filtrata con Sa HEPA Aria ambientale ss Aria contaminata Fonte ESCO WORLD CLASS WORLDWIDE Figura 14 Protezione e Operatore e ambiente esterno La protezione dell operatore assicurata dal flusso frontale di aria esterno convogliato come flusso laminare al di sopra del piano di lavoro che viene emesso dalla cappa attraverso un estrattore In questo modo le particelle di aerosol eventualmente generate nell area di lavoro vengono convogliate nell estrattore ed allontanate dall operatore e dall ambien
77. avoro ai valori progettati durante tutte le varie fasi della lavorazione PERCIO ue pi i f i i E PRE CAMERA CAMERA PRINCIPALE 5A Pa 75 Pa Figura 37 Rappresentazione schematica di un isolatore a doppia camera Figura 38 Foto di isolatore a doppia camera 92 CAPITOLO U N DICESIMO La normativa nel campo degli isolator 1 Sommario Gli isolatori sono apparecchiature molto costose che servono per creare un piccolo volume rigorosamente confinato entro il quale eseguire operazioni con polveri liquidi e composti biologici estremamente pericolosi Si tratta quindi di una misura di protezione dell ambiente di lavoro nei confronti di inalazione o contatto con sostanze fortemente tossiche Si esamineranno le principali normative di legge italiane D Lgs 81 08 ecc ed europee evidenziando che tali apparecchiature rispettano tra gli altri il principio di preferenza di misure di protezione collettiva rispetto ai dispositivi di protezione individuale Verranno presi in considerazione anche i riferimenti che la Direttiva Macchine riserva a questo tipo di apparecchiature Si citeranno anche le principali normative tecniche ISO EN UNI che si occupano degli isolatori 2 Riferimenti legislativi Nuovo approccio del Legislatore Si elencheranno e commenteranno alcuni riferimenti legislativi sia italiani che europei che indicano chiaramente che in pre senza di molecole fort
78. azione che esprime una proteina envelope virale eterologa ad esempio la glicoproteina del virus della stomatite vescicolare VSV G per sostituire la proteina envelope omologa lentivirale 2 un costrutto helper o due costrutti di packaging codificanti uno le proteine virali Gag e Pol necessarie in trans l altro contenente Rev sotto il promotore del Sarcoma di Rous Tali plasmidi sono difettivi per il segnale di packaging per tutti i geni accessori e per il gene Tat 3 un costrutto che ospita il transgene comprese le sequenze necessarie per la produzione e il packaging del vettore di espressione VL comunemente denominato il costrutto transfer Alternativamente VL pu essere realizzato utilizzando un costrutto che codifica per il transfer vector e una sola cassetta contenente i geni per l envelope e il packaging attentamente progettati per ridurre il rischio di ricombinazione In particolare le omologie di sequenza tra i costrutti transfer e packaging envelope e helper sono ridotte al minimo per prevenire eventi di ricombinazione Il problema della biosicurezza fondamentale nella valutazione di impiego di MOGM e per garantirla i vettori lentivirali hanno subito nel tempo successive modifiche sino a giungere alla costruzione dei vettori di 3 generazione Questi ultimi sono ca ratterizzati dall assenza nel genoma della maggior parte dei geni coinvolti nella patogenicit Per quanto riguarda il transfer vector sono state ef
79. azione delle operazioni e considerazione degli effetti termici dovuti alla interazione delle radiazioni con la materia nella progettazione delle strutture di stoccaggio e di smaltimento Rifiuti di questo tipo sono i prodotti derivanti dal riprocessamento di combustibile nucleare irraggiato o gli stessi elementi di combustibile irraggiato In Italia la classificazione dei rifiuti contenuta nella Guida Tecnica n 26 emanata dall ENEA DISP ora APAT Agenzia Pro tezione dell Ambiente e per i servizi Tecnici Secondo tale documento i rifiuti sono classificati in tre categorie ciascuna delle quali prevede una diversa modalit di gestione e di smaltimento Prima categoria vi appartengono rifiuti radioattivi che richiedono tempi di decadimento dell ordine di mesi sino ad un tempo massimo di alcuni anni per decadere a concentrazioni di radioattivit di rilevanza trascurabile dell ordine delle centinaia di Bq g e quelli contenenti radionuclidi a lungo periodo di dimezzamento purch in concentrazioni non rilevanti hanno origine essenzialmente dagli impieghi medici e di ricerca scientifica dove i radionuclidi utilizzati tranne alcuni casi specifici quali quelli del SH e del C sono caratterizzati da tempi di dimezzamento relativamente brevi inferiori a 1 anno e nella maggior parte dei casi inferiori ai 2 mesi Seconda categoria vi appartengono i rifiuti che richiedono tempi di decadimento variabili da qualche decina fino ad alcune cen
80. azione letale per i micror ganismi L intero processo ha la durata di qualche ora e termina con l abbattimento finale tramite un catalizzatore dei vapori di acqua ossigenata al di sotto di valori di sicurezza per gli operatori Detti sistemi hanno il vantaggio di non danneggiare le eventuali strumentazioni elettroniche presenti all interno dell isolatore Figure 26 27 Alcuni dei pi comuni sistemi di generazione diffusione e successivo abbattimento del VHP Isolatore a camera unica L isolatore a camera unica il pi immediato sistema di contenimento che si possa pensare allo scopo di evitare la diffusione nell ambiente di lavoro di polvere ritenuta pericolosa tuttavia un sistema a camera unica utilizzabile solo per quantit di prodotto molto piccole e operazioni che consentono di essere eseguite in un unica fase Una delle condizioni pi limitanti infatti che tutti i prodotti gli eventuali additivi gli strumenti i contenitori ed ulteriori ac cessori siano collocati all interno dell isolatore pulito prima di cominciare le operazioni Una volta completate le operazioni il prodotto finale deve essere racchiuso all interno di contenitori facilmente bonificabili e tutti gli oggetti e le superfici presenti all interno dell isolatore devono essere sottoposti a lavaggio Inoltre occorre sottolineare che l eventuale strumentazione ed i macchinari posti all interno dell isolatore devono essere facilmente
81. biologici dei gruppi 3 e 4 devono avere le parti di chiusura posizionate sul retro 8 nel caso di manipolazione di agenti biologici di gruppo 3 consigliabile la tuta intera obbligatoria per gli agenti di gruppo 4 9 gli indumenti di protezione devono adattarsi alle esigenze lavorative e garantire comfort durante tutto il periodo di utilizzo I DPI vengono distinti a seconda delle applicazioni e protezione degli arti superiori guanti di protezione contro i prodotti chimici e i microrganismi conformit alla norma EN 374 1 2 8 e protezione degli occhi e del viso occhiali con o senza schermi laterali occhiali a visiera o maschere schermi facciali devono possedere certificazione CE emessa dall Organismo Notificato per il Produttore che attesti la marcatura CE come DPI per la protezione da spruzzi di liquidi in base ai requisiti previsti dalla norma tecnica EN 166 Nel caso siano disponibili dispositivi per i quali la certificazione di conformit alla suddetta norma tecnica attesti anche la protezione da goccioline aerosol questi saranno da preferire come misura di protezione individuale e protezione del corpo protezione locale grembiuli per schizzi frontali y copertura limitata da utilizzare nei casi di bassa probabilit di accadimento e per rischi non gravi es camici da indossare su altri indumenti ed essere tolti rapidamente in caso di contaminazione Y Y copertura completa nel caso di protezione totale es tute e tute pressu
82. boratorio di classe 3 oltre che in ogni piano dell edificio deve essere presente il kit per le operazioni di pulizia in caso di sversamenti accidentali contenente panni assorbenti pinze contenitori per taglienti ipoclorito di sodio 5 candeggina commerciale guanti grossi da cucina guanti vinile lattice sovracamice impermeabilizzato cuffie occhiali di protezione 10 mascherina ad alta efficienza FFP3 11 istruzioni per la pulizia 12 cartello di divieto d ingresso per decontaminazione CR a a T 81 Procedure da adottare in caso di emergenza AEROSOL Evacuare l ambiente e chiudere le porte avvertire le persone responsabili della sicurezza lasciare l ambiente chiuso per 30 60 minuti per permettere alle particelle di depositarsi segnalare il divieto di entrata nella stanza indossare la tuta protettiva e la maschera appropriata ed entrare nella stanza in due persone sigillare le finestre e i condotti effettuare la disinfezione con formaldeide o altri gas sigillare la porta affiggere il cartello di divieto d ingresso per decontaminazione lasciare agire almeno 24h prima di rimuovere i sigilli e rientrare SVERSAMENTO ACCIDENTALE DI MATERIALE INFETTO Nel caso di sversamento accidentale di materiale infetto seguire le procedure stabilite in modo da minimizzare il rischio di esposizione Sversamento di piccole quantit di materiale lt 10 ml 1 3 Coprire lo sversamento
83. caci livelli capacitivi oppure radar o a fibre ottiche Per citare solo le pi importanti ad esempio la Direttiva Macchine DPR 459 96 di cui si approfondiranno in seguito diversi punti dedica tutto l Allegato alla definizione dei requisiti essenziali di sicurezza e costituisce una utile guida Altrettanto importante l Allegato della cosiddetta Direttiva PED dall acronimo inglese Pressure Equipment Directive re cepita in Italia col D Lgs n 93 del 25 2 2000 che orienta il progettista per quanto riguarda le apparecchiature in pressione Un altra recente direttiva che applica lo stesso concetto relativamente ai requisiti essenziali di sicurezza la cosiddetta ATEX dall acronimo inglese Atmosphere Explosive recepita in Italia col D Lgs n 126 del 23 3 1998 in questo caso per i requisiti essenziali di sicurezza vengono esposte nell Allegato Il Tutte queste ultime Direttive si rifanno ad un concetto fondamentale che era gi in embrione nella Legge italiana n 186 del 1 3 1968 e cio il fatto che un apparecchiatura o un impianto che venga progettato costruito ed esercito seguendo una norma tecnica armonizzata EN o quantomeno nazionale UNI o CEI si considera automaticamente rispondente ai principi di buona tecnica richiesti dalla legge Si conferisce cos una notevole importanza alle norme tecniche UNI EN senza costringere il legislatore ad entrare in dettagli ingegneristici e costruttivi durante
84. cerca collegate esiste un capitolo dedicato dell Elenco europeo dei Rifiuti che si riporta di seguito 18 18 01 18 01 01 18 01 02 18 01 03 18 01 04 18 01 06 18 01 07 18 01 08 18 01 09 18 01 10 18 02 18 02 01 18 02 02 18 02 03 18 02 05 18 02 06 18 02 07 18 02 08 Rifiuti prodotti dal settore sanitario e veterinario o da attivit di ricerca collegate tranne i rifiuti di cucina e di ristorazione non direttamente provenienti da trattamento terapeutico rifiuti dai reparti di maternit e rifiuti legati a diagnosi trattamento e prevenzione delle malattie negli esseri umani oggetti da taglio eccetto 18 01 03 parti anatomiche ed organi incluse le sacche per il plasma e le riserve di sangue tranne 18 01 03 rifiuti che devono essere raccolti e smaltiti applicando precauzioni particolari per evitare infezioni rifiuti che non devono essere raccolti e smaltiti applicando precauzioni particolari per evitare infezioni es bende ingessature lenzuola indumenti monouso assorbenti igenici sostanze chimiche pericolose o contenenti sostanze pericolose sostanze chimiche diverse da quelle di cui alla voce 18 01 06 medicinali citotossici e citostatici medicinali diversi da quelli di cui alla voce 18 01 08 rifiuti di amalgama prodotti da interventi odontoiatrici rifiuti legati alle attivit di ricerca e diagnosi trattamento e prevenzione delle malattie negli animali oggetti da taglio eccetto 18 02 02 rifiuti che dev
85. che presentano un rischio moderato CLASSE 3 ovvero operazioni per le quali un livello 3 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente impieghi confinati ad alto rischio ovvero operazioni per le CLASSE 4 quali un livello 4 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Tabella 3 Il livello di contenimento adeguato a garantire la sicurezza determina la classe dell impiego confinato Le classi di impiego confinato sono il nuovo requisito introdotto dalla normativa sui MOGM Queste 4 classi correlate alle misure di contenimento e identificate attraverso un adeguata valutazione del rischio sono ne cessarie a controllarne il rischio Le tappe procedurali che consentono di assegnare la classe d impiego sono MISURE DI ASSEGNAZIONE LIVELLO DI CONTENIMENTO VALUTAZIONE DELLA CLASSE CONTENIMENTO NECESSARIE A DEL RISCHIO DI IMPIEGO CHE DEVE ESSERE CONTROLLARE CONFINATO APPLICATO IL RISCHIO Nella maggior parte dei casi le misure di contenimento necessarie a controllare il rischio e la classe di impiego che deve essere applicata sono le stesse MISURE DI CONTENIMENTO NECESSARIE A CONTROLLARE IL RISCHIO MAYA ai RT e CLASSE DI IMPIEGO CLASSE 2 CONTENIMENTO CHE DEVE ESSERE APPLICATO LIVELLO 2 In alcuni casi le misure di contenimento per controllare il rischio possono consistere in un insieme di misure derivanti da due livelli differenti MISURE DI CONTENIMENTO N
86. che umane oppure quelli costituiti da acidi nucleici da microrganismi geneticamente modificati o da cellule autologhe allogeniche o xenogeniche modificate geneticamente ex vivo Tali prodotti sono usati per il trattamento la prevenzione o la diagnosi di malattie nell uomo Le applicazioni di terapia genica in vivo o ex vivo presentano diverse caratteristiche e limiti terapia genica in vivo geni clonati sono trasferiti direttamente nei tessuti del paziente l unica possibilit di terapia genica per tessuti in cui le singole cellule non possono essere coltivate in vitro in numero sufficiente es cellule cerebrali e o quest ultime non possono essere estratte o reimpiantate nel paziente Limiti Non esiste un modo per selezionare e amplificare le cellule che acquisiscono ed esprimono il gene esogeno quindi il successo dipende dal grado di efficienza del trasferimento e dell espressione del gene terapia genica ex vivo Metodo applicabile solo a tessuti che possono essere prelevati dal paziente modificati geneticamente n vitro e reintrodotti nel paziente dove attecchiscono e sopravvivono per un lungo periodo di tempo es cellule del sistema ematopoietico epiteliali prelievo del midollo selezione delle cellule coltura in vitro trattamento Limiti Possibili fenomeni di rigetto da parte del sistema immunitario ovviati dal normale utilizzo di cellule osseo del paziente staminali emopoietiche per un giorno con il vettore autologhe
87. chia dei rischi vedi anche Appendice X sull ADR secondo cui il rischio radioattivit predominante rispetto agli altri pu essere utile fornire qualche indicazione sulle corrette modalit di gestione dei rifiuti radioattivi gi definiti nel paragrafo relativo alla classificazione sulla base della normativa speciale che li disciplina decreto legislativo n 230 1995 come modificato ed integrato dal decreto legislativo n 241 2000 Cenni sulla gestione dei rifiuti radioattivi rifiuti radioattivi sono classificati in base alla loro attivit e al loro tempo di dimezzamento Allo stato attuale non esiste una classificazione armonizzata a livello europeo L IAEA classifica i rifiuti radioattivi nel seguente modo e rifiuti a bassa attivit LLW Low Level Waste il loro livello di radioattivit al di sopra dei limiti che permetterebbero loro di essere smaltiti come rifiuti convenzionali e rifiuti ad attivit intermedia ILW Intermediate Level Waste il loro livello di radioattivit supera il limite stabilito per le scorie di basso livello Essi richiedono la schermatura nelle manipolazioni o un adeguato contenitore di stoccaggio Per questi rifiutinon necessario prendere in considerazione il calore di decadimento nella progettazione delle strutture di contenimento e di smaltimento e rifiuti ad alta attivit HLW High Level Waste il loro elevato livello di radioattivit richiede protezione del personale schermatura remotizz
88. ci tossici volatili o operatore ambiente radioattivi e prodotto Barriera totale tra operatore e area di lavoro Impieghi confinati al alto rischio Classe Ill cappa con guanti 0 aria ricircolata 100 aria espulsa Tabella 24 La scelta della cappa di sicurezza biologica basata sul rischio potenziale dell agente utilizzato sulla possibilit che le ope razioni di laboratorio possano generare aerosol e sulla necessit di proteggere l operatore l ambiente o il prodotto da con taminanti aerotrasportati Secondo la tabella contenuta nell Allegato IV del D Lgs 206 01 che illustra le misure di contenimento di prevenzione e altre misure di protezione per le attivit di laboratorio l utilizzo delle cappe di sicurezza biologica si ritiene necessario nei laboratori che manipolano MOGM con livello di contenimento 3 e 4 Per quelli di livello di contenimento 2 il loro utilizzo limitato alle operazioni per le quali il loro uso si ritiene necessario mentre in quelli di livello di contenimento 1 il loro utilizzo non si ritiene necessario La scelta della cappa di sicurezza biologica determinata dal rischio associato all impiego confinato di MOGM 63 Aria Aria Plenum Livelli di Classi ne contaminato Sistema di espulsione circondato da Aria esterna All interno della stanza o o om bala laboratorio condotto diretto I A1 70 A Aria esterna Espulsione all interno i 30 laboratorio della stanza attr
89. clo Usare particolare cautela per contenitori che possono essere stati sotto pressione Non porre in autoclave un contenitore di liquidi sigillato ci potrebbe causare un esplosione a causa di un eccesso di riscaldamento del liquido durante il ciclo o quando il contenitore viene aperto Buone pratiche di laboratorio usare attrezzature di protezione individuale DPI Y guanti resistenti al calore per il carico e lo scarico dell autoclave Y guanti resistenti ai liquidi per eliminare il contatto con i rifiuti contaminati Y Y camice v occhiali nel caso di pericolo di schizzi minimizzare la formazione di aerosol 73 prevenire la fuoriuscita dei rifiuti in autoclave durante il carico e lo scarico prevenire le ustioni dovute alla manipolazione del materiale autoclavato attenersi alle procedure per la gestione di sversamenti Per una sterilizzazione efficiente necessario un corretto imballaggio che assicuri che il vapore penetri nei rifiuti stessi considerata la relazione che esiste tra la densit del carico e la penetrazione del vapore sacchetti confezionati al limite della loro capacit non saranno ade guatamente decontaminati in autoclave Se sono utilizzati sacchetti in polipropilene devono essere lasciati aperti du rante la sterilizzazione in autoclave poich il polipropilene impermeabile al vapore e se il sacchetto fosse chiuso durante il processo di sterilizzazione la temperatura interna del sacchetto non sarebbe
90. con quelle del non modificato nelle medesime condi zioni di rilascio o di utilizzo Adozione del principio di precauzione Effetti diretti indiretti Pericoli connessi con Y Y microrganismo donatore e ricevente wild type natura del patogeno stabilit del wild type tropismo derivanti dal gene o dall elemento inserito derivanti da OGM finale alterazione caratteristiche patogene esistenti modifica della patogenicit suscettibilit al sistema immunitario tropismo finale OGM vs microrga nismo parentale suscettibilit a profilassi e terapia stabilit trasferimento di sequenze geniche di OGM e rilascio nell ambiente Strategie per sicurezza vettori retrovirali patogenicit Sito di inserimento del transgene ricombinazione tra virus correlati La gravit delle conseguenze di ogni effetto negativo individuato deve essere qualificata Conseguenze influenzate da e Costituzione genetica dell OGM e esposizione ambientale e stato di salute di individui potenzialmente esposti e metodo di somministrazione e frequenza d uso dell OGM Alcune considerazioni da fare e la diffusione di OGM nell ambiente o le sue specie ospite e interazioni con altri organismi e effetti sulla dinamica della popolazione o la diversit genetica nell ambiente ricevente Fattori coinvolti e giudizio globale sulla idoneit di un OGM v strategie di produzione v valutazione capacit dell OGM di stabilire infezione in vivo probabilit ch
91. condizioni di utilizzazione previste le istruzioni per eseguire senza alcun rischio la messa in funzione l utilizzazione il trasporto l installazione il montaggio e lo smontaggio la regolazione la manutenzione e la riparazione 2 1 Foodstuff machinery and machinery for cosmetics or pharmaceutical product all surfaces must be smooth and have neither ridges nor crevices Be designed and constructed in such a way as to reduce the projections edges and recesses Be easily cleaned and disinfected 2 1 Macchine agroalimentari b Tutte le superfici e gli elementi di raccordo devono essere lisci senza rugosit ne spazi in cui possono fermarsi ma terie organiche c gruppi costituiti da pi unit devono essere progettati in modo da ridurre al minimo le sporgenze i bordi e gli angoli Essi sono realizzati preferibilmente mediante saldatura o incollatura continua d Tutte le superfici a contatto con i prodotti alimentari devono poter essere facilmente pulite e disinfettate eventualmente dopo aver tolto le parti facilmente smontabili Gli angoli interni devono essere raccordati con raggi tali da consentire una pulizia completa e liquidi provenienti da prodotti alimentari e i prodotti di pulizia di disinfezione e di risciacquatura devono poter de fluire verso l esterno della macchina senza incontrare ostacoli eventualmente in una posizione pulizia 8 Normativa tecnica e pubblicazioni
92. crobiche compresi gli antibiotici e a gamma degli organismi ospiti Valutazione dell incidenza del MOGM sulla salute umana e sull ambiente Per quanto attiene al microrganismo geneticamente modificato ottenuto necessario valutare gli effetti potenzialmente nocivi che pu avere sulla salute umana e sull ambiente Gli aspetti che vanno presi in considerazione in ordine alla salute umana sono e gli effetti tossici o allergenici attesi correlati al MOGM e o ai suoi prodotti metabolici e il confronto della patogenicit del MOGM con quella del ricevente oppure se pertinente dell organismo parentale e la capacit di colonizzazione attesa e la possibilit che il microrganismo sia patogeno per soggetti umani immunocompetenti e le malattie provocate dal MOGM e i meccanismi di trasmissione e il livello di invasivit e la virulenza 15 e la dose infettiva e i possibili cambiamenti della via di infezione o della specificit tissutale e la possibilit di sopravvivenza del MOGM al di fuori di un organismo umano e la stabilit biologica e o spettro di resistenze agli antibiotici e l allergenicit e la tossinogenicit e la disponibilit di terapie e misure profilattiche adeguate e gli ecosistemi nei quali il microrganismo in questione potrebbe essere involontariamente rilasciato dalla struttura di impiego confinato e l attesa circa la capacit di sopravvivenza e moltiplicazione e la portata della dis
93. curezza scritto nella lingua del Paese di utilizzo con informazioni chiare dovrebbero inoltre garantire semplicit d uso facilit di manuten zione facilit di accesso per la pulizia e la decontaminazione Le attrezzature vanno scelte a seconda di alcuni principi generali per i quali devono essere progettate per impedire e o limitare il contatto tra l operatore e il materiale infetto fabbricate con materiali impermeabili ai liquidi resistenti alla corrosione e rispondenti a requisiti di resistenza strutturale prive di spigoli vivi parti sporgenti o taglienti e parti mobili non bloccabili progettate costruite ed installate per consentire un impiego agevole facilit di manutenzione pulizia decontaminazione e controlli di qualit ed idoneit Va evitato per quanto possibile l uso di materiali in vetro o infrangibili ni ali di A seconda del livello di contenimento stabilito per le operazioni da effettuare saranno necessarie oltre che attrezzature di diverso tipo anche accessori supplementari Ogni apparecchiatura deve essere corredata di apposita scheda dove registrare le informazioni utili su e provenienza e acquisto e installazione e collaudo e datediricevimento e messa in funzione e riferimenti alle procedure di taratura e manutenzione quando necessari loro periodicit e dati del fornitore e dell assistenza tecnica La strumentazione in dotazione ad un laboratorio deve soddisfare le caratteristiche d
94. da Assenza di tossinogenicit II MOGM non deve comportare un incremento della tossinogenicita a causa della modificazione genetica subita n essere noto per le sue propriet tossinogeniche Assenza di allergenicit II MOGM non deve comportare un incremento dell allergenicit a causa della modificazione genetica subita n essere un noto allergene dotato in particolare di propriet allergeniche comparabili a quelle dei microrganismi identificati nella Direttiva 2000 54 CEE relativa alla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da un esposizione ad agenti biologici durante il lavoro Assenza di agenti nocivi avventizi II MOGM non deve ospitare accidentalmente agenti noti ad esempio altri microrganismi in stato attivo o latente presenti nei pressi o all interno del MOGM che potrebbero causare danni alla salute umana o all ambiente Trasferimento di geni Il materiale genetico modificato non deve risultare dannoso se trasferito n essere auto trasmissibile o trasferibile con fre quenza superiore a quella di altri geni del microrganismo ricevente o parentale Sicurezza per l ambiente in caso di dispersione significativa non intenzionale II MOGM non deve produrre effetti negativi sull ambiente n nell immediato n a distanza di tempo qualora dovesse veri ficarsi un incidente che comporti una significativa dispersione non intenzionale del MOGM MOGM che non rispondono ai criteri di cui sopra non possono essere in
95. dal trasportatore dei rifiuti costituisce documentazione equipollente al FIR 3 ad eccezione degli imprenditori agricoli con un volume di affari annuo non superiore a 8 000 delle imprese che raccolgono e trasportano i propri rifiuti non pericolosi nonch per i soli rifiuti non pericolosi delle imprese e gli enti produttori iniziali che non hanno pi di 10 dipendenti 4 soltanto se non rispetta le condizioni previste dall art 183 c 1 lett m del D Lgs 152 2006 parte IV 5 soltanto se effettuate a titolo professionale ovvero conto terzi 6 per i rifiuti sottoposti a procedure semplificate ai sensi dell art 216 del D Lgs 152 2006 parte IV ed effettivamente 60 avviati al riciclaggio ed al recupero sufficiente una semplice comunicazione di inizio attivit alla Sezione Regionale o Provinciale territorialmente competente 7 i Consorzi obbligatori sono esclusi dall obbligo d iscrizione all Albo 8 lo stoccaggio secondo la definizione dell art 183 c 1 lettera del D Lgs 152 2006 parte IV distinto dal deposito temporaneo ovvero esterno al luogo di produzione operazione di recupero R13 o di smaltimento D15 appositamente autorizzata 9 la sterilizzazione soggetta agli obblighi amministrativi segnalati solo se effettuata all esterno del perimetro della struttura di produzione gli obblighi di comunicazione dell attivazione di convalida dell impianto di verifica e certifi cazione del processo e di control
96. debba classificare le proprie attivit riferendosi a capitoli diversi Per esempio un fabbricante di automobili pu reperire i rifiuti che produce sia nel capitolo 12 rifiuti dalla lavorazione e dal trattamento superficiale di metalli che nel capitolo 11 rifiuti inorganici contenenti metalli provenienti da trattamento e ricopertura di metalli o ancora nel capitolo 08 rifiuti da uso di rivestimenti in funzione delle varie fasi della produzione Nota rifiuti di imballaggio oggetto di raccolta differenziata comprese combinazioni di diversi materiali di imballaggio vanno classificati alla voce 15 01 e non alla voce 20 01 3 2 Se nessuno dei codici dei capitoli da 01 a 120 da 17 a 20 si presta per la classificazione di un determinato rifiuto occorre esaminare i capitoli 13 14 e 15 per identificare il codice corretto 3 3 Se nessuno di questi codici risulta adeguato occorre definire il rifiuto utilizzando i codici di cui al capitolo 16 3 4 Se un determinato rifiuto non classificabile neppure mediante i codici del capitolo 16 occorre utilizzare il codice 99 rifiuti non altrimenti specificati preceduto dalle cifre del capitolo che corrisponde all attivit identificata al punto 3 1 si fa notare che l utilizzo del codice 99 esclusivamente residuale e che molte autorit competenti richiedono comunque una specificazione della tipologia nei documenti amministrativi riguardanti rifiuti con tale codice 4 rifiuti contrassegnati ne
97. del lavoro nella concezione dei posti di lavoro nella scelta delle at trezzature e nella definizione dei metodi di lavoro e produzione e riduzione dei rischi alla fonte i priorit delle misure di protezione collettiva rispetto alle misure di protezione individuale Art 18 Obblighi del Datore di Lavoro e del Dirigente z aggiornare le misure di prevenzione in relazione ai mutamenti organizzativi e produttivi che hanno rilevanza ai fini della salute e della sicurezza del lavoro o in relazione al grado di evoluzione della tecnica della prevenzione e della prote ZIONE Art 28 Oggetto della valutazione dei rischi 1 La valutazione dei rischi anche nella scelta delle attrezzature di lavoro e delle sostanze o dei preparati chimici impiegati nonche nella sistemazione dei luoghi di lavoro deve riguardare tutti i rischi per la sicurezza e per la salute dei la voratori ivi Compresi quelli riguardanti gruppi di lavoratori esposti a rischi particolari Come si potuto vedere a monte di tutte le considerazioni vi una doverosa Valutazione dei Rischi Argomento questo di igiene industriale molto complesso che non verr sviluppato in questa sede Evidentemente le tecnologie di alto con tenimento sono applicabili nei casi oggi sempre pi frequenti di molecole fortemente attive come succede ad esempio nel caso dei farmaci citotossici Un altro caso che si pu citare sono le applicazioni in ambito di Ricerca
98. della cappa stessa necessario collegare la cappa stessa al sistema di estrazione dell edifico attraverso un manicotto Il volume di scarico dell aria estratta dall edificio deve essere sufficiente a mantenere il flusso di aria nel laboratorio e la differenza di pres sione tra il manicotto e il sistema di filtrazione Classe Il Tipo A2 Fonte ESCO WORLD CLASS WORLDWIDE Figura 16 Le cappe di sicurezza di Classe Il A2 si differenziano da quelle di Classe Il A1 per diversi aspetti il sistema di espulsione che determina se l aria sia scaricata dalla cappa all interno o all esterno attraverso uno specifico sistema di estrazione o tramite quello dell edificio il gradiente di pressione se le cappe hanno i plenum contaminati a pressione positiva circondati da un condotto a pres sione negativa 66 Caratteristiche Sate I contaminant in Danger I contaminanti in caso di perdita caso di perdite del plenum del plenum sono possono raccolti dalle ventole fuoriuscire di aspirazione nel laboratorio Spazio a pressione negativa determinata dalla ventola di aspirazione Cappa Classe Il A1 Cappa Classe Il A2 Figura 17 e Aspirazione interna dell aria dalla griglia frontale con velocit di flusso di almeno 0 5 m s e Tutti i plenum contaminati sono circondati da una pressione d aria negativa e Aria ricircolata 70 aria emessa da un comune plenum nella stanza 30 Classe II Tipo B1
99. dere lampada a raggi UV e rimuovere immediatamente con carta assorbente imbevuta di soluzione di decontaminazione gli eventuali piccoli versamenti del materiale contaminato nella cappa cambiare i guanti dopo la decontaminazione e metterli insieme alla carta utilizzata per la pulizia nel materiale da autoclavare in caso di versamenti di maggiore entit liquidi che attraversano la parte anteriore o posteriore delle griglie tutti gli elementi all interno della cappa devono essere rimossi e decontaminati e la soluzione decontaminante deve essere versata sulla superficie di lavoro e attraverso la griglia nella vaschetta Nel caso di decontaminazione con gas il metodo pi comune utilizza la formaldeide e il perossido idrogeno Decontaminazione delle cappe biologiche con formaldeide Viene effettuata mediante nebulizzazione con i vapori di formaldeide 60 ml di formalina e 60 ml di acqua per 1 m di cabina a 21 C e con umidit relativa del 70 dopo il processo consigliabile l inattivazione con ammoniaca L operatore addetto a tale attivit deve indossare i DPI necessari ed esporre segnaletica idonea all esterno del locale Procedura e Disporre all interno della cappa un bunsen di sicurezza alimentato a gas o piastra elettrica e Chiudere il foro di espulsione e Far evaporare la soluzione di formaldeide in acqua dopo aver chiuso anche il vano anteriore della cappa e Mettere la cappa in funzione mentre evapora la formaldeide e
100. di numerazione tra questi tre livelli di contenimento numerati da 1 a 3 e le analoghe misure di contenimento previste dal superato D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 numerate da 2 a 4 in accordo con l uso ormai internazionale delle sigle P1 P2 P3 P4 era spesso causa di notevole confusione Le operazioni con MOGM erano poi distinte in due tipi A o B a seconda che si trattasse di operazioni eseguite a scopo di insegnamento ricerca o sviluppo o di operazioni industriali o commerciali Le operazioni di tipo A o B erano soggette a procedure distinte ad esempio era richiesta una notifica per operazioni di tipo IB ma non per operazioni di tipo IA La distinzione tra A e B di fatto non basata sull entit del rischio nella nuova direttiva scomparsa Elementi presenti anche nella normativa precedente ma trattati piu estesamente e approfonditamente nella nuova normativa sono la valutazione del rischio cui dedicato il nuovo Allegato Ill ed i requisiti minimi che caratterizzano i vari livelli di contenimento Allegato IV e principi che riguardano la valutazione del rischio vengono enunciati nell Allegato III della nuova direttiva e Nell Allegato IV vengono invece stabiliti i requisiti minimi che caratterizzano i vari livelli di contenimento Tali requisiti minimi sono risultati essere pi restrittivi di quelli enunciati nella direttiva precedente nonch di quelli previsti dal superato D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 Direttiva 2009 41 CE d
101. dispositivi di sicurezza ai raccordi per l effettuazione delle prove al telaio e alle pannellature e la strumentazione di cui deve essere fornita ed in particolare gli strumenti di controllo i dispositivi di segnalazione i 57 sensori il sistema di temporizzazione e le registrazioni automatiche e il sistema di controllo automatico con individuazione di ciclo abortito e le prove di tipo e funzionali sia biologiche che fisiche secondo un programma specificato e la marcatura da apporre e la documentazione di cui deve essere corredata Viene poi descritto l apparato di prova contenitore carico strumenti e indicatori biologici Sono fornite indicazioni per il collaudo di conformit la messa in servizio e la convalida sia iniziali che successive quindi sulla verifica delle caratteristiche funzionali e sulla manutenzione La messa in servizio in particolare prevede un verifica su precisione degli strumenti parametri fisici registrati ed indicati aumento di pressione in caso di rimozione dell aria per mezzo del vuoto assenza di perdite di fluidi rispondenza delle emissioni alla normativa alimentazione di fluidi ed energia elettrica e livello di pressione sonora Sono infine fornite alcune indicazioni per la formazione del personale ed in particolare il responsabile gli operatori il col laudatore ed i manutentori Trattamento e destino del rifiuto Qualora il rifiuto debba essere inviato a termovalorizzazione ad esempio perch
102. do di contenimento fisico necessario impermeabilit robustezza chiusura Le disposizioni del DPR 254 2003 per i rifiuti a rischio infettivo costituiscono comunque utile indicazione purch ci non sia in contrasto con i dettami del D Lgs n 206 2001 ovvero tali rifiuti dovrebbero essere depositati movimentati internamente raccolti e trasportati utilizzando apposito imballaggio a perdere anche flessibile recante apposita scritta ad es rifiuti pe ricolosi contaminati da Microrganismi Geneticamente Modificati ed il simbolo del rischio biologico o se si tratta di rifiuti taglienti o pungenti apposito imballaggio rigido a perdere resistente alla puntura recante analoga scritta con l aggiunta della caratteristica specifica taglienti e pungenti contenuti entrambi nel secondo imballaggio rigido esterno eventualmente riu tilizzabile previa idonea disinfezione ad ogni ciclo d uso ed anch esso recante la scritta identificativa Gli imballaggi esterni devono avere caratteristiche adeguate per resistere agli urti ed alle sollecitazioni provocate durante la loro movimentazione e trasporto e devono essere realizzati in un colore idoneo a distinguerli dagli imballaggi utilizzati per il conferimento degli altri rifiuti In ogni caso devono essere previste formulazioni permanenti e leggibili o etichette scritte chiaramente e fissate in modo sicuro ed inalterabili Il contenitore o la sua etichetta devono essere marcati con l indicazione i
103. e Le misure adottate devono avere lo scopo di eliminare il rischio di infortuni durante l esistenza prevedibile della mac china comprese le fasi di montaggio e smontaggio anche se tale rischio fosse la conseguenza di una situazione anormale prevedibile b Per la scelta delle soluzioni pi opportune il fabbricante deve applicare i seguenti principi nell ordine indicato e eliminare o ridurre i rischi nel miglior modo possibile integrazione della sicurezza nella progettazione e nella costruzione della macchina e adottare le misure di protezione necessarie nei confronti dei rischi che non possono essere eliminati e informare gli utilizzatori dei rischi residui d Nelle condizioni d uso previste devono essere ridotti al minimo possibile il disagio la fatica e le tensioni psichiche stress dell operatore tenuto conto dei principi dell ergonomia Ergonomia na a LU siii r k Modello Si evitano Scafandri Figura 40 Prevenzione dei rischi dovuti agli elementi mobili Si riporta solamente un esempio di un isolatore nel quale al suo interno presente un piccolo mulino rompigrumi In questo caso sono state installate delle fotocellule per impedire il funzionamento del mulino stesso quando l operatore ha le braccia infilate nei guanti Figura 42 Machinery Directive 2006 42 EC Annex 1 3 7 Risks related to moving parts Photocells Figura 41 97 Rischi di esplosione La m
104. e Sviluppo sia chi mico che biologico in cui quello che si sta manipolando pu essere potenzialmente pericoloso Dai precedenti brevi estratti dalle norme di legge appare chiaro come gli isolatori e le altre apparecchiature di alto con tenimento rispettino in pieno le richieste di e contenimento del rischio alla fonte l isolatore confina un volume protetto attorno alla sorgente di agente pericoloso e rispetto dei principi ergonomici poich evita agli operatori di indossare pesanti scafandri e adeguamento alle moderne tecnologie trattandosi di quanto di pi avanzato esista in campo tecnologico Ulteriori successive citazioni pi inerenti alle attrezzature di lavoro rafforzano e confermano i concetti sopra esposti Council Directive 89 655 EEC 30 Nov 1989 94 minimum safety and health requirements for the use of work equipment by workers at work Annex par 2 5 Work equipment presenting hazard due to emissions of gas vapour liquid or dust must be fitted with appropriate con tainment and or extraction devices near the source of the hazard Figura 39 4 Riferimenti legislativi Agenti Cancerogeni Council Directive 90 394 EEC 28 June 1990 Protection of workers from the risks related to exposure to carci nogens at work Article 5 prevention and reduction of exposure par 2 the employer shall ensure that the carcinogen is in so far as is technically possible manufactured and used in a clo
105. e del vettore e descrizione dettagliata delle modifiche apportate modalit di introduzione e descrizione delle modifiche del vettore che ne impediscono la replicazione e riducono la probabilit di ricombinazione con virus selvatici e descrizione dei metodi di amplificazione dei vettori virali e delle cellule mediante le quali tale amplificazione viene condotta Se la propagazione virale richiede la coinfezione della linea di impacchettamento con un virus helper o l in troduzione di altro materiale genetico descrizione delle modalit di rimozione di eventuali virioni proteine virali o ma teriale genetico indesiderati dal prodotto finale e documentazione circa l origine e le caratteristiche biologiche del virus parentale dettagliata descrizione caratterizzazione e identificazione delle sequenze terapeutiche inserite siano esse codificanti o regolatorie Tutte le sequenze virali mo dificate per la costruzione del vettore andranno indicate e caratterizzate almeno attraverso adeguate analisi di restri zione Nel caso dei vettori retro e lentivirali nonch dei vettori adeno associati e dei vettori amplicon richiesta la verifica sperimentale della sequenza dell intero vettore e descrizione del razionale scientifico alla base della scelta del vettore virale per la patologia considerata Nel caso in cui saranno preferiti vettori virali competenti per la replicazione richiesta un approfondita giustificazione basata su consolidati dati
106. e di 1 atmosfera se per caso l acqua dovesse finire cosa avvertibile con l assenza di sfiato spegnere immediatamente l autoclave fare attenzione a non toccare l autoclave durante l uso onde evitare gravi ustioni una volta trascorso il tempo previsto per la sterilizzazione spegnere l autoclave non aprire mai lo sfiato per accelerare il raffreddamento aprire l autoclave solo quando il manometro arrivato a zero fare attenzione al vapore quando si solleva il coperchio prelevare i campioni autoclavati con gli appositi guanti chiudere subito il coperchi e controllare il nastro da autoclave richiudere l autoclave e staccare l interruttore periodicamente o quando si reputi necessario pulire l autoclave Esempi di materiali che devono essere autoclavati prima dello smaltimento colture e stock di agenti biologici infettivi materiale e dispositivi connessi alla colture di materiale biologico e alla loro manipolazione materiale solido contaminato es asciugamani di carta stoffa pipette fiasche e contenitori bottiglie piastre Petri e guanti Scarico sicuro dell autoclave A ciclo completo attendere fino a quando il manometro della camera di pressione sia zero prima di aprire l autoclave Attendere alcuni minuti prima di rimuovere i sacchetti dall autoclave per lasciar raffreddare ulteriormente eventuali liquidi o residui di agar fuso che possono essere fuoriusciti nel contenitore secondario durante il ci
107. e eventi rari possono verificarsi v modalit di somministrazione al paziente dose via di somministrazione v modalit di possibile esposizione ambientale grandezza durata La stima del rischio ambientale l entit delle conseguenze dei potenziali effetti avversi identifi cati combinato con l esito della valutazione del rischio Il rischio pu anche essere descritto in termini qualitativi Pur non essendo possibile moltipli care termini qualitativi una matrice di rischio utile come strumento per illustrare il processo di stima del rischio stesso 5 Applicazione di strategie di gestione per rischi derivanti da rilascio deliberato o di commercializza zione di OGM 6 Determinazione del rischio generale dell OGM Tabella 11 Strategie di gestione del rischio possono riguardare e caratterizzazione del rischio e misure di gestione e conseguenze dell avvenuto pericolo e stima rischio Sulla base dei passaggi precedenti una conclusione dovrebbe essere data se l impatto am bientale globale accettabile o meno Questa valutazione finale dovrebbe essere espressa come una sintesi di tutti i rischi che sono connessi alla specifica applicazione di terapia genica MISURE DI CONTENIMENTO DA APPLICARE PER LA GESTIONE DEL RISCHIO e Buona prassi operativa e appropriato equipaggiamento per minimizzare l esposizione ad agenti infettivi e Stretta aderenza a protocolli standard operativi Equipaggiamento di sicurezza
108. e indicare per quanto tempo richiesto il rinnovo B se si tratta di un rinnovo successivo e fornire la storia dei cambiamenti del MOGM intercorsi e tutte le altre informazioni di cui al punto a 10 Nel caso in cui le variazioni proposte e o le condizioni d uso e di sicurezza applicate non siano adeguate per consentire che l Impiego confinato continui sar necessario procedere ad una nuova autorizzazione Tariffe Con Decreto del Ministro per la Salute 2 Maggio 2001 G U del 5 Maggio 2001 vengono fissate le tariffe da versare all atto della presentazione di ciascuna notifica Perch la notifica inizi il suo iter di valutazione necessario infatti che ad essa sia allegata ricevuta dell avvenuto pagamento sul conto corrente postale 58299009 intestato alla sezione della tesoreria pro vinciale di Viterbo La tariffa dovuta una sola volta per le diverse sezioni di uno stesso impianto purch soddisfino le condizioni specificate all art 4 del citato decreto ministeriale Anche nel caso di impieghi di MOGM che sfruttano uno stesso sistema ospite vettore per diversi inserti o uno stesso sistema vettore inserto in diversi ospiti questi impieghi possono essere considerati parti di una stessa notifica di impiego con pagamento di una sola tariffa ULTERIORE NORMATIVA DI RIFERIMENTO Il D Lgs 81 08 ovvero il Testo unico sulla salute e la sicurezza sul lavoro e sue modifiche ed integrazioni D Lgs 106 09 l attuazione dell art 1
109. e questi rischi 29 Considerazioni in termini di salute pubblica Dovranno essere considerati e quali sono le possibilit che il vettore contenente il materiale genetico possa propagarsi oltre il bersaglio previsto ad esempio diffusione di vettori competenti per la replicazione ricombinazione con virus helper ecc e le misure preventive intese a minimizzare o eliminare il rischio di diffusione del prodotto ad altri individui come il personale medico infermieristico o nell ambiente e quali saggi sono previsti per controllare un eventuale diffusione del medicinale sperimentale al di fuori del soggetto della sperimentazione e See per quanto tempo il paziente dovr essere mantenuto in isolamento e in base a quali criteri potr uscirne e icriteri di selezione del personale medico e paramedico che pu venire in contatto col paziente e con suo materiale biologico e come tale personale viene informato sul protocollo sperimentale e eventuali accertamenti da eseguirsi sul personale LA NOTIFICA DI IMPIEGO CONFINATO PER MEDICINALI SPERIMENTALI PER TERAPIA GENICA RICHIEDE LE SEGUENTI INFORMAZIONI La notifica di impiego confinato per medicinali sperimentali per terapia genica richiede le seguenti informazioni linee guida sulla sperimentazione clinica di fase con medicinali sperimentali per terapia genica somatica ISS Notiziario dell Istituto Superiore di Sanit Volume 17 n 7 8 Luglio Agosto MC Galli G Migliaccio e Origin
110. e solventi Sostanze organiche alogenate non utilizzate come solventi escluse le sostanze polimerizzate inerti Sali per rinvenimento contenenti cianuri te ah a 47 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Oli e sostanze oleose minerali ad esempio fanghi di lavorazione ecc Miscugli olio acqua o idrocarburo acqua emulsioni Sostanze contenenti PCB e o PCT ad esempio isolanti elettrici ecc Sostanze bituminose provenienti da operazioni di raffinazione distillazione o pirolisi ad esempio residui di distillazione ecc Inchiostri coloranti pigmenti pitture lacche vernici Resine lattici plastificanti colle adesivi Sostanze chimiche non identificate e o nuove provenienti da attivit di ricerca di sviluppo o di insegnamento i cui effetti sul uomo e o sull ambiente non sono noti ad esempio rifiuti di laboratorio ecc Prodotti pirotecnici ed altre sostanze esplosive Prodotti di laboratori fotografici Qualunque materiale contaminato da un prodotto della famiglia dei dibenzofurani policlorurati PCDF Qualunque materiale contaminato da un prodotto della famiglia delle dibenzoparadiossine policlorurati PCDD Allegato G 2 Rifiuti contenenti uno qualunque dei costituenti elencati nell Allegato H aventi una delle caratteristiche elencate nell Allegato e consistenti in in corsivo sono riportate le voci di potenziale interesse per l uso confinato dei MOGM 19 20 2 22 23 24 25 26 27
111. eabile ai gas per la successiva decontaminazione distruzione tramite incenerimento Per quanto riguarda i laboratori di classe 4 secondo il D Lgs 206 01 sia l aria immessa nella zona di lavoro che l aria estratta devono essere filtrate attraverso un ultrafiltro HEPA o un filtro simile filtri per le particelle sospese sono progettati per prevenire la contaminazione dei prodotti o dell ambiente 37 e per proteggere gli operatori da eventuali contaminazioni Esistono 3 tipi principali molto efficaci nella separazione di par ticelle di dimensioni fino a 10m consistono di fibre submicroniche di borosilicato idrofobici infiammabili e sono comune mente noti come HOSCH HEPA ULPA Le particelle o la velocit dell aria determinano il grado di separazione in quanto la separazione funzione del diametro delle particelle delle fibre e del valore di flusso attraverso le fibre da 99 97 a 99 995 da 99 97 a 99 995 da 99 997 a 99 999 Ambiente di lavoro isolamento Non necessario Non necessario Necessario Necessario Laboratorio sigillabile per la fumigazione Non necessario Non necessario Necessario Necessario Superfici resistenti ad acqua acidi alcali Non necessario Non necessario Necessario Necessario solventi disinfettanti agenti decontaminanti bancone bancone bancone arredo bancone arredo e facili da pulire e disinfettare pavimento pavimento Laboratorio equipaggiato con gruppo Non necessario Non necessa
112. egrazione di materiale genetico esogeno nel genoma di cellule bersaglio pu dar luogo a una serie di fenomeni inde siderati quali e inattivazione di un gene soppressore di tumori e cis o trans attivazione di proto oncogeni o altri geni capaci di promuovere proliferazione cellulare e variazioni nella capacit delle cellule a rispondere ad agenti quali fattori di crescita citochine o ormoni con conseguente acquisizione di potenziale tumorigenicit L insorgenza di eventi di mutagenesi inserzionale stata osservata di recente in uno studio di terapia genica facente uso di cellule staminali emopoietiche trasdotte ex vivo con vettori retrovirali Nei protocolli che prevedono l utilizzazione di cellule trasdotte ex vivo con vettori retrovirali o lentivirali o comunque poten zialmente capaci di generare eventi di mutagenesi inserzionale le condizioni di trasduzione e le dosi dovranno essere giu stificate in rapporto ai dati di integrazione gia disponibili e i pazienti dovranno essere sottoposti a monitoraggio per verificare l inserzione del vettore Negli altri tipi di protocollo la necessit di monitorare i pazienti per l integrazione del vettore verr valutata caso per caso In tutti i casi tale monitoraggio non deve essere considerato un surrogato del controllo di effetti avversi del trattamento Riattivazione di virus latenti Il protocollo clinico dovr prendere in considerazione la possibile riattivazione nel paziente di virus lat
113. el Parlamento Europeo e del Consiglio del 6 maggio 2009 Considerate le diverse e sostanziali modifiche che ha subito la Direttiva 90 219 CEE per ragioni di chiarezza si effettuata la rifusione delle disposizioni in questione con la Direttiva 2009 41 CE del Parlamento Europeo e del Consiglio del 6 maggio 2009 I nuovi elementi introdotti nella direttiva riguardano esclusivamente le procedure di comitato pertanto non stato necessario provvedere al recepimento della stessa da parte degli Stati Membri VALUTAZIONE DELLA CLASSE DELL IMPIEGO CONFINATO Elemento essenziale per la preparazione di una notifica di impiego la valutazione della classe dell impiego confinato che si intende eseguire art 5 del D Lgs 206 01 In analogia con i gruppi di rischio da 1 a 4 previsti dal D Lgs 81 2008 in materia di tutela della salute e della sicurezza nei luoghi di lavoro sono previste quattro classi di impiego definite sulla base del livello di contenimento necessario a proteggere la salute umana e l ambiente dai possibili rischi connessi con l uso di un particolare MOGM Tabella 3 impieghi confinati che presentano rischi nulli o trascurabili CLASSE 1 ovvero operazioni per le quali un livello 1 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente impieghi confinati a basso rischio ovvero operazioni per le CLASSE 2 quali un livello 2 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente impieghi confinati
114. ema di aspirazione esterno alla cappa che mantiene una pres sione negativa circa 124 5 Pa al suo interno Guanti a manicotto di gomma pesante posizionati frontalmente permettono l accesso al piano di lavoro Le cappe di classe Ill devono avere un box di passaggio a doppia porta interbloccante che pu essere sterilizzato e dotato di filtro HEPA La cappa di classe Ill pu essere collegata ad un autoclave passante ed usata per decontaminare tutto il materiale che entra o esce dalla cappa Diversi glove box possono essere uniti insieme per ampliare Il piano di lavoro Le cappe di classe Ill sono idonee per lavorare in laboratorio a livello di contenimento 3 e 4 Caratteristiche e Chiusura totale ed ermetica dotata di manicotti con guanti e Funzionamento a pressione negativa e Presenza di filtro HEPA sull aria in ingresso ed di un doppio filtro HEPA sull aria in uscita Manutenzione cappe di biologiche Periodicit annuale e Verifica e sostituzione dei filtri come previsto dal libretto d uso e manutenzione e Verifica e pulizia delle tubazioni di scarico ove presenti e Verifica del funzionamento elettrico e meccanico del motore dell elettroventilatore ove presente e Controllo delle ore di funzionamento dei filtri ove possibile e verifica generale delle parti meccaniche ad es pannello frontale saliscendi ecc parti strutturali es integrit superfici e tubazioni indicatori e allarmi ove presenti impianto elettrico
115. emente attive o microrganismi l uso degli isolatori perfettamente rispondente alla normativa vi gente riferimenti di leggi italiane citati testualmente saranno in corsivo Per quanto riguarda la legislazione comunitaria si utilizzata la versione in inglese anch essa in corsivo Innanzitutto occorre ricordare che da oltre venti anni le Direttive si muovono nel solco del cosiddetto Nuovo Approccio new approach Resolution 7 May 1985 che tende ad evitare di imporre dettagliate soluzioni tecniche nelle norme di legge Infatti nel corso di molti anni di esperienza le prime leggi tecniche risalgono agli anni 20 si visto che l evoluzione tec nologica corre molto pi velocemente delle norme di legge Questo fenomeno notevolmente accentuato in questi anni fa s che se si decidesse di fissare soluzioni tecniche per legge si finirebbe inevitabilmente per impedire l adozione di nuove e pi efficaci misure di sicurezza che l evoluzione della tecnologia propone e che la normativa nel frattempo rimasta indietro invece nega o non prevede Si finirebbe cos per creare un danno al livello di sicurezza generale Un esempio per tutti i misuratori a visione diretta del livello dell acqua a vetro nei generatori di vapore che in virt di leggi degli anni 30 sono stati prescritti fino a tempi recenti quando la tecnologia nel frattempo aveva gi elaborato soluzioni pi moderne ed effi
116. endo che ove la norma UNI EN 12461 parla di rifiuti gassosi per omogeneit con la normativa italiana in materia di rifiuti opportuno intendere effluenti gassosi o gas di scarico che se emessi in atmosfera sono esplicitamente esclusi dal campo di applicazione del D Lgs n 152 2006 Norme in materia di gestione dei rifiuti in modo da non generare confusione ovvio che gli effluenti devono essere opportunamente trattati come del resto previsto dal D Lgs n 206 2001 e il materiale derivante dal trattamento degli effluenti filtri effluenti liquidi da lavaggi polveri abbattute ecc dovr essere gestito come rifiuto contaminato inoltre come per i liquidi qualora gli effluenti gassosi siano contenuti in un volume definito e movimentabile serbatoi o recipienti di qualsiasi genere devono invece essere considerati rifiuti Il primo passo quello di identificare i rifiuti che presentano rischio biologico in modo da separarli fin dall origine quindi oc corre individuare eventuali altre categorie di rischio rispetto le quali possono essere presenti incompatibilit tra i metodi di trattamento pi opportuni In tali casi es rifiuti contenenti materiali biologici e sostanze tossiche oppure radioattive dovrebbe essere effettuata una valutazione del rischio per determinare quale rischio deve essere trattato prima La codifica dei rifiuti dovrebbe essere effettuata proprio sulla base del rischio prevalente Alcune indicazioni utili sulla
117. enerare particelle virali competenti per la replicazione Replication Competent Virus RCV nonch alle relative metodiche di saggio In questa prospettiva andranno eliminate tutte quelle sequenze virali non necessarie per la produzione espressione del vettore virale Andranno altres ridotte al minimo tutte quelle sequenze che presentano omologie conosciute con virus competenti per la replicazione o con virus endogeni umani In particolare nel caso di vettori retrovirali andr eliminata ogni omologia di sequenza tra il vettore e i costrutti packaging potenzialmente in grado di originare retrovirus competenti per la replicazione attraverso eventi di ricombinazione Con lo stesso criterio sar anche necessario che le diverse funzioni pac kaging vengano espresse il piu possibile da vettori indipendenti genomi retro e lentivirali presentano all estremit 3 una sequenza regolatoria promotrice 3 LTR che una volta inserita nel genoma delle cellule ospite potenzialmente in grado di promuovere l espressione di geni cellulari adiacenti Per escludere ragionevolmente questa possibilit si raccomanda che i vettori retro e lentivirali siano costruiti in modo tale che una volta integrati perdano qualsiasi funzione regolatoria promotrice alla propria estremit 3 30 Inoltre nell ambito della valutazione del rischio per la produzione di vettori lentivirali devono essere considerate tutte le possibili combinazione dei plasmidi utili
118. entano il trasferimento sicuro del materiale in un autoclave al di fuori del laboratorio e che forniscano un livello di protezione equivalente e inun livello di contenimento 4 sia presente in laboratorio La sterilizzazione Tabella 26 il processo chimico o fisico in grado di distruggere tutte le forme di microrganismi viventi su materiali perfettamente asciutti che si attua tramite 71 e Mezzi fisici calore filtrazione radiazioni ionizzanti e Mezzi chimici disinfettanti gt Completa e radicale denaturazione delle proteine e del DNA o RNA microbico Interferiscono con i processi vitali dei microrganismi in modo irreversibile e selettivo STERILIZZAZIONE Procedura fisica o chimica che distrugge tutti i microrganismi incluso un largo numero di spore batteriche altamente resistenti Metodi di sterilizzazione secondo l OMS Calore a Secco Ossido di Etilene Formalina Metodi Stufa a Secco Autoclave Autoclave Autoclave Acceleratore lineare di cobalto 60 Tabella 26 La sterilizzazione comprende diverse fasi e Raccolta e Decontaminazione e Lavaggio manuale automatico ad ultrasuoni e Risciacquo acqua corrente e demineralizzata e Asciugatura pistole ad aria compressa e Confezionamento e Sterilizzazione e Conservazione materiali sterilizzati Dipendente dal tipo di attrezzature Dipendente dal tipo di attrezzature Per ogni fase necessario indossare gli idonei DPI
119. enti quali Herpes virus Epstein Barr Citomegalovirus e prevedere relativi adeguati controlli sia nella selezione dei pazienti che nel periodo di os servazione successivo alla terapia Altrettanto vale per la possibilit di complementazione nel paziente di vettori virali deficienti per la replicazione a causa della presenza di virus endogeni Effetti immunitari La sovra espressione del gene terapeutico e o di qualsiasi costituente del vettore genico in particolare in organi o tessuti non bersaglio pu portare ad una attivazione indesiderata del sistema immune ad esempio risposte infiammatorie croniche in duzione di fenomeni di auto immunit Dovr essere presa in considerazione l immunogenicit del prodotto del gene introdotto indipendentemente dal fatto che il meccanismo d azione previsto sia mediato o meno dalla risposta immune Mobilizzazione del materiale genetico Come stato gi evidenziato la competenza alla replicazione virale recuperata in vivo in seguito a eventi di co o super in fezione del paziente con virus correlati oppure a seguito di eventi di ricombinazione con sequenze virali endogene pu por tare alla mobilizzazione del materiale genetico verso cellule non bersaglio ad esempio cellule della linea germinale o alla sua diffusione verso il personale medico o para medico verso i familiari del paziente o ad altri Nel protocollo clinico dovranno essere descritte le procedure atte a riconoscere e minimizzar
120. eparazione per uso industriale Rifiuti prodotti dal trattamento aerobico di rifiuti solidi Rifiuti prodotti dal trattamento anaerobico di rifiuti Rifiuti prodotti dalle operazioni di bonifica di terreni e risanamenti delle acque di falda L infettivit una della caratteristiche di pericolo per cui mancano i criteri di riferimento sia a livello comunitario che a livello nazionale per cui l assegnazione di tale caratteristica effettuata esclusivamente sulla base della provenienza e della va lutazione soggettiva del produttore del rifiuto sempre consigliata l inattivazione dei MOGM potenziali contaminanti del rifiuto o dell effluente Sono inoltre oggetto di disposizioni specifiche le seguenti tipologie di rifiuti e veicoli fuori uso VFU d lgs n 209 2008 e s m i e irifiuti contenenti amianto RCA DM n 248 2004 e irifiuti di apparecchiature elettriche ed elettroniche RAEE d lgs n 151 2005 e s m i Infine si segnalano le recenti modifiche normative intervenute in ambito europeo che avranno progressivamente influenza sulla classificazione dei rifiuti e larecentissima pubblicazione in GUCE 31 dicembre 2008 del regolamento CE n 1272 2008 relativo alla classificazione all etichettatura e all imballaggio delle sostanze e delle miscele cosiddetto CLP che modifica e dal 1 giugno 2015 abroga le direttive 67 548 CEE e 1999 45 CE e che modifica il regolamento CE n 1907 2006 REACH in particolare ha abrogato
121. eplica e pu essere rinvenuto nel sangue e o nei secreti e quindi pu contaminare l ambiente le precauzioni dovrebbero essere maggiori e diverse a seconda del tipo di contatto necessario per la trasmissione prevedendo modalit di contenimento in grado di limitare al massimo la diffusione attraverso qualunque via precauzioni standard pre cauzioni per contatto precauzioni per via aerea Le direttive di isolamento dovranno comunque essere modulate sulle ca ratteristiche dei virus impiegati e potranno essere quindi pi o meno severe a seconda delle caratteristiche di replicazione ed eliminazione dell agente impiegato Occorre comunque considerare che il possibile rischio che deriva dall impiego dei vettori virali dovrebbe in realt essere gi ridotto al minimo nel corso degli studi preclinici che quindi rappresentano la maggiore garanzia di sicurezza dell impiego di vettori in terapia genica Si ritiene comunque necessario durante l impiego clinico di questi vettori applicare una serie di precauzioni generali e specifiche pur sottolineando che nessuna delle procedure indicate pu ridurre a zero il rischio di dif fusione di un agente virale e che la sicurezza di impiego resta soprattutto affidata ad una completa conoscenza preclinica delle caratteristiche degli agenti impiegati 23 CAPITOLO QUINTO Vettori per terapia genica Il trasferimento di un transgene nella cellula bersaglio necessita di un sistema vettore in grado di veic
122. er colture cellulari e le piastre Petri devono essere chiuse prima dell eliminazione mentre le pipette devono es sere inserite in un doppio sacchetto biohazard b Il sacchetto biohazard deve essere dotato di sistema di rilevazione della corretta sterilizzazione o deve essere chiuso con nastro indicatore inoltre deve essere riempito per circa 2 3 del volume in modo tale da permettere l ingresso del vapore al momento della sterilizzazione vedi sezione dedicata autoclave Rifiuti liquidi a il materiale liquido deve essere raccolto in contenitori di plastica in cui stata aggiunta una quantit di ipoclorito di sodio corrispondente al 20 del volume finale Quando il volume all interno del contenitore raggiunge la met o i due terzi della sua capacit procedere ad autoclavare il materiale Assicurarsi che il contenitore sia chiuso con un tappo prima di rimuoverlo dalla cappa b raccomandabile usare un contenitore dedicato per trasportare il materiale all autoclave MISURE DI EMERGENZA UNI EN 12297 2000 Norme di comportamento in caso di incidente Per stabilire un piano di intervento in caso di emergenza necessario rispettare le procedure operative conoscere i respon sabili nei diversi settori sicurezza laboratorio ecc ed i recapiti telefonici delle strutture di pronto intervento ed avere a disposizione materiale di pronto soccorso abiti di protezione disinfettanti e attrezzatura per la decontaminazione Nel la
123. erimento genico in cellule probabilit di attivare o inattivare non in attiva replicazione ad sequenze di DNA endogeno es cellule staminali linfociti localizzate vicino al sito di cellule nervose e dendritiche intergrazione del DNA provirale applicabili a terapia genica in genoma dei lentivirus pi vivo complesso di quello dei retrovirus 26 Principali preoccupazioni per quanto riguarda la produzione e l uso clinico sono e la potenziale generazione di lentivirus competenti per la replicazione durante la produzione e ricombinazione in vivo con sequenze lentivirali e inserzione del DNA provirale vicino o all interno di geni che possono innescare l induzione di una cancerogenesi PROGETTAZIONE DI VETTORI LENTIVIRALI VL Devono essere impiegati tutti i mezzi possibili per ridurre la patogenicit associata con l uso di lentivirus wild type WT nella produzione di VL e ridurre al minimo i rischi connessi con il loro uso Questo si pu ottenere utilizzando e genomi lentivirali minimi attraverso l eliminazione dei geni lentivirali per la virulenza o accessori e separazione dei geni sequenze lentivirali essenziali per la costruzione del VL in opportune costrutti cassette che riducono al minimo la possibilit di generazione di Lentivirus Competenti per la Replicazione RCL Attualmente la maggior parte dei processi di produzione VL impiega almeno tre plasmidi 1 un costrutto envelope vettore di pseudotipizz
124. erisce l informazione tra questi organismi e da un inserto che contiene uno o pi geni in grado di rivelare l attivit biologica Ciascuna di queste parti insieme al costrutto finale deve essere presa in considerazione al fine di ottenere un accurata e corretta valutazione del rischio Ricadono sotto la nuova normativa tutte le attivit che comportano l uso di MOGM inclusa la semplice conservazione stoc caggio di ceppi o linee cellulari Il processo di valutazione del rischio indicato nel D Lgs 206 01 si basa sull attuazione di due procedure La prima procedura prevede l identificazione delle caratteristiche potenzialmente nocive del MOGM rischio l attribuzione al MOGM di una classe iniziale classi da 1 a 4 sulla base degli effetti nocivi potenziali e la valutazione della probabilit con cui gli effetti nocivi possono verificarsi sia su soggetti umani sia sull ambiente tenendo conto della natura e della portata del lavoro svolto e delle misure di contenimento adottate sulla base della classificazione iniziale del MOGM La seconda procedura prevede la classificazione definitiva del MOGM l individuazione delle misure di contenimento concrete per garantire la si curezza durante l attivit implicante l uso di microrganismi geneticamente modificati Il livello di classificazione definito mediante la valutazione del rischio determina i requisiti relativi al contenimento per le attivit connesse ai MOGM conformemente all
125. esign principles 28 pagg La norma illustra anche con l ausilio di numerosi disegni diverse caratteristiche costruttive del guscio degli isolatori inclusi i dettagli delle guarnizioni e degli elementi che trattengono le superfici trasparenti Vi inoltre una serie di considerazioni riguardanti il settore nucleare con indicazioni su schermature particolari e bracci meccanici per la manipolazione di oggetti Il tipo di rifinitura illustrato sembra tuttavia inferiore agli standard richiesti per il settore farmaceutico ISO 10648 2 Containment enclosures part 2 Classification according to leak tightness and associated checking methods 14 pagg Definizione di alcuni metodi di controllo della tenuta dell isolatore mediante flussaggio di gas o per controllo dell andamento della pressione Tali metodi sono illustrati anche con l ausilio di formule disegni tabelle e grafici ISO 14644 7 Cleanrooms and associated controlled environment Part 7 Separative devices clean air hoods gloveboxes isolators and mini environments 52 pagg Norma molto recente 2004 che indica i requisiti minimi per il progetto la costruzione l installazione il collaudo e l appro vazione delle apparecchiature di contenimento per quegli aspetti in cui differiscono dalle cleanroom propriamente dette e descritte nelle norme ISO 14644 4 e ISO 14644 5 ISO 11933 1 Components for containment enclosure Part 1 Glove bag ports bung
126. estelli e Bilanciare i contenitori e gli accessori da centrifuga con liquidi non corrosivi es acqua distillata alcool propanolo al 70 e Utilizzare provette da centrifuga di vetro a pareti spesse o di plastica nel caso si centrifughino agenti biologici che presentano un medio o alto rischio e utilizzare preferibilmente provette per centrifuga con tappi a vite contrassegnate secondo con un codice stabilito e Le provette ed i contenitori dei campioni da centrifugare devono essere chiusi in modo sicuro e Lo spazio vuoto da lasciare tra la superficie del fluido e l orlo della provetta da centrifuga dovrebbe essere indicato nelle istruzioni fornite dal fabbricante osservare il limite di riempimento delle provette da centrifuga secondo quanto indicato dal fabbricante e Quando si usano rotori ad angolo fisso fare attenzione a non riempire troppo le provette per evitare dispersione di materiale es liquidi e Sigillare debitamente le provette per evitare la diffusione di eventuali aerosol contaminanti e Utilizzare centrifughe dotate di rotori anti aerosol o di apposite chiusure di protezione anti aerosol nel caso si lavori con agenti biologici di gruppo 2 3 e 4 e Centrifugare separatamente dagli altri materiali i liquidi contenenti agenti biologici di gruppo 3 e 4 e aprire e chiudere le provette sotto cappa di sicurezza biologica e cestelli devono essere caricati equilibrati sigillati ed aperti sotto cappa di sicurezza biologica e lspe
127. fettuate modificazioni in seguito alle preoccupazioni di mobilitazione del vettore con possibile attivazione di protoconcogeni nelle cellule bersaglio attraverso l inserzione del promotore presente nel vettore in loro prossimit La modificazione SIN Self Inattivating introdotta nel vettore lentivirale derivato dal virus HIV potrebbe impedire la mobilitazione del vettore e la ricombinazione con il ceppo WT Anche le LTR del ceppo WT presenti nel vettore di trasferimento di prima generazione sono state attualmente sostituite dal promotore di un virus non correlato Citomegalovirus CMV o Virus Sarcoma di Rous RSV Anche se necessario considerare che promotori forti come il promotore di CMV contengono sequenze enhancer che pos sono attivare proto oncogeni Ulteriori modifiche per ottenere una maggiore sicurezza includono la separazione in due costrutti di packaging indipendenti dei geni rev e gag pol e la sostituzione di segnali retrovirali di poliadenilazione Inoltre sono stati deleti tutti i geni accessori e il gene rev presente in una forma incompleta Tuttavia tali modifiche non devono esse stesse introdurre nuovi rischi per la sicurezza e le performance del vettore Sono necessari esperimenti in vitro e o in vivo per valutare le caratteristiche del costrutto tra cui il rischio di generazione di Lentivirus Competenti per la Replicazione prom bTeRT Salf Inactivating H LTR Transfer Vector 0 S y Packaging
128. ficienti per sospettare che l esposizione umana alla sostanza possa dar luogo ad effetti tossici per lo e sulla base in genere di risultati inequivocabili di adeguati studi su animali in cui gli effetti osservati comparivano in assenza di segni di forte tossicit materna FRASI DI RISCHIO Sostanze che danneggiano la fertilit negli esseri umani R60 Pu ridurre la fertilit Sostanze che hanno effetti tossici sullo sviluppo R61 Pu danneggiare bambini non ancora nati Sostanze da considerare potenzialmente in grado di danneggiare la fertilit negli esseri umani R60 Pu ridurre la fertilit Sostanze da considerare potenzialmente in grado di provocare effetti tossici sullo sviluppo degli esseri umani R61 Pu danneggiare bambini non ancora nati Categoria 3 Tabella 18 oppure a livelli di dose approssimativamente analoghi a quelli correlati ad altri effetti tossici pur non rappresentandone una conseguenza secondaria aspecifica altri dati pertinenti Sostanze che potrebbero avere effetti sulla fertilit umana In genere le sostanze si reputano tali sulla base di risultati di adeguati studi su animali che forniscono prove sufficientemente valide da corroborare il forte sospetto di danno della fertilit in assenza di altri effetti tossici oppure elementi comprovanti danni della fertilit riscontrati a livelli di dose approssimativamente analoghi a quelli correlati ad
129. fiuti derivanti dalla attivit di recupero e smaltimento di rifiuti i fanghi prodotti dalla potabilizzazione e da altri trattamenti delle acque e dalla depurazione delle acque reflue e da abbattimento di fumi di cui all art 184 c 3 lettere c d e g del D Lgs 152 2006 parte IV 2 i soggetti la cui produzione annua di rifiuti non eccede le 10 tonnellate di rifiuti non pericolosi vedi nota 1 e le 2 tonnellate di rifiuti pericolosi possono adempiere all obbligo di tenuta dei registri di carico e scarico anche tramite le organizzazioni di categoria interessate o loro societ di servizi Appena prodotto un rifiuto i produttori dovranno inserire nell Area Registro Cronologico della Scheda SISTRI PRODUT TORI le informazioni relative ad essi prodotti entro dieci giorni lavorativi dalla produzione degli stessi In caso di movimentazione di un rifiuto i soggetti indicati dovranno accedere al sistema per aprire una nuova Scheda SISTRI AREA MOVIMENTAZIONE Tali soggetti sono obbligati a comunicare al sistema i dati del rifiuto almeno 8 ore prima che si effettui l operazione di Movimentazione salvo giustificati motivi di emergenza Durante il trasporto i rifiuti devono essere accompagnati dalla copia cartacea della Scheda SISTRI AREA MOVIMENTAZIONE relativa ai rifiuti stampata dal produttore dei rifiuti al momento della presa in carico dei rifiuti da parte del conducente dell impresa di trasporto Tale copia sottoscritta dal produttore e
130. fiuti sanitari pericolosi a rischio infettivo UNI EN 12461 2000 procedimento documen tato per ottenere regi strare ed interpretare i ri sultati necessari per di mostrare che un pro cesso ottiene costante mente un prodotto con forme a una specifica predeterminate UNI EN 12470 2001 procedura documen tata per ottenere regi strare ed interpretare i risultati necessari per dimostrare che un pro cesso fornisce costan temente un prodotto conforme a specifiche predeterminate NIH guidelines dimostrazione dell effi cacia di una procedura sull organismo che funge da ospite per la propagazione della mo lecola di DNA ricombi nante probabilit che un microrganismo sia sopravvissuto sul materiale sottoposto al trattamento si ritiene si tratti di un errore in realt al posto di inferiore dovrebbe essere scritto superiore La sterilizzazione effettuata secondo le norme UNI 10384 94 parte prima mediante procedimento che comprenda anche la triturazione e l essiccamento ai fini della non riconoscibilit e maggiore efficacia del trattamento nonch della diminuzione di volume e di peso dei rifiuti stessi Possono essere sterilizzati unicamente i rifiuti sanitari pericolosi a solo rischio infettivo L efficacia viene verificata secondo quanto indicato nell Allegato III dello stesso DPR La sterilizzazione dei rifiuti sanitari a rischio infettivo una facolt esercitabile ai fini de
131. glioramento e la diversificazione della produzione nonch lo sviluppo di nuovi prodotti per il settore zootecnico In questo ultimo campo la realizzazione pi importante finora ottenuta stata la produzione di ormone somatotropo bovino da parte di un microrganismo trasformato In Tabella 2 sono illustrate le principali applicazioni biotecnologiche di piante geneticamente modificate aumento o miglioramento della produzione agricola delle caratteristiche organolettiche dei prodotti agricoli produzione di cibo ad alto valore nutrizionale pomodoro Flavr Savr con inibizione degli enzimi della degradazione della pectina riso con un pi elevato contenuto di proteine e o contenente provitamina A e soia con un contenuto pi elevato di lisina resistenza a stress ambientali patogeni e parassiti es mais Bt resistente alla piralide resistenza ad erbicidi poco inquinanti e facilmente biodegradabili es glifosato riduzione del rischio di indurre allergie in prodotti alimentari settore agroalimentare uso delle piante per bonificare l ambiente fitoremediation es agenti tossici e mutageni aumento della fertilit dei suoli settore ambientale settore l l i emascanieo bioreattori per la produzione di vaccini farmaci e anticorpi settore nuove specie di piante ornamentali floro vivaistico Tabella 2 L industria alimentare rappresenta uno dei campi piu importanti di applicazione delle biotecn
132. gni singola procedura a meno che non si utilizzi un organismo estremamente pericoloso Tuttavia potrebbero essere necessarie considerazioni pi specifiche per procedure non routinarie o per procedure che po trebbero avere implicazioni significative per il livello di rischio come nel caso di processi in cui viene generato aerosol Concentrazione e portata La densit di una coltura pu comportare il rischio di esposizione ad alte concentrazioni di un particolare MOGM soprattutto nelle fasi a valle di un processo Occorre dunque valutare attentamente gli effetti della concentrazione del MOGM sulla pro babilit che si verifichi un evento dannoso Anche la portata delle operazioni un fattore da considerare in sede di valutazione del rischio Tale fattore pu essere espresso in termini di volume assoluto di un unica operazione oppure in termini di frequenza di un determinato processo ripetitivo poich entrambi possono concorrere ad aumentare la possibilit di espo sizione se dovessero fallire le misure di contenimento e protezione e quindi influire sulla probabilit che si verifichi un evento dannoso Sebbene le operazioni su vasta scala non comportino necessariamente un livello di rischio pi elevato esse po trebbero comunque aumentare la possibilit di esposizione sia in termini di numero di soggetti umani sia di quantit di espo sizione dell ambiente in caso di cattivo funzionamento delle misure di contenimento Sulla base della portat
133. go MOGM AI verificarsi di un incidente spetta all utilizzatore poich colui in grado di valutare le conseguenze di un eventuale rilascio accidentale di MOGM informare immediatamente per iscritto il Ministero della Salute art 16 comma 1 La comunicazione va estesa alle altre Autorit indicate nel medesimo comma nel caso in cui in conseguenza dell incidente si verifichi un rilascio di MOGM al di fuori della zona utilizzata per l impiego confinato Scadenza e rinnovo dell autorizzazione all impiego confinato di MOGM Il notificante alla scadenza dell autorizzazione di un impiego confinato del MOGM autorizzato deve interrompere le attivit Il notificante che intende proseguire nell impiego ha l obbligo di richiedere il rinnovo dell autorizzazione A tale scopo dovr inviare domanda al Ministero della Salute entro i 6 mesi che precedono la data di scadenza fornendo contestualmente le seguenti informazioni A se si tratta del primo rinnovo in rapporto all uso confinato autorizzato in precedenza e descrivere in dettaglio qualunque variazione nella costruzione del MOGM e descrivere in dettaglio qualunque variazione nelle condizioni di uso es volume totale e descrivere in dettaglio qualunque incidente avvenuto negli anni di uso confinato autorizzato con la valutazione dell efficacia delle misure di sicurezza e di decontaminazione messe in atto fornire una aggiornata valutazione del ri schio dell impiego confinato
134. golamento recante disciplina della gestione dei rifiuti sanitari Quest ultimo regolamento contiene in particolare le modalit di gestione dei rifiuti sanitari a rischio infettivo e quindi in ambito sanitario influenzer sia direttamente le modalit di gestione dei rifiuti non contenenti o contaminati da MOGM sia indirettamente la fase finale di gestione dei rifiuti MOGM ove questi siano inattivati per mezzo di un autoclave che non sia all interno del laboratorio ma perlomeno sul piano ovvero fino al livello di contenimento 3 e dunque al servizio anche di altri settori sanitari all interno della stessa struttura Innanzi tutto nella Tabella 15 si osserva la distinzione tra effluenti e rifiuti primi se convogliati ad uno scarico in conduttura pretrattamento e o fognatura rientrano nella disciplina delle acque scarichi mentre se confinati in un volume definito e movimentabile serbatoi o recipienti di qualsiasi genere rientrano comunque nella disciplina dei rifiuti si tratta di un orien tamento oramai consolidato Altri riferimenti utili sono costituiti dalle norme europee UNI EN 12461 2000 Biotecnologie Processi su larga scala e produzione Linee guida sul trattamento l inattivazione ed il controllo dei rifiuti UNI EN 12740 2001 Biotecnologie Laboratori di ricerca sviluppo ed analisi Linee guida per il trattamento l inattivazione ed il controllo dei rifiuti 40 Classificazione dei
135. i alcali solventi organici e a calore moderato Inoltre se addossati ad un muro devono essere continui con lo stesso mediante stesura nel punto di contatto di materiale sigillante Nell area dei laboratori devono essere disponibili docce di emergenza e doccette lavaocchi di emergenza Ogni laboratorio deve essere fornito di un lavandino con comando di erogazione dell acqua a pedale o a gomito preferibilmente posizionato in prossimit dell uscita Gli spogliatoi e gli spazi ricreativi devono essere situati in zone al di fuori delle aree di lavoro del laboratorio Nei pressi dei laboratori devono essere disponibili locali guardaroba attrezzati con armadietti a doppio scomparto dove gli operatori possano riporre gli indumenti personali separati da quelli di lavoro Negli impianti di classe 3 e 4 la zona di lavoro deve essere separata da qualsiasi altra attivit nello stesso edificio e separata da aree aperte al flusso di passaggio di personale Tali laboratori devono essere sigillabili in modo da consentire la fumiga zione L accesso al laboratorio deve avvenire attraverso una camera di compensazione ovvero un locale separato dal la 36 boratorio Il lato esente da contaminazioni della camera di compensazione deve essere separato dalla parte ad accesso li mitato da uno spogliatoio o da impianti doccia e preferibilmente da porte autobloccanti a tenuta d aria necessarie nei la boratori di biosicurezza 4 All interno del l
136. i il livello di contenimento applicato per gli stabulari deve essere corrispondente a quello adottato per i laboratori dove vengono prodotti i MOGM Considerando che i MOGM sono agenti biologici in primo luogo necessario adottare misure di prevenzione dell espo sizione possibile prevenire l esposizione e eliminando l uso di MOGM a favore di tecniche alternative es utilizzo di sonde geniche e prodotti di PCR e sostituendo uno specifico MOGM con altri meno pericolosi Qualora questo non fosse realizzabile necessario identificare altre misure che ne controllino l esposizione possibile con trollare l esposizione e disegnando il processo di lavoro e le misure di controllo ingegneristiche per evitare o minimizzare il rilascio di MOGM nei luoghi di lavoro come processi e sistemi di manipolazione totalmente chiusi cappe di classe III fermentatori chiusi contenimento di aerosol utilizzo di cappe di sicurezza biologica e corretta gestione delle attrezzature e monitoraggio delle misure di controllo e fornendo un impianto di ventilazione che pu includere la pressione negativa e tenendo un registro dei lavoratori esposti e effettuando operazioni di pulizia e disinfezione al termine di ogni attivit di lavoro e riducendo il tempo di esposizione del lavoratore e dotando l operatore dei dispositivi di protezione individuale e usando misure di igiene per la prevenzione o riduzione del rilascio accidentale di MOG
137. i qualora non si riesca a prevenire con altri mezzi l esposizione 95 6 Riferimenti legislativi Agenti Biologici Directive 2000 54 EC 18 09 2000 Protection of workers from the risks related to exposure to biological agents at work Article 6 reduction of risks paragraph 2 b design of work processes and engineering control measures so as to avoid or minimize the release of biological agents into the place of work c collective protection measures and or where exposure cannot be avoided by other means individual protection measures d hygiene measures compatible with the aim of the prevention or reduction of the accidental transfer or release of a biological agent from the workplace 81 08 TITOLO X agenti biologici Art 272 Misure tecniche organizzative procedurali 1 In tutte le attivit per le quali la valutazione dei rischi evidenzia rischi per la salute dei lavoratori il datore di lavoro attua misure tecniche organizzative e procedurali per evitare ogni esposizione degli stessi ad agenti biologici 2 In particolare il datore di lavoro a evita l utilizzazione di agenti biologici nocivi se il tipo di attivit lavorativa lo consente b limita al minimo i lavoratori esposti o potenzialmente esposti al rischio di agenti biologici c progetta adeguatamente i processi lavorativi d adotta misure collettive di protezione ovvero misure di protezione individuali qualora on sia possibile evitare altri men
138. i Classe Il Tipo A1 e Aspirazione interna dell aria dalla griglia frontale con velocit di flusso di almeno 0 4 m s e Passaggio dell aria attraverso filtro HEPA prima d immissione dall alto sul piano di lavoro e Flusso laminare dall alto diffuso a circa 6 18 cm dal piano di lavoro met del flusso passa attraverso la griglia frontale di recupero dell aria met passa attraverso griglia posteriore di estrazione e Aria espulsa il 30 di aria passa attraverso il filtro HEPA di scarico in uscita nel laboratorio o all esterno e Aria ricircolata nell area di lavoro all interno della cappa il 70 dell aria passa attraverso il filtro HEPA di entrata Principale utilizzo Realizzazione di impieghi confinati di classe 2 e 3 Impieghi confinati che presentano un rischio basso e moderato ovvero operazioni per le quali un livello 2 o 3 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente Possono essere utilizzate anche per piccole quantita di agenti chimici tossici non volatili e radionuclidi in tracce eventualmente presenti in colture cellulari o sistemi microbici Precauzioni e Non utilizzare la cappa tipo A1 con sostanze chimiche tossiche volatili vapori chimici possono accumularsi nella cappa per ricircolo dell aria e nel laboratorio per gas di scarico creando rischi per la salute e la sicurezza e l aria emessa da cappa di tipo A1 pu essere espulsa fuori dall edificio Per non alterare il flusso
139. i affidabilit di funzionamento di si curezza di precisione ed accuratezza del risultato al fine di garantire la sicurezza dell operatore e non alterare l esito finale del lavoro realizzato A tale scopo necessario che le apparecchiature vengano tenute in perfetta efficienza e installate in locali che garantiscano un adeguata protezione dal deterioramento L efficienza dovr essere garantita attraverso un insieme di adeguate procedure di manutenzione ordinaria straordinaria programmata e di taratura Manutenzione ordinaria Deve essere realizzata dall operatore al momento dell uso per garantire il buon funzionamento dell apparecchiatura Manutenzione straordinaria Si tratta di un intervento realizzato a seguito di guasti o anomalie di funzionamento Sono interventi effettuati su specifica richiesta e di norma vengono eseguiti da un tecnico specializzato della ditta fornitrice Manutenzione programmata Viene effettuata con cadenze temporali prefissate per evitare decadimenti nel buon funzionamento dell apparecchiatura Di norma gli interventi vengono eseguiti dalla ditta fornitrice con la quale si stipula un contratto di manutenzione annuale Taratura Questa operazione necessaria a garantire che l apparecchio e lo strumento utilizzato sia in grado di fornire misure entro i limiti di tolleranza previsti dai requisiti tecnici Nell ambito dei controlli operativi opportuno stabilire e le modalit di taratura e manuten
140. i del materiale e non esporre l operatore a possibili contaminazioni evitare movimenti bruschi degli avambracci all interno della cappa per non alterare il flusso laminare della cortina d aria compromettendo la parziale barriera di contenimento prevista Spostare le braccia lentamente e perpendicolarmente al fronte di apertura della cappa consentir di ridurre questo rischio evitare il passaggio di persone alle spalle dell operatore l apertura o la chiusura di porte nella stanza per non alterare il flusso laminare eseguire tutte le operazioni di lavoro nella parte mediana e posteriore del piano di lavoro ed in modo visibile attraverso il vetro frontale Inoltre le apparecchiature che generano aerosol vortex mixer centrifughe da tavolo devono essere situati nella parte posteriore della cappa per sfruttare il vantaggio dell air split Oggetti ingombranti come sac chetti per rifiuti a rischio biologico pipette usate e contenitori per la raccolta di rifiuti liquidi dovrebbero essere collocati in un lato interno della cappa non usare bunsen o altri tipi di bruciatori sotto le cappe di tipo Il e III poich l aria calda indotta pu deviare il regolare flusso interno dell aria e quindi causare contaminazione dell area di lavoro dell ambiente esterno e danni ai filtri HEPA consigliabile tenere un microinceneritore elettrico ma preferibile l utilizzo di anse sterili monouso estrarre il materiale potenzialmente infetto o
141. i di sicurezza non oltre 4 del volume secondo il Manuale di biosicurezza nei laboratori edizione italiana AIRESPSA 2005 oppure ad intervalli periodici dovrebbero essere trasportati in un area di deposito in attesa del trattamento e in funzione del livello di rischio decontaminati esternamente Deposito presso la struttura Non buona prassi mantenere i contenitori aperti per lunghi periodi n tenerli depositati a lungo presso la struttura a seguito della chiusura e prima del trattamento di inattivazione Per i rifiuti sanitari pericolosi a rischio infettivo il DPR 254 2003 prevede che la durata del deposito temporaneo non superi di norma i 5 giorni Le caratteristiche della zona adibita a deposito dovrebbero essere le seguenti e definizione chiara per livelli di contenimento dal 2 in su indicazione con il simbolo internazionale di rischio biologico e un cartello chiaro e permanente e separazione dallo spazio di lavoro e dalle aree di consegna e deposito delle merci in arrivo e accessibilit a carrelli e o contenitori carrellati di trasporto dei rifiuti e facilit di pulizia e decontaminazione e sicurezza dell accesso ovvero possibilit di impedire l accesso a persone non autorizzate e animali Nel caso di piccole quantit laboratori potrebbe essere ammesso il deposito di contenitori rigidi e molto resistenti in un area adeguata e definita oppure il deposito in frigoriferi o congelatori all interno del laboratorio stes
142. i possono ottenere tre risultati differenti e Si constatano effetti negativi che non sono stati presi adeguatamente in considerazione nella classificazione iniziale e che non sarebbero opportunamente limitati dalle misure di contenimento provvisorie stabilite con la procedura 1 Occorre dunque applicare ulteriori misure di contenimento e possibilmente rivedere la classificazione dell attivit e laclassificazione iniziale era corretta e le misure di contenimento che ne derivano sono adatte a prevenire o minimizzare i danni alla salute umana o all ambiente e laclassificazione iniziale di livello superiore rispetto a quanto necessario per l attivit svolta e di conseguenza sarebbe opportuno utilizzare una classificazione inferiore con relative condizioni di contenimento 2 Conferma dell adeguatezza delle misure di contenimento definitive Una volta stabilite la classificazione e le condizioni di contenimento definitive occorre rivalutare il livello dell esposizione di soggetti umani e dell ambiente procedura 1 Ne dovrebbe risultare una conferma dell accettabilit del grado di probabilit degli effetti nocivi vista la natura e la portata delle operazioni e le condizioni di contenimento proposte A questo punto il processo di valutazione del rischio concluso Conformemente all articolo 6 paragrafo 2 della Direttiva se la natura o la portata dei lavori da svolgere cambiano in misura significativa oppure se sono disponibili nuovi d
143. i ricerca studio sperimentazione consulenza proposta normativa ai fini della tutela della salute della sicurezza e della compatibilit ambientale con riferimento agli ambienti di vita ed alle installazioni a rischio di incidente rilevante In particolare il DIPIA attraverso il Laboratorio di Biotecnologie e Microbiologia Ambientale valuta i rischi connessi con l impiego delle biotecnologie nell industria in agricoltura e in microbiologia ambientale Ancora i ricercatori altamente qualificati di detto Laboratorio forniscono fin dai primi sforzi legislativi alle Autorit Competenti Na zionali consulenza tecnico scienfica tanto da essere un valido supporto alle Commissioni Interministeriali di Valutazione per le Biotecnologie istituite presso il Ministero della Salute e il Ministero dell Ambiente e della Tutela del Territorio e del Mare MATTM per l applicazione di due Direttive Europee luna sull uso confinato di microrganismi geneticamente modificati MOGM Direttiva 98 81 CE recepita dal D Lgs n 206 del 12 4 2001 e l altra sul rilascio deliberato di organismi genetica mente modificati OGM con riguardo alle procedure di autorizzazione ai fini della sperimentazione e della commercializzazione delle colture transgeniche Direttiva 2001 18 CE recepita dal D Lgs n 224 dell 8 luglio 2003 Detta consulenza tecnico scientifica ha una sua intrinseca consistenza in quanto si fonda su una costante attivit di studio di ricerca e di spe
144. ianti destinati ad impieghi di classi superiori necessaria una esplicita autorizzazione scritta da parte del Ministero della Salute con i termini indicati nell art 7 Tali termini decorrono dalla data di ricevimento da parte del Ministero della Salute della notifica di impianto completa di attestato di pagamento della relativa tariffa cfr paragrafo 5 e si intendono sospesi durante i periodi in cui il Ministero in attesa di ulteriori informazioni eventualmente richieste Nel caso di impianti destinati ad impieghi di classe 4 prevista art 11 commi 6 e 7 una procedura che mette in grado la popolazione interessata di esprimere preventivamente il proprio parere in merito alla richiesta di autorizzazione all impianto imp 3 26 6 imp 2 167 39 Imp 1 230 90 IMPIANTI AUTORIZZATI PER TIPOLOGIA Figura 2 Situazione degli impianti notificati fino al 2009 in Italia La notifica di impiego La notifica di impiego di un determinato MOGM con indicazione del microrganismo ricevente o ospite del tipo di inserto e dell eventuale vettore utilizzato viene presentata dall utilizzatore figura da identificarsi con il responsabile scientifico e ge stionale dell impiego confinato Si potr trattare ad esempio del ricercatore che coordina l attivit di ricerca con il MOGM in questione o analoga figura in campo industriale a lui che compete la valutazione e la conseguente assegnazione del l impiego confinato ad un
145. ianto laboratori stabulari che intende utilizzare specificando per ciascun locale il tipo di confinamento adottato inviare una notifica al Ministero della Salute per ogni impiego che implichi l utilizzo di MOGM 1 Come prescritto dal D Lgs 81 08 e dalle sue successive integrazioni l utilizzatore produttore deve procedere ad una valutazione preliminare del rischio derivante dagli agenti biologici impiegati che tenga conto del gruppo di rischio di ap partenenza integrato con una valutazione della sicurezza riguardante le procedure che sono state utilizzate per mini mizzare o eliminare il rischio di contaminazione 2 A tal proposito occorre considerare la valutazione del rischio di impiego confinato legata allo sviluppo di costrutti per terapia genica e la loro sperimentazione clinica La valutazione deve essere aggiornata alla luce delle nuove evidenze scientifiche deve essere analizzata in rapporto al sistema biologico utilizzato ai suoi vantaggi rispetto a sistemi alternativi ed in relazione ai benefici attesi 3 Successivamente deve essere fatta una valutazione della sperimentazione clinica con riferimento ai rischi riguardanti il paziente che riceve il transgene la salute pubblica e l ambiente in generale L impiego di terapia genica in animali nell ambito di studi preclinici comporta il rispetto delle norme vigenti Aspetti im portanti da considerare 22 e livello di contenimento del laboratorio stabulario nel quale ve
146. ica cellulare o meno in grado di riprodursi o di trasferire materiale genetico Gli agenti biologici sono stati classificati in quattro gruppi a seconda del livello di rischio di infezione e Gruppo 1 Agente biologico che presenta poche probabilit di causare malattie in soggetti umani e Gruppo 2 Agente biologico che pu causare malattia in soggetti umani e costituire un rischio per i lavoratori poco probabile che si propaghi nella comunit sono disponibili efficaci misure profilattiche o terapeutiche e Gruppo 3 Agente biologico che pu causare gravi malattie in soggetti umani e costituisce un serio rischio per i lavoratori pu propagarsi nella comunit ma di norma sono disponibili efficaci misure profilattiche o terapeutiche e Gruppo 4 Agente biologico che pu provocare gravi malattie in soggetti umani e rappresenta un serio rischio per i lavoratori pu presentare un elevato rischio di diffusione nella comunit non sono disponibili di norma efficaci misure profilattiche o terapeutiche Un microrganismo geneticamente modificato MOGM secondo la Direttiva 2009 41 CE un microrganismo entit mi crobiologica cellulare e non cellulare capace di replicarsi o trasferire materiale genetico compresi virus viroidi cellule animali e vegetali in coltura il cui materiale genetico stato modificato in un modo non naturale mediante moltiplicazione o ricom binazione naturale Nell Allegato parte A della s
147. icrorganismo donatore il MOGM risultante Le caratteristiche dell impiego confinato La gravit degli effetti potenzialmente nocivi La probabilit che gli effetti nocivi si realizzino dipendente dal tipo di operazioni effettuate dalla portata e natura di tali operazioni insieme alle condizioni di contenimento VD B Procedura della valutazione del rischio 1 Individuazione del livello di rischio associato al MOGM AI fine di rinvenire notizie utili alla procedura di valutazione l utilizzatore pu fare riferimento a normative nazionali e co munitarie pertinenti in particolare il D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 ovvero a normative internazionali purch rappresentino il risultato di nuove conoscenze scientifiche o del progresso tecnico nella specifica materia Tali normative riguardano microrganismi naturali e si basano sulla capacit dei microrganismi di provocare malattie per gli esseri umani animali o piante e sulla gravit e trasmissibilit della malattia che essi sono in grado di provocare e sulla possibilit di avere efficaci misure profilattiche o terapeutiche Il D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 classifica i microrganismi in quanto agenti biologici in 4 gruppi di rischio in base ai loro effetti potenziali su un individuo sano adulto Tali gruppi di rischio possono essere usati dall utilizzatore come riferimento per la classificazione delle attivit di impiego confinato nelle 4 classi di rischio di cui all art 5 L u
148. iene data attuazione in Italia alla Direttiva 98 81 CE che modifica la pre cedente Direttiva 90 219 CE sull impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati MOGM Il nuovo decreto supera abrogandolo il Decreto Legislativo 3 Marzo 1993 n 91 che recepiva la precedente direttiva Il Decreto attualmente in vigore stabilisce le misure per l impiego confinato dei MOGM volte a tutelare la salute dell uomo e dell ambiente Perch si voluta una revisione della Direttiva 90 219 CEE La Direttiva 90 219 CEE stata revisionata al fine di e armonizzare la Direttiva sull uso confinato dei MOGM con la Direttiva riguardante la protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti dall esposizione ad agenti biologici 2000 54 CE e classificare gli impieghi confinati dei MOGM in base ai rischi che comportano per la salute umana e per l ambiente tale classificazione deve essere coerente con la prassi internazionale e basarsi su una specifica valutazione dei rischi e Sviluppare procedure amministrative e obblighi di notifica in relazione ai rischi degli impieghi confinati e adeguare le parti tecniche al progresso scientifico e aumentare la trasparenza e la fiducia del pubblico e chiarire ed estendere il campo di applicazione della Direttiva e adottare e applicare misure appropriate per la gestione dei rifiuti derivanti dagli impieghi confinati dei MOGM Principali modifiche del D Lgs n 206 del 2001 rispetto al precedente D
149. iene la distruzione di tutti i microrganismi ad eccezione di un certo numero di spore batteriche La principale eccezione alle regole dell inattivazione microbica e della decontaminazione il prione del morbo di Creutzfeldt Jakob o altri prioni responsabili delle encefalopatie spongiformi trasmissibili del sistema nervoso centrale di esseri umani o animali Gli studi effettuati mo 55 strano che i prioni sono resistenti alle prassi convenzionali di sterilizzazione chimica e o termica Una panoramica sulle propriet dei principali disinfettanti riportata in Tabella 21 TABELLA 21 PROPRIET DEI PRINCIPALI DISINFETTANTI n l Attivo contro Interferenza negativada Interferenza negativada da Attivit livelli ipo di disinfettante Batteri naa concentrazione Funghi Gram Gram Microbatteri lipidici Proteine gura Detergenti aaa positivi negativi sors intermedia 0 4 3 rapido Composti fenolici intermedia 0 5 rapido intermedia 70 rapido Ipocloriti k i k ponn alta 6 8 non determinato Formaldeide alta intermedia variabile 2 da 30 a 3h intermedia XXX buono v dipendente dal virus eer A molto C cationico A E 5 pre parzialmente A anionico nullo c su tempi di esposizione lunghi a se i dati del fabbricante sono rispettati Glutaraldeide lodofori XXX Nota Si richiama l attenzione su tossici
150. il personale esposto rimuovere gli indumenti contaminati ed eliminarli Lavare la cute se esposta con del sapone e poi con un antisettico In caso di schizzi negli occhi procedere al loro lavaggio con l apposita doccia per 15 minuti disponibile inoltre anche doccia completa la persona eventualmente contaminata deve attivare la procedura prevista per incidenti occupazionali rivolgendosi al Servizio di Malattie Infettive Procedure di pulizia apporre un indicazione che avverta di non entrare e lasciare che l eventuale aereosol si depositi per 30 minuti indossare sempre indumenti protettivi camici rinforzati guanti sovrascarpe cuffie e mascherine FFP3 e raccogliere il materiale per procedere alla decontaminazione guanti spessi disinfettante panni assorbenti sacchetti biohazard pinze versare ipoclorito di sodio sulla carta e su altre aree che possano essere state raggiunte dagli schizzi di materiale contaminato Tutto il materiale accidentalmente versato deve rimanere in contatto con il disinfettante per almeno 20 minuti rimuovere il materiale assorbente pulire 3 volte con panno imbevuto di ipoclorito di sodio procedendo dall esterno verso il punto di contaminazione e se si tratta di pareti verticali procedere dall alto al basso Effettuare l ultimo pas saggio con panno asciutto Eventuali frammenti vanno rimossi con pinze e riposti in contenitori per taglienti autoclavare tutto il materiale indossato o usato per pulire il
151. imento al progetto scientifico di cui fanno parte NOME DEL MOGM VETTORE INSERTO RICEVENTE CLASSE E PROGETTO DI RISCHIO ae Ma a Tabella 10 Tabella sinottica di riepilogo del dei MOGM che si intendono utilizzare 31 CONSIDERAZIONI SULLA SICUREZZA PER GLI OPERATORI SANITARI PER LA POPOLAZIONE UMANA IN GE NERE E PER L AMBIENTE PER QUEST ULTIMO IN RELAZIONE ALLA PROBABILITA DI RILASCIO DI MICRORGA NISMI GENETICAMENTE MODIFICATI MOGM E AL LORO POTENZIALE IMPATTO Il rilascio deliberato nell ambiente di Organismi Geneticamente Modificati OGM a scopi sperimentali e l immissione in commercio regolamentato dalla Direttiva 2001 18 CE Nella Tabella 11 viene riportato il metodo per la valutazione del rischio ambientale proposto dall EMEA Guideline on scien tific requirements for the environmental risk assessment of gene therapy medicinal products 32 1 Identificazione delle caratteristiche che possono causare effetti negativi 2 Valutazione delle potenziali conseguenze di ogni effetto negativo 3 Valutazione del rischio del verificarsi di ogni potenziale effetto negativo individuato 4 Stima del rischio collegato a ciascuna caratteristica identificata dell OGM e Biologia del OGM connessa con la modificazione genetica e Natura del materiale genetico inserito che pu provocare effetti negativi sulla salute umana o sull ambiente Confronto tra le caratteristiche dell OGM
152. impianti di riprocessamento o liquidi equivalenti ed i solidi in cui questi liquidi possono essere convertiti e irifiuti contenenti emettitori di alfa e neutroni provenienti essenzialmente dai laboratori di ricerca scientifica da usi medici ed industriali dagli impianti di fabbricazione degli elementi di combustibile ad ossido misto e dagli impianti di riprocessamento Nella successiva Tabella 22 viene riportato il confronto fra le categorie della Guida Tecnica n 26 e la classificazione IAEA CATEGORIE CARATTERISTICHE Confronto Tipo di gestione con GT26 suggerito Rifiuti che decadono in pochi mesi Stoccaggio temporaneo massimo alcuni anni a livelli inferiori smaltimento come rifiuti ai limiti stabiliti per il rilascio convenzionali incondizionato LILW SL LILW LL Rifiuti a bassa e media attivit con limitato contenuto di a radionuclidi a emittenti Rifiuti a bassa e media attivit che eccedono il limite di 4000 Ba g per a emittenti Rifiuti che eccedono il limite di 4000 Bgg per a emittenti e presentano una significativa produzione di calore gt 100 W m3 Condizionamento e smaltimento in un sito ingegneristico in superficie Condizionamento in matrice cementizia e smaltimento di depositi di media profondit gt 100 m Condizionamento in matrice vetrosa e smaltimento in formazione geologica profonda 100 800 m dopa un periodo di stoccaggio di 40 50 anni in adequate Struttura ingegneri
153. ione dei campioni Contenitori del campione recipienti dei campioni devono essere preferibilmente in plastica e non devono lasciare fuoriuscire il materiale se chiusi correttamente recipienti devono essere etichettati correttamente per facilitarne l identificazione recipienti devono essere facilmente pulibili anche esternamente Trasporto di campioni nell ambiente di lavoro recipienti dei campioni devono essere posti in contenitori rigidi chiusi e mantenuti in posizione verticale per evitare span dimenti accidentali Questi contenitori per il trasporto possono essere di metallo o di plastica con coperchio preferibilmente dotato di guarnizione autoclavabili e resistenti all azione dei disinfettanti chimici e devono essere decontaminati con regolarit Apertura dei contenitori contenitori devono essere aperti all interno di una cappa di sicurezza Classe Il Particolare attenzione richiesta nell apertura di contenitori con materiale liofilizzato poich il contenuto pu essere sot tovuoto e l ingresso improvviso di aria pu favorire la dispersione del materiale nell atmosfera Eliminazione dei rifiuti Procedure per l eliminazione dei rifiuti Rifiuti solidi a rifiuti solidi prodotti durante le attivit di lavoro devono essere autoclavati prima di essere eliminati come rifiuto speciale A tal fine devono essere eliminati in sacchetti autoclavabili per rifiuti ospedalieri sacchetti biohazard Le fia sche p
154. isce la valutazione del rischio le misure tecniche organizzative procedurali e di emergenza nell impiego di tali agenti le misure igieniche e di prevenzione specifiche per strutture sanitarie o veterinarie i laboratori sta bulari e i processi industriali e infine gli obblighi di formazione e di informazione dei lavoratori Il Capo terzo regola la sorveglianza sanitaria a cui sono sottoposti i lavoratori esposti ad agenti biologici assegnando l obbligo al datore di lavoro di provvedere alla prevenzione e al controllo sanitario tramite l ausilio del medico competente e di istituire e aggiornare un registro dei lavoratori esposti ad agenti biologici di classe 3 e 4 garantendo l accesso ai dati del rappre sentante per la sicurezza e al medico competente Infine il Capo quarto regola le sanzioni a carico di datori di lavoro dirigenti preposti medici competenti lavoratori nel caso di specifiche inadempienze di loro competenza Il Titolo X integrato dagli Allegati dal n XLIV al n XLVIII i quali circostanziano le attivit lavorative che possono comportare la presenza di agenti biologici elencano gli agenti biologici classificati presentano le specifiche misure e livelli di contenimento e sull uso degli agenti biologici nei processi industriali ESPOSIZIONE AGENTI BIOLOGICI ZA LRA GAP ARTCOLIE ALLEGA en All XLVI alain e SIC ALI Elenco degli agenti biologici classificati Elenco esemplificativo di attivit lavorative che possono c
155. istica pericoloso per l ambiente di cui all Allegato III parte A e B della direttiva 99 45 CE che si potrebbe assimilare alla caratteristica H14 ecotossico riconducibile alle a frasi di rischio R50 R51 R52 R53 ambiente acquatico ed R59 ambiente non acquatico per le quali sono definite le modalit di calcolo e i limiti di concentrazione per la classificazione del preparato a frasi di rischio R54 R55 R56 R57 ed R58 ambiente terrestre per le quali non sono ancora definiti i criteri particolareggiati per l uso Ulteriori criteri per la classificazione dei rifiuti si trovano nell Allegato G Categorie o tipi generici di rifiuti pericolosi elencati in base alla loro natura o all attivit che li ha prodotti i rifiuti possono presentarsi sotto forma di liquido di solido o di fango e nell Allegato H Costituenti che rendono pericolosi i rifiuti dell Allegato G 2 quando tali rifiuti possiedono le caratteristiche dell Allegato di seguito riportati Allegato G 1 Rifiuti che presentano una qualsiasi delle caratteristiche elencate nell Allegato e che consistono in in corsivo sono riportate le voci di potenziale interesse per l uso confinato dei MOGM Sostanze anatomiche rifiuti di ospedali o provenienti da altre attivit mediche Prodotti farmaceutici medicinali prodotti veterinari Prodotti per la protezione del legno Biocidi e prodotti fitosanitari Residui di prodotti utilizzati com
156. istica elettrica L illuminazione deve essere di adeguata intensit per permettere il facile riconoscimento degli oggetti favorire lo svolgimento delle attivit dell operatore in modo da evitarne l affaticamento visivo ed infine rendere chiaramente percepibili eventuali si tuazioni pericolose L illuminazione naturale ove possibile deve essere preferita rispetto a quella artificiale al fine di favorire il benessere psico fisico degli operatori e ridurre il consumo energetico Le finestre devono essere dotate di sistemi che per mettano la modulazione dell intensit della luce L impianto di illuminazione artificiale nel rispetto delle esigenze di risparmio energetico deve assicurare parametri illuminotecnici quali livello e uniformit di illuminamento ripartizione delle luminanze limitazione dell abbagliamento colore della luce e buona resa del colore illuminamento di esercizio medio sui piani di lavoro non inferiore a 300 lux Sii Deve essere predisposto un impianto elettrico a norma che sia adeguato alle potenze delle apparecchiature e attrezzature in uso e con un numero di prese proporzionato alle esigenze L impianto deve rispondere a delle caratteristiche di sicurezza in relazione alle tipologie di sostanze utilizzate alle apparecchiature presenti ed alle procedure operative realizzate ne cessaria la predisposizione di un impianto di illuminazione di emergenza che entri in funzione quando se ne verifichi la ne
157. ito insieme ad altre indicazioni di interesse ad esempio sulla necessit di un autoclave LIVELLI DI CONTENIMENTO 2 3 Autoclave Nel sito Nell edificio tai entrata ATTIVITA SPECIFICHE Laborato rio Serre e camere di crescita Stabulari Tabelle a Ibelc Inattivazione dei MOGM negli effluenti dei lavandini degli Non Non 20 scarichi o delle necessario necessario Necessario Necessario docce se presenti o in effluenti analoghi Inattivazione dei MOGM nei iali 3 21 e M ea li Necessario Necessario Necessario nati Inattivazione dei MOGM negli effluenti dei lavandini e delle docce o in effluenti analoghi Inattivazione dei MOGM nei materiali e nei rifiuti contami S Necessario Necessario Necessario nati compresi gli e necessa con mezzi con mezzi con mezzi effluenti di processo NO convalidati convalidati convalidati prima dello scarico finale 4 In base a procedure convalidate che consentano il trasferimento sicuro del materiale in un autoclave al di fuori del laboratorio e che forniscano un livello di protezione equivalente Non Non Se necessa i necessario necessario rio Necessario Diverse da quelle di laboratorio Tabella Il Tabella 15 Va inoltre ricordato che la gestione dei rifiuti in generale disciplinata dal D Lgs n 152 2006 parte IV mentre non si applica ai MOGM per esplicita esclusione dal campo di applicazione il DPR 15 luglio 2003 Re
158. l argomento o il dettaglio richiesto occorre rifarsi a linee guida pubblicazioni e articoli reperibili sul mercato curando la scelta di quelle associazioni e o autori che vantano maggiori esperienze nel campo HSE MCA Handling cytotoxic drugs in isolators in NHS pharmacies 6 pagg Gli enti pubblici inglesi Health and Safety Executive e Medicines Controls Agency hanno emesso questa breve guida in cui si descrivono le opposte esigenze di salvaguardia dell operatore e di non contaminazione del prodotto durante la manipo lazione di farmaci citotossici fortemente attivi La guida termina con una tabella di confronto tra isolatori con pressione ne gativa o positiva rispetto all ambiente circostante HSE Summary of the Technical Basis for the COSHH Essentials 1999 8 pagg L ente pubblico inglese Health and Safety Executive HSE Chemical Risk assessment and control unit nella pubblicazione HSE Books 1999 ISBN 0 7176 2434 X preso a sua volta dagli Annals of Occupational Hygiene vol 42 6 1998 espone un metodo che partendo da considerazioni sulla pericolosit volatilit e quantit della sostanza da manipolare fornisce una graduatoria di misure tecniche ed ingegneristiche da adottare via via pi sofisticate a seconda del rischio PDA Technical Report n 34 design and validation of isolator systems for the manufacturing and testing of health care pro ducts 30 pagg L associazione PDA ha redatto questa guid
159. l Ministero della Salute dei do cumenti contenenti le informazioni richieste a norma del presente decreto Campo di applicazione Ricadono nel campo di applicazione della normativa tutte le attivit che implicano l uso di MOGM inclusa la semplice con servazione di ceppi o linee cellulari Nell Allegato Parte A vengono specificate quali tecniche sono da considerarsi atte all ottenimento di un microorganismo geneticamente modificato 1 tecniche di ricombinazione di acido nucleico che comportano la formazione di nuove combinazioni di materiale genetico mediante inserimento di molecole di acido nucleico prodotte con qualsiasi mezzo al di fuori dell organismo DNA virus pla smide vettore e il loro inserimento in un organismo ospite nel quale non si presentano in natura ma nel quale sono in grado di moltiplicarsi in maniera continuativa 2 microinoculazione e macroinoculazione microincapsulazione 3 tecniche di fusione cellulare o di ibridazione che producono cellule vive con nuove combinazioni di materiale genetico mediante fusione di cellule con metodi non presenti in natura Inoltre considerato che per microorganismo si intende ogni entit microbiologica cellulare o non cellulare inclusi i virus viroidi e le cellule animali o vegetali in coltura capace di replicarsi o di trasferire geni ricadono nell ambito della normativa vettori virali pur se difettivi per la replicazione proposti per terapia genica ma capaci di
160. l esposizione di soggetti umani o dell ambiente ad esso In diversi casi l esposizione svolge un ruolo fondamentale nella valutazione del rischio poich spesso determinante nel verificarsi dell eventuale effetto dannoso La probabilit di esposizione di soggetti umani o dell ambiente ad un determinato MOGM correlata al tipo di attivit effettuate e alle condizioni di contenimento applicate corrispondenti alla classificazione iniziale Al fine di stimare la probabilit di un esposizione di soggetti umani o dell ambiente ad un MOGM necessario inoltre va 16 lutare la natura e la portata delle attivit lavorative svolte senza dimenticare che tali fattori influenzano anche la scelta delle procedure di gestione del rischio Natura delle attivit da svolgere Il grado di rischio e l adozione di misure di protezione per ridurre tale rischio ad un livello adeguato dipendono dalla natura delle attivit da svolgere poich esse determinano l esposizione di soggetti umani e dell ambiente al rischio e dunque la possibilit che si verifichi un danno In funzione della natura delle attivit da svolgere viene utilizzata una delle tabelle spe cificate nell Allegato IV che definiscono le misure adeguate di contenimento e di protezione In pratica per i lavori svolti in laboratorio dove l influenza delle procedure standard sull esposizione ben nota improbabile che venga richiesta una va lutazione dettagliata del rischio di o
161. lavabili e che non devono essere presenti zone che permettano un ristagno di polvere o di liquido di lavaggio Figure 28 29 Figure 28 29 Isolatore a camera singola che richiede la bonifica completa prima della riapertura della porta Le considerazioni fatte a proposito dell isolatore a camera singola bonifica completa e attrezzature lavabili sembrerebbero limitarne fortemente l uso se non fosse per alcuni accessori che ne consentono un uso un po pi flessibile di seguito illustrati 87 Isolatore con pass box di ingresso Si intende col termine pass box una camera piu piccola adiacente alla camera principale con due porte una verso l esterno ed un altra verso la camera principale Normalmente il pass box privo di finestre e di guanti e non dotato di un sistema di controllo della pressione negativa come la camera principale Figura 30 i PASS BOX ISOLATORE Figura 30 Rappresentazione schematica di un isolatore dotato di pass box L introduzione degli oggetti durante le fasi di lavoro avviene tramite le seguenti operazioni in successione 1 apertura della porta esterna del pass box e introduzione del materiale 2 chiusura della porta l isolatore dovrebbe essere dotato di un interblocco che impedisca la contemporanea apertura accidentale della porta di comunicazione tra il pass box e la camera principale 3 passaggio del materiale da introdurre nella camera principale Figura 31 la p
162. le Techniques on Waste Treatmente Industries o WT BREF dell agosto 2006 e riportato anche nelle Linee Guida per l individuazione delle migliori tecniche disponibili per gli impianti di trattamento chimico fisico e biologico dei rifiuti liquidi emanate con DM 9 gennaio 2007 51 Schema di compatibilita chimica tra diversi gruppi di sostanze fornisce indicazioni per la pianificazione di uno stoc caggio di rifiuti costituiti o contenenti in quantita significative le relative sostanze chimiche ad esempio acidi e minerali non ossidanti gruppo n 1 possono generare calore e reazioni violente di polimerizzazione quando aggiunte o miscelate con aldeidi gruppo n 5 NA Gruppo reattivo Acidi e minerali non ossidanti 2 Acidi e minerali 2 ossidanti 3 Acidi organici GH 3 4 Alcoli e glicoli H IHF HP 4 5 Aldeidi HP HF HP 5 6 lAmmidi E 6 GT Ammine k alifatiche ed A 3 R aromatiche GT 8 Composti H GIH H GIH 8 azotati idrazine GT si Carbammati AS eS ui T 10 Sostanze H H H H HG 10 caustiche 11 anu GT IGT GT G 11 GF GF GF 12 H H H GF U HG 12 Ditiocarbammati GF IGF IGF GT F JE Gi 13 Esteri H HF HG H 13 14 Eteri H HF 14 15 Fluoruri GT GT
163. licazione Replication Competent Virus RCV nonch alle relative metodiche di saggio In questa prospettiva andranno eliminate tutte quelle sequenze virali non necessarie per la produzione espressione del vet tore virale Andranno altres ridotte al minimo tutte quelle sequenze che presentano omologie conosciute con virus competenti per la replicazione o con virus endogeni umani In particolare nel caso di vettori retrovirali andr eliminata ogni omologia di sequenza tra il vettore e i costrutti packaging potenzialmente in grado di originare retrovirus competenti per la replicazione attraverso eventi di ricombinazione Con lo stesso criterio sar anche necessario che le diverse funzioni pac kaging vengano espresse il pi possibile da vettori indipendenti genomi retro e lentivirali presentano all estremita 3 una sequenza regolatoria promotrice 3 LTR che una volta inserita nel genoma delle cellule ospite potenzialmente in grado di promuovere l espressione di geni cellulari adiacenti Per esclu dere ragionevolmente questa possibilit si raccomanda che i vettori retro e lentivirali siano costruiti in modo tale che una volta integrati perdano qualsiasi funzione regolatoria promotrice alla propria estremit 3 Possibili conseguenze indesiderate derivanti dall uso clinico di medicinali sperimentali per terapia genica da con siderare attentamente nella valutazione del protocollo clinico Mutagenesi inserzionale L int
164. liti e se il caso mo dificati dalla Commissione secondo la procedura di cui all articolo 21 1 Introduzione tipi di microrganismi geneticamente modificati MOGM inseriti nella parte C secondo la procedura di cui all articolo 21 non rientrano nella sfera di applicazione della presente direttiva L inserimento di un MOGM in tale elenco avviene solo previo esame caso per caso e l esclusione riguarda un MOGM ben definito L esclusione riguarda solo i MOGM destinati ad un impiego confinato come da definizione dell articolo 2 lettera c ma non l immissione deliberata di MOGM nell ambiente Per essere inserito nell elenco di cui alla parte C un MOGM deve essere conforme ai criteri specificati di seguito 2 Criteri Generali Verifica convalida del ceppo Occorre stabilire con precisione l identit del ceppo ed inoltre conoscere e verificare la modificazione Prove documentate e riconosciute della sicurezza del MOGM Occorre fornire documenti a riprova della sicurezza dell organismo Stabilit genetica Qualora un eventuale instabilit genetica possa influire negativamente sulla sicurezza dell organismo occorre fornire prova della sua stabilit genetica 3 Criteri Specifici Assenza di patogenicit II MOGM non deve causare malattie o danni alla salute di soggetti umani piante o animali La patogenicit comprende anche la tossinogenicit e l allergenicit Di conseguenza il MOGM deve essere caratterizzato anche
165. ll elenco con un asterisco sono rifiuti pericolosi ai sensi della direttiva 91 689 CEE relativa ai rifiuti pericolosi e ad essi si applicano le disposizioni della medesima direttiva a condizione che non trovi applicazione l articolo 1 paragrafo 5 esclusione dei rifiuti domestici Si ritiene che tali rifiuti presentino una o pi caratteristiche indicate nell Allegato III della direttiva 91 689 CEE che stato trasposto nell Allegato alla parte IV del D Lgs n 152 2006 Caratteristiche di pericolo per i rifiuti H1 Esplosivo sostanze e preparati che possono esplodere per effetto della fiamma o che sono sensibili agli urti e agli attriti pi del dinitrobenzene 42 H2 Comburente sostanze e preparati che a contatto con altre sostanze soprattutto se infiammabili presentano una forte reazione esotermica H3 A Facilmente infiammabile sostanze e preparati e liquidi il cui punto di infiammabilit inferiore a 21 C compresi i liquidi estremamente infiammabili o e chea contatto con l aria a temperatura ambiente e senza apporto di energia possono riscaldarsi e infiammarsi e solidi che possono facilmente infiammarsi per la rapida azione di una sorgente di accensione e che continuano a bruciare o a consumarsi anche dopo l allontanamento della sorgente di accensione o e gassosi che si infiammano a contatto con l aria a pressione normale o e che acontatto con l acqua o l aria umida s
166. lla semplificazione delle modalit di gestione dei rifiuti stessi L efficacia del procedimento di sterilizzazione ed i metodi per dimostrarla sono stabiliti dalla norma UNI 10384 94 parte prima sulla base delle prove di convalida in essa stabilite 1 Nota 1 In pratica una tale affermazione assoluta riguardante l assenza di microrganismi vitali non pu essere provata Tuttavia le condizioni di sterilit si possono considerare raggiunte qualora si utilizzi un metodi di sterilizzazione accettato o riconosciuto 2 Nota 2 Il processo di inattivazione di microrganismi vitali durante la procedura di sterilizzazione solitamente descritto da una funzione matematica em pirica comunemente una funzione esponenziale Per la loro natura matematica tali funzioni possono essere ridotte a numeri molto bassi ma non a zero Comunque tali funzioni empiriche possono essere valide per controllare o stabilire i parametri nella procedura di sterilizzazione per ottenere il grado voluto di inattivazione dei microrganismi vitali Disinfezione La disinfezione non assicura un overkill e quindi carente nel garantire i margini di sicurezza raggiungibili con la steriliz zazione L efficacia di una procedura di disinfezione controllata significativamente da un numero di fattori ciascuno dei quali pu avere un effetto pronunciato sul risultato finale fattori che influenzano la disinfezione dipendono 1 caratteristiche del prodotto spettro di a
167. lli di tenuta che permettono la facile e sicura so stituzione del film continuo tubolare con uno nuovo quando si arriva al termine del tubolare vecchio In casi eccezionali il sistema a film continuo tubolare termosaldabile pu servire anche per il trasferimento di oggetti che debbano poi essere riutilizzati altrove a patto che si proceda all apertura del sacchetto all interno della camera di un isolatore Esistono sistemi pi idonei per il trasferimento di materiali da un isolatore ad un altro di seguito illustrati Contenitori RTP Con il termine contenitori RTP si intende una particolare categoria di contenitori che possono essere agganciati in modo rapido e sicuro alle pareti di un isolatore mediante una porta speciale denominata RTP Rapid Transfer Port Tale sistema di aggancio descritto nel Cap 7 della norma ISO 11933 3 ove si indicano i principi fondamentali di questo tipo di aggancio per i dettagli si rimanda alla suddetta fonte Nella Figura 35 rappresentata una semplificazione del funzionamento del contenitore RTP che consente di trasferire oggetti mediante l accoppiamento del contenitore all isolatore attraverso l apertura dall interno della parte circolare della RTP e il disaccoppiamento del contenitore dall isolatore a fine operazione La speciale lavorazione meccanica delle due porte RTP quella sull isolatore e quella sul contenitore garantisce un intimo 90 contatto tra le superfici 2 e
168. lmente Allegato H C17 C18 48 Berillio composti del berillio Composti del vanadio Composti del cromo esavalente Composti del cobalto Composti del nichel Composti del rame Composti dello zinco Arsenico composti dell arsenico Selenio composti del selenio Composti dell argento Cadmio composti del cadmio Composti dello stagno Antimonio composti dell antimonio Tellurio composti del tellurio Composti del bario ad eccezione del solfato di bario Mercurio composti del mercurio Tallio composti del tallio Piombo composti del piombo C19 Solfuri inorganici C20 Composti inorganici del fluoro escluso il fluoruro di calcio C21 Cianuri inorganici C22 I seguenti metalli alcalini o alcalino terrosi litio sodio potassio calcio magnesio sotto forma non combinata C23 Soluzioni acide o acidi sotto forma solida C24 Soluzioni basiche o basi sotto forma solida C25 Amianto polveri e fibre C26 Fosforo composti del fosforo esclusi i fosfati minerali C27 Metallocarbonili Rifiuti aventi come costituenti C28 Perossidi C29 Clorati C30 Perclorati C31 Azoturi C32 PCB e o PCT C33 Composti farmaceutici o veterinari C34 Biocidi e sostanze fitosanitarie ad esempio antiparassitari ecc C35 Sostanze infettive C36 Oli di creosoto C37 lIsocianati tiocianati C38 Cianuri organici ad esempio nitrili ecc C39 Fenoli composti fenolati C40 Solventi alogenati C41 Solventi org
169. lo periodico da parte delle Autorit competenti sono prescritti dall art 7 del DPR n 254 2003 da cui per sono esclusi i MOGM Gli impianti di discarica e gli impianti di incenerimento dei rifiuti dovranno essere dotati di apparecchiature idonee a mo nitorare l ingresso e l uscita di automezzi la cui installazione manutenzione e accesso sono riservati al personale del SISTRI con oneri a carico dello stesso Appendice X I MOGM secondo l ADR 2009 L ADR definisce i Microrganismi Geneticamente Modificati MOGM e gli Organismi Geneticamente Modificati OGM mi crorganismi e organismi nei quali il materiale genetico stato di proposito modificato mediante un procedimento che non si riscontra in natura se contengono agenti patogeni definiti come microrganismi compresi batteri virus rickettsie parassiti funghi e altri agenti come i prioni che possono causare malattie all uomo o agli animali vengano assegnati alla classe 6 2 Materie infettanti cos suddivise I1 Materie infettanti per l uomo I2 Materie infettanti unicamente per gli animali I3 Rifiuti ospedalieri 14 Materia biologica Le materie infettanti sono poi suddivise in e categoria A ovvero trasportata in una forma che pu quando si verifichi un esposizione causare un invalidita permanente o una malattia letale o potenzialmente letale alle persone o agli animali fino ad allora in buona salute e categoria B se non soddisfa i criteri per
170. loro miscela che presenti una concentrazione complessiva superiore allo 0 005 in peso 50 ppm Quest ultima as similazione particolarmente importante in quanto coerente con il limite di concentrazione specifico per la classificazione dei preparati con frase di rischio R33 pericolo di effetti cumulativi pari a 0 005 previsto dalla normativa vigente e con il limite previsto dal Regolamento n 850 2004 CE relativo agli inquinanti organici persistenti o POP come modificato dal Re golamento 1195 2006 CE per farli rientrare nelle disposizioni specifiche per i POP waste Ne discende che i rifiuti contenenti PCB in concentrazione superiore ai 50 ppm sono da considerare pericolosi come del resto indicato anche dalla Convenzione di Basilea sul controllo dei movimenti oltre frontiera dei rifiuti pericolosi e sulla loro eliminazione Infine si ritiene altrettanto utile fare presente che le disposizioni specifiche del Regolamento n 850 2004 CE si applicano ai rifiuti che contengono oltre ai PCB anche i seguenti inquinanti organici persistenti tra cui molti insetticidi al di sopra delle soglie definite dallo stesso Regolamento e Aldrin e Clordano e Dieldrin e Eldrin e Eptacloro e Esaclorobenzene e Mirex e Toxafene e DDT e Clordecone e Dibenzodiossine e dibenzofurani policlorurati PCDD PCDF 49 e Esabromobifenile e HCH compreso il lindano Per i rifiuti prodotti dal settore sanitario e veterinario o da attivit di ri
171. manuali terreni solidi di ovatta brodo coltura coltura Tabella 16 Uno schema della classificazione dei rifiuti sempre con riferimento all ambito sanitario riportata nello schema seguente in cui si collega la tipologia del rifiuto prodotto al relativo regime giuridico che ne guida le modalit di gestione 41 i NON i I PERICOLOSI a RIFIUTI Assimilati agli URBANI CARATTERISTICHE DI PERICOLO PROVENIENZA PERICOLOSI gar m on cda a 0 a 00 ALTRE CATEGORIE TRATTAMENTI Classificazione rifiuti RADIOATTIVI a a da laboratori sanitari Figura 12 Per codificare e classificare un rifiuto si deve fare riferimento all Allegato D del D Lgs n 152 2006 parte IV che riporta l Elenco Europeo dei Rifiuti e d indicazioni per la sua lettura ed in particolare Diversi tipi di rifiuto inclusi nell elenco sono definiti specificatamente mediante un codice a sei cifre per ogni singolo rifiuto e i corrispondenti codici a quattro e a due cifre per i rispettivi capitoli Di conseguenza per identificare un rifiuto nell elenco occorre procedere come segue 3 1 Identificare la fonte che genera il rifiuto consultando i titoli dei capitoli da 01 a 12 o da 17 a 20 per risalire al codice a sei cifre riferito al rifiuto in questione ad eccezione dei codici dei suddetti capitoli che terminano con le cifre 99 possibile che un determinato impianto o stabilimento
172. mento CE n 1394 2007 del Parlamento europeo e del Consiglio del 13 novembre 2007 sui medicinali per terapie avanzate e recante modifica della Direttiva 2001 83 CE e del Regolamento CE n 726 2004 Direttiva 2001 18 CE Decreto legislativo 81 2008 Decreto legislativo 106 2009 Il presente regolamento fissa norme per i medicinali per terapie avanzate che sono preparati industrialmente o nella cui fabbricazione intervenga un processo industriale e che devono essere commercializzati negli Stati membri Rilascio deliberato di organismi geneticamente modificati nell ambiente Testo Unico sulla salute e sicurezza nei luoghi di lavoro disposizioni integrative e correttive al Decreto legislativo 81 2008 izzati a fini 4 BI f SCIENTITICI Decret legislativo 116 92 Sulla protezione degli animali uti A tO Nella DI Hva spea a i O g0 D Itri fini eri vt INTIOTITO Qeild LIT TIN Tabella 7 Normativa sui medicinali sperimentali per terapia genica Gli aspetti regolatori della terapia genica coprono diversi campi Ogni ricerca sperimentale studi preclinici inclusi quelli sugli animali preparazione e produzione di prodotti per terapia genica sperimentazione e sviluppo clinico utilizzatore produttore al momento di iniziare una ricerca sperimentale per terapia genica che preveda l impiego di MOGM tenuto a inviare una notifica al Ministero della Salute indicando tutti i dati relativi all imp
173. n cui l autoclave pu essere situata al di fuori della struttura confinata e probabilmente al servizio anche di altre unit utile conoscere anche le disposizioni del DPR 215 2003 ovvero della norma UNI 10384 94 TABELLA 20 Definizioni collegate all inattivazione vari gradi di decontaminazione TERMINE Inattivazione Decontaminazione Disinfezione Disinfettante Sterilizzazione Sterile 54 DPR 15 7 2003 drastica riduzione della carica microbica effet tuata con l impiego di sostanze disinfettanti abbattimento della ca rica microbica tale da ga rantire un SAL Sterility Assurance Level non inferiore a 10 6 UNI EN 12461 2000 processo usato per raggiungere uno stato libero da microrganismi di processo Vitali processo atto a ridurre il numero di microrgani smi vitali mediante vari metodi fisici e chimici agente chimico in grado di ridurre il numero dei microrganismi vitali processo adottato per ottenere lo stato sterile stato di assenza di mi crorganismi vitali 1 e 2 UNI EN 12470 2001 distruzione parziale o completa di una data attivit fino alla distru zione del sistema mi crobiologico rimozione o riduzione a livelli accettabili della contaminazione micro biologica processo di riduzione del numero di micror ganismi vitali mediante vari metodi fisici e chi mici processo usato per ot tenere lo stato sterile libero da microrganismi vitali
174. ngono manipolati gli animali gli stabulari e gli impieghi confinati di MOGM devono essere autorizzati e accertamento di potenziale ricombinazione in vivo e effetti farmacologici tossicologici e problemi immunologici e aspetti etici della manipolazione animale Si sottolinea che considerata la variet degli approcci terapeutici le metodiche ed il grado di approfondimento degli studi preclinici andranno valutati caso per caso livelli di contenimento ed i controlli da effettuare saranno determinati dalla natura del gene da trasdurre e dal tipo di vettore utilizzato Le linee guida dell ISS sulla sperimentazione clinica di fase con medicinali sperimentali per terapia genica Linee guida sulla sperimentazione clinica di fase con medicinali sperimentali per terapia genica somatica ISS Notiziario dell Istituto Superiore di Sanit Volume 17 n 7 8 Luglio Agosto www iss it binary publ publi 0478 1106653420 pdf dovranno essere seguite durante lo sviluppo del medicinale sperimentale nella produzione dei dati scientifici e nella preparazione della do cumentazione da presentare all Istituto Superiore di Sanita ISS allo scopo di ottenere l autorizzazione del medicinale spe rimentale alla sperimentazione clinica di fase Rif DPR 439 2001 Contestualmente necessario ottenere l autorizzazione all impiego confinato di MOGM per le strutture cliniche in cui sar svolta la sperimentazione Vedere modulistica del Minister
175. ni Per Microorganismo si intende ogni entit microbiologica cellulare o non cellulare inclusi i virus viroidi e le cellule animali o vegetali in coltura capace di replicarsi o di trasferire geni Per MOGM si intende un microrganismo il cui materiale genetico stato modificato in un modo che non avviene in natura per incrocio e o ricombinazione naturale La modificazione genetica avviene almeno mediante l impiego delle tecniche elen cate nell Allegato parte A Per Impiego confinato si intende ogni attivit nella quale i microrganismi vengono modificati geneticamente o nella quale tali MOGM vengono messi in coltura conservati utilizzati trasportati distrutti smaltiti o altrimenti utilizzati e per la quale ven gono usate misure specifiche di contenimento al fine di limitare il contatto degli stessi con la popolazione o con l ambiente Per Incidente si intende ogni evento imprevisto che comporti una diffusione non intenzionale di agenti biologici e di MOGM nel corso del loro impiego confinato che possa presentare un pericolo immediato o differito per la salute dell uomo o per l ambiente Per Utilizzatore si intende il responsabile scientifico e gestionale dell impiego confinato di MOGM Per Titolare dell impianto si intende il datore di lavoro cos come definito dall art 2 del D Lgs 626 Per Notifica si intende a presentazione da parte dell utilizzatore o del titolare dell impianto a
176. nternazionale di rischio biologico Devono inoltre essere presenti sistemi di chiusura o mezzi per sigillare il contenitore chiusura integrale fascette di plastica o di metallo sistemi di sigillatura termica Nel caso di rifiuti infetti o comunque contaminati ad elevato contenuto di umidit o che contengano liquidi l utilizzo di ma teriale assorbente per contenere eventuali perdite accidentali all interno del contenitore interno ne aumenta il peso ma prescritto dalle istruzioni d imballaggio ADR in quantit sufficiente da assorbire l intero quantitativo di liquido presente il contenitore deve comunque essere in grado di trattenere i liquidi anche se destinato a rifiuti solidi Il contenitore deve essere realizzato con materiale permeabile agli agenti sterilizzanti se i contenuti devono essere sterilizzati con vapore o fumiganti gassosi o comunque realizzati in modo che l agente sterilizzante sia in grado di penetrare nel ca rico contenitori dovrebbero essere conformi alle disposizioni nazionali per quanto attiene ai codici a colori materiali forma e dimensioni ed in particolare se destinati al trasporto all esterno dovrebbero essere conformi all ADR Appendice X Ci do vrebbe avvenire anche nel caso in cui i rifiuti vengano trattati ovvero inattivati all esterno della struttura confinata contenitori dovrebbero essere rimossi dalla struttura confinata quando sono stati riempiti in modo tale da non superare limit
177. nto essenziale per la preparazione di una notifica di impiego la valutazione della classe dell impiego confinato che si in tende eseguire art 5 del D Lgs 206 01 In analogia con i gruppi di rischio da1 a 4 previsti dal D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 in materia di tutela della salute e della sicurezza nei luoghi di lavoro sono previste quattro classi di impiego definite sulla base del livello di contenimento necessario a proteggere la salute umana e l ambiente dai possibili rischi connessi con l uso di un particolare MOGM Il livello di contenimento adeguato a garantire la sicurezza determina la classe dell impiego confinato Il nuovo requisito introdotto dalla normativa sui MOGM sono le 4 classi di impiego confinato che sono correlate alle misure di contenimento identificate attraverso la valutazione del rischio in quanto necessarie a controllare il rischio La richiesta di applicare un contenimento pi basso rispetto alla classe di impiego deve essere fatta dal notificante al mo mento della notifica e un adeguata valutazione del rischio deve essere effettuata per giustificare tale richiesta Senza au torizzazione dalla Autorit Competente e fino a quando non si ottiene non si pu applicare un livello di contenimento pi basso della corrispondente classe di impiego Obiettivo primario selezionare le misure fisiche di contenimento e le procedure di sicurezza associate in base al livello di rischio per la salute umana e per l ambiente
178. nza di specie suscettibili uomo animali o piante nell ambiente potenzialmente esposto Ambiente favorevole alla sopravvivenza del MOGM La possibilit che il MOGM possa sopravvivere e perdurare nell ambiente un fattore determinante in sede di valutazione del rischio 17 Effetti sull ambiente fisico Occorre anche valutare gli effetti dannosi connessi a un MOGM sia diretti sia indiretti dovuti ad un alterazione significativa delle caratteristiche fisico chimiche e o dell equilibrio ecologico delle componenti del suolo o dell acqua nell ambiente esposto PROCEDURA 2 1 Classificazione definitiva e determinazione delle misure di contenimento Una volta esaminate tutte le potenziali caratteristiche dannose in termini di gravit e di probabilit tenendo in debita con siderazione gli effetti delle misure di contenimento e di protezione indicate nella classificazione iniziale dell organismo rice vente si pu procedere alla classificazione definitiva e alla determinazione delle misure di contenimento per il MOGM in que stione Per classificare il MOGM e determinare le relative misure di confinamento in via definitiva occorre rivedere la classificazione iniziale per stabilirne la correttezza tenendo presente le attivit e le caratteristiche delle operazioni proposte Da un confronto tra la classificazione iniziale e le relative misure di contenimento da un lato e la classe e le misure di con tenimento definitive dall altro s
179. o a tutti gli utilizzatori con riferimento alla letteratura degli stan dard nazionali Devono essere forniti agli operatori protocolli scritti o manuali di sicurezza relativi alle procedure Ad ogni uso della cappa necessario osservare delle corrette prassi operative 70 accertarsi che la cappa sia idonea all agente biologico utilizzato verificare il perfetto funzionamento della stessa spegnere lampada UV se presente prima di iniziare il lavoro posizionare il vetro frontale se del tipo a scorrimento all altezza fissata per la maggiore protezione dell operatore 20 30 cm oppure regolare l altezza della sedia in modo che il volto dell operatore sia al di sopra dell apertura del vetro frontale Il vetro che non deve essere aperto quando la cappa in uso accendere il sistema di aspirazione della cappa almeno 10 minuti prima di iniziare il lavoro in modo da stabilizzare il flusso e consentire l eliminazione del particolato presente al suo interno pulire con etanolo EtOH al 70 o una soluzione diluizione 1 100 di ipoclorito di sodio 0 05 o altri disinfettanti la superficie di lavoro le pareti interne e la superficie interna del vetro se si usa ipoclorito necessario effettuare un secondo lavaggio con acqua sterile per eliminare il cloro residuo che pu eventualmente corrodere le superfici in ac ciaio inossidabile pulire con EtOH al 70 le superfici di tutti i materiali e contenitori immessi nella cappa per
180. o brevi e a lungo termine sia la realizzazione di prodotti puliti a partire da materie prime rinnovabili sia l ottenimento di rifiuti ecocompatibili CAPITOLO P RIMO Evoluzione normativa Nel corso degli anni sono emerse preoccupazioni riguardanti i potenziali rischi che l utilizzazione delle biotecnologie pu comportare per la salute umana e per l ambiente Su questo aspetto si soffermata la Comunit Europea che ha emanato delle disposizioni legislative riguardanti il rilascio deliberato nell ambiente di organismi geneticamente modificati e l impiego confinato di microrganismi geneticamente modificati quali le Direttive 90 220 CEE e 90 219 CEE Tali direttive adottate a partire dal 1990 sono state poi modificate rispettivamente dalle Direttive 98 81 CEE e 2001 18 CEE In Italia la sicurezza delle attivit che comportano l utilizzo di materiale geneticamente modificato garantita dall operativit di decreti che recepiscono il contenuto delle suddette Direttive Europee rivolte alla tutela dell uomo dell ambiente e del l ecosistema in generale Queste disposizioni stabiliscono in particolare le misure e le norme procedurali da ottemperare per chiunque voglia manipolare produrre in laboratorio utilizzare o rilasciare nell ambiente esterno microrganismi o organismi geneticamente modificati LA NORMATIVA SULL IMPIEGO CONFINATO DI MICROORGANISMI GENETICAMENTE MODIFICATI Con il Decreto Legislativo 12 aprile 2001 n 206 v
181. o da esperti ricercatori dell ISPESL Il progetto stato realizzato in una coerente logica di aderenza agli scopi del CCM istituito con la Legge n 138 del 26 05 04 e del Decreto del Ministero della Salute 01 07 04 modificato dal Decreto del Ministero del Lavoro della Salute e delle Politiche Sociali del 18 09 08 Il CCM opera su tutto il territorio nazionale al fine di garantire ai cittadini uguali possibilit di accesso agli interventi di prevenzione attraverso una rete di collaborazione tra diverse strutture sanitarie enti ed istituti di ricerca nel rispetto del processo di regionalizzazione innescato dalla riforma del Titolo V della Costituzione Questa iniziativa si colloca nell ambito di un programma di promozione della sicurezza nei laboratori che fanno uso di microrganismi geneticamente modificati e si propone di offrire un adeguato strumento di formazione sulle misure di contenimento e di tutela della salute dell uomo e dell ambiente secondo la Direttiva 98 81 CE recepita in Italia con il Decreto Legislativo n 206 del 12 aprile 2001 Il progetto scaturisce dall esigenza di offrire a coloro che operano nel campo delle biotecnologie un informazione intuitiva e dinamica completa ed esauriente A questo scopo stato quindi realizzato un cd rom multimediale che documenta misure di contenimento procedure e nor mativa aggiornata sulla sicurezza dei laboratori attraverso una rappresentazione virtuale degli ambienti di lavoro e degli stru
182. o da esprimere sul pericapside proteine di superficie diverse da quelle presenti nei virus parentali Questa operazione detta pseudotipizzazione Le proteine dell en velope legando differenti componenti proteiche delle cellule ospiti determinano il tropismo del virus Attraverso la pseu dotipizzazione possibile modificare il tropismo del vettore ampliando o restringendo a seconda dello scopo da perseguire lo spettro d ospite dei diversi tipi cellulari Uno svantaggio dei vettori derivati da virus integranti come MoLV o HIV rappresentato dal fatto che l integrazione nel ge noma avviene in modo non controllato e questo pu comportare fenomeni di mutagenesi inserzionale Einfatti possibile che il vettore si inserisca all interno di un gene cellulare essenziale determinandone la perdita di funzione e la morte della singola cellula oppure che il vettore si inserisca all interno di geni oncosoppressori inattivandoli o in prossimit di protooncogeni alterandone i profili di espressione e potenzialmente attivandoli in un contesto dove dovrebbero essere silenti In quest ultimo caso la cellula contenente quella specifica integrazione potrebbe acquisire un vantaggio proliferativo sulle altre dando origine a una popolazione cellulare espansa pi favorevole alla trasformazione tumorale Questa evenienza per quanto rara da tenere in attenta considerazione nella scelta di un protocollo di terapia genica vettori lentivirali di ultima
183. o della Salute E inoltre indispensabile tener conto delle caratteristiche dei locali in cui si svolge la sperimentazione o il soggiorno del pa ziente Infatti l impiego in clinica dei vettori al momento maggiormente usati per terapia genica potrebbe in teoria presentare dei rischi per il personale ospedaliero e per la comunit Le modalit di eliminazione delle particelle virali dall organismo e le modalit di trasmissione e contagio di soggetti umani variano a seconda della specie virale interessata Esistono virus che vengono eliminati per via respiratoria sia liberi sia vei colati dalle goccioline di Flugge ad es gli Adenovirus sono tra i virus proposti come vettori di geni terapeutici e virus che si trasmettono per via parenterale e o sessuale per contatto con secrezioni varie alcuni virus erpetici ed i retrovirus anch essi proposti come vettori di geni sono meno facilmente diffusibili e richiedono contatti pi stretti Il controllo della diffusione delle infezioni virali particolarmente arduo data la grande diffusibilit di alcuni di questi agenti e le loro ridottissime dimensioni Peraltro poich i virus circolano di solito veicolati da particelle liquide o di polvere anche l uso di procedure filtri ecc non in grado di bloccare particelle delle dimensioni di un virus ma capaci di fermare particelle di aerosol che veicolano virus potrebbe essere utile per limitare il rischio di diffusione Se l agente biologico si r
184. o proposto La terapia genica particolarmente adatta ad alcune patologie e malattie infettive causate da un singolo agente patogeno sia virale sia batterico e tumori causati da errata divisione e proliferazione cellulare per attivazione di un oncogene o inattivazione di un oncosoppressore e malattie ereditarie deficienze genetiche di un singolo prodotto genico o errata espressione di un gene e malattie del sistema immunitario allergie infiammazioni e malattie autoimmuni STRATEGIE OPERATIVE DELLA TERAPIA GENICA APPLICAZIONI Aumentare la quantit di un gene Malattie causate da perdita funzionale di un gene L introduzione di copie aggiuntive del deficitario aggiungendone delle copie gene non alterato determina un aumento quantitativo del prodotto genico a livelli sufficienti per ripristinare il fenotipo normale Alcune forme tumorali Alcuni geni possono essere indotti nella loro espressione in cellule tumorali in modo da causarne la morte Il killing si distingue in Diretto i geni codificano per una tossina letale o per un pro farmaco molecola in grado di conferire suscettibilit a un determinato farmaco la cui somministrazione svolge azione sinergica e selettiva sulla cellula Indiretto geni immunostimolatori capaci di indurre o aumentare una risposta immunitaria contro la cellula cancerogena Killing selettivo delle cellule patologiche Correzione selettiva della mutazione Difficile applicazione pratica anche se te
185. ocale spogliatoio prevista un area libera disponibile eventualmente per la futura installazione di lavello doc cia autoclave o scaffalatura per immagazzinamento di sostanze in ambiente sicuro Le condotte dell aerazione devono per mettere la disinfezione tramite gas Le finestre devono essere chiuse e sigillate per mantenere il gradiente di pressione negativa all interno del laboratorio Impianto di condizionamento e ventilazione L impianto di condizionamento dell aria e le condizioni di depressione nelle aree di lavoro sono parametri estremamente critici nella strutturazione di un laboratorio di livello di contenimento 3 e 4 Secondo il D Lgs 206 01 l area di lavoro deve essere mantenuta ad una pressione negativa rispetto a quella delle aree nelle immediate vicinanze Il sistema aeraulico deve essere in grado di garantire il filtraggio assoluto dell aria attraverso filtri HEPA sul canale di ripresa a monte di tutti i canali di recupero dell aria e sul sistema di immissione dell aria nel laboratorio L impianto di ventilazione prevede che l aria immessa all interno del laboratorio e quella emessa sia senza ricircoli per garantire l assenza di by pass di aria contaminata in altre zone dell edificio Ci viene realizzato con un sistema di presa dell aria esterna all edificio che viene immessa nel laboratorio fornendo un flusso laminare costante di aria sterile in classe 100 La sterilit prima dell immissione viene garantit
186. odulata attivando o disattivando il transgene al momento opportuno e Permanenza del transgene Il nuovo materiale genetico introdotto deve poter essere mantenuto nella cellula a lungo termine tranne nel caso in cui sia preferibile una sua presenza transitoria e Risposta immunitaria La risposta immunitaria un altro aspetto critico per l efficacia di un intervento di terapia genica Infatti pu ma nifestarsi una risposta immune contro il vettore per trasferimento genico o contro il transgene stesso riconosciuto come estraneo L insorgere di una risposta di tipo immunitario pu avere effetti anche molto gravi limitando non solo l efficacia della procedura terapeutica ma mettendone anche a serio rischio la sicurezza Una terapia genica di successo deve essere quindi in grado di evadere i meccanismi di difesa immunitaria tipici degli organismi com plessi come l uomo e Sicurezza della pratica terapeutica La sicurezza della pratica terapeutica un aspetto essenziale da considerare nel caso di vettori di origine virale si deve essere certi dell assenza di virus contaminanti patogeni o di possibilit residua di provocare malattia da parte del vettore Inoltre nel caso di vettori che si integrano nei cromosomi necessario valutare possibili effetti negativi per la presenza di nuovo materiale genetico all interno del genoma delle cellule bersaglio 21 ASPETTI REGOLATORI RIGUARDANTI MEDICINALI PER TERAPIE AVANZATE Regola
187. olarvi all interno il DNA Esistono due grandi categorie di vettori che consentono il trasferimento genico vettori non virali si basano sull uso di DNA da solo o complessato a molecole che ne facilitino l ingresso nella cellula vettori non virali DNA nudo DNA complessato a liposomi DNA polimero complessato a DNA Figura 8 vettori virali si basano sull utilizzo di virus opportunamente modificati in modo tale da poter veicolare il loro genoma all interno delle cellule bersaglio senza indurre patogenicit virus sono microorganismi esistenti in natura specializzati nel trasferi mento di informazione genetica nelle cellule Per questa ragione si pensato di sfruttare questa loro peculiarit adattandola alle opportune necessit A differenza dei virus infatti i vettori da essi derivati non sono in grado di portare a termine un in fezione produttiva poich in seguito all introduzione del materiale genetico trasduzione non avviene la replicazione e la pro pagazione del vettore Tuttavia durante l evoluzione gli organismi hanno sviluppato barriere fisiche e biologiche quali le mem brane cellulari il complesso sistema immunitario per evitare proprio l introduzione di materiale genetico esogeno al loro interno da parte dei virus Questo rappresenta un ulteriore difficolt da tenere in considerazione nello sviluppo e nell appli cazione dei vettori virali vettori virali attualmente utilizzati sono deriv
188. ologie poich utilizza da sempre e bioconversioni per la trasformazione dei prodotti agricoli in alimenti pane lievitato vino aceto yogurt crauti formaggi Le ricerche nel settore alimentare hanno permesso di identificare processi di trasformazione maggiormente selettivi e specifici per minimizzare il pi possibile i danni meccanici termici e chimici nei prodotti alimentari causati dalle pratiche di lavorazione delle materie prime agricole e per produrre alimenti con caratteristiche migliori uniformit nella qualit e garanzie di igiene e sicurezza L esigenza di un controllo nella qualita degli alimenti che nasce dall integrazione tra l emergere delle nuove tecnologie e la crescente consapevolezza dei consumatori in tema di sicurezza alimentare sta alimentando l ascesa sul mercato dei test diagnostici per gli alimenti Una soluzione rapida ed efficiente potrebbe essere rappresentata dallo sviluppo di specifici biosensori che consentano di identificare e quantificare la presenza di composti o microrganismi Le biotecnologie trovano applicazione anche nei processi industriali in particolare nella realizzazione di prodotti a ridotto im patto ambientale o ottenuti da processi di bioconversione amminoacidi antibiotici vitamine polisaccaridi carta e derivati della cellulosa Le emergenti biotecnologie ambientali possono infine soddisfare sia la necessit di assicurare il corretto smaltimento dei rifiuti e degli effluenti in tempi medi
189. omportare valutazione del rischio la presenza di agenti biologici Esposizione da agenti biologici All XLV misure organizzative tecniche Segnale di rischio biologico e procedurali Misure specifiche per strutture Specifiche sulle misure di contenimento sanitarie e veterinarie e sui livelli di contenimento vem ven re All XLVIII SPS eee Specifiche per processi industriali industriali Figura 4 In data 21 05 2009 al D Lgs 81 08 sono state apportate modifiche con il Decreto Legislativo 3 agosto 2009 n 106 Di sposizioni integrative e correttive del Decreto Legislativo 9 aprile 2008 n 81 in materia di tutela della salute e della sicurezza nei luoghi di lavoro Tale decreto entrato in vigore dal 20 agosto 2009 12 CAPITOLO TERZO Valutazione del rischio dell impiego confinato La valutazione del rischio biologico ha lo scopo di individuare le diverse tipologie di pericoli connessi alla manipolazione degli agenti biologici al fine di rimuovere o ridurre ad un livello accettabile il rischio di contaminazione degli operatori dei campioni dell ambiente e della comunit in genere Un agente biologico definito secondo la normativa vigente Direttiva 2000 54 CE come un qualsiasi microrganismo anche se geneticamente modificato coltura cellulare ed endoparassita umano che potrebbe provocare infezioni allergie o intossicazioni in lavoratori esposti Un microrganismo definito come un entit microbiolog
190. on riempire mai le provette fino all orlo fermare subito la centrifuga se la rottura avviene quando essa in funzione aspettare 15 30 minuti ed aprire lentamente il coperchio indossando una mascherina e guanti monouso due paia aprire sotto cappa di sicurezza biologica se possibile i rotori o i contenitori a tenuta togliere i vetri con delle pinze metalliche e pulire seguendo la procedura precedente Sversamento di materiale all interno di cappe di biologiche di sicurezza Mantenere la cappa in funzione indossare i DPI inserire gli UV e attendere 10 15 minuti assorbire il liquido sversato con carta assorbente aggiungere la sostanza germicida allo sversamento partendo dall esterno verso l interno per minimizzare la possibilit di aerosol e lasciar agire almeno 20 minuti rimuovere il disinfettante con una spugna o con carta assorbente Togliere le griglie e pulirle con della carta imbevuta di disinfettante procedere quindi alla pulizia del fondo della cappa lavare con disinfettante tutto il piano della cappa togliere le griglie e pulirle con della carta imbevuta di disinfettante sterilizzare il materiale utilizzato per la pulizia prevedere la disinfezione con formalina della cappa Sversamento di grosse quantit di materiale gt 10 ml 82 Lasciare la stanza per evitare di inalare aerosol avvertire dell incidente le altre persone presenti ed il responsabile del laboratorio e chiudere la porta soccorrere
191. ondizioni di esercizio controllare che quando in corso il ciclo di sterilizzazione il dispositivo di blocco del portello rimanga bloccato e il portello non si apra livello dell acqua prima dell avvio di un ciclo di sterilizzazione controllare che il livello dell acqua nell autoclave sia compreso fra l indice minimo e il massimo riportati sull indicatore di livello e funzionalit dello sfiato mentre l autoclave raggiunge la pressione di esercizio verificare la tenuta delle valvole manuali di sfiato e stato di conservazione della guarnizione del portello verificare che non vi siano rotture scorie o frammenti lubrificare con grasso al silicone evitare l uso di prodotti chimici e efficienza della valvola di sicurezza impostare un valore di pressione superiore al valore indicato dall indice rosso sul manometro e controllare che prima di raggiungere tale valore la valvola di sicurezza cominci a sfiatare e controllare dispositivo elettronico di livello mentre l autoclave in funzione scaricare lentamente l acqua aprendo il rubinetto di scarico e verificare che raggiunto il livello minimo intervenga l allarme e si accenda la spia di segnalazione e efficienza dei processi di sterilizzazione utilizzare indicatori biologici come strisce o ampolle di spore di Bacillus stearothermophilus normalmente disponibili in commercio Si consiglia di effettuare questo controllo con frequenza almeno mensile e ispezionare la camera
192. one con altri organismi nell ambiente e gli effetti su di essi incluse le eventuali caratteristiche di competitivit patogenicit o simbiosi e lacapacit di formare strutture di sopravvivenza ad es spore o sclerozi Inserto e l identit e le funzioni specifiche dell inserto geni e il livello di espressione del materiale genetico inserito e l origine del materiale genetico l identit dell organismo o degli organismi donatori e loro caratteristiche se pertinenti e lastoriadi eventuali modificazioni genetiche precedenti e l ubicazione del materiale genetico inserito possibilit di attivazione disattivazione di geni dell organismo ospite a seguito dell inserzione Vettore e la natura e l origine dei vettori e la struttura e la quantit dell acido nucleico del vettore e o del donatore che rimane nel costrutto finale del microrganismo modificato e la frequenza di mobilizzazione del vettore inserito se presente nel MOGM finale e o la capacit di trasferimento di materiale genetico Organismo donatore Devono essere prese in considerazione per esperimenti di fusione o esperimenti shotgun dove l inserto non ben ca ratterizzato e la patogenicit virulenza infettivit tossicit e possibilit di fungere da vettore di agenti patogeni e la natura dei vettori indigeni y sequenza v frequenza di mobilizzazione e specificit v presenza di geni che conferiscono resistenza a sostanze antimi
193. one pu essere ridotto a 3 minuti Sono ideali per materiali porosi ma non possono essere usate per trattare liquidi a causa della presenza del vuoto Fasi del procedimento di sterilizzazione e rimozione dell aria dalla camera 72 immissione del vapore raggiungimento della temperatura sterilizzazione asciugatura introduzione di aria pulita con filtro HEPA Procedimento di sterilizzazione Calore umido Ciclo 121 C 1 atm Ciclo 134 C 2 atm 12 minuti per la penetrazione del vapore 1 minuto per la penetrazione del vapore 12 minuti per la sterilizzazione 2 minuti per la sterilizzazione 6 minuti per il fattore di sicurezza 1 minuto per il fattore di sicurezza Totale 30 minuti Totale 4 minuti Tabella 27 Per un corretto uso dell autoclave si raccomanda di seguire la seguente procedura controllare il livello dell acqua e se necessario ripristinarlo con acqua demineralizzata inserire le bottiglie dei terreni da autoclavare con i coperchi leggermente aperti se possibile inserire il materiale da autoclavare nell apposito cestello i recipienti da autoclavare dovranno essere muniti dell apposito nastro per autoclave fare attenzione che il coperchio sia ben posizionato e che la valvola sia completa chiudere bene a fondo la manopola del coperchio dell autoclave far partire l autoclave visualizzando l aumento della pressione sull apposito manometro controllare che non venga mai superata la pression
194. ono essere raccolti e smaltiti applicando precauzioni particolari per evitare infezioni rifiuti che non devono essere raccolti e smaltiti applicando precauzioni particolari per evitare infezioni sostanze chimiche pericolose o contenenti sostanze pericolose sostanze chimiche diverse da quelle di cui alla voce 18 02 05 medicinali citotossici e citostatici medicinali diversi da quelli di cui alla voce 18 02 07 Altre tipologie di rifiuti che possono essere prodotti nell uso confinato dei MOGM e potenzialmente contaminati potrebbero indicativamente afferire alle seguenti categorie 02 02 01 07 07 05 07 06 14 15 19 19 05 19 06 19 13 Rifiuti prodotti da agricoltura orticoltura acquicoltura selvicoltura caccia e pesca trattamento e preparazione di alimenti rifiuti prodotti da agricoltura orticoltura acquicoltura selvicoltura caccia e pesca Rifiuti dei processi chimici organici rifiuti dalla produzione formulazione fornitura ed uso di prodotti farmaceutici rifiuti dalla produzione formulazione fornitura ed uso di grassi lubrificanti saponi detergenti disinfettanti e cosmetici Solventi organici refrigeranti e propellenti di scarto Rifiuti di imballaggio assorbenti stracci materiali filtranti e indumenti protettivi non specificati altrimenti Rifiuti prodotti da impianti di trattamento dei rifiuti impianti di trattamento delle acque reflue fuori sito nonch dalla potabilizzazione dell acqua e dalla sua pr
195. ontenimento 1 e 2 ser ramenti delle finestre devono essere rivestiti in materiale Impermeabile e facilmente lavabile Gli arredi e le superfici di lavoro devono essere robusti saldamente ancorati e essere uniti ai muri da sigillanti Devono essere facilmente pulibili impermeabili all acqua e resistenti a disinfettanti acidi alcali solventi organici e al calore moderato Impiantistica idraulica Deve essere garantita una fornitura di acqua di buona qualit Non devono esistere interconnessioni tra forniture di acqua per il laboratorio e quelle di acqua potabile opportuno montare un dispositivo anti riflusso a protezione del sistema idrico pubblico Nei locali del laboratorio le condutture esterne andrebbero evitate nel caso in cui non fosse possibile le tubazioni e i condotti a vista dovrebbero essere separati dal muro o dal soffitto in modo da evitare interstizi difficili da pulire i lavabi dovrebbero essere situati in prossimit della porta di accesso e dotati di acqua corrente Gli effluenti dei lavandini provenienti dagli impianti di livello 3 preferibile che non siano convogliati direttamente in fognatura ma siano sottoposti a pretrattamento inattivazione Anche gli effluenti della doccia di sicurezza preferibile che siano convogliati in pilette di raccolta ed attraverso un apposito tubo in polietilene fatti confluire nella vasca di raccolta L acqua di raccolta non deve essere mai smaltita nella fognatura 35 Impiant
196. ore dalle sostanze stesse quando questo dovr essere riaperto Sistemi identificati con l acronimo inglese CIP Clean In Place che derivano dall esperienza in campo farmaceutico nei si stemi di pulizia delle apparecchiature per evitare cross contamination o per una buona separazione dei lotti sono stati adattati per la decontaminazione degli isolatori stessi Negli isolatori risultano particolarmente adatte le pistole spruzzatici di liquido detergente che viene distribuito sulle superfici alle quantit e caratteristiche richieste da un sistema di serbatoi pompe ed eventuali scambiatori Il sistema CIP pu essere dedicato all isolatore oppure pu essere a servizio di tutto il reparto o comunque pu servire un gruppo di ap parecchiature Di solito questi sistemi hanno piccole dimensioni e sono montati su ruote Figura 25 wae SPRAY BALL Ory Link Figura 25 Rappresenta un CIP asservito ad un isolatore Lo smaltimento della soluzione esausta del lavaggio avviene come evidenziato in figura 25 attraverso le valvole dry link che permettono di sganciare il fusto da smaltire senza sversamento della soluzione liquida E buona norma fare terminare il ciclo di lavaggio con un risciacquo di acqua a temperatura ambiente si tratter del miglior tipo di acqua a disposizione di solito almeno demineralizzata ma sono frequenti i casi in cui si usi acqua Purificata PW O addirittura acqua Iniettabile
197. oricamente attuabile sia a livello di sequenza che altera la funzionalit genica genica sia a livello del suo trascritto di RNA messaggero Inibizione selettiva dell espressione genica In cellule alterate che esprimono un nuovo prodotto genico come molecola alterata o aberrante si pu bloccare l espressione intervenendo direttamente sul DNA sull RNA o sulla proteina Tabella 6 20 REQUISITI DELLA TERAPIA GENICA proteina non sistema vettore proteina funzionante funzionante Nucleo cellule bersaglio Figura 7 Principio di funzionamento della terapia genica e Efficienza elevata del transgene Il trasferimento del transgene alle cellule deve avvenire con un efficienza elevata Infatti se la percentuale di cellule che riceve il transgene bassa non si avr un esito terapeutico favorevole per la maggior parte delle patologie L efficienza di trasferimento correlata sia alla tipologia dei vettori utilizzati per veicolare i transgeni che alle cellule bersaglio e Livello di espressione del transgene Il livello di espressione del transgene deve essere appropriato rispetto a ci che avviene a livello fisiologico Una pro duzione troppo bassa non ha effetto terapeutico una troppo alta potrebbe avere un effetto nocivo Un ruolo fonda mentale nell espressione del transgene svolto dal promotore scelto Inoltre in alcuni casi preferibile un espressione costitutiva del transgene mentre in altri casi potrebbe essere m
198. ormativa vigente su classificazione ed etichettatura delle sostanze pericolose MUTAGENICIT CATEGORIA DESCRIZIONE SIMBOLO E FRASI DI RISCHIO INDICAZIONI PERICOLO Categoria 1 Sostanze note per gli effetti T Tossico R46 Puo mutageni sull uomo provocare Esistono prove sufficienti per alterazioni stabilire un nesso causale tra genetiche l esposizione dell uomo ad ereditarie esse e l insorgenza di alterazioni genetiche ereditarie Categoria 2 Sostanze da considerare T Tossico R46 Puo mutagene per l uomo provocare Esistono prove sufficienti per alterazioni ritenere verosimile che genetiche l esposizione umana possa ereditarie provocare lo sviluppo di alterazioni genetiche ereditarie in generale sulla base di adeguati studi su animali altre informazioni specifiche Categoria 3 Sostanze da considerare con Xn Nocivo R68 PU sospetto per possibili effetti provocare effetti mutageni irreversibili Esistono prove ottenute da studi introdotta col specifici sugli effetti mutageni 28 APT in ma non sono sufficienti per precedenza era classificare la sostanza nella adottata R40 categoria 2 Tabella 19 H12 Sostanze e preparati che a contatto con l acqua l aria o un acido sprigionano un gas tossico o molto tossico H13 Sostanze e preparati suscettibili dopo eliminazione di dare origine in qualche modo ad un altra sostanza ad esempio ad un prodotto di lisciviazione avente una delle car
199. osti di grande utilit per l uomo Nel caso delle piante queste colture possono trovare applicazione nella produzione di molti metaboliti farmaci pigmenti aromi fragranze vitamine ecc mentre le colture di cellule animali trovano applicazione nella produzione di vaccini virali interferoni e altre sostanze biologicamente attive e an ticorpi monoclonali Anticorpi Monoclonali produzione di anticorpi grazie alla fusione di una linfocita B produttore di anticorpi ma con vita breve in vitro con cellule trasformate cellule mielomatose Gli ibridomi cellulari ottenuti sono in grado di mantenere l immortalit e di produrre anticorpi monoclonali che provengono cio da un unico clone linfocitario Essi sono estremamente specifici e quindi molto importanti per numerose applicazioni diagnostiche e terapeutiche e nella purificazione delle pro teine Ingegneria genetica nota anche come tecnica del DNA ricombinante rDNA permette di agire sul DNA degli organismi e quindi sulle loro caratteristiche genetiche in modo mirato e selettivo essa consente infatti di estrarre il DNA di un organismo identificarne e separarne la porzione che interessa ed inserirla tal quale o previa modificazione nel DNA di un organismo diverso nel quale continuer a svolgere la sua funzione Principali aspetti applicativi delle biotecnologie Le applicazioni in campo biomedico rappresentano il settore al quale le biotecnologie hanno dato finora il contrib
200. ppo deve comprendere i dispositivi di prefiltrazione di pre trattamento termico preriscaldamento d inverno e preraffreddamento d estate umidificazione a vapore filtrazione finale costituita da sezione di celle HEPA All uscita del gruppo di trattamento le condizioni termo igrometriche dell aria devono essere fissate ad un valore tale da as sicurare in tutti i locali il controllo dei parametri termo igrometrici La ripresa dell aria dagli ambienti ed il suo trasferimento all esterno deve essere assicurata da un unit ventilante equipag giata con il sistema di recupero dell energia termica riscaldante durante la stagione fredda raffreddante durante quella calda Il rispetto delle condizioni sopraindicate porta a dimensionare l impianto con una notevole portata d aria deve quindi essere assicurato un numero di ricambi d aria ora maggiore di sei In alcuni casi si pu arrivare fino a 20 ricambi ora Ulteriore parametro di benessere costituito dalla differenza di temperatura in uscita dai diffusori e l aria dell ambiente stesso Minore tale differenza e maggiore il grado di benessere In ultimo la velocit dell aria in uscita dai diffusori non deve essere troppo elevata Filtri Tutti gli alloggiamenti dei filtri HEPA devono essere progettati per consentire la decontaminazione in situ del filtro prima della rimozione in alternativa il filtro pu essere rimosso in un contenitore primario sigillato imperm
201. prigionano gas facilmente infiammabili in quantit pericolose H3 B Infiammabile sostanze e preparati liquidi il cui punto di infiammabilit pari o superiore a 21 C e inferiore o H4 H5 H6 H7 H8 H9 H10 pari a 55 C Irritante sostanze e preparati non corrosivi il cui contatto immediato prolungato o ripetuto con la pelle o le mucose pu provocare una reazione infiammatoria Nocivo sostanze e preparati che per inalazione ingestione o penetrazione cutanea possono comportare rischi per la salute di gravit limitata Tossico sostanze e preparati comprese le sostanze e i preparati molto tossici che per inalazione ingestione o penetrazione cutanea possono comportare rischi per la salute gravi acuti o cronici e anche la morte Cancerogeno sostanze e preparati che per inalazione ingestione o penetrazione cutanea possono produrre il cancro o aumentarne la frequenza per maggior chiarezza si riportano in Tabella 17 le categorie di canceroge nicit previste dalla normativa vigente su classificazione ed etichettatura delle sostanze pericolose CANCEROGENICIT CATEGORIA DESCRIZIONE SIMBOLO E FRASI DI RISCHIO INDICAZIONI PERICOLO Categoria 1 Sostanze note per gli effetti T Tossico R 45 PU cancerogeni sull uomo Esistono provocare i prove sufficienti per stabilire un cancro nesso causale tra l esposizione R 49 PU dell uomo alla sostanza e lo provocare
202. rappresentante del Ministero del Lavoro della Salute e delle Politiche Sociali Settore Salute un rappresentante del Ministero del Lavoro della Salute e delle Politiche Sociali Settore Lavoro un rappresentante del Ministero dell Ambiente e della Tutela del Territorio e del Mare un rappresentante del Ministero delle Politiche agricole e forestali un rappresentante del Ministero delle Attivit Produttive un rappresentante del Ministero dell Interno un rappresentante del Ministero dell Universit e della Ricerca scientifica e tecnologica NNSNSSSSN 11 esperti di comprovata competenza scientifica un esperto del Ministero del Lavoro della Salute e delle Politiche Sociali Settore Salute un esperto del Ministero dell Ambiente e della Tutela del Territorio e del Mare un esperto del Ministero delle Politiche agricole e forestali un esperto del Ministero del Lavoro della Salute e delle Politiche Sociali Settore Lavoro due esperti dell Istituto Superiore di Sanit due esperti dell Istituto Superiore per la Prevenzione e Ricerca Ambientale un esperto dell Agenzia nazionale per la protezione civile due esperti dell Istituto Superiore per la Prevenzione e la Sicurezza del Lavoro NNSNSNSSSSN 1 rappresentante designato dalla Conferenza Permanente per i Rapporti tra lo Stato le Regioni e Provincie Autonome Le funzioni di segreteria sono svolte a cura del Dipartimento della prevenzione sanitaria del Ministero della Salute p
203. razioni che possono ge nerare aerosol omogenizzazione di tessuti areazione di colture Cappe di sicurezza biologica di classe Il Cappa a flusso laminare verticale Esistono 4 tipologie di cappe di classe Il distinte in base alla percentuale di aria riciclata Tipo A1 Tipo A2 Tipo B1 Tipo B2 Classe II Tipo A1 Aria filtrata con HEPA gt Aria ambientale gt aree Aria contaminata Fonte ESCO WORLD CLASS WORLDWIDE Figura 15 Protezione e Operatore e ambiente esterno e prodotto La protezione dell operatore assicurata dal flusso frontale di aria esterno convogliato come flusso laminare al di sopra del piano di lavoro che viene filtrato attraverso un filtro HEPA in modo da minimizzare la possibilit di contaminazioni crociate per il prodotto L ambiente protetto da un filtro HEPA che filtra l aria emessa dalla cappa Tipo A1 e A2 Tale aria libera da particolato pu essere immessa nel laboratorio o liberata al di fuori dell edificio attraverso il sistema di ventilazione Caratteristiche e Allarmi di sicurezza per ventilazione insufficiente e Velocit frontale di aspirazione di almeno 0 4m s e Contatore delle ore di utilizzo per il controllo dell efficienza dei filtri e Ariainentrata filtrata attraverso filtro HEPA prima di essere immessa sul piano di lavoro e Interno della cappa in depressione 65 e Aria in uscita filtrata da un filtro HEPA Specifiche del flusso d aria per cappe d
204. re controllato il laboratorio deve essere in depressione necessaria la presenza di una cappa di sicurezza biologica di classe III il cui utilizzo necessario in tutte le operazioni effettuate La progettazione e l operativit di una simile struttura prevede delle conoscenze ed esperienze gestionali comprovate PROGETTAZIONE DEGLI IMPIANTI CARATTERISTICHE GENERALI Struttura Le pareti i soffitti e i pavimenti devono essere lisci facili da pulire impermeabili ai liquidi e resistenti agli agenti chimici e ai disinfettanti normalmente usati in laboratorio pareti rivestite con materiale vinilico termosaldato o vernice epossidica sino ad un altezza di m 2 00 pavimento rivestito con materiale vinilico termosaldato con una sguscia di raccordo tra la pavimen tazione stessa e la parete materiali per i pavimenti devono essere opportunamente scelti tali da essere lisci ed antiscivolo Le porte devono avere superfici facilmente lavabili essere dotate di sistema di autochiusura e di finestra di osservazione con una larghezza utile minima di m 0 80 Inoltre devono avere caratteristiche antincendio grado predeterminato di resistenza al fuoco REI una larghezza utile minima di m 1 20 ed essere apribili nel senso dell esodo Le finestre devono essere apribili in assenza di aerazione meccanica per consentire una corretta ventilazione naturale del locale e devono essere dotate di reti per la protezione da insetti ed artropodi solo per impianti di c
205. re firmata e presentata al Ministero della Salute dal titolare dell impianto da identificarsi con il datore di lavoro ai sensi del D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 Essa contiene le informazioni relative all impianto come specificato nella parte A dell Allegato V al D Lgs 206 01 Non con tiene informazioni relative ai MOGM che saranno contenute nelle notifiche di impiego obbligatorie per impieghi di classe 2 304 Solo per impieghi di classe 1 per i quali non prevista ulteriore notifica la notifica di impianto conterr un riepilogo della valutazione di cui sopra oltre ad informazioni sulla gestione dei rifiuti Per tutti gli impieghi inclusi quelli di classe 1 documenti di valutazione completi saranno conservati presso l impianto responsabilit del titolare dell impianto informare il Ministero della Salute riguardo qualsiasi modifica delle informazioni con tenute nella notifica di impianto in modo che il relativo fascicolo esistente presso il Ministero risulti costantemente aggiornato Fatti salvi gli aggiornamenti successivi la notifica di impianto viene eseguita una sola volta prima del primo im piego Modifiche sostanziali dell impianto richiederanno comunque la presentazione di una nuova notifica Per impianti destinati esclusivamente ad impieghi di classe 1 vige un regime di silenzio assenso con un termine di 45 giorni trascorsi i quali in assenza di indicazioni contrarie gli impieghi di classe 1 possono iniziare Per gli imp
206. ressione negativa presente al l interno della camera principale previene una contaminazione massiccia del pass box L operatore nel prelevare il materiale potrebbe accidentalmente contaminare il pass box La pressione negativa dell isolatore impedisce la contaminazione MASSICCIA i dal pasa box f dl r Prass Weg PASS BOx IN ISOLATORE Figura 31 Introduzione del materiale dal pass box alla camera principale Prima di ri aprire il pass box ad esempio per introdurre un secondo oggetto opportuno eseguire un ciclo di lavaggio del 88 volume del pass box stesso che potrebbe essere contaminato Figura 32 Al lavaggio potra seguire un essiccamento a pass box chiuso solo se cio e ritenuto strettamente necessario altrimenti esso potra essere asciugato aprendo la porta esterna senza correre alcun rischio Tuttevia primo di riaprire il poss box ee bene lavarlo Lavaggio che risulta molto semplice perche NON di sono oggetti contenuti nel pass box ISOLATORE Figura 32 Lavaggio del pass box Una considerazione sull utilizzo del pass box riguarda la possibilit di utilizzarlo anche per fare uscire oggetti o contenitori che debbono poi essere riutilizzati Tale utilizzo risulterebbe pericoloso e assolutamente sconsigliabile Infatti non essendo il pass box dotato n di guanti n di finestre difficile o impossibile garantire la pulizia completa degli oggetti e delle pareti del pas
207. resso il quale ha sede la Commissione Interministeriale di Valutazione La Commissione dura in carica quattro anni e svolge i seguenti compiti e esamina le notifiche di impiego e di impianto ed esprime parere sulle stesse e esprime parere su ogni altra questione relativa agli aspetti considerati dal decreto citato e promuove ove lo ritenga necessario la richiesta di parere al Consiglio Superiore di Sanit e al Comitato Nazionale per la Biosicurezza e le Biotecnologie e le Scienze della Vita della Presidenza del Consiglio dei Ministri Tra i compiti del Ministero della Salute in materia di biotecnologie c quello di inviare alla Commissione Europea entro il 31 dicembre di ogni anno una relazione sintetica sugli impieghi confinati delle classi 3 e 4 notificati nel corso dell anno con la descrizione i fini ed i rischi connessi all impiego Ogni tre anni a partire dal 5 giugno 2003 lo stesso Ministero invia alla Commissione Europea una sintetica relazione relativa all esperienza acquisita STESURA DELLE NOTIFICHE Il Decreto Legislativo 206 01 prevede un regime di notifica e autorizzazione per gli impieghi confinati che ricadono nel suo campo di applicazione e per gli impianti ove si intende mettere in atto tali impieghi Tutte le notifiche sia di impiego che di impianto devono essere presentate al Ministero della Salute Direzione Generale della Prevenzione Sanitaria La valutazione della classe dell impiego confinato Eleme
208. resso tecnico la direttiva 67 548 CEE Questi metodi sono basati sui lavori e sulle raccomandazioni degli organismi internazionali competenti in par ticolare su quelli del OCSE Si ritiene inoltre che i rifiuti classificati come pericolosi in riferimento ai codici da H3 a H8 e ai codici H10 e H11 del me desimo Allegato Allegato III della direttiva 91 689 CEE presentino una o pi delle seguenti caratteristiche punto di infiammabilit lt 55 C e unao pi sostanze classificate come molto tossiche in concentrazione totale gt 0 1 e unao pi sostanze classificate come tossiche in concentrazione totale gt 3 e unao pi sostanze classificate come nocive in concentrazione totale gt 25 46 e unao pi sostanze corrosive classificate come R35 in concentrazione totale gt 1 e unao pi sostanze corrosive classificate come R34 in concentrazione totale gt 5 e unao pi sostanze irritanti classificate come R41 in concentrazione totale gt 10 e unao pi sostanze irritanti classificate come R36 R37 R38 in concentrazione totale gt 20 e una sostanza riconosciuta come cancerogena categorie 1 o 2 in concentrazione gt 0 1 e una sostanza riconosciuta come cancerogena categoria 3 in concentrazione gt 1 e una sostanza riconosciuta come tossica per il ciclo riproduttivo categorie 1 o 2 classificata come R60 o R61 in concentrazione gt 0 5 e una sostanza riconosciuta come tossica per il ciclo riprodutti
209. rifiuti Per poter individuare i rifiuti prodotti durante l uso confinato di MOGM occorre fare riferimento alle attivit nell ambito delle quali tale uso trova applicazione in quanto i rifiuti sono classificati primariamente in funzione della provenienza e attivit sanitarie ricerca medica e veterinaria terapia genica ecc e agricoltura e agroindustria e processi chimici organici biotecnologie in ambito farmaceutico o produzione di fitofarmaci biocidi cosmetici e operazioni di tipo ambientale trattamento di reflui e bonifiche di siti inquinati rifiuti derivanti da queste attivit sono per esplicita dichiarazione del D Lgs 152 2006 rifiuti speciali art 184 comma 3 lett a c g e h e come tali devono essere gestiti Difficilmente l impiego confinato dei MOGM potr produrre rifiuti assimilabili agli urbani in quanto lo stesso D Lgs n 152 2006 prevede che possano essere assimilati ai rifiuti urbani i rifiuti non pericolosi provenienti da locali e luoghi non adibiti ad uso civile di abitazione se rispondenti a criteri qualitativi e quantitativi che determinano i singoli comuni e che co munque non possano di norma essere assimilati ai rifiuti urbani quelli provenienti dalle aree produttive salvo i rifiuti prodotti negli uffici nelle mense negli spacci nei bar e nei locali a servizio dei lavoratori o comunque aperti al pubblico Soprattutto in ambito sanitario possono inoltre essere prodotti rifiuti contaminati da
210. rimen tazione che i ricercatori del DIPIA talvolta svolgono in collaborazione con i ricercatori di altri Enti di ricerca pubblici o privati coinvolti in simili tematiche In tale prospettiva il DIPIA ha gi portato a termine interessanti progetti di ricerca sul rilascio deliberato di OGM ed ha appena finito di realizzare il presente cd rom sull impiego confinato di MOGM che rappresenta il prodotto finale di un progetto CCM finanziato dal Ministero della Salute e cofinanziato dall ISPESL Detto cd rom attraverso l utilizzo di una tecnologia infor matica di simulazione virtuale permette di controllare ogni oggetto e parametro della scena e consente di evidenziare tutte le caratteristiche tecniche e strutturali del laboratorio le procedure di accesso e di uscita del personale e dei materiali le procedure operative le misure igieniche compatibili con la prevenzione le misure di contenimento e le strumentazioni atte ad evitare o minimizzare il rilascio di MOGM nei luoghi di lavoro Il Direttore del DIPIA ario Mariani Indice Introduzione Evoluzione della Normativa Decreto Legislativo 12 aprile 2001 n 206 Valutazione del rischio dell impiego confinato Terapie avanzate e medicinali innovativi Vettori per terapia genica Requisiti minimi di contenimento dei laboratori per impiego confinato di MOGM Rifiuti Principali attrezzature di laboratorio Flusso del personale e procedure operative Approfondimento sulle tecnologie di con
211. rio Preferibile Necessario elettrogeno Ventilazione flusso d aria verso l interno Non necessario Preferibile Necessario Necessario legata al sistema di ventilazione dell edificio Non necessario Preferibile Se necessario No dotata di sistema indipendente Non necessario Preferibile Necessario Necessario Aria emessa dal laboratorio sottoposta Non necessario Non necessario Necessario Necessario ad ultrafiltrazione HEPA Entrata con doppia porta Non necessario Non necessario Necessario Necessario Pressione negativa rispetto alla pressione Non necessario Non necessario nelle immediate vicinanze Necessario Necessario La pressione del laboratorio monitorata con Non necessario Non necessario Necessario Necessario un sistema di allarme nel caso di variazioni di pressione non accettabile Accesso al laboratorio attraverso camera di Non necessario Non necessario Se necessario Se necessario compensazione Inattivazione dei MOGM negli effluenti Non necessario Non necessario Se necessario Se necessario dei lavandini degli scarichi o delle docce se presenti o in effluenti analoghi Autoclave Sul piano Necessario Necessario Necessario Necessario Nel laboratorio Non necessario Non necessario Preferibile Necessario A doppia entrata Non necessario Non necessario Preferibile Necessario Cappa biologica Classe Il Non necessario Se necessario Necessario Necessario Classe III Non necessario Non necessario Preferibile Nece
212. risolvere E stata omessa la versione originale inglese in alcuni punti nei quali il recepimento non stato altro che una traduzione molto fedele in italiano Directive 2006 42 EC Machinery amending Directive 95 16 EC Annex Essential Health and Safety Requirements relating to the design and construction of machinery 1 1 2 Principles of safety integration a machinery must be designed and constructed so that it is fitted for its function and can be operated adjusted and maintained without putting persons at risk b in selecting the most appropriate methods the manufacturer must apply the following principles in the order given e eliminate or reduce risks as far as possible inherently safe machinery design and construction e take the necessary protective measures in relation to risks that cannot be eliminated e inform users of residual risks 1 1 6 Ergonomics Under the intended conditions of use the discomfort fatigue and physical and psychological stress faced by the operator 96 must be reduced to the minimum possible taking into account ergonomic principles Direttiva Macchine DPR 459 96 Allegato requisiti Essenziali di Sicurezza 1 1 2 Principi d integrazione della sicurezza a Per costruzione le macchine devono essere atte a funzionare ad essere regolate e a subire la manutenzione senza che tali operazioni se effettuate nelle condizioni previste dal fabbricante espongano a rischi le person
213. rizzate I DPI per la protezione del corpo possono essere di diversa tipologia in relazione alle modalit lavorative ed alle mansioni da svolgere Nel caso in cui la valutazione del rischio evidenzi che il rischio di esposizione dell operatore comporti la necessit di utilizzare altri DPI specifici gli stessi devono essere compatibili con l indumento e avere caratteristiche di protezione ade guate Le modalit di gestione dopo l uso dovrebbero essere stabilite con apposite procedure aziendali Tali procedure devono te nere conto dei livelli di contenimento da realizzare in base agli agenti biologici che rappresentano i rischi di esposizione Do vrebbero essere stabilite le modalit di conservazione eventuale decontaminazione o corretto smaltimento L utilizzatore deve rispettare le indicazioni di manutenzione stabilite dal fabbricante e protezione delle vie respiratorie In relazione alla valutazione del rischio di esposizione rispetto agli specifici agenti biologici in base a quanto disposto dal D Lgs 475 92 Direttiva 686 89 CE e dalla Direttiva 54 2000 CE un facciale filtrante DPI monouso necessita di una cer tificazione CE dall Organismo Notificato in Ill categoria 80 Flusso del materiale Negli impianti di contenimento 3 4 l ingresso del materiale pu avvenire tramite pass box La manipolazione del materiale deve essere effettuata in Modo da evitare o minimizzare i rischi connessi con il suo utilizzo Manipolaz
214. rte siano aperte contemporaneamente suona un allarme ottico acustico e accedere al laboratorio Laboratorio e Primadilavorare sotto cappa necessario indossare il secondo paio di guanti con eventuali coprimaniche che deve essere sostituito spesso ogni qualvolta si ritiene possa esserci stata una eventuale contaminazione e quando si sospende la manipolazione del materiale infetto e Al termine dell attivit lavorativa e dopo la raccolta del materiale da autoclavare si pu procedere a scartare il paio di guanti pi esterni ed eventuali coprimaniche Procedura di uscita e uscire dal laboratorio attraverso la camera di compensazione e accedere allo spogliatoio e togliere sovrascarpe e sovracamice o tuta maschera cuffia occhiali ed il secondo paio di guanti e gettarli nell ecobox e togliere il camice e lavarsi accuratamente le mani e Uscire attraversando l accesso controllato Dispositivi di protezione individuale DPI Tutto il personale operante in un laboratorio a contenimento di classe 3 deve indossare 77 e camice o tuta ad es in area produzione disposable in tyvek e abiti da lavoro tipo pigiama da chirurgo o camice e occhiali di sicurezza e guanti in lattice usa e getta e doppio paio di guanti avendo cura di coprire il polsino del camice con il primo paio di guanti in modo da non lasciare scoperto il polso e soprascarpe e cuffia e mascherina e maschera guanti e grembiule di
215. s safety and regulation valves control and protection devices Sono qui proposti vari schemi di regolazione della pressione e alcuni sistemi di filtrazione o lavaggio dell aria in uscita dagli isolatori Taluni schemi sono poco applicati in pratica e sembrano abbastanza teorici Tuttavia al cap 12 1 5 rappresentata una soluzione push through filter che sta avendo numerose applicazioni pratiche grazie alla sua semplicit e grazie al fatto che possibile smaltire il filtro esausto in completa sicurezza ISO 11933 5 Components for containment enclosure Part 5 Penetrations for electrical and fluid circuits Questa parte della norma interamente dedicata a illustrare varie soluzioni costruttive per permettere il passaggio attraverso le pareti degli isolatori da parte di cavi elettrici tubi ed alberi E molto interessante per gli addetti ai lavori AS 4273 1999 Design installation and use of pharmaceutical isolators pag 22 Ente normatore australiano Di tale norma risultano molto utili le definizioni e le precisazioni dei termini inglesi Si trattano seppur in modo generico anche gli aspetti della pulizia dell avviamento dei controlli periodici e dell addestramento La norma propone poi una classi ficazione evidenziata mediante una tabella con figure degli isolatori in base alla loro configurazione fisica rispetto all ambiente esterno Ove non esistano norme tecniche nazionali o straniere che coprano
216. s box stesso Si pensi ad esempio alle zone di appoggio degli oggetti o alle aree delle pareti del pass box che non riescono ad essere irrorate dal liquido di lavaggio a causa della presenza degli oggetti stessi Film tubolare per smaltimento Utile accessorio dell isolatore il sistema di espulsione di oggetti da smaltire attraverso l uso di film tubolare in plastica ter mosaldabile Lo smaltimento pu interessare contenitori vuoti ma contaminati che hanno gi esaurito la loro funzione oppure attrezzi usa e getta o altri accessori piccole quantit di prodotto non utilizzabile In Figura 33 vengono rappresentate le varie fasi di questa operazione e aprire dall interno la porta che divide la camera principale dal vano cilindrico annesso alla camera dell isolatore e inserire l oggetto da smaltire dopo aver controllato che il film tubolare esterno sia presente e saldato Figura 33 A e procedere alla saldatura della porzione di film tubolare in plastica di dimensioni sufficienti a contenere gli oggetti da avviare allo smaltimento e tagliare di solito con l ausilio della macchina termosaldatrice stessa la sacca contenente all interno gli oggetti da smaltire Figura 33 B 89 Doppio 0 Ring Termosaldatura SMAIL TIMFNTA Figura 33 A e B Fasi relative allo smaltimento con film tubolare Figura 34 Foto di un sistema reale sistemi di espulsione sono dotati di una successione di scanalature e ane
217. s for glove bag ports enclosure rings and interchangeable units 54 pagg Norma ricca di disegni dettagliati sui sistemi di fissaggio dei guanti con sistemi pi o meno complessi Sono illustrati anche sistemi di chiusura ermetica a tappo ISO 11933 2 Components for containment enclosure Part 2 Gloves welded bags gaiters for remote handling tongs 99 and for manipulators 58 pagg Norma ricca di disegni dettagliati sui sistemi di fissaggio e sostituzione in sicurezza dei guanti con sistemi piu o meno com plessi a due o tre cave Sono rappresentati anche disegni dei sistemi a sacco saldabile per l espulsione di oggetti e materiali Sono poi illustrati sistemi di manipolazione di oggetti mediante pinze tipici del settore nucleare ISO 11933 3 Components for containment enclosure Part 3 Transfer systems such as plain door airlock chambers double door transfer systems leaktight connections for waste drums 43 pagg Sono illustrati in questa norma dettagli costruttivi di porte guarnizioni e agganci per contenitori rimuovibili dall isolatore Certamente il capitolo pi interessante il n 7 Double door transfer systems ove si rappresenta il principio di funzionamento della porta anche detta Rapid Transfer Port RTP che ha trovato un successo senza pari nelle applicazioni degli isolatori ISO 11933 4 Components for containment enclosure Part 4 ventilation and gas cleaning systems such as filters trap
218. sed system par 4 whenever a carcinogen is used the employer shall apply all the following measures c design of work processes and engineering control measures so as to avoid or minimize the release of carcinogens into the place of work g collective protection measures and or where exposure cannot be avoided by other means individual protection measures 5 Riferimenti legislativi Agenti Chimici Council Directive 98 24 EC 7 April 1998 Protection of the health and safety of workers from the risks related to chemical agents at work Article 5 general principles for prevention of risks associated with hazardous chemical agents par 2 Risks shall be eliminated or reduced to a minimum by the design and organisation of systems of work at the workplace reducing to a minimum the duration and intensity of exposure Suitable working procedure including arrangements for the safe handling 81 08 TITOLO IX capo I agenti chimici Art 225 Misure specifiche di protezione e di prevenzione 1 Il datore di lavoro garantisce che il rischio sia ridotto mediante l applicazione delle seguenti misure da adottarsi nel seguente ordine di priorit a progettazione di appropriati processi lavorativi e controlli tecnici nonch uso di attrezzature e materiali adeguati b appropriate misure organizzative e di protezione collettive alla fonte del rischio c misure di protezione individuali compresi i dispositivi di protezione individual
219. seguenti medicinali ad uso umano medicinale di terapia genetica medicinale di terapia cellulare somatica prodotto di ingegneria tissutale Prodotto di ingegneria tissutale prodotto che contiene o consiste di cellule o tessuti prodotti dall ingegneria cellulare o tessutale e che presentato come avente propriet atte a rigenerare riparare o sostituire un tessuto umano oppure che viene utilizzato o somministrato ad esseri umani a tal fine Questo tipo di prodotto pu contenere cellule o tessuti d origine umana o animale o entrambe Il prodotto pu anche contenere prodotti cellulari biomolecole biomateriali sostanze chimiche supporti o matrici Medicinale per terapie avanzate combinate medicinale per terapie avanzate che contiene come parte integrante del prodotto uno o pi dispositivi medici ai sensi della Direttiva 93 42 CEE o uno o pi dispositivi medici impiantabili attivi ai sensi della Direttiva 90 385 CEE La sua parte cellulare o tessutale deve contenere cellule o tessuti vitali o la sua parte cellulare o tes sutale che contiene cellule o tessuti non vitali deve essere capace di agire sul corpo umano con un azione che possa essere considerata primaria rispetto a quella dei dispositivi in questione MEDICINALI SPERIMENTALI PER TERAPIA GENICA medicinali sperimentali per terapia genica cos come definiti dall Organizzazione Mondiale della Sanit OMS sono quelli usati in vivo per modificare geneticamente cellule somati
220. seminazione del microrganismo modificato negli ecosistemi identificati e l anticipazione delle conseguenze dell interazione tra il microrganismo modificato e gli organismi o i microrganismi che potrebbero entrare in contatto in caso di immissione accidentale nell ambiente e gli effetti noti o prevedibili sulle piante e sugli animali quali patogenicit tossicit allergenicit trasmissione di agenti patogeni modificazione nella resistenza agli antibiotici alterazione del tropismo o della specificit per organismi ospiti colonizzazione e il coinvolgimento noto o prevedibile in processi biogeochimici B Caratteristiche dell impiego confinato L analisi di valutazione del rischio in una prima fase si basa sull identificazione delle potenziali caratteristiche nocive del MOGM esaminando i rischi associati al ricevente all organismo donatore al vettore ed all eventuale inserto a questo pro cesso deve seguire una prima classificazione dell impiego confinato Classificazione iniziale del MOGM paragrafi da 3 a 5 dell Allegato IIl specificano che la prima fase del processo di valutazione del rischio di un MOGM l iden tificazione delle sue potenziali caratteristiche nocive e una prima classificazione mediante l identificazione dei rischi associati al ricevente all organismo donatore se di pertinenza al vettore e all eventuale inserto A tale scopo pu essere utile tenere conto oltre che delle caratteristiche gener
221. sere espressa come una sintesi di tutti i rischi che sono connessi alla specifica applicazione del protocollo di terapia genica 34 CAPITOLO SESTO Requisiti Minimi di contenimento dei laboratori per impiego confinato di MOGM LIVELLI DI CONTENIMENTO SECONDO LA DIRETTIVA 2009 41 CE Livello 1 laboratorio di base indicato quando si compiono operazioni che presentano rischi nulli o trascurabili ovvero ope razioni per le quali un livello 1 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente In genere destinato ad insegnamento di base o di ricerca Nel laboratorio devono essere applicate le misure minime di contenimento e di protezione La stanza dove si svolgono le operazioni deve essere separata dall esterno tramite una porta che deve rimanere chiusa durante le attivit di lavoro In genere non necessaria la presenza di particolari attrezzature Livello 2 laboratorio di base indicato quando si compiono operazioni a basso rischio ovvero operazioni per le quali un livello 2 di contenimento adeguato a proteggere la salute umana e l ambiente In genere destinato a diagnostica di base o ricerca Nel laboratorio devono essere applicate le misure minime di contenimento e di protezione deve essere esposto un segnale di rischio biologico sulla porta del laboratorio e gli operatori devono essere forniti di dispositivi di protezione in dividuale Prevede la presenza di una cappa di sicurezza biologica di classe o Il per
222. sere scaricata all esterno in modo tale da evitare l interferenza con l equilibrio dell aria circolante nella cappa o con il sistema di ventilazione dell edificio La quantit di aria espulsa dall impianto viene compensata dall aspirazione di un eguale quantita di aria fresca filtrata op portunamente condizionata E necessario che l area di lavoro con il maggiore rischio di contaminazione ambientale sia mantenuta in una condizione di depressione in modo da assicurare che nessun agente biologico potenzialmente pericoloso possa fuoriuscire Il gradiente di pressione viene ottenuto mantenendo la pressione all interno del laboratorio ad un valore inferiore ad es 25Pa della pressione della camera di compensazione ad es 10Pa Secondo il gradiente di pressione creato si verifica uno spostamento del flusso d aria dalla zona a pi alta pressione verso quella a pi bassa Ci consente al flusso d aria di avere un andamento unidirezionale verso l interno del laboratorio evitando l uscita di aria proveniente dalle aree sottoposte a rischio biologico verso le aree circostanti L impianto di ventilazione inoltre in grado di garantire le condizioni idonee termo igrometriche temperatura e umidit relativa in estate ed inverno Il trattamento dell aria immessa avviene nel gruppo condizionatore ed effettuato in modo tale che essa sia caratterizzata all uscita dell unit da temperatura ed umidit costanti Il gru
223. seriti nella parte C Per facilitare l applicazione di tali criteri la Commissione deve poter adottare note esplicative dettagliate secondo la procedura di cui all art 21 Allegato Il parte C che soddisfino i criteri specificati nell Allegato Il parte B Sono inoltre esclusi i MOGM che siano stati immessi sul mercato secondo la parte C della Direttiva 90 220 CE modificata dalla Direttiva 2001 18 CE o secondo normative a questa equivalenti sotto il profilo della valutazione di impatto ambientale prodotti medicinali contenenti MOGM approvati dall EMEA con procedura centralizzata COMMISSIONE INTERMINISTERIALE DI VALUTAZIONE Ai fini del Decreto Legislativo 206 2001 il Ministero della Salute coordina le attivit amministrative e tecnico scientifiche relative all impiego confinato dei microrganismi geneticamente modificati in collaborazione con i Ministeri dell Ambiente e della Tutela del Territorio e del Mare delle Politiche agricole e forestali dell Interno delle attivit Produttive dell Istruzione dell Universit e della Ricerca Presso il Ministero della Salute secondo quanto previsto dall art 14 dello stesso decreto istituita una Com missione interministeriale di valutazione composta dai rappresentanti di tutte le istituzioni coinvolte nella materia Presidente Direttore generale del Dipartimento della prevenzione sanitaria del Ministero della Salute o un suo sostituto 7 rappresentanti dei Ministeri coinvolti un
224. so Inattivazione La normativa italiana non fornisce indicazioni sulla definizione di inattivazione Si riportano nella Tabella 20 le definizioni proposte dal Regolamento sulla gestione dei rifiuti sanitari DPR 15 luglio 2003 pur se non applicabile ai MOGM confrontate con quelle riportate nelle norme UNI EN 12461 2000 e UNI EN 12470 2002 dalla norma UNI 10834 1 e da altri riferimenti internazionali autorevoli quali le linee guida dell US National Insitutes of Health 53 NIH guidelines for research involving recombinant DNA molecole ultima revisione aprile 2002 Appendice K e la 5 edizione di Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL Appendice B dell US Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention con il National Institutes of Health Per quanto riguarda le procedure di decontaminazione lavaggio confezionamento e sterilizzazione si puo fare riferimento alle Linee Guida sull attivit di sterilizzazione quale protezione collettiva da agenti biologici per operatore nelle strutture sanitarie pubblicate sul sito ISPESL in area Documentazione indirizzo http www ispesl it linee_guida fattore_di_ri schio LGAgeBiolSter asp avendo cura di verificare le compatibilit delle indicazioni ivi riportate con la normativa specifica sui rifiuti Ad esempio nel caso di laboratori stabulari serre e camere di crescita e di livelli di contenimento fino a 3 i
225. sono le soluzioni disinfettanti mantenute in sistemi di drenaggio L intensit e la natura dell esposizione dell ambiente e l eventuale presenza di bioti che possono subire effetti negativi se esposti al MOGM in questione sono elementi ambientali importanti Ambiente potenzialmente esposto Nella valutazione del rischio in conformit a quanto definito dalla normativa di riferimento necessario considerare anche le caratteristiche ambientali delle aree potenzialmente esposte e l incidenza che queste possono avere sul prodursi di even tuali effetti dannosi In genere l ambiente potenzialmente esposto viene identificato con il luogo di lavoro e con l area immediatamente circostante Tuttavia sulla base delle caratteristiche specifiche dell impiego confinato e dell impianto nel quale avvengono le attivit lavorative potrebbe essere opportuno considerare un ambiente pi ampio La portata dell esposizione dell ambiente pu dipendere dalla natura e dalla portata dell attivit svolta ma occorre tenere in considerazione anche tutte le possibili modalit di trasmissione nell ambiente circostante In questo caso potrebbe trattarsi di modalit fisiche tubature di scarico locali corsi d acqua smaltimento dei rifiuti movimenti delle correnti d aria e vettori biologici Movimento di animali e insetti infettati Presenza di specie suscettibili La possibilit che si verifichi realmente un danno dipende anche dall eventuale prese
226. ssario Tabella 13 Riassunto dei requisiti minimi di contenimento per la progettazione di laboratori per impiego confinato di MOGM 38 Nella Tabella 14 sono riportati i documenti prodotti dall Unione Europea e dagli USA inerenti i requisiti minimi di contenimento per manipolazione di microrganismi e MOGM ai fini della tutela della salute dell uomo e dell ambiente UNI EN 12128 UNI EN 13312 5 UNI EN 1620 Tabella 14 Biotecnologie Laboratori di ricerca sviluppo e analisi Livelli di contenimento di laboratori microbiologici aree a rischio situazioni e requisiti fisici di sicurezza Biotecnologie Criteri di prestazione per le postazioni di sicurezza microbiologica Biotecnologie Criteri di prestazione per gli elementi filtranti e per i filtri Biotecnologie Criteri di prestazione per i sistemi di trattamento degli effluenti gassosi Biotecnologie Criteri di prestazione per tubazioni e strumentazione Criteri generali di prestazione Biotecnologie Criteri di prestazione per tubazioni e strumentazione Giunti Biotecnologie Criteri di prestazione per tubazioni e strumentazione Tubi e tubazioni Biotecnologie Criteri di prestazione per tubazioni e strumentazione Valvole EN Large scale process and production in biotechnology Design of plant buildings according to the degree of hazard 1996 NIH Guidelines for Research Involving Recombinant DNA Molecules 2002 APPENDIX G PHYSICAL CONTAIN
227. stiche 2 Tabella 22 Legenda VLLW Very Low Level Waste LILW SL Low and Intermediate Level Waste Short Lived LILW LL Low and Intermediate Level Waste Long Lived HLW High Level Waste Occorre inoltre precisare che anche quando i rifiuti risultino al di sotto della soglia di radioattivit come definita nel paragrafo sulla classificazione per cui possono essere smaltiti come rifiuti speciali comunque prevista una valutazione della espo sizione e della dose efficace individuale e collettiva prima dello smaltimento definitivo nel rispetto dei seguenti criteri e doseefficace individuale lt 10 uSv anno e dose efficace collettiva lt 1 uSv x persona anno Se sono presenti radionuclidi con tempi di dimezzamento diversi sarebbe opportuno raccoglierli in modo differenziato e nel caso in cui ci non fosse possibile indicare sul contenitore il radionuclide con tempo di decadimento maggiore contenitori devono garantire il contenimento preferibilmente doppio al fine di evitare contaminazioni esterne livelli di irraggiamento esterno e di contaminazione superficiale dei contenitori devono essere conformi alla classificazione dei lo cali e dei lavoratori effettuata dall esperto qualificato ai sensi del d lgs n 230 95 e s m i 59 OBBLIGHI AMMINISTRATIVI Dato il notevole coacervo di disposizioni normative che regolano le attivit di gestione dei rifiuti all interno ed all esterno dei luoghi di produzione si
228. stituisce un documento che deve essere conservato presso l impianto L intero documento nei casi di notifiche di impieghi di classe 3 o 4 od una sua sintesi nel caso di notifiche di impieghi di classe 2 forma parte integrante ed essenziale della notifica di impiego Nella valutazione si deve tener conto ad esempio e diun possibile recupero della competenza alla replicazione e delle possibili conseguenze di un evento incidentale che porti ad infezioni e integrazione in cellule non bersaglio di un vettore virale difettivo per la replicazione ma capace di promuovere costitutivamente la sintesi di molecole biologicamente attive e Si deve valutare il rischio connesso a MOGM contenenti i geni che controllano la proliferazione cellulare l immor talizzazione l apoptosi o geni che codificano per fattori ad alto impatto biologico come fattori di crescita citochine e neurotrasmettitori oppure sequenze sconosciute Qualora si utilizzino agenti patogeni per l uomo i criteri di valutazione da adottare si fondano sulle caratteristiche di pato genicita del vettore virale di partenza desunte dall elenco degli agenti patogeni descritto nel D Lgs 9 Aprile 2008 n 81 La notifica di impianto In ordine di tempo la prima notifica da presentare sara quella relativa all impianto per la quale potr essere utilizzato lap posito modulo reperibile sul sito web del Ministero della Salute Mod notifica impianto MOGM La notifica dovr esse
229. stro CAPPE DI SICUREZZA BIOLOGICA Le cappe di sicurezza biologica sono un valido sistema di prevenzione primaria in quanto impediscono la diffusione di ma teriale biologico potenzialmente pericoloso Tali cappe al momento dell installazione devono essere conformi alla norma UNI EN 12469 marcatura CE e alla dichiarazione di conformit La EN 12469 organizzata in 8 capitoli e alcuni allegati Molti di questi allegati sono considerati normativi altri informativi requisiti minimi di performance sono riportati nella Tabella 24 delle EN 12469 e sono con siderati normativi mentre i valori di velocit dell aria riportati nella tabella H1 della EN 12469 sono considerati informativi Le cappe sono classificate in tre categorie Classe 1 Classe II Classe III a seconda del livello di protezione che garantiscono all operatore all ambiente circostante e al prodotto Utilizzo Tipo di protezione Cappa biologica di sicurezza Impieghi confinati a basso Protezione Classe rischio operatore e 0 aria ricircolata 100 aria espulsa ambiente Impieghi confinati a basso Protezione Classe Il A1 e A2 rischio o moderato piccole operatore ambiente 70 aria ricircolata 30 aria espulsa quantit di agenti chimici e prodotto tossici radionuclidi in tracce Classe Il B1 30 aria ricircolata 70 aria espulsa Classe Il B2 0 aria ricircolata 100 aria espulsa Quantit maggiori di agenti Protezione chimi
230. sufficiente per la decontami nazione Inoltre tali sacchetti devono essere messi in contenitori rigidi per evitare o contenere le fuoriuscite un corretto caricamento nella autoclave formattazione importante caricare correttamente l autoclave per consentire al vapore di circolare liberamente in tutta la camera e non sovraccaricare la camera con sacchetti che siano troppo grandi per la capacit dell autoclave v Oggetti puliti e contaminati possono essere sterilizzati nella stessa autoclave ma non durante lo stesso ciclo perch necessitano di calore a diversi tempi di esposizione v Non mettere mai oggetti taglienti in un sacchetto di rischio biologico Tutti i taglienti devono essere smaltiti in contenitori rigidi deputati che saranno inceneriti un corretto funzionamento autoclave Annualmente necessario effettuare un test di verifica per determinare il tempo la pressione e la temperatura di sicurezza adeguate per decontaminare i rifiuti attraverso l uso di un indicatore biologico spore di Bacillus stea rothermophilus inattivato a 121 C Perla prova autoclavare fiale di B stearothermophilus insieme con un carico di rifiuti AI completamento del ciclo incubare le fiale per 48 ore e gli eventuali segni di crescita osservati indicano che l autoclave non sterilizza correttamente Se ci si verifica l autoclave deve essere ritestata per un ciclo di tempo che consenta una avvenuta decontaminazione Possibili cause di f
231. t e o allergenicita dei disinfettanti e sul loro impatto ambientale Aspetti positivi biodegradabili e scarsamente volatili fenoli sintetici basso costo fortemente attivi contro l epatite virale deodoranti Aspetti negativi maleolenti irritanti tossici inattivabili da materiale organico altamente instabili corrosivi per i metalli inattivabili da materiale organico irritanti e lesivi rapida evaporazione riduzione tempi contatto incapacit di penetrare il materiale organico residuo cancerogena sconsigliata dal Ministero della Sanit con Circolare n 57 83 tossica irritanti si inattivano a T gt 43 C fonti Norma UNI EN 12461 2000 US Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Pre vention amp National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL 5th edition Ap pendix B AMA L D Amico M Mariani E Bemporad ANMDO AA VV I rifiuti sanitari Normativa e modalit di gestione Febbraio 1997 56 La resistenza alla decontaminazione di alcuni organismi saggiati illustrata nel diagramma a piramide di Figura 13 A 4 SPORE BATTEI ti subt Si ridium sporot Efficacia del germicida O DI PICCOLA TAGLIA Poliovirus Coxackievirus Rinovirus BATTERI VEGETATIVI ROTTI EL Det LU Salmonella cholereesuis Enterococci VIRUS LIPI
232. tate le seguenti definizioni sostanza pericolosa qualsiasi sostanza che o sar classificata come pericolosa ai sensi della direttiva 67 548 CE e suc cessive modifiche metallo pesante qualunque composto di antimonio arsenico cadmio cromo VI rame piombo mercurio nichel selenio tellurio tallio e stagno anche quando tali metalli appaiono in forme metalliche classificate come pericolose Per le caratteristiche di pericolo H1 H2 H9 H12 H13 e H14 mancano i criteri di riferimento sia a livello comunitario che a livello nazionale e si ritiene che la classificazione di pericolosit possa comunque essere correttamente effettuata applicando i criteri di cui sopra criteri di individuazione delle sostanze pericolose presenti nei rifiuti sono quelli definiti nella direttiva 88 379 CEE preparati pericolosi e successive modifiche La direttiva 91 689 CEE relativa ai rifiuti pericolosi prevedeva infatti ai fini dell attribuzione di alcune caratteristiche di pericolo un assimilazione dei rifiuti pericolosi ai preparati pericolosi In soli due casi la decisione che ha introdotto il nuovo Elenco Europeo dei Rifiuti non si allinea con la direttiva 88 379 CEE come modificata dalla direttiva 99 45 CE e in particolare e la caratteristica sensibilizzante prevista dalla direttiva sui preparati pericolosi non riconducibile a nessuna delle caratteristiche di pericolo individuate nella direttiva 91 689 CEE e la caratter
233. te La protezione dell ambiente garantita da un filtro HEPA nel sistema di scarico Poich l aria che penetra sul piano di lavoro attraverso l apertura frontale non sterile non si ritiene che questo tipo di cappa sia consistentemente affidabile per la protezione del prodotto 64 L apertura frontale permette alle braccia dell operatore di raggiungere il piano di lavoro all interno della cappa mentre egli segue le operazioni attraverso il vetro Il vetro pu anche essere completamente alzato per permettere la pulizia dell area di lavoro o per altri scopi L aria viene espulsa dalla cappa attraverso un filtro HEPA a all interno del laboratorio e poi all esterno attraverso gli estrattori dell edificio b all esterno attraverso gli estrattori dell edificio c direttamente all esterno Il filtro HEPA pu essere posizionato nel plenum della cappa o sugli estrattori dell edificio Alcune cappe di sicurezza biologica di classe sono dotate di un aspiratore integrato mentre altre confidano sul sistema di aspirazione dell edificio Caratteristiche e Allarmi di sicurezza per ventilazione insufficiente e Velocit frontale d aspirazione di almeno 0 4m s e Contatore delle ore di utilizzo per controllo efficienza dei filtri e Ripiano con bordi rialzati per impedire eventuali travasi all esterno Principale utilizzo Confinamento di piccole strumentazioni centrifughe piccoli fermentatori ed effettuazione di ope
234. tenimento Normativa nel campo degli isolatori 13 19 24 35 40 62 TI 84 93 INtroduzione Le biotecnologie secondo l Organizzazione per la Cooperazione e lo Sviluppo Economico OCSE sono definite come l ap plicazione della scienza e della tecnologia agli organismi viventi o a parte di essi per ottenere beni e servizi al fine di migliorare la qualit della vita dell uomo Esse costituiscono l insieme delle tecnologie che utilizzano organismi viventi batteri lieviti cellule vegetali cellule animali di organismi semplici o complessi o i loro derivati organelli ed enzimi per ottenere beni e servizi e produzione di beni ottenuti mediante l impiego di nuovi organismi miglioramento genetico di microrganismi piante animali e o dei loro prodotti es enzimi ormoni che derivano in larga misura dall applicazione mirata di tecniche di modificazione genetica e fornitura di nuovi servizi ad esempio diagnostica terapia prevenzione trapianto ottenuti in seguito alla migliore comprensione della fisiologia della genetica e della biologia molecolare Il loro utilizzo trova applicazione in diversi settori come illustrato nella Figura 1 AGRONOMI BIOLOGI GENETISTI MICROBIOLOGI FARMACOLOGI NUOVI ORGANISMI PRODUTTORI AGRICOLTURA INDUSTRIA DI TRASFORMAZIONE INDUSTRIA FARMACEUTICA INDUSTRIA CHIMICA FARMACI E DIAGNOSTICI ALIMENTI E MANGIMI DISTRIBUTORI E ALLEVATORI
235. tenuta Vengono fornite indicazioni precise sulle posizioni sui metodi di campionamento ana lisi e sull interpretazione dei risultati Il metodo ben descritto con i relativi riferimenti normativi con figure grafici e ta belle che guidano l operatore attraverso l esecuzione del test Attualmente non esistono altri riferimenti cos precisi sulle metodologie di controllo dei risultati del contenimento di apparecchiature AFI Associazione Farmaceutici Industria Buone Pratiche di Fabbricazione 100 Linee Guida AFI Vol III Cap 3 Determinazione dei valori di OEL Occupational Exposure Level per i principi attivi farmaceutici 2006 In questa autorevole linea guida tutto il terzo capitolo da pag 99 a pag 207 e dedicato a fornire indicazioni tossicologi che su ben 1456 diverse molecole che costituiscono Principi Attivi Farmaceutici API dall acronimo inglese Active Phar maceutical Ingredient N Hirst M Brocklebank M Ryder Containment systems a design guide 199 pagg Ed IChemE Questo libro sull argomento sicuramente uno dei pi completi sulla scelta sulla progettazione e sull utilizzo degli isola tori Scritto da esperti del settore fornisce una panoramica completa dell utilizzo degli isolatori negli impianti di produ zione di principi attivi farmaceutici Vi sono numerose figure schemi e riferimenti normativi e bibliografici Viene trattato ampiamente anche il difficile tema dell accoppiamento tra
236. ti l esposizione e adotta misure igieniche per prevenire e ridurre al minimo la propagazione accidentale di un agente biologico fuori dal luogo di lavoro m concorda procedure per la manipolazione ed il trasporto in condizioni di sicurezza di agenti biologici all interno del luogo di lavoro 7 Riferimenti legislativi Macchine Directive 2006 42 EC Machinery amending Directive 95 16 EC Art 7 Presumption of Conformity Machinery manufactured in conformity with a harmonized standard the references to which have been published in the Official Journal of the European Union shall be presumed to comply with the essential Health and Safety requirements covered by such a harmonized standard Si riporta qui sotto il suo quasi testuale recepimento Direttiva Macchine DPR 459 96 Art 2 Conformit ai requisiti essenziali di sicurezza comma 1 Possono essere immessi sul mercato o messi in servizio le macchine ed i componenti di sicurezza con formi alle disposizioni del presente regolamento ed ai requisiti essenziali di cui all Allegato RES comma 3 Si presumono rispondenti ai requisiti essenziali di cui al comma 1 le macchine ed i componenti di si curezza costruiti in conformit alle norme armonizzate Di seguito si citano alcuni punti dell Allegato Requisiti Essenziali di Sicurezza che occorre comunque soddisfare qualora non si trovino norme armonizzate strettamente pertinenti alla situazione tecnica che si deve
237. tilizzatore pu anche consultare schemi di classificazione che si riferiscono ad agenti patogeni per piante o animali Comitato Nazionale per la Biosicurezza e le Biotecnologie Classificazione degli agenti patogeni per gli animali o vegetali Presidenza del Consiglio dei Ministri Tali normative forniranno solo un indicazione provvisoria della classe di rischio dell impiego confinato e delle relative misure di contenimento 2 AI fine di selezionare le misure di contenimento si devono tener presenti le caratteristiche dell ambiente potenzialmente esposto ai MOGM l entit dell impiego o operazioni particolari 3 Sulla base degli elementi al punto 2 il livello di rischio del MOGM associato all impiego confinato pu essere ridotto o incrementato 4 Tale valutazione eseguita in conformit alle indicazioni precedenti deve consentire l assegnazione dell impiego confinato ad una delle 4 classi chiaro che un impiego di una determinata classe potr essere eseguito solo in un impianto che realizzi le corrispondenti misure di contenimento Sar cura dell Autorit Competente verificare la corrispondenza tra classe di impiego e livello di contenimento realizzato presso l impianto proposto per la sua esecuzione avendo anzitutto verificato la correttezza della classe proposta dal notificante sulla base della propria valutazione Tale valutazione e la conseguente scelta della classe da assegnare all impiego va argomentata per iscritto e co
238. tinaia di anni per raggiungere concentrazioni di radioattivit dell ordine di alcune centinaia di Bg g nonch quei rifiuti 58 contenenti radionuclidi a vita molto lunga purche in concentrazioni di tale ordine Sono previste 2 sottocategorie e rifiuti solidi la cui attivit al di sotto dei limiti stabiliti che possono essere smaltiti senza ulteriori trattamenti e rifiuti la cui attivit superiore ai limiti stabiliti e che devono essere condizionati al fine di raggiungere determinati requisiti meccanici chimici e fisici per poter essere smaltiti sulla terraferma in questa categoria rientrano in gran parte i rifiuti provenienti da particolari cicli di produzione degli impianti nucleari e so prattutto dalle centrali elettronucleari di potenza nonch da alcuni particolari impieghi medici industriali e di ricerca scientifica Vi rientrano inoltre anche alcune parti e componenti di impianto derivanti dalle operazioni di decommissioning degli impianti nucleari Terza categoria vi appartengono tutti i rifiuti che non sono riconducibili alle due categorie precedenti In particolare i rifiuti radioattivi di detta categoria richiedono tempi di decadimento dell ordine di migliaia di anni ed oltre ed oltre per raggiungere concentrazioni di radioattivit dell ordine di alcune centinaia di Bq g in tale categoria rientrano in particolare e irifiuti liquidi ad elevata attivit specifica derivanti dal primo ciclo di estrazione degli
239. tituzionali preposti a fornire assistenza ai datori di lavoro TITOLO Disposizioni generali TITOLO Il Luoghi di lavoro TITOLO III Attrezzature e DPI TITOLO IV Cantieri temporanei o mobili TITOLO V Segnaletica di sicurezza TITOLO VI Mov manuale dei carichi TITOLO VII Attrezzature con videoterminali TITOLO VIII Agenti fisici TITOLO IX Sostanze pericolose TITOLO X Esposizione ad agenti biologici TITOLO XI Protezione da atmosfere esplosive TITOLO XII Disposizioni penali e procedura TITOLO XII Disposizioni transitorie Tabella 4 11 e a individuare soluzioni tecniche organizzative formative e di controllo Di fatto il provvedimento potenzia il sistema di vigilanza il ruolo dei rappresentanti dei lavoratori cui assicura progetti formativi e corsi qualificanti Istituisce il SINP sistema informativo nazionale per la prevenzione a esaudire l esigenza di un informazione centralizzata ufficiale e costantemente aggiornata sia per il datore di lavoro che per il lavoratore Il Titolo X del decreto Figura 4 diviso in quattro Capi regola tutte le attivit nelle quali vi rischio di esposizione ad agenti biologici Il Capo primo dedicato al complesso di definizioni e classificazioni in quattro classi di rischio degli agenti biologici alle procedure di autorizzazione e comunicazione agli organi di vigilanza che il datore di lavoro che utilizzi tali agenti deve os servare Il Capo secondo defin
240. trasferire geni Sono esclusi dal campo di applicazione i microorganismi modificati con tecniche di mutagenesi tradizionale con la fusione cellulare procariotica ed eucariotica mediante processi fisiologici noti e i MOGM ottenuti tramite autoclonazione self cloning purch non patogeni per uomo animali o piante Allegato Il parte A Criteri di esclusione A livello comunitario la Decisione del Consiglio dell 8 marzo 2001 che integra la Direttiva 90 219 CEE relativamente ai criteri per stabilire la sicurezza per la salute umana e l ambiente di alcuni tipi di microrganismi geneticamente mo dificati prevede una procedura per giungere alla compilazione di un elenco di MOGM che soddisfacendo restrittivi criteri di sicurezza per la salute umana e per l ambiente vengono esclusi dal campo di applicazione della direttiva 98 81 CE Tali criteri vengono enunciati nell Allegato II parte B alla Decisione del Consiglio dell 8 marzo 2001 ALLEGATO II PARTE B Criteri per stabilire la sicurezza dei MOGM per la salute umana e l ambiente devono essere integrati da note esplicative Nel presente Allegato sono descritti in termini generali i criteri che consentono di stabilire la sicurezza di determinati tipi di MOGM per la salute umana e l ambiente e la loro idoneit ad essere inseriti nella parte C dell Allegato II Esso sar integrato da note esplicative che forniranno una guida per facilitare l applicazione di tali criteri che saranno stabi
241. ttivit microbica tipo di attivit carica microbica specie microbica e fase del ciclo vitale variazione della resistenza microbica concentrazione d uso tempo di azione temperatura e pH caratteristica del solvente accessibilit dei batteri inattivazione del disinfettante 4 la quantit di sostanza organica presente ad es terra feci e sangue 5 il tipo e le condizioni di strumenti dispositivi e materiali da disinfettare 2 popolazione microbica 3 condizioni di impiego La disinfezione una procedura che riduce il livello di contaminazione microbica in base al livello di attivit del disinfettante utilizzato Per definizione la disinfezione chimica ed in particolare la disinfezione di alto livello differisce dalla sterilizzazione chimica per la sua assenza di potere sporicida Anche se alcuni disinfettanti a concentrazioni elevate e dopo diverse ore di esposizione possono ridurre il numero delle spore Generalmente si distinguono tre livelli di disinfezione La disinfezione di livello basso utilizza disinfettanti in gradi di eliminare la maggior parte dei batteri alcuni funghi e virus ma non i microrganismi resistenti come il Mycobacterium tuberculosis e le spore Con la disinfezione di livello intermedio sono inattivati tutti i batteri in forma vegetativa compreso M tuberculosis la maggior parte dei virus e dei funghi ma non necessariamente le spore Nella disinfezione di elevato livello si ott
242. uddetta direttiva sono contenute informazioni sulle tecniche da considerare idonee all otte nimento di un microorganismo geneticamente modificato e tecniche di ricombinazione di acido nucleico che comportano la formazione di nuove combinazioni di materiale genetico mediante inserimento di molecole di acido nucleico prodotte con qualsiasi mezzo diverso da un organismo in un virus in un plasmide batterico o in altro sistema vettore e il loro inserimento in un organismo ospite nel quale non si presentano in natura ma nel quale sono in grado di moltiplicarsi in maniera continuativa e tecniche che ricorrono all introduzione diretta in un microrganismo di materiale ereditabile preparato al di fuori dello stesso comprese la microinoculazione la macroinoculazione e la microincapsulazione e tecniche di fusione cellulare o di ibridazione che producono cellule vive con nuove combinazioni di materiale genetico ereditabile mediante la fusione di due o pi cellule con metodi non presenti in natura Nella seconda parte dell Allegato parte B vengono indicate invece le tecniche non considerate come risultato di modifi cazioni genetiche e fecondazione in vitro e processi naturali quali trasduzione trasformazione coniugazione e induzione della poliploidia Un MOGM quindi costituito da un organismo ospite nel quale l informazione genica viene inserita un organismo donatore dal quale viene ottenuta l informazione da un vettore che trasf
243. ui le altre caratteristiche di pericolo hanno la precedenza Sostanze di Classe 1 esplosive Sostanze di Classe 2 gas Liquidi esplosivi desensibilizzati di Classe 3 infiammabili Sostanze auto reattive e solidi esplosivi desensibilizzati di Classe 4 1 Sostanze piroforiche di classe 4 2 a rischio di combustione spontanea Sostanze di Classe 5 2 perossidi organici Sostanze di Classe 6 1 tossiche o 3 infiammabili che sulla base della loro tossicit per inalazione devono essere classificate nel Gruppo d Imballaggio 1 alto rischio Sostanze che soddisfano i criteri di classificazione della Classe 8 e presentano una tossicit per inalazione di polveri e nebbie LCs nell intervallo del Gruppo d Imballaggio 1 ed una tos sicit per ingestione orale e contatto dermico soltanto nell intervallo del Gruppo d Imballaggio 3 basso rischio o inferiore devono essere collocate in Classe 8 9 Sostanze infettanti di Classe 6 2 Siria Oe a Per quanto riguarda invece la Classe 9 la tabella di precedenza dei rischi non la pone mai come prioritaria per cui vanno seguite le indicazioni relative ad imballaggio e trasporto relative agli altri rischi Quanto gia indicato nel testo relativamente all imballaggio risulta in accordo con le disposizioni dell ADR 61 CAPITOLO OTIAVO Principali attrezzature di laboratorio Le attrezzature dei laboratori devono avere l adeguata certificazione CE e possedere apposito manuale di si
244. uti devono av venire in una struttura in depressione fisicamente collegata a tenuta alla sterilizzatrice Il ciclo di sterilizzazione deve essere automatico e prevedere un sistema di controllo in continuo della varabile di processo definita come grandezza fisica o combinazione di grandezze fisiche da controllare durante il ciclo ai fini del raggiungimento della sterilit ed essere in grado di segnalare automaticamente eventuali deviazioni di quest ultima oltre i limiti stabiliti Le condizioni stabilite devono essere raggiunte nel punto critico ed uniformemente nella camera e nel carico mantenute per il tempo prefissato e riproducibili Eventuali effluenti devono essere trattati Prima dell esercizio regolare il processo di sterilizzazione deve essere convalidato dal punto di vista fisico e biologico per dimostrare il raggiungimento delle condizioni nel punto critico ed il loro mantenimento entro i limiti prefissati per il tempo stabilito e un adeguato margine di sicurezza e di riproducibilit Vengono quindi indicati i criteri per stabilire le condizioni di sterilizzazione e le documentazioni e registrazioni da effettuare Inoltre prevista l approvazione del verbale di convalida da parte di personale estraneo al processo Per la sterilizzatrice la norma fornisce inoltre e requisiti costruttivi in relazione al materiale al recipiente a pressione alla temperatura delle superfici esterne ai sistemi di chiusura o confinamento e relativi
245. uto pi si gnificativo sia in termini di prodotti terapeutici vaccini e diagnostici che di ricerca e sviluppo Tabella 1 SINIL Genomica ricerca genetica Diagnostica molecolare sequenziamento del DNA Sonde nucleotidiche che riconoscono specifiche sintesi ingegneria genetica sequenze di DNA Molecular fingerprinting colture cellulari e tessutali ingegneria tessutale ibridizzazione fusione cellulare vaccini o immu nostimolanti manipolazio ne embrionale Vaccini epatite virale B meningite virale pertosse immunodiagnostica anticorpi monoclonali che ricono scono in modo specifico sostanze antigeniche cellule neoplastiche placche arteriosclerotiche zone di necrosi del tessuto miocardico Terapia genica SCID Severe Combined Immunodefi terapia genetica vettori ciency Disease determinata dall alterazione del gene per virali l enzima adenosina deaminasi ADA fibrosi cistica distrofia muscolare di Duchenne emofilia A e B l l 1 Prodotti terapeutici somatostatina insulina ormone citi nes gle della crescita interferoni citochine Colony Stimulating LI a Factors CSF attivatore del plasminogeno ormoni e glicolipidica glicoproteica fattori di crescita recettori cellulari sostanze messagge proteomica re feromoni Tabella 1 Le applicazioni in agricoltura e zootecnia costituiscono un importante strumento per la difesa delle colture dagli agenti pa togeni biotici ed abiotici il mi
246. v e quello di promuovere l informazione e la formazione sia nel settore pubblico che in quello privato in materia di prevenzione e sicurezza sul lavoro la tutela della salute negli ambienti di vita a causa delle attivit antropiche sul territorio Riguardo a tutto cio l ISPESL contribuisce alla diffusione scientifica e culturale ed alla formazione con partecipazione ad eventi e convegni nonch pubblicazioni e linee guida proprio in questa ottica che s inserisce la realizzazione del presente manuale relativo alla sicurezza nei laboratori che fanno uso di microrganismi geneticamente modificati Il manuale stato trasposto in una particolare versione informatica che grazie ad un software realizzato con il fattivo con tributo di personale ISPESL permette di animare ambienti virtuali tridimensionali multimediali ed interattivi cos da dare utile supporto tecnico scientifico non solo agli operatori esperti che manipolano MOGM ma anche ai neofiti di questa materia Con questa pubblicazione l ISPESL si propone quindi di fornire un mezzo immediato di divulgazione per promuovere la cultura della prevenzione della sicurezza nonch la formazione e l informazione nei luoghi di lavoro pubblici e privati che fanno uso di microrganismi geneticamente modificati MOGI Il Dipartimento Installazioni di Produzione e Insediamenti Antropici DIPIA uno dei cinque Dipartimenti tecnico scientifici centrali dell ISPESL ed esso svolge compiti d
247. versamento INGESTIONE E CONTATTO CON PELLE E OCCHI Rimuovere gli indumenti di protezione e chiedere aiuto avvisare immediatamente il medico ed il responsabile per la sicurezza informare sulle modalit di accadimento e fornire appropriata descrizione del materiale con cui si venuto a contatto lavare abbondantemente con acqua corrente pulita la parte per la contaminazione degli occhi usare la spruzzetta lavare gli occhi seguendo le istruzioni e senza sfregali recarsi al pronto soccorso PUNTURE ACCIDENTALI TAGLI E ABRASIONI Rimuovere gli abiti e i guanti lavare le mani e le parti coinvolte facilitare il sanguinamento applicare un idoneo disinfettante per la pelle informare sulle modalit di accadimento e fornire appropriata descrizione del materiale con il quale si venuti a contatto avvisare il medico ed il responsabile per la sicurezza 83 CAPITOLO DECIMO Approfondimento sulle tecnologie di contenimento Sommario Tecnologie di alto contenimento devono essere utilizzate per eseguire operazioni con polveri liquidi e composti biologici estremamente pericolosi Gli isolatori anche conosciuti come Glove Box sono apparecchiature che permettono di eseguire operazioni in un piccolo volume ermeticamente confinato tramite i guanti Saranno approfonditi alcuni aspetti della tecnologia degli isolatori quali il sistema di filtrazione dell aria i dispositivi di trasferimento dei materiali e i sistemi di bonifica e
248. viduare quali sono le fasi del processo che rischiano di esporre gli operatori al contatto con le sostanze fortemente attive siano esse polveri o sostanze biologiche Isolatore a pressione negativa L isolatore svolge la funzione di protezione del prodotto dell ambiente e dell operatore dagli agenti nocivi grazie ad una serie di barriere fisiche che confinano un volume ben definito dal resto dell ambiente di lavoro Tali barriere sono costituite da lamiere metalliche o di materiale plastico L intervento dell operatore all interno del volume confinato permesso dai guanti installati sulle pareti dell isolatore e la visibilit garantita da superfici trasparenti vetro o materiale plastico Figura 21 Schema di un isolatore 84 Figura 22 Foto di un isolatore Allo scopo di aumentare ulteriormente la sicurezza offerta dalle barriere fisiche permanenti che confinano la polvere in un volume ben preciso all interno dell isolatore mantenuta una pressione negativa rispetto all ambiente esterno Tale depres sione impedisce la fuoriuscita di polvere anche se si verificassero condizioni di funzionamento anomale quali il trafilamento da una guarnizione la rottura di un guanto o l apertura accidentale di una porta In tali condizioni infatti grazie alla pressione negativa all interno dell isolatore sar l aria esterna ad entrare e non viceversa L isolatore dovr essere dimensionato in modo da assicurare
249. vo categoria 3 classificata come R62 o R63 in concentrazione 5 e una sostanza mutagena della categoria 1 o 2 classificata come R46 in concentrazione 0 1 e una sostanza mutagena della categoria 3 classificata come R40 in concentrazione 1 L espressione sostanza tossica per il ciclo riproduttivo stata introdotta con la direttiva 92 32 CEE recante settima modifica alla direttiva 67 548 CEE Il termine teratogena stato sostituito dall espressione sostanza tossica per il ciclo riproduttivo in quanto pi confacente dando una definizione pi precisa senza tuttavia modificare il concetto alla base Corrisponde dunque al codice H10 dell Allegato III della direttiva 91 689 CEE La classificazione e i numeri R si basano sulla direttiva 67 548 CEE concernente il ravvicinamento delle disposizioni legislative regolamentari ed amministrative relative alla classificazione all imballaggio e all etichettatura delle sostanze pericolose G U L 196del 16 8 1967 pag 1 e successive modifiche limiti di concentrazione si riferiscono a quelli spe cificati nella direttiva 88 379 CEE per il ravvicinamento delle disposizioni legislative regolamentari ed amministrative degli Stati membri relative alla classificazione all imballaggio e all etichettatura dei preparati pericolosi G U L 187 del 16 7 1988 pag 14 e successive modifiche mentre per la mutagenicit vale il criterio sopra specificato Sono inoltre ripor
250. ze reattive Estremamente reattive Non mescolare con altre con l acqua sostanze o rifiuti 107 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 414 15 16 17 18 19 20 21 24 25 26 27 28 30 31 32 33 34 101 102 103 104 105 106 107 Note Gruppo di reattivit di appartenenza Reactivity Group Number Legenda H sviluppo di calore F combustione G generazione di gas innocui e non infiammabili GT generazione di gas tossici GF generazione di gas infiammabili E esplosione P polimerizzazione rapida S solubilizzazione di sostanze tossiche U con effetti sconosciuti ma potenzialmente pericolosi 52 Per quanto riguarda il contenimento opportuno identificare i contenitori pi adatti per i diversi rischi fattori da pren dere in considerazione per la scelta sono i seguenti e Stato e o caratteristiche fisiche del rifiuto liquido viscoso solido tagliente in tal caso resistenza alla perforazione e sufficiente rigidit e metodi e procedure previste per la manipolazione ed il trasporto chiusura presenza di maniglie carrellatura ecc e metodi di trattamento materiali compatibili con le condizioni previste chiusura allentabile o rimovobile e decontaminazione del contenitore per il riutilizzo materiali resistenti al trattamento senza perdita delle caratteristiche di impermeabilit rigidit e robustezza e mezzi per identificare rifiuti diversi possibilit di apporre scritte etichette colori e Capacit di fornire il gra
251. zionare dopo l uso i rotori e i contenitori delle centrifughe per accertare l assenza di corrosioni e di fessure capillari e riporli capovolti per permettere la fuoriuscita della condensa 75 lspezionare quotidianamente la camera interna della centrifuga per cercare macchie o sporco a livello del rotore In presenza di macchie o sporco necessario rivedere i protocolli di centrifugazione Decontaminare cestelli rotori e camera interna della centrifuga al termine di ogni utilizzo In caso di incidente In caso di rottura di provette e dispersione del materiale nella camera interna della centrifuga durante il suo funzionamento fermare la rotazione ed attendere almeno 30 minuti prima dell apertura per permettere la deposizione delle particelle di aerosol prodotte Se la rottura viene rilevata a centrifuga gi ferma il rotore dovrebbe essere sostituito immediatamente e lasciato chiuso per 30 minuti Per tutte le operazioni di intervento devono essere indossati i DPI adeguati guanti resistenti di gomma e procedure operative adeguate come rimuovere pezzi della provetta con pinze Possibili rischi per l operatore Rottura meccanica della centrifuga Rottura dell equipaggiamento di laboratorio ad es provette Generazione di aerosol Errori dell operatore INCUBATORE Il corretto uso di un incubatore prevede di 76 collocare lo strumento in zona protetta dalla luce solare diretta evitare l introduzione di grandi quantit
252. zione e e loro frequenze e il personale responsabile delle verifiche Le operazioni di manutenzione e taratura devono essere riportate in schede riassuntive Scheda di manutenzione che riporti la data e la firma del tecnico che ha effettuato le operazioni relative a e verifica e sostituzioni 62 e pulizia Scheda di taratura su cui viene riportato e procedura di taratura e programma di taratura e data di svolgimento della stessa e di quella futura e firma del tecnico e riferimenti ai campioni primari o materiali di riferimento utilizzati per il controllo Se la taratura viene attuata da un centro esterno dovr essere riportata tutta la documentazione inerente Un apparecchiatura che in seguito a taratura non sia risultata idonea al suo utilizzo dovr essere messa fuori servizio e contrassegnata da un etichetta visibile che riporti la data di rilevazione dell evento L apparecchiatura non potr essere in nessun modo utilizzata fino a quando la riparazione o l ulteriore taratura non la rendano di nuovo funzionante L evento dovr essere riportato sulla scheda di taratura Disinfezione della strumentazione e applicazione di procedure e protocolli indicati dalla casa produttrice e semplice disinfezione dopo ogni utilizzo e esecuzione periodica di cicli di disinfezione e lavaggio notificato su apposito registro e manutenzione ordinaria e straordinaria da parte del personale specializzato notificate su apposito regi
253. zione di questa precamera a sinistra in Figura 37 importantissima poich consente un pi facile passaggio con relativa bonifica degli oggetti da fare entrare o da fare uscire dalla camera principale consentendo il lavaggio dei soli oggetti interessati al transito Per tale motivo importante che la precamera sia di dimensioni appena sufficienti ad ospitare gli oggetti in transito da e 91 per la camera principale E opportuno che nella precamera siano installati un paio di guanti per facilitare le operazioni di la vaggio con pistola a spruzzo La precamera deve essere concepita solo come un luogo dove consentito il passaggio ed il lavaggio degli oggetti con tenitori strumenti attrezzi accessori che vanno e vengono dalla camera principale nella quale invece presente tutto ci che occorre alle operazioni di processo La presenza della precamera comunque non toglie la possibilit di installare nella camera principale tutti quegli accessori che sono stati precedentemente descritti ad esempio il sistema di espulsione a film continuo o gli agganci RTP per i con tenitori Il sistema camera precamera sar anche dotato di una serie di interblocchi che regola l apertura delle porte e previene l aper tura accidentale di una di esse Inoltre i due sistemi di ventilazione seppur indipendenti dovranno essere coordinati da un unico computer che mantenga le pressioni entrambe negative rispetto all ambiente di l
254. zione dovrebbero essere separate da quelle per altre attivit ricerca testing Stabilire flussi unidirezionali ove possibile Controllati anche attraverso le modalit operative e la temporalit e Monitoraggio ambientale e test sul prodotto devono essere previsti per assicurare un adeguato controllo nell area di processo e per una valutazione del rischio ambientale 33 Stretta aderenza a protocolli a oe A P potenziali vie di contaminazione crociata standard operativi lavorare su una linea cellulare alla volta l Centrifughe Pipettatori Incubatori e usare adeguate procedure di flusso operativo a processare un campione alla volta procedure di pulizia e adeguata separazione di attivit pulire sanificare la centrifuga tra filtri concomitanti campioni diversi attuare procedure per evitare la contaminazione crociata Procedure di emergenza per sistemi di critici UPS Tabella 12 Piano di emergenza Disposizioni per i casi di emergenza derivanti dal trasporto al centro di trattamento trasporto al sito di trattamento all interno di centro e manipolazione di OGM contenenti il prodotto nel centro di trattamento accidentale contatto con la pelle con gli occhi e punture accidentali metodi di prevenzione per l infezione il trattamento e metodi di prevenzione per le malattie disponibilit di vaccini SOP e piano di emergenza Diversi gli aspetti riguardanti l uso di un OGM pu richiedere
255. zioni svolte in una struttura di impiego confinato o in caso di dispersione accidentale nell ambiente Il livello di classificazione definito mediante la valutazione del rischio determina i requisiti relativi al contenimento per le attivit connesse ai MOGM confor memente all Allegato IV Figura 5 Rischio biologico Tipologia di manipolazione Probabilit di esposizione microrganismo Assegnazione di una classe di rischio per l impiego confinato Valutazione del rischio Rivalutazione Gestione del rischio Massima protezione della salute umana e dell ambiente Figura 5 Lo schema sintetizza la procedura della valutazione del rischio e della sua gestione VALUTAZIONE DEL RISCHIO DELL IMPIEGO CONFINATO La valutazione di cui all articolo 5 comma 2 si deve basare sui seguenti elementi PROCEDURA 1 A Individuazione di tutti gli effetti potenzialmente nocivi dell impiego confinato L identificazione delle caratteristiche potenzialmente nocive del MOGM determinate dalla modificazione genetica o da even tuali cambiamenti degli elementi tipici dell organismo ricevente Sono considerati effetti potenzialmente nocivi e affezioni degli esseri umani inclusi gli effetti tossici o allergici e malattie degli animali o delle piante e effetti negativi dovuti all impossibilita di curare la malattia o di predisporre un efficace profilassi e effetti negativi dovuti alla colonizzazione o alla diffusione
256. zzati Tabella 8 Packaging vector Envelope vector Transfer vector l Il generazione Non in grado di Specificare promotore geni e se si trasdurre cellule umane tratta di un costrutto SIN self inactivating Ill generazione con In grado di Contenente geni non patogenetici integrasi difettiva per trasdurre cellule umane geni marcatori geni terapeutici l integrazione geni regolatori Ill generazione con Contenente geni con potenziale integrasi competente patogenetico oncogeni o geni per l integrazione tossici Tabella 8 Fare un elenco dei MOGM risultanti Tabella 9 Elenco dei MOGM risultanti dalla combinazione dei vettori transfer envelope e packaging Specificare se la trasfezione transiente o stabile Effettuare un valutazione del rischio in relazione ai singoli vettori che saranno utilizzati Valutare i diversi profili di biosicurezza in seguito all impiego delle diverse combinazioni di vettori che si intendono utilizzare all interno dello stesso disegno sperimentale Tabella 9 Riempire la Tabella 10 A partire dal 1 Gennaio 2010 i moduli di notifica di impiego MOGM saranno modificati verr introdotta la tabella al punto X del modulo di notifica di impiego di classe 2 e al punto XI del modulo di notifica di impiego delle classi 3 e 4 che dovr essere compilata dal notificante responsabile scientifico e gestionale dell impiego confinato in modo che risultino i MOGM che intende utilizzare con rifer

MOGM e sicurezza in laboratorio

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