NOM-180-SSA1-1998 - Asociación Nacional de la Industria Química
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1. ml de muestra filtrados 5 1 Agua con finalidad para consumo humano considerando las especificaciones establecidas en la NOM 127 SSA1 1994 Con agua de buena calidad la presencia general de coliformes es m nima Por lo tanto se deben contar todas las colonias de coliformes cajas con 20 a 80 colonias y usar la f rmula dada anteriormente para obtener la densidad de coliformes Si existe un crecimiento confluente que es un desarrollo que cubre el rea de filtraci n completa de la membrana o una porci n y las colonias no est n bien distribuidas reportar los resultados como crecimiento confluente con sin coliformes y solicite un nuevo muestreo del mismo sitio Si el n mero total de colonias bacterianas coliformes o no coliformes excede las 200 por membrana o si las colonias no son suficientemente distinguibles una de la otra para asegurar el conteo reporte los resultados como Demasiado numerosas para contar DNPC La presencia de coliformes en tales cultivos se verifica mediante la colocaci n del filtro de membrana completo dentro de un tubo est ril con caldo bilis verde brillante Como alternativa arrastre la Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 superficie completa del cultivo de la membrana con una asa est ril o con un isopo de algod n est ril e inocule a un tubo de caldo lactosado y a otro de caldo bilis verde brillante Si se produce gas de este cultivo dentro de las 48 3 horas2. Appl Environ Microbiol 54 1595 Edberg S C amp M M Edberg 1988 A defined substrate technology for the enumeration of microbial indicators of environmental pollution Yale J Biol Med 61 389 Covert T C L C Shadix E W Rice J R Haines amp R W Frey Berg 1989 Evaluation of the autoanalysis Colilert test for detection and enumeration of total coliforms Appl Environ Microbiol 55 2443 Edberg S C amp D B Smith 1989 Absence of association between total heterotrophic and total coliform bacteria from a public water supply Appl Environ Microbiol 55 380 Edberg S C M J Allen D B Smith amp the National Collaborative Study 1989 National field evaluation of a defined substrate method for the simultaneous detection of total coliforms and Escherichia coli from drinking water Comparison with presence absence techniques Appl Environ Microbiol 55 1003 Edberg S C M J Allen D B Smith amp N J Kaiz 1990 Enumeration of total coliforms and Escherichia coli from source water by tha defined substrate technology Appl Environ Microbiol 56 366 Edberg S C M J Allen D B Smith 1991 Defined substrate technology method for rapid ans simultaneous enumeration of total coliforms and Escherichia coli from water Collaborative study J Assoc Offic Anal Chem 74 526 Edberg S C F Ludwig amp D B Smith 1991 The Colilert System for total coliforms and Escherichia coli American Water Works Research F
3. al tiempo que es til el equipo de potabilizaci n La prueba de eficiencia referida a vida til se efectuar de acuerdo con la normatividad correspondiente 7 4 Los equipos de tratamiento de agua de tipo dom stico deben ostentar en la etiqueta o contraetiqueta las siguientes leyendas Utilizar con agua de abastecimiento p blico y V ase instructivo anexo o leyendas alusivas 7 5 El instructivo o manual de operaci n del equipo de tratamiento de agua de tipo dom stico debe contener cuando menos la siguiente informaci n en espa ol 7 5 1 Finalidad de uso 7 5 2 Instrucciones de operaci n 7 5 3 Condiciones de operaci n incluyendo en su caso para finalidad del m todo de prueba o de verificaci n sanitaria las restricciones referentes a caracter sticas de calidad de agua 7 5 4 Procedimiento de mantenimiento 7 5 5 Vida til referida a volumen de agua tratada o a tiempo 7 6 Las personas f sicas o morales referidas en el punto 7 1 de este apartado deben tener a disposici n de la autoridad sanitaria cuando sta la requiera la siguiente informaci n 7 6 1 Formulaci n de materias primas y partes componentes del producto 7 6 2 Pa s de origen de las materias primas y partes componentes del producto o en su caso indicar si es en su totalidad de importaci n En este ltimo caso se debe se alar la fracci n arancelaria comprendida en la Tarifa de la Ley del Impuesto General de Importaci n 7 6 3 Etiqueta del produ
4. Agar libre de sales 15 0 g Agua destilada 1000 0 ml Poner a ebullici n durante tres minutos el extracto de carne y la peptona Bacto o equivalente agregar el agar y calentar agitando continuamente hasta disolver Distribuir en tubos de 10 x 100 mm y esterilizar 20 minutos a 121 C el medio no debe sufrir sobrecalentamiento lo que se evita por un precalentamiento del autoclave Utilizar este medio para efectuar los subcultivos 5 2 Agar nutritivo B Preparar del mismo modo que el Agar nutritivo A descrito en el punto 5 1 pero agregando 30 g de agar libre de sales en lugar de los 15 g especificados en dicho punto Distribuir 20 ml del medio en cada botella de Roux Utilizar este medio para preparar el cultivo de referencia 6 Microorganismo de prueba Cepa de Escherichia coli ATCC 11229 7 Preparaci n del cultivo de referencia Tomar una asada de la cepa de Escherichia coli y sembrar en una botella de Roux con agar nutritivo B incubar de 20 a 24 horas a una temperatura de 35 2 C Hacer por lo menos tres siembras 8 Preparaci n del subcultivo Tomar una asada de cada cultivo de referencia y resembrar en tubos independientes con Agar nutritivo A incubar 20 24 horas a una temperatura de 35 2 C 9 Preparaci n de la suspensi n de Escherichia coli 9 1 A partir del subcultivo en tubo ya desarrollado adicionar 5 ml de soluci n salina al 0 85 est ril y agitar suavemente en forma manual rotando verticalmente el t
5. Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 SECRETARIA DE SALUD NORMA Oficial Mexicana NOM 180 SSA1 1998 Salud ambiental Agua para uso y consumo humano Equipos de tratamiento de tipo dom stico Requisitos sanitarios Al margen un sello con el Escudo Nacional que dice Estados Unidos Mexicanos Secretar a de Salud Subsecretar a de Regulaci n y Fomento Sanitario Direcci n General de Salud Ambiental NORMA OFICIAL MEXICANA NOM 180 SSA1 1998 SALUD AMBIENTAL AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO EQUIPOS DE TRATAMIENTO DE TIPO DOMESTICO REQUISITOS SANITARIOS JAVIER CASTELLANOS COUTI O Presidente del Comit Consultivo Nacional de Normalizaci n de Regulaci n y Fomento Sanitario con fundamento en los art culos 39 de la Ley Org nica de la Administraci n P blica Federal 40 y 69 H de la Ley Federal de Procedimiento Administrativo 13 apartado A fracci n l 118 fracci n Il y 119 fracci n Il de la Ley General de Salud 25 del Reglamento Interior de la Secretar a de Salud 41 43 45 46 fracci n Il y 47 de la Ley Federal sobre Metrolog a y Normalizaci n 28 y 24 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrolog a y Normalizaci n 214 fracci n IV y 225 del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades Establecimientos Productos y Servicios y CONSIDERANDO Que con fecha 13 de diciembre de 1999 en cumplimiento del acuerdo del Comit y de lo previsto en el art culo
6. bactericida cloro soluciones de cloro bromo yodo u otro producto qu mico para matar o destruir las bacterias presentes en el agua debe contar con un elemento posfiltrante para eliminar la concentraci n residual del bactericida 6 2 Filtro potabilizador tipo bacteriol gico El dispositivo equipado con una buj a de cer mica cartucho de celulosa o fibras sint ticas y membrana submicr mica reemplazables de porosidad fina de 0 5 micras o menores nominal la cual puede contener una sustancia o componente bactericida o bacteriost tico este dispositivo retiene mata destruye o inhibe las bacterias y retiene asimismo los s lidos suspendidos presentes en el agua 6 3 Ozonificador El dispositivo equipado con un generador de ozono para matar o destruir las bacterias presentes en el agua debe contar con un elemento prefiltrante porosidad no mayor de 5 0 micras para retener los s lidos suspendidos 6 4 Purificador germicida de luz ultravioleta El dispositivo para matar o destruir las bacterias presentes en el agua equipado con una l mpara germicida de luz ultravioleta y que debe contar con un elemento prefiltrante porosidad no mayor de 5 0 micras para retener los s lidos suspendidos Lunes 30 de octubre de 2000 DIARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 6 5 Otros Aquellos que la autoridad sanitaria competente determine que se trata de equipos de tratamiento de agua de tipo dom stico como se definen en esta Norma y no se contemplan
7. destapadores abrelatas entre otros Microscopio estereosc pico ptico o equivalente Incubadora ajustada a temperatura de 35 C 1 C Contador mec nico o manual de Tally Recipientes est riles para muestras frascos botellas jarras bolsas otros Balanza granataria con sensibilidad de 0 1 g Portaasa y asa bacteriol gica Portaobjetos 3 Reactivos y medios de cultivo 3 1 Agar cuenta est ndar Preparar de acuerdo con las instrucciones del fabricante o por ingredientes El pH final debe ser de 7 0 0 2 despu s de esterilizar a 121 C durante 15 minutos 3 2 Agar ENDO LES 3 2 1 Ingredientes Cantidad g Extracto de levadura 1 2 Casitona o tripticasa 3 7 Tiopeptona o tiotona 3 7 Triptosa 7 5 Lactosa 9 4 Fosfato cido de potasio K2HPO4 3 3 Fosfato de potasio K POz4 1 0 Cloruro de sodio NaCl 3 7 Lunes 30 de octubre de 2000 DIARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 Desoxicolato de sodio 0 1 Lauril sulfato de sodio 0 05 Sulfito de sodio Na2SOz 1 6 Fucsina b sica 0 8 Agar 15 0 Agua grado reactivo 1000 0 ml 3 2 2 Preparaci n Rehidratar el medio en un litro de agua que contenga 20 ml de etanol al 95 no desnaturalizado lo cual reduce el crecimiento Background y el tama o de la colonia Llevar hasta ebullici n para disolver el agar retirar del calor y enfriar a 45 50 C No esterilizar en autoclave El pH final debe ser 7 0 0 2 Distribuir en cantidades de 5 a 7 ml dentro de cajas de Petri de 60 mm
8. en la clasificaci n 7 Especificaciones 7 1 Las personas f sicas o morales que se dediquen al proceso e importaci n de equipos de tratamiento de agua de tipo dom stico deben tener a disposici n de la autoridad sanitaria un informe de resultados de laboratorio sobre prueba de potabilidad de cada equipo en particular de conformidad con el m todo de prueba para evaluar la eficiencia en reducci n bacteriana descrito en el Ap ndice Normativo A de esta norma El laboratorio que efect e la prueba debe ser acreditado o tercero autorizado La prueba de potabilidad es aceptable cuando el porcentaje en reducci n bacteriana es igual o mayor a 95 para organismos mes filos aerobios e igual o mayor a 99 99 para organismos coliformes totales 7 2 La Secretar a de Salud determinar los casos en que el agua tratada a trav s de un equipo de tratamiento de agua de tipo dom stico complementariamente a la prueba de eficiencia en reducci n bacteriana debe ser sometida a an lisis de sustancias t xicas provenientes de los elementos o sustancias que componen dicho equipo 7 3 La Secretar a de Salud determinar de acuerdo con el dictamen o solicitud fundamentada t cnicamente de dependencias organismos oficiales y empresas privadas o por queja de un usuario los casos en que un equipo de tratamiento de agua complementariamente a la prueba de eficiencia en reducci n bacteriana debe ser sometido a pruebas de eficiencia referidas a vida til
9. en reducci n bacteriana es igual o mayor a 95 para organismos mes filos aerobios e igual o mayor a 99 99 para organismos coliformes totales APENDICE INFORMATIVO A DETERMINACION DE ORGANISMOS COLIFORMES TOTALES METODO DEL SUSTRATO CROMOGENICO Ver Nota a pie de p gina 1 Introducci n La determinaci n de organismos coliformes por medio del sustrato cromog nico se fundamenta en el uso de sustratos cromog nicos hidrolizables para la detecci n de enzimas de bacterias coliformes Cuando se utiliza esta t cnica el grupo se define como todas las bacterias que poseen la enzima R D galactosidasa y capaces de romper el sustrato cromog nico dando como resultado una liberaci n del crom geno A diferencia del m todo de fermentaci n de lactosa que permite el crecimiento de muchos organismos aer bicos y elimina o suprime algunos no coliformes con inhibidores qu micos esta t cnica provee nutrientes que son m s selectivos y espec ficos para el crecimiento de coliformes La prueba puede usarse tanto en tubos m ltiples como en formato presencia ausencia muestras individuales de 100 ml La obtenci n de resultados v lidos requiere la aplicaci n estricta de los procedimientos de control de calidad 2 Principio El sustrato cromog nico tal como el orto nitrofenil R D galactopiran sido ONPG u otro equivalente es empleado para detectar la enzima R D galactosidasa la cual es producida por bacterias coliformes totales La enzima
10. 0 2 Preparar un volumen de 100 litros de agua de prueba libre de bactericidas y bacteriost ticos para operar el equipo inoculando el volumen de suspensi n de Escherichia coli requerido para alcanzar una carga total de bacterias organismos mes filos aerobios de 5 000 a 10 000 UFC ml y una concentraci n de organismos coliformes totales mayor o igual a 240 NMP 100 ml o UFC 100 ml 10 3 Determinar para el agua de prueba la concentraci n real de organismos mes filos aerobios en UFC ml de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM 092 SSA1 1994 y la concentraci n real de organismos coliformes totales de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM 112 SSA1 1994 o con los m todos alternativos presentados en los Ap ndices Informativos A y B 11 Desarrollo de la prueba 11 1 Instalar el equipo y operarlo con agua de prueba de acuerdo con el instructivo respectivo del fabricante o distribuidor 11 2 Alimentar el equipo con agua de prueba 11 3 Despu s de 10 minutos de operar el equipo tomar tres muestras de agua de prueba sin tratar y a continuaci n tres muestras de agua tratada determinar la concentraci n de organismos mes filos aerobios en UFC ml de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM 092 SSA1 1994 y la concentraci n de organismos coliformes totales de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM 112 SSA1 1994 o con los m todos alternativos presentados en los Ap ndices Informativos A y B 12 C lculos Lunes 30 de octubre de 2
11. 000 DIARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 Con los resultados de cuenta de organismos mes filos aerobios y la concentraci n de organismos coliformes totales en agua de prueba sin tratar y tratada media aritm tica calcular los porcentajes en la reducci n bacteriana de acuerdo con las f rmulas especificadas en los puntos 12 1 y 12 2 12 1 Porcentaje en reducci n bacteriana de organismos mes filos aerobios organismos mes filos aerobios organismos mes filos aerobios APST RBMA ABT x 100 organismos mes filos aerobios APST En donde RBMA Porcentaje en reducci n bacteriana de organismos mes filos aerobios organismos mes filos aerobios 1psy Cuenta de organismos mes filos aerobios en UFC ml de agua de prueba sin tratar organismos mes filos aerobios xpy Cuenta de organismos mes filos aerobios en UFC ml de agua de prueba tratada 12 2 Porcentaje en reducci n bacteriana de organismos coliformes totales coliformes totales E coliformes totales RBCT ABST APT x 100 coliformes totales ssr En donde RBCT Porcentaje en reducci n bacteriana de organismos coliformes totales coliformes totales apsr Cuenta de organismos coliformes totales en NMP 100 ml o UFC 100 ml de agua de prueba sin tratar coliformes totales apy Cuenta de organismos coliformes totales en NMP 100 ml o UFC 100 ml de agua de prueba tratada 13 Reporte Prueba de potabilidad aceptable si el porcentaje
12. 2 hidroxietilpiperazina N 2 cido etano sulf nico Lunes 30 de octubre de 2000 DIARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 El procedimiento tambi n puede ser desarrollado con la adici n de cantidades apropiadas del sustrato reactivo a la muestra mezclando vigorosamente y dosificando en cinco o diez tubos est riles Incube a 35 0 5 C por 24 horas 5 2 Procedimiento de presencia ausencia Adicione as pticamente sustrato enzim tico prepesado a 100 ml de muestra en un vaso est ril transparente no fluorescente de borosilicato o en una botella o recipiente equivalente Opcionalmente adicionar 100 ml de muestra al sustrato enzim tico en un recipiente provisto por el fabricante Tape as pticamente y mezcle vigorosamente para disolver Incube a 35 0 5 C por 24 horas 6 Interpretaci n Despu s de 24 horas de incubaci n examine si existe cambio de color en los tubos o recipientes Cuando el sustrato es orto nitrofenil R D galactopiran sido ONPG es hidrolizado por la enzima de la bacteria para producir ortonitrofenol amarillo algunos sustratos usados en otras formulaciones pueden producir respuestas de diferente color La respuesta cromog nica descrita es una reacci n positiva para coliformes totales Si el cambio de color no es uniforme en todo el tubo mezcle por inversi n antes de la lectura Comparar cada tubo nuevamente con el comparador de color disponible de la fuente comercial del sustrato Si la intensidad del color es mayor o igual
13. 47 de la Ley Federal sobre Metrolog a y Normalizaci n se public en el Diario Oficial de la Federaci n el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana a efecto que dentro de los sesenta d as naturales posteriores a dicha publicaci n los interesados presentaran sus comentarios al Comit Consultivo Nacional de Normalizaci n de Regulaci n y Fomento Sanitario Que con fecha 19 de junio de 2000 fueron publicadas en el Diario Oficial de la Federaci n las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comit en t rminos del art culo 47 fracci n III de la Ley Federal sobre Metrolog a y Normalizaci n Que en atenci n a las anteriores consideraciones contando con la aprobaci n del Comit Consultivo Nacional de Normalizaci n de Regulaci n y Fomento Sanitario se expide la siguiente NORMA OFICIAL MEXICANA NOM 180 SSA1 1998 SALUD AMBIENTAL AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO EQUIPOS DE TRATAMIENTO DE TIPO DOMESTICO REQUISITOS SANITARIOS Prefacio En la elaboraci n de esta Norma Oficial Mexicana participaron las unidades administrativas e instituciones siguientes SECRETARIA DE SALUD Direcci n General de Salud Ambiental Laboratorio Nacional de Salud P blica SECRETARIA DE MEDIO AMBIENTE RECURSOS NATURALES Y PESCA Direcci n de Normas CAMARA NACIONAL DE LA INDUSTRIA DE LA TRANSFORMACION Consejo Param dico PROCURADURIA FEDERAL DEL CONSUMIDOR BECKTON AND DICKINSON S A INDUSTRIAS MASS S A DE C V MER
14. ARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 22 horas de incubaci n con alta densidad de colonias no coliformes de 0 5 a 1 hora antes de contar puede prevenir la dispersi n y puede ayudar a discernir el brillo met lico La incubaci n anaer bica a 35 C por 24 horas de algunas muestras de agua subterr nea pueden suprimir el desarrollo de colonias de no coliformes pero debe ser cuidadosamente evaluada para asegurar no perder la recuperaci n de los coliformes Las muestras de agua tratada efluente o residual puede incluir bacterias estresadas que crecen relativamente lento y producen un m ximo brillo en 22 24 horas Los organismos de fuentes no tratadas pueden producir brillo a las 16 18 horas y el brillo puede subsecuentemente disminuir despu s de 24 30 horas 4 6 Verificaci n de los coliformes Ocasionalmente las colonias de no coliformes aparecen como colonias t picas con brillo Las colonias at picas rojo oscuro nucleadas sin brillo met lico ocasionalmente pueden ser coliformes Es recomendable verificar ambos tipos de colonias mediante una prueba de fermentaci n de lactosa o por el uso de procedimientos alternativos que involucren ambos una prueba r pida 4 horas o por reacciones bioqu micas t picas o un sistema multiprueba para especies 4 6 1 Fermentaci n de la lactosa Verificar colonias t picas y at picas incluidas en la cuenta directa probar un m nimo de 5 de tales colonias por trasferencia del crecimiento de cada
15. CK DE MEXICO S A HARMONY BROOK DE MEXICO S A AMWAY DE MEXICO OZONO OPTIMO S A DE C V INSTAPURA S A DE C V Lunes 30 de octubre de 2000 DIARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 INDICE Introducci n Objetivo Campo de aplicaci n Referencias Definiciones S mbolos y abreviaturas Clasificaci n Disposiciones sanitarias Concordancia con normas internacionales y mexicanas SONT AAN O Bibliograf a A 2 Observancia de la Norma 11 Vigencia Ap ndice Normativo A Ap ndice Informativo A Ap ndice Informativo B 0 Introducci n El objetivo de los programas de abastecimiento de agua para uso y consumo humano es asegurar que toda la poblaci n alcance una dotaci n adecuada de agua de buena calidad En M xico en la pr ctica no se han alcanzado estas metas por lo que un cierto n mero de usuarios recurre a m todos intradomiciliarios para subsanar deficiencias de la calidad del agua suministrada a nivel municipal Los m todos intradomiciliarios o dom sticos para purificar el agua de consumo humano consisten en la aplicaci n de equipos de tratamiento y sustancias germicidas orientados fundamentalmente al aspecto bacteriol gico considerado como de riesgo inmediato a la salud y en casos espec ficos a la depuraci n de caracter sticas f sicas y o qu micas La Secretar a de Salud con el consenso de los sectores involucrados presenta esta Norma Oficial Mexicana que incluye clasificaciones y disposiciones sanita
16. R D galactosidasa hidroliza al sustrato y provoca un cambio de color el cual indica y sustenta una prueba positiva despu s de 24 a 28 horas sin procedimientos adicionales Las bacterias no coliformes tales como las especies del g nero Aeromonas y Pseudomonas que producen peque as cantidades de la enzima R D galactosidasa son suprimidas y no pueden producir una respuesta positiva durante las 28 horas a menos de que m s de 10 10 000 unidades formadoras de colonias UFC por ml 10 UFC 100 ml est n presentes 3 Aplicaciones j Aprobado por el Committee of Standard Methods 1992 Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 La prueba de coliformes con sustrato cromog nico se recomienda para el an lisis de muestras de agua potable agua purificada o agua limpia proveniente de cualquier fuente Inicialmente los laboratorios planearon usar este procedimiento conduciendo pruebas paralelas con una de las pruebas de coliformes est ndar por un periodo de varios meses para evaluar la efectividad de la prueba para el tipo espec fico de agua analizada y para determinar el n mero relativo de pruebas positivas obtenido por las dos t cnicas Las muestras de agua que contienen materiales h micos o de otro tipo pueden estar coloreadas Si hay color de fondo se comparan los tubos inoculados con un tubo de control conteniendo nicamente muestra de agua Ciertas aguas con alto contenido de sales de calcio pueden causar precipita
17. a 35 0 5 C se concluye la presencia de coliformes Se recomienda reportar Crecimiento confluente o Demasiado numerosas para contar con al menos una colonia de coliformes detectable verificada como una muestra positiva de coliforme total No se recomienda reportar nicamente Crecimiento confluente o Demasiado numerosas para contar Cuando no se detectan coliformes habiendo utilizado vol menes de muestra peque os se requiere una nueva muestra y seleccionar vol menes m s apropiados para la filtraci n por membrana Normalmente se requieren vol menes de 25 50 o 100 ml para agua destinada al consumo humano Para reducir interferencia de sobrecrecimiento en lugar de filtrar 100 ml filtre porciones de 50 ml a trav s de 2 diferentes membranas porciones de 25 ml a trav s de 4 diferentes membranas y as sucesivamente La cuenta de coliformes totales observadas sobre todas las membranas se suma y se reporta el n mero total en 100 ml
18. a inhibir el desarrollo bacteriano 4 Procedimiento Generalmente el enriquecimiento del medio de cultivo puede mejorar la valoraci n de la calidad del agua para beber Sin embargo este paso puede eliminarse en el an lisis de rutina de este tipo de agua ya que varios estudios mostraron que se obtienen resultados adecuados por la t cnica simple de filtraci n por membrana en un solo paso Sin embargo se recomienda que en lo posible se verifiquen todas las muestras de agua que den resultados positivos 4 1 Selecci n del tama o de muestra El tama o de muestra lo determina la densidad bacteriana lo cual en muestras de agua para beber estar limitado s lo por el grado de turbiedad o por el crecimiento de bacterias no coliformes sobre el medio Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 El volumen de muestra sugerida para prueba de coliformes totales y coliformes fecales por esta t cnica es de 100 ml 4 2 Filtraci n de la muestra Utilizando pinzas est riles colocar una membrana est ril cuadriculado hacia arriba sobre el portafiltro poroso Cuidadosamente coloque el embudo sobre el recept culo y aseg relo en su lugar Filtre la muestra bajo vac o parcial con el filtro a n en su lugar enjuague el embudo mediante la filtraci n de tres porciones de 20 a 30 ml de soluci n buffer est ril Una vez complementado el enjuague final y que el proceso de filtraci n haya concluido quitar el embudo e inmediatamen
19. a la del comparador los coliformes totales est n presentes Las muestras son negativas para coliformes totales si no se observa color Si la respuesta cromog nica es cuestionable despu s de 24 horas incube 4 horas m s Si se intensifica el crom geno la muestra es positiva para coliformes totales si no sucede esto la muestra es negativa 7 Reporte Si se desarroll el procedimiento de NMP calcular el valor de NMP del n mero de tubos o celdas positivos de acuerdo con las tablas de n mero m s probable correspondientes al sistema utilizado Si se utiliza el procedimiento de presencia ausencia reportar resultados de coliformes totales presentes a ausentes en 100 ml de muestra 8 Control de calidad Pruebe cada lote de sustrato comercial desarrollando la prueba por inoculaci n con tres bacterias de control Escherichia coli otra coliforme total diferente a E coli por ejemplo Enterobacter cloacae y una no coliforme Evite el uso de in culos pesados Si se usan Pseudomonas como el no coliforme representativo seleccione una especie no fluorescente Incube estos controles a 35 0 5 C por 24 horas Lea y registre los resultados 9 Bibliograf a Edberg S C M J Allen D B Smith 8 the National Collaborative Study 1988 National field evaluation of a defined substrate method for the simultaneous enumeration of total coliforms and Escherichia coli from drinking water Comparison with the standard multiple tube fermentation method
20. ci n 4 3 T cnica de enriquecimiento Colocar un cojinete absorbente en una caja de Petri est ril y pipetear 1 8 a 2 0 ml de caldo lauril triptosa para saturar el cojinete Cuidadosamente remueva cualquier exceso de l quido del cojinete As pticamente colocar sobre el cojinete una membrana a trav s de la cual se haya filtrado una muestra de agua incubar la membrana sin invertir la caja durante 15 a 20 horas a 35 0 5 C en una atm sfera de 90 de humedad relativa Si se usa el medio de agar base tipo ENDO remover el enriquecimiento de la incubadora separar la membrana del cojinete con el enriquecimiento y colocar sobre la superficie del agar La colocaci n incorrecta de la membrana a su vez se pone de manifiesto porque partes de la membrana no se ti en lo cual indica entrada de aire Donde suceda esto cuidadosamente resit e la membrana sobre la superficie de agar Si se usa medio l quido colocar un cojinete est ril nuevo en el fondo de la caja y saturar con 1 8 2 0 ml de medio M ENDO separar la membrana del cojinete con el enriquecimiento y colocar sobre la superficie del M ENDO con las precauciones antes descritas Descartar el cojinete de enriquecimiento utilizado A continuaci n con el medio ya sea agar o l quido con cojinete invertir las placas e incubar por 20 22 horas a 35 0 5 C 4 4 T cnica alternativa directa en paso simple Si se usa medio de agar base colocar la membrana despu s de filtrar la muestra d
21. ci n pero sta no debe afectar la reacci n La prueba del sustrato cromog nico no se usa para verificar siembras presuntivas de coliformes o colonias de filtraci n con membrana porque el sustrato puede ser sobrecargado por el in culo pesado de 6 D galactosidasa d bil producido por no coliformes causando resultados falsos positivos En lo que se refiere a Escherichia Coli un sustrato fluorog nico como el 4 metilumbeliferil R D glucor nido MUG es utilizado para detectar la enzima R glucoronidasa la cual es producida por E Coli La enzima RB glucoronidasa hidroliza el sustrato produciendo fluorescencia cuando el l quido es expuesto a la luz ultravioleta de onda larga 366 nm La presencia de fluorescencia indica una respuesta positiva para E coli Algunas Shigella spp tambi n pueden producir una respuesta positiva Debido a que Shigella spp son reconocidas como pat genas humanas no est n consideradas como perjudiciales para probar la calidad sanitaria del agua 4 Formulaci n del sustrato Las formulaciones del sustrato se presentan comercialmente en tubos para el procedimiento de tubos m ltiples o en recipientes para muestras de 100 ml para la determinaci n de presencia ausencia Tambi n son aprovechables porciones prepesadas del reactivo para mezclar y dosificar en tubos m ltiples para pruebas de 10 ml u otros recipientes para muestras de 100 ml Se requiere de un proveedor confiable para el aseguramiento de calidad y unif
22. colonia en caldo lauril triptosa incubar a 35 0 5 C durante 48 horas La formaci n de gas en caldo lauril triptosa y su conformaci n en caldo lactosa con verde brillante dentro de las 48 horas verifica a la colonia probada como coliforme 4 6 2 Verificaci n alternativa de coliformes Aplicar este procedimiento alternativo de verificaci n de coliformes para colonias aisladas sobre el filtro de membrana Si no hay colonias aisladas o si la separaci n entre las colonias es de menos de 2 mm estriar el crecimiento a medio M ENDO para asegurar la pureza del cultivo y transferir al tubo de fermentaci n 4 6 2 1 Prueba r pida Una verificaci n r pida de las colonias es la prueba de citocromo oxidasa CO y Beta galactoxidasa ONPG La reacci n de los coliformes es de CO negativa y ONPG positiva con 4 horas de incubaci n del tubo de cultivo o procedimiento de microprueba 4 6 2 2 Sistema multiprueba comercial Verificar las colonias por estr as para su purificaci n seleccionar colonias perfectamente aisladas e inocular dentro de un sistema multiprueba para enterobacterias que incluya reacciones de fermentaci n de lactosa CO y ONPG 5 C lculos C lculo de la densidad de coliformes Hacer el conteo usando filtros de membrana con 20 a 80 colonias de coliformes y no m s de 200 colonias para cualquier tipo de colonia seg n la siguiente ecuaci n Colonias de coliformes contadas Colonias de coliformes totales 100 ml x 100
23. cto en espa ol 8 Concordancia con normas internacionales y mexicanas Esta Norma Oficial Mexicana no es equivalente a ninguna norma internacional ni mexicana 9 Bibliograf a 9 1 Bacteriological Analytical Manual C 5th Edition Food and Drug Administration Division of Microbiology 1978 EUA 9 2 Manual de T cnicas y Procedimientos de Laboratorio para An lisis Microbiol gicos de Agua Potable Secretar a de Salud Subsecretar a de Servicios de Salud D G E Laboratorio Nacional de Salud P blica Reimpresi n M xico D F 1989 9 3 Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists Thirteen Ed 1980 Washington D C EUA 9 4 Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists 1995 Washington D C EUA Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 9 5 Procedimiento Normalizado de Operaci n PNO RMPM 001 para la Evaluaci n de Germicidas Laboratorio Nacional de Salud P blica Departamento de Evaluaci n de Riesgos Microbianos y Parasitarios S S A M xico D F 1995 9 6 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater American Public Health Association 14th Ed Washington D C 1975 pp 875 880 EUA 9 7 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater American Public Health Association 17th Ed Washington D C 1992 EUA 9 8 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater American Public Health Association 18th Ed Washing
24. de vidrio o pl stico Si se utilizan placas de otro tama o ajustar la cantidad de medio No exponer las placas a la luz directa del sol Almacenar en la oscuridad de 4 a 8 C preferiblemente en bolsas de pl stico selladas u otros recipientes para reducir la p rdida de humedad Descartar el medio que no se utiliz despu s de 2 semanas 3 3 Medio ENDO 3 3 1 Ingredientes Cantidad g Triptosa o polipeptona 10 0 Tiopeptona o tiotona 5 0 Casitona o tripticasa 5 0 Extracto de levadura 15 Lactosa 12 5 Cloruro de sodio NaCl 5 0 Fosfato cido dipot sico K2HPO4 4 375 Fosfato dihidr geno pot sico KH2PO4 1 375 Lauril sulfato de sodio 0 05 Desoxicolato de sodio 0 10 Sulfito de sodio Na2SOz 2 1 Fuscina b sica 1 05 Agar opcional 15 0 Agua grado reactivo 1000 0 ml 3 3 1 Rehidratar el medio en un litro de agua que contenga 20 ml de etanol al 95 Calentar hasta ebullici n para disolver el agar retirar del calor y enfriar entre 45 50 C Distribuir en cantidades de 5 a 7 ml a cajas de Petri desechables o de vidrio de 60 mm de di metro No esterilizar en autoclave El pH final debe ser de 7 1 7 3 Almacenar el medio Caldo o Agar en la oscuridad de 4 a 8 C y descarte cualquier caldo de medio sin usar despu s de 96 horas y el agar sin usar despu s de 2 semanas Medio l quido 2 ml por placa sin agar se puede usar un cojinete absorbente si est certificado libre de sulfito u otro agente t xico a una concentraci n que pued
25. e agua directamente sobre el agar como se describi anteriormente en el apartado 4 3 e incubar por 24 2 horas a 35 0 5 C Si se usa medio l quido colocar un cojinete sobre la placa y saturar con 1 8 a 2 0 ml de medio M ENDO Colocar la membrana despu s de filtrar la muestra de agua directamente sobre el cojinete invierta la caja e incube por 24 2 horas a 35 0 5 C 4 5 Conteo Para determinar la cuenta de colonias sobre el filtro de membrana usar un microscopio binocular de disecci n de bajo poder 10 a 15 aumentos u otro aparato ptico similar con l mpara fluorescente de luz blanca con rango perpendicular tanto como sea posible al plano del filtro Las colonias t picas de coliformes totales tienen color rojo oscuro con brillo met lico El rea brillante puede variar de tama o desde que s lo brille la parte superior de la colonia hasta que abarque la superficie total de la colonia las colonias at picas de coliformes pueden ser rojo oscuro o nucleadas sin brillo Las colonias que no tengan brillo pueden ser rosas rojas blancas o incoloras y se consideran no coliformes No existe correlaci n entre la cuenta de colonias coliformes o no coliformes sobre el medio tipo ENDO y el n mero total de bacterias presentes en la muestra original Sin embargo una cuenta alta de bacterias no coliformes puede interferir con el m ximo desarrollo de coliformes La refrigeraci n de los cultivos despu s de Lunes 30 de octubre de 2000 DI
26. ormidad del sustrato comercial Se debe evitar la exposici n prolongada del sustrato a la luz directa del sol La formulaci n en polvo contiene los siguientes compuestos anhidros por litro de sustrato preparado Ver Nota a pie de p gina Sulfato de amonio NH 250 5 00 g Sulfato de manganeso MnSO 0 0005 g Sulfato de zinc ZnSO 0 0005 g Sulfato de magnesio MgSO 0 10 g Cloruro de sodio NaCl 10 0 g Cloruro de calcio CaCl 0 05 g Sulfito de sodio Na SO 0 04 g Amfotericina B 0 001 g O Nitrofenil R D galactopiran sido 0 50 g 4 Metilumbeliferil B D glucor nido 0 075 g Solanio Ver Nota a pie de p gina 0 50 g Buffer Hepes de sal de sodio 5 39 Buffer Hepes de ac org nicos Ver Nota a pie de p gina 6 9g 5 Procedimiento 5 1 Procedimiento de tubos m ltiples Seleccione el n mero apropiado de tubos por muestra con medio predosificado para la prueba de tubos m ltiples y rotule Siga las instrucciones del fabricante para preparar la serie de diluciones As pticamente adicione 10 ml de muestra a cada tubo tape herm ticamente y agite vigorosamente para disolver La mezcla resultante es incolora Algunas part culas pueden resultar insolubles durante la prueba esto no afectar su desarrollo 2 Alternativamente se pueden utilizar productos con diferentes formulaciones debidamente acreditados 3 Solanio es una mezcla de diversos qu micos incluyendo antibi ticos Es propiedad de Environetics Branford Conn N
27. oundation Denver Colo Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 APENDICE INFORMATIVO B DETERMINACION DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES FECALES METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA 1 Fundamento Este m todo se basa en la filtraci n de una muestra para concentrar c lulas viables sobre la superficie de una membrana y transferirlas a un medio de cultivo apropiado para posteriormente contar el n mero de unidades formadoras de colonias UFC desarrolladas despu s de la incubaci n 2 Material Autoclave con term metro y man metro capaz de alcanzar temperaturas de esterilizaci n Material para envolver esterilizable papel kraft bolsas de pol mero resistentes al calor otros Membranas para filtraci n est riles con poro de 0 45 milimicras y cojinetes absorbentes de 47 mm de di metro Sistema de filtraci n Sistema de luz ultravioleta para esterilizaci n de las unidades de filtraci n Bomba de vac o 20 27 pulgadas Hg tuber a y aditamentos herm ticos para mantener el vac o Matraz Kitazato Cajas Petri desechables o de vidrio est riles de 50 x 90 mm Marcador indeleble o equivalente Pinzas de acero inoxidable Propipeta de 50 ml de capacidad Botellas de borosilicato con capacidad de 150 ml y tapa de rosca Pipetas bacteriol gicas de 1 2 5 10 y 25 ml de capacidad est riles y protegidas con tap n de algod n Utensilios est riles como cucharas cucharones picahielos
28. ras del agua de prueba antes y despu s de haberse sometido al tratamiento de acuerdo con la NOM 014 SSA1 1993 Se efect an cuentas microbianas en dichas muestras para constatar que se redujo el n mero de g rmenes en el agua tratada 4 Material y equipo Autoclave provisto de term metro y o man metro capaz de alcanzar temperatura de esterilizaci n de 121 2 C probado con term metro de m ximas Espectrofot metro con escala de Transmitancia o Nefel metro de Mc Farland Horno para esterilizar a 160 180 C Incubadora de aire con circulaci n mec nica para operar a una temperatura de 35 2 C Ba o de agua con circulaci n mec nica y mezcla de agua para operar a una temperatura de 44 5 0 2 C Potenci metro Pipetas serol gicas est riles de 1 y 10 ml de capacidad con graduaci n de una d cima de su volumen total Se recomienda contar complementariamente con pipetas de 2 5 y 11 ml de capacidad Tubos de cultivo de 22 x 175 mm 20 x 200 mm 16 x 160 mm y 10 x 100 mm con tapa met lica o de rosca Botellas de Roux Asa de platino o micromel Lunes 30 de octubre de 2000 DIARIO OFICIAL Segunda Secci n 45 Contador manual Contador de colonias Cajas de Petri est riles de 100 X 15 mm Mecheros Fisher o Bunsen Soluci n salina est ril al 0 85 8 5 g de cloruro de sodio grado anal tico en 1000 ml de agua 5 Medios de cultivo 5 1 Agar nutritivo A Extracto de carne 3 09 Peptona 5 0g
29. rias para los equipos de tratamiento que coadyuvar n a elevar la calidad del agua destinada al uso y consumo humano 1 Objetivo Esta Norma Oficial Mexicana establece los requisitos que deben cumplir los equipos de tratamiento de agua de tipo dom stico 2 Campo de aplicaci n Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas f sicas o morales que se dediquen al proceso e importaci n de los equipos a que se refiere esta norma 3 Referencias Para la correcta aplicaci n de esta Norma Oficial Mexicana es necesario consultar las siguientes 3 1 NOM 014 SSA1 1993 Procedimientos sanitarios para el muestreo de agua para uso y consumo humano distribuida por sistemas de abastecimiento p blicos y privados 3 2 NOM 041 SSA1 1993 Agua purificada envasada Especificaciones sanitarias 3 3 NOM 092 SSA1 1994 M todo para la cuenta de bacterias aerobias en placa 3 4 NOM 110 SSA1 1993 Preparaci n y diluci n de muestras de alimentos para su an lisis bacteriol gico 3 5 NOM 112 SSA1 1994 Determinaci n de bacterias coliformes T cnica del n mero m s probable 3 6 NOM 127 SSA1 1994 Salud Ambiental Agua para uso y consumo humano L mites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilizaci n Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 3 7 NOM 008 SCFI 1993 Sistema general de unidades de medida 4 Definiciones Para efec
30. te despu s retire la membrana con pinzas est riles y col quela sobre el medio selectivo con un movimiento circular a fin de evitar la entrada de aire Meter un control de 100 ml de soluci n buffer est ril cada 10 muestras para checar posible contaminaci n cruzada o buffer contaminado Incubar el control bajo las mismas condiciones de la muestra Usar unidades de filtraci n est riles al principio de cada serie de filtraciones como precauci n m nima para prevenir contaminaci n accidental Una serie de filtraciones se considera cuando hay un intervalo de interrupci n de 30 minutos o m s entre cada filtraci n de muestras Despu s de tales interrupciones tratar cualquier muestra como una serie de filtraci n y esterilizar toda la unidad de filtraci n en uso Descontaminar este equipo entre filtraciones sucesivas ya sea por medio de luz ultravioleta UV o esterilizando apropiadamente en autoclave de acuerdo con las caracter sticas del equipo No exponer la preparaci n de cultivo con el filtro de membrana al rango de radiaci n UV que pueda salir de la cabina de esterilizaci n Se recomienda protegerse los ojos pueden usarse lentes de seguridad o de vidrio prescritos para la adecuada protecci n contra la luz UV de la columna de esterilizaci n que no se a sle durante el tiempo de exposici n Limpie el tubo de UV regularmente y cheque peri dicamente su efectividad para asegurar que haya un 99 99 de muerte bacteriana en 2 minutos de exposi
31. ton D C 1995 EUA 10 Observancia de la norma La vigilancia en el cumplimiento de la presente norma corresponde a la Secretar a de Salud y a los gobiernos de las entidades federativas en sus respectivos mbitos de competencia 11 Vigencia La presente norma oficial mexicana estar vigente a los 60 d as naturales despu s de su publicaci n en el Diario Oficial de la Federaci n Sufragio Efectivo No Reelecci n M xico D F a 21 de septiembre de 2000 El Presidente del Comit Consultivo Nacional de Normalizaci n de Regulaci n y Fomento Sanitario Javier Castellanos Couti o R brica APENDICE NORMATIVO A METODO DE PRUEBA PARA EVALUAR LA EFICIENCIA EN REDUCCION BACTERIANA 1 Introducci n La eficiencia de un equipo en la reducci n bacteriana est dada por su capacidad para retener destruir o matar la carga microbiana presente en el agua cuando existe alguna contaminaci n eventual Esta eficiencia depende del dise o del equipo y el principio en que est basada su actividad 2 Objetivo Demostrar si el equipo cumple con las propiedades que le son atribuidas por el fabricante bajo las condiciones de operaci n descritas por el mismo 3 M todo Se inocula una fuente de agua con un n mero conocido de colonias del microorganismo seleccionado para probar la eficiencia del equipo Posteriormente el agua se somete al proceso descrito en el Instructivo del equipo proporcionado por el fabricante Se toman muest
32. tos de esta Norma Oficial Mexicana se entiende por 4 1 Bactericida a la sustancia o medio que mata o destruye bacterias 4 2 Bacteriost tico a la sustancia o medio que tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de bacterias sin matarlas o destruirlas 4 3 Equipo de tratamiento de agua de tipo dom stico al que se instala en punto de uso domiciliario de agua para beber o cocinar con prop sitos de retener matar destruir o inhibir las bacterias presentes en ella 4 4 Germicida al agente qu mico que destruye microorganismos especialmente pat genos lo que no necesariamente incluye la capacidad de destrucci n de esporas 4 5 M todo de prueba al procedimiento anal tico utilizado en el laboratorio para comprobar que un producto satisface las especificaciones que establece la norma 4 6 Vida til al tiempo que es til el equipo de potabilizaci n 5 S mbolos y abreviaturas El significado de los s mbolos y abreviaturas utilizados en esta Norma es el siguiente 51 C Grado Celsius 5 2 g Gramo 53 Litro 5 4 mi Mililitro 55 mm Mil metro 5 6 nm Nan metro 5 7 NMP N mero m s probable 5 8 pH Potencial de hidr geno 5 9 UFC Unidades formadoras de colonias 5 10 Por ciento 6 Clasificaci n Los equipos de tratamiento de agua de tipo dom stico objeto de esta norma se clasifican en la forma siguiente 6 1 Equipo dosificador de productos o sustancias qu micos bactericidas El equipo que dosifica un
33. ubo entre las dos manos para obtener una suspensi n bacteriana la cual se transfiere a un tubo est ril 9 2 Determinaci n de la concentraci n de organismos mes filos aerobios en la suspensi n de Escherichia coli utilizando uno de los dos m todos que se presentan en los puntos 9 2 1 y 9 2 2 9 2 1 M todo espectrofotom trico Determinar la concentraci n de bacterias en UFC ml utilizando la Tabla 1 Tabla 1 TRANSMITANCIA CON FILTROS UFC mI x 109 13 0 11 5 Segunda Secci n DIARIO OFICIAL Lunes 30 de octubre de 2000 Nota La calibraci n del aparato debe realizarse con soluci n salina est ril 9 2 2 M todo nefelom trico Determinar la concentraci n de bacterias en UFC ml utilizando la Tabla 2 Tabla 2 600 900 1 200 1 500 1 800 2 100 2 400 2700 3 000 9 3 Diluir la suspensi n bacteriana con soluci n salina est ril al 0 85 a la transmitancia o turbiedad elegida de acuerdo con la concentraci n de bacterias establecida en el punto 10 2 10 Preparaci n de agua de prueba 10 1 El agua de prueba se debe preparar con agua de sistema de abastecimiento p blico ajustada o que cumpla con los l mites permisibles de la NOM 127 SSA1 1994 en los par metros que incidan o afecten la eficiencia del equipo de tratamiento conforme al contenido del instructivo respectivo proporcionado por el fabricante o distribuidor al laboratorio acreditado que efect e la prueba 1
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