PROSPECTO INTERNACIONAL PRUEBA PARA DETERMINACIÓN
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1. consulte la secci n 4 Reactivos componentes Materiales necesarios pero no suministrados Equipo para la prueba CLA que comprende Soporte para c maras de prueba capaz de contener hasta 40 c maras de prueba Recipiente para drenaje de muestras Frasco dosificador de soluci n de lavado tamponada de 2 litros Micropipeta y puntas Recipientes desechables de 50 ml para reactivos Jeringa de 3 ml Probeta graduada o matraz aforado de 1 litro para preparar la soluci n de lavado tamponada e Agua desionizada o destilada e Tubos para separaci n de suero o con tap n rojo de 10 ml para la recogida de muestras e Centr fuga capaz de alcanzar 2 000 3 000 x g 2 500 3 600 rpm e Tubos de pl stico para almacenamiento limpios para la preparaci n de muestras e Toallas de papel absorbente Pa os limpios que no suelten pelusa Lumin metro CLA 1 Preparaci n de las c maras de prueba y de las muestras del paciente 1 Antes de usarlas centrifugue nuevamente las muestras de suero durante 10 a 20 minutos a 2 000 3 000 x g 2 500 3 600 rpm NOTA el uso del sistema de freno de la centr fuga puede hacer que el sedimento pellet se suelte y esto puede producir niveles altos de se al de fondo y resultados err neos Desactive el freno de la centr fuga antes de centrifugar las muestras de suero 2 Extraiga de la bolsa de pl stico las c maras de prueba que necesite una por cada muestra de suero2. 1030 Data available upon request EO STE G aea o 11 12 Para asistencia t cnica p ngase en contacto con Hitachi Chemical Diagnostics Fuera de los Estados Unidos p ngase en contacto con el representante local de Hitachi Chemical Diagnostics Hitachi Chemical Diagnostics Inc Hitachi Europe Ltd Hitachi Chemical Diagnostics Inc 630 Clyde Court Whitebrook Park Lower Cookham Road Mountain View California 94043 Tel 650 961 5501 Maidenhead Berkshire SL6 8YA United Kingdom Tel 44 0 1628 585 590 Paolo IAS Fax 44 0 1628 585 594 2000 Hitachi Chemical Diagnostics Inc CLA es una marca registrada de Hitachi Chemical Diagnostics Inc Fabricado bajo uno o m s de los siguientes n meros de patente de Estados Unidos 3 941 876 4 031 197 4 459 360 y patentes correspondientes extendidas en Canad Australia Jap n Espa a Francia Alemania Italia Suecia y Gran Breta a 4 510 393 4 558 013 5 567 149 y patentes correspondientes extendidas en Canad Australia Jap n Espa a Francia Alemania Italia Suecia Suiza Austria B lgica Pa ses Bajos Luxemburgo y Gran Breta a 4 568 184 285 485 4 743 541 y patentes correspondientes extendidas en Canad Australia Jap n Francia Alemania Suecia Suiza y Gran Breta a y 5 082 768 y patentes correspondientes extendidas en Jap n
3. el soporte para c maras de prueba 2 Extraiga el tap n superior de cada c mara de prueba y deje que el l quido escurra y caiga dentro del recipiente para el drenaje de muestras Anote la hora de finalizaci n de la incubaci n I Lave las c maras de prueba tres 3 veces tal como se describi en los pasos El a E4 J Prepare la mezcla fotorreactiva tal como se indica en la secci n 6 Preparaci n de los reactivos NOTA las c maras de prueba deben llenarse con la mezcla reactiva inmediatamente despu s del ltimo lavado para evitar que los filamentos se sequen K Llene las c maras de prueba con la mezcla fotorreactiva 1 Golpee suavemente la base del extremo de la c mara de prueba sobre una toalla de papel absorbente para eliminar los restos de la soluci n de lavado 2 Acople una jeringa a la parte superior de la c mara de prueba 3 Coloque la base de la c mara de prueba en un recipiente desechable con la mezcla fotorreactiva 4 Aspire lentamente con el mbolo de la jeringa de forma que introduzca la mezcla fotorreactiva en la c mara de prueba hasta cubrir el filamento m s alto Esto reducir la formaci n de burbujas de aire que podr an alterar los resultados de la prueba Tapone las c maras de prueba 1 Inserte el tap n blanco en la base de la c mara de prueba sin desconectar la jeringa de la parte superior de la c mara de prueba 2 Retire la jeringa e inserte el tap n negro que va en la
4. hasta la fecha de caducidad si se conserva refrigerado 2 8 C cuando no est siendo utilizado NOTA un frasco de reactivo con anticuerpo es suficiente para veinte 20 c maras de prueba con 36 alergenos Mezcla fotorreactiva Prepare la mezcla fotorreactiva inmediatamente antes de su uso Permita que los agentes fotorreactivos A B C y D alcancen la temperatura ambiente Utilice una micropipeta con punta desechable para combinar en un recipiente partes iguales de los agentes fotorreactivos A B C y D Se requiere un m nimo de 350 ul de cada agente fotorreactivo por c mara de prueba en cada ensayo es decir 1 4 ml de mezcla de agentes fotorreactivos por c mara de prueba NOTA para evitar la contaminaci n de los reactivos use una punta desechable nueva en la pipeta para cada agente fotorreactivo e Para mezclar efect e una rotaci n suave del recipiente NOTA la mezcla fotorreactiva debe ser utilizada en un plazo m ximo de 60 minutos tras la mezcla de los reactivos Instrucciones para la conservaci n e Conserve los componentes del kit a 2 8 C Si se conservan como se indica los componentes pueden utilizarse hasta las fechas de caducidad impresas en las etiquetas de cada componente No congele los componentes del kit El embalaje de las c maras de prueba consiste en una bolsa de pl stico que contiene una esponja humidificadora Aseg rese de que dicha bolsa est bien cerrada antes y despu s del uso Si
5. la esponja se seca humed zcala con la soluci n de lavado tamponada y vuelva a cerrarla adecuadamente Si se conservan en las bolsas bien cerradas a 2 8 C las c maras de prueba pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad impresa 1 Recoja una muestra de sangre venosa en un tubo de separaci n de suero o tubo con tapa roja de 10 ml No es necesario que el paciente est en ayunas No se requiere ning n preparativo en especial NOTA el suero hemolizado o el suero lip mico pueden afectar negativamente al rendimiento de la prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA 2 Permita que la sangre se coagule en el tubo durante 1 hora a temperatura ambiente 3 Centrifugue la sangre coagulada durante 10 a 20 minutos a 2 000 3 000 x g 2 500 rpm 4 Transfiera el suero a un tubo de pl stico para almacenamiento limpio y etiquetado adecuadamente 5 Las muestras de suero pueden conservarse a 2 8 C hasta un m ximo de una semana Para conservar durante per odos m s largos congele las muestras a 20 C NOTA debe evitarse congelar y descongelar repetidamente las muestras Despu s de descongelar una muestra congelada debe mezclarse muy bien la muestra antes de su centritugaci n EJ Procedimiento del ensayo Consulte la Gu a del usuario y manual de procedimiento para obtener instrucciones detalladas sobre c mo efectuar la prueba Materiales provistos Prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA
6. n de m todos in vitro para la alergia Como promedio la concordancia calculada como eficiencia entre cada prueba in vitro para alergenos CLA y las pruebas in vitro alternativas es de aproximadamente el 95 el intervalo de concordancia va del 86 al 100 Nota no existen alergenos de referencia est ndar para la comparaci n de m todos ni para la gran mayor a de los alergenos cl nicamente importantes pd Ej Bibliograf a shizaka K Ishizaka T Hornbrook MM J Immunol 1966 97 75 Johansson SGO Bennich H Immunol 1967 13 381 Kulczycki A J Allergy Clin Immunol 1981 68 5 Johansson SGO Bennich HH Berg T Prog Clin Immunol 1972 1 157 Homburger HA CRC Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 1986 23 279 Miller SP Marinkovich VA Riege DH Sell WJ et al Clin Chem 1984 30 1467 Agata H et al Ann Allergy 1993 70 153 Safety Management No CDC 22 Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts Atlanta GA Centers for Disease Control April 30 1976 U S Dept of Health and Human Services Centers for Disease Control Guidelines For Prevention of Transmission of Human Immunodeficiency Virus and Hepatitis B Virus to Health Care and Public Safety Workers February 1989 10 Richardson SH Barkley WE eds Biosafety in microbiological and biomedical laboratories 2nd ed Washington DC US Dept of Health and Human Services 1988 Federal OSHA Standard 1910 1030 Bloodborne pathogens 29 CFR 1910
7. Cierre bien la bolsa de pl stico y guarde en la nevera las c maras de prueba que no haya usado 3 Seque la humedad del exterior de cada c mara de prueba 4 Con la rejilla de colores mirando hacia abajo rotule cada c mara de prueba con la identificaci n correcta del paciente 5 Anote los n meros de lote del kit y del panel y los datos de identificaci n del paciente 6 Golpee suavemente el extremo de la c mara de prueba sobre una toalla de papel absorbente para eliminar todo l quido residual del interior de la c mara de prueba Procedimiento est ndar A Llene la c mara de prueba con suero 1 Acople la jeringa de 3 ml a la parte superior de la c mara de prueba 2 Inserte la base de la c mara de prueba en el tubo que contiene el suero del paciente Evite el contacto con precipitados o pel culas lip dicas 3 Aspire lentamente traccionando del mbolo de la jeringa de forma que el suero del paciente se introduzca en la c mara de prueba hasta cubrir el filamento m s alto Aseg rese de que el suero cubra completamente el filamento m s alto Esto reducir la formaci n de burbujas de aire que podr an alterar los resultados de la prueba B Tapone e incube las c maras de prueba 1 Sin desconectar la jeringa de la parte superior de la c mara de prueba inserte un tap n blanco en la base de la c mara de registro 2 Retire la jeringa e inserte un tap n negro en la parte superior de la c mara de prueba
8. HITACHI Hitachi Chemical Diagnostics Inc PROSPECTO INTERNACIONAL PRUEBA PARA DETERMINACION DE IgE ALERGENO ESPEC FICA CLA CE Para diagn stico in vitro Producto de un solo uso Doc No 0625 SPA Rev 07 Indicaciones de uso La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA CLA Allergen Specific IgE Assay es un ensayo in vitro para la determinaci n semicuantitativa de la concentraci n de IgE s rica humana circulante contra alergenos espec ficos Resumen y explicaci n de la prueba La alergia at pica es un trastorno inmunitario de hipersensibilidad mediado por una clase espec fica de anticuerpos s ricos denominados reaginas identificados como inmunoglobulinas E IgE a mediados de la d cada de los sesenta Cuando son estimulados por un alergeno espec fico los linfocitos B inmunocompetentes producen anticuerpos de clase IgE contra ese alergeno El anticuerpo IgE se une por medio de su fragmento Fc a los receptores presentes en la superficie de mastocitos y leucocitos bas filos La uni n subsiguiente de alergeno a la IgE espec fica unida a dichas c lulas induce la liberaci n de gr nulos celulares y la liberaci n de aminas vasoactivas fen menos que causan contracci n del m sculo liso prurito tumefacci n y p rdida de l quido extracelular a trav s de mucosas Las manifestaciones cl nicas m s comunes de estos procesos biol gicos son fiebre del heno asma dermatitis urticaria y shoc
9. NOTA los tapones deben introducirse completamente para evitar p rdidas 3 Coloque las c maras de pruebas llenas de suero en el soporte para c maras de prueba 4 Incube a temperatura ambiente durante 16 a 24 horas y anote la hora de comienzo de la incubaci n C Prepare la soluci n de lavado tal como se indica en la secci n 6 Preparaci n de reactivos D Deseche el suero 1 Extraiga el tap n inferior de la base de cada c mara de prueba y coloque nuevamente la c mara de prueba en el soporte para c maras de prueba 2 Extraiga el tap n superior de cada c mara de prueba y deje que el suero escurra y caiga dentro del recipiente para el drenaje de muestras Anote la hora de finalizaci n de la incubaci n E Lave las c maras de prueba 1 Purgue el dosificador de soluci n de lavado hasta eliminar todas las burbujas de aire 2 Conecte el extremo del tubo abierto del dosificador a la parte superior de la primera c mara de prueba 3 Lave sucesivamente cada una de las c maras de prueba con 10 ml de soluci n de lavado apretando una vez con fuerza moderada la bomba del dosificador NOTA espere a que todo el l quido se haya escurrido de la c mara de prueba antes de continuar con el paso siguiente 4 Repita el paso 3 dos veces m s para realizar un total de tres lavados NOTA las c maras de prueba deben llenarse con el reactivo con anticuerpo inmediatamente despu s del lavado para evitar que los
10. alino 0 01 M Tween 20 al 0 1 y azida s dica al 0 001 como agente conservante Cada kit para 20 pruebas 20 c maras de prueba Anticuerpo IgE Un frasco de 32 ml La soluci n contiene Soluci n de color azul con anticuerpo de cabra contra IgE humana marcado con enzima tamp n fosfato salino 0 01 M pH 7 2 estabilizadores proteicos Proclin al 0 1 como agente conservante Agente fotorreactivo A Un frasco de 8 ml La soluci n contiene Luminol 5 amino 2 3 dihidro 1 4 ftalazinediona 14 30 mM Agente fotorreactivo B La soluci n contiene Tamp n borato 0 05 M pH 9 4 Agente fotorreactivo C Soluci n de color rojo con Etil naranja 0 0025 M Agente fotorreactivo D La soluci n contiene Per xido de hidr geno 0 004 M Tapones de goma para la c mara de prueba color negro 22 Tapones Para la parte superior de las c maras de prueba Un frasco de 8 ml Un frasco de 8 ml Un frasco de 8 ml Tapones de goma para la c mara de prueba color blanco 22 Tapones Para la base de las c maras de prueba El kit puede adquirirse en varias configuraciones P ngase en contacto con el representante local de Hitachi Chemical Diagnostics para obtener m s informaci n Precauciones La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica es nicamente para diagn stico in vitro El concentrado de soluci n de lavado tamponada contiene azida s dica como agente conservante Se ha informado que la azida s dica
11. as recomendaciones para el manejo de cualquier muestra de suero o sangre humanos potencialmente infecciosos Cumpla con las precauciones universales o con las normativas de su centro para la manipulaci n de muestras de pacientes El volumen m nimo de suero humano que se requiere por cada c mara de prueba es C mara de prueba de 36 alergenos 1 4 ml de suero C mara de prueba de 16 o menos alergenos 0 8 ml de suero Debe seguirse el siguiente protocolo para la obtenci n preparaci n y Enjuague con agua destilada el dosificador de soluci n de lavado y las conservaci n de suero para uso en pruebas de alergia CLA tuber as Mezcle el contenido del frasco de concentrado de soluci n de lavado invirti ndolo suavemente varias veces Vierta el contenido del frasco de concentrado de soluci n de lavado 50 ml en una probeta graduada o un matraz aforado de 1 litro de capacidad que contenga 950 ml de agua destilada o desionizada Mezcle muy bien e Transfiera la soluci n al dosificador de soluci n de lavado Una vez preparada la soluci n de lavado tamponada puede utilizarse durante un m ximo de 1 mes siempre que se conserve a temperatura ambiente 20 25 C o refrigerada 2 8 C Reactivo con anticuerpo Permita que el reactivo con anticuerpo alcance la temperatura ambiente antes de su uso Invierta con suavidad el frasco de reactivo con anticuerpo antes de su uso El reactivo con anticuerpo puede usarse
12. de sus resultados consulte el prospecto de los sueros de control positivo y negativo para IgE CLA Las agencias reguladoras pueden requerir un uso m s frecuente de los sueros control positivo y negativo Consulte con la agencia reguladora correspondiente para obtener informaci n m s detallada Resultados El lumin metro CLA 1 mide la cantidad de luz emitida por los filamentos de las c maras de prueba El lumin metro mide la emisi n de luz en unidades de luminiscencia UL o Lux Para calcular la respuesta de IgE del paciente el instrumento resta autom ticamente el nivel de emisi n de luz del filamento control negativo blanco del nivel de emisi n de cada filamento para cada IgE espec fico Los valores CLA se clasifican de O a 4 seg n la cantidad de luz emitida por cada uno de los filamentos de la c mara de prueba A partir de estos valores se obtiene el sistema de puntuaci n de alergia en clases CLA para la prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA La correspondencia entre las cantidades de IgE los valores de la clasificaci n CLA y las lecturas del instrumento se muestran en la tabla siguiente Concentraci n de IgE espec fica para el alergeno por Clase CLA UL netas clases 4 gt 242 Se detectan niveles muy altos de anticuerpos 3 143 242 Se detectan niveles altos de anticuerpos 2 66 142 Se detectan niveles moderados de anticuerpos 1 27 65 Se detectan niveles bajos de anticuerp
13. del suero b Examine cada una de las c maras de prueba para inspeccionar el movimiento del suero mientras el agitador rotativo est en marcha c Si el suero no fluye suavemente de un extremo al otro de la c mara de prueba i Detenga el agitador rotativo retire la c mara de prueba y golp ela suavemente contra alguna superficie ii Vuelva a colocar la c mara en el agitador rotativo iii Reanude la rotaci n e inspeccione el movimiento del suero iv Repita estos pasos si fuera necesario C G Siga el procedimiento descrito anteriormente en Procedimiento est ndar H Tapone e incube las c maras de prueba 1 Inserte el tap n blanco que va en la base de la c mara de prueba sin desconectar la jeringa acoplada a su parte superior 2 Retire la jeringa e inserte el tap n negro en la parte superior de la c mara 3 Coloque las c maras de pruebas llenas de reactivo en el soporte para c maras de prueba Incube a temperatura ambiente durante 3 horas 15 minutos y anote la hora de comienzo de la incubaci n Nota no haga rotar las c maras de prueba durante la fase de incubaci n con el reactivo con anticuerpo l N Siga el procedimiento descrito anteriormente en Procedimiento est ndar Control de calidad A Filamentos de control interno Cada c mara de prueba contiene filamentos de control positivo para el procedimiento y filamentos de control negativo blanco Estos filamentos sirven como ind
14. filamentos se sequen F Llene la c mara de prueba con el reactivo con anticuerpo 1 Golpee suavemente la base de la c mara de prueba sobre una toalla de papel absorbente para eliminar todo resto de soluci n de lavado 2 Acople la jeringa de 3 ml a la parte superior de la c mara de prueba 3 Coloque la base de la c mara de prueba dentro del recipiente que contiene el reactivo con anticuerpo Utilice un recipiente desechable para poner el reactivo con anticuerpo 4 Aspire lentamente con el mbolo de la jeringa de forma que introduzca el reactivo con anticuerpo en la c mara de prueba hasta cubrir el filamento m s alto NOTA aseg rese de que el reactivo con anticuerpo cubra completamente el filamento m s alto Esto reducir la formaci n de burbujas de aire que podr an alterar los resultados de la prueba G Tapone e incube las c maras de prueba 1 Inserte el tap n blanco en la base de la c mara de prueba sin desconectar la jeringa de la parte superior de la c mara de prueba 2 Retire la jeringa e inserte el tap n negro que va en la parte superior de la c mara 3 Coloque las c maras de prueba llenas de reactivo en el soporte para c maras de prueba Incube a temperatura ambiente durante 4 horas 15 minutos y anote la hora de comienzo de la incubaci n H Deseche el reactivo con anticuerpo 1 Extraiga el tap n inferior de la base de cada c mara de prueba y coloque cada c mara de prueba nuevamente en
15. formaci n de grietas en el pl stico del soporte y a fallos prematuros en su funcionamiento Valores esperados La distribuci n en clases CLA se determin originalmente mediante estudios cient ficos que establecieron curvas de calibraci n utilizando suero que conten a anticuerpos de clase IgE espec ficos contra componentes del abedul blanco El umbral de corte entre resultados positivos y negativos se defini estad sticamente como dos desviaciones est ndar por encima del valor promedio de la poblaci n normal e Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia esperados para la poblaci n de inter s Caracter sticas de rendimiento del procedimiento est ndar A Precisi n Intraensayo se procesaron 5 replicados de cuatro muestras de suero en una sola serie El promedio del coeficiente de variaci n medio de las respuestas de todos los alergenos analizados fue del 11 7 estimados en forma de UL netas Entre ensayos se procesaron 5 replicados de cuatro muestras de suero en cuatro d as distintos El promedio del coeficiente de variaci n de las respuestas de todos los alergenos analizados fue del 11 6 estimados en forma de UL netas B Sensibilidad El l mite de detecci n de la prueba es 10 UL C Especificidad No se detect reacci n cruzada con las inmunoglobulinas s ricas humanas IgA IgM IgG o IgD cuando las concentraciones eran las fisiol gicas y normales D Comparaci
16. icadores internos en cada c mara de prueba Control positivo para el procedimiento el control positivo para el procedimiento comprueba el rendimiento de los reactivos del kit Los controles positivos para el procedimiento deben producir lecturas superiores o iguales a 243 UL en el lumin metro CLA 1 Control negativo blanco el control negativo blanco compensa cualquier uni n no espec fica de IgE que se pueda producir El control negativo blanco debe dar lugar a una lectura inferior o iguales a 33 UL en el lumin metro CLA 1 Resultados inaceptables de los controles internos si el resultado de cualquiera de los controles internos no estuviera dentro de los l mites aceptables definidos anteriormente debe realizarse lo siguiente Coloque nuevamente la c mara de prueba en el chasis de alojamiento de la c mara de prueba asegur ndose de insertarla completamente y efect e una nueva lectura Si los resultados siguen siendo inaceptables consulte las secciones 6 y 7 de la Gu a del usuario y manual de procedimiento B Sueros de control IgE positivo e IgE negativo Hitachi Chemical Diagnostics recomienda que cada lote nuevo de reactivos y c maras de prueba de kits de la prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA sean sometidos a prueba con dos tipos de sueros de control suero de control positivo para IgE CLA y suero de control negativo para IgE CLA Para obtener instrucciones sobre su uso y la aceptabilidad
17. k anafil ctico La valoraci n en un paciente del nivel de IgE contra varios alergenos es til para el diagn stico y tratamiento de la alergia at pica La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA se basa en una modificaci n no isot pica del m todo original de radioalergoabsorbencia RAST sigla en ingl s de radioallergosorbent test y permite la determinaci n simult nea en un paciente de los niveles de IgE contra varios alergenos espec ficos Se obtienen resultados semicuantitativos usando un sistema de clasificaci n similar al utilizado en las pruebas RAST Todos los paneles de alergenos de las pruebas CLA incorporan controles internos que eval an el rendimiento del ensayo y compensan la uni n no espec fica en la muestra de suero del paciente La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA combina la especificidad y sensibilidad de los m todos RAST con la comodidad y simplicidad de las pruebas no isot picas para determinaci n simult nea de varios alergenos Principio de la prueba La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA se realiza en un peque o dispositivo de pl stico denominado c mara de prueba en el cual el suero del paciente se pone en contacto simult neamente con varios alergenos o mezclas de alergenos La c mara de prueba contiene una serie de filamentos individuales de celulosa cada uno de los cuales tiene unido de forma covalente un alergeno o una
18. la pipeta Statpet para transferir suero a la c mara de prueba La c mara de prueba debe llenarse con suero s lo hasta la mitad NOTA empuje el mbolo de la pipeta Statpet antes de poner en contacto la base de la c mara de prueba con las muestras de suero La inyecci n de aire dentro de la muestra de suero puede disgregar el precipitado presente en el fondo del tubo de muestra B Tapone las c maras de prueba m ntelas en el agitador rotativo y h galas rotar 1 Sin desconectar la pipeta Statpet de la parte superior de la c mara de prueba inserte un tap n blanco en la base de la c mara de prueba 2 Retire la pipeta Statpet e inserte el tap n negro en la parte superior de la c mara de prueba NOTA los tapones deben introducirse completamente para evitar p rdidas 3 Para cubrir todos los filamentos con suero incline 45 la c mara de prueba ya conectada y golpee suavemente un extremo de la c mara hasta que el suero fluya hacia el extremo que se encuentra en la posici n m s baja A continuaci n invierta la posici n de la c mara y golpee suavemente de nuevo hasta que el suero fluya hacia el otro extremo 4 Monte las c maras de prueba en el soporte del agitador rotativo CLA 5 Rote las c maras de prueba como se indica a continuaci n a Programe el reloj del agitador rotativo para 3 horas de rotaci n y d comienzo a la rotaci n Anote la hora de comienzo y de detenci n de la rotaci n para la incubaci n
19. mezcla de alergenos Cada c mara de prueba contiene tambi n un control negativo blanco y un control positivo para el procedimiento La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA se efect a llenando la c mara de prueba con el suero del paciente La IgE del suero se une durante la incubaci n a los filamentos de celulosa recubiertos de alergeno A continuaci n se lava la c mara de prueba con una soluci n tamponada para eliminar los componentes de suero no unidos Posteriormente se agrega a la c mara de prueba un anticuerpo contra IgE marcado con enzima el cual se unir a la IgE s rica previamente unida a los filamentos de celulosa Despu s de un segundo lavado se llena la c mara de prueba con una mezcla fotorreactiva que reacciona con el anticuerpo marcado y produce quimioluminiscencia La cantidad de luz emitida por cada filamento es directamente proporcional a la cantidad de IgE espec fica para los alergenos presentes en el suero del paciente El Reactivos componentes Prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA Conserve a una temperatura de 2 a 8 C hasta la fecha de caducidad No congelar Descripci n de los componentes contiene C maras de prueba Alergenos o mezclas de alergenos espec ficos unidos covalentemente a los filamentos de celulosa Concentrado de soluci n de lavado tamponada Dos frascos de 50 ml cada uno Al diluirla esta soluci n contiene tamp n fosfato s
20. os 0 1 12 26 Se detectan niveles muy bajos de anticuerpos 0 0 11 No se detectan anticuerpos Los valores de 1 0 o superiores en la clasificaci n CLA indican concentraciones progresivamente crecientes de anticuerpos contra alergenos espec ficos La clase CLA 0 indica ausencia o niveles no detectables de anticuerpos contra alergenos espec ficos Limitaciones de la prueba El suero hemolizado o lip mico puede afectar negativamente al rendimiento de la prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA El diagn stico cl nico definitivo y los reg menes de administraci n de inmunoterapia no deben basarse nicamente en los resultados de ninguna prueba diagn stica aislada sino que deben ser formulados por el m dico despu s de la valoraci n de todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio e La prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica CLA proporciona resultados semicuantitativos El m todo no tiene un est ndar absoluto y sus niveles se clasificaci n se definieron arbitrariamente Puesto que la capacidad de uni n del anticuerpo de clase IgE espec fico puede variar de alergeno a alergeno el hecho de que alergenos diferentes sean clasificados de manera similar no implica necesariamente una equivalencia cl nica En las pruebas de alergia a alimentos podr a no ser posible detectar los anticuerpos de clase IgE circulantes si stos est n dirigidos contra formas alteradas de los alergen
21. os p ej cocinados procesados o digeridos y estas formas alteradas poseen caracter sticas diferentes a las de los alergenos alimentarios utilizados en la prueba Los resultados falsos positivos en pruebas efectuadas en personas con alergia a alimentos pueden llevar a restricciones inapropiadas en la dieta mientras que los resultados falsos negativos en personas con sensibilidad a los alimentos pueden dar lugar a reacciones anafil cticas de distinto grado de gravedad En las pruebas de alergia a alergenos inhalados los resultados falsos positivos pueden conducir a la prescripci n de medicaci n inadecuada para esas personas Los resultados falsos negativos pueden llevar a omitir un tratamiento m dico adecuado Una respuesta de IgE alergeno espec fica de nivel bajo debe interpretarse con cuidado si los valores totales de IgE son superiores o iguales a 500 Ul ml La obtenci n de resultados fiables y reproducibles requiere que los procedimientos de la prueba se efect en cumpliendo estrictamente las instrucciones de uso del producto y buenos procedimientos de control de calidad e Se ha observado que la contaminaci n con hipoclorito de sodio puede alterar la prueba El material de laboratorio que haya sido descontaminado con hipoclorito de sodio debe ser aclarado profusamente con agua destilada o desionizada NOTA el uso de soluciones que contengan alcohol para la desinfecci n del soporte para c maras de prueba llevar a la
22. parte superior de la c mara 3 Examine las c maras de prueba taponadas para ver si hay p rdidas de l quido 4 Elimine todo resto de mezcla fotorreactiva de la parte externa de las c maras de prueba utilizando un pa o limpio h medo que no suelte pelusa M Incube las c maras durante 20 minutos antes de leer los valores en el lumin metro Deben leerse los resultados de todas las c maras de prueba en un plazo m ximo de 60 minutos tras la introducci n del agente fotorreactivo N Para la lectura de los resultados consulte la Gu a del usuario y manual de procedimiento Procedimiento alternativo en el mismo d a NOTA los estudios propios del fabricante han mostrado una importante reducci n de la sensibilidad cuando el procedimiento se completa en el mismo d a Cada laboratorio debe determinar si el procedimiento alternativo es apropiado para sus aplicaciones espec ficas Se requiere un kit agitador rotativo CLA que comprende Equipo principal con su cable de alimentaci n Soporte para c maras de prueba Instrucciones de uso Pipeta Statpet de 750 uL A Llene la c mara de prueba con suero 1 Inserte la pipeta Statpet incluida en el kit agitador rotativo en la parte superior de la c mara de prueba 2 Inserte la base de la c mara de prueba en el tubo que contiene el suero del paciente Evite el contacto con precipitados o pel culas lip dicas 3 Empuje y luego suelte suavemente el mbolo de
23. reacciona con el plomo o el cobre de las ca er as y forma azidas met licas potencialmente explosivas Por lo tanto tome las precauciones adecuadas cuando deseche este reactivo y siempre haga correr suficiente cantidad de agua para prevenir la acumulaci n de azidas met licas en los sistemas de ca er as e Nouse los componentes del kit despu s de la fecha de caducidad La fecha de caducidad est impresa en cada uno de los componentes Los reactivos provistos en los kits de la prueba para determinaci n de IgE alergeno espec fica pertenecen a lotes compatibles No los mezcle El Obtenci n y preparaci n de muestras con los lotes de reactivos de otros kits e Se ha observado que la contaminaci n con hipoclorito de sodio lej a puede alterar la prueba 6 Preparaci n de los reactivos Soluci n de lavado tamponada e Deje que el concentrado de soluci n de lavado tamponada alcance la temperatura ambiente Compruebe que todos los cristales salinos se hayan disuelto Si quedan cristales sin disolver coloque el frasco de concentrado de soluci n de lavado con su tapa bien ajustada dentro de una cubeta con agua tibia hasta que se hayan disuelto todos los cristales No use componentes del kit que presenten signos de deterioro Los signos de deterioro comprenden olores fuera de lo normal aspecto turbio y otras indicaciones de contaminaci n Manipule las muestras del paciente y los componentes usados del kit seg n l
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