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BPG ES.book - GE Healthcare Life Sciences

1. dispone de mallas con porosidades de 10 12 23 y 54 um Un tama o inadecuado de la malla puede producir problemas de retropresi n o p rdidas del gel Los tama os de malla recomendados son los siguientes Tabla 5 2 Tama os de malla recomendados para columnas BPG Tama o de malla um Material Tama o de cuenta um 10 PA 30 70 12 PEEK 30 70 23 PP3 FF gel 54 PP BB gel 1 Poliamida 2 Poli ter ter cetona 3 Polipropileno 44 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 5 13 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo Para establecer el flujo de empaquetado ptimo para columnas BPG proceda de la siguiente forma PASO 1 V lvula Cerrada SA Fig 5 1 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 1 recipientes cerrado para evitar la presencia de gas o un vertido en la zona de 1 iADVERTENCIA Intente siempre mantener los l quidos peligrosos en trabajo PASO 1 a Humedezca el filtro de la columna con etanol al 20 para eliminar el aire atrapado Llene la columna con 10 15 cm de tamp n de empaquetado Drene los tubos para eliminar todas las burbujas de aire Conecte un tubo en el lado de succi n de una bomba 2 0 y Ponga la bomba en marcha coloque el tubo sobre la malla inferior y extraiga las burbujas de aire atrapadas bajo la malla Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 45 5 Fun
2. Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 13 1 1 7 Objetivo de este manual 14 1 6 1 Materiales y sustancias Para proceder a su destrucci n los materiales usados se dividen en las siguientes categor as e inflamables e Madera e Materiales compuestos por ejemplo recubiertos con pl stico o con una capa de metal e Papel e No inflamables e Metal Nota Los metales peligrosos o que contiene materias peligrosas como plomo cadmio mercurio etc deben separarse y eliminarse de forma controlada e Los pl sticos se separan en duros lendurecidos y blandos t rmicos e Material para compostaje todos los materiales que se podr n trans formar en abono en un futuro pr ximo e Material de dep sito ciertos materiales que no pueden reciclarse y deben depositarse Para su dep sito contacte con las autoridades locales 1 6 2 Columnas BPG Antes de desechar el equipo de la columna es necesario e Vaciar limpiar y esterilizar la columna e Para metales no inflamables como el acero inoxidable contacte con una empresa local de eliminaci n de residuos de confianza 1 7 Objetivo de este manual Este manual se ha dise ado como introducci n general y gu a para utilizar la columna Espec ficamente el manual incluir e Introducci n Cap tulo 1 e Desempaquetado de la columna Cap tulo 2 e La columna BPG Cap tulo 3 e Instalaci n y test de estanqueidad Cap tulo 4 e Funcionamiento Cap tu
3. culos se refieren a las Figuras A 1 y A 2 Art Descripci n Material En contacto Cant BPG 100 BPG 140 BPG 200 culo con l quido paq N ref N ref N ref n del proceso 1 Tubo de la columna 500 Vidrio borosilicado 8 0251 0 8 1112 95 8 1152 01 Tubo de la columna 750 Vidrio borosilicado 1 8 0251 02 8 1152 02 Tubo de la columna 950 Vidrio borosilicado il 8 0251 03 8 1112 96 8 1152 03 2 Varilla para tubo 500 316 1 8 1105 80 8 1105 83 8 1105 83 Varilla para tubo 750 316 1 8 1105 8 8 1105 84 Varilla para tubo 950 316 1 8 1105 82 18 1105 85 18 1105 85 3 Segmento de ajuste PTFE 1 8 0251 22 18 1112 97 8 0252 22 4 Malla 54 um base PP a 2 8 1126 97 18 1126 99 18 1127 0 Malla 23 um base PP 2 8 9252 0 8 1113 00 8 9254 0 Malla 10 um base PA 2 8 0251 77 8 1113 02 8 0252 77 Malla 12 um base PEEK 2 8 1148 38 8 1148 40 8 1148 42 5 Malla de soporte base PP 2 8 0251 55 8 1112 98 8 0252 55 6 Reborde de la junta de cierre EPDM 2 8 8494 0 8 1113 06 8 8489 0 7 Reborde de la junta de cierre FEP 1 8 0019 4 8 1113 07 8 0019 5 8 Tuerca M6 316 5 9 1582 0 z z Tuerca M8 316 5 9 0763 01 9 0763 0 9 Arandela de muelle 316 4 8 8482 0 8 8482 01 8 8482 0 0 Brida 316 8 1
4. 33 que sujetan el tubo de entrada 5 Retire la junta de cierre vieja 32 y des chela De esta forma se completa el desmontaje del adaptador Montaje del adaptador 1 Coloque la nueva junta de cierre 32 lubricada etanol 20 entre el tubo de entrada 31 y el adaptador 38 Apriete los tornillos de cabeza hexagonal 33 2 Deslice el resorte 34 sobre el tubo de entrada 3 Descienda con cuidado el tornillo del adaptador 29 y la tapa 17 sobre el tubo de entrada 4 Atornille los tornillos de fijaci n 39 en el adaptador y apri telos Ahora el adaptador se ha vuelto a montar Montar un tubo de extensi n dispositivo del paquete El dispositivo de empaquetado de BPG 450 es un tubo de extensi n de acero inoxidable Para montar el tubo de extensi n en una columna BPG 450 proceda de la siguiente forma 1 Retire el adaptador de la columna y coloque el tubo de extensi n de acero inoxidable en la brida superior Aseg rese de que la junta de cierre est colocada correctamente en la brida 2 Utilice los tornillos de fijaci n entregados con el tubo de extensi n para ajustar el tubo de extensi n en la columna La columna extendida est lista para usar en el primer paso de empaquetado de los procesos de empaquetado en dos etapas Nota Retire el tubo de extensi n despu s del paso inicial de sedimentaci n Inserte el adaptador y siga empaquetando Se necesita un tubo de 15 cm de longitud para instalar el adaptador
5. adaptador PP 2 8 1103 04 8 1112 99 8 0252 56 36 Malla 54 um adaptador PP 2 8 1126 96 8 1126 98 8 1127 00 Malla 23 um adaptador PP 2 8 1103 08 8 1113 01 8 9253 01 Malla 10 um adaptador PA 2 8 1103 05 8 1113 03 8 0252 76 Malla 12 um adaptador PEEK 2 8 1148 37 8 1148 39 8 1148 41 37 Junta 25 mm EPDM 2 8 0019 27 8 0019 27 8 0019 27 38 Patas soporte 316 1 8 1126 93 8 1126 93 8 1126 93 39 Rueda 3 8 1001 09 8 1001 09 8 1001 09 40 V lvula de 4 conexiones 2 v as 316L PTFE 1 8 5757 01 8 5757 01 8 5757 01 41 Tubos 1 42 Arandela de muelle PP 1 8 1142 79 NA NA 43 Arandela de muelle PP 1 8 1142 80 8 1142 80 8 1142 80 Consulte la Tabla 3 3 en la Gu a de mantenimiento de BPG Tubo i d 4 mm BPG 100 6 mm BPG 140 y 200 Comparable a 316L Tabla A 2 Componentes de las columnas BPG 300 Los n meros de los art culos se refieren a las Figuras A 3 y A 4 Art Descripci n C digo n mero Material En contacto con Cant culo n l quido del paq proceso 1 Brida del adaptador 8 1012 48 316 1 2 Tuerca M12 8 1012 24 316 6 3 Arandela de muelle 8 1012 25 316 6 4 Tuerca M10 8 1012 44 316 5 5 Brida 316 6 Junta de cierre 301 x 6 mm 8 1012 26 EPDM gt 2 7 Junta de cierre 301 x 6 mm 8 1012 27
6. ficas utilizando hasta 131 litros de gel Adem s permiten aplicar altas velocidades de flujo La utilizaci n de las columnas BPG conjuntamente con Geles BioProcess como Sepharose Fast Flow y Sephacryl High Resolution es la mejor manera de alcan zar los m s estrictos niveles de calidad Los materiales de fabricaci n de las columnas BPG se han seleccionado especialmente para resistir los agentes de lavado y sanitizaci n como el hidr xido de sodio y el etanol Gracias a las especificaciones de presi n y su resistencia a flujos bajos estas columnas pueden utilizarse con geles BioProcess en cromatograf as de intercambio i nico de interacci n hidrof bica de afinidad y de gel filtraci n Tambi n puede emplearse Sephadex G 25 de tama o de poro ancho medio fino y super fino El sistema de distribuci n de flujo se ha desarrollado para ajustarse al alto rendimiento de los geles de GE Healthcare Las columnas BPG se suministran completas con un adaptador Hay disponibles dispositivos de empaquetado para pedidos en los que se soliciten alturas de lecho suplementarias Este manual tambi n incluye protocolos de montaje de la columna y de empaquetado con geles BioProcess Los protocolos de mantenimiento espec ficos de cada proceso en particular est n reflejados en una secci n especial de la Gu a de mantenimiento de las columnas BPG Cap tulo 1 Al final del manual encontrar unos desplegables en los que se explican los tres pr
7. lvula de seguridad conectada directamente despu s de la bomba Ponga en marcha la bomba y elimine el aire de los tubos desde la bomba bombeando con un flujo bajo Durante el bombeo con un flujo bajo conecte un man metro entre la bomba y la columna y luego conecte los tubos a la parte superior de la columna Abra la v lvula inferior Establezca una curva de presi n flujo empezando con un flujo bajo El gel empezar a sedimentar dejando un espacio claro entre el lecho y el adaptador NO ajuste el adaptador Aumente lentamente la presi n y registre el flujo una vez estabilizada la presi n El tiempo que tarda en estabilizarse la presi n depende del tipo de gel puede tardar desde unos minutos hasta unas horas Siga aumentando la presi n hasta que se alcance la meseta del flujo una presi n aumentada no da flujos m s altos No se producir meseta en el caso de algunos geles r gidos En estos casos utilice un flujo con la presi n m xima permitida para la columna La determinaci n concluir una vez alcanzada la presi n m xima Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 PASO 8 Curva de presi n flujo gt Flujo de empaquetado Velocidad de flujo Presi n de empaquetado Presi n m x 70 o ys 2 gt Presi n Fig 5 8 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 8 PASO 8 a Represente gr ficamente la presi n contra el fl
8. 1 Afloje los tornillos de fijaci n 44 para separar el tubo de la columna 12 incluidas las bridas 3 de la base 1 Levante con cuidado el tubo de la columna y ret relo Si la junta de cierre se adhiere al tubo de vidrio o a la base humed zcalo con etanol al 20 y luego ret relo 2 Para cambiar las juntas de sellado de la brida superiores e inferiores afloje los tornillos de cabeza hexagonal 7 y levante y retire la brida superior Retire el tubo de vidrio y sustituya la junta de cierre inferior Vuelva a colocar el tubo de vidrio y ajuste la nueva junta de cierre superior Por ltimo acople la brida superior Alinee con cuidado el tubo de vidrio con las bridas De esta forma se completa el procedimiento de desmontaje del adaptador Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 29 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje 30 Montaje de la columna Para montar la columna BPG 450 consulte la Figura A 5 y la Tabla A 3 y proceda de la siguiente forma 1 Con respecto a la Figura 4 6 compruebe que las siguientes piezas est n colocadas correctamente en la base Placa de distribuci n 41 Interruptor de resorte 36 Malla de soporte 2 Malla del filtro 5 Sello en forma de U 4 montado en la malla del filtro Nota Humedezca la malla del filtro con etanol al 20 para eliminar el aire atrapado Fig 3 6 Situaci n de la base en las columnas BPG 450 2 Coloque con cuidado el tubo de
9. 7 Fig 3 2 Representaci n de la base en las columnas BPG 100 140 y 200 2 Fije la base 12 al soporte 15 con los tornillos de fijaci n 13 y las arandelas de muelle 14 Con cuidado coloque el tubo de vidrio 1 sobre la junta de cierre 6 7 de la base 12 Compruebe que el tubo de vidrio no est en contacto con acero inoxidable Alinee el tubo con la malla del filtro 4 Atornille las varillas de soporte 2 a la base 12 Coloque la brida 10 de forma que las varillas de soporte 2 encajen en los orificios correspondientes Aseg rese de que las juntas de sellado 6 7 de la brida est n alineadas con el tubo de vidrio El tubo de vidrio no debe tocar acero inoxidable de lo contrario el tubo de vidrio puede romperse Alinee la superficie interna del tubo de vidrio con la superficie interna de la brida Monte las arandelas de muelle 9 y las tuercas 8 en las varillas de soporte 2 y apri telas a mano Seg n las especificaciones de la Tabla 4 1 utilice una llave dinamom trica para apretar las tuercas 8 y las arandelas de muelle 9 para ajustar las varillas de soporte 2 a la brida 10 Siga la secuencia de pasos de la Figura 4 1 es decir apriete las tuercas en el orden 1 2 3 4 de la figura dibujando una cruz A ADVERTENCIA Si aprieta demasiado fuerte estas cuatro tuercas en las varillas de soporte las que ajustan la brida y la base al tubo de la columna el tubo de vidrio se rompe
10. Aseg rese de que el agua utilizada con la columna no tiene part culas ya que stas pueden bloquear y da ar las mallas Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Sumario Precauciones de seguridad errar 5 T Introducti N a nn o trar 9 Ut General assess Sala 9 1 2 Etiquetado dela columna srta ssssesoiosienemniiaiiaiesqets tos amremicisaetos 10 1 3 Seguridad venlle e ee gado dd gas 1 3 1 Conlara 1 3 2 Advertencias 133 Avisos de precauci n 1 3 4 NOS iniia 1 3 5 Resistencia qu mica 1 3 6 Uso en atm sferas potencialmente explosivas 11 1 4 Operadores aprobados rivero loma ans 12 1 5 Almacenamiento de columnas BPG llenas de geles 12 1 5 1 Limpieza con NaCl despu s del uso TG Elimindci ny reciclado ercer iii 1 6 1 Materiales y SUSTANCIAS nnnnnnnonnrmmmmmsssssesmess 1 6 2 Columnas BRG siiin abba 17 Objetivo de este Manual seesisnrarinieianiinreiuariiiiia 2 Desempaquetado de la columna 17 2 1 C digos para los tubos y de la columna y los A CN 17 2 2 Componentes suministrados uenoccccennnnnmmermmrmees 18 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje 3 11 BPG 100 140 Y OO ea EUA EU a UI 312 BPG 300 3 1 3 BPG 450 3 2 CONEXIONES cria isis 3 3 Toma de tierra de la columna coccion 32 34 Testdeestanqueidad sisiaaimesnisiiio cnica 33 amp gt Locolumna
11. V lvula Fig 5 12 M todo de empaquetado de la columna paso 9 PASO 9 a Ajuste la junta de cierre del adaptador girando el mando BPG 100 140 y 200 o el asa ajustadora de sellado BPG 300 y 450 en el sentido de las agujas del reloj b Abra la v lvula inferior c Ponga en marcha la bomba Ajuste el flujo al recomendado para el empaquetado Compruebe el man metro para asegurarse de que la presi n no supera la presi n m xima del gel consulte el manual de usuario para cada gel El lecho se volver a comprimir hasta el nivel de la marca en la columna realizado en el paso 7 e Repita los pasos 7 y 8 hasta que el adaptador alcance la marca en la columna Nota No abra la junta de cierre del adaptador cuando quede un m ximo de 1 cm de l quido En su lugar utilice el asa ajustadora de la altura para atornillar el adaptador hasta el ltimo cent metro restante Nunca descienda el adaptador m s de 5 mm como m ximo dentro del lecho Desconecte los tubos de la parte superior de la columna para poder eliminar el exceso de tamp n a trav s de la parte superior del adaptador Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 55 5 Funcionamiento 5 2 Evaluaci n de la columna 56 Ello finaliza el procedimiento de empaquetado de la columna Limpie los restos de tamp n o suspensi n desde la parte superior del adaptador El espacio existente entre la cabeza del adaptador y la parte superior de la columna debe estar seco y l
12. a hendidura en la base del anillo de la malla del filtro Retire la malla del filtro 41 42 girando una esp tula o una hoja roma similar de acero inoxidable en la hendidura Retire la malla de soporte 40 2 Retire el tornillo gu a 28 y la tuerca de cierre 27 de la brida 26 Libere la unidad de cierre 30 y la camisa del adaptador 35 desatornillando los tornillos de fijaci n 31 de la arandela superior de la unidad de cierre 4 Retire cuidadosamente el volante de cierre 23 liberando la tensi n del resorte 38 situado bajo la camisa del adaptador 35 5 Retire el conjunto de piezas de la parte superior 24 a 26 29 y 32 y sep relo del mbolo externo del adaptador 36 haci ndolo girar en el sentido de las agujas del reloj Retire la unidad de cierre 30 y la junta de cierre del adaptador 33 34 Retire el mbolo externo del adaptador 36 la camisa interna del adaptador 35 y el resorte 38 quitando los tornillos 37 de la placa del adaptador 39 8 Puede desmontar el conjunto de piezas de la parte superior 24 26 29 y 32 quitando los tornillos 32 De esta forma se completa el procedimiento de desmontaje del adaptador Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 27 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje 28 Montaje del adaptador Para montar el adaptador en las columnas BPG 300 consulte la Figura A 3 y proceda de la siguiente forma 1 2 10 11 12 Coloque los
13. anteriormente 3500 BPG 100 3000 2500 BPG 140 H w U O o O o o Flujo cm h 1000 BPG 200 500 0 02 04 06 08 1 12 14 16 18 2 22 24 26 28 3 Presi n de en bar Fig 4 2 Ejemplos de curvas de presi n flujo para columnas BPG 100 140 y 200 vac as Flujo cm h T099 BPG 300 800 BPG 450 600 400 200 0 0 05 0 1 0 15 0 2 0 25 0 3 0 35 0 4 0 45 0 5 Presi n en bares Fig 4 3 Curvas de presi n flujo para columnas BPG 300 y 450 vac as Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 39 4 La columna BPG 4 4 Curvas de presi n flujo 4 4 2 Curvas de presi n flujo para columnas empaquetadas Las figuras 3 4 a 3 6 muestran las curvas de presi n flujo para columnas BPG empaquetadas obtenidas utilizando el m todo presentado en la secci n M todo de empaquetado de la columna P gina 51 y la configuraci n mostrada en la Fig 3 Fi ll Flujo cm h BPG 100 70 60 En BPG 200 BPG 300 40 30 20 10 5 0 6 0 Presi n de en bar y 4 4 Curva de presi n flujo para Superdex 200 grado prep en columnas BPG Altura del lecho 60 cm Flujo cm h 300 250 200 150 100 50 3 0 3 5 4 0 Presi n de en bar Fig 4 5 Curva de presi n flujo para Q Sepharose High Performance en BPG 300 500 Al 40 tura del lecho 10 cm Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC La columna BPG 4 Flujo cm h 400 300 200 100 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 Presi n de en ba
14. camisa del adaptador 30 est n alineados con los orificios del mbolo externo del adaptador 31 8 Con los dedos apriete los tornillos 26 en la mitad superior de la unidad de cierre 27 asegur ndose de que queden correctamente alineados en los orificios hasta que parezca una porci n de la rosca del tornillo de 1 a 2 mm Por ltimo apriete los tornillos con una llave de anillo 9 Monte la pieza de bloqueo de giro 25 en la brida 21 con los tornillos 24 10 Monte la junta de cierre del adaptador 28 29 en la placa del adaptador 34 11 Humedezca la malla del filtro 36 con etanol al 20 Monte la malla de soporte 35 y la malla del filtro 36 en la placa del adaptador 34 Si moja la malla del filtro con agua ser m s f cil colocarlo en el adaptador De esta forma se completa el procedimiento de montaje del adaptador Montar un tubo de extensi n dispositivo de empaquetado El tubo de extensi n se monta a la entrega El montaje desmontaje del tubo de extensi n es igual al de la columna con excepci n de las pautas a seguir para el soporte Para montar un tubo de extensi n en BPG 100 140 y 200 proceda de la siguiente forma 1 Retire el adaptador de la columna y coloque el tubo de extensi n en la brida superior 10 de forma que las varillas de la columna se adapten a los orificios abiertos de la brida Figura 4 3 en el tubo de extensi n Aseg rese de que la delgada junta de cierre est colocada correc
15. de tierra de la red de la planta y el otro extremo a la toma de tierra de la columna situada en su soporte La toma de tierra de la columna posee un cable M6 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 3 4 Test de estanqueidad Antes de bajar el adaptador aseg rese de que la junta de cierre no est seca Por ejemplo use un 20 de etanol Para realizar el test de estanqueidad a trav s del adaptador 1 Llene la columna con agua o soluci n de sanitizaci n y luego coloque el adaptador en la columna a la misma altura a la que vaya a trabajar con la columna Selle el adaptador con el ajustador de sellado 3 Elimine el aire atrapado en la columna 4 Cierre la v lvula de salida de la columna V lvula de salida de la columna 9 Calibrador de presi n Adaptador Columnas BPG V lvula de seguridad V lvula de entrada a la columna Fig 3 8 Representaci n esquem tica de la columna las v lvulas y la bomba para el test de estanqueidad Eleve la presi n hasta la presi n m xima de trabajo Espere alrededor de 15 minutos hasta que se haya estabilizado la presi n Compruebe el descenso de presi n en el calibrador La ca da de la presi n no debe superar 0 1 bar en el transcurso de 5 minutos Para conocer la presi n con m s precisi n consulte los datos que registra el controlador de presi n Ello finaliza el test de estanqueidad Columnas BPG Modo de empleo
16. en el tubo de la columna si se retira la extensi n de empaquetado Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 31 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 2 Conexiones Terminal cable de tierra de las columnas BPG 300 32 3 2 Conexiones Hay disponibles diversos conectores distintos para conectar las columnas BPG a diferentes tipos de tubos y sistemas consulte el Cap tulo 3 de la Gu a de mantenimiento de columnas BPG Los accesorios de abrazaderas sanitizables higi nicas de las columnas BPG per miten la CIP Otros conectores son de polipropileno con buena resistencia qu mi ca El di metro exterior de todos los accesorios de abrazaderas BPG es de 25 mm Se utilizan uniones de 51 mm con los kits de man metro y v lvula de seguridad 3 3 Toma de tierra de la columna Para evitar descargas de electricidad est tica es necesario conectar a tierra la columna adecuadamente Nota Elequipo debe estar conectado a tierra en el caso de que la columna vaya a ser utilizada en atm sferas potencialmente explosivas Con este objetivo se dispone de un kit de tierra adecuado como accesorio y el soporte de la columna se acompa a de un terminal de conexi n a tierra como se muestra a continuaci n Terminal cable de tierra de las columnas BPG 100 140 200 y 450 Fig 3 7 Toma de tierra en el soporte de la columna Para la toma de tierra de la columna conecte uno de los extremos del cable de tierra a una de las tomas
17. los tornillos de fijaci n 21 y las arandelas de muelle 20 que sujetan la base 14 al soporte 19 Separe la base y el soporte Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 25 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje 26 Desmontando la columna Para montar la columna BPG 300 consulte la Figura A 4 y proceda de la siguiente forma Nota Humedezca la malla con etanol al 20 para eliminar el aire atrapado 1 Con respecto a la Figura 4 5 compruebe que las siguientes piezas est n colocadas correctamente en la base 14 e Placa de distribuci n 13 el lado perfilado debe estar de cara a la base y el lado plano debe estar de cara a la malla de soporte e Malla de soporte 12 e Malla 10 11 e Junta de cierre 6 7 Fig 3 5 Situaci n de la base en las columnas BPG 300 2 Fije la base 14 al soporte 19 con los tornillos de fijaci n 21 y las arandelas de muelle 20 3 Con cuidado coloque el tubo de vidrio 9 sobre la junta de cierre 6 7 de la base 14 Compruebe que el tubo de vidrio no est en contacto con el acero inoxidable Alinee el tubo de vidrio con la malla del filtro inferior 10 11 4 Atornille las varillas de soporte 8 a la base 14 Coloque la brida 5 de forma que las varillas de soporte 8 encajen en los orificios correspondientes Aseg rese de que la junta de cierre 6 7 de la brida est alineado con el tubo de vidrio El tubo de vidrio no debe tocar el acero
18. notas 7 8 Triton X 100 100 OK Tween Tri n butil fosfato 1 0 3 OK UREA 8M OK 1 El test no incluye tubos de PVC La goma EPDM cambia las caracter sticas Para un uso repetitivo y a largo plazo utilice juntas de sellado y juntas de FEP PFR PTFE 3 Cambie a juntas de sellado y juntas de FEP PFR PTFE La resistencia al pl stico de polipropileno es aceptable Puede utilizarse en condiciones de carrera normal No utilice NaCl en soluciones de almacenamiento Recuerde que el NaCl puede corroer el acero inoxidable en soluciones cidas pH inferior a 4 5 No superior a 4 horas 7 No se recomienda utilizarlo con mallas de PA 8 FEP cambia las caracter sticas Por tanto utilice goma EPDM 4 3 1 Resistencia qu mica al cloruro s dico Las columnas BPG est n equipadas con componentes humedecidos de acero inoxidable por lo que deben someterse a un mantenimiento adecuado cuando se exponen a NaC1 durante procesos cromatogr ficos Si un proceso incorpora el uso de soluciones NaCl es esencial enjuagar cuidadosamente la columna Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 37 4 La columna BPG 4 4 Curvas de presi n flujo 38 para eliminar todo residuo de NaC1 Se recomienda realizar un enjuagado con agua de al menos cinco vol menes de columna Agua es la soluci n de enjuagado preferida debido a las propiedades de solubilidad de NaC1 en agua con respecto a otras posibles soluciones de enjuagado tales como el etanol
19. pieza estas tablas y figuras se encuentran al final del manual Los n meros entre par ntesis que encontrar a lo largo de cada secci n corresponden con las figuras y las tablas del final del manual ADVERTENCIA Cerci rese de que la columna es herm tica y no gotea tras haberla montado 3 1 1 BPG 100 140 y 200 Desmontando la columna Para desmontar las columnas BPG 100 140 y 200 consulte la Tabla A 1 y las Figuras A 1 y A 2 del final del manual y proceda de la siguiente manera Retire las tuercas ciegas 18 y las arandelas de muelle 14 que ajustan el adaptador a la brida 10 ADVERTENCIA Si el sello de la junta de cierre del adaptador est seco un movimiento forzado del adaptador lo da ar Humedezca la junta de cierre con agua o con una soluci n de etanol al 20 NO engrase la junta de cierre 2 Desatornille la tuerca de ajuste 17 varias vueltas para aflojar el sello de la junta de cierre del adaptador 28 29 y retire el adaptador 3 Con ayuda de una llave y en la secuencia que muestra la Fig 4 1 retire las tuercas 8 y las arandelas 9 de muelle que fijan las varillas de soporte 2 a la brida 10 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 19 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje 20 A ADVERTENCIA No afloje del todo las tuercas de una sola vez Afloje las tuercas paso a paso tal y como muestra la Figura 4 1 Son suficientes tres o
20. presi n flujo Los m todos recomenda dos est n descritos exhaustivamente en las secciones 5 1 3 y 5 1 5 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 43 5 Funcionamiento 5 1 Empaquetado de la columna 5 1 1 Cantidades de geles necesarias por cm de altura del lecho Las cantidades de geles necesarias por cm de altura del lecho se presentan a continuaci n Tabla 5 1 Cantidad media necesaria para columnas BPG Cantidad de gel por litro Cantidad de gel por cent metro de lecho empaquetado Gel de columna empaquetada BPG 100 BPG140 BPG200 BPG300 BPG 450 DEAE Sepharose Fast Flow 1 251 98 ml 192 ml 393 ml 882 ml 1 97 1 Sepharose Fast Flow 1 251 98 ml 192 ml 393 ml 882 ml 1 97 CM Sepharose Fast Flow 1 251 98 ml 192 ml 393 ml 882 ml 1 97 S Sepharose Fast Flow 1 251 98 ml 192 ml 393 ml 882 ml 1 97 Phenyl Sepharose Fast Flow 1 251 98 ml 192 ml 393 ml 882 ml 1 971 Sephadex G 25 grados C y M 2509 19 6 g 38 2 g 78 59 1769 394 g Sephadex G 25 SF 2809 2209 42 99 88 0 y 198 g 443 g Sepharose 4 y 6 Fast Flow 1 201 94 m 183 ml 377 m 847 ml 1 891 Sephacryl High Resolution 1 251 98 m 192 ml 393 m 882 ml 1 971 Superdex 75 y 200 grado prep 1 201 94 m 183 ml 377 m 847 ml 1 891 Q y SP Sepharose High Performance 1 201 94 m 183 ml 377 m 847 ml 1 891 Phenyl Sepharose High Performance 1 201 94 m 183 ml 377 m 847 ml 1 89 5 1 2 Tama os de malla recomendados Es importante seleccionar las mallas apropiadas para el adaptador y la base Se
21. 134 2 8 1113 21 8 1134 22 1 Espiga inclinable de la columna PTFE 8 8 1003 00 8 1003 00 2 Pieza de remate 316L E 8 1144 18 8 1113 20 8 1112 62 3 Fijaci n M8 x 12 316 4 8 1113 28 8 1113 28 4 Arandela de muelle 316 4 8 1143 26 8 1113 29 8 1113 29 5 Soporte completo 316L 8 1031 10 18 1031 20 8 1031 20 6 Abrazadera 25 mm 304 8 1001 3 8 1001 31 8 1001 31 7 Tuerca de ajuste PEEK 8 1109 27 8 1109 27 8 1109 27 8 Tuerca ciega 316 4 8 1143 25 8 1113 27 8 1113 27 9 Tuerca de ajuste cuerpo 316 1 0003 0 8 1113 26 8 1113 26 20 Segmento de cierre POM 2 8 0264 01 18 0267 0 8 0267 01 21 Brida 316 8 1143 24 8 1113 24 22 Tuerca de ajuste inserto PEEK 8 0251 20 8 0252 20 8 0252 20 23 Tornillo de cabeza hexagonal M8 x 45 316 5 9 6375 0 9 6375 0 9 6375 0 24 Tornillo de cabeza hexagonal M4 x 14 316 5 9 6356 0 9 6356 0 9 6356 0 25 Pieza de bloqueo de giro 316 8 1113 25 8 1113 25 26 Tornillo con adaptador de cabeza 316 3 8 8457 0 8 8457 0 8 8457 0 27 Unidad de cierre 316L 8 1147 47 8 1113 3 8 1147 48 28 Adaptador de la junta de cierre EPDM 2 8 8475 O 8 1113 10 8 0275 0 29 Adaptador de la junta de cierre FEP 8 0019 40 8 1113 1 8 0019 50 30 Camisa del adaptador 316 8 1113 23 8 1113 23 8 1113 23 31 Tubo adaptador externo 316 8 1134 83 8 1134 83 8 1134 83 32 Tornillo M6 x 12 316L PTFE 3 8 1145 08 8 1145 08 8 1145 08 33 Resorte 316 PTFE 8 8491 01 8 8491 01 8 8491 01 34 Placa del adaptador S31803 8 1112 80 8 1113 30 8 1112 81 35 Malla de soporte
22. 18 1170 70 AC 33 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 4 Test de estanqueidad 34 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC La columna BPG 4 4 La columna BPG Este cap tulo proporciona conocimientos generales sobre las especificaciones y caracter sticas de las columnas BPG 4 1 Especificaciones y caracter sticas Tabla 4 1 Especificaciones y caracter sticas principales de las columnas BPG Di metro rea Altura Altura del lecho 3 cm Volumen del lecho liter Presi n Peso Peso del Dimen de la transver del m xima total adapta siones columna sal cm2 tubo bar g kg dor globales mm cm kg cm PxAnxaAl Min 1 2 3 Min 1 2 3 4 100 78 5 50 0 26 34 45 0 0 2 0 2 7 3 5 8 15 7 48x48x127 100 78 5 75 25 4 55 65 2 0 32 43 5 1 8 16 7 48x48x152 100 78 5 95 45 54 72 78 3 5 42 5 7 6 1 8 17 7 48x48x172 140 154 50 o 26 34 45 0 0 4 0 5 2 6 9 6 25 1 59x59x127 140 154 75 25 4 55 65 3 9 6 3 85 100 6 26 1 59x59x152 140 154 95 45 54 72 78 6 9 83 111 120 6 27 1 59x59x172 200 314 50 0 26 34 45 0 0 82 107 141 6 34 3 59x59x127 200 314 75 25 4 55 65 78 129 173 204 6 36 3 59x59x152 200 314 95 45 54 72 78 141 170 226 245 6 39 3 59x59x172 296 688 50 0 26 34 45 00 179 234 310 4 68 29 69x69x133 296 688 75 25 4 55 65 172 282 378 447 4 73 29 69x69x158 296 688 95 45 54 72 78 310 372 495 537 4 78 29 69x69x178 446 1562 50 11 22 30 45 172 344 469 703 2 5 200 00 80x80x140 446 1562 75 36 38 51 62 562 594 797 968 25 215 00 80x80x16
23. 200 es preciso solicitar el soporte y la columna Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 17 2 Desempaquetado de la columna 2 2 Componentes suministrados 2 2 Componentes suministrados Compruebe que est n presentes todos los elementos de la Tabla 2 2 Tabla 2 2 Cantidad de cada de componente suministrada con las columnas BPG Producto Cantidad BPG BPG BPG BPG BPG 100 140 200 300 450 Brida ciega con junta EPDM 2 2 2 2 2 Abrazadera 23 mm 51 mm 2 2 2 2 2 Soporte 1 1 23 mallas de um 2 2 2 2 2 Tornillos de fijaci n para sujetar el soporte a la 6 4 columna Manual de usuario mantenimiento uno de cada 1 1 1 1 1 18 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 3 Instalaci n y test de estanqueidad Todas las columnas BPG poseen abrazaderas sanitizables como conectores PRECAUCI N Utilice nicamente tubos y abrazaderas aprobados que resistan la presi n m xima de la columna y los productos qu micos que van a usarse durante su funcionamiento PRECAUCI N Coloque la columna en un sitio apartado de los lugares de paso para evitar que nadie choque con ella o la mueva inintencionadamente Procure no pisar los tubos que est n por el suelo 3 1 Desmontaje y montaje Siga las instrucciones de las secciones siguientes para desmontar y montar las columnas y los adaptadores Consulte las tablas A 1 a A 3 y las Figuras A 1 a A 5 para identificar cada
24. 316 5 8 Varilla BPG 450 500 8 1106 18 316 Varilla BPG 450 750 8 1103 09 316 Varilla BPG 450 1000 8 1103 10 316 9 Unidad de cierre 8 1109 69 316L 0 Fijaci n de pin 8 3001 07 316 3 1 Tornillo tope 9 4363 01 316 2 2 Tubo de vidrio BPG 450 500 8 1103 14 Vidrio borosilicado Tubo de vidrio 450 750 8 1103 15 Vidrio borosilicado Tubo de vidrio 450 1000 8 1103 16 Vidrio borosilicado 3 Tap n tope giratorio 8 1107 43 POM 4 Tope giratorio 8 1109 41 316L 5 Tornillo M8 x 50 8 1109 40 316 5 6 Separador 8 1109 42 316L 7 Tapa 8 1109 70 316 8 Segmento de cierre 8 1109 43 PP 2 9 Ajustador de altura del adaptador 8 1109 44 POM 20 Asa 8 1109 45 316 21 Reborde de la tuerca 8 1109 46 PEEK 23 Ajustador de sellado 8 1109 47 PEEK 24 Asa 8 1109 48 316 25 Mando 8 1109 49 PP 26 Tornillo M10 x 65 8 1109 50 316 2 27 Arandela de muelle 10 5 x 20 8 1109 51 316 0 28 Tuerca ciega M10 y arandela de muelle 18 1103 20 316 29 Tornillo adaptador 8 1109 54 316L 30 Tubo de ajuste 8 1109 55 316 31 Tubo de entrada i d 12 mm 8 1109 53 316L 32 Junta de cierre 12 3 x 2 4 8 1103 70 EPDM a 2 Junta de cierre 12 3 x 2 4 8 1117 65 FEP 33 Tornillo M4 x 16 8 1109 56 316 2 34 Resorte 8 1107 44 316 PTFE 35 Tornillo M5 x 10 8 1109 57 316 2 36 nterruptor de resorte 8 1107 45 PP 2 38 Placa del adaptador 8 1109 71 S31803 39 Tornillo M8 x 25 8 1145 12 316L PTFE 3 40 Junta de cierre 419 x 10 8 1017 47 EPDM E Junta de cierre 419 x 10 8 1117 66 FEP 41 Placa distribuidora 8 1106 0
25. 4 PP Comparable a 316L contin a en la p gina siguiente Componentes de las columnas BPG 450 continuaci n Art Descripci n C digo n mero Material En contacto con Cant culo n l quido del paq proceso 42 Malla de soporte del adaptador 8 1104 34 PP 43 Malla 54 um adaptador 8 1127 04 PP alla 23 um adaptador 8 1001 62 PP alla 10 um adaptador 8 1017 46 PA alla 12 um adaptador 8 1148 45 PEEK 44 Tornillo M10 x 80 8 1109 59 316 2 45 Tornillo M10 x 16 8 1109 60 316 2 46 Abrazadera 8 1109 61 316 47 Tornillo M5 x 16 8 1109 62 316 2 48 Tubo de entrada inferior 8 1109 63 316L 50 Tornillo de cabeza hexagonal M10 x 40 8 1109 65 316 2 51 Pata 8 1109 66 316 52 Soporte de rueda 8 1107 46 POM 316 53 Rueda 8 1177 75 Perno de anilla 8 1109 64 54 Pieza de bloqueo de giro del adaptador 8 1115 18 316 ndice A avisos de advertencia 11 avisos de notas 11 avisos de precauci n 11 C c lculos de HETP 58 c lculos de la asimetr a del pico 60 cantidades de geles 44 columna cantidad de componentes suministrada 18 componentes b sicos 9 desempaquetado 17 elecci n de la muestra de prueba 57 eliminaci n 13 empaquetado 43 evaluaci n 56 instalaci n 19 materiales 35 m todo de empaquetado sugerido 51 montaje y desmontaje 19 n de referencia de soportes y tubos 17 p rdida 19 principios de funcionamiento 43 test de e
26. 5 446 1562 100 61 64 72 78 953 1000 1125 1218 25 230 00 80x80x190 Los vol menes y alturas m ximos de los lechos se basan en una concentraci n de la suspensi n del 75 y una compresi n de empaquetado del 15 La compresi n es la diferencia de volumen entre un lecho sedimentado y un lecho bajo presi n 1 Estas cifras se obtienen sin un tubo de extensi n 2 Los vol menes y las alturas de los lechos se obtienen con una extensi n de empaquetado durante la consolidaci n del lecho sedimentaci n La cantidad total de suspensi n del 75 debe adaptarse a la columna la extensi n con el adaptador montado 3 El volumen y la altura del lecho se obtienen al dejar el tubo de extensi n de empaquetado durante el paso de empaquetado final El adaptador debe sellarse al menos 5 cm dentro del tubo de la columna para evitar tensiones fuertes en el tubo de vidrio 4 Use un man metro para controlar la presi n encontrar la informaci n necesaria para pedirlo en el cap tulo 3 de la Gu a de mantenimiento de BPG La temperatura de funcionamiento para las columnas BPG es de 4 a 40 C Tabla 4 2 Dimensiones de entrada y salida de columnas BPG Tama o de la columna 100 140 200 300 450 Dimensiones l E mm 4 6 6 10 12 4 2 Materiales de la columna Los materiales utilizados en la fabricaci n de las columnas BPG se han seleccionado cuidadosamente teniendo en cuenta su compatibilidad con los disolventes utilizados m s habitualmente en la sepa
27. BPG iii 4 1 Especificaciones y caracter sticas 4 2 Materiales de la COlUMNA cin ici 4 3 Resistencia qu mica occccca i 4 3 1 Resistencia qu mica al cloruro s dico teses 37 4 4 Curvas de presi n flUJO eee 38 4 4 1 Curvas de presi n flujo para columnas vacias ms 39 4 4 2 Curvas de presi n flujo para columnas empaquetadas 40 5 Funcionamiento es eseseesesessssesesesessssesesesesesesessesesesessesesesese 43 5 1 Empaquetado de la columna eretas 43 5 1 1 Cantidades de geles necesarias por cm de altura del lecho 44 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 7 5 1 2 Tama os de malla recomendados 44 5 1 3 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo 45 5 1 4 Flujos de empaquetado recomendados para geles CECI dk na o AA cano 5 05 M todo de empaquetado de la columna 5 2 Evaluaci n de la columna ccccciocccccccccccccacicinaccccnaos 5 2 1 Elecci n de la muestra de prueba para columnas 57 5 2 2 Edlculo de HERE var regina a ater data 58 5 2 3 C lculo del factor de asimetr a del pico 60 6 Abreviaturas see 61 A e a a 67 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Introducci n 1 1 Introducci n 1 1 General Las columnas BPG est n especialmente dise adas para cumplir los altos est ndares de higiene que requieren ciertos procesos industriales Con ellas se pueden realizar separaciones cromatogr
28. El protocolo de enjuagado debe usar al menos cinco vol menes de columna de agua purificada para garantizar una eliminaci n ptima de los iones de cloruro residuales que pueden resultar corrosivos para el acero inoxidable con el paso del tiempo 4 4 Curvas de presi n flujo Por lo general es muy dif cil desarrollar curvas te ricas de presi n flujo Las curvas m s exactas de presi n flujo se obtienen por m todos experimentales La Figura 3 1 muestra una configuraci n t pica utilizada en los laboratorios GE Healthcare para generar curvas de presi n flujo O gt Man metro Para cilindro de medici n o caudal metrc V lvula de seguridad E Ao o ZA Bomba Tamp n Tanque Notas 1 La longitud m xima permitida del tubo entre el man metro y la salida es de 15m 2 El di metro del tubo es de 10 mm Fig 4 1 Configuraci n t pica para determinar las curvas de presi n flujo Nota La columna s lo contiene tamp n El flujo de salida debe estar al mismo nivel que el man metro Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC La columna BPG 4 4 4 1 Curvas de presi n flujo para columnas vac as Las figuras 3 2 y 3 3 muestran las curvas de presi n flujo para columnas BPG vac as obtenidas utilizando el m todo presentado en la secci n Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo P gina 45 de este manual y la configuraci n mostrada
29. FEP 3 1 8 Varilla para T300 500 18 1012 31 316 1 Varilla para T300 750 18 1012 32 316 1 Varilla para T300 950 18 1012 33 316 1 9 Tubo de la columna T300 500 18 1012 28 Vidrio borosilicado x 1 Tubo de la columna T300 750 18 1012 29 Vidrio borosilicado 1 Tubo de la columna T300 950 18 1012 30 Vidrio borosilicado 1 0 Malla 23 um base 8 1012 34 PA 2 1 Malla 10 um base 18 1012 35 PP 2 alla 12 um base 18 1148 44 PEEK 2 alla 54 um base 18 1127 03 PP 2 2 Malla de soporte base 18 1012 36 PP 2 3 Placa de distribuci n 8 1012 37 PP 2 4 Base 8 1140 47 316L 5 Junta 25 mm i d 12 mm 8 0200 00 EPDM 5 6 Junta 25 mm i d 10 mm 8 1012 40 PTFE E 5 7 Conector 25 mm 10 mm PP 2 8 V lvula manual de 4 conexiones 2 v as 18 1012 56 316L PTFE 1 9 Soporte completo 8 1012 38 316L 20 Arandela de muelle 18 1012 61 316 6 21 Fijaci n M12 x 25 8 1012 65 316 6 22 Rueda 8 1001 09 1 23 Ajustador de sellado 8 1012 41 PEEK 1 24 Ajustador de altura del adaptador 8 1128 31 316 T 25 Segmento de cierre 8 1012 42 POM 2 26 Brida del adaptador 8 1129 06 316 L 2r Tuerca M10 8 1012 44 316 5 28 Tornillo tope completo 18 1012 43 316 POM 1 29 Tuerca de ajuste inserto 8 1012 45 PEEK 1 30 Unidad de cierre 18 1147 50 316L 31 Tornillo con adaptador de cabeza M8 8 1012 46 316 3 32 Tornillo de cabeza hexagonal M8 x 60 8 1012 47 316 5 33 Junta de cierre 274 x 8 mm 8 1012 51 EPDM 2 34 Junta de cierre 274 x 8 mm 8 1012 52 FEP 1 35 Camisa d
30. GE Healthcare Columnas BPG Modo de empleo Informaci n importante para el usuario Todos los usuarios deben leer este manual en su total idad para comprender completamente el uso seguro de las columnas BPG AVISO El signo de AVISO resalta instrucciones nece sarias para evitar lesiones personales Es importante no continuar hasta que se hayan comprendido claramente y cum plido las condiciones especificadas CUIDADO El signo de CUIDADO resalta instrucciones necesarias para evitar da os al producto u otros equipos Es impor tante no continuar hasta que se hayan comprendido claramente y cumplido las condiciones especificadas Nota El signo Nota se utiliza para se alar informaci n importante para un uso seguro y eficaz del producto Certificado CE Este producto cumple los requisitos de las directivas CE aplicables Si desea una copia de la Declaraci n de Conformidad correspondiente p danos que se la enviemos El s mbolo CE y la declaraci n de conformidad correspondiente son v lidos para el instrumento cuando se utiliza como unidad aut noma o se conecta a otros instrumentos de GE Healthcare con distintivo CE o se conecta a otros productos recomendados o de scritos en este manual y se utilizan en el mismo estado en que fueron entregados por GE Healthcare a excepci n de las alteraciones descritas en este manual Precauciones de seguridad PPR PPP IMPORTANTE Siempre q
31. GE Healthcare para obtener informaci n actualizada Suecia GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Alemania GE Healthcare UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA Reino Unido GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 Estados Unidos GE Healthcare Bio Sciences KK Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Jap n imagination at work User Manual 18 1170 70 AC 03 2007 E Elanders sterv la 2007
32. Gire el tornillo gu a hasta que engarce la ranura en el mbolo externo del adaptador 36 impidiendo un movimiento lateral del tubo sin impedir el movimiento vertical Bloquee el tornillo topo 28 en posici n con la tuerca de cierre 28 Monte la junta de cierre del adaptador 33 34 en la placa del adaptador 39 Humedezca la malla del filtro 41 42 con etanol al 20 para eliminar todas las burbujas de aire atrapadas en ella Si la malla del filtro est tensa cali ntela con agua a 40 C Monte la placa de distribuci n 13 la malla de soporte 40 y la malla del filtro 41 42 en la placa del adaptador 39 De esta forma se completa el procedimiento de montaje del adaptador BPG 300 Montar un tubo de extensi n dispositivo del paquete El tubo de extensi n se monta a la entrega El montaje desmontaje del tubo de extensi n es igual al de la columna con excepci n de las pautas a seguir para el soporte Para montar un tubo de extensi n en la columna BPG 300 consulte la Figura A 4 y proceda de la siguiente forma 1 Retire el adaptador de la columna y coloque el tubo de extensi n en la brida superior 5 Aseg rese de que la delgada junta de cierre est colocada correcta mente en la brida Utilice la abrazadera de la brida para ajustar el tubo de extensi n en la columna Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 La columna extendida est lista para usar en el
33. a muestra apl quela tan cerca de la entrada de la columna como sea posible Si queda aire atrapado dentro del sistema cuando aplique la muestra debe evitar que pase a su trav s para que no se mezcle con l Calcule el valor de HETP a partir de la curva de conductividad o UV de esta forma En t rminos simples la HETP se expresa como HETP L N donde L Altura del lecho cm N N mero de placas te ricas N viene definida por la ecuaci n N 5 54 Ve Wh donde Ve Volumen de eluci n ml Wh Anchura del pico a la mitad de la altura ml Ve se mide como el volumen pasado a trav s de la columna desde la mitad de la aplicaci n de la muestra hasta el pico m ximo W se mide como la anchura en la mitad de la altura del pico desde la base al v rtice Siguiendo el ejemplo de la Fig 5 13 el valor de HETP puede calcularse a partir del cromatograma de la siguiente forma Tabla 5 3 C lculos de HETP Velmi Wp ml N N m HETP cm Acetona 18800 900 2417 4203 0 024 58 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 Una columna bien empaquetada tendr valores de HETP bajos Sin embargo s lo es posible comparar columnas que se hayan empaquetado con el mismo tipo de gel y a las que se hayan realizado tests bajo las mismas condiciones Como regla emp rica general el valor de HETP es bueno si equivale aproxi madamente a dos cuatro veces el di metro medio de las cuentas del gel que se est u
34. anillos de cierre 25 en el soporte del mbolo 26 Ajuste la parte insertable del rodamiento de ajuste 29 al cuerpo del volante de ajuste 24 mediante los tornillos 32 a trav s del soporte del mbolo 26 de forma que el cuerpo del volante de ajuste gire en los anillos de cierre 25 Coloque el resorte 38 la camisa interna del mbolo del adaptador 35 y el mbolo externo del adaptador 36 en la placa del adaptador 39 desliz ndolos sobre ella Apriete el mbolo externo del adaptador 36 en la placa del adaptador 39 mediante los tornillos 37 Coloque la unidad de cierre 30 en el mbolo externo del adaptador 36 desliz ndolo sobre l En el sentido de las agujas del reloj atornille aproximadamente 5 cm el conjunto de piezas de la brida 24 a 26 29 y 32 en el mbolo externo del adaptador 36 En el sentido de las agujas del reloj gire el volante de bloqueo 23 sobre la parte superior del adaptador hasta que los orificios de la camisa interna del adaptador 35 est n alineados con los orificios del mbolo externo del adaptador 36 Con los dedos apriete los tornillos 31 en la mitad superior de la unidad de cierre 30 asegur ndose de que queden correctamente alineados en los orificios hasta que parezca una porci n de la rosca del tornillo de 1 a 2 mm Por ltimo apriete os tornillos con una llave de anillo Sit e el tornillo gu a 28 y la tuerca de cierre 27 en el soporte del mbolo 26
35. cionamiento 5 1 Empaquetado de la columna PASO 2 e L 2a 3 cm de tamp n restante ESA V lvula Cerrada N Fig 5 2 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 2 PASO 2 a Siga bombeando tamp n y aire hasta que s lo queden 2 3 cm de tamp n en la columna b Use un nivel para comprobar que la columna est horizontal Corr jalo con las ruedas pies ajustables si es necesario E Fig 5 3 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 3 PASO 3 a Mezcle eltamp n de empaquetado con el gel para formar una suspensi n al 75 es decir volumen sedimentado volumen suspendido total 0 75 Nota Este volumen de suspensi n es adecuado para geles BioProcess Para otros geles de cromatografia compruebe el volumen de suspensi n recomendado con su proveedor 46 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 PASO 4 V lvula Cerrada R Fig 5 4 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 4 PASO 4 a Vierta con cuidado la suspensi n homog nea en la columna Aseg rese de que no queda ninguna burbuja de aire atrapada en la suspensi n Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 47 5 Funcionamiento 5 1 Empaquetado de la columna PASO 5 gt lt V lvula Cerrada Fig 5 5 Determinaci n del flujo de empaquetado
36. cuatro vueltas para aflojar y retirar las tuercas correctamente Para evitar que las varillas se desatornillen utilice una llave de media luna en la parte plana Fig 3 1 Secuencia de retirada y apretado de las tuercas ADVERTENCIA Al retirar la brida el tubo de la columna queda suelto Tenga cuidado para evitar que se vuelque el tubo de la columna 4 Retire la brida 10 con cuidado 5 Con una llave ajustable retire las varillas de soporte 2 de la base 12 6 Levante el tubo de vidrio 1 y ret relo Con cuidado coloque el tubo de vidrio sobre una superficie firme Si la junta de cierre se adhiere al tubo de vidrio o a la base humed zcalo con etanol al 20 y luego ret relo 7 Con la ayuda de una llave retire los tornillos de fijaci n 13 y las arandelas de muelle 14 que sujetan la base 12 al soporte 15 Separe la base y el soporte Montaje de la columna Para montar las columnas BPG 100 140 y 200 consulte la Tabla A 1 y la Figura A 2 que se encuentran al final del manual Proceda de la siguiente manera Nota Humedezca la malla con etanol al 20 para eliminar el aire atrapado 1 Con respecto a la Figura 4 2 compruebe que las siguientes piezas est n colocadas correctamente en la base 12 e Malla de soporte 5 e Malla del filtro 4 e Segmento de ajuste PTFE 3 e Junta de cierre 6 7 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 6
37. de acuerdo con las descripciones e instrucciones dadas en este manual 1 3 2 Advertencias ADVERTENCIA El s mbolo Advertencia subraya instrucciones que deben seguirse estrictamente para evitar cualquier da o personal No proceda hasta que no haya entendido claramente las instrucciones y se hayan cumplido todas las condiciones establecidas 1 3 3 Avisos de precauci n PRECAUCI N El signo Precauci n se ala instrucciones o condiciones que deben seguirse para evitar cualquier da o al producto o a otro equipo No proceda hasta que no haya entendido claramente las instrucciones y se hayan cumplido todas las condiciones establecidas 1 3 4 Notas Nota El signo Nota se utiliza para indicar informaci n importante para utilizar el producto de forma ptima y sin problemas 1 3 5 Resistencia qu mica Las especificaciones referentes a la resistencia qu mica est n incluidas en el Cap tulo 3 de este Modo de empleo 1 3 6 Uso en atm sferas potencialmente explosivas Las columnas BPG no contienen circuitos el ctricos No obstante siempre deben observarse las siguientes precauciones e Evite las descargas de electricidad est tica mediante una toma a tierra de la columna Conecte un cable de tierra a la red de tierra de la planta Hay disponible como accesorio un kit de conexi n a tierra Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 11 1 Introducci n 1 4 Operadores aprobados 12 e Durante el func
38. eguridad Y Bomba Man metro Marca del limite del lecho gt lt V lvula Fig 5 10 M todo de empaquetado de la columna paso 7 PASO 7 a Marque el l mite superior del lecho una vez ste haya sedimentado b Pare la bomba c Cierre la v lvula inferior d Afloje el sello de la junta de cierre del adaptador girando la tuerca de ajuste BPG 100 140 y 200 o el asa ajustadora de sellado BPG 300 y 450 sobre la parte superior del adaptador en sentido contrario a las agujas del reloj Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 53 5 Funcionamiento 5 1 Empaquetado de la columna PASO 8 x DN D L Bomba Man metro V lvula de seguridad gt lt V lvula Cerrada Fig 5 11 M todo de empaquetado de la columna paso 8 PASO 8 a Descienda r pidamente el adaptador girando el asa ajustadora de la altura en sentido contrario a las agujas del reloj El tamp n existente entre el lecho sedimentado y el adaptador pasa a trav s de la junta de cierre del adaptador y la pared de la columna El lecho empezar a subir durante esta operaci n Deje de descender el adaptador cuando est 0 5 a 1 cm por encima del lecho 54 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 PASO 9 O DA ze Bomba No alo Y V lvula de seguridad Dq
39. el adaptador 8 1147 83 316 36 Tubo adaptador externo 8 1142 93 316L 1 37 Tornillo M8 x 16 8 1145 10 316L PTFE 5 38 Resorte 18 1012 50 316 PTFE 1 39 Placa del adaptador 8 1112 82 531803 4 4o alla de soporte adaptador 18 1012 53 PP 2 41 alla 23 um adaptador 8 1012 54 PP 2 42 alla 10 um adaptador 18 1012 55 PA 2 alla 12 um adaptador 18 1148 43 PEEK 2 alla 54 um adaptador 18 1127 02 PP 2 43 Tubos PVC 44 Abrazadera 25 mm 8 1001 31 304 1 45 Soporte de rueda 8 1033 33 POM 316 1 Consulte la Tabla 3 4 en la Gu a de mantenimiento de BPG Tubo i d 10 mm Comparable a 316L Tabla A 3 Componentes de las columnas BPG 450 Los n meros de los art culos se refieren a la Figura A 5 Art Descripci n C digo n mero Material En contacto con Cant culo n l quido del paq proceso 1 Base 8 1109 67 316L 2 Malla de soporte base 8 1104 35 PP 3 Brida 8 1109 68 PP 316 E 4 Sello en forma de U 8 1104 40 EPDM Sello en forma de U 8 1117 55 PFR 5 Malla 54 um base 8 1127 05 PP Malla 23 um base 8 1103 19 PP Malla 10 um base 8 1103 18 PA Malla 12 um base 8 1148 46 PEEK 6 Reborde de la junta de cierre 446 x 6 8 1105 33 EPDM 2 Reborde de la junta de cierre 446 x 6 8 1117 67 FEP 7 Tornillo de cabeza hexagonal M8 x 50 8 1109 40
40. impio o llenarse con etanol al 20 para prevenir el crecimiento bacteriano Nota Compruebe siempre el rendimiento de la columna empaquetada antes de utilizarla Consulte las instrucciones de este procedimiento en la secci n 5 2 que aparece a continuaci n 5 2 Evaluaci n de la columna La eficiencia de la columna depende del grado de empaquetado Una columna mal empaquetada da lugar a un flujo irregular un ensanchamiento de la zona y una reducci n de la resoluci n Por tanto es importante tener un m todo mediante el que pueda examinarse la columna antes de su puesta en funcionamiento Dicho m todo debe ser simple cuantitativo y no deber a introducir materiales contaminantes Tambi n es una ventaja que pueda utilizarse el mismo m todo para controlar el rendimiento de la columna durante su periodo activo de forma que sea f cil determinar cu ndo debe reempaquetarse o sustituirse el gel Deben evitarse m todos que utilicen colorantes como azul dextrano ya que no cumplen los criterios anteriores y no pueden utilizarse con geles de cromato graf a de afinidad o de intercambio i nico La experiencia ha demostrado que el mejor m todo para expresar la eficiencia de una columna es en cuanto a la altura equivalente a una placa te rica HETP y el factor de asimetr a del pico As Estos valores pueden determinarse f cilmente aplicando a la columna una muestra de soluci n de NaCl o de acetona por ejemplo Es importante que la col
41. inoxidable de lo contrario el tubo de vidrio puede romperse 6 Alinee la superficie interna del tubo de vidrio con la superficie interna de la brida Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 ADVERTENCIA Si aprieta demasiado fuerte estas cuatro tuercas en las varillas de soporte las que ajustan la brida y la pieza de soporte a la columna de vidrio el tubo de vidrio se romper Utilice siempre una llave dinamom trica para N apretar estas tuercas Para especificaciones dinamom tricas consulte la Tabla 4 2 7 Sit e las arandelas de muelle 3 y las tuercas 2 en las varillas de soporte 8 y apri telas a mano 8 Configure la llave dinamom trica seg n la Tabla 4 2 y apriete las tuercas 2 seg n la secuencia mostrada en la Fig 4 4 Apriete las tuercas paso a paso para evitar una presi n mec nica irregular sobre el tubo de vidrio Se recomiendan tres a cuatro vueltas por tuerca Tabla 3 2 Especificaciones de las llaves dinamom tricas para las columnas BPG 300 Art culo Consulte su posici n en la Fig A 4 Especificaci n de la llave dinamom trica Tuercas de la varilla 2 6 Nm Tuercas de la brida de centrado 4 6 5 Nm La columna est lista para ser utilizada y ya puede insertarse el adaptador Desmontaje del adaptador Para desmontar el adaptador en las columnas BPG 300 consulte la Figura A 3 y proceda de la siguiente forma 1 Localice la peque
42. ionamiento y el mantenimiento de la columna s lo deben utilizarse herramientas especialmente dise adas para su utilizaci n en atm sfera explosivas e No olvide utilizar prendas de vestir adecuadas a atm sferas potencial mente explosivas Distintivo EX El c digo EX en la etiqueta de identificaci n define el nivel de protecci n a la explosi n del equipo La categor a EX del equipo debe estar en concordancia con el nivel de protecci n de la sala EX II3G Los equipos incluidos en esta categor a est n concebidos para funcionar de acuerdo con los par metros operacionales establecidos por el fabricante y asegurar un nivel de protecci n normal Los equipos incluidos en esta categor a deben utilizarse en reas en las que las atm sferas explosivas producto de gases o vapores son poco frecuentes o en el caso de existir ocurren en muy pocos casos y durante un per odo de tiempo muy breve 14 Operadores aprobados La columna BPG es un equipo que podr a compararse con un vasija de presi n de volumen variable Los operadores que utilicen la columna deben haber trabajado previamente con vasijas a presi n y con equipos que proporcionen geles presurizados para control del empaquetado por compresi n axial El operador debe leer con detenimiento el Modo de empleo y en especial las instrucciones de seguridad de forma que cuando empiece a trabajar con la columna ya est familiarizado con ellos El uso inadecuado de la columna puede ca
43. ismo b distancia desde el v rtice del pico hasta el 10 de la altura del pico en el lado descendente del mismo Nota El c lculo de los valores de HETP y A es la mejor forma de evaluar el estado de la columna empaquetada Una columna empaquetada puede parecer que est bien aunque ser necesario volver a empaquetarla para obtener unas ptimas prestaciones No olvide examinar la columna despu s de empaquetarla y peri dicamente entre diferentes carreras para asegurar unas prestaciones ptimas Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Abreviaturas 6 6 Abreviaturas Las abreviaturas utilizadas en este manual se definen a continuaci n As Factor de asimetr a del pico CIP Cleaning in place EPDM Etilen propileno FEP Fluoro eteno propeno FF Fast Flow HETP tura equivalente a un plato te rico A HR Alta resoluci n D Di metro interno EX Cromatograf a de intercambio i nico Altura del lecho mero de platos te ricos PA Poliamida PEEK Poli ter ter cetona POM Pl stico acetal PP Polipropileno PTFE Poli tetra fluoro etano PVC Cloruro de polivinilo THF Tetrahidrofurano UV Ultravioleta Ve Volumen de eluci n Wh Anchura del pico a la mitad de su altura PFR Goma perfluoro FPM Goma fluorocarbono Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 61 6 Abreviaturas 62 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Tabla A 1 Componentes de las columnas BPG 100 140 y 200 Los n meros de los art
44. l distintivo CE en la etiqueta de identificaci n muestra que la columna cumple los requisitos de la directiva europea para equipamiento de presi n PED 97 23 EC y o la directiva para equipamiento en atm sferas potencialmente explosivas ATEX100 94 9 EC Las columnas en las que el producto de volumen y presi n permitida es demasiado peque o no deben tener el distintivo CE seg n la PED El equipo suministrado fuera de la Uni n Europea puede no estar marcada con el distintivo CE O BPG 100 950 Serial no Max column volume V 8 L Code no 18 1103 03 Design pressure PS 8bar g Year of manufacturing Maximum filling mass 12 kg Tare mass dt kg PED fluid group cat 1 NA Operating temp TS 4 40 C CE Ens Fig 1 1 Ejemplo de placa de graduaci n de la columna BPG Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Introducci n 1 1 3 Seguridad 1 3 1 General La informaci n presentada en este manual sugiere las mejores condiciones de trabajo aunque nunca tendr n m s relevancia que las normas locales o la responsabilidad individual Se han dedicado grandes esfuerzos para dise ar y fabricar los distintos componentes del equipo de modo que cumpla con todos los aspectos de seguridad aplicables Cuando se trabaja con una vasija a presi n siempre es responsabilidad individual considerar e La seguridad propia y la de los dem s e La seguridad del equipo mediante un uso correcto
45. la columna 12 sobre el sello en forma de U 4 Aseg rese de que la brida 3 est centrada en el sello en forma de U Asegure el tubo a la base con los tornillos de fijaci n 44 apret ndolos en una secuencia cruzada con la llave dinamom trica configurada a 8 Nm Cada tornillo de fijaci n tiene que apretarse 3 veces ADVERTENCIA Si aprieta demasiado fuerte estos tornillos de fijaci n los que ajustan la brida 3 y las varillas 8 el tubo de la columna se romper Utilice siempre una llave dinamom trica a 4 Nm para apretar estos tornillos de fijaci n Consulte la Tabla 4 3 para especificaciones de la llave dinamom trica en la columna BPG 450 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 Tabla 3 3 Especificaciones de las llaves dinamom tricas para las columnas BPG 450 Art culo Consulte su posici n en la Fig A 5 Especificaci n de la llave dinamom trica Tornillos de fijaci n de la tapa y de la base 26 y 27 8Nm Tubo de vidrio a bridas 3 y varillas 8 4Nm Desmontaje del adaptador Para sustituir la junta de cierre 32 Para sustituir la junta de cierre en las columnas BPG 450 consulte la Tabla A 3 y la Figura A 5 y proceda de la siguiente manera Quite las fijaciones del adaptador 39 2 Levante y retire la tapa 17 y el mbolo del adaptador 29 Procure no doblar el tubo de entrada 31 3 Retire el resorte 34 4 Retire los tornillos
46. lo 5 e Abreviaturas Cap tulo 6 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Introducci n 1 El manual adjunto Gu a de mantenimiento de las columnas BPG incluye los siguientes temas e Mantenimiento y servicio Cap tulo 1 e Resoluci n de problemas Cap tulo 2 e Informaci n para pedidos Cap tulo 3 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 15 1 Introducci n 1 7 Objetivo de este manual 16 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Desempaquetado de la columna 2 2 Desempaquetado de la columna Desempaquete el equipo cuidadosamente y compruebe que no se hayan producido da os durante el transporte 2 1 C digos para los tubos y de la columna y los soportes La Tabla 2 1 abajo especifica los n de referencia de los tubos y los soportes de la columnas correspondientes a cada di metro de columna compruebe que los n de referencia de todas las piezas son los adecuados para su columna Tabla 2 1 N de referencia de los soportes y los tubos Di metro Longitud del tubo de la columna mm de la Soporte columna 500 750 950 mm 100 18 1103 01 18 1103 02 18 1103 03 18 1031 10 140 18 1113 08 18 1113 09 18 1031 20 200 18 1103 11 18 1103 12 18 1103 13 18 1031 20 300 18 1103 21 18 1103 22 18 1103 23 450 18 1103 71 18 1103 72 18 1103 73 La altura del tubo de la columna BPG 450 es de 1000 mm Nota Para obtener el set completo de las columnas BPG 100 140 y
47. n cualquier columna Una desventaja es que el NaCl puede interaccionar con la matriz del gel especialmente en matrices de intercambio i nico y dar por tanto resultados err neos Sin embargo la acetona no interacciona con la matriz y se detecta por absorci n UV a 280 nm Alternativamente se puede aumentar 10 veces la concentraci n del tamp n y utilizarse como soluci n test En la Fig 5 13 se presenta un trazado UV de acetona en una aplicaci n t pica de una columna BPG y da los valores calculados de HETP y As Columna BPG 300 Ve Gel Sepharose 6 Fast Flow lt gt Altura del lecho 57 5 cm Volumen del lecho 40 6 litros Eluyente Agua destilada Muestra 1 05 litros acetona 1 NaCl 1 ndice de flujo 19 cm h Vh Ve 188 Wh 0 9 HETP 0 024 cm a 0 90 a b b 0 85 10 b a 0 85 0 90 gt As 0 94 Volumen Absorci n UV 50 Fig 5 13 Cromatograma de prueba que muestra los c lculos de HETP y As Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 57 5 Funcionamiento 5 2 Evaluaci n de la columna 5 2 2 C lculo de HETP El volumen de la muestra deber a ser aproximadamente un 1 del volumen total del lecho y la concentraci n de NaCl 1 0 v v o equivalente cuando se utilice una soluci n tamp n de alta concentraci n Alternativamente puede utilizarse acetona 1 0 v v El flujo lineal debe ser de 30 cm h para geles de 34 um y 50 um y de 20 cm h para geles de 90 um Para evitar la diluci n de l
48. n tenido en cuenta los efectos combinados Por lo general deber evitarse el uso de los siguientes productos qu micos en las columnas BPG e Sustancias muy oxidantes como los per xidos e Compuestos halogenados e Disolventes clorados como el cloruro de metileno e steres como los acetatos e Hidrocarburos arom ticos como el tolueno e cidos fuertes en altas concentraciones e Cloroformo e THF e Tolueno e Metilendicloruro Nota Evite la sal combinada con un pH inferior a 4 Lave siempre la columna con al menos dos vol menes de la columna de una soluci n de pH neutro entre uso de tampones de sal y de pH bajo Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC La columna BPG 4 Tabla 4 3 Tabla de resistencia qu mica de materiales en las columnas BPG Sustancia Concentraci n 60 90 d as por volumen cido ac tico 10 V ase la nota 7 cido ac tico 25 V ase la nota 7 Acetonitrilo 5 V ase la nota 2 Acetonitrilo 50 V anse las notas 3 4 Acetona 10 OK Ciclohexano 00 V anse las notas 3 4 Etanol 00 V ase la nota 2 Acetato de etilo 00 V ase la nota 4 Etilenglicol 50 OK Glicerol 00 OK Hexano 00 V anse las notas 2 7 cido hidrocl rico 0 1M V anse las notas 6 7 Alcohol isopropilo 00 V ase la nota 2 Metanol 00 OK cido n trico 0 1M V ase la nota 7 N propanol 00 OK Cloruro s dico 2M V ase la nota 5 Hidr xido de sodio 2M OK cido trifluoroac tico 0 1 V anse las
49. nas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Figura A 1 Identificaci n de las partes de las columnas BPG 100 140 y 200 Figura A 2 Identificaci n de las partes de las columnas BPG 100 140 y 200 continuaci n Figura A 3 Identificaci n de las partes de la columna BPG 300 5 sd 10 11 15 16 Figura A 4 Identificaci n de las partes de la columna BPG 300 continuaci n Figura A 5 Identificaci n de las partes de la columna BPG 450 Enco ntrar la informaci n de contacto de GE imagination at work y GE Monogram son marcas registradas de General E Electric Company su oficina local en A E BPG Sepharose Sephacryl Sephadex Superdex y Drop Design son marcas www gelifesciences com contact registradas de General Electric Company Todas las marcas registradas de terceros son propiedad de sus propietarios www gelifesciences com respectivos O 2007 General Electric Company Todos los derechos reservados Se public por primera vez en febrero de 2003 GE Healthcare Bio Sciences AB Todos los bienes y servicios se venden sujetos a los t rminos y condiciones de Bjorkgatan 30 venta de la compa a de GE Healthcare que los suministra Si desea recibir una 75184 U sala copia de estos t rminos y condiciones solic tenosla P ngase en contacto con pp su representante de
50. njuagar cuidadosamente la columna para eliminar todo residuo de NaC1 Se recomienda realizar un enjuagado con agua de al menos cinco vol menes de columna Agua es la soluci n de enjuagado preferida debido a las propiedades de solubilidad de NaC1 en agua con respecto a otras posibles soluciones de enjuagado tales como el etanol El protocolo de enjuagado debe usar al menos cinco vol menes de columna de agua purificada para garantizar una eliminaci n ptima de los iones de cloruro residuales que pueden resultar corrosivos para el acero inoxidable con el paso del tiempo El dise o de BPG permite que la soluci n tamp n est sobre el adaptador durante el empaquetado Una vez finalizado y sellada la junta de cierre es crucial eliminar toda la soluci n tamp n de ese espacio incluidos los iones de cloruro para evitar que se produzca corrosi n con el paso del tiempo En la secci n 4 3 Resistencia qu mica encontrar m s informaci n sobre NaCl 1 6 Eliminaci n y reciclado Cuando la columna haya alcanzado el fin de su ciclo vital debe eliminarse con arreglo a las leyes vigentes y las normativas relativas a los aspectos medioambientales del reciclado y eliminaci n de equipos industriales Esta responsabilidad recae sobre el usuario final o equivalente Contacte con las autoridades locales para cualquier consulta relativa a los aspectos medioambientales o las leyes vigentes para reciclar o eliminar equipos industriales de este tipo
51. o del adaptador lo da ar Humedezca la junta de cierre con agua o con una soluci n de etanol al 20 NO engrase la junta de cierre 2 Desatornille el volante de bloqueo 23 varias vueltas suficientes s lo para aflojar el sello de la junta de cierre del adaptador 33 34 Retire el adaptador sin dejar el acero inoxidable toque el vidrio 3 Con una llave y en la secuencia que muestra la Fig 4 4 retire las tuercas 2 y las arandelas de muelle 9 que fijan las varillas de soporte 8 a la brida 5 Precauci n No afloje del todo las tuercas de una sola vez Afloje las tuercas paso a paso tal y como muestra la Figura 4 4 Son suficientes tres o cuatro vueltas para aflojar y retirar las tuercas correctamente Para prevenir que se desatornillen las varillas utilice una llave ajustable en la parte plana Fig 3 4 Secuencia de retirada y apretado de las tuercas Precauci n Al retirar la brida el tubo de la columna queda suelto Tenga cuidado para evitar que se vuelque pierda el equilibrio el tubo de la columna 4 Retire la brida 5 con cuidado Con una llave ajustable retire las varillas de soporte 8 de la base 14 6 Levante el tubo de vidrio 9 y ret relo Con cuidado coloque el tubo de vidrio sobre una superficie firme Si la junta de cierre se adhiere al tubo de vidrio o a la base humed zcalo con una soluci n de etanol al 20 y luego ret relo 7 Con una llave en anillo retire
52. ocesos b sicos de montaje de la columna adaptador componentes de la columna y soporte Los componentes b sicos de la columna son e Tubo de vidrio e Brida e Juntas de sellado e Mallas del filtro e Mallas de soporte e Base e Varillas Las varillas sujetan la brida y la base con el tubo de vidrio sellado con juntas de sellado Las juntas de sellado a slan por completo el tubo de vidrio e impiden que entre en contacto con los componentes de acero inoxidable El conjunto de piezas de la brida del adaptador y la tuerca de ajuste est n sujetas o aferradas al reborde de la columna La tuerca de ajuste puede rotar sobre un segmento de cierre en la brida modificando la altura de la placa del adaptador en el tubo de la columna La Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 9 1 Introducci n 1 2 Etiquetado de la columna 10 junta de cierre sella el adaptador y la columna de vidrio al ser comprimido por la unidad de cierre Esta operaci n se realiza mediante el bot n de ajuste de sellado El soporte est sujeto a la base de la columna e incorpora ruedas con frenos accionables con los pies Nota Las columnas BPG 100 tienen pies ajustables Pueden solicitarse ruedas de forma adicional Las columnas BPG no deben emplearse para otros usos por ejemplo e Tanque de almacenamiento para productos qu micos etc e Vasija a presi n general e Vasija de fermentaci n e Contenedor de gases 1 2 Etiquetado de la columna E
53. para tampones de empaquetado PASO 3 Humedezca las mallas con etanol al 20 para eliminar el aire atrapado en las mismas PASO 4 Ajuste el flujo de la bomba al flujo del empaquetado sin conectar la columna a la bomba Registre la velocidad de la bomba para iniciar el empaquetado al flujo correcto PASO 5 Si el gel ya est en la columna levante el adaptador agite con cuidado el gel y repita los pasos 5 y 6 de la secci n 5 1 3 Si el gel no est en la columna repita los pasos 1 al 6 de la secci n 5 1 3 PASO 6 V lvula de seguridad Q x gt lt V lvula Fig 5 9 M todo de empaquetado de la columna paso 6 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 PASO 6 Ponga en marcha la bomba Elimine las burbujas de aire de los tubos desde la bomba bombeando con un flujo bajo c Durante el bombeo con un flujo bajo conecte el man metro entre la bomba y la columna luego conecte los tubos a la parte superior de la columna d Abra la v lvula inferior e Ajuste el flujo al flujo predefinido f Mida el flujo a intervalos regulares y aj stelo si es necesario La retropresi n del lecho aumentar y reducir el flujo a medida que se empaquete el gel g Aseg rese de que la presi n que aparece en el man metro no supera la presi n m xima del gel consulte el manual de usuario para cada gel o de la columna PASO 7 ON V lvula de s
54. primer paso de empaquetado de los procesos de empaquetado en dos etapas La abrazadera extra suministrada con el tubo de extensi n se utiliza para montar el adaptador en la extensi n Nota No empaquete la columna a alturas de lecho superiores a la longitud de la columna es decir el adaptador debe sellar la pared de la columna NO la pared del tubo de extensi n Se necesita un tubo de 10 cm de longitud para instalar el adaptador en el tubo de la columna si se retira la extensi n de empaquetado 3 13 BPG450 Desmontando la columna Para desmontar la columna BPG 450 consulte la Tabla A 3 y la Figura A 5 del final del manual y proceda de la siguiente manera 1 Afloje el sello del adaptador girando el volante 24 ADVERTENCIA Si el sello de la junta de cierre del adaptador est seco un movimiento forzado del adaptador lo da ar Humedezca la junta de cierre con agua o con una soluci n de etanol al 20 NO engrase la junta de cierre 2 Desplace el adaptador unos mil metros hacia abajo para aflojar la junta de cierre de la pared de vidrio Luego despl celo hacia arriba hasta donde pueda 3 Retire los tornillos de fijaci n 26 y las arandelas de muelle 27 Afloje la tapa 17 y levante y saque el adaptador Nota El adaptador de las columnas BPG 450 es pesado Por razones de seguridad se recomienda que el adaptador se levante con un elevador de techo conectado con los pernos de anillo de la tapa de la columna
55. ptador 30 y el resorte 33 quitando los tornillos 32 8 Puede desmontar el conjunto de piezas de la parte superior 19 23 quitando los tornillos 23 De esta forma se completa el procedimiento de desmontaje del adaptador Montaje del adaptador Para montar el adaptador en las columnas BPG 100 140 y 200 consulte la Figura A 1 y la Tabla 4 1 para las especificaciones de las llaves dinamom tricas y proceda de la siguiente manera 1 Coloque el segmento de cierre 20 en el hueco de la brida 21 2 Ajuste la parte insertable del rodamiento de ajuste 22 al cuerpo del volante de ajuste 19 mediante los tornillos 23 a trav s de la brida 21 de forma que el cuerpo del volante de ajuste gire en el segmento de cierre 20 3 Coloque el resorte 33 la camisa del adaptador 30 y el mbolo externo del adaptador 31 en la placa del adaptador 34 desliz ndolos sobre ella 4 Apriete el mbolo externo del adaptador 31 en la placa del adaptador 34 mediante los tornillos 32 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 5 Coloque la unidad de cierre 27 en el tubo del adaptador 31 desliz ndolo sobre l 6 Enelsentido de las agujas del reloj atornille 5 cm el conjunto de piezas de la brida 19 23 en el mbolo externo del adaptador 31 7 En el sentido de las agujas del reloj gire el tornillo de ajuste 17 sobre la parte superior del adaptador hasta que los orificios de la
56. ptimo paso 5 PASO 5 Nota Este paso debe realizarse r pidamente para que el gel no sedimente completamente Inserte el adaptador Use los cuatro tornillos de fijaci n BPG 100 140 y 200 o la abrazadera del adaptador de la placa superior BPG 300 y 450 para fijar la brida de la columna en su posici n c Use el volante ajustador de altura para colocar el adaptador 1 5 mm por debajo de la superficie superior del l quido 48 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 PASO 6 gt lt V lvula Cerrada Fig 5 6 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 6 PASO 6 a Asegure la junta de cierre del adaptador girando la tuerca de ajuste selladora BPG 100 140 y 200 o el asa BPG 300 y 450 sobre la parte superior del adaptador en el sentido de las agujas del reloj b Con la junta de cierre sellada descienda el adaptador llen ndolo con tamp n para expulsar el aire que est dentro del tubo del adaptador El tubo del adaptador estar lleno cuando el tamp n cree un menisco y no haya burbujas de aire Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 49 5 Funcionamiento 5 1 Empaquetado de la columna 50 PASO ON Q Y Man metro V lvula de seguridad gt lt V lvula Fig 5 7 Determinaci n del flujo de empaquetado ptimo paso 7 PASO 7 ADVERTENCIA Utilice siempre una v
57. r Fig 4 6 Curva de presi n flujo para una columna BPG 450 empaquetada con Q Sepharose Fast Flow a una altura del lecho de 15 cm Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 41 4 La columna BPG 4 4 Curvas de presi n flujo 42 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 5 Funcionamiento ADVERTENCIA Maneje la columna con cuidado ya que las especificaciones de presi n s lo son v lidas si el tubo de vidrio est indemne y sin rasgu os Nunca introduzca aire o gas en la columna Nota Antes de empaquetar la columna por primera vez recomendamos que lave la columna y los tubos con soluci n CIP p ej NaOH para asegurarse de que todas las superficies est n limpias Consulte la Secci n 1 3 de la Gu a de mantenimiento de columnas BPG Para un rendimiento ptimo de las columnas BPG recomendamos los protocolos de empaquetado de la columna esquematizados en los siguientes p rrafos Antes de usar las columnas le recomendamos que lea todo el cap tulo 5 1 Empaquetado de la columna Existen diferentes m todos de empaquetado dependiendo cada uno de la columna y del tipo de gel utilizado Para las columnas BPG recomendamos el m todo de empaquetado descrito en la subsecci n 5 1 5 El flujo de empaque tado ptimo depende de la temperatura del tipo de gel del lote y de la cantidad Por consiguiente para cada sistema individual el flujo ptimo debe determinarse emp ricamente mediante una curva de
58. r Utilice siempre una llave dinamom trica para apretar estas tuercas Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 21 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje 22 Tabla 3 1 Especificaciones de las llaves dinamom tricas para las columnas BPG 100 140 y 200 Columna BPG 100 140 200 Momento Nm 4 5 5 9 La columna est lista para ser utilizada y ya puede insertarse el adaptador Desmontaje del adaptador Para desmontar el adaptador en las columnas BPG 100 140 y 200 consulte la Tabla A 1 y la Figura A 1 y proceda de la siguiente manera 1 Retire la malla del filtro 36 dobl ndola con cuidado Retire la malla de soporte 35 Procure no rascar el adaptador para evitar p rdidas 2 Retire la pieza de bloqueo de giro 25 de la brida superior 21 quitando los ornillos de fijaci n 24 3 Libere la unidad de cierre 27 y la camisa del adaptador 30 desatornillando los ornillos de fijaci n 26 de la arandela superior de la unidad de cierre 4 Con cuidado retire la tuerca de ajuste 17 De esta forma disminuir la tensi n del resorte 33 situado bajo la camisa del adaptador 30 5 Retire el conjunto de piezas de la parte superior 19 23 y sep relo del mbolo externo 31 haci ndolo girar en el sentido de las agujas del reloj 6 Retire la unidad de cierre 27 y la junta de cierre del adaptador 28 29 Retire el mbolo externo del adaptador 31 la camisa del ada
59. raci n cromatogr fica de biomol culas y en los procesos de mantenimiento y limpieza de las columnas Los Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 35 4 La columna BPG 4 3 Resistencia qu mica 36 materiales polim ricos presentes en el flujo del proceso cumplen los requisitos detallados para la USP clase VI descritos en USP lt 88 gt Pruebas de reactividad biol gica In Vivo Puede considerarse que los componentes de la columna contienen partes h medos aqu llas que est n en contacto con los l quidos del proceso y partes secas Todos los materiales de fabricaci n son materiales de alta calidad que cumplen los requisitos del entorno de fabricaci n industrial En las tablas A 1 A 2 y A 3 del Ap ndice se presentan los componentes de las columnas e identifican los materiales en que se fabrican las partes h medas y secas de cada componente 4 3 Resistencia qu mica La tabla 3 3 pretende servir como gu a sobre la resistencia a los disolventes de los materiales utilizados en las columnas BPG Esta informaci n se ha recopilado de material publicado en diversas fuentes y no a partir de tests individuales de los diferentes componentes de la columna En consecuencia el operador debe considerar esta lista tan s lo como una gu a sobre la resistencia a productos qu micos mostrada por cada material Debe observarse que los efectos de un producto qu mico ser n m s graves a temperaturas y presiones m s altas y que no se ha
60. stanqueidad 19 toma de tierra 32 conectores 32 curvas de presi n 38 curvas de flujo 38 D desempaquetado de la columna 17 desmontaje del adaptador columnas 100 140 y 200 22 columnas 450 31 desmontando el adaptador columnas 300 27 desmontando la columna columnas 100 140 y 200 19 columnas 300 24 columnas 450 29 determinaci n del flujo de empaquetado 45 dispositivo de empaquetado situaci n de componentes 24 distintivo CE 10 E elecci n de la muestra de prueba para columnas 57 eliminaci n de la columna 13 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC especificaciones de la llave dinamom trica columnas 100 140 y 200 22 columnas 300 27 columnas 450 31 instalaci n de la columna 19 M montaje de la columna columnas 100 140 y 200 20 columnas 300 26 columnas 450 30 montaje del adaptador columnas 100 140 y 200 22 columnas 300 28 columnas 450 31 montar un tubo de extensi n columnas 100 140 y 200 23 columnas 300 28 columnas 450 31 N n de ref soportes y tubos 17 O operadores aprobados 12 R resistencia qu mica 11 36 37 S seguridad 11 atm sferas explosivas 11 distintivo EX 12 storage 12 T tama os de mallas flujos de empaquetado 51 tama os de malla 44 test de estanqueidad 33 test de estanqueidad de la columna 19 toma de tierra de la columna 32 tubo de extensi n montaje en las columnas 300 28 montaje en las columnas 450 31 montar en columnas 100 140 y 200 23 67 68 Colum
61. tamente en la brida Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 23 3 Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Desmontaje y montaje Fig 3 3 Situaci n de los componentes del dispositivo de empaquetado 2 Utilice las arandelas de muelle y las tuercas ciegas de la tapa de la columna adaptador para asegurar el tubo de extensi n en la columna La columna extendida est lista para usar en el primer paso de empaquetado de los procesos de empaquetado en dos etapas Los tornillos de fijaci n y las arandelas de muelle suministradas con el tubo de extensi n se utilizan para montar el adaptador en la extensi n Nota No empaquete la columna a alturas de lecho superiores a la longitud de la columna es decir el adaptador debe sellar la pared de la columna NO la pared del tubo de extensi n Se necesita un tubo de 10 cm de longitud para instalar el adaptador en el tubo de la columna si se retira la extensi n de empaquetado 3 1 2 BPG 300 Desmontando la columna Para desmontar la columna BPG 300 consulte la Tabla A 2 y las Figuras A 3 y A 4 del final del manual y proceda de la siguiente manera 24 Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Instalaci n y test de estanqueidad 3 1 Afloje las tuercas 4 de la brida de centrado 1 que asegura el montaje del adaptador con la brida 5 y retire la brida de centrado ADVERTENCIA Si el sello de la junta de cierre del adaptador est seco un movimiento forzad
62. tilizando siempre y cuando la muestra no interaccione con l En la pr ctica la correlaci n entre el valor de HETP y el rendimiento de la columna s lo puede ser evaluada por las especificaciones internas de los clientes Una vez establecido puede fijarse un est ndar para juzgar la aceptabilidad del empaquetado de una columna Por ejemplo el operador de la columna puede saber por experiencia que una columna empaquetada con gel Sephadex G 25 con valores de HETP superiores a 0 05 cm no da la separaci n requerida Por consiguiente el operador de la columna establecer este valor al m ximo permisible es decir la calidad m nima aceptable Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 59 5 Funcionamiento 5 2 Evaluaci n de la columna 60 5 2 3 C lculo del factor de asimetr a del pico El contorno del pico deber a ser lo m s sim trico posible Es lo que suele suceder en el caso de geles filtraci n pero en el de geles de intercambio de iones y de afinidad puede ser asim trico debido a interacciones con el gel Un cambio en el contorno del pico suele ser la primera indicaci n de un deterioro de la columna El valor del factor de asimetr a del pico deber a ser lo m s cercano posible a 1 El factor de asimetr a del pico As se calcula a partir del gr fico de la Fig 5 13 de la siguiente forma As b a donde a distancia desde el v rtice del pico hasta el 10 de la altura del pico en el lado ascendente del m
63. ue se utilice la columna tenga a su alcance este manual del Modo de empleo de la misma IMPORTANTE El usuario final debe asegurarse de que toda instalaci n mantenimiento funcionamiento e inspecci n son realizados por personal cualificado debidamente formado y conocedor de las instrucciones de funcionamiento ADVERTENCIA Utilice siempre una vestimenta protectora adecuada para garantizar la seguridad personal durante el funcionamiento ADVERTENCIA Preste atenci n espacial cuando se est trabajando cerca de la columna ADVERTENCIA NUNCA debe haber aire o gas a presi n en la columna ADVERTENCIA La presi n de trabajo de la columna nunca debe superar la presi n de dise o de lo contrario existe riesgo de lesi n personal y da o a la columna Debe acoplarse un dispositivo de seguridad adecuado ADVERTENCIA El rango de temperatura de trabajo de la columna nunca debe estar fuera del rango de temperatura de dise o ADVERTENCIA Sobre las superficies en contacto con l quido s lo debe utilizar productos qu micos que hayan demostrado no ser perjudiciales ADVERTENCIA Los frenos de la rueda deben estar activados en todo momento durante el funcionamiento o el almacenamiento de la columna Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC ADVERTENCIA Durante el traslado de la columna preste una atenci n especial a su equilibrio PRECAUCI N
64. ujo seg n se indica en el ejemplo anterior El flujo de empaquetado ptimo es de aproximadamente un 70 del flujo m ximo No se producir meseta en el caso de algunos geles r gidos en estos casos utilice un flujo con la presi n m xima permitida para la columna 5 1 4 Flujos de empaquetado recomendados para geles GE Health care Esta informaci n se encuentra en las instrucciones que acompa an a cada gel suministrado Sin embargo para un empaquetado ptimo recomendamos determinar una curva de presi n flujo con cada lote de geles columna o configuraciones del sistema tal y como se describe en la secci n 5 1 3 5 1 5 M todo de empaquetado de la columna Este m todo de empaquetado puede utilizarse con los geles BioProcess y se basa en la aplicaci n de un flujo constante a trav s de la columna Para preparar el procedimiento de empaquetado de la columna proceda de la siguiente forma ADVERTENCIA Utilice siempre una v lvula de seguridad conectada N directamente despu s de la bomba Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC 51 5 Funcionamiento 5 1 Empaquetado de la columna 52 PASO 1 Confirme que se ha establecido el flujo ptimo para la combinaci n de equipo columna tipo de gel y cantidad consulte la secci n 5 1 3 PASO 2 Compruebe que dispone de suficiente tamp n de empaquetado Un tamp n de empaquetado t pico es NaCl 0 1M Sin embargo compruebe siempre las instrucciones de los geles
65. umna est equilibrada de forma adecuada antes de evaluar el empaquetado 2 vol menes de columna Es preferible realizar tres carreras de prueba para ver si los valores del test son o no estables Si un mal resultado mejora durante esta prueba la raz n puede ser que la columna no estuviera debidamente equilibrada Para comprobar que el lecho es estable haga funcionar la columna a un presi n del 70 del empaquetado durante 20 horas y vu lvala a probar preferiblemente tres carreras de prueba Tenga en cuenta que los picos de presi n pueden producir un mal empaquetado agrietamiento Si sucede se necesita una trampa del aire y una v lvula despresurizadora entre la bomba y la columna Esta v lvula se situar entre la trampa de aire y la columna Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Funcionamiento 5 5 2 1 Elecci n de la muestra de prueba para columnas El material m s adecuado para realizar el test en la columna es la muestra que tiene que analizarse aunque esto no siempre es pr ctico ni econ mico Como alternativa puede utilizarse una soluci n de NaCl o acetona para obtener una buena aproximaci n de la calidad del empaquetado de la columna El eluido se controla midiendo la conductividad o la absorci n UV y el perfil resultante de eluci n se utiliza para calcular el valor de HETP Las ventajas de utilizar la soluci n de NaCl es que se puede conseguir con facilidad y emplearse con total seguridad para realizar tests e
66. usar da os en las instalaciones y lesiones f sicas en el operador 1 5 Almacenamiento de columnas BPG llenas de geles Las columnas BPG llenas de geles se almacenan en la soluci n bacteriost tica recomendada para los geles Antes de aplicar la soluci n bacteriost tica es esencial limpiar la columna por ejemplo con 0 5M NaOH u otra soluci n CIP recomendada para los geles Tambi n es importante enjuagar la columna para eliminar todos los iones de cloruro Enju guela con agua purificada despu s del CIP durante al menos cinco vol menes de columna Una vez aplicada la soluci n bacteriost tica la columna est lista para almacenarla Protocolo de almacenamiento en seco 1 Desmonte la columna 2 Efect e un mantenimiento de rutina es decir cambie las juntas t ricas etc Columnas BPG Modo de empleo 18 1170 70 AC Introducci n 1 3 Seque cuidadosamente todos los componentes de la columna 4 Monte la columna 5 Selle todas las entradas y salidas tal como se indica en el protocolo de almacenamiento anterior 6 Envuelva la columna en pl stico para evitar su exposici n al polvo y otros agentes contaminantes presentes en el aire 7 Guarde la columna a temperatura ambiente controlada en un entorno limpio y seco Nota Evite condiciones de almacenamiento que puedan exponer la columna a cambios de temperatura extremos 1 5 1 Limpieza con NaCl despu s del uso Si un proceso incorpora el uso de soluciones NaCl es esencial e

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