Análisis CEDIA® Cocaína
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1. Los metabolitos pueden detectarse en la orina hasta 3 semanas despu s del consumo prolongado excesivo de coca na El an lisis CEDIA Coca na emplea la tecnolog a del ADN recombinante patente estadounidense n 4708929 para producir un sistema nico y homog neo de enzimoinmunoan lisis Este an lisis se basa en la enzima bacteriana P galactosidasa que se ha preparado gen ticamente dividi ndola en dos fragmentos inactivos Estos fragmentos se vuelven a asociar espont neamente para formar una enzima totalmente activa que en el formato del an lisis descompone un sustrato y genera un cambio de color que puede medirse mediante espectrofotometr a En el an lisis la droga conjugada con un fragmento inactivo de la P galactosidasa compite con la droga de la muestra en busca de un sitio de fijaci n de anticuerpos Si la muestra contiene coca na sta se fija al anticuerpo permitiendo que los fragmentos inactivos formen una enzima activa Los fragmentos inactivos forman una enzima activa Si la muestra no contiene coca na el anticuerpo se fija a la coca na conjugada en el fragmento enzim tico inactivo e impide la recombinaci n de los fragmentos inactivos de fP galactosidasa impidiendo a su vez la formaci n de una enzima activa La cantidad de enzimas activas formadas y el correspondiente cambio de absorbancia es proporcional a la cantidad de droga presente en la muestra Reactivos 1 Amortiguador de reconstituci n de AE2. Workplace Drug Testing Programs Final Guidelines Este comunicado recomienda que las muestras que no se analicen en los 7 d as posteriores a su llegada al laboratorio se conserven en unidades de refrigeraci n seguras Procedimiento del an lisis Para la realizaci n de este an lisis pueden utilizarse analizadores qu micos capaces de mantener una temperatura constante pipetear muestras mezclar reactivos medir ndices enzim ticos y cronometrar la reacci n de manera precisa Microgenics parte de Thermo Fisher Scientific puede suministrar hojas de aplicaci n con los par metros espec ficos de los instrumentos Se suministran etiquetas de c digos de barras adicionales para la determinaci n semicuantitativa s lo con los kits de 17 mL y 65 mL Para utilizarlos cubrir la etiqueta original del envase con la etiqueta correcta Control de calidad y calibraci n An lisis cualitativo Para el an lisis cualitativo de muestras utilice el calibrador CEDIA multidrogas con cutoffs primarios cutoffs cl nicos primarios cutoffs optativos o cutoffs secundarios seg n el cutoff seleccionado para analizar los resultados Consultar la aplicaci n especifica del analizador An lisis semicuantitativo Para el an lisis semicuantitativo de los resultados de las muestras se usa el Calibrador Multidrogas con cutoffs Primarios Clinicos Opcionales o Secundarios seg n el cutoff seleccionado conjuntamente con los Calibradores Negativo Inte
3. An lisis CEDIA Coca na Thermo SCIENTIFIC IVD Para Usarlo En Diagn stico In Vitro REF 10016413 3 x 17 mL Indiko Kit 100086 Kit de 3x 17 mL 100095 Kit de 65 mL 1661230 Kit de 495 mL Indicaciones El an lisis CEDIA Coca na es un dispositivo m dico para diagn stico in vitro indicado para el an lisis cualitativo y semicuantitativo de metabolitos de la coca na en orina humana Para obtener un resultado anal tico confirmado debe emplearse un m todo qu mico alternativo m s espec fico El m todo de confirmaci n recomendado es la t cnica combinada de cromatograf a de gases y espectrometr a de masas GC MS Al valorar resultados anal ticos referentes a drogas y sobre todo cuando se trata de resultados positivos preliminares deben aplicarse consideraciones cl nicas y el criterio profesional Resumen y explicaci n del an lisis La coca na benzoilmetilecgonina se obtiene de la planta Erythroxylon coca muy extendida en Sudam rica La adicci n de la coca na es muy frecuente en EE UU 2 La coca na puede provocar euforia excitaci n locuacidad vivacidad ansiedad insomnio hiperactividad paranoia psicosis grave e incluso el suicidio 4 La coca na se metaboliza r pidamente siendo menos del 5 eliminado en la orina en su estado original 4 Los dos metabolitos mas importantes que se forman por hidr lisis enzim tica y no enzim tica son la benzoilecgonina y el ster met lico de ecgonina
4. Contiene piperazina N N bis cido 2 etanosulf nico 0 54 pg mL anticuerpo monoclonal de rat n anti benzoilecgonina sales de tamp n estabilizador y conservante 1a Reactivo de AE Contiene 0 171 g L de aceptor enzim tico sales de tamp n detergente y conservante 2 Amortiguador de reconstituci n de DE Contiene piperazina N N bis cido 2 etanosulf nico sales de tamp n y conservante 2a Reactivo de DE Contiene 15 38 pg L de donante enzim tico conjugado a benzoilecgonina 1 67 g L de rojo de clorofenol P D galactopiran sido estabilizador y conservante Material adicional Etiquetas de c digo de barras alternativas n meros de cat logo 100086 y 100095 solamente Consulte el modo de empleo en la hoja de aplicaciones espec fica del analizador Envase de analizador vac o para trasvasar la soluci n DE AE n de cat 100095 Envase de analizador vac o para trasvasar la soluci n DE n mero de cat logo 1661230 solamente Material adicional requerido se vende por separado Calibrador CEDIA negativo Calibrador CEDIA multidrogas con cutoffs primarios o cutoffs clinicos primarios 300 ng mL Calibrador CEDIA multidrogas con cutoffs secundarios 150 ng mL Calibrador CEDIA multidrogas con cutoffs optativos 200 ng mL Calibrador CEDIA multidrogas intermedio Calibrador CEDIA multidrogas alto Conjunto de controles para drogas en orina MGC Primary 300 ng mL Conjunto de controles para drogas en orina MGC Clinical 300 n
5. a iguales o superiores al valor de respuesta del alibrador se consideran positivas Las muestras que produzcan valores de respuesta inferiores valor de respuesta del calibrador se consideran negativas Para obtener m s informaci n onsulte la aplicaci ns espec fica del analizador 009 0mam Resultados semicuantitativos El calibrador multidrogas con cutoffs primarios cutoffs cl nicos primarios cutoffs optativos o cutoffs secundarios utilizado junto con el calibrador negativo y los calibradores multidrogas intermedio y alto puede utilizarse para estimar la concentraci n relativa de metabolitos de la Exactitud Se analizaron 590 muestras de orina en el Hitachi 717 con el an lisis CEDIA Coca na utilizando un enzimoinmunoan lisis ElA de tipo comercial para metabolitos de la coca na como referencia Los resultados se detallan a continuaci n A Cutoff de 300 ng mL B Cutoff de 200ng mL CEDIA CEDIA 9 2 87 5t EIA EIA o 49 o 498 Las muestras se analizaron mediante CG EM y conten an 22 94 ng mL de benzoilecgonina t Todas las 5 muestras se analizaron mediante CG EM En 4 muestras se encontraron 22 101 ng mL de benzoilecgonina en una muestra 169 ng mL de benzoilecgonina Especificidad Al analizar los siguientes compuestos originales y metabolitos con el an lisis CEDIA Coca na protocolo de cutoff de 300 ng mL se obtuvieron l
6. amina 500 000 Caracter sticas espec ficas de rendimiento A A continuaci n se muestran los resultados t picos obtenidos con el analizador Hitachi 717 Los Cimetidina 500 000 Morfina 100 000 resultados obtenidos en su laboratorio pueden ser distintos a estos datos Clordiacep xido 100 000 Nifedipina 500 000 Precisi n o i Code na 500 000 Propoxifeno 500 000 Los estudios de la precisi n medida realizados con reactivos y calibradores envasados arrojaron los siguientes resultados en mA min con un analizador Hitachi 717 siguiendo las Diacepam 500 000 Ranitidina 500 000 pautas de realizaci n del experimento de repeticiones NCCLS modificado Digoxina 100 000 Secobarbital 500 000 Precisi n en laser Precisi n total Enalapril 500 000 11 nor A THC COOH 10 000 ng mL 150 225 300 375 150 225 300 375 a Fenciclidina 500 000 Verapamil 500 000 n 120 120 120 120 120 120 120 120 E No se observaron interferencias de las siguientes sustancias a adidas a las concentraciones x 2926 333 4 363 6 387 3 292 6 333 4 363 6 387 3 end genas normales encontradas en orina cuando se analizaron con el an lisis CEDIA Coca na SD 4 15 3 36 3 32 3 21 13 6 8 91 9 69 10 47 Sustanci Concentraci n Sustanci Concentraci n CV 1 4 1 0 0 9 0 8 4 7 2 1 2 1 2 7 ariak ensayada CE ensayada Acetona lt 1 0 g dL Galactosa lt 10 mg dL cido asc rbico lt 0 15 g dL y globulina lt 0 5 g dL cido ox lico lt 0 1 g dL Glucosa lt 1 5 g dL Alb mina de suero humano lt 0 5 g
7. dL Hemoglobina lt 0 3 g dL Cloruro s dico lt 6 0 g dL Riboflavina lt 7 5 mg dL Creatinina lt 0 5 g dL Urea lt 2 0 g dL Etanol lt 1 0 g dL Sensibilidad El l mite de detecci n LDO de la aplicaci n cualitativa fue 6 ng mL y 13 ng mL con los protocolos de cutoff de 150 ng mL y 300 ng mL respectivamente El l mite de detecci n LDO de la aplicaci n semicuantitativa fue 13 2 ng mL y 19 5 ng mL con los protocolos de cutoff de 150 ng mL y 300 ng mL respectivamente Referencias 1 Hawks RL Analytical methodology In Hawks RL Chiang C N eds Urine Testing for Drugs of Abuse NIDA Research Monograph 1986 73 30 41 2 Gawin FH Ellinwood EH Jr Cocaine and other stimulants Actions abuse and treatment N Engl J Med 1988 318 1173 1182 3 Jatlow PI Drugs of abuse profile Cocaine Clin Chem 1987 33 supplI 66B 71B 4 Bouknight LG Bouknight RR Cocaine A particularly addictive drug Postgrad Med 1988 83 115 124 131 5 Benowitz NL Clinical pharmacology and toxicology of cocaine Pharmacol 8 Toxicol 1993 72 3 12 6 Jones RT The pharmacology of cocaine In Grabowski J ed Cocaine Pharmacology Effects and Treatment of Abuse NIDA Research Monograph 1984 50 34 53 7 Ambre J Urinary excretion of cocaine and metabolites in humans A kinetic analysis of published data J Anal Toxicol 1985 9 241 245 8 Ambre J Ruo Tl Nelson J Belknap S Urinary excretion of cocaine benzoy
8. es NOTA 2 Para evitar la contaminaci n cruzada de los reactivos no intercambie los tapones de los envases de reactivo La soluci n R2 debe presentar un color amarillo naranja Un color rojo oscuro o rojo p rpura indica que el reactivo est contaminado y debe desecharse NOTA 3 Antes de realizar el an lisis las soluciones R1 y R2 deben estar a la temperatura de almacenamiento del compartimiento de reactivos del analizador Para obtener m s informaci n consulte la aplicaci n espec fica del analizador NOTA 4 Para garantizar la estabilidad de la soluci n de AE reconstituido evite la exposici n continuada y prolongada a luz brillante Almacene los reactivos a entre 2 y 8 C NO LOS CONGELE Para determinar la estabilidad de los componentes sin abrir consulte la fecha de caducidad en las etiquetas de la caja o del envase Soluci n R1 60 d as refrigerada en el analizador a entre 2 y 8 C Soluci n R2 60 d as refrigerada en el analizador a entre 2 y 8 C Recogida y manipulaci n de muestras Obtenga muestras de orina en recipientes limpios de cristal o pl stico Las muestras muy turbias deben centrifugarse antes del an lisis Trate la orina humana como material potencialmente infeccioso Si se sospecha que la muestra puede estar adulterada obtenga otra muestra para el an lisis La adulteraci n de las muestras de orina puede afectar a los resultados del an lisis Las pautas indicadas en The Mandatory Guidelines for Federal
9. g mL Conjunto de controles para drogas en orina MGC Select 150 ng mL Conjunto de controles para drogas en orina MGC Specialty 150 ng mL A Precauciones y advertencias Los reactivos contienen azida s dica Evite el contacto con la piel y las mucosas En caso de contacto lave las reas afectadas con abundante agua En caso de contacto con los ojos o de ingesti n consulte inmediatamente con un m dico La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las ca er as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Al desechar dichos reactivos debe enjuagarse siempre con abundante agua para evitar la acumulaci n de azidas Limpie las superficies met licas expuestas con hidr xido s dico al 10 Preparaci n y almacenamiento de los reactivos A continuaci n se describe la preparaci n de las soluciones para los analizadores Hitachi Consultar la aplicaci n espec fica al analizador para obtener m s detalles Extraiga el kit del almacenamiento refrigerado inmediatamente antes de preparar las soluciones Prepare las soluciones en el orden siguiente para reducir el riesgo de una posible contaminaci n Soluci n de donante enzim tico R2 Conecte el envase 2a reactivo de DE al envase 2 amortiguador de reconstituci n de DE utilizando uno de los adaptadores incluidos Mezcle los l quidos mediante una suave inversi n y aseg rese de que todo el material liofilizado del envase 2a pasa al envase 2 Evite la formaci n de e
10. lecgonine and ecgonine methyl ester in humans J Anal Toxicol 1988 12 301 306 9 Weiss RD Gawin FH Protracted elimination of cocaine metabolites in long term high dose cocaine abusers Am J Med 1988 85 879 880 10 Burke WM et al Prolonged presence of metabolite in urine after compulsive cocaine use J Clin Psychiatry 1990 51 145 148 11 Henderson DR Friedman SB Harris JD etal CEDIA a new homogeneous immunoassay system Clin Chem 1986 32 1637 1641 12 Notice of Mandatory Guidelines For Federal Workplace Drug Testing Program Final Guidelines Federal Register 1994 110 June 9 11983 Las pautas revisadas se esperan para el a o 2002 13 Datos sobre trazabilidad archivados en Microgenics Corporation parte de Thermo Fisher Scientific 14 Datos archivados en Microgenics Corporation parte de Thermo Fisher Scientific taal EC REP Microgenics Corporation Thermo Fisher Scientific Oy 46360 Fremont Blvd Ratastie 2 P O Box 100 Fremont CA 94538 6406 EE UU 01621 Vantaa Finland Servicio al cliente y de Tel 358 9 329100 asistencia t cnica en EE UU Fax 358 9 32910300 1 800 232 3342 Para actualizaciones de folletos visite www thermoscientific com diagnostics Otros pa ses Comun quese con su representante local de Thermo Fisher Scientific CEDIA es una marca registrada de Roche Diagnostics Thermo SCIENTIFIC 10006475 2_ES 2012 07
11. os siguientes resultados porcentuales de reacci n cruzada Concentraci ne Sustancia analizada ng mL Reacci n cruzada Benzoilecgonina 300 100 Cocaetileno 312 57 Coca na 312 54 Ecgonina 10 000 1 1 Ecgonina metil ster 10 000 lt 0 1 Se analizaron compuestos no relacionados estructuralmente mediante el an lisis CEDIA Coca na protocolo de cutoff de 300 ng mL y se obtuvieron respuestas negativas cuando se analizaron muestras con las concentraciones indicadas a continuaci n coca na Consultar la aplicaci n espec fica del analizador para obtener m s detalles Sustancia concentracion Sustancia Concentracion ng mL ng mL Cuando se informe de un resultado con una concentraci n se debe tener en cuenta que existen Acetaminofeno 500 000 Fenobarbital 500 000 factores que pueden influir en el resultado de un test de orina como pueden ser la ingesti n de l quidos y otros factores biol gicos Acido acetilsalic lico 500 000 Fluoxetina 500 000 Limitaciones cido salicilico 500 000 Ibuprofen 500 000 i Un resultado positivo en el an lisis indica la presencia de metabolitos de la coca na no Amoxicilina 100 000 Levotiroina 50 000 indica ni mide la intoxicaci n 2 Existe la posibilidad de que otras sustancias o factores no mencionados interfieran en Anfetamina 500 000 Metadona 500 000 el an lisis y causen resultados falsos p ej errores t cnicos o de procedimiento Captopril 500 000 Metanfet
12. rmedio y Alto Las pr cticas correctas de laboratorio recomiendan analizar los controles cada d a que se analicen las muestras y cada vez que se realice una calibraci n Se recomienda efectuar dos niveles de controles uno 25 por encima y otro 25 por debajo del valor de cutoff elegido Utilice el conjunto CEDIA de controles multidrogas el conjunto de controles cl nicos el conjunto de controles optativos cutoff 300 o el conjunto de controles espec ficos cutoff 150 para el control de calidad Volver a calibrar el an lisis si se cambian los reactivos o si los resultados de los controles exceden los l mites fijados Cada laboratorio debe fijar su propia frecuencia de control Basar la evaluaci n del control de calidad en los valores que se obtengan para los controles que deben quedar dentro de los l mites especificados Si se detectan tendencias o cambios repentinos de los valores revise todos los par metros operativos Para obtener m s ayuda p ngase en contacto con el servicio de asistencia t cnica al cliente Todos los requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditaci n locales estatales o federales Resultados y valores esperados Resultados cualitativos Calibrador CEDIA Multidrogas con cutoffs primarios o secundarios seg n el cutoff eleccionado se utiliza como referencia para distinguir entre muestras positivas y negativas as muestras que produzcan valores de respuest
13. spuma Separe el envase 2a y el adaptador del envase 2 y des chelos Tape el envase 2 y d jelo reposar unos 5 minutos a temperatura ambiente Mezcle de nuevo Anote la fecha de la reconstituci n en la etiqueta del envase Soluci n de aceptor enzim tico R1 Conecte el envase la reactivo de AE al envase 1 amortiguador de reconstituci n de AE utilizando uno de los adaptadores incluidos Mezcle los l quidos mediante una suave inversi n y aseg rese de que todo el material liofilizado del envase la pasa al envase 1 Evite la formaci n de espuma Separe el envase la y el adaptador del envase 1 y des chelos Tape el envase 1 y d jelo reposar unos 5 minutos a temperatura ambiente entre 15 y 25 C Mezcle de nuevo Anote la fecha de la reconstituci n en la etiqueta del envase N mero de cat logo 100095 analizador Hitachi 717 911 912 914 Trasvase los reactivos reconstituidos a los envases de 100 mL vac os R1 y R2 correspondientes suministrados con el kit Analizador Hitachi 917 y Sistema Modular Analytics P Utilice los reactivos reconstituidos sin trasvasar los envases Deseche los envases de 100 mL vac os N mero de cat logo 1661230 analizador Hitachi 747 y Sistema Modular Analytics D Trasvasar mediante el embudo parte de la soluci n R2 al envase suministrado de soluci n R2 adecuadamente etiquetado NOTA 1 Los componenetes suministrados en este kit deben utilizarse en su conjunto No mezclar componentes de lotes diferent
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