Sistema de pruebas RF IgM Plus
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1. Resultado de ELISA Positivo Negativo Total Positivo 308 11 319 Resultados AtheNA Negativo 0 129 129 Total 308 140 448 Intervalo de confianza del 95 Sensibilidad relativa 100 98 21 99 99 Especificidad relativa 92 1 86 38 96 01 Concordancia relativa 97 5 95 65 98 77 NOTA Originalmente se incluyeron 450 muestras en el estudio Dos de las muestras produjeron resultados no v lidos en el ensayo AtheNA RF y por lo tanto se excluyeron del resumen de datos anterior Evaluaci n de la especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS La especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se evalu mediante 150 muestras de donantes normales dado que se part a de la base de que dicho grupo no presentar a el anticuerpo FR IgM Utilizando este grupo 128 148 dieron negativo para el anticuerpo IgM FR Por tanto la especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se determin en 86 5 Expresado como un intervalo de confianza del 95 la especificidad cl nica se determin en un rango de 0 799 a 0 916 Evaluaci n de la sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM La sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se evalu utilizando 150 muestras de suero definidas cl nicamente de pacientes diagnosticados con artritis reumatoide Utilizando este grupo 149 150 diero2. et al Immunoglobulin E Rheumatoid Factor in the Serum of Patients with RA Asthma and Other Diseases J Clin Invest 68 1610 1981 6 Wolfe F The Natural History of Rheumatoid Arthritis J of Rheumatol Vol 23 suppl 44 13 22 1996 7 Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture Second edition Approved Standard 1984 Published by National Committee for Clinical Laboratory Standards ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba RF IgM Plus 5 Fecha rev 9 15 2015 8 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens NCCLS Document H18 A Vol 10 No 12 Approved Guideline 1990 9 U S Department of Labor Occupational Safety and Health Administration Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Fed Register 56 64175 64182 1991 10 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests Approved Guidelines 4 Edition 2010 CLSI Document GP44 A4 ISBN 1 56238 724 3 Clinical and Laboratory Standards Institute 950 West Valley Road Suite 2500 Wayne PA 19087 lt ZEUS Scientific saal ZEUS Scientific Inc 200 Evans Way Branchburg New Jersey 08876 EE UU Llamada gratuita EE UU 1 800 286 2111 opci n 2 Internacional 1 908 526 3744 Fax 1 908 526 2058 P gina Web www zeusscientific com AtheNA Multi Lyte y SAVe Diluent son marcas registradas de ZEUS Scientific Inc ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prue
3. En este caso no comunique los resultados del paciente La validez de la muestra se basa en las caracter sticas de las microesferas y sus interacciones con los sueros de los pacientes Se supervisan diferentes par metros autom ticamente mediante la Intra Well Calibration Technology Si se determina que cualquiera de los criterios no cumple las especificaciones los resultados del paciente se considerar n como no v lidos y se deber n repetir En caso de que esto se produzca el informe de datos indicar la muestra en particular que se invalid y el c digo de soluci n de problemas Es posible analizar controles adicionales siguiendo las directrices o los requisitos de las normativas locales regionales o nacionales o de las organizaciones acreditadas Los controles externos deben ser representativos del suero humano normal debido a que el sistema de calibraci n AtheNA Multi Lyte se basa parcialmente en las caracter sticas de la muestra de suero Si la formulaci n de la muestra es artificial no es suero humano se pueden producir resultados err neos Las buenas pr cticas de laboratorio recomiendan el uso de controles positivos y negativos para asegurar la funcionalidad de los reactivos y la ejecuci n adecuada del procedimiento del ensayo Los requisitos de control de calidad se deben realizar en total cumplimiento con las normativas locales auton micas o estatales o con los requisitos de acreditaci n y los procedimientos de control d
4. a 17 Precauci n neutralice cualquier desecho l quido con pH cido antes de agregarlo a la soluci n de lej a 18 No permita que el conjugado entre en contacto con recipientes o instrumentos que hayan podido contener previamente una soluci n que utilice azida de sodio como conservante Los residuos de azida de sodio pueden destruir la actividad enzim tica del conjugado 19 No exponga ninguno de los reactivos a soluciones que contengan lej a o a ning n olor fuerte de soluciones que contengan lej a Los restos de lej a hipoclorito de sodio incluso a nivel de trazas pueden destruir la actividad biol gica de muchos de los reactivos incluidos en este sistema de pruebas MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Pipetas capaces de dispensar con exactitud entre 10 y 200 yl 2 Pipeta multicanal capaz de dispensar con exactitud 10 200 ul 3 Dep sitos de reactivos para pipetas multicanal 4 Pipetas serol gicas 5 Puntas de pipetas descartables 6 Toallas de papel 7 Cron metro de laboratorio para controlar los pasos de incubaci n 8 Recipiente para desechos y desinfectante es decir 10 de lej a de uso dom stico 0 5 de hipoclorito de sodio 9 SistemaAtheNA Multi Lyte Luminex Instrument con fluido envolvente n mero de producto 40 50000 10 Agua destilada o desionizada 11 V rtex 12 Sonicador de ba o peque o 13 Agitador de placas capaz de agitar a una velocidad de 800 RPM opcional para el
5. de microesferas durante 30 segundos en un peque o sonicador de ba o b Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el contenido del ensayo se mezcle detenidamente Entre los medios adecuados de mezcla se incluye mezclar la placa en un agitador de placa durante aproximadamente 30 segundos a 800 RPM aproximadamente o ajustar una pipeta en ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba RF IgM Plus 2 Fecha rev 9 15 2015 10 11 12 aproximadamente del volumen en la placa y aspirar y expulsar repetidamente bomba arriba y bomba abajo el contenido del pocillo durante un m nimo de 5 ciclos EJEMPLO DE CONFIGURACI N DE LA PLACA 1 2 Control negativo Etc Control positivo Paciente 1 Paciente 2 Paciente 3 Paciente 4 Paciente 5 H Paciente 6 Prepare una diluci n 1 21 por ejemplo 10 ul de suero 200 ul de diluyente SAVe Diluent del control negativo del calibrador del control positivo y de cada suero de paciente NOTA El diluyente SAVe Diluent sufrir un cambio de color lo cual confirma que la muestra se ha combinado con el diluyente Para obtener un rendimiento adecuado es importante que las disoluciones de muestra se mezclen detenidamente seg n el punto 2b Despu s de determinar el n mero total de pocillos a procesar utilice una pipeta multicanal o repetidora para dispensar 50 uL de suspensi n de microesferas dentro de cada uno de los pocillos de la platina de filtraci n Transfiera 10 uL de cada muestra dilu
6. manipularse con un Nivel de bioseguridad 2 tal como se ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba RF IgM Plus 1 Fecha rev 9 15 2015 recomienda para cualquier muestra de sangre o suero humano potencialmente infeccioso en el manual de Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Bioseguridad en laboratorios microbiol gicos y biom dicos de los Centros para el Control de Enfermedades Institutos Nacionales de la Salud ltima edici n y en la Norma de la OSHA sobre Pat genos que se transmiten en la sangre 9 5 Para lograr resultados precisos es esencial cumplir estrictamente los tiempos y temperaturas de incubaci n especificados Se debe dejar que todos los reactivos alcancen temperatura ambiente 20 25 C antes de empezar el ensayo Devuelva los reactivos no utilizados a una temperatura refrigerada inmediatamente despu s de su uso 6 Un lavado inadecuado podr a ocasionar resultados de falsos positivos o falsos negativos Debe reducirse al m nimo la cantidad de soluci n de lavado residual p ej mediante secado o aspiraci n antes de a adir el conjugado No permita que los pocillos se sequen entre una incubaci n y la siguiente 7 El diluyente SAVe la suspensi n de microesferas los controles y el conjugado contienen azida s dica en una concentraci n de 0 1 w v Se ha informado que la azida s dica forma azidas de plomo o cobre en las ca er as del laboratorio lo que puede ocasionar expl
7. tecnolog a Intra Well Calibration Technology ejecuta un an lisis de regresi n de las normativas internas y a continuaci n ajusta los valores de unidad calculados bas ndose en una normativa adicional y en las caracter sticas de la muestra de suero 2 Interpretaciones Los resultados del ensayo de AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se pueden interpretar de la siguiente manera Valor unitario Muestras negativas lt 6 IU ml Muestras positivas gt 6 IU ml Muestras positivas fuertes gt 25 IU ml LIMITACIONES DEL ENSAYO 1 El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS es una herramienta para el diagn stico pero no es en s una prueba diagn stica Los resultados de la prueba se deben interpretar junto con la evaluaci n cl nica y los resultados de otros procedimientos diagn sticos 2 Debido a la naturaleza homog nea de este ensayo las muestras hemol ticas ict ricas o lip micas pueden interferir con el resultado de este ensayo Adem s los espec menes con concentraciones de lgC anormales pueden interferir con el resultado de este ensayo Debe evitarse el uso de estos tipos de muestras 3 Un resultado negativo no excluye la posibilidad de artritis reumatoide Aproximadamente el 25 de los pacientes diagnosticados con artritis reumatoide pueden producir resultados negativos de FR RESULTADOS ESPERADOS En la sangre del grupo de donantes normales hab a un total de 148 muestras De las 148 muestras 128 148 86 5 fuero
8. ZEUS AtheNA Sistema de pruebas RF IgM Plus IVD z E Multi Lyte A91101M USO PREVISTO El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte Rheumatoid Factor RF IgM Plus de ZEUS est dise ado para la detecci n cualitativa o cuantitativa de anticuerpos de tipo lg M contra el factor reumatoide FR en suero humano El sistema de pruebas est dise ado para ser utilizado como ayuda en el diagn stico de artritis reumatoide Esta prueba est concebida exclusivamente para uso diagn stico in vitro IMPORTANCIA Y ASPECTOS GENERALES La artritis reumatoide AR es un trastorno inflamatorio cr nico y generalmente progresivo de las articulaciones La AR es una enfermedad muy variable que se manifiesta desde un cuadro leve de breve duraci n a una poliartritis destructiva progresiva asociada con una vasculitis sist mica 1 Se ha estimado recientemente que aparece en un 1 2 de la poblaci n general 2 y es dos veces m s probable que se produzca en hombres que en mujeres 1 Las caracter sticas cl nicas de la enfermedad precoz consisten en linfadenopat a anorexia debilidad cansancio y rigidez matutina o dolor generalizado 1 3 La AR se asocia con varios atributos que se pueden medir en el laboratorio 4 Los hallazgos anal ticos m s frecuentes que se asocian con la AR son el factor reumatoide FR los anticuerpos antinucleares ANA los complejos inmunes y los niveles de complemento caracter sticos 3 La medici n de la IgM FR en suero tiene un pap
9. ba RF IgM Plus Para consultas al Servicio de atenci n al cliente en EE UU contacte con su distribuidor local Para consultas al Soporte t cnico contacte con ZEUS Scientific llame de forma gratuita o escriba a supportOzeusscientific com Para consultas al Servicio de atenci n al cliente y al Soporte t cnico desde fuera de EE UU contacte con su distribuidor local 2015 ZEUS Scientific Inc Todos los derechos reservados 6 EMERGO EUROPE Molenstraat 15 EC 2513 BH The Hague The Netherlands Tel 31 0 70 345 8570 Fax 31 0 70 346 7299 Fecha rev 9 15 2015
10. de microesferas de poliestireno cada uno conjugado con un ant geno diferente Si est presente en los sueros del paciente FR IgM se unir con el ant geno inmovilizado en uno o m s conjuntos de microesferas Las microesferas se enjuagan para extraer las prote nas s ricas no reactivas 2 EllgM antihumano de cabra conjugado con ficoeritrina se a ade al recipiente y la platina se incuba El conjugado reaccionar con el anticuerpo de tipo IgM inmovilizado en la fase s lida del paso 1 A continuaci n la suspensi n de mircroesferas se analiza utilizando el instrumento AtheNA Multi Lyte El conjunto o conjunto de microesferas se clasifican identifican y la cantidad de mol cula informante conjugado PE se determina para cada conjunto de microesferas Mediante el empleo de Intra Well Calibration Technology tecnolog a de calibraci n intrapocillo se utilizan conjuntos de micropart culas de calibraci n interna para convertir fluorescencia sin procesar en resultado unidades COMPONENTES DEL SISTEMA DE PRUEBA Materiales suministrados Cada sistema de pruebas contiene los siguientes componentes en cantidad suficiente para realizar el n mero de pruebas indicado en la etiqueta del envase NOTA los siguientes componentes contienen como conservante azida de sodio a una concentraci n de lt 0 1 p v Suspensi n de microesferas controles conjugado y SAVe Diluent2 SOLN BEAD Suspensi n de microesferas contiene microesferas de poliestir
11. e 60 minutos CONTROL DE CALIDAD Olnimi olol WO 0 J O UI Es 0 N E O Precauci n Los controles positivo y negativo tienen como fin supervisar cualquier fallo importante del reactivo El Control Positivo no asegurar la precisi n del l mite de referencia del ensayo 1 2 Cada vez que se realiza el ensayo es necesario incluir el Control Negativo en el pocillo A1 y el Control Positivo en el pocillo B1 La validez de la tirada se determina mediante la realizaci n de los controles positivos y negativos Estos criterios se analizan autom ticamente mediante la Intra Well Calibration Technology a El control negativo y el control positivo deben ser todos negativos en la microesfera no espec fica o de ant geno de control b El control negativo debe ser negativo para todos y cada uno de los analitos incluidos en la suspensi n de microesferas c El control positivo debe ser positivo para un grupo predeterminado de analitos que se incluyen en la suspensi n de microesferas multiplexada El control positivo debe arrojar un resultado FR positivo Adem s del resultado cualitativo el control positivo debe cumplir con las escalas predeterminados de actividad Estos intervalos est n codificados dentro del CD de calibraci n d Sino se cumple ninguno de los criterios anteriores toda la tirada se considerar como no v lida y se tendr que repetir
12. e Calidad normativos del laboratorio del usuario Se recomienda que el usuario consulte CLSI EP12 A and 42 CFR 493 1256 para obtener informaci n de ayuda sobre las pr cticas de CC adecuadas ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba RF IgM Plus 3 Fecha rev 9 15 2015 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS 1 C lculos a Calibraci n del ensayo El sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS utiliza la Intra Well Calibration Technology La Intra Well Calibration Technology incluye una curva est ndar con m ltiples puntos dentro de la suspensi n de microesferas Con la Intra Well Calibration Technology cada pocillo del ensayo se calibra internamente sin que necesite la intervenci n del usuario La curva est ndar est dise ada para que se ajuste autom ticamente bas ndose en las caracter sticas nicas del paciente o suero de control Los valores del calibrador se asignan de acuerdo con los est ndares internos de ZEUS son espec ficos del lote y est n codificados en el CD de calibraci n del lote b L mite de referencia del analito Cada analito del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS tiene un l mite de referencia asignado ZEUS determina los l mites de referencia para cada lote de sistema de pruebas y est n codificados en el CD de calibraci n del lote c Mediante la tecnolog a Intra Well Calibration Technology todos los c lculos se realizan autom ticamente cuando se utiliza el sistema AtheNA Multi Lyte La
13. el diagn stico importante en la AR y m s recientemente se ha visto implicado con el pron stico de la enfermedad 6 El FR pertenece a un grupo de inmunoglobulinas definido t picamente como anticuerpos que reaccionan con la porci n Fc de las mol culas de IgG humana y de algunas otras especies 1 4 El FR es un anticuerpo policlonal que reacciona con una gran cantidad de determinantes de la mol cula IgG 4 Los anticuerpos contra el FR pertenecen a las tres clases principales de inmunoglobulinas IgM IgG e IgA aunque tambi n se ha descrito FR IgE 5 Los FR IgM e IgG son los m s frecuentes 1 estando presente el FR IgM en el 75 de los pacientes diagnosticados de AR 4 El FR tambi n se ha asociado con algunas infecciones bacterianas y v ricas como hepatitis y mononucleosis infecciosa y con algunas infecciones cr nicas como tuberculosis enfermedades parasitarias endocarditis bacteriana subaguda y c ncer 1 Adem s se pueden ver niveles elevados de FR en el 15 de la poblaci n mayor de 65 a os de edad 4 FUNDAMENTO DE LA PRUEBA El sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS est dise ado para detectar anticuerpos de tipo IgM contra FR en suero humano El procedimiento de la prueba comprende dos pasos de incubaci n 1 Los sueros de prueba diluidos correctamente se incuban en una mezcla multiplexada de la suspensi n de microesferas La suspensi n de microesferas contiene una mezcla de conjuntos distinguibles
14. eno de 5 6 micras que se conjugan con IgG humano purificado por afinidad La suspensi n de microesferas tambi n contiene un conjunto de microesferas dise adas para detectar anticuerpos no espec ficos en la muestra del paciente si est presente y cuatro conjuntos de microesferas separadas que se utilizan para la calibraci n del ensayo Un frasco de color mbar que contiene 5 5 ml Listo para usar z Conjugado IgM antihumana espec fica de la cadena u de cabra conjugado con ficoeritrina Una botella de color mbar que contiene 15 ml Listo CONJ 2 para usar CONTROL 3 Control positivo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n rojo CONTROL 4 Control negativo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n verde de Diluyente SAVe Diluent Una botella de 50 ml con tap n verde soluci n salina tamponada con fosfato Listo para usar NOTA El diluyente SAVe DIL oz Diluent cambiar de color cuando se combine con suero Tamp n de lavado concentrado 10X diluir 1 parte del concentrado 9 partes de agua desionizada o destilada Una botella de 50 ml con tap n transparente que contiene soluci n salina tamponada con fosfato concentrada 10X Z li i D P 1 Los siguientes componentes no dependen del n mero de lote del sistema de pruebas y se pueden usar indistintamente con cualquier sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte de ZEUS Tamp n de lavado y SAVe Diluent9 2 Elsistema de pruebas tambi n contiene a Una
15. etiqueta de componentes que contiene informaci n espec fica de lote dentro de la caja del sistema de pruebas b CD de calibraci n que incluye los valores de calibraci n del kit espec ficos de los lotes y necesarios para el an lisis de la muestra y el control de calidad del ensayo y prospectos del paquete c Una placa de disoluci n de 96 pocillos d Una placa del filtro de disoluci n de 96 pocillos PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro 2 Se deben seguir las precauciones normales que se utilizan para manipular reactivos de laboratorio En caso de contacto con los ojos enjuague inmediatamente con abundante agua y busque asistencia m dica Utilice ropa de protecci n adecuada guantes y protecci n para la cara ojos No respire los vapores Desh gase de los desechos observando todas las normativas locales regionales y nacionales 3 La suspensi n de microesferas AtheNA Multi Lyte no contiene organismos viables No obstante el reactivo se debe considerar como un peligro biol gico potencial y se debe manipular consecuentemente 4 Los controles son material con potencial riesgo biol gico Los materiales a partir de los cuales se obtuvieron estos productos resultaron negativos para el ant geno del VIH 1 el HBsAg y para anticuerpos contra el VHC y el VIH por m todos de prueba homologados Sin embargo dado que ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a total de que no hay agentes infecciosos estos productos deber n
16. ida 1 21 y el control de la placa de disoluci n a la placa de filtraci n Para obtener un rendimiento adecuado es importante que las disoluciones de muestra se mezclen detenidamente seg n el punto 2b Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos Despu s de la incubaci n enjuague las microesferas mediante filtrado al vac o usando el tamp n de lavado que se suministra diluido en la concentraci n 1x a Coloque la placa de filtraci n sobre el colector de vac o y extraiga la soluci n dejando las microesferas detr s b Apague el vac o y a ada 200 uL de Tamp n de Lavado diluido 1x c Aplique el vac o y extraiga la soluci n d Repita los pasos 7b y 7c para un total de tres lavados A continuaci n del lavado final secar suavemente el fondo de la placa y permitir que la placa se seque al aire durante 3 a 5 minutos antes de continuar con el siguiente paso Agregue 150 ul de conjugado a cada micropocillo a la misma velocidad y en el mismo orden en que se agregaron las muestras Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el conjugado y la suspensi n de microesferas se mezclen detenidamente seg n el punto 2b Como una opci n mientras mezcle el conjugado y las microesferas puede transferir la mezcla a pocillos vac os de una placa de reacci n de poliestireno Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos Instale el instrumento AtheNA Multi Lyte para analizar las reacc
17. iones Para ello seleccione la plantilla RF IgM Plus Consulte el manual del operador para obtener detalles sobre la operaci n del instrumento AtheNA Multi Lyte Los resultados se pueden leer en la placa del filtro o en una placa de reacci n NOTA Para obtener un an lisis adecuado del esp cimen es importante que el instrumento se instale calibre y mantenga de acuerdo con las instrucciones del fabricante Consulte el manual del instrumento para obtener informaci n sobre la preparaci n del instrumento antes de la lectura de los resultados del ensayo La placa deber leerse en los 60 minutos posteriores a la adici n de la incubaci n del conjugado Es posible que decida agitar la placa durante unos 15 segundos antes de la lectura Este paso opcional puede reducir la cantidad de tiempo necesario para leer la placa Paso Procedimiento de prueba abreviado 1 Diluya las muestras al 1 21 en SAVe Diluent Mezcle bien Combine 50 uL de suspensi n de microesferas con 10 uL de la muestra diluido en un pocillo vac o Mezcle bien Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos Enjuague las microesferas 3 veces con 200 uL de tamp n de lavado 1x Seque suavemente el fondo de la placa y secar con aire durante 3 a 5 minutos Agregue 150 uL de conjugado en cada pocillo Mezcle bien Transfi ralo a una placa de reacci n opcional Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos Agite la placa opcional Lea los resultados dentro de un periodo d
18. mezclado 14 Aspirador de vac o y colector de vac o para lavar las microesferas CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Suspensi n de microesferas Extraiga solo la cantidad necesaria para analizar las muestras a los que se les va a realizar la prueba y devuelva ec la porci n no utilizada a su almacenamiento ok Conjugado NO CONGELAR Sistema de pruebas control positivo control negativo y diluyente SAVe Diluent9 250 Tamp n de lavado 1X hasta 7 d as entre 20 y 25 C o durante 30 d as entre 2 y 8 C A Tamp n de lavado 10X 2 25 C RECOGIDA DE LAS MUESTRAS 1 ZEUS Scientific recomienda que el usuario realice la recolecci n de muestras conforme al documento M29 del Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio CLSI Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Protecci n de los trabajadores de laboratorio frente a las enfermedades infecciosas 2 Ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a completa de que las muestras de sangre humana no transmitir n infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre deben considerarse potencialmente infecciosos 3 Con este ensayo solamente deben utilizarse sueros reci n extra dos y debidamente refrigerados que se hayan obtenido mediante procedimientos homologados de venopunci n as ptica No los utilice si se han agregado anticoagulantes o conservantes Evite utilizar sueros hemolizados lip micos o contaminados con bacterias 4 Almacene la muestra a tem
19. n negativas 18 148 12 2 fueron dudosas y 2 148 1 4 ofrecieron resultados positivos fuertes De las muestras cl nicas las que estaban diagnosticadas con artritis reumatoide 1 150 0 7 fueron negativas y 149 150 99 3 ofrecieron resultados positivos De las 149 muestras 12 149 8 fueron negativas y 137 149 92 ofrecieron resultados positivos fuertes El sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se calibr de acuerdo con un est ndar proporcionado por la Organizaci n Mundial de la Salud OMS El ensayo se calibr de acuerdo con OMS 64 2 que posee un valor definido de 25 IU ml Cuando se analiz utilizando el sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM de ZEUS se obtuvo un resultado de 24 25 IU ml con este est ndar CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO 1 Estudio comparativo Se ha realizado un estudio comparativo interno para demostrar la equivalencia del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS con el sistema de pruebas ELISA RF IgM comercializado El rendimiento se evalu usando 450 muestras 150 de sueros de donantes normales 150 muestras enviadas previamente a un laboratorio para una prueba de FR rutinaria y 150 muestras de pacientes diagnosticados cl nicamente con artritis reumatoide Los resultados de la investigaci n se resumen en la tabla 1 a continuaci n Tabla 1 Rendimiento del resultado ANA cualitativo del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS
20. n negativo para el anticuerpo FR IgM Por tanto la sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se determin en 99 3 Expresado como un intervalo de confianza del 95 la especificidad cl nica se determin en un rango de 0 963 a 0 999 2 Reproducibilidad Se llev a cabo una evaluaci n en nuestros laboratorios del intraensayo y de la reproducibilidad del intraensayo Se probaron seis muestras En cada d a de prueba cada muestra se diluy dos veces y despu s de carg para cuatro replicados resultando en un total de ocho pozuelos para cada una de las seis muestras Este protocolo se sigui durante tres d as Los resultados se utilizaron para calcular valores medios en Ul ml desviaciones t picas y porcentaje de coeficiente de variaci n CV Las muestras se seleccionaron de tal manera que result que dos de ellas eran claramente negativas dos eran claramente positivas y se seleccionaron dos que eran positivas d biles Los resultados se resumen en las Tablas 2 y 3 a continuaci n ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba RF IgM Plus 4 Fecha rev 9 15 2015 Tabla 2 Datos de precisi n de AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS e Resultados d a 1 Resultados d a 2 Resultados d a 3 ID de la muestra Caracte
21. osiones al golpear con un martillo Para evitarlo enjuague bien el lavabo con agua despu s de eliminar las soluciones que contengan azida de sodio 8 La soluci n concentrada del tamp n de lavado es IRRITANTE Irritante para los ojos el sistema respiratorio y la piel 9 La diluci n o adulteraci n de estos reactivos puede generar resultados err neos 10 No utilice reactivos de otro origen o fabricante 11 Nunca pipetee con la boca Evite el contacto de los reactivos y las muestras de pacientes con la piel y las membranas mucosas 12 Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos Esto puede ocasionar resultados incorrectos 13 La contaminaci n cruzada de reactivos y o muestras podr a ocasionar resultados err neos 14 Evite salpicar o generar aerosoles 15 No exponga los reactivos a la luz intensa durante el almacenamiento o la incubaci n La suspensi n de microesferas y el conjugado son reactivos sensibles a la luz Ambos se han embalado en envases que protegen de la luz Las exposiciones normales que se experimentan durante el curso de la ejecuci n del ensayo no afectar n al rendimiento del ensayo No exponga estos reactivos a fuentes potentes de luz visible de manera innecesaria 16 Recoja la soluci n de lavado en un lavabo de eliminaci n Trate la soluci n de desecho con desinfectante es decir 10 de lej a de uso dom stico 0 5 de hipoclorito de sodio Evite la exposici n de los reactivos a los vapores de la lej
22. peratura ambiente durante un lapso no superior a las 8 horas Si la prueba no se realiza dentro de las 8 horas el suero puede almacenarse a entre 2 8 C durante un lapso no superior a las 48 horas Si tiene previsto retrasar la realizaci n de la prueba conserve los sueros de la prueba a 20 C o a temperaturas inferiores Evite m ltiples ciclos de congelaci n descongelaci n que puedan ocasionar la p rdida de actividad de los anticuerpos y dar lugar a resultados err neos Es responsabilidad de cada laboratorio utilizar todas las referencias disponibles o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad para su laboratorio 10 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO 1 Retire los componentes individuales del kit del lugar de almacenamiento y permita que alcancen la temperatura ambiente 20 25 C 2 Determine el n mero total de Controles y muestras que se desean probar Es necesario incluir el Control Negativo y el Control Positivo con cada tanda de pruebas El Control Negativo se debe probar en el pocillo A1 y el Control Positivo en el pocillo B1 Cada Control y muestra necesita un micropocillo para su procesamiento a Para optimizar los tiempos de lectura la suspensi n de microesferas debe estar bien mezclada antes de su empleo El medio m s efectivo de volver a suspender las microesferas es primero utilizar el v rtex con la suspensi n de microesferas durante aproximadamente 30 segundos seguido por la sonicaci n de la suspensi n
23. r stica ra E CS o ur E Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n 2 1 1 2 1 1 1 1 1 1 2 1 1 J 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 Negativo 1 1 4 1 1 1 1 1 1 2 1 1 e 1 1 2 2 1 1 1 1 1 2 1 1 226 197 193 185 209 219 200 204 230 214 226 211 A 224 226 196 202 217 213 NN 207 217 192 218 220 203 Positivo fuerte 163 166 172 1744 162 158 163 145 198 160 144 158 E 152 162 191 174 165 151 146 160 167 175 154 157 9 8 9 9 11 9 9 8 8 9 10 8 z 10 11 9 9 10 10 a 9 8 10 10 10 9 Positivo 8 8 10 9 10 9 10 9 8 7 9 9 j 8 8 10 7 11 10 10 9 9 8 9 8 Tabla 3 Resumen de las pruebas de precisi n de AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS Precisi n interensayo e ID de la muestra C lculos gt g Precisi n interensayo D a 1 D a 2 D a 3 VI 1 2 1 1 1 DE 0 0 534522 0 0 38069 CV 0 35 6 0 32 6 VI 1 2 1 1 2 DE 0 0 991031 0 0 69025 CV 0 52 9 0 53 4 VI 213 204 215 210 3 DE 12 04678 15 42493 7 225945 12 49630 CV 5 7 7 6 3 4 5 9 VI 157 176 156 163 4 DE 8 253787 12 36282 6 53425 13 07164 CV 5 3 7 0 4 2 8 0 VI 9 9 10 9 5 DE 1 069045 0 64087 0 916125 0 89685 CV 11 9 7 0 9 5 9 7 VI 9 9 9 9 6 DE 0 886405 1 195229 0 916125 1 03472 CV 10 1 14 1 9 8 11 7 3 Reactividad cruzada y sustancias interferentes El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS se evalu por si presentaba reactividad cruzada con otros anticuerpos e interferencias de componentes del suero Para este estudio se evaluaron un total de 38 muestras 18 mue
24. stras que dieron positivo para diferentes anticuerpos de enfermedades autoinmunitarias e infecciosas se probaron en el sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS De las 18 muestras evaluadas dos resultaron reactivas al ensayo AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS Una de las dos tambi n result reactiva al ensayo ELISA RF IgM Se evaluaron un total de 20 muestras que conten an sustancias potencialmente interferentes Estos 20 espec menes conten an o bien niveles anormales de hem lisis n 5 bilirubina n 5 concentraci n de lgG por encima de lo normal n 5 o bien niveles de l pidos por encima de lo normal n 5 Cuatro de las muestras resultaron positivas d biles utilizando el sistema de prueba AtheNA Multi Lyte RF IgM Plus de ZEUS Una de las cuatro tambi n result reactiva al ensayo ELISA RF IgM REFERENCIAS 1 Turgeon M L Rheumatoid Arthritis In Immunology and Serology in Laboratory Medicine 2 Ed Shanahan J ed Mosby Year Book Inc St Louis MO Ch 28 pp 387 398 1996 2 Wilske K Yocum D Rheumatoid Arthritis The Status and Future of Combination Therapy J of Rheumatol Vol 23 suppl 44 1 1996 3 Jackson G Immunodeficiences and Autoimmune Disorders In Clinical Laboratory Medicine Tilton R et al Eds Mosby Year Book Inc St Louis MO Ch 36 pp 485 504 1992 4 Richardson C Emery P Laboratory Markers of Disease Activity J of Rheumatol Vol 23 suppl 44 pp 23 30 1996 5 Zuraw B
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