Sistema de pruebas TPO/Tg Plus
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1. 282 DE 139 5575 119 7411 223 3076 165 43184 CV 5 0 4 3 7 8 5 9 2 VI 2857 2780 2848 2828 DE 105 3768 132 3545 93 18453 112 31470 CV 3 7 4 8 3 3 4 0 3 VI 305 322 217 282 DE 17 09428 33 09186 15 15633 52 08605 CV 5 6 10 3 7 0 18 5 4 VI 273 275 323 290 DE 16 53568 4 67736 17 46783 36 04323 CV 6 1 15 5 5 4 12 4 5 VI 20 17 21 19 DE 1 832251 1 846812 2 815772 2 66995 CV 9 3 10 6 13 3 13 7 6 VI 18 17 20 18 DE 2 03101 2 748376 3 251373 2 88424 CV 11 4 16 0 16 3 15 7 3 Reactividad cruzada y sustancias interferentes El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte TPO Tg Plus de ZEUS se evalu por si presentaba reactividad cruzada con otros anticuerpos e interferencias de componentes del suero Para este estudio se evaluaron un total de 39 muestras Diecinueve de las muestras resultaron positivas para varios anticuerpos autoinmunes y enfermedades infecciosas De las diecinueve muestras evaluadas una result reactiva al ensayo AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS La misma muestra no result reactiva con ELISA Se evaluaron un total de 20 muestras que conten an sustancias potencialmente interferentes Estos 20 espec menes conten an o bien niveles anormales de hem lisis n 5 bilirubina n 5 concentraci n de IgG por encima de lo normal n 5 o bien niveles de l pidos por encima de lo normal n 5 Cinco de las muestras resultaron positiv2. 95 la especificidad cl nica se determin en un rango de 89 1 a 97 3 ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 5 Fecha de rev 9 15 2015 Tabla 2 Rendimiento del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS en relaci n a ELISA Tg IgG Resultado de ELISA Positivo Negativo Dudoso Total AtheNA Resultados Positivo 575 9 23 607 Negativo 0 135 0 135 Dudoso 0 3 0 3 Total 575 150 23 745 Sensibilidad relativa 575 575 100 Especificidad relativa 135 144 93 8 Concordancia relativa 710 719 98 8 Cinco muestras resultaron inv lidas con AtheNA Sus resultados se excluyeron de los c lculos de la sensibilidad relativa especificidad y acuerdo Las muestras dudosas se excluyeron de los c lculos de sensibilidad especificidad y concordancia Sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS La sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS se evalu utilizando 300 muestras de suero definidas cl nicamente de pacientes diagnosticados con una enfermedad tiroidea autoinmune En este grupo la totalidad de las trescientas muestras resultaron positivas para el anticuerpo Tg IgG La sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS se determin en 300 300 o 100 Especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS La especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA
3. Multi Lyte Tg Plus de ZEUS se evalu mediante 150 muestras de donantes normales dado que se part a de la base de que dicho grupo no estar a sufriendo enfermedades autoinmunes Tres de las muestras arrojaron resultados inv lidos con AtheNA dejando 147 muestras De las 147 muestras 11 147 fueron positivas en AtheNA 2 147 fueron dudosas en AtheNA y 134 147 ofrecieron resultados negativos en AtheNA La especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS se determin en 134 147 o 91 2 Expresado como un intervalo de confianza del 95 la especificidad cl nica se determin en un rango de 86 6 a 95 7 2 Reproducibilidad Se llev a cabo una evaluaci n en nuestros laboratorios del intraensayo y de la reproducibilidad del intraensayo Se probaron seis muestras En cada d a de prueba cada muestra se diluy dos veces y despu s de carg para cuatro replicados resultando en un total de ocho pozuelos para cada una de las seis muestras Este protocolo se sigui durante tres d as Los resultados se utilizaron para calcular valores medios en UI ml desviaciones t picas y porcentaje de coeficiente de variaci n CV Las muestras se seleccionaron de tal manera que result que dos de ellas eran claramente negativas dos eran claramente positivas y se seleccionaron dos que eran positivas d biles Los resultados de este estudio se resumen en las tablas 3 y 4 a continuaci n Tabla 3 Estudio de precisi n de AtheNA Multi Lyte TPO
4. Plus de ZEUS ID de la muestra Caracter stica Resultados d a 1 Resultados d a 2 Resultados d a 3 Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n 2 1 Positivo fuerte 1229 1196 1202 1254 1224 1252 1085 1223 1098 1164 1191 1118 1170 1218 1189 1093 1191 1206 1201 1174 1314 1136 1343 1174 2 1185 1134 1103 1122 1138 1117 1126 1160 1140 1150 1175 1122 1083 1079 1050 1087 1185 1164 1149 1181 1055 1008 1060 11067 3 Positivo 259 267 351 328 312 346 249 266 261 295 362 360 295 259 309 207 327 297 297 289 313 296 314 310 4 266 296 310 235 317 346 293 276 263 235 309 311 270 269 283 253 295 322 318 276 247 260 242 303 5 Negativo 4 5 6 7 7 6 4 5 6 6 5 6 4 5 8 6 5 5 3 4 6 7 6 7 6 6 5 6 7 8 8 5 4 6 7 5 7 5 5 6 4 6 6 6 5 7 6 8 7 ID de la muestra C lculos Precisi n interensayo Precisi n interensayo D a 1 D a 2 D a 3 1 VI 1187 1180 1212 193 DE 46 53724 77 75603 65 57643 63 32340 CV 3 9 6 6 5 4 5 3 2 VI 1137 1089 1129 1118 DE 40 21882 49 05955 46 83405 48 40290 CV 3 5 4 5 4 2 4 3 3 VI 273 295 329 299 DE 18 39206 44 15233 24 61126 37 82509 CV 6 7 15 0 7 5 12 7 4 VI 283 261 306 283 DE 17 91249 25 35885 29 84693 30 24439 CV 6 3 9 7 9 8 1
5. 0 7 5 VI 4 7 6 6 DE 0 707107 0 755929 0 834523 1 21509 CV 16 6 11 6 14 2 21 9 6 VI 5 6 7 6 DE 0 64087 0 991031 1 125992 1 16018 CV 12 5 16 2 16 4 19 2 ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 6 Fecha de rev 9 15 2015 Tabla 3 Estudio de precisi n de AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS ID de la muestra Caracter stica Resultados d a 1 Resultados d a 2 Resultados d a 3 Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n 2 1 Positivo fuerte 2936 2685 2725 2864 3006 2931 2557 2874 2798 2621 2543 2721 2762 2921 2894 2644 2909 3109 2958 2831 2938 2686 3155 2629 2 3007 2807 2714 2950 2935 2832 2659 2869 2912 2931 2949 2852 2808 2955 2741 2690 2942 2837 2860 2894 2700 2598 2739 2700 3 Positivo 294 328 378 342 201 233 299 324 327 288 226 217 291 286 331 270 204 207 324 296 330 312 206 242 4 248 267 304 312 327 324 287 262 282 263 290 340 269 301 319 266 329 344 283 267 184 268 326 307 5 Negativo 21 20 18 19 23 24 20 19 20 16 22 17 20 18 19 16 19 24 17 23 16 18 18 23 6 18 18 20 15 19 23 19 20 18 17 19 20 20 16 19 11 25 21 14 18 16 18 19 14 ID de la muestra C lculos Precisi n interensayo Precisi n interensayo D a 1 D a 2 D a 3 1 VI 2816 2771 2875
6. Lyte TPO Tg Plus de ZEUS tiene un l mite de referencia asignado ZEUS determina los l mites de referencia para cada lote de sistema de pruebas y est n codificados en el CD de calibraci n del lote c Mediante la tecnolog a Intra Well Calibration Technology todos los c lculos se realizan autom ticamente cuando se utiliza el sistema AtheNA Multi Lyte La tecnolog a Intra Well Calibration Technology ejecuta un an lisis de regresi n de las normativas internas y a continuaci n ajusta los valores de unidad calculados bas ndose en una normativa adicional y en las caracter sticas de la muestra de suero 2 Interpretaciones a Determinaci n de corte El corte para cada ensayo se estableci utilizando una poblaci n negativa para cada marcador Los resultados de AtheNA Multi Lyte se determinaron para esta poblaci n y el corte se estableci en aproximadamente la media m s tres veces la desviaci n est ndar Bas ndose en los resultados de esta prueba el fabricante estableci las siguientes directrices para la interpretaci n de las muestras de los pacientes b Interpretaci n individual del analito antitiroideo Los valores unitarios de las muestras para los analitos multiplexados se interpretan de la siguiente manera Muestras negativas lt 100 IU ml Valor unitario Muestras positivas gt 120 IU ml Muestras dudosas 100 to 120 IU ml LIMITACIONES DEL ENSAYO 1 El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte TPO Tg Plus de ZEUS es una herr
7. Multi Lyte no contiene organismos viables No obstante el reactivo se debe considerar como un peligro biol gico potencial y se debe manipular consecuentemente 4 Los controles son material con potencial riesgo biol gico Los materiales a partir de los cuales se obtuvieron estos productos resultaron negativos para el ant geno del VIH 1 el HBsAg y para anticuerpos contra el VHC y el VIH por m todos de prueba homologados Sin embargo dado que ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a total de que no hay agentes infecciosos estos productos deber n manipularse con un Nivel de bioseguridad 2 tal como se recomienda para cualquier muestra de sangre o suero humano potencialmente infeccioso en el manual de Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Bioseguridad en laboratorios microbiol gicos y biom dicos de los Centros para el Control de Enfermedades Institutos Nacionales de la Salud ltima edici n y en la Norma de la OSHA sobre Pat genos que se transmiten en la sangre 5 5 Para lograr resultados precisos es esencial cumplir estrictamente los tiempos y temperaturas de incubaci n especificados Se debe dejar que todos los reactivos alcancen temperatura ambiente 20 25 C antes de empezar el ensayo Devuelva los reactivos no utilizados a una temperatura refrigerada inmediatamente despu s de su uso IVD REF ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 2 Fecha de rev 9 15 2015 6 Un lavado in
8. NA Multi Lyte Tg produjo un resultado de 1126 IU ml CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO 1 Estudio comparativo Se ha realizado un estudio comparativo interno para demostrar la equivalencia del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte TPO Tg Plus de ZEUS con el sistema de pruebas ELISA comercializado El rendimiento se evalu usando 750 muestras 150 de sueros de donantes normales 300 muestras enviadas previamente a un laboratorio para una prueba de autoanticuerpos tiroidales rutinarias y 300 muestras de personas enfermas de pacientes diagnosticados cl nicamente con trastornos tiroideos autoinmunes Los resultados de la investigaci n se resumen en las tablas 1 y 2 siguientes Tabla 1 Rendimiento del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS en relaci n a ELISA TPO IgG Resultado de ELISA Positivo Negativo Dudoso Total AtheNA Resultados Positivo 531 31 33 595 Negativo 0 143 0 143 Dudoso 0 7 0 7 Total 531 181 33 745 Sensibilidad relativa 531 531 100 Especificidad relativa 143 174 82 2 Concordancia relativa 674 705 95 6 Cinco muestras resultaron inv lidas con AtheNA Sus resultados se excluyeron de los c lculos de la sensibilidad relativa especificidad y acuerdo Las muestras dudosas se excluyeron de los c lculos de sensibilidad especificidad y concordancia Las notables diferencias en el n mero de muestras dudosas entre ELISA y AtheNA se atribuyen a la diferencia en las
9. ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 1 Fecha de rev 9 15 2015 Sistema de pruebas TPO Tg Plus A51101 USO PREVISTO El sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Tg Plus de ZEUS tiene como objetivo la detecci n cuantitativa de anticuerpos de clase IgG a 2 ant genos de tiroide distintos la peroxidasa tiroidea TPO y la tiroglobulina TG en el suero humano El sistema de pruebas est dise ado para ser utilizado como ayuda en el diagn stico de diferentes enfermedades tiroideas autoinmunes Esta prueba est concebida exclusivamente para uso diagn stico in vitro IMPORTANCIA Y ASPECTOS GENERALES Los anticuerpos tiroideos son un fen meno caracter stico en pacientes con las enfermedades de Hashimoto o de Graves 1 La presencia de anticuerpos tiroideos en el suero del 80 de los pacientes que sufren estas dos enfermedades hace que sea recomendable la realizaci n de alg n tipo de prueba de anticuerpos tiroideos en la evaluaci n de pacientes aquejados de bocio 1 Aunque los anticuerpos tiroideos est n asociados principalmente con las enfermedades de Hashimoto o de Graves tambi n pueden encontrarse en el suero de pacientes aquejados de otras enfermedades como por ejemplo mixedema tiroiditis granulomatosa bocio nodular no t xico y carcinoma tiroideo 1 Tambi n aparecen anticuerpos tiroideos en la mayor a de los casos de tiroiditis linfoc tica en ni os 2 y en raras ocasiones en pacientes con anemia perniciosa y
10. aboratory Standards Institute 950 West Valley Road Suite 2500 Wayne PA 19087 ZEUS Scientific Inc 200 Evans Way Branchburg New Jersey 08876 EE UU Llamada gratuita EE UU 1 800 286 2111 opci n 2 Internacional 1 908 526 3744 Fax 1 908 526 2058 P gina Web www zeusscientific com AtheNA Multi Lyte y SAVe Diluent son marcas registradas de ZEUS Scientific Inc Para consultas al Servicio de atenci n al cliente en EE UU contacte con su distribuidor local Para consultas al Soporte t cnico contacte con ZEUS Scientific llame de forma gratuita o escriba a support zeusscientific com Para consultas al Servicio de atenci n al cliente y al Soporte t cnico desde fuera de EE UU contacte con su distribuidor local 2015 ZEUS Scientific Inc Todos los derechos reservados
11. adecuado podr a ocasionar resultados de falsos positivos o falsos negativos Debe reducirse al m nimo la cantidad de soluci n de lavado residual p ej mediante secado o aspiraci n antes de a adir el conjugado No permita que los pocillos se sequen entre una incubaci n y la siguiente 7 El diluyente SAVe la suspensi n de microesferas los controles y el conjugado contienen azida s dica en una concentraci n de 0 1 w v Se ha informado que la azida s dica forma azidas de plomo o cobre en las ca er as del laboratorio lo que puede ocasionar explosiones al golpear con un martillo Para evitarlo enjuague bien el lavabo con agua despu s de eliminar las soluciones que contengan azida de sodio 8 La soluci n concentrada del tamp n de lavado es IRRITANTE Irritante para los ojos el sistema respiratorio y la piel 9 La diluci n o adulteraci n de estos reactivos puede generar resultados err neos 10 No utilice reactivos de otro origen o fabricante 11 Nunca pipetee con la boca Evite el contacto de los reactivos y las muestras de pacientes con la piel y las membranas mucosas 12 Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos Esto puede ocasionar resultados incorrectos 13 La contaminaci n cruzada de reactivos y o muestras podr a ocasionar resultados err neos 14 Evite salpicar o generar aerosoles 15 No exponga los reactivos a la luz intensa durante el almacenamiento o la incubaci n La suspensi n de microesferas y el conju
12. amienta para el diagn stico pero no es en s una prueba diagn stica Los resultados de la prueba se deben interpretar junto con la evaluaci n cl nica y los resultados de otros procedimientos diagn sticos 2 Las muestras hemol ticas ict ricas o lip micas pueden interferir con el resultado de este ensayo Adem s los espec menes con concentraciones de IgG anormales pueden interferir con el resultado de este ensayo Debe evitarse el uso de estos tipos de muestras RESULTADOS ESPERADOS La investigaci n cl nica incluy 150 muestras de donantes normales Se supone que este grupo en su mayor parte no deber a padecer la enfermedad y por tanto mostrar solo una baja incidencia de los autoanticuerpos TPO y Tg La investigaci n tambi n incluy 300 muestras de pacientes diagnosticados con una enfermedad relacionada con autoanticuerpos asociada al anticuerpo antitiroideo Con respecto al ensayo TPO en la sangre del grupo de donantes normales tres de las muestras resultaron inv lidas en el ensayo reduciendo el total a 147 muestras normales De las 147 muestras 137 147 93 2 fueron negativas 3 147 2 0 fueron dudosas y 7 147 4 8 ofrecieron resultados positivos Los resultados num ricos de esta poblaci n variaron desde un m nimo de 4 IU ml a un m ximo de 1183 IU ml con resultado medio de 53 IU ml y una mediana de 15 IU ml De las muestras cl nicas las que estaban diagnosticadas con una enfermedad tiroidea autoinmune 0 300 0 fuer
13. ar de color cuando se combine con suero WASHBUF 10X 6 Tamp n de lavado concentrado 10X diluir 1 parte del concentrado 9 partes de agua desionizada o destilada Una botella de 50 ml con tap n transparente que contiene soluci n salina tamponada con fosfato concentrada 10X NOTAS 1 Los siguientes componentes no dependen del n mero de lote del sistema de pruebas y se pueden usar indistintamente con cualquier sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte de ZEUS Tamp n de lavado y SAVe Diluent 2 El sistema de pruebas tambi n contiene a Una etiqueta de componentes que contiene informaci n espec fica de lote dentro de la caja del sistema de pruebas b CD de calibraci n que incluye los valores de calibraci n del kit espec ficos de los lotes y necesarios para el an lisis de la muestra y el control de calidad del ensayo y prospectos del paquete c Una placa de disoluci n de 96 pocillos d Una placa del filtro de disoluci n de 96 pocillos PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro 2 Se deben seguir las precauciones normales que se utilizan para manipular reactivos de laboratorio En caso de contacto con los ojos enjuague inmediatamente con abundante agua y busque asistencia m dica Utilice ropa de protecci n adecuada guantes y protecci n para la cara ojos No respire los vapores Desh gase de los desechos observando todas las normativas locales regionales y nacionales 3 La suspensi n de microesferas AtheNA
14. as utilizando el sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS Cuatro de esas cinco muestras tambi n fueron positivas en el TPO de ELISA Cuatro de las muestras resultaron positivas utilizando el sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Tg Plus de ZEUS Dos de esas cuatro muestras tambi n fueron positivas en el Tg de ELISA REFERENCIAS 1 Beall GN Solomon DH Post Grad Med 54 181 1973 2 Tung KS Ramos CV Deodhar SD Am J Clin Pathol 61 549 1974 3 Beall GN Solomon DH Ed Samter 2nd Edition Boston Little Brown and Company pp 1198 1213 1971 4 Doniach D and Roitt IM Clin Immunol 2nd Edition Ed Gell PH and Coombs RRA Oxford Blackwell Chapter 35 1968 ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 7 Fecha de rev 9 15 2015 5 U S Department of Labor Occupational Safety and Health Administration Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Fed Register 56 64175 64182 1991 6 Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture Second edition Approved Standard 1984 Published by National Committee for Clinical Laboratory Standards 7 Procedures for the Handling and Processing of blood Specimens NCCLS Document H18 A Vol 10 No 12 Approved Guideline 1990 8 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests Approved Guidelines 4th Edition 2010 CLSI Document GP44 A4 ISBN 1 56238 724 3 Clinical and L
15. dan el uso de controles positivos y negativos para asegurar la funcionalidad de los reactivos y la ejecuci n adecuada del procedimiento del ensayo Los requisitos de control de calidad se deben realizar en total cumplimiento con las normativas locales auton micas o estatales o con los requisitos de acreditaci n y los procedimientos de control de Calidad normativos del laboratorio del usuario Se recomienda que el usuario consulte CLSI EP12 A and 42 CFR 493 1256 para obtener informaci n de ayuda sobre las pr cticas de CC adecuadas INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS 1 C lculos a Calibraci n del ensayo El sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Tg Plus de ZEUS utiliza la Intra Well Calibration Technology La Intra Well Calibration Technology incluye una curva est ndar con m ltiples puntos dentro de la suspensi n de microesferas Con la Intra Well Calibration Technology cada pocillo del ensayo se calibra internamente sin que necesite la intervenci n del usuario La curva est ndar est dise ada para que se ajuste ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 4 Fecha de rev 9 15 2015 autom ticamente bas ndose en las caracter sticas nicas del paciente o suero de control Los valores del calibrador se asignan de acuerdo con los est ndares internos de ZEUS son espec ficos del lote y est n codificados en el CD de calibraci n del lote b L mite de referencia del analito Cada analito del sistema de pruebas AtheNA Multi
16. de prueba abreviado 1 Diluya las muestras al 1 21 en SAVe Diluent Mezcle bien 2 Combine 50 L de suspensi n de microesferas con 10 L de la muestra diluido en un pocillo vac o Mezcle bien 3 Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos 4 Enjuague las microesferas 3 veces con 200 L de tamp n de lavado 1x 5 Seque suavemente el fondo de la placa y secar con aire durante 3 a 5 minutos 6 Agregue 150 L de conjugado en cada pocillo Mezcle bien 7 Transfi ralo a una placa de reacci n opcional 8 Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos 9 Agite la placa opcional 10 Lea los resultados dentro de un periodo de 60 minutos CONTROL DE CALIDAD 1 Cada vez que se realiza el ensayo es necesario incluir el Control Negativo en el pocillo A1 y el Control Positivo en el pocillo B1 2 La validez de la tirada se determina mediante la realizaci n de los controles positivos y negativos Estos criterios se analizan autom ticamente mediante la Intra Well Calibration Technology a El control negativo y el control positivo deben ser todos negativos en la microesfera no espec fica o de ant geno de control b El control negativo debe ser negativo para todos y cada uno de los analitos incluidos en la suspensi n de microesferas c El control positivo debe ser postivo tanto para TPO como para Tg y debe cumplir los rangos espec ficos de lote para estos controles Estos intervalos est n co
17. dificados dentro del CD de calibraci n d Si no se cumple ninguno de los criterios anteriores toda la tirada se considerar como no v lida y se tendr que repetir En este caso no comunique los resultados del paciente 3 La validez de la muestra se basa en las caracter sticas de las microesferas y sus interacciones con los sueros de los pacientes Se supervisan diferentes par metros autom ticamente mediante la Intra Well Calibration Technology Si se determina que cualquiera de los criterios no cumple las especificaciones los resultados del paciente se considerar n como no v lidos y se deber n repetir En caso de que esto se produzca el informe de datos indicar la muestra en particular que se invalid y el c digo de soluci n de problemas Si una muestra resulta no v lida repetidamente se debe probar utilizando una metodolog a alternativa ya que es incompatible con el sistema de prueba AtheNA Multi Lyte Plus 4 Es posible analizar controles adicionales siguiendo las directrices o los requisitos de las normativas locales regionales o nacionales o de las organizaciones acreditadas Los controles externos deben ser representativos del suero humano normal debido a que el sistema de calibraci n AtheNA Multi Lyte se basa parcialmente en las caracter sticas de la muestra de suero Si la formulaci n de la muestra es artificial no es suero humano se pueden producir resultados err neos 5 Las buenas pr cticas de laboratorio recomien
18. e 3 a 5 minutos antes de continuar con el siguiente paso 9 Agregue 150 l de conjugado a cada micropocillo a la misma velocidad y en el mismo orden en que se agregaron las muestras Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el conjugado y la suspensi n de microesferas se mezclen detenidamente seg n el punto 2b Como una opci n mientras mezcle el conjugado y las microesferas puede transferir la mezcla a pocillos vac os de una placa de reacci n de poliestireno 10 Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos 11 Ajuste el instrumento AtheNA Multi Lyte para analizar las reacciones seleccionado la plantilla TPO Tg Plus Consulte el manual del operador para obtener detalles sobre la operaci n del instrumento AtheNA Multi Lyte Los resultados se pueden leer en la placa del filtro o en una placa de reacci n NOTA Para obtener un an lisis adecuado del esp cimen es importante que el instrumento se instale calibre y mantenga de acuerdo con las instrucciones del fabricante Consulte el manual del instrumento para obtener informaci n sobre la preparaci n del instrumento antes de la lectura de los resultados del ensayo 12 La placa deber leerse en los 60 minutos posteriores a la adici n de la incubaci n del conjugado Es posible que decida agitar la placa durante unos 15 segundos antes de la lectura Este paso opcional puede reducir la cantidad de tiempo necesario para leer la placa Paso Procedimiento
19. eba puede ofrecer una garant a completa de que las muestras de sangre humana no transmitir n infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre deben considerarse potencialmente infecciosos 3 Con este ensayo solamente deben utilizarse sueros reci n extra dos y debidamente refrigerados que se hayan obtenido mediante procedimientos homologados de venopunci n as ptica No los utilice si se han agregado anticoagulantes o conservantes Evite utilizar sueros hemolizados lip micos o contaminados con bacterias 6 7 4 Almacene la muestra a temperatura ambiente durante un lapso no superior a las 8 horas Si la prueba no se realiza dentro de las 8 horas el suero puede almacenarse a entre 2 8 C durante un lapso no superior a las 48 horas Si tiene previsto retrasar la realizaci n de la prueba conserve los sueros de la prueba a 20 C o a temperaturas inferiores Evite m ltiples ciclos de congelaci n descongelaci n que puedan ocasionar la p rdida de actividad de los anticuerpos y dar lugar a resultados err neos Es responsabilidad de cada laboratorio utilizar todas las referencias disponibles o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad para su laboratorio 8 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO 1 Retire los componentes individuales del kit del lugar de almacenamiento y permita que alcancen la temperatura ambiente 20 25 C 2 Determine el n mero total de Controles y muestras que se desean probar Es necesario
20. gado son reactivos sensibles a la luz Ambos se han embalado en envases que protegen de la luz Las exposiciones normales que se experimentan durante el curso de la ejecuci n del ensayo no afectar n al rendimiento del ensayo No exponga estos reactivos a fuentes potentes de luz visible de manera innecesaria 16 Recoja la soluci n de lavado en un lavabo de eliminaci n Trate la soluci n de desecho con desinfectante es decir 10 de lej a de uso dom stico 0 5 de hipoclorito de sodio Evite la exposici n de los reactivos a los vapores de la lej a 17 Precauci n neutralice cualquier desecho l quido con pH cido antes de agregarlo a la soluci n de lej a 18 No permita que el conjugado entre en contacto con recipientes o instrumentos que hayan podido contener previamente una soluci n que utilice azida de sodio como conservante Los residuos de azida de sodio pueden destruir la actividad enzim tica del conjugado 19 No exponga ninguno de los reactivos a soluciones que contengan lej a o a ning n olor fuerte de soluciones que contengan lej a Los restos de lej a hipoclorito de sodio incluso a nivel de trazas pueden destruir la actividad biol gica de muchos de los reactivos incluidos en este sistema de pruebas MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Pipetas capaces de dispensar con exactitud entre 10 y 200 l 2 Pipeta multicanal capaz de dispensar con exactitud 10 200 l 3 Dep sitos de reactivos para pipetas mult
21. icanal 4 Pipetas serol gicas 5 Puntas de pipetas descartables 6 Toallas de papel 7 Cron metro de laboratorio para controlar los pasos de incubaci n 8 Recipiente para desechos y desinfectante es decir 10 de lej a de uso dom stico 0 5 de hipoclorito de sodio 9 SistemaAtheNA Multi Lyte Luminex Instrument con fluido envolvente n mero de producto 40 50000 10 Agua destilada o desionizada 11 V rtex 12 Sonicador de ba o peque o 13 Agitador de placas capaz de agitar a una velocidad de 800 RPM opcional para el mezclado 14 Aspirador de vac o y colector de vac o para lavar las microesferas CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Suspensi n de microesferas Extraiga solo la cantidad necesaria para analizar las muestras a los que se les va a realizar la prueba y devuelva la porci n no utilizada a su almacenamiento Conjugado NO CONGELAR Sistema de pruebas control positivo control negativo y diluyente SAVe Diluent Tamp n de lavado 1X hasta 7 d as entre 20 y 25 C o durante 30 d as entre 2 y 8 C Tamp n de lavado 10X 2 25 C RECOGIDA DE LAS MUESTRAS 1 ZEUS Scientific recomienda que el usuario realice la recolecci n de muestras conforme al documento M29 del Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio CLSI Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Protecci n de los trabajadores de laboratorio frente a las enfermedades infecciosas 2 Ning n m todo de pru
22. incluir el Control Negativo y el Control Positivo con cada tanda de pruebas El Control Negativo se debe probar en el pocillo A1 y el Control Positivo en el pocillo B1 Cada Control y muestra necesita un micropocillo para su procesamiento a Para optimizar los tiempos de lectura la suspensi n de microesferas debe estar bien mezclada antes de su empleo El medio m s efectivo de volver a suspender las microesferas es primero utilizar el v rtex con la suspensi n de microesferas durante aproximadamente 30 segundos seguido por la sonicaci n de la suspensi n de microesferas durante 30 segundos en un peque o sonicador de ba o b Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el contenido del ensayo se mezcle detenidamente Entre los medios adecuados de mezcla se incluye mezclar la placa en un agitador de placa durante aproximadamente 30 segundos a 800 RPM aproximadamente o ajustar una pipeta en aproximadamente del volumen en la placa y aspirar y expulsar repetidamente bomba arriba y bomba abajo el contenido del pocillo durante un m nimo de 5 ciclos ZEUS AtheNA Multi Lyte Sistema de prueba TPO Tg Plus 3 Fecha de rev 9 15 2015 EJEMPLO DE CONFIGURACI N DE LA PLACA 1 2 A Control negativo Etc B Control positivo C Paciente 1 D Paciente 2 E Paciente 3 F Paciente 4 G Paciente 5 H Paciente 6 3 Prepare una diluci n 1 21 por ejemplo 10 l de suero 200 l de diluyente SAVe Diluent del contr
23. metodolog as de AtheNA y ELISA AtheNA generalmente presenta un mayor rendimiento se al ruido en relaci n con ELISA y por lo tanto puede discriminar mejor entre muestras negativas y positivas a la vez que minimiza el n mero de muestras que caen dentro de la zona dudosa Sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS La sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS se evalu utilizando 300 muestras de suero definidas cl nicamente de pacientes diagnosticados con una enfermedad tiroidea autoinmune En este grupo la totalidad de las trescientas muestras resultaron positivas para el anticuerpo TPO IgG La sensibilidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO IgG se determin en 300 300 o 100 Especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS La especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS se evalu mediante 150 muestras de donantes normales dado que se part a de la base de que dicho grupo no estar a sufriendo enfermedades autoinmunes Tres de las muestras arrojaron resultados inv lidos con AtheNA dejando 147 muestras De las 147 muestras 7 147 fueron positivas en AtheNA 3 147 fueron dudosas en AtheNA y 137 147 ofrecieron resultados negativos en AtheNA La especificidad cl nica del sistema de prueba AtheNA Multi Lyte TPO Plus de ZEUS se determin en 137 147 o 93 2 Expresado como un intervalo de confianza del
24. ol negativo del calibrador del control positivo y de cada suero de paciente NOTA El diluyente SAVe Diluent sufrir un cambio de color lo cual confirma que la muestra se ha combinado con el diluyente Para obtener un rendimiento adecuado es importante que las disoluciones de muestra se mezclen detenidamente seg n el punto 2b 4 Despu s de determinar el n mero total de pocillos a procesar utilice una pipeta multicanal o repetidora para dispensar 50 L de suspensi n de microesferas dentro de cada uno de los pocillos de la platina de filtraci n 5 Transfiera 10 L de cada muestra diluida 1 21 y el control de la placa de disoluci n a la placa de filtraci n Para obtener un rendimiento adecuado es importante que las disoluciones de muestra se mezclen detenidamente seg n el punto 2b 6 Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos 7 Despu s de la incubaci n enjuague las microesferas mediante filtrado al vac o usando el tamp n de lavado que se suministra diluido en la concentraci n 1x a Coloque la placa de filtraci n sobre el colector de vac o y extraiga la soluci n dejando las microesferas detr s b Apague el vac o y a ada 200 L de Tamp n de Lavado diluido 1x c Aplique el vac o y extraiga la soluci n d Repita los pasos 7b y 7c para un total de tres lavados 8 A continuaci n del lavado final secar suavemente el fondo de la placa y permitir que la placa se seque al aire durant
25. on negativas 0 300 0 fueron dudosas y 300 300 100 ofrecieron resultados positivos Los resultados num ricos de esta poblaci n variaron desde un m nimo de 643 IU ml a un m ximo de 1207 IU ml con resultado medio de 972 IU ml y una mediana de 978 IU ml Con respecto al ensayo Tg en la sangre del grupo de donantes normales tres de las muestras resultaron inv lidas en el ensayo reduciendo el total a 147 muestras normales De las 147 muestras 133 147 90 5 fueron negativas 3 147 2 0 fueron dudosas y 11 147 7 5 ofrecieron resultados positivos Los resultados num ricos de esta poblaci n variaron desde un m nimo de 15 IU ml a un m ximo de 976 IU ml con resultado medio de 78 IU ml y una mediana de 44 IU ml De las muestras cl nicas las que estaban diagnosticadas con una enfermedad tiroidea autoinmune 0 300 0 fueron negativas 0 300 0 fueron dudosas y 300 300 100 ofrecieron resultados positivos Los resultados num ricos de esta poblaci n variaron desde un m nimo de 428 IU ml a un m ximo de 1968 IU ml con resultado medio de 1153 IU ml y una mediana de 1188 IU ml Tanto el ensayo TPO como el Tg se han calibrado con los est ndares establecidos por la Organizaci n Mundial de la Salud OMS TPO se calibr de acuerdo con OMS 66 387 y Tg se calibr de acuerdo con OMS 65 93 Utilizando estos est ndares cada uno con un resultado esperado de 1000 IU ml el ensayo AtheNA Multi Lyte TPO produjo un resultado de 1080 IU mL y el ensayo Athe
26. s ndrome de Sj gren 3 4 FUNDAMENTO DE LA PRUEBA El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte TPO Tg Plus de ZEUS est dise ado para detectar anticuerpos de la clase IgG en suero humano ante TPO y Tg El procedimiento de la prueba comprende dos pasos de incubaci n 1 Los sueros de prueba diluidos correctamente se incuban en una mezcla multiplexada de la suspensi n de microesferas La suspensi n de microesferas contiene una mezcla de conjuntos distinguibles de microesferas de poliestireno cada uno conjugado con un ant geno diferente Si est presente en los sueros del paciente determinados anticuerpos se unir n con el ant geno inmovilizado en uno o m s conjuntos de microesferas Las microesferas se enjuagan para extraer las prote nas s ricas no reactivas 2 El IgG antihumano de cabra conjugado con ficoeritrina se a ade al recipiente y la placa se incuba El conjugado reaccionar con el anticuerpo de tipo IgG inmovilizado en la fase s lida del paso 1 A continuaci n la suspensi n de mircroesferas se analiza utilizando el instrumento AtheNA Multi Lyte El conjunto o conjunto de microesferas se clasifican identifican y la cantidad de mol cula informante conjugado PE se determina para cada conjunto de microesferas Mediante el empleo de Intra Well Calibration Technology tecnolog a de calibraci n intrapocillo se utilizan conjuntos de micropart culas de calibraci n interna para convertir fluorescencia sin procesar en resultado
27. unidades COMPONENTES DEL SISTEMA DE PRUEBA Materiales suministrados Cada sistema de pruebas contiene los siguientes componentes en cantidad suficiente para realizar el n mero de pruebas indicado en la etiqueta del envase NOTA los siguientes componentes contienen como conservante azida de sodio a una concentraci n de lt 0 1 p v Suspensi n de microesferas controles conjugado y SAVe Diluent SOLN BEAD 1 Suspensi n de microesferas contiene microesferas de poliestireno de 5 6 micras separadas y distinguibles que se conjugan con los siguientes ant genos Peroxidasa tiroidea TPO y tiroglobulina Tg La suspensi n de microesferas tambi n contiene un conjunto de microesferas dise adas para detectar anticuerpos no espec ficos en la muestra del paciente si est presente y cuatro conjuntos de microesferas separadas que se utilizan para la calibraci n del ensayo Un frasco de color mbar que contiene 5 5 ml Listo para usar CONJ 2 Conjugado Ficoeritrina conjugada con IgG antihumana de cabra espec fico de cadena Una botella de color mbar que contiene 15 ml Listo para usar CONTROL 3 Control positivo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n rojo CONTROL 4 Control negativo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n verde DIL SPE 5 Diluyente SAVe Diluent Una botella de 50 ml con tap n verde soluci n salina tamponada con fosfato Listo para usar NOTA El diluyente SAVe Diluent cambi
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