QUANTA FlashTM h-tTG IgA - Annar Diagnóstica Import
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1. 2010 Burgin Wolff A Gaze H et al Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease Arch Dis Child 66 941 947 1991 Osman AA et al B Cell epitopes of gliadin Clin Exp Immunol 121 248 254 2000 Aleanzi M et al Celiac disease Antibody recognition against native and selectively deamidaion gliadin peptides Clinical Chemistry 47 2023 2028 2001 Schwertz E et al Serologic assay based on gliadin related nonapeptides as a highly sensitive and specific diagnostic aid in celiac disease Clinical Chemistry 50 2370 2375 2004 Fleckenstein B Qiao S W et al Molecular characterization of covalent complexes between tissue transglutaminase and gliadin peptides J Biol Chem 279 17607 16 2004 Prince HE Evaluations of the INOVA Diagnostics Enzyme Linked Immunosorbent Assay Kits for Measuring Serum Immunoglobulins G IgG and IgA to Deamidated Gliadin Peptides Clinical and Vaccine Immunology 13 150 151 2006 Sugai E et al Accuracy of Testing Antibodies to Synthetic Gliadin Related Peptides in Celiac Disease Clinical Gastroenterology and Hepatology 4 1112 1117 2006 Kurppa K Lindfors K et al Antibodies against deamidated gliadin peptides in early stage celiac disease J Clin Gastroenterol 2010 epub ahead of print Volta U Granito A et al Deamidated gliadin peptide antibodies as a routine test for celiac disease J Clin Gastroenterol 44 186 90 2010 Collin P et al Selective IgA deficiency an2. CLSI y los datos obtenidos son los siguientes Miu stes Rango del an lisis Pendiente Intersecci n de Y R CU IC del 95 IC del 95 1 De 1 6 a 31 7 0 96 de 0 92 a 1 00 0 08 de 0 65 a 0 81 1 00 2 De 1 4 a 67 7 0 86 de 0 84 a 0 89 1 26 de 0 40 a 2 12 1 00 3 De 4 9 a 292 8 0 96 de 0 92 a 1 00 1 68 de 4 49 a 7 86 1 00 4 De 16 4 a 561 0 0 86 de 0 83 a 0 89 0 37 de 9 71 a 8 97 1 00 5 De 30 4 a 1 271 2 0 92 de 0 90 a 0 94 3 11 de 16 59 a 10 37 1 00 6 De 183 8 a 1 470 7 1 04 de 0 97 a 1 10 6 39 de 67 03 a 54 25 1 00 QUANTA Flash DGP Screen 701111 Calibradores Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los calibradores QUANTA Flash DGP Screen est n destinados a utilizarse con el inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash DGP Screen en el instrumento BIO FLASH Cada calibrador establece un punto de referencia para la curva de trabajo utilizada en la determinaci n de los valores de la unidad de quimioluminiscencia CU para la medici n de anticuerpos IgG e IgA anti DGP en suero Resumen y principios del procedimiento El CIA de QUANTA Flash DGP Screen emplea una curva maestra predefinida espec fica de cada lote que se guarda en el c digo de barras del cartucho de reactivos Los calibradores QUANTA Flash DGP Screen est n dise ados para generar una curva de trabajo espec fica para el instrumento a partir de los par metros de la curva maestra con un pun
3. No debe utilizarse suero muy hemolizado ni suero ict rico Tras la recogida el suero debe separarse del co gulo El documento H18 A3 del CLSI recomienda las siguientes condiciones de almacenamiento de muestras 1 No guarde las muestras a temperatura ambiente durante m s de 8 horas 2 Si el an lisis no se efect a en un plazo de 8 horas refrigere las muestras a 2 8 C 3 Si el an lisis no va a realizarse en un plazo de 48 horas o si debe preparar las muestras para enviarlas cong lelas a una temperatura de 20 C o inferior Las muestras congeladas deben mezclarse bien despu s de descongelarse y antes del an lisis Procedimiento Materiales suministrados 1 Cartucho de reactivos QUANTA Flash DGP Screen Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO FLASH con ordenador para manejarlo L quido de lavado del sistema BIO FLASH n mero de componente 3000 8205 Iniciadores BIO FLASH n mero de componente 3000 8204 Cubetas BIO FLASH n mero de componente 3000 8206 Soluci n de limpieza BIO FLASH n mero de componente 3000 8211 Calibradores QUANTA Flash DGP Screen n mero de componente 701111 Controles QUANTA Flash DGP Screen n mero de componente 701112 Uso del analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH 1 Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y
4. antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del control y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del control e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la medici n de anticuerpos IgG o IgA anti DGP p ptidos de gliadina desamidada Limitaciones Estos controles est n dise ados para 15 usos La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que pueden marcarse para controlar el n mero de usos El tiempo m ximo durante el que los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante m s de 2 5 horas en total deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de control para m s de 15 usos y o duran
5. anti tTG y anti endomisio con el fin de reducir el n mero de biopsias intestinales necesarias para realizar un diagn stico Recientes estudios han revelado que los anticuerpos de los pacientes cel acos se unen a un n mero muy peque o de ep topos espec ficos de la mol cula de gliadina que se han desamidado de forma selectiva Se considera que la desamidacion esta provocada por la enzima asociada a la enfermedad cel aca la transglutaminasa tisular Bas ndose en las anteriores observaciones se han desarrollado an lisis que utilizan p ptidos de gliadina desamidados espec ficos Consiguen una mayor exactitud en el diagn stico de la enfermedad cel aca que los an lisis anti gliadina habituales Una estrategia de detecci n sensible para detectar personas con enfermedad cel aca en poblaciones de riesgo comprende el an lisis de anticuerpos IgG e IgA contra p ptidos de gliadina desamidados ya que una proporci n considerable de pacientes cel acos presentan deficiencia de IgA Varios estudios han demostrado la elevada utilidad cl nica de esta estrategia de an lisis La dermatitis herpetiforme DH es una enfermedad de la piel que al igual que la enfermedad cel aca est provocada por la ingesta de prote nas del trigo La mayor a de los pacientes con DH presentan una atrofia de las vellosidades intestinales del yeyuno id ntica a la encontrada en la enfermedad cel aca y una dieta estricta sin gluten mejora tanto las lesiones
6. realizarse con todo cuidado para no verter los reactivos 4 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los residuos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Aseg rese de limpiar siempre el instrumento seg n el procedimiento recomendado que est indicado en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los cartuchos de reactivos no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado 2 Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento y permanecen estables durante 63 d as tras este per odo deben desecharse El software BlO FLASH supervisa las fechas de caducidad de los cartuchos cargados as como las de los lotes de cartuchos de reactivos Recogida de muestras Este procedimiento debe realizarse con una muestra de suero No deben utilizarse muestras que est n contaminadas con microorganismos que hayan recibido un tratamiento a base de calor o que contengan part culas visibles Las muestras que conten an hasta 10 mg dL de bilirrubina 200 mg dL de hemoglobina 1 000 224 mg dL de triglic ridos colesterol o 500 Ul mL de IgM de factor reumatoide no presentaron interferencia en el QUANTA Flash DGP Screen
7. residuos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Aseg rese de limpiar siempre el instrumento seg n el procedimiento recomendado que est indicado en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los calibradores no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado 2 Los calibradores abiertos deben desecharse al cabo de 8 horas Procedimiento 1 Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Cada calibrador debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del calibrador y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del calibrador e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento d
8. A anti DGP 2 Los resultados de este an lisis deben utilizarse junto con resultados cl nicos y otros an lisis serol gicos 3 Si no se mezclan correctamente los reactivos antes del primer uso pueden obtenerse resultados err neos 4 Las caracteristicas de rendimiento de este ensayo no se han establecido para sustratos distintos del suero Valores esperados El l mite de detecci n del ensayo se ha determinado analizando 446 muestras caracterizadas cl nicamente extracciones simples en pacientes claramente positivos o negativos a la presencia de enfermedad cel aca y que no segu an ninguna dieta sin gluten Estas muestras 117 cl nicamente positivas y 329 cl nicamente negativas se han utilizado para ajustar el l mite de detecci n a 20 CU a fin de optimizar la sensibilidad y especificidad en los valores 86 3 y 96 0 respectivamente en este grupo de preparaci n del an lisis Rango de referencia Los niveles de anticuerpos IgA e IgG anti DGP se analizaron con el QUANTA Flash DGP Screen en un grupo de 351 individuos aparentemente sanos y donantes de sangre normales 172 hombres y 179 mujeres con edades de 6 meses a 82 a os una edad media de 32 a os y una mediana de edad de 33 a os Con un l mite de detecci n de 20 CU 7 muestras el 2 0 dieron positivo en el QUANTA Flash DGP Screen La concentraci n media fue de 3 8 CU y los valores oscilaron entre lt 0 5 y 358 8 CU Sensibilidad y especificidad cl nicas El estu
9. QUANTA Flash DGP Screen 701113 Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto El QUANTA Flash DGP Screen es un inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA para la detecci n semicuantitativa de anticuerpos IgG e IgA anti DGP p ptidos de gliadina desamidada en suero humano en el instrumento BIO FLASH Junto con los resultados de la exploraci n f sica y otras pruebas de laboratorio puede ayudar a diagnosticar la enfermedad cel aca y de la dermatitis herpetiforme Resumen y explicaci n de la prueba La celiaqu a o enfermedad cel aca EC es una enteropat a por sensibilidad al gluten cuyas caracter sticas principales son inflamaci n y un t pico aplanamiento histol gico de la mucosa intestinal que provoca un s ndrome de malabsorci n La etiolog a exacta de la celiaqu a es a n desconocida pero la gliadina la fracci n soluble en alcohol del gluten del trigo es claramente el agente toxico Segun los estudios realizados la EC tiene una prevalencia del 0 7 al 1 0 en la poblaci n general cifra que se eleva hasta el 20 en algunas poblaciones de riesgo Originalmente se utilizaban una serie de biopsias intestinales m ltiples para diagnosticar la enfermedad cel aca y los trastornos relacionados M s recientemente la Sociedad Europea de Gastroenterolog a Pedi trica y Nutrici n ESPGAN y diversos otros estudios publicados han recomendado el uso de marcadores serol gicos como los anticuerpos anti gliadina anti DGP
10. VA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos de Am rica Servicio t cnico nacional 877 829 4745 Servicio t cnico internacional 00 1 858 805 7950 support inovadx com Representante autorizado en la UE Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621110ESP Diciembre 2011 Revisi n 2
11. aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco Haga clic en Siguiente d Siga las instrucciones de la ventana A adir iniciadores A adir frasco del iniciador 1 Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo Haga clic en Finalizar Vuelva a colocar el caj n de residuos en su lugar y ci rrelo Para sustituir el recipiente de l quido de lavado del sistema haga clic en el bot n Inventario de vol menes F9 en la esquina superior derecha En la pantalla Inventario Vol menes haga clic en el bot n Lavado del sistema En la ventana que se abrir A adir l quido de lavado Retirar frascos haga clic en Siguiente Siga las instrucciones de la ventana que aparecer A adir l quido de lavado A adir frasco Una vez aceptado el c digo de barras haga clic en Finalizar si es necesario Para vaciar el recipiente de residuos l quidos en la pantalla Inventario Vol menes haga clic en el bot n Residuo l quido Extraiga el residuo l quido y t relo Haga clic en Siguiente Una vez sustituido el frasco vac o haga clic en Finalizar M todo Preparaci n del cartucho de reactivos La primera vez que se utilice el cartucho de reactivos se deben seguir los pasos siguientes para instalar el cartucho con precisi n en el instrumento BIO FLASH Nota no utilice el cartucho de reactivos si observa cualquier signo de que est da ado Cartucho
12. amp n estabilizantes de prote nas y conservantes 2 Control positivo de QUANTA Flash DGP Screen Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti DGP prediluido preparado para ser utilizado y de 0 5 ml de volumen con tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 Los controles contienen una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza las pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente a VIH HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia de VIH VHB VHC u otros agentes infecciosos Por ello los controles QUANTA Flash DGP Screen deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccios
13. ante el que los tubos del calibrador pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es 8 horas Si los calibradores destapados permanecen en el instrumento durante m s de 8 horas deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de calibrador para m s de 4 calibraciones y o durante m s de 8 horas es posible que la calibraci n del ensayo sea incorrecta lo que producir resultados err neos 12 QUANTA Flash DGP Screen 701112 Controles Para uso diagn stico in vitro Uso previsto Los controles QUANTA Flash DGP Screen est n destinados al control de calidad de los an lisis efectuados mediante el kit de inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash DGP Screen en un instrumento BIO FLASH Resumen y principios del procedimiento Los controles QUANTA Flash DGP Screen est n constituidos por un control negativo y un control positivo Cada uno de ellos contiene una cantidad diferente de anticuerpos anti DGP El control negativo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles muy bajos de anticuerpos El control positivo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles de anticuerpos de moderados a altos Reactivos 1 Control negativo de QUANTA Flash DGP Screen Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti DGP prediluido preparado para ser utilizado y de 0 5 ml de volumen con t
14. contiene soluci n salina tamponada con Tris Tween 20 estabilizantes de prote nas y conservantes 3 IgA IgG trazadora anticuerpos anti IgG y anti lgA humana marcada con isoluminol que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservante Advertencias 1 El tamp n del ensayo contiene una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza las pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 4 Los vertidos de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente para la eliminaci n de residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Este ensayo solo debe utilizarse con el instrumento BIO FLASH Una vez abierto el cartucho de reactivos debe almacenarse en la bandeja de reactivos del instrumento La colocaci n del cartucho de reactivos en el instrumento por primera vez debe
15. d coeliac disease Scand Journal Gastroenterology 27 367 371 1992 Smecuol E et al Permeability Zonulin Production and Enteropathy in Dermatitis Herpetiformis Clinical Gastroenterlogy and Hepatology 3 335 341 2005 Beutner EH et al Sensitivity and Specificity of IgA class antiendomysial antibodies for dermatitis herpetiformis and findings relevant to their pathogenic significance Journal of the American Academy of Dermatology 15 464 473 1986 Jaskowski TD Donaldson MR et al Novel screening assay performance in pediatric celiac disease and adult dermatitis herpetiformis JPGN 51 19 23 2010 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Fifth Edition 2007 10 imbolos utilizados lt 5 Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Consulte las instrucciones de uso L mite de temperatura No reutilizar 9 0 2 Riesgo biol gico O C digo de lote N mero de cat logo Utilizar antes del tiempo indicado Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para n an lisis ONTROL Control positivo gene ONTROL Control negativo CAL 4 Calibrador 1 CAL 2 Calibrador 2 Caja de cart n reciclable B gt Mantener en esta posici n QUANTA Flash es una marca comercial de INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH es una marca comercial registrada de Biokit S A 2011 Fabricado por INO
16. de INOVA 701112 contienen los controles positivos y negativos del QUANTA Flash DGP Screen Consulte el apartado Controles QUANTA Flash DGP Screen 701112 de este documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo introducir el valor de la unidad y la desviaci n est ndar de cada control y c mo analizar los controles Se recomienda analizar los controles una vez cada d a en que se utilice el ensayo C lculo de los resultados Se produce una curva maestra de seis puntos en INOVA para cada nuevo lote de QUANTA Flash DGP Screen Esta curva log stica de cuatro par metros se codifica mediante el c digo de barras de cada cartucho de reactivos Tras calibrar un cartucho de reactivos se utilizar un curva de trabajo espec fica del dispositivo para convertir las RLU a CU La reactividad del anticuerpo para DGP puede entonces clasificarse seg n la tabla siguiente Reactividad CU Negativo lt 20 Positivo d bil 20 30 Positivo gt 30 La reactividad expresada en CU est directamente relacionada con la titulaci n del autoanticuerpo en las muestras de paciente Los aumentos y disminuciones de las concentraciones de anticuerpos de pacientes se reflejar n en un correspondiente aumento o disminuci n de las CU que es proporcional a la cantidad de anticuerpo El rango notificable del ensayo va de 0 5 CU a 1461 8 CU Si el resultado de un paciente es inferior a 0 5 CU el sistema BIO FLASH indicar lt 0 5 CU Dado que es
17. de reactivos QUANTA Flash DGP Screen Durante el env o y el almacenamiento las micropart culas se depositan y es preciso mezclarlas para volver a suspenderlas 1 La primera vez que se utiliza el cartucho invierta suavemente el cartucho 30 veces evitando la formaci n de espuma Compruebe la resuspensi n completa de las micropart culas Si las micropart culas no se han resuspendido completamente siga invirtiendo el cartucho hasta que se termine la resuspensi n Si las micropart culas no se resuspenden NO UTILICE EL CARTUCHO 2 Una vez que se han resuspendido las micropart culas coloque el cartucho de reactivos sobre una superficie s lida para retirar la anilla roja Con una mano sostenga el cartucho de reactivos en su lugar Con la otra mano agarre con fuerza la anilla roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente 3 Pulse las dos pesta as laterales del tap n de perforaci n parte gris y aplique presi n a la parte superior del cartucho de reactivos hasta que descienda y alcance un tope Las pesta as deber an quedar ocultas NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO 4 Coloque con cuidado el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carro de reactivos del instrumento BIO FLASH Cuando el cartucho est colocado en el carro de reactivos el instrumento realizar una mezcla peri dica adicional de los lechos Calibraci n del ensayo 1 Cada nuevo lote de cartucho de
18. dio de validaci n cl nica cont con 30 muestras cel acas procedentes de la biblioteca de sueros de INOVA 7 de ellas con deficiencia selectiva de IgA 71 controles sin celiaqu a y 68 muestras procedentes de un seminario sobre tTG 18 controles con EC y 50 sin EC Un estudio externo independiente cont con 93 muestras cel acas y 98 controles con la enfermedad Las muestras se analizaron con el CIA de QUANTA Flash DGP Screen Los resultados se procesaron por separado para calcular la sensibilidad y especificidad para EC n 141 y DH n 25 utilizando la misma poblaci n de control n 219 Sensibilidad y especificidad cl nicas del ensayo QUANTA Flash DGP Screen en la EC Diagn stico Positivo Sin EC Total An lisis intervalo de confianza 95 Sensibilidad 85 8 78 9 91 1 QUANTA Flash DGP Screen Negativo 99 5 Especificidad 98 2 95 4 Total Sensibilidad y especificidad cl nicas del ensayo QUANTA Flash DGP Screen en la DH Diagn stico Positivo Sin DH Total An lisis intervalo de confianza 95 Sensibilidad 68 0 46 5 85 1 QUANTA Flash DGP Screen Negativo 99 5 Especificidad 98 2 95 4 Total Distribuci n de las poblaciones de control con y sin enfermedad utilizadas en el estudio de validaci n y en el rango de referencia Grupo de pacientes Colitis ulcerosa Enfermedad de Crohn Enfermedad
19. el software BIO FLASH Para obtener m s informaci n o solucionar problemas relativos al ensayo p ngase en contacto con el servicio t cnico de INOVA Diagnostics Inc en la direcci n o n mero de tel fono indicados al final de estas instrucciones de uso Para vaciar el recipiente de residuos s lidos abra el caj n de residuos Extraiga el recipiente de residuos s lidos y tire las cubetas usadas de forma adecuada Vuelva a colocar el recipiente de residuos s lidos en su lugar cierre el caj n de residuos y haga clic en S en la ventana Vaciar caj n de residuos Para sustituir los iniciadores haga clic en el bot n Inventario de vol menes F9 situado en la parte superior derecha a En la pantalla Inventario Vol menes haga clic en el bot n Iniciadores situado a la izquierda Se abrir la ventana A adir iniciadores Retirar frascos viejos b Abra y retire el caj n de residuos del instrumento BIO FLASH Tire todas las cubetas en el caj n de residuos secos Haga clic en S en la ventana Vaciar caj n de residuos Retire los frascos del iniciador de sus soportes y haga clic en el bot n Siguiente Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustit yalos por nuevos iniciadores Realice la operaci n frasco a frasco y respete el c digo de color de los tapones blanco blanco rojo rojo c Siga las instrucciones de la ventana que se abrir A adir iniciadores A adir frasco del iniciador 2 Una vez
20. etalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH 3 El instrumento analizar cada calibrador por triplicado Una vez analizados los calibradores el software solicitar la validaci n de la calibraci n En la pantalla Resumen del instrumento haga clic en bot n Seleccionar mas opciones Ctrl M V se alado con una flecha Seleccione Calibraci n Ctrl F3 En la ventana Calibraci n marque el ensayo deseado y haga clic en Detalles 4 En la ventana Detalles de calibraci n que se abrir seleccione la calibraci n que acaba de efectuar La curva maestra se visualizar como una l nea discontinua y la nueva curva maestra como una l nea continua Si los resultados de la calibraci n son v lidos en la parte inferior izquierda de la pantalla aparecer un bot n de validaci n Haga clic en el bot n Validar calibraci n 5 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Se recomienda analizar los controles QUANTA Flash DGP Screen vendidos por separado n mero de producto 701112 tras calibrar un lote de cartuchos de reactivos Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la medici n de anticuerpos IgG o IgA anti DGP p ptidos de gliadina desamidada Limitaciones Estos calibradores est n dise ados para realizar 4 calibraciones El tiempo m ximo dur
21. ic en el bot n A adir ensayo En ventana que se abrir aseg rese de que est marcada la casilla Mostrar todos los ensayos Seleccione el ensayo DGP Screen de la lista y haga clic en A adir Por ltimo introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Crear Realice este proceso para ambos controles Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes 1 Antes de utilizar un nuevo lote de controles QUANTA Flash DGP Screen por primera vez introduzca en el software el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Resumen del instrumento haga clic en el bot n Seleccionar m s opciones Ctrl M vw se alado con una flecha Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo DGP Screen en la columna de la izquierda A continuaci n seleccione el material de control apropiado en la derecha DGPSN para el control negativo o bien DGPSP para el control positivo Haga clic en el bot n Nuevo lote de control de calidad 3 Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica para cada lote Introduzca la informaci n de esta hoja de datos en el software Dicha informaci n debe comprender el n mero de lote la caducidad la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Guardar Realice este proceso para ambos controles Se recomienda utilizar los controles QUANTA Flash DGP Screen una vez los d as en que se utilizar el ensayo Cada control debe mezclarse suavemente
22. igen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente a VIH HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia de VIH VHB VHC u otros agentes infecciosos Por ello los calibradores QUANTA Flash DGP Screen deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 4 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 5 Los vertidos de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente para la eliminaci n de residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Los calibradores QUANTA Flash DGP Screen deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash DGP Screen 3 No transfiera los reactivos de los calibradores a tubos secundarios Los c digos de barras de los tubos son utilizados por el instrumento para ajustar los calibradores al tipo de ensayo adecuado 4 Los tubos de los calibradores una vez abiertos pueden utilizarse durante un maximo de 8 horas o 4 calibraciones transcurrido este tiempo los reactivos deben desecharse 5 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los
23. inflamatoria intestinal sin especificar Infecci n por H pylori Otras enfermedades gastrointestinales Alergia alimentaria Diabetes de tipo 1 Enfermedades reum ticas sist micas varias Enfermedad tiroidea autoinmunitaria Hepatitis v rica Enfermedad hep tica autoinmunitaria Controles sin EC sin especificar Positivo o 0 0 2 0 0 0 0 0 0 0 2 Fa Positive Comparaci n de m todos con un ensayo comercializado con el mismo fin Las muestras usadas en la comparaci n de m todos fueron las de los estudios de validaci n cl nica pacientes con celiaqu a y dermatitis herpetiforme otros controles con enfermedad y donantes de sangre normales que se encontraban dentro del rango notificable del ensayo Dichas muestras se analizaron mediante el QUANTA Flash DGP Screen y un ELISA destinado al mismo fin Comparaci n de m todos ELISA de DGP Screen Concordancia N 228 Positivo Negativo Total intervalo de confianza 95 QUANTA Positivo Conc pos 85 7 69 7 95 2 Flash DGP Negativo Conc neg 96 9 93 4 98 9 Screen CIA Total Conc total 95 2 91 5 97 6 Aun paciente se le diagnostica celiaqu a otro paciente un control negativo procedente de un seminario sobre tTG tambi n da positivo en un CIA h tTG IgA y un tercero present sospecha de celiaqu a sin diagn stico Las tres muestras restantes proceden de donantes de sangre normales Tre
24. intestinales como cut neas 1818 Los m todos serol gicos actuales como los ensayos EMA y tTG tienen un rendimiento muy pobre cuando se utilizan en la DH con sensibilidades que van entre el 45 y el 75 18 20 en comparaci n con la sensibilidad del 95 o superior que muestran para la enfermedad cel aca Un estudio ha revelado que los anticuerpos anti DGP son m s habituales que los anticuerpos anti tTG en los pacientes con DH El QUANTA Flash DGP Screen es una prueba con rendimiento mejorado para la detecci n de anticuerpos IgA e IgG contra un p ptido sint tico desamidado selectivamente derivado de la prote na del trigo gliadina y que permite la detecci n de la enfermedad cel aca incluso si coexiste una deficiencia de IgA Principios del procedimiento Se recubren con p ptido de gliadina desamidada sint tica part culas de l tex paramagn ticas que se guardan en el cartucho de reactivos en unas condiciones que mantienen el ant geno en su estado reactivo Cuando el cartucho de an lisis est preparado para ser utilizado por primera vez se invierte varias veces todo el cartucho para mezclar completamente los reactivos A continuaci n se coloca el cartucho de reactivos en el instrumento BIO FLASH Mediante el instrumento se prediluye una muestra de suero de paciente utilizando l quido de lavado del sistema a adido a una cubeta de pl stico desechable Se combinan en una segunda cubeta y se mezclan peque as cantidades del suero de
25. o 4 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 5 Los vertidos de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente para la eliminaci n de residuos Precauciones Este producto est destinado a uso diagn stico in vitro Los controles QUANTA Flash DGP Screen deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash DGP Screen No transfiera los reactivos de los controles a tubos secundarios Los c digos de barras de los tubos son utilizados por el instrumento para identificar al control Cada tubo de control una vez abierto es v lido para 15 usos y puede permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los residuos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Aseg rese de limpiar siempre el instrumento seg n el procedimiento recomendado que est indicado en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los controles no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado Los controles abiertos son v lidos para 15 usos y pueden permanecer como m xim
26. o 10 minutos en el instrumento en cada uso El tiempo total durante el que los tubos de control pueden permanecer sin tapar en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Si los controles se dejan destapados en el instrumento por m s de 2 5 horas en total los controles que acumulen un tiempo total superior a 2 5 horas deber n desecharse Si se utiliza el mismo tubo de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Para conseguir una estabilidad ptima retire los controles del sistema inmediatamente despu s de tomar las muestras y almac nelos a 2 8 C tapados y en el vial original Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el ensayo DGP Screen 1 Antes de utilizar los controles QUANTA Flash DGP Screen por primera vez en el instrumento introduzca en el software el nombre el lote las r plicas la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Resumen del instrumento haga clic en el bot n Seleccionar m s opciones Ctrl M w se alado con una flecha Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo DGP Screen en la columna de la izquierda A continuaci n haga clic en el bot n Nuevo material de control de calidad Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica para cada lote En primer lugar introduzca el nombre el n mero de lote y la caducidad de esta hoja de datos en el software A continuaci n haga cl
27. paciente diluido las part culas de DGP y el tamp n de an lisis Esta cubeta se incuba a 37 C y despu s los lechos se magnetizan y se lavan varias veces A continuaci n se a ade anticuerpo conjugado con isoluminol a la cubeta y esta se incuba a 37 C De nuevo las part culas se magnetizan y se lavan repetidamente El conjugado de isoluminol produce una reacci n luminiscente al a adir a la cubeta los reactivos iniciadores La luz emitida por la reacci n se mide como unidades relativas de luz RLU mediante el sistema ptico del BIO FLASH El n mero de RLU es proporcional a la cantidad de conjugado de isoluminol ligado que a su vez es proporcional a la cantidad de anticuerpos anti DGP unidos al DGP en las part culas El ensayo QUANTA Flash DGP Screen utiliza una curva maestra predefinida espec fica para cada lote que se carga en el instrumento mediante el c digo de barras del cartucho de reactivos De acuerdo con los resultados del an lisis de dos calibradores se crea una curva de trabajo espec fica para el instrumento que se usa para calcular las unidades de quimioluminiscencia CU a partir de las RLU obtenidas con cada paciente Reactivos El cartucho de reactivos del QUANTA Flash DGP Screen contiene los reactivos siguientes para 50 an lisis 1 Part culas paramagn ticas recubiertas de DGP en un tamp n que contiene l quido estabilizantes de prote nas y conservante 2 Tamp n de an lisis de color rosa que
28. reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Consulte el apartado Calibradores QUANTA Flash DGP Screen 701111 de este documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo calibrar el cartucho de reactivos 3 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Programaci n y an lisis de muestras 1 Pulse el bot n Lista de trabajo de la parte superior de la pantalla y seleccione la pesta a Gradillas de la parte inferior 2 Seleccione la gradilla de muestras que se utilizar marc ndola en la pantalla o escaneando su c digo de barras con el lector manual de c digos de barras Escanee o escriba el nombre de la muestra indique el tipo de muestra elija el tipo de recipiente tubo copa y seleccione DGP Screen en el panel del ensayo Repita estos pasos para todas las muestras 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y coloque la gradilla en el carro de muestras del instrumento 4 Cuando todos los materiales necesarios est n cargados en el instrumento el icono de inicio pasara a estar disponible en color verde en la parte superior de la pantalla Pulse el icono de inicio para comenzar la sesi n de an lisis Control de calidad Los controles QUANTA Flash DGP Screen vendidos por separado n mero de producto
29. s muestras proceden de donantes de sangre normales mientras que las dos restantes son controles negativos procedentes de un seminario sobre tTG Precisi n y reproducibilidad La precisi n del ensayo QUANTA Flash DGP Screen se ha evaluado analizando 7 pacientes seg n el documento EP5 A2 del CLSI la tabla siguiente resume los datos obtenidos Bento de la Entre distintas Entre distintos sesi n de Total ick sesiones dias analisis Muestra N Media CU DE CV DE CV DE CV DE CV 1 84 1354 7 57 7 4 3 29 0 2 1 29 4 2 2 70 9 5 2 2 84 85 5 3 2 3 7 2 1 2 5 0 0 0 0 3 5 4 1 3 84 46 7 1 8 3 9 1 1 2 4 0 2 0 4 2 1 4 6 4 84 13 4 0 4 3 0 0 2 1 9 0 1 0 9 0 5 3 6 5 84 21 7 0 8 3 8 0 6 2 7 0 1 0 5 1 0 4 7 6 84 24 1 1 0 4 3 0 8 3 3 0 0 0 0 1 2 5 0 7 84 26 9 1 0 3 9 0 6 2 1 0 0 0 0 1 0 3 9 Limites de deteccion rangos lineales y notificables El l mite inferior de detecci n del ensayo de acuerdo con el documento EP17 A del CLSI es de 570 RLU aproximadamente lo que equivale a 0 04 CU muy por debajo del valor inferior al rango notificable El l mite superior de detecci n aproximado es de 1 113 000 RLU que est aproximadamente un 71 por encima del valor superior del rango notificable El rango notificable completo que va de 0 5 CU a 1461 8 CU es lineal Se ha realizado un estudio de linealidad siguiendo el documento EP6 A del
30. te m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Referencias bibliogr ficas 1 2 3 20 21 Trier JS Celiac Sprue New England Journal of Medicine 325 1709 1719 1991 Troncone R and Ferguson A Antigliadin antibodies J Pediatr Gastroenterol Nutr 12 150 158 1991 Fasano A Berti Gerarduzzi T Not T Colletti RB Drago S Elitsur Y Green PH Guandalini S Hill ID Pietzak M Ventura A Thorpe M Kryszak D Fornaroli F Wasserman SS Murray JA Horvath K Prevalence of celiac disease in at risk and not at risk groups in the United States a large multicenter study Arch Intern Med 163 3 286 292 2003 Dub C Rostom A Sy R Cranney A Saloojee N Garritty C Sampson M Zhang L Yazdi F Mamaladze V Pan Macneil J Mack D Patel D Moher D The prevalence of celiac disease in average risk and at risk Western European populations a systematic review Gastroenterology 128 4 Suppl 1 S57 67 2005 5 Working Group of European Society of Paediatric Gastroenterology and Nutrition Revised criteria for diagnosis of coeliac disease Arch Dis Child 65 909 911 1990 McMillan SA Haughton DJ et al Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy BMJ 303 1163 1165 1991 Sugai E Moreno ML et al Celiac disease serology in patients with different pre test probabilities Is biopsy avoidable World J Gastroenterol 16 3144 52
31. te valor es inferior a 20 CU se considera un resultado negativo Si el resultado de un paciente es superior a 1461 8 CU el sistema BIO FLASH indicar gt 1461 8 CU Este valor se considera un resultado positivo El software BIO FLASH dispone de una opci n denominada Rean lisis autom tico Si esta opci n est seleccionada el instrumento volver a analizar de manera autom tica cualquier muestra con un resultado superior a 1461 8 CU diluy ndola nuevamente seg n un factor de 10 y calcular las CU utilizando este factor de diluci n adicional Interpretaci n de los resultados El ensayo QUANTA Flash permite detectar peque as diferencias en las poblaciones de pacientes Cada laboratorio debe determinar su propio rango normal bas ndose en los controles y la poblaci n de pacientes que utilice de acuerdo con los procedimientos espec ficos que establezca Es recomendable que los resultados notificados por el laboratorio incluyan esta informaci n Los siguientes resultados se han obtenido mediante el inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash DGP Screen de INOVA Los valores obtenidos con m todos de ensayo de otros fabricantes pueden no ser intercambiables La magnitud de los niveles de anticuerpos obtenidos no siempre puede correlacionarse con un t tulo de punto final Limitaciones del procedimiento 1 No todos los pacientes con enfermedad cel aca o dermatitis herpetiforme son positivos para anticuerpos IgG o Ig
32. to de decisi n basado en las caracter sticas operativas y en la evaluaci n cl nica del CIA de QUANTA Flash DGP Screen Los calibradores se analizan en varios instrumentos con diversos lotes de reactivos antes de efectuar la asignaci n de valores Reactivos 1 Calibrador 1 de QUANTA Flash DGP Screen Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti DGP prediluido preparado para ser utilizado y de 0 3 ml de volumen con tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes 2 Calibrador 2 de QUANTA Flash DGP Screen Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti DGP prediluido preparado para ser utilizado y de 0 3 ml de volumen con tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 Los calibradores contienen una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza las pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Todo el material de or
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