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1. dro 1 No existi efecto de horario dentro de cada estaci n P gt 0 05 La variabilidad de los datos CV 36 5 seguramente influy en la no significancia del efecto De todos modos el invierno es la estaci n con mayor homogeneidad en la cantidad de larvas infectantes a lo largo del d a prevaleciendo la ma ana sobre el mediod a y la tarde En primavera y oto o la mayor cantidad de larvasfue recuperada al mediod a En verano el muestreo de la tarde fue el m s eficiente Para aumentar la potencia del test y al no existir efecto horario la variaci n estacional se evalu con los valores de los tres horarios La infectividad promedio detectada en el verano 447 5 L3 kps fue significativamente menor P lt 0 05 que la observada en primavera 1104 8 L3 kps oto o 1047 L3 kps e invierno 979 9 L3 kps Cuadro 1 Infectividad de la pastura L3 KPS en lostresmomentosde muestreo por la t cnica de Mwegoha y Jorgensen Letras iguales entre horarios dentro de cada estaci n no difieren significativamente OL 0 05 Con la t cnica de Baermann Cuadro 2 tampoco se detectaron diferencias significativas entre los horarios de muestreo en ninguna de las estaciones P gt 0 05 el coeficiente de variabilidad tambi n en este caso fue sumamente alto Durante primavera y oto o la mayor infectividad fue obtenida a la ma ana en tanto que en verano e invierno el horario de muestreo m s eficiente fue el de la tarde E2. de Baermann modificada el n mero de larvasinfectivas registrado durante la primavera fue significativamente mayor P lt 0 05 que el observado en el resto del a o El horario de muestreo no tuvo efecto sobre la recuperaci n y aislamiento de larvas en las pasturas en ninguna de las estaciones del a o P gt 0 05 La t cnica de Mwegoha y Jorgensen result significativamente m s eficiente para estimar la infectividad de las pasturas durante el verano oto o e invierno En primavera las diferencias entre las t cnicas no fueron significativas P gt 0 05 Los g neros parasitarios de mayor prevalencia fueron Cooperia spp y Ostertagia spp en tanto que Haemonchus spp Trichostrongylus spp y Oesophagostomum spp fueron hallados en menor proporci n Palabras clave nematodestrichostrongylideos pasturas infectividad t cnicas de laboratorio SUM MARY SEASONAL AND DAILY DYNAMIC OF TRICHOSTRONGYLE LARVAE POPULATIONS IN CATTLE GRAZING PASTURES The dynamic of trichostrongyle larvae populations on grazing cattle pastures along the year is mainly influenced by climatic conditions and ts assessment by the way in which grass samples are collected and processed in the laboratory The aim of this experiment was to determine the seasonal and daily variation of infective trichostrongyle larvae populations on cattle grazing pastures and to evaluate the efficacy of two laboratory techniques used for estimating trichostrongyle herbage infectiv
3. realizar los muestreos en dicho momento Con respecto a las t cnicas de laboratorio con excepci n de la primavera en las restantes estaciones la t cnica de Mwegoha y Jorgensen demostr ser en todos los horarios de muestreo m s efec tiva que la de Baermann Esta diferencia de eficiencia podr a deberse a las condiciones en las cuales se realiza la migraci n larval tempe ratura ptima en el m todo de Mwegoha y Jorgensen comparado con el de Baermann que se efect a a temperatura de laboratorio La participaci n relativa de cada g nero parasitario en las dife rentes estaciones del a o es coincidente con la informaci n existente acerca de dicha prevalencia en la regi n Pampeana Ostertagia spp y Cooperia spp predominan sobre los otros g neros durante todo el a o La distribuci n estacional de los g neros obedece a que Ostertagia spp es un par sito adaptado a cdlimastemplados fr os que alcanza su mayor incidencia a la altura del paralelo 38 sudeste de la provincia de Buenos Aires Fiel y Steffan 1994 a Cooperia spp en cambio es un g nero intermedio entre los adaptados a climas fr os y los prevalentes en climas c lidos Otros g neros adaptados a climas c li dos como Haemonchus y Oesophagostomum alcanzaron su mayor 34 Din mica estacional y diaria en las pasturas de poblaciones incidencia en el verano aunque en menor proporci n que en traba jos anteriores realizadosen la zona Se pueden establecer las siguie
4. 00 700 g de pasto verde Para cada d a de muestreo el procedimiento se repiti en tres horarios 2 primeras horas de luz mediod a y 2 ltimas horas de sol T cnicas de laboratorio Cada muestra de pasto fue primariamente procesada en una m quina de lavado con 8 10 de agua sin residuos de agentes dorados y 4 5 gotas de detergente no i nico para facilitar la extrac ci n de las larvas adheridas en las estructuras del forraje El l quido de lavado fue filtrado por un tamiz de 37 micras 400 meshes donde se concentraron las larvas para luego transferirlas a recipientes con 50 ml de agua destilada Para clarificar las muestras y aislar las larvas infectivas para su cuantificaci n e identificaci n se utilizaron last cnicas de Mwegoha y Jorgensen 1977 basada en la migraci n de larvas a trav s de una pel cula de agar gel y la de Baermann 1917 modificada con migra ci n de las larvas en medio l quido a trav s de un papel de filtro Las larvas infectivas aisladas de cada muestra de pasto fueron coloreadas con soluci n yodo iodurada contadase identificadas por la clave descripta por Niec 1968 El pasto de cada muestra se sec en estufa hasta peso constante para expresar el n mero de larvas FERREYRA D A STEFFAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 29 infectivas por kilo de pasto seco L3 k p s a trav s de la siguiente f rmula L3 k p s 1000 x n gr p s donde n n mero de larvas contadas gr
5. FAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 27 En estudios realizados para determinar el efecto del momento del d a para realizar el muestreo sobre la cantidad de larvasinfectantes recuperadas las diferencias halladas no pudieron comprobarse estad sticamente Gettinby et al 1985 Romero y Gruner 1984 Krecek et al 1991 Dada la migraci n de las larvas infectivas en funci n de la humedad y en forma inversa a la intensidad lum nica se recupera r an m s larvas a la salida y entrada del sol y en los d as nublados o lluviosos Fiel y Steffan 1994 a Se informan los resultados de un estudio orientado a contribuir a la determinaci n de los momentos del d a de m xima recuperaci n de larvasinfectivas de nematodestrichostrongylideos en los pastos a lo largo de las diferentes estaciones del a o y a comparar dost cnicas de laboratorio utilizadas en la estimaci n de la infectividad de pasturas MATERIALES Y METODOS Dise o experimental El estudio se realiz sobre una pastura mejorada con gram neas y leguminosas pastoreada continuamente por bovinos de recr a por tadores subclinicos de infecciones parasitarias internas A intervalos semanales y durante las cuatro estaciones del a o se extrajeron al azar muestras duplicadas de pasto en tres momentos diferentes del d a ma ana mediod a y tarde Las muestras fueron procesadas por lavado vigoroso para extraer las larvas infectivas del pasto para lue go aislarlas y concentrarl
6. RIA 31 2 25 38 ISSN 0325 8718 INTA Argentina DINAMICA ESTACIONAL Y DIARIA EN LAS PASTURAS DE POBLACIONES DE NEMATODES TRICHOSTRONGYLIDEOS DE BOVINOS FERREY RA D A STEFFAN P E FIEL C A GONZALEZ F RESUMEN El presente experimento fue desarrollado para determinar la din mica estacional y diaria en los pastos de poblaciones de larvas infectivas de nematodestrichostrongylideos de bovinos evaluando a su vez la eficiencia de dos t cnicas de laboratorio Se utiliz una pastura consociada contaminada a trav s del pastoreo continuo por animales parasitados Durante un a o a intervalos semanales y en tres momentos del d a ma ana mediod a y tarde se colectaron manualmente muestras duplicadas de pasto La extracci n de larvas infectivas de las muestras se realiz a trav s del lavado vigoroso del pasto Para el aislamiento de las larvas infectivas se utilizaron dos t cnicas a Mwegoha y Jorgensen migraci n en agar gel y b Baermann modificado migraci n a trav s de papel de filtro Con la primera losniveles de infectividad detectados durante el verano resultaron significativamente menores P lt 0 05 que losdetectadosen lasotrasestaciones Area de Parasitolog a y Enfermedades Parasitarias Facultad de Ciencias Veterinarias UNCPBA Campus Universitario 7000 Tandil Argentina e mail parasito vet unicen edu ar FERREYRA D A STEFFAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 25 del a o Con la t cnica
7. as DISCUSION Uno de los mayores inconvenientes que se presentan al preten der definir el comportamiento de las larvas infectivas de nematodes gastrointestinales en los pastos es la variabilidad que presentan los datos A los factores ya mencionados como causa de dicha variabili dad clima m todo de muestreo tipo de forraje hay que sumar las p rdidas que se producen desde la recolecci n del pasto hasta la re cuperaci n de las larvas que pueden significar del 20 al 60 del total de larvas presentes Su rez 1997 32 Din mica estacional y diaria en las pasturas de poblaciones El m todo de muestreo de la pastura utilizado si bien no cons tituye el de mayor precision indica la infectividad potencial de una pastura En los trabajos donde se compararon diferentes formas de muestreo de las pasturas no fue posible mencionar un m todo que resulte superior a losdem s debido a la variabilidad que presentaron los datos Raynaud y Gruner 1981 utilizando el mismo m todo de este trabajo recuperaron mayor cantidad de larvas de Dictyocaulus Ostertagia y Cooperia que con un m todo de muestreo al azar sobre una ruta en forma de W en tanto que Bryan y Kerr 1988 compara ron tres m todos diferentes de recolecci n manual de pasto uno con animales fistulados de es fago y otro con animales trazadores de infectividad El muestreo manual del rea de mayor intensidad de pastoreo es seg n estos autores el m todo m s preciso Sin em
8. as a trav s de dos t cnicas de laboratorio para su cuantificaci n e identificaci n Los datos se compararon y analizaron estad sticamente Per odo experimental El estudio se desarroll entre el 25 de septiembre de 1996 y el 22 de septiembre de 1997 Campo experimental y manejo del pastoreo Se utiliz un potrero de 9 ha del Campo Experimental 6 de la Estaci n Experimental del INTA en Balcarce con una base forrajera 28 Din mica estacional y diaria en las pasturas de poblaciones compuesta por una pastura implantada a base de Thynophirum ponticum Festuca arundinacea y Lotus tenuis El potrero fue dividi do en tres parcelas de 3 ha afin de optimizar el consumo de forraje a trav s de un esquema rotativo de pastoreo por las mismas Desde el 25 9 96 hasta el 20 3 97 se utilizaron 24 terneros AA de un a o de vida al comienzo del estudio Posteriormente y hasta el 15 6 97 se introdujeron 51 vaquillonas AA de recr a A partir de esa fecha el campo experimental permaneci sin animales Metodolog a de muestreo de las pasturas A intervalos semanales sobre una ruta de muestreo en zig zag trazada en el potrero se realizaron 40 detenciones frente a deposi ciones fecales con formaci n costrosa secas en el exterior En cada detenci n se tomaron 4 submuestras cortando pasto a ras del suelo a 10 20 cm del borde externo de las deposiciones y coloc ndolas al azar en 2 bolsas pl sticasidentificadas Las muestrasfinalesfueron de 6
9. bar go la delimitaci n del rea mencionada resulta engorrosa y de esca sa practicidad para el diagn stico parasitol gico de rutina El m to do utilizado en el presente trabajo es f cilmente practicable para dichos fines La variaci n estacional de la infectividad de las pasturas obser vada en el experimento es coincidente con la bibliograf a existente Seg n Fiel y Steffan 1994 a en sistemas de recr a e invernada la con taminaci n e infectividad de las pasturas comienza a descender des de la primavera vegetal en adelante La primera como consecuencia de un menor aporte de huevos a la pastura por la inmunidad que adquieren los animales 15 meses de edad La infectividad de los pastos disminuye por el crecimiento de forraje que diluye la cantidad de larvas infectantes y por la acci n directa de la radiaci n solar que condiciona la sobreviviencia de las larvas Esta situaci n se observ en el experimento llegando en el verano a niveles realmente bajos Seg n los mismos autores durante el oto o la infectividad de los pastos aumenta debido a la traslaci n de larvas provocada por las lluvias desde deposiciones fecales remanentes del ciclo de produc ci n anterior Los animales reci n ingresados terneros de destete encuentran este pie de infecci n y reciclan r pidamente la enfer medad eliminando gran cantidad de huevos con la materia fecal s tos contribuir n al aumento progresivo de la cantidad de larvas en l
10. chostrongylosis of cattle Vet Parasitol 10 65 71 COUVILLION C E 1993 Estimation of the numbers of trichostrongylid larvae on pastures Vet Parasitol 46 197 203 FERREY RA D A STEFFAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 35 FIEL C A y STEFFAN P E 1994 a Epidemiologia de los nematodes gastrointestinales en la Pampa Humeda En Enfermedades parasitarias de importancia econ mica en bovinos Bases epidemioldgicas para su prevenci n y control A Nari y C Fiel editores 12 Edici n pp 67 129 Editorial Hemisferio Sur FIEL C A y STEFFAN P E 1994 b Gu a de procedimientospara el diagn stico de nematodes en bovinos Cuadernillo de Divulgaci n T cnica Ed Hoechst Argentina S A GETTINBY G McKELLAR Q A BAIRDEN K THEODORIS Y WHITELAW A 1985 Comparisson of two techniques used for recovery of nematode infective larvae from pasture Res Vet 39 99 102 JORGENSEN R J 1980 Epidemiology of bovine Dictyocaulosisin Denmark Vet Parasitol 7 153 167 KRECEK R C GROENEVELD H T van WYK J A 1991 Effects of time of day and stratum on Haemonchus contortus and Haemonchus placei third stage larvae on irrigated pasture Vet Parasitol 40 87 98 MWEGOHA W M Y JORGENSEN R J 1977 Recovery of infective 3rd stage larvae of Haemonchus contortus and Ostertagia ostertagi by migration in agar gel Acta Vet Scand 18 293 299 NIEC R 1968 Cultivo e identificaci n de larvas in
11. co de la enfermedad ya que indica el riesgo al que se hallan expues toslosanimalesen pastoreo y permite trazar patrones de infectividad que se pueden relacionar con el clima y el manejo de los animales Fiel y Steffan 1994 a Dicha estimaci n est afectada por varios fac tores entre los que se encuentran el clima el tipo de forraje la t cni ca de laboratorio Couvillon 1993 el per odo del a o y el horario de muestreo Fiel y Steffan 1994 b La recolecci n manual de pasto es utilizada en estudios de epidemiolog a y en el diagn stico de rutina de infectividad de pasturas Aunque el m todo es simple se han realizado diferentes trabajos destinadosa establecer el mejor procedimiento para realizar el muestreo Raynaud y Gruner 1981 Cabaret et al 1982 Seg n Couvillion 1993 las muestras deben ser tomadas al azar y con sufi cientes repeticiones para superar la variabilidad propia del muestreo El posterior aislamiento de laslarvas desde las muestras se realiza con diferentes t cnicas Una de ellasesla de Baermann 1917 con modi ficaciones en la que la migraci n de las larvas se realiza a trav s de un papel de filtro que est en contacto con el agua contenida en un embudo Mwegoha y Jorgensen 1977 propusieron una t cnica de migraci n en agar gel incluido en agua donde las part culas extra asson retenidas en el agar y las larvas luego de migrar por el agua se concentran en tubos c nicos FERREYRA D A STEF
12. fectantes de nematodes gastrointestinalesdel bovino y ovino Manual T cnico N2 3 INTA Argentina 37 p g RAYNAUD J P GRUNER L 1981 Comparisson of techiques for assesment of the contamination of positive herbage with infective nematode larvae In Epidemiology and Control of nematodiasisin cattle P Nansen Jorgensen R J Soulsby E J L editors Martinus Nijhoff Publishersd The Hague Boston and London pp 51 64 ROMERO C G GRUNER L 1984 Effect of temperature and humidity in gastrointestinal strongyle infections of cattle pastures Ann Rech Vet 1 65 S A S INSTITUTE INC 1985 SAS User s Guide Basics Version 5 edn 1290 pp and SAS User s Guide Statistics Version 5 edn 956 pp Cary NC SAS Institute Inc 36 Din mica estacional y diaria en las pasturas de poblaciones SIEVERS G QUINTANA I CORTESE F ORTEGA F y ERNST S 1996 Distribuci n de las larvas infectantes de trichostrongilidos del bovino sobre el pasto durante un a o Trabajo presentado en el V E R V E Merlo San Luis 23 24 de Mayo SUAREZ V H 1997 Diagn stico de las parasitosisinternas de los rumiantes en la regi n de invernada Interpretaci n y t cnicas Bol divulgaci n t cnica N256 EEA Anguil INTA 50 p FERREYRA D A STEFFAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 37
13. ity From a naturally infected pasture duplicate herbage samples were collected at weekly intervals in three times of the day i e early morning midday and late afternoon samplingswere carried out throughout the four seasons of the year The grass samples were processed in a washing machine to extract the infective larve For larval isolation two techniques were used a Mwegoha amp Jorgensen s technique based on the capability of infective larvae to migrate through agar gel and b the modified Baermann stechnique in which larvae migrate in water through a filter paper The Mwegoha y Jorgensen 5 technique showed that summer pasture infectivity was lower than that recorded in other seasons P lt 0 05 while the 26 Din mica estacional y diaria en las pasturas de poblaciones highest levels of herbage infectivity were recorded in spring P lt 0 05 throughout the Baermann 5 technique The time of the day at which grass samples were collected did not have influence throughout the four seasons of the year P gt 0 05 The Mwegoha Jorgensen s technique showed to be more efficient than the modified Baermann s to estimate pasture trichostrongyle larvae infectivity during summer autumn and winter Key Words trichostrongyle nematode herbage infectivity laboratory methods INTRODUCCION La determinaci n de la infectividad de pasturas por nematodes trichostrongylideos constituye una herramienta til en el diagn sti
14. n t rminosestacionales la mayor cantidad de larvasfue hallada en pri mavera 1041 3 L3 kps difiriendo significativamente P lt 0 01 de los promediosobservadosen verano 285 1 L3 kps oto o 240 L3 kps e invierno 365 5 L3 kps Diferencias entre t cnicas de laboratorio Con la t cnica de Mwegoha y Jorgensen se recuperaron canti dades significativamente superiores que con la t cnica de Baermann FERREYRA D A STEFFAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 31 Cuadro 2 Infectividad de la pastura L3 KPS en tres momentos de muestreo por la t cnica de Baermann Letras iguales entre horarios dentro de cada estaci n no difieren significativamente Ol 0 05 en el muestreo de la ma ana del verano P lt 0 05 en lostres horarios durante el oto o ma ana P lt 0 01 mediod a P lt 0 01 tarde P lt 0 05 y en la ma ana P lt 0 01 y el mediod a P lt 0 01 del invierno En prima vera las diferencias entre last cnicas no fueron significativas P gt 0 05 Cuadros 1 y 2 Distribuci n proporcional de g neros parasitarios Cooperia spp y Ostertagia spp fueron los g neros de mayor prevalencia Cooperia alcanz valores del 52 en oto o 68 en pri mavera y 73 en verano Ostertagia spp prevaleci en oto o invier no En menor medida fueron hallados Haemonchus spp Trichostrongylus spp y Oesophagostomum spp La distribuci n de g neros fue similar para las dos t cnicas de laboratorio evaluad
15. ntes conclusiones a Con respecto a la variaci n estacional se comprob con la t cnica de Mwegoha y Jorgensen que en el verano ocurre una gran disminuci n de la infectividad de las pasturas b No se comprob variaci n diaria significativa en la infectividad de las pasturas c La t cnica de Mwegoha y J orgensen demostr ser m s eficien te que el m todo de Baermann modificado en la estimaci n de la infectividad de pasturas por nematodestrichostrongylideos d A la vista de los resultados surge la necesidad de realizar trabajos con mayor frecuencia de muestreo Sin embargo a medida que se acorta el intervalo entre losmismos se dificulta la extrapolaci n de los resultados a los trabajos de diagn stico en sistemas reales de producci n donde usualmente el intervalo entre muestreos es de cuatro semanas REFERENCIAS ABBIATI N RECHIONI L 1988 Transformaciones de potenciasen modelos lineales Comunicaciones de XVI Coloquio Argentino de Estad stica 1 7 BAERMANN G 1917 Eine einfache methode zur auffindung von Ankylostomum Nematoden larven in erdproben Geneesk Tijdschr Ned Indie 57 131 137 BRYAN R P KERR J D 1988 The grazing behaviour of cattle in relation to the sampling of infective nematode larvae on pasture Vet Parasitol 30 73 82 CABARET J RAYNAUD J P LE STANG J P 1982 Comparison between tracer calves and herbage samplings for the assesment of pasture infectivity in tri
16. os pastos As los m ximos niveles de infectividad se observan du rante los meses invernales Este hecho fue observado en el experi FERREYRA D A STEFFAN P E FIEL C A y GONZ LEZ F 33 mento solo con la t cnica de Mwegoha y J orgensen 1977 que arroj valores crecientes de infectividad durante el oto o y niveles altos durante el invierno Los resultados obtenidos en cuanto a la varia ci n diaria son coincidentescon parte de la bibliograf a existente En Chile Sievers et al 1996 no hallaron diferencias en la infectividad de pasturas muestreadasa la ma ana y a la tarde durante primavera y verano con temperaturas medias entre 10 18 C y precipitaciones de aproximadamente 25 mm semanales En Sud frica Krecek et al 1991 tampoco observaron diferendas en la cantidad de larvas de H contortus y H placei recuperadasen cinco horarios de muestreo desde el amane cer hasta el anochecer En este caso se utiliz riego artificial a raz n de 35 mm semanales y las temperaturas medias oscilaron entre 15 y 24 C Gettinby et al 1985 utilizando ovejasfistuladas no encontra ron diferencias en el n mero de larvas recuperadasa las 9 12 y 15h Si bien este efecto de horario de muestreo no pudo comprobarse estad sticamente en el verano la mayor cantidad de larvas fue recu perada con ambas t cnicas en los muestreos de la tarde hecho que adquiere importancia desde un punto de vista pr ctico ya que indi caria la conveniencia de
17. p s peso en gramos de la muestra de pasto seca Dise o experimental El modelo utilizado fue yp H T Bi Ya Eim donde Y sel recuento de larvas infectantes de la pastura obtenidas en el muestreo correspondiente a la sima estaci n del a o j sima semana de la estaci n i en el k simo horario repetici n m u esel promedio general t esel efecto de la i sima estaci n p esel efecto de la semana dentro de la i sima estaci n Error para testear el efecto estaci n Y esel efecto del k simo horario de muestreo Y esel efecto del k simo horario de muestreo dentro de la estaci n i jum es el t rmino del error correspondiente a la observaci n y An lisis estad stico Losdatosfueron procesados por el Proc GLM SAS 1985 El efecto estaci n fue testeado con semana estaci n como t rmino de error Para discriminar su significancia se utiliz el test de Duncan Last c nicasde laboratorio se compararon a trav s de un test de t para mues tras apareadas El nivel de significancia fue del 5 Para lograr ho mogeneidad de varianza y normalidad los datos fueron transforma dos a su 0 25 potencia Abbiati y Rechioni 1988 RESULTADOS Variaci n estacional y diaria de la infectividad de la pastura Con la t cnica de Mwegoha y J orgensen la infectividad de pri mavera oto o e invierno fue superior a la obtenida en verano Cua 30 Din mica estacional y diaria en las pasturas de poblaciones
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