Home

INDEX, ÍNDICE, INDICE, ÍNDICE 2 – 7 English 8 – 13

Contents

1. antibiotique MAP VersaTREK ESP Culture System Il Souches Sensibles Souches r sistantes Concentration S AR Conce nitration Accord Accord Accord Accord Equivalente Streptomycine 2 ug ml 95 14 2 ug ml 95 100 11 79 10 ug ml 103 6 8 ug ml 103 100 5 83 Tableau 6 Dix souches cliniques 30 tests et 30 CDC souches challenges 60 tests de M tuberculosis teste a deux ou trois sites avec 2 concentrations de Streptomycine Les donn es sont repr sent es comme nombre total de points de donn es test es Antibiotique MAP VersaTREK ESP Culture System Il Souches Sensibles Souches resistantes Concentration o 6 Concentration S R Equivalente Accord Accord Accord Accord Streptomycine 2 ug ml 72 18 2 ug ml 72 100 18 100 10 ug ml TT 13 8 ug ml 77 100 13 100 INFORMATION DE DANGER Xn Nuisible R22 Nuisible si aval R61 Peut causer nuisance l embryon S37 Porter des gants de protections appropri s S53 Eviter l exposition Obtenir des instructions sp ciales avant l utilisation R F RENCES Page 7 Pour informations suppl mentaires appeler l assistance technique de TREK au 1 216 351 8735 29 Portugu s VersaTREKO Myco Streptomycin 7120 30 UTILIZA O PREVISTA O teste VersaTREK Myco Streptomycin um teste r pido qualitativo da sensibilidade in vitro Estreptomicina para cultura de Mycobacterium tuberculosis O Ve
2. ES Representante autorizado en la Comunidad Europea EC REP IT Mandatario nella Comunit Europea FR Mandataire dans la Communaut europ enne PT Representante autorizado na Comunidade Europeia GB Contains ES Contiene IT Contiene FR Contient PT Cont m GB For use with the VersaTREK and ESP Il systems to perform M tuberculosis susceptibility testing ES Para su uso con los sistemas VersaTREK y ESP Il en la realizaci n de pruebas de sensibilidad de M tuberculosis IT Da utilizzare con i sistemi VersaTREK e ESP Il per eseguire il test di sensibilit di M tuberculosis FR utiliser avec les syst mes VersaTREK et ESP Il pour effectuer les essais de sensibilit de M tuberculosis PT Para utiliza o com os sistemas VersaTREK e ESP II para realiza o do teste de sensibilidade de M tuberculosis GB Streptomycin ES Estreptomicina STR IT Streptomicina FR Streptomycine PT Estreptomicina 38
3. Be sure to check the subculture results on the mycobacterial agar to verify that only one species of mycobacterium was present especially in the case of a resistant result TABLE 3 Examples of Results for Calculation of Susceptibility of M tuberculosis strains to VersaTREK Myco Streptomycin Patient A B C D E F G Streptomycin Control 2 4 5 9 10 10 12 Positive Days Streptomycin Drug Positive 5 2 6 7 14 13 10 Days Invalid Invalid Result ce en Resistant Resistant Susceptible Resistant SR Repeat Test Repeat Test All resistant results should be confirmed by an alternate method prior to reporting LIMITATIONS 1 No qa The VersaTREK Myco Streptomycin susceptibility test does not interpret the degree of susceptibility of the isolate being tested Itis a qualitative test The VersaTREK Myco Streptomycin susceptibility test can only be performed on the VTI or ESP instruments Testing cannot be performed manually Use only pure cultures of M tuberculosis The user must confirm the purity of the culture especially if the result is resistant Cultures that contain multiple species of Mycobacteria may give erroneous results Failure to prepare the isolates per the manufacturer s recommendation may lead to inaccurate results Failure to re hydrate the streptomycin with the proper volume of sterile water may give inaccurate results Thorough mixing of inoculated bottles is important Failure
4. McFarland Des isolats purs pas g de plus de 4 5 semaines poussant sur une g lose agar appropri e pour les mycobact ries Middlebrook 7H10 Middlebrook 7H11 Lowenstein Jensen inclin s sont pr lev s l aide d une anse st rile et plac s dans un tube contenant 9 10 ml d eau st rile distill e ou d ionis e et des billes de verre Le tube est vortex et laiss au repos pendant 15 minutes Approximativement 5 ml de la couche sup rieure est enlev e plac e dans un tube st rile et ajust McFarland 1 approximativement 3 0 x 10 cellules souches ml utilisant de l eau st rile distill e ou d ionis e b Flacon VersaTREK Myco ensemenc Pr parer une suspension McFarland 1 partir d un isolat test d un milieu agar ou liquide croissance dans le milieu Middlebrook 7H9 Aseptiquement injecter 0 5 ml de cette dilution dans un flacon de culture VersaTREK Myco suppl ment avec 0 1 ml de VersaTREK Myco GS Un VersaTREK connector st rile est plac sur le flacon qui est incub e dans l appareil jusqu ce qu un signal positif soit observ environ 10 cellules souches ml Une fois le signal positif atteint le VersaTREK connector est enlev et le flacon est vortex pendant 1 2 minutes L inoculum du flacon ensemenc doit tre utilis dans les 72 heures apr s le signal positif de l appareil Faire une dilution au 1 10ieme de la suspension McFarland 1 partir du milieu agar ou du flacon ensemenc dans u
5. n Ceppi sensibili Ceppi resistenti i O O Concentrazione S R Concentrazione N conferme u N conferme u equivalente conferme conferme Streptomicina 2 ug ml 72 18 2 ug ml 72 100 18 100 10 ug ml 77 13 8 ug ml 77 100 13 100 INFORMAZIONI SUI RISCHI Xn Dannoso R22 Dannoso se ingerito R61 Pu provocare danni al nascituro S37 Indossare guanti appropriati S53 Evitare l esposizione consultare le istruzioni speciali prima dell uso RIFERIMENTI pg 7 Per maggiori informazioni contattare Assistenza Tecnica di TREK Diagnostic Systems al numero 1 216 351 8735 22 Fran ais VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 UTILISATION PREVUE Le test Versa TREK myco streptomycin est un proc d qualitatif rapide pour tester la sensibilit in vitro la Streptomycine partir d une culture de Mycobacterium tuberculosis VersaTREK myco Streptomycin est utilis avec le VersaTREK Automated Microbial detection System VTI et le ESP Culture System Il ESP RESUME ET EXPLICATION Le diagnostic rapide de la tuberculose est important pour le commencement des traitements m dicamenteux appropri s et l institution de mesures pour emp cher la diffusion de cette maladie fortement contagieuse Retarder le traitement particuli rement pour les souches de M tuberculosis multi r sistante aux antibiotiques MDR TB peut aboutir l chec du traitement et la mortalit des patients Pour aborder ses probl me
6. avec de l eau st rile et pr parer une dilution de 5 ml dans 15 ml comme d cris sous Inoculation de VersaTREK Myco Culture Bottles pour tester la sensibilit Myco 3 Ajouter 1 0 ml de l antibiotique ayant une concentration de 120 ug ml un flacon de VersaTREK Myco La concentration finale de la streptomycine du flacon contenant la culture de Myco est de 4 ug ml 4 Ajouter 1 0 ml de l antibiotiques ayant une concentration de 30 ug ml un deuxi me flacon VersaTREK Myco La concentration finale de la streptomycine du flacon de Myco est de2 ug ml 5 Ajouter 1 0 ml d eau st rile distill e ou d ionis e dans le flacon de croissance de contr le 6 Ajouter 0 5 ml de la dilution au 1 10ieme de la culture provenant d un flacon ensemence positif VersaTREK un flacon de culture appropri es contenant l antibiotique et au flacon de croissance de contr le ne contenant pas d antibiotique 7 Apres l observation des r sultants attendus utiliser le reste des sp cimens test du lot Si les r sultats attendus ne sont pas atteints contacter l assistance technique Table 4 R sultats attendus des souches QC Organisme ATCC Streptomycine M tuberculosis 25618 Sensible Les causes les plus communes des erreurs du contr le qualit sont la surcharge de l ensemencement des kits des tests de la streptomycine et la contamination Si les faux r sultats de r sistance r p t s sont obtenus l antibiotique
7. cis 5 L chec de la r hydratation de la streptomycine avec le bon volume d eau st rile peut donner des r sultats impr cis 6 Bien mixer les flacons inocul s est important L chec de l ad quat mixage peut mener a de faux r sultats de r sistance 7 L checde l utilisation du bouillon de suppl ment VersaTREK Myco GS peut mener de faux r sultats de sensibilit CONTROLE QUALITE Un nouveau lot ou une exp dition de VersaTREK Myco Streptomycin devra tre test avec des organismes de contr le qualit M tuberculosis ATCC 25618 sensible la streptomycine Les r sultats attendus sont montr s dans le tableau 4 Le contr le qualit devra tre effectu une fois chaque semaine lors de la performance du test de sensibilit L observation de r sultats r els dans les 4 13 jours indique que les r actifs sont pr ts tre utilis pour tester des isolats de patients Si les r sultants r els ne sont pas observ s ne pas reporter les r sultats des patients R p ter le contr le qualit et tout autres isolats de patients affect s par l erreur initiale du contr le qualit Si le contr le qualit r p t ne donne toujours pas les r sultats attendus ne pas reporter les r sultats des patients Ne pas utiliser le produit avant d avoir contact les services techniques 1 Ajouter 1 ml de versa TREK Myco GS au flacon de culture VersaTREK Myco 2 R hydrater VersaTREK Myco Streptomycin lyophilis
8. dell isolato di prova Iniettare asetticamente 0 5 ml di questa diluizione in un flacone di coltura VersaTREK Myco integrato con 1 0 ml di VersaTREK Myco GS Al flacone viene applicato un connettore VersaTREK Connector sterile e il flacone viene incubato nello strumento finch non si osserva un segnale positivo circa 10 CFU ml Una volta registrato tale segnale il connettore VersaTREK Connector viene rimosso e il flacone viene centrifugato per 1 2 minuti L inoculo del flacone di coltura dovr essere utilizzato entro 72 ore dal segnale positivo dello strumento Effettuare una diluizione 1 10 del McFarland N 1 dell agar o del flacone di coltura VersaTREK Myco in soluzione salina o acqua distillata sterile inoculo per il test Aggiungere 0 5 ml a ciascun brodo di controllo e di test Lavare i flaconi di coltura e i relativi tappi con un disinfettante micobattericida Mescolare tutti i flaconi capovolgendoli pi volte Rimuovere il dispositivo di chiusura ermetica dalla parte inferiore del connettore VersaTREK Connector Inserire nel tappo del flacone di coltura l estremit del connettore VersaTREK Connector contenente l ago NOTA non capovolgere il flacone di coltura mentre il connettore si trova sul flacone il liquido presente nell ago potrebbe alterare i valori di pressione del flacone Posizionare nello strumento il flacone di coltura con il connettore VersaTREK Connector Per ulteriori dettagli sull inserimento del flacone consultare
9. nicas de Mycobacterium tuberculosis para comprobar la susceptibilidad a la estreptomicina en 4 lugares diferentes usando el m todo de proporciones de agar modificadas MAP y VersaTREK Myco Streptomycin Test Ambos sistemas detectaron 95 87 2 cepas susceptibles El m todo MAP detect 6 cepas altamente resistentes resistentes a 10 ug ml de estreptomicina y 14 cepas ligeramente resistentes resistentes a una concentraci n de 2 ug ml de estreptomicina La prueba VersaTREK Streptomycin detect 5 cepas altamente resistentes y 11 ligeramente resistentes La prueba inicial se realiz con s lo una concentraci n 8 ug ml de estreptomicina que se mostr inconsistente para detectar cepas poco resistentes a la estreptomicina Se a adi a la prueba una concentraci n adicional de 2 ug ml que fue analizada con 14 cepas cl nicas de M tuberculosis y 30 cepas CDC en tres lugares Esta prueba mostr una buena correlaci n para detectar resistencias ligeras a la estreptomicina 14 CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO Tabla 5 Resultados del estudio clinico con VersaTREK ESP Culture System II Comparado con el m todo de proporcion agar modificada MAP Farmaco VersaTREK ESP Culture System II MAR Cepas susceptibles Cepas resistentes iA o o Concentraci n N S N R Concentracion Nodo Acuerdo Ne de Acuerdo equivalente Acuerdos Acuerdos Estreptomicina 2 Hg ml 95 14 2 ug ml 95 100 11 79 10 ug ml 103 6 8 u
10. tes des dangers 3 AVERTISSEMENTS TEST DE SPECIMENS POTENTIELLEMENT DANGEREUX Suivre les pr cautions universelles et les politiques institutionnelles dans le traitement et la disposition des agents infectieux 4 Lors de travaux avec des cultures de M tuberculosis les recommandations sont de niveau 3 de bios curit pour les pratiques les quipements de confinement et les facilit s 5 Le VersaTREK connector contient une aiguille enfonc e st rile lors du premier enl vement de joint mais est potentiellement contamin e la fin de l utilisation 6 Inspecter visuellement tous les flacons pour contamination fissures ou autres signes de d t rioration Ne pas utiliser de flacons apparaissant troubl s ou fissur s 7 Utiliser uniquement des seringues but es 8 Autoclaver tous les flacons de VersaTREK Myco avant de disposer STOCKAGE Stocker 2 8 C Prot ger contre la lumi re Lors de la r hydratation stocker 2 8 C et utiliser dans les 4 semaines ou congeler 20 C et utiliser dans les 3 mois Une fois d congel ne pas recongeler DATE DE PEREMPTION La date de p remption s applique au produit dans son contenant intact non ouvert quand stock comme adress Le test VersaTREK Streptomycin ne doit pas tre utilis au del de la date de p remption indiqu e PROCEDURE TEST DE LA SENSIBILITE DE M tuberculosis UTILISANT LE VERSATREK ESP CULTURE SYSTEM Il Mat riels fournis VersaTREK M
11. Se a repeti o de controlo de qualidade n o correr conforme esperado n o d o relat rio dos resultados do doente N o utilize o produto at ter contactado os Servi os T cnicos 1 Adicione 1 ml de VersaTREK Myco GS s garrafas de cultura VersaTREK Myco 2 Re hidrate o VersaTREK Myco Streptomycin liofilizado com gua esterilizada e prepare uma dilui o de 5 ml a 15 mi conforme descrito em Inocula o de Garrafas de Cultura VersaTREK Myco para Teste de Sensibilidade 3 Adicione 1 0 ml de concentra o de antibi tico de 120 ug ml a uma garrafa VersaTREK Myco A concentra o de estreptomicina final na garrafa de cultura Myco de 8 ug ml 4 Adicione 1 0 ml de concentra o de antibi ticos de 30 ug ml a uma segunda garrafa VersaTREK Myco A concentra o de estreptomicina final na garrafa de cultura Myco de 2 ug ml 5 Adicione 1 0 ml de gua esterilizada destilada ou desionizada garrafa de controlo de crescimento 6 Adicione 0 5 ml da dilui o de 1 10 de cultura de uma garrafa para processamento VersaTREK Myco positivo s garrafas de cultura apropriadas que contenham o antibi tico e garrafa de controlo de crescimento isento de antibi ticos 7 Ap s observa o dos resultados esperados utilize o restante lote no teste de amostras Se n o forem alcan ados os resultados esperados contacte o Apoio T cnico Tabela 4 Resultados Esperados Estirpe de CQ Microrganismo ATCC Estreptomicina M tube
12. a sterile container Add 15 ml of distilled or deionized sterile water This yields a drug concentration of 30 ug ml 10 11 12 13 14 15 Aseptically add 1 0 ml of the 120 ug ml drug concentration to a culture bottle by injecting through the septum with a needle and syringe The final streptomycin concentration in the Myco culture bottle is 8 ug ml Aseptically add 1 0 ml of the 30 ug ml drug concentration to a second culture bottle by injecting through the septum with a needle and syringe The final streptomycin concentration in the Myco culture bottle is 2 ug ml TABLE 1 Anti Tuberculosis Drug Preparation Drug and Final Amount of Concentration Concentration in Diluent Added After Additional Number of VersaTREK Myco to Lyophilized Rehydration Dilutions into RE Bottles Tests per Vial Bottles Streptomycin Streptomycin 8 0 ug ml 25 ml 120 ug ml No 120 ug ml 20 US 5 ml diluted Streptomycin 2 0 ug ml drug plus 30 ug ml 20 15 ml water For the drug free control bottle add 1 0 ml of sterile water in place of the drug Twenty tests can be performed from a single vial The inoculum of a specimen for susceptibility testing must be confirmed as a pure culture of M tuberculosis prior to streptomycin testing and prepared as follows a McFarland equivalent cell suspension Pure isolates not more than 4 5 weeks old growing on an appropriate mycobacterial agar medium Middlebrook 7H10 M
13. de la streptomycine a surement perdu son activite La recommandation sera de retester avec un nouveau stock de Pantibiotique RESULTATS ATTENDUS Le test initial de 109 souches cliniques de Mycobacterium tuberculosis a t effectu e pour la sensibilit de la streptomycine a 4 diff rents sites utilisant la m thode de la g lose proportion modifi e MAP et le test VersaTREK Myco Streptomycin Chacun des syst mes a d tect 95 souches sensibles 87 2 La m thode de MAP a d tect 6 souches hautement r sistantes r sistance de la streptomycine la concentration de 10 ug ml et 14 souches faiblement r sistantes r sistance de la streptomycine a la concentration de 2 ug ml Le test de VersaTREK Myco Streptomycin a d tect 5 souches hautement r sistantes et 11 faiblement r sistantes Le test initial a t effectu avec seulement une seule concentration 8 ug ml de streptomycine qui se trouve tre inconsistant dans la d tection des souches faiblement r sistantes la streptomycine Une autre concentration 2 ug ml a t ajout au test avec 14 souches cliniques de M tuberculosis et 30 CDC souches challenge 3 sites Ce test a montr de bonne corr lation dans la d tection de faible r sistance a la streptomycine 28 CHARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE Tableau 5 Resultats de I tude Clinique avec le VersaTREK ESP Culture System Il Comparaison la m thode de la g lose a proportion modifi e MAP
14. di testa determinate dalla crescita batterica all interno di un flacone sigillato stato inoltre sviluppato uno speciale algoritmo per il rilevamento dei micobatteri dalla crescita particolarmente lenta Con il sistema VTI ESP il farmaco antitubercolare streptomicina pu essere iniettato nei flaconi VersaTREK Myco integrati con VersaTREK Myco GS Un inoculo di M tuberculosis proveniente da un flacone di coltura viene aggiunto sia a un flacone di controllo senza farmaco utilizzato come controllo positivo che a un flacone di test contenente streptomicina Se il microrganismo sensibile al farmaco verr rilevata una crescita ritardata o una mancata crescita Se invece il microrganismo resistente alla streptomicina verr rilevata una crescita batterica mediante la generazione di una curva che presenta un escursione discendente rispetto alla linea di base Il tempo di rilevamento nel flacone senza farmaco corrisponde alla stessa durata del test e ne determina perci la conclusione Il farmaco utilizzato in questo sistema streptomicina idratata con acqua sterile in specifiche concentrazioni di base pari a 2 ug ml e 8 ug ml Il rilevamento della crescita batterica nel sistema VTI ESP si basa sulla misurazione sensibile della produzione e o del consumo di gas all interno dello spazio di testa di un flacone di coltura Queste informazioni vengono utilizzate per generare una curva di pressione per ciascun flacone Un algoritmo interno analizza
15. to mix adequately may lead to false resistant results Failure to use the VersaTREK Myco GS growth supplement may lead to false susceptible results QUALITY CONTROL A new lot number or shipment of VersaTREK Myco Streptomycin should be tested with the quality control organism M tuberculosis ATCC 25618 streptomycin susceptible Expected results are shown in Table 4 Quality control should be run once each week when susceptibility testing is performed Observation of the proper results within 4 13 days indicated the reagents are ready for use in testing patient isolates If proper results are not observed do not report patient s results Repeat quality control and any patient isolates affected by the initial quality control failure If repeat quality control does not perform as expected do not report patient results Do not use the product until you have contacted Technical Services 1 2 Add 1 ml of VersaTREK Myco GS to VersaTREK Myco culture bottles Rehydrate lyophilized VersaTREK Myco Streptomycin with sterile water and prepare the 5 ml to 15 ml dilution as described under Inoculation of VersaTREK Myco Culture Bottles for Susceptibility Testing Add 1 0 ml of the 120 ug ml drug concentration to a VersaTREK Myco bottle The final streptomycin concentration in the Myco culture bottle is 8 ug ml Add 1 0 ml of the 30 ug ml drug concentration to a second VersaTREK Myco bottle The final streptomycin concentration in the Myco c
16. 1 12 13 14 Para el frasco de control sin f rmaco a ada 1 0 ml de agua est ril destilada o desionizada Con un Unico vial se pueden realizar 20 pruebas El in culo de una muestra para pruebas de susceptibilidad debe confirmarse como cultivo puro de M tuberculosis antes de las pruebas con estreptomicina y debe prepararse asi a Suspension de c lulas equivalentes a McFarland Los aislamientos puros de menos de 4 6 5 semanas que crezcan en un medio agar micobacteriano apropiado Middlebrook 7H10 Middlebrook 7H11 medios Lowenstein Jensen se consiguen usando una asa est ril y se colocan en un tubo con aproximadamente 9 a 10 ml de agua est ril destilada o desionizada y perlas de vidrio Se agita el tubo y se deja sedimentar durante 15 minutos Se extraen aproximadamente 5 ml de la capa superior que se colocan en un tubo de prueba est ril y se ajustan al equivalente n 1 de McFarland aproximadamente 3 0 x 107 CFU ml usando agua est ril destilada o desionizada b Frasco de cultivo VersaTREK Myco Prepare un equivalente n 1 de McFarland a partir de una fuente agar o liquida crecimiento de Middlebrook 7H9 del aislamiento de la prueba Inyecte as pticamente 0 5 ml de esta diluci n en un frasco de cultivo VersaTREK Myco complementado con 1 0 ml de VersaTREK Myco GS Se coloca un VersaTREK Connector sobre el frasco y ste se incuba en el instrumento hasta que se observa una sefial positiva 10 CFU ml aprox Al observars
17. AS DE COMPORTAMENTO FUNCIONAL Tabela 5 Resultados do Estudo Cl nico com o VersaTREK ESP Culture System II Em compara o com o M todo Propor es Agar Modificado MAP Antibidtico VersaTREK ESP Culture System II MAP ni Estirpes Sensiveis Estirpes Resistentes o o A Concentra o N N Conce ntra o N Acordo Acordo N Acordo Acordo S R Equivalente Estreptomicina 2 ug ml 95 14 2 ug ml 95 100 11 79 10 ug ml 103 6 8 ug ml 103 100 5 83 Tabela 6 Dez Amostras Cl nicas 30 testes e 30 Estirpes Padronizadas CDC 60 testes de M tuberculosis testadas em duas ou tr s localiza es com 2 concentra es de Estreptomicina Os dados s o representados como n mero total de pontos de dados testados Antibi tico MAP VersaTREK ESP Culture System Il Estirpes Sensiveis Estirpes Resistentes o o A Concentra o pe Li N Acordo Acordo N Acordo Acordo Estreptomicina 2 ug ml 72 18 2 ug ml 72 100 18 100 10 ug ml 77 13 8 ug ml 77 100 13 100 INFORMAGAO DE RISCO Xn Nocivo R22 Nocivo por ingest o R61 Risco durante a gravidez com efeitos adversos na descend ncia S37 Usar luvas adequadas S53 Evitar exposi o obter instru es espec ficas antes da utiliza o REFER NCIAS P gina 7 Para informa es adicionais contacte o Apoio T cnico da TREK Diagnostic Systems atrav s do 1 216 351 8735 36 Symbols S
18. Conservare a 2 8 C Proteggere dalla luce AI momento della reidratazione conservare a 2 8 C e utilizzare entro 4 settimane oppure congelare a 20 C e utilizzare entro 3 mesi Una volta effettuato lo scongelamento non ricongelare DATA DI SCADENZA La data di scadenza riguarda il prodotto presente del contenitore intatto non aperto e conservato secondo le istruzioni Il test VersaTREK Streptomycin non dovr essere utilizzato oltre la data di scadenza indicata PROCEDURA TEST DI SENSIBILIT DEL M tuberculosis MEDIANTE VERSATREK ESP CULTURE SYSTEM Il Materiali forniti VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 VersaTREK Myco Culture Bottles 7111 42 VersaTREK Myco GS 7112 42 VersaTREK Connectors 7150 44 Materiali richiesti ma non forniti Acqua distillata o deionizzata sterile Autoclave Middlebrook 7H10 o altri agar micobatterici o terreni di coltura all uovo per i controlli di purezza Incubatrice a CO 37 C Anse sterili Siringhe sterili da tubercolina con aghi collegati in modo permanente Disinfettante antimicobatterico ad es Amphly OMNI ecc Tamponi imbevuti di alcol Miscelatore a vortice Cappa di sicurezza biologica Microscopio Materiali per la colorazione dei vetrini Microrganismo per il controllo qualit M tuberculosis ATCC 25618 Inoculazione dei flaconi di coltura VersaTREK Myco per il test di sensibilit Myco 1 Etichettare ciascun flacone di coltura VersaTREK Myco con i dati di identificazio
19. K Connector through the culture bottle stopper NOTE Do not invert the culture bottle while the connector is on the bottle Fluid in the needle may interfere with the pressure readings for the bottle Place the culture bottle with the VersaTREK Connector into the instrument Refer to the VersaTREK ESP System Operator s Manual for details on bottle entry Loading suggestion If the sample accession number is 123 give the streptomycin test bottles accession numbers such as 123PC for the positive control and 12352 and 123S8 for the streptomycin test broths In this way all bottles associated with this sample accession number will be able to be searched for and located as a group An alternative method to adding reagents and inocula to broth bottles is to remove the cap and stopper and perform the additions using a sterile pipette Careful closure of the stopper and cap is required RESULTS For susceptibility testing using the VersaTREK ESP Culture System Il an isolate is interpreted as being susceptible or resistant to a drug based on the following round all times of detection to the nearest whole day 1 2 After the drug free bottle has become positive record the time to detection this is found on the graph of the test bottle Three additional days rounded to the nearest whole number of incubation after the drug free control has signaled positive search and record the results from the other test bottles for the isolate S
20. REK Myco GS et VersaTREK Myco streptomycin Un connecteur VersaTREK connector est attach chaque flacon pour tablir un syst me ferm pour contr ler les flacons avec l instrument VTI ESP Une membrane hydrophobe se trouvant dans le VersaTREK connector emp che la production d a rosols Les informations sur les isolats sont entr es dans l ordinateur du syst me et les flacons sont plac s dans l instrument pour incubation 35 37 C dans des conditions stationnaires Le syst me VTI ESP d tecte la croissance de Mycobact ries en contr lant continuellement toutes les 24 mins le taux de consommation d oxyg ne dans l espace de t te du flacon de culture et annonce la croissance avec un signal positif A la fin de la p riode d incubation indiqu e comme d termin par le flacon de contr le sans antibiotiques pour chaque isolat test l isolat est manuellement d termin pour tre sensible ou r sistant l antibiotique REACTIFS VersaTREK Myco Streptomycin contient une fiole de Streptomycine lyophilis La fiole doit tre r hydrat avec 25 ml d eau st rile distill e ou d ionis e 23 FORMULE SUR LA REHYDRATATION H20 Eau trait e 25ml STR Streptomycine 0 012 w v SA Agent solubilisant 1 25 w v Ajust e pour rencontrer les crit res de performance PRECAUTIONS D EMPLOI 1 A utiliser en diagnostic in vitro 2 Se r f rer aux notices techniques mat rielles de s curit pour des informations compl
21. SULTATS Pour les tests de sensibilit utilisant le VersaTREK ESP Culture System Il un isolat est interpr t comme tant sensible ou r sistant un antibiotique suivant arrondir tous les temps de d tection au jour entier le plus proche 1 D s que le flacon sans antibiotique est devenu positif enregistrer le temps de d tection ceci se trouve sur le graphique du flacon test 2 Trois jours en plus arrondi au nombre entier le plus proche d incubation apr s que le flacon sans antibiotique soit signal positif chercher et enregistrer les r sultats des autres flacons test pour l isolat 3 Sensible un isolat d un flacon contenant un antibiotique qui n aurait pas mis de signal dans les 3 jours du temps de d tection du contr le sans antibiotique est d termin tre sensible la concentration de cet antibiotique La croissance apr s 3 jours arrondi au nombre entier le plus proche du flacon de contr le signal e positif devra tre jet parce que ce n est pas consid r comme tant une indication de r sistance Pour arrondir au nombre entier le plus proche si temps lt XX 49 il faut arrondir au chiffre inf rieur et si temps gt XX 50 il faut arrondir au chiffre sup rieur 4 R sistant Le temps de d tection des bouteilles de m dicament est de trois jours arrondi au nombre entier le plus proche le temps de d tection de la bouteille t moin sans m dicament arrondi au nombre entier le plus proche Pour arr
22. TES DIAGNOSTIC SYSTEMS MAGELLAN BIOSCIENCES INDEX NDICE INDICE NDICE 2 7 English 8 13 Espa ol 14 19 Italiano 20 26 Fran ais 27 32 Portugu s Symbols Simbolos 33 34 Simboli Symboles Simbolos English VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 INTENDED USE The VersaTREK Myco Streptomycin test is a rapid qualitative procedure for in vitro susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from culture to streptomycin VersaTREK Myco Streptomycin is used with the VersaTREK Automated Microbial Detection System VTI and the ESP Culture System Il ESP SUMMARY AND EXPLANATION Rapid diagnosis of tuberculosis is important for initiation of appropriate drug therapy and institution of measures to prevent the spread of this highly contagious disease Delayed treatment particularly of multiple drug resistant M tuberculosis MDR TB strains can result in treatment failure and patient mortality To address these issues clinical microbiologists are urged to use the most sensitive and rapid diagnostic tests that provide reliable results Experts at the CDC have made several recommendations regarding Mycobacterial testing including the use of both a liquid and solid medium for Mycobacterial culture i For streptomycin susceptibility testing of M tuberculosis The VTI ESP System combines a liquid culture medium VersaTREK Myco Broth a growth supplement VersaTREK Myco GS and spec
23. a elimina o ARMAZENAMENTO Conservar entre 2 C e 8 C Proteger da exposi o solar Na re hidrata o conservar entre 2 e 8 C e utilizar dentro de 4 semanas ou congelar a 20 C e utilizar dentro de 3 meses Depois de descongelado n o voltar a congelar PRAZO DE VALIDADE O prazo de validade aplica se ao produto na sua embalagem intacta por abrir quando armazenado conforme instru es O teste VersaTREK Streptomycin n o deve ser utilizado para al m do prazo de validade indicado PROCEDIMENTO TESTE DE SENSIBILIDADE DE M tuberculosis UTILIZANDO O VERSATREK ESP CULTURE SYSTEM Il Materiais Fornecidos VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 Garrafas de Cultura VersaTREK Myco 7111 42 VersaTREK Myco GS 7112 42 VersaTREK Connectors 7150 44 Materiais Necess rios mas Nao Fornecidos Agua esterilizada destilada ou desionizada Autoclave Middlebrook 7H10 ou outro meio micobacteriano com base de agar e ovo para verifica es da pureza Incubador deCO 37 C Placas de Petri esterilizadas Seringas de tuberculina esterilizadas com agulhas fixas permanentes Desinfectante Micobacteriano p ex Amphly OMNI etc Tamp es de alcool Misturador vortex Camara de fluxo laminar Microsc pio Materiais para l minas de colora o Microrganismo de Controlo de Qualidade M tuberculosis ATCC 25618 Inocula o de Garrafas de Cultura VersaTREK Myco para Teste de Sensibilidade Myco 1 Identifique com uma etiqueta cada garr
24. acas agar Middlebrook Mais de uma esp cie de micobact ria est presente REPETIR TESTE para verificar resultados notificar m dico que os resultados finais est o pendentes O limite superior de 10 dias de tempo de detec o para o controlo de crescimento foi estabelecido por dados internos e cl nicos Assegure se de que verifica os resultados da subcultura no meio s lido para agar micobacterias para se certificar que apenas uma esp cie de micobact ria esteve presente especialmente no caso de um resultado resistente TABELA 3 Exemplos de Resultados para C lculo de Susceptibilidade de estirpes de M tuberculosis a VersaTREK Myco Streptomycin Paciente A B C D E F G Controlo estreptomicina 2 4 5 9 10 10 12 positivo dias Medicamento estreptomicina 5 2 6 7 14 13 10 positivo dias Controlo do Controlo do Resultado IPS mento Invalido E Resistente Resistente Susceptivel Resistente crescimento invalido repetir ensaio invalido repetir ensaio repetir ensaio Todos os resultados resistentes devem ser confirmados por um m todo alternativo antes do relat rio LIMITA ES 1 O teste de sensibilidade VersaTREK Myco Streptomycin n o interpreta o grau de sensibilidade do isolado a testar um teste qualitativo 2 O teste de sensibilidade VersaTREK Myco Streptomycin apenas pode ser efectuado em aparelhos VTI ou ESP O teste n o pode ser efectuado manualmente 3 Uti
25. afa de cultura VersaTREK Myco com a informa o de identifica o Para o teste de estreptomicina ser o utilizadas 3 garrafas por teste 2 Desinfecte as tampas das garrafas de cultura com lcool 3 Adicione de forma ass ptica 1 0 ml de VersaTREK Myco GS a cada garrafa de cultura injectando atrav s do septo com uma agulha e seringa 4 Re hidrate VersaTREK Myco Streptomycin liofilizado adicionando assepticamente 25 ml de gua esterilizada destilada ou desionizada O que resultar numa concentra o de antibi tico de 120 ug ml 5 Remova assepticamente 5 ml da solu o e transfira para um recipiente esterilizado Adicione 15 ml de gua esterilizada destilada ou desionizada O que resultar numa concentra o de antibi tico de 30 ug ml 31 10 11 12 13 14 15 Adicione de forma ass ptica 1 0 ml da concentra o de antibi tico de 120 ug ml a uma garrafa de cultura injectando atrav s do septo com uma agulha e seringa A concentra o de estreptomicina final na garrafa de cultura Myco de 8 ug ml Adicione de forma ass ptica 1 0 ml da concentra o de antibi tico de 30 ug ml a uma segunda garrafa de cultura injectando atrav s do septo com uma agulha e seringa A concentra o de estreptomicina final na garrafa de cultura Myco de 2 ug ml TABELA 1 Prepara o de Medicamento Anti Tuberculose Quantidade Concentra o do I Concentracao Concentracao a Antibi ti
26. al crecimiento e incrementan el rea de superficie expuesta al ox geno del espacio de aire La tecnolog a del sistema VTI ESP se basa en la detecci n de cambios en la presi n del espacio de aire dentro de un frasco cerrado causados por el crecimiento microbiano Se ha desarrollado un algoritmo especial para la detecci n de microbacterias de crecimiento muy lento En el sistema VTI ESP el f rmaco antituberculoso estreptomicina se puede inyectar en frascos VersaTREK Myco complementados con VersaTREK Myco GS Un in culo de un cultivo confirmado de M tuberculosis desarrollado a partir de un frasco de cultivo se a ade a un frasco de control sin f rmacos usado como control positivo y a un frasco de prueba que contiene estreptomicina Si el organismo es susceptible al f rmaco se detectar un crecimiento retrasado o no microbiano Si el organismo es resistente a la estreptomicina se detectar un crecimiento microbiano con la generaci n de una curva que muestra una excursi n descendiente a partir de la l nea base El tiempo para detectar el frasco sin f rmaco determina la finalizaci n de la prueba El f rmaco usado en este sistema es estreptomicina que se hidrata con agua est ril hasta conseguir una concentraci n cr tica espec fica Las concentraciones de f rmacos espec ficas para este f rmaco son 2 ug ml y 8 ug ml La detecci n de crecimiento bacteriano en el sistema VTI ESP se basa en la medida sensible de la producci n o del cons
27. ar que s lo hab a una especie de micobacteria especialmente en el caso de un resultado resistente TABLA 3 Ejemplos de resultados para el c lculo de susceptibilidad de las cepas de M tuberculosis a VersaTREK Myco Streptomycin Positivo d as F rmaco de Paciente A B C D E F G Control de estreptomicina 2 4 5 9 10 10 12 estreptomicina 5 2 6 7 14 13 10 Positivo d as Control de Control de crecimiento Inv lido crecimiento Resultado inv lido Repetir Resistente Resistente Susceptible Resistente inv lido Repetir prueba Repetir prueba prueba Todos los resultados de resistencia deber n ser confirmados mediante un m todo alternativo antes de ser informados LIMITACIONES 1 La prueba de susceptibilidad VersaTREK Myco Streptomycin no interpreta el grado de susceptibilidad del aislamiento que se analiza Es una prueba cualitativa 2 Laprueba de susceptibilidad VersaTREK Myco Streptomycin s lo se puede realizar con los instrumentos VTI o ESP La prueba no se puede realizar manualmente 3 Utilice nicamente cultivos puros de M tuberculosis El usuario debe confirmar la pureza del cultivo especialmente si el resultado es resistente Los cultivos que contengan especies m ltiples de micobacterias pueden dar resultados err neos 4 Sinose prepara el aislamiento seg n las recomendaciones del fabricante pueden generarse resultados err neos 13 5 Sino se rehidrata la estrept
28. artir de um meio liquido ou s lido cultivado em Middlebrook 7H9 do isolado de teste Injecte de forma ass ptica 0 5 ml desta dilui o numa garrafa de cultura VersaTREK Myco fornecido com 1 0 ml de VersaTREK Myco GS Um VersaTREK Connector esterilizado colocado na garrafa e a garrafa incubada no aparelho at ser observado um sinal positivo aprox 10 CFU ml Depois de atingido um sinal positivo o VersaTREK Connector removido e a garrafa agitada durante 1 a 2 minutos O in culo da garrafa de processamento deve ser utilizado dentro de 72 horas do sinal de aparelho positivo Efectue uma dilui o 1 10 d suspens o McFarland 1 de meio s lido ou da garrafa para processamento Myco em agua esterilizada salina ou destilada in culo para teste Adicione 0 5 ml a cada caldo de controlo e de teste Limpe as garrafas de cultura e as tampas com um desinfectante Micobactericida Homogeneize todas as garrafas invertendo varias vezes Remova o selo do fundo de um VersaTREK Connector Prima a extremidade da agulha do VersaTREK Connector atrav s da tampa da garrafa de cultura NOTA N o inverta a garrafa de cultura enquanto o conector est na garrafa O fluido na agulha pode interferir com as leituras de press o d garrafa Coloque a garrafa de cultura com o VersaTREK Connector no aparelho Consulte o Manual do Utilizador do Sistema VersaTREK ESP para detalhes sobre a introdu o de garrafas Sugest o de carregamento Se o n mero de ace
29. based on the sensitive measurement of gas production and or gas consumption within the headspace of a seeded culture bottle This information is used to generate a pressure curve for each bottle An internal algorithm analyzes the information to determine the status of each test sample When a set of conditions is met a bottle is flagged as positive There are approximately 10 CFU ml of Mycobacteria at the time of detection PRINCIPLES OF THE PROCEDURE Susceptibility testing of M tuberculosis specimens is performed with the VTI ESP System by inoculating a suspension of organisms into VersaTREK Myco broth bottles that have been supplemented with VersaTREK Myco GS and VersaTREK Myco Streptomycin A VersaTREK Connector is attached to each bottle to establish a closed system for monitoring the bottle with the VTI ESP instrument A hydrophobic membrane in the VersaTREK Connector prevents aerosolization Isolate information is entered into the system computer and the bottles are placed in the instrument for incubation at 35 37 C under stationary conditions VTI ESP System detects Mycobacterial growth by continuously monitoring every 24 minutes the rate of consumption of oxygen within the headspace of the culture bottle and reports that growth response with a positive signal At the end of the specified incubation period as determined by the drug free control bottle for each isolate that is tested the isolate is manually determined to be susceptible
30. cen anormales contacte con el soporte t cnico de TREK en el 1 216 351 8735 12 TABLA 2 observaciones y evaluaci n de la prueba Frasco de la z o prueba Resultados obtenidos Posible causa Acci n Control de Posible contaminante o in culo Rae lt 3 dias desde la inoculaci n demasiado fuerte compruebe la REPETIR PRUEBA crecimiento P pureza de las placas y gr ficas Control de gt 10 d as desde la inoculaci n Organismo o viabl sin culo REPETIR PRUEBA crecimiento demasiado d bil Control de Crecimiento detectado entre 3 y 10 Prueba valida eval e los crecimiento d as despu s de la inoculaci n frascos con farmaco No se observan contaminantes al menos en 18 h sobre una placa de Prueba valida agar sangre Se observan organismos no AFB El cultivo no era puro REPETIR PRUEBA Control de pureza No se observan variaciones coloniales en las placas de agar Prueba valida sin acci n Middlebrook REPETIR PRUEBA para nr E E verificar los resultados Se observa una variaci n colonial Hay m s de una especie de pes informe al m dico de que los en las placas de agar Middlebrook micobacteria presente B resultados finales est n pendientes El indice superior de 10 dias de tiempo de detecci n para el control de crecimiento se ha establecido a partir de datos cl nicos e internos Aseg rese de comprobar los resultados de los subcultivos con el agar micobacteriano para verific
31. centrazione specifica del farmaco un isolato che presente nello stesso flacone del farmaco non abbia evidenziato segnali di crescita entro il periodo di rilevamento di tre giorni stabilito per il controllo senza farmaco Non si dovr invece tener conto di una crescita che dovesse verificarsi dopo tre giorni arrotondati al numero intero pi vicino nel flacone del controllo di crescita con segnale positivo in quanto tale crescita non viene considerata un indice di resistenza Per l arrotondamento al numero intero pi vicino procedere nel modo seguente se il tempo lt XX 49 si arrotonda per difetto se invece gt XX 50 si arrotonda per eccesso Resistente il tempo di rilevazione del flacone di farmaco tre giorni arrotondato al numero intero pi vicino del tempo necessario per rilevare il flacone di controllo che non contiene farmaco arrotondato al numero intero pi vicino Per l arrotondamento al numero intero pi vicino procedere nel modo seguente se il tempo lt XX 49 si arrotonda per difetto se invece gt XX 50 si arrotonda per eccesso NOTA e Nessun flacone deve avere contrassegno positivo prima del terzo giorno In tal caso i flaconi sono contaminati oppure l inoculo troppo grande necessario ripetere il test e Il segnale del flacone del test pu comparire prima di quello del flacone di controllo consultare la Tabella 3 esempio D Prima della registrazione dei dati tutti i risultati di resistenza dovranno
32. cillo M tuberculosis ATCC 25618 sensibile alla streptomicina Nella Tabella 4 sono riportati i risultati previsti Il controllo qualit dovr essere effettuato una volta alla settimana in concomitanza con il test di sensibilit Il verificarsi dei risultati previsti entro 4 13 giorni indicher che i reagenti sono pronti per l uso nei test sugli isolati del paziente Se i risultati non rientrano nella norma non riportarli nel referto del paziente Ripetere il controllo qualit esaminando tutti gli isolati del paziente interessati dal risultato anomalo del controllo qualit Se neanche la ripetizione del controllo qualit dovesse dare l esito previsto non includere i dati nel referto del paziente e non utilizzare il prodotto prima di aver contattato l Assistenza tecnica 1 Aggiungere 1 ml di VersaTREK Myco GS ai flaconi di coltura VersaTREK Myco 2 Reidratare il prodotto VersaTREK Myco Streptomycin liofilizzato con acqua sterile e preparare la diluizione da 5 ml a 15 ml come descritto nella sezione Inoculazione dei flaconi di coltura VersaTREK Myco per il test di sensibilit Myco 3 Aggiungere al flacone VersaTREK Myco 1 0 ml della concentrazione del farmaco pari a 120 ug ml La concentrazione finale di streptomicina presente nel flacone di coltura Myco sar di 8 ug ml 4 Aggiungere 1 0 ml della concentrazione del farmaco pari a 30 ug ml a un secondo flacone VersaTREK Myco La concentrazione finale di streptomicina presente nel flac
33. co GS a cada frasco de cultivo inyectandolo a trav s del tabique con una aguja y una jeringa 10 4 Rehidrate la estreptomicina liofilizada VersaTREK Myco a adiendo as pticamente 25 ml de agua est ril destilada o desionizada Se produce una concentraci n de f rmaco de 120 ug ml 5 Extraiga as pticamente 5 ml de la soluci n y transfi ralos a un envase est ril A ada 15 ml de agua est ril destilada o desionizada Se produce una concentraci n de f rmaco de 30 ug ml 6 A ada as pticamente 1 0 ml de la concentraci n de 120 ug ml a un frasco de cultivo inyectandolo a trav s del tabique con una aguja y una jeringa La concentraci n final de estreptomicina en el frasco de cultivo Myco es 8 ug ml 7 Afiada as pticamente 1 0 ml de la concentraci n de 30 ug ml a un frasco de cultivo inyect ndolo a trav s del tabique con una aguja y una jeringa La concentraci n final de estreptomicina en el frasco de cultivo Myco es 2 ug ml TABLA 1 preparaci n del f rmaco antituberculoso F rmaco y Cantidad de Concentraci n Diluciones Concentraci n N mero de concentraci n final en diluyente despu s de la adicionales para inyectar pruebas por los frascos a adida a la rehidrataci n en los frascos de vial VersaTREK Myco estreptomicin la prueba a liofilizada Estreptomicina 8 0 25 ml 120 ug ml No 120 ug ml 20 ug ml Estreptomicina 2 0 la 5 ml de 30 ug ml 20 ug ml f rmaco diluido m s 15 ml de agua 10 1
34. co e Final nas de DIES Apos Re Dilui es a Injectar DINO SE Adicionado a 285 f Testes por Garrafas VersaTREK Estreptomici hidratacao Adicionais nas Garrafas de G f Myco streptomicin Teste arrafa a Liofilizada Estreptomicina 9 0 25 ml 120 ug ml N o 120 g m 20 ug ml No US 5 ml de ARIA antibi tico 30 pg ml 20 Hg diluido mais Para o controlo isento de antibi tico adicione 1 0 ml de agua esterilizada em vez de antibi tico Podem ser efectuados vinte testes de uma s garrafa O in culo de uma amostra para teste de sensibilidade deve ser confirmada como cultura pura de M tuberculosis antes do teste de estreptomicina e preparado como segue a Suspens o equivalente a McFarland Os isolados puros que n o excedam 4 a 5 semanas cultivados num meio s lido micobacteriano apropriado Middlebrook 7H10 Middlebrook 7H11 geloses inclinadas Lowenstein Jensen s o retirados utilizando uma ansa esterilizada e colocados num tubo contendo aproximadamente 9 a 10 ml de gua esterilizada destilada ou desionizada e esferas de vidro O tubo agitado num misturador v rtex e deixado a repousar durante 15 minutos S o removidos aproximadamente 5 ml da camada superior colocados num tubo de ensaio esterilizado e ajustados ao equivalente de 1 na escala McFarland aproximadamente 3 0 x 10 CFU ml utilizando agua esterilizada destilada ou desionizada b Garrafa para Processamento VersaTREK Myco Prepare o equivalente a 1 McFarland a p
35. contaminant whereas control bottles that do not signal within 10 days after being inoculated may be indicative or improper bottle preparation For either situation the specimen should be retested Always review the isolate s graph before reporting Refer to the Operator s Manual for graph analysis If graphs for tests that have signaled positive look abnormal contact TREK Technical Support at 1 800 642 7029 or 1 216 351 8735 TABLE 2 Test Observations and Test Assessment Test bottle Result obtained Possible cause Action Possible contaminant or too heavy Growth control lt 3 days from inoculation inoculum check purity plates and REPEAT TEST graphs Growth control gt 10 days from inoculation Non viable organism too light REPEAT TEST inoculum Growth control Growth detected between 3 and 10 days after inoculation Valid test evaluate drug bottles Purity check No contaminants observed by at least 18 h on Blood Agar Valid test plate Non AFB organisms observed Culture was not pure REPEAT TEST No colonial variation observed on Middlebrook agar plates Valid test No action Colonial variation observed on Middlebrook agar plates More than one species of mycobacterium is present REPEAT TEST to verify results notify physician that final results are pending The upper range of 10 days detection time for the growth control was established by clinical and in house data
36. da isolado testado o isolado manualmente determinado como sens vel ou resistente ao antibi tico REAGENTES O VersaTREK Myco Streptomycin cont m uma garrafa de estreptomicina liofilizada A garrafa deve ser re hidratada com 25 ml de gua esterilizada destilada ou desionizada F RMULA NA RE HIDRATA O H20 gua Destilada 25 ml STR Estreptomicina 0 012 peso volume SA Agente de Solubiliza o 1 25 peso volume Ajustada para corresponder aos crit rios de controlo de qualidade 30 PRECAU ES 1 Para utiliza o em diagn stico in vitro 2 Consulte as Fichas de Seguran a do Material para uma informa o completa sobre os riscos 3 AVISO AMOSTRA DE TESTE POTENCIALMENTE INFECCIOSA Siga as Precau es Universais e a pol tica institucional de manipula o e elimina o de agentes infecciosos 4 No trabalho com culturas de M tuberculosis recomendam se as pr ticas equipamento de conten o e instala es de N vel 3 de Bioseguran a 5 O VersaTREK Connector cont m uma agulha afiada encastrada e esterilizada aquando da remo o do selo mas potencialmente contaminada no final da sua utiliza o 6 Inspeccione visualmente todas as garrafas no que respeita a contamina o fissuras ou outros sinais de deteriora o N o utilize garrafas que se apresentem turvas ou com fissuras 7 Utilize apenas seringas com bloqueio de agulha 8 Proceda autoclavagem de todas as garrafas VersaTREK Myco antes d
37. dad in vitro de Mycobacterium tuberculosis desde el cultivo hasta la estreptomicina VersaTREK Myco Streptomycin se utiliza junto con VersaTREK Automated Microbial Detection System VTI y ESP Culture System II ESP RESUMEN Y EXPLICACION Diagnosticar rapidamente la tuberculosis es importante para iniciar un tratamiento farmacol gico adecuado y establecer las medidas para prevenir la propagaci n de esta enfermedad altamente contagiosa El retraso en el tratamiento especialmente de las cepas de M tuberculosis resistentes a multiples farmacos MDR TB puede conllevar el fracaso de ste y la muerte del paciente Para tratar estos casos se requiere que los microbi logos cl nicos utilicen las pruebas de diagn stico m s sensibles y r pidas que proporcionen resultados fiables Expertos del CDC han hecho varias recomendaciones respecto a las pruebas micobacterianas incluido el uso de medios l quidos y s lidos para cultivos micobacterianos En las pruebas de susceptibilidad de estreptomicina de M tuberculosis el sistema VTI ESP combina un medio de cultivo l quido VersaTREK Myco Broth un suplemento de crecimiento VersaTREK Myco GS y concentraciones espec ficas de estreptomicina con un sistema de detecci n que incuba autom ticamente y monitoriza continuamente los cultivos inoculados con aislamientos de M tuberculosis provinentes de diversas muestras Las esponjas de los frascos de VersaTREK Myco proporcionan una matriz de soporte
38. do espa o livre A tecnologia do Sistema VTI ESP baseada na detec o das altera es de press o do espa o livre numa garrafa selada devido a crescimento microbiol gico Foi desenvolvido um algoritmo especial para detec o de micobact rias de crescimento lento Com o Sistema VTI ESP o antibi tico anti tuberculose estreptomicina pode ser injectado nas garrafas VersaTREK Myco suplementadas com VersaTREK Myco GS Um in culo de uma cultura confirmada de M tuberculosis provenienteo de uma garrafa para processamento adicionado a uma garrafa de controlo isento de antibi ticos utilizada como controlo positivo e a uma garrafa de teste que contenha estreptomicina Se o microrganismo for sens vel ao antibi tico n o ser detectado crescimento microbiol gico ou ser detectado crescimento retardado Se o microrganismo for resistente estreptomicina o crescimento microbiol gico ser detectado pelo aparecimento de uma curva que ir apresentar uma curva descendente relativamente linha de base O tempo de detec o da garrafa isenta de antibi tico determina quando um teste est conclu do O antibi tico utilizado neste sistema a estreptomicina que hidratada com gua esterilizada a uma concentra o cr tica espec fica As concentra es de antibi tico espec ficas para este antibi tico s o 2 ug ml e 8 ug ml A detec o de crescimento microbiol gico no Sistema VTI ESP baseia se na medi o sens vel da produ o de g
39. e M tuberculosis provenant d un flacon ensemenc est ajout a un flacon de contr le positif et un flacon contenant de la streptomycine Si l organisme est sensible l antibiotique aucune croissance ne sera d tect e ou alors retard e Si l organisme est r sistant la streptomycine une croissance microbienne sera d tect e par la g n ration d une courbe allant vers le bas partir de la ligne de base Le temps de d tection du flacon sans antibiotique d termine quand le test est termin L antibiotique utilis dans ce syst me est la streptomycine qui est hydrat e avec de l eau st rile une concentration critique sp cifique Ces concentrations sp cifiques sont 2ug ml et 8ug ml La d tection de la croissance microbienne par le syst me VTI ESP est bas e sur la mesure sensible de production de gaz et ou la consommation de gaz dans l espace de t te du flacon ensemenc e de culture Cette information est utilis e pour produire une courbe de pression pour chaque flacon Un logarithme interne analyse les informations pour d terminer le statut de chaque chantillon d essai Quand un ensemble de conditions est rencontr un flacon est signal positif Il y a environ 10 cellules souches ml de Mycobact ries au moment de la d tection PRINCIPE Le test de la sensibilit des sp cimens de M tuberculosis est ex cute avec le syst me VTI ESP en inoculant une suspension d organismes dans des flacons de bouillon VersaT
40. e la sefial positiva se extrae el VersaTREK Connector y se agita el frasco durante 1 6 2 minutos El in culo del frasco de cultivo debe utilizarse durante las 72 horas posteriores a la se al positiva Realice una diluci n 1 10 del McFarland n 1 de agar o del frasco de cultivo VersaTREK Myco en sal o agua destilada est ril in culo para la prueba Afiada 0 5 ml a cada caldo de control y de prueba Limpie los frascos de cultivo y los tapones con un desinfectante micobactericida Mezcle todos los frascos invirti ndolos varias veces Quite el sello de la parte inferior del VersaTREK Connector Presione el final de la aguja del VersaTREK Connector a trav s del tap n del frasco de cultivo AVISO no invierta el cultivo mientras el VersaTREK Connector est encima El fluido de la aguja puede interferir con las lecturas de presi n del frasco Coloque el frasco de cultivo con el VersaTREK Connector en el instrumento Para obtener mas informaci n sobre el acceso al frasco consulte el manual t cnico del sistema VersaTREK ESP Sugerencia de carga si el n mero de muestra es 123 numere los frascos de la prueba de estreptomicina con n meros como 123CP para el control positivo y 12352 y 12388 para los caldos de prueba de estreptomicina De esta manera todos los frascos asociados con este numero de muestra podran buscarse y ser localizadas como grupo 11 15 Un m todo alternativo para a adir reactivos e in culos a los frascos de cu
41. eiro mais pr ximo ap s a garrafa de controlo de crescimento ter dado positiva n o deve ser tido em conta como indica o de resist ncia Arredondar ao n mero inteiro mais aproximado se tempo lt XX 49 arredondamento por defeito e se tempo 2XX 50 arredondamento por excesso 4 Resistente O tempo de detec o de garrafa de medicamento igual a tr s dias arredondado para o n mero inteiro mais aproximado do tempo de detec o de garrafa de controlo isento de medicamentos arredondado para o n mero inteiro mais aproximado Arredondar ao n mero inteiro mais aproximado se tempo lt XX 49 arredondamento por defeito e se tempo 2XX 50 arredondamento por excesso NOTA e Nenhum garrafa deve ser assinalado positivamente antes do terceiro dia As garrafas assinalados antes de decorridos tr s dias estar o contaminados ou o inoculo demasiado elevado O ensaio deve ser repetido e Uma garraf a de ensaio pode dar sinal antes de garrafa de controlo consultar a tabela 3 exemplo D Todos os resultados resistentes devem ser confirmados por um m todo alternativo antes do relat rio As garrafas que assinalem positivo devem ser coradas com corante bacilos cido lcool resistente AFB e subcultivadas numa placa de gelose Middlebrook 7H10 ou 7H11 bem como numa placa de gelose n o selectiva p ex Agar Sangue certificando se da pureza da amostra As garrafas de controlo de crescimento que d em positivo em menos de 2 5 dias pod
42. em indicar a presen a de contaminante n o micobacteriano enquanto que as garrafas de controlo que n o d em positivo dentro de 10 dias ap s terem sido inoculadas podem ser indicativas de prepara o da garrafa indevida Em qualquer situa o a amostra deve ser novamente testada Reveja SEMPRE o gr fico do isolado antes do relat rio Consulte o Manual do Utilizador para an lise de gr ficos Se os gr ficos para testes que tiverem dado sinal positivo n o parecem normais contacte o Apoio T cnico da TREK atrav s do 1 216 351 8735 33 TABELA 2 Observa es de Teste e Avalia o de Teste crescimento lt 3 dias da inocula o demasiado denso verificar placas e gr ficos de pureza Garrafa de A Teste Resultado obtido Causa possivel Ac o Controlo de Contaminante possivel ou in culo REPETIR TESTE crescimento 10 dias ap s inocula o Controlo de A gt 10 dias da inoculac o Microrganismo n o vi vel in culo REPETIR TESTE crescimento demasiado leve Controlo de Crescimento detectado entre 3 e Teste v lido avaliar garrafas de antibi tico Verificac o de pureza N o se observou contaminantes durante pelo menos 18 horas na placa Agar Sangue Teste v lido Organismos n o AFB observados Cultura n o era pura REPETIR TESTE Variac o de col nia n o observada em placas agar Middlebrook Teste v lido Sem ac o Variac o de col nia observada em pl
43. essere confermati da un metodo alternativo I flaconi che evidenziano segnali positivi dovranno essere colorati come bacilli acidoresistenti AFB e posti in sottocoltura sia in una piastra con agar Middlebrook 7H10 o 7H11 che in una piastra con agar non selettivo ad es agar sangue per assicurare la purezza del campione flaconi di controllo della crescita che presentano un segnale positivo in meno di 2 5 giorni possono indicare la presenza di un contaminante non micobatterico mentre i flaconi di controllo che non presentano un tale segnale entro 10 giorni dall inoculazione potrebbero essere indicativi di una preparazione non corretta del flacone Per entrambe le situazioni necessario sottoporre il campione a un nuovo test Riesaminare sempre i grafici degli isolati prima di registrare i dati Per l analisi dei grafici consultare il Manuale dell operatore Se i grafici dei test con segnali positivi dovessero risultare anormali contattare l Assistenza tecnica TREK al numero 1 216 351 8735 19 TABELLA 2 Osservazioni e valutazioni dei test Flacone del test Risultato ottenuto Possibile causa Azione Possibile presenza di contaminante colonie osservata sulle piastre con agar Middlebrook Controllo di lt 3 giorni dall inoculazione o inoculo troppo pesante RIPETERE IL TEST crescita controllare le piastre e i grafici di purezza Controllo di gt 10 giorni dall inoculazione Microrganismo non vitale o inoc
44. g ml 103 100 5 83 Tabla 6 Diez cepas clinicas 30 pruebas y 30 cepas CDC 60 pruebas de M tuberculosis se analizaron en dos o tres lugares con 2 concentraciones de estreptomicina Los datos estan representados como numero total de puntos de datos analizados Farmaco MAP VersaTREK ESP Culture System Il Cepas susceptibles Cepas resistentes iA o o Concentraci n N S N R a dati va Acuerdo Esa Acuerdo Estreptomicina 2 Hg ml 72 18 2 ug ml 72 100 18 100 10 ug ml 77 13 8 ug ml 77 100 13 100 RIESGOS ESPEC FICOS Xn Nocivo R22 Nocivo por ingesti n R61 Posible riesgo de da o a los nonatos S37 Utilice los guantes apropiados S53 Evite la exposici n y procure disponer de las instrucciones especiales antes de su utilizaci n BIBLIOGRAFIA pg 7 Para obtener informacion adicional llame al Servicio de Asistencia T cnica de TREK Diagnostic Systems al numero 1 216 351 8735 15 Italiano VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 USO PREVISTO Il test VersaTREK Myco Streptomycin una rapida procedura qualitativa che consente di verificare in vitro la sensibilit delle colture di Mycobacterium tuberculosis alla streptomicina Il test VersaTREK Myco Streptomycin viene utilizzato con i sistemi VersaTREK Automated Microbial Detection System VTI ed ESP Culture System Il ESP SOMMARIO E SPIEGAZIONE Una diagnosi tempestiva della tubercolosi estrema
45. i a 10 ug ml di streptomicina e 14 ceppi a bassa resistenza resistenti a una concentrazione di 2 ug ml di streptomicina Il test VersaTREK Streptomycin ha rilevato 5 ceppi ad alta resistenza e 11 a bassa resistenza Il test iniziale 21 stato effettuato con una sola concentrazione 8 ug ml di streptomicina che si rivelata incoerente nel rilevare ceppi a bassa resistenza alla streptomicina stata aggiunta al test un ulteriore concentrazione di 2 ug ml che stata esaminata con 14 ceppi clinici di M tuberculosis e 30 ceppi CDC di prova in tre siti Quest ultimo test ha evidenziato una buona correlazione nel rilevamento di una bassa resistenza alla streptomicina CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Tabella 5 Risultati dello studio clinico con VersaTREK ESP Culture System Il rispetto al metodo MAP Modified Agar Proportion Farmaco VersaTREK ESP Culture System Il MAP E TT MES n Ceppi sensibili Ceppi resistenti i O O Concentrazione S R Concentrazione N conferme h N conferme u equivalente conferme conferme Streptomicina 2 ug ml 95 14 2 Hg ml 95 100 11 79 10 ug ml 103 6 8 ug ml 103 100 5 83 Tabella 6 Dieci ceppi clinici 30 test e 30 ceppi CDC di prova 60 test di M tuberculosis esaminati in due o tre siti con 2 concentrazioni di streptomicina dati sono rappresentati come numero totale dei punti dati esaminati Farmaco VersaTREK ESP Culture System Il MAP
46. ida ripetere il test non valida ripetere il test ripetere il test Prima della registrazione dei dati tutti i risultati di resistenza dovranno essere confermati da un metodo alternativo LIMITAZIONI 1 Il test di sensibilit VersaTREK Myco Streptomycin non indica il grado di sensibilit dell isolato esaminato ma esclusivamente un test qualitativo 2 Il test di sensibilit VersaTREK Myco Streptomycin pu essere eseguito unicamente sugli strumenti VTI ed ESP Non possibile effettuare il test manualmente 20 3 Utilizzare esclusivamente colture pure di M tuberculosis L utente dovr confermare la purezza delle colture specialmente se i risultati indicano resistenza Le colture che contengono pi specie di micobatteri potrebbero fornire risultati errati 4 Una preparazione degli isolati non conforme alle raccomandazioni del produttore potrebbe determinare risultati imprecisi 5 La mancata reidratazione della streptomicina con il corretto volume di acqua sterile potrebbe fornire risultati imprecisi 6 importante miscelare accuratamente i flaconi inoculati Una miscelazione inadeguata potrebbe determinare risultati di falsa resistenza 7 Il mancato utilizzo dell integratore di crescita VersaTREK Myco GS potrebbe fornire risultati di falsa sensibilit CONTROLLO QUALIT Un nuovo lotto o stock di VersaTREK Myco Streptomycin dovr essere sottoposto a test con il microrganismo del controllo qualit il ba
47. iddlebrook 7H11 Lowenstein Jensen slants are scraped using a sterile loop and placed in a tube containing approximately 9 to 10 ml sterile distilled or deionized water and glass beads The tube is vortexed and allowed to settle for 15 minutes Approximately 5 ml of the top layer is removed placed in a sterile test tube and adjusted to a No 1 McFarland equivalent approximately 3 0 x 10 CFU ml using sterile distilled or deionized water b VersaTREK Myco seed bottle Prepare a No 1 McFarland equivalent from an agar or liquid source growth in Middlebrook 7H9 of the test isolate Aseptically inject 0 5 ml of this dilution into a VersaTREK Myco culture bottle supplemented with 1 0 ml VersaTREK Myco GS A sterile VersaTREK Connector is placed on the bottle and the bottle is incubated in the instrument until a positive signal is observed approx 10 CFU ml Once a positive signal is reached the VersaTREK Connector is removed and the bottle is vortexed for 1 2 minutes The seed bottle inoculum must be used within 72 hours of the positive instrument signal Perform a 1 10 dilution of the McFarland No 1 from agar or the Myco seed bottle in sterile saline or distilled water inoculum for test Add 0 5 ml to each control and test broth Wipe the culture bottles and stoppers with a Mycobactericidal disinfectant Mix all bottles by inverting several times Remove the seal from the bottom of a VersaTREK Connector Press the needle end of the VersaTRE
48. ific concentrations of streptomycin with a detection system that automatically incubates and continuously monitors culture inoculated with isolates of M tuberculosis from a variety of specimen sources The sponges in the VersaTREK Myco bottles provide a growth support matrix and increase the surface area exposed to headspace oxygen The technology of the VTI ESP System is based on the detection of headspace pressure changes within a sealed bottle due to microbial growth A special algorithm has been developed for detection of very slow growing Mycobacteria With the VTI ESP System anti tuberculosis drug streptomycin can be injected into VersaTREK Myco bottles supplemented with VersaTREK Myco GS An inoculum of a confirmed culture of M tuberculosis grown from a seed bottle is added to a drug free control bottle used as a positive control and to a test bottle containing streptomycin If the organism is susceptible to the drug delayed or no microbial growth will be detected If the organism is resistant to streptomycin microbial growth will be detected by the generation of a curve exhibiting a downward excursion from the baseline The time to detection of drug free bottle determines when a test is complete The drug used in this system is streptomycin which is hydrated with sterile water to a specific critical concentration The specific drug concentrations for this drug are 2 ug ml and 8 ug ml The detection of microbial growth in the VTI ESP System is
49. il Manuale dell operatore del sistema VersaTREK ESP Indicazioni per un miglior caricamento se il numero d inventario del campione 123 si consiglia di assegnare ai flaconi del test della streptomicina dei numeri d inventario quali 123PC per il controllo positivo 12352 e 123S8 per i brodi di coltura della streptomicina In questo modo tutti i flaconi associati al numero d inventario del campione in esame potranno essere facilmente individuati e localizzati come appartenenti allo stesso gruppo Un metodo alternativo per aggiungere i reagenti e gli inoculi ai flaconi di coltura consiste nel rimuovere il tappo ed il coperchio ed effettuare le aggiunte utilizzando una pipetta sterile necessario chiudere attentamente sia il tappo che il coperchio 18 RISULTATI Per i test di sensibilit mediante VersaTREK ESP Culture System Il un isolato viene interpretato come sensibile o resistente a un determinato farmaco in base a quanto segue arrotondare tutti i tempi di rilevamento al giorno intero pi vicino 1 Una volta diventato positivo il flacone senza farmaco registrare il tempo di rilevamento riportato sul grafico del flacone del test Dopo altri tre giorni di incubazione arrotondati al numero intero pi vicino successivi al momento in cui il controllo senza farmaco ha evidenziato un segnale positivo ricercare e registrare i risultati dell isolato per gli altri flaconi del test Sensibile viene definito sensibile alla con
50. imbolos Simboli Symboles Simbolos GB Batch code ES C digo de lote LOT IT Codice del lotto FR Code du lot PT C digo do grupo GB Catalogue number ES N mero de cat logo IT Numero di catalogo FR R f rence du catalogue PT N mero de cat logo GB Manufacturer ES Fabricante IT Fabbricante FR Fabricant PT Fabricante r q GB Consult instructions for use ES Consulte las instrucciones de uso BH IT Consultare le istruzioni per l uso FR Consulter les instructions d utilisation z s PT Consulte instru es para o uso E a GB Temperature limitation ES L mite de temperatura IT Limiti di temperatura FR Limites de temp rature L A PT Limitag o de temperatura YYYYMMDD YYYYMM MM end of month GB Use By que mm fin del RE pts de caducidad Ana AMMGG AAAAMM MM fine ilizzare entro FR Date de p remption mese PT Uso Deft AAAAMMJJ AAAAMM MM fin perto de mois YYYYMMDD YYYYMM MM fim do m s GB In Vitro Diagnostic Medical Device ES Producto sanitario para diagn stico in vitro IVD IT Dispositivo medico diagnostico in vitro FR Dispositif m dical de diagnostic in vitro PT In Vitro Dispositivo M dico Diagn stico GB Contains sufficient for lt n gt tests ES Contenido suficiente para lt n gt ensayos IT Contenuto sufficiente per lt n gt saggi FR Contenu suffisant pour lt n gt tests PT Contem suficiente para lt n gt testes 37 Authorized Representative in the European Community
51. ion 8 ug ml of streptomycin which was found to be inconsistent in detecting low streptomycin resistant strains An additional concentration of 2 ug ml was added to the test and this was tested with 14 M tuberculosis clinical strains and 30 CDC challenge strains at three sites This testing showed good correlation in detecting low resistance to streptomycin PERFORMANCE CHARACTERISTICS Table 5 Clinical Study Results with the VersaTREK ESP Culture System Il Compared to the Modified Agar Proportion Method MAP Drug MAP VersaTREK ESP Culture System Il Susceptible Strains Resistant Strains Concentration S R CARO Agreement Agreement Agreement Agreement oncentration Streptomycin 2 ug ml 95 14 2 ug ml 95 100 11 79 10 ug ml 103 6 8 ug ml 103 100 5 83 Table 6 Ten Clinical 30 tests and 30 CDC Challenge Strains 60 tests of M tuberculosis tested at two or three sites with 2 concentrations of Streptomycin The data are represented as total number of data points tested Drug MAP VersaTREK ESP Culture System Il Susceptible Strains Resistant Strains Concentration S R ee Agreement Agreement Agreement Agreement oncentration Streptomycin 2 ug ml 72 18 2 ug ml 72 100 18 100 10 ug ml 77 13 8 ug ml 77 100 13 100 HAZARD INFORMATION Xn Harmful R22 Harmful if swallowed R61 May cause harm to the unborn child S37 Wear
52. le informazioni per determinare lo stato di ciascun campione del test Quando si verifica una specifica serie di condizioni il flacone in questione viene contrassegnato come positivo AI momento del rilevamento il numero di micobatteri di circa 10 CFU ml PRINCIPI DELLA PROCEDURA Il test di sensibilit del M tuberculosis viene effettuato con il sistema VTI ESP inoculando una sospensione di microrganismi nei flaconi per brodo di coltura VersaTREK Myco gi integrati con VersaTREK Myco GS e VersaTREK Myco Streptomycin A ciascun flacone viene collegato un connettore VersaTREK Connector in modo da configurare un sistema chiuso per il monitoraggio del flacone con lo strumento VTI ESP Una membrana idrofobica presente nel connettore VersaTREK Connector impedisce l aerosolizzazione Le informazioni sull isolato vengono immesse nel computer del sistema e i flaconi vengono collocati nello strumento per un incubazione a 35 37 C in condizioni stazionarie Il sistema VTI ESP rileva la crescita micobatterica monitorando continuamente ogni 24 minuti il tasso di consumo di ossigeno all interno dello spazio di testa del flacone di coltura Tale risposta di crescita viene indicata con un segnale positivo AI termine del periodo di incubazione previsto come determinato dal flacone di controllo senza farmaco per ciascun isolato esaminato l isolato viene contrassegnato manualmente come sensibile o resistente al farmaco REAGENTI VersaTREK Myco Strep
53. lize apenas culturas puras de M tuberculosis O utilizador deve confirmar a pureza da cultura especialmente se o resultado for resistente As culturas que contiverem m ltiplas esp cies de Micobact rias podem fornecer resultados errados 4 An o prepara o dos isolados de acordo com as recomenda es do fabricante pode levar a resultados imprecisos 5 An o re hidrata o de estreptomicina com o devido volume de gua esterilizada pode fornecer resultados imprecisos 34 6 A mistura homog nea de garrafas inoculadas importante A falta de homogeneiza o adequada pode levar a falsas resist ncias 7 A n o utiliza o do suplemento de crescimento VersaTREK Myco GS pode levar a falsas sensibilidades CONTROLO DE QUALIDADE Um novo n mero de lote ou carregamento de VersaTREK Myco Streptomycin deve ser testado com o microrganismo de controlo de qualidade de M tuberculosis ATCC 25618 sens vel estreptomicina Os resultados esperados s o apresentados na Tabela 4 O controlo de qualidade deve ser efectuado semanalmente quando o teste de sensibilidade for efectuado A observa o dos resultados esperados dentro de 4 a 13 dias indica que os reagentes est o prontos para utiliza o no teste de isolados do doente Se n o forem observados os resultados esperados n o d o relat rio dos resultados do doente Repita o controlo de qualidade e quaisquer isolados do doente afectados pela falha de controlo de qualidade inicial
54. ltivo es extraer la tapa y el tap n y realizar las adiciones usando una pipeta est ril Se requiere cerrar la tapa y el tap n con cuidado RESULTADOS Para la prueba de susceptibilidad con VersaTREK ESP Culture System II un aislamiento se interpreta como susceptible o resistente a un farmaco segun lo siguiente redondee los momentos de detecci n al dia m s cercano 1 despu s de que el frasco sin f rmaco haya dado positivo anote el momento de detecci n en la gr fica del frasco de prueba 2 Tres d as adicionales redondeados al n mero completo m s pr ximo de incubaci n despu s de que el control sin f rmaco haya dado positivo busque y anote los resultados de los otros frascos de la prueba para el aislamiento 3 Susceptible un aislamiento en un frasco con f rmaco que no ha dado se ales en el periodo de detecci n de tres d as del control sin f rmaco se considera susceptible a esa concentraci n de f rmaco El crecimiento despu s de tres d as redondeados al n mero completo m s pr ximo del frasco de control del crecimiento que da positivo no debe tenerse en cuenta porque no se considera un indicador de resistencia Para redondear hasta el n mero entero m s cercano si el tiempo es lt XX 49 se redondea a la baja y si el tiempo es gt XX 50 se redondea al alta 4 Resistente El tiempo de detecci n de la botella del f rmaco es de tres d as redondeado hasta el n mero entero m s cercano del tiempo de detecci
55. manualmente si el aislamiento es susceptible o resistente al farmaco REACTIVOS VersaTREK Myco Streptomycin contiene un vial de estreptomicina liofilizada El vial se tiene que rehidratar con 25 ml de agua est ril destilada o desionizada FORMULA DE REHIDRATACION H20 Agua procesada 25 ml STR Estreptomicina 0 012 w v SA Agente solubilizante 1 25 wiv Ajustada para reunir los criterios de funcionamiento PRECAUCIONES 1 Uso para diagn stico in vitro 2 Para obtener m s informaci n sobre el riesgo consulte las hojas de informaci n de seguridad 3 ATENCI N MUESTRA DE PRUEBA POTENCIALMENTE INFECCIOSA Siga las precauciones generales y la pol tica institucional al manipular y tratar agentes infecciosos 4 En el manejo de cultivos de M tuberculosis se recomiendan las pr cticas equipo de contenci n e instalaciones del nivel de Bioseguridad 3 5 VersaTREK Connector contiene una aguja afilada empotrada que es est ril al quitar el sello pero al acabar de utilizarla esta contaminada 6 Inspeccione visualmente todos los frascos por si est n contaminados o hay grietas u otras se ales de deterioro No utilice frascos que parezcan turbios o agrietados 7 Utilice nicamente jeringas con cierre para aguja 8 Esterilice todos los frascos VersaTREK Myco antes de utilizarlos ALMACENAMIENTO Almac nelos a 2 8 C Prot jalos de la luz Despu s de la rehidrataci n almac nelos a 2 8 C y utilicelos en 4 semanas o c
56. mente importante per l avvio di un adeguata terapia farmacologica e per l adozione di misure che prevengano la diffusione di una malattia cos contagiosa Un ritardo nel trattamento specialmente dei ceppi di M tuberculosis multifarmaco resistente MDR TB pu determinare un insuccesso terapeutico e compromettere persino la sopravvivenza del paziente Per risolvere questi problemi i microbiologi clinici vengono sollecitati a utilizzare i test diagnostici pi rapidi e sensibili che consentano di ottenere risultati veramente affidabili Negli Stati Uniti gli esperti del CDC Centers for Disease Control hanno formulato diverse raccomandazioni riguardo ai test micobatterici compreso l uso di terreni di coltura sia liquidi che solidi per i micobatteri Per il test di sensibilit del M tuberculosis alla streptomicina il sistema VTI ESP si basa su una combinazione tra un dispositivo di rilevamento automatico e un terreno di coltura liquido VersaTREK Myco Broth un integratore di crescita VersaTREK Myco GS e determinate concentrazioni di streptomicina Il sistema incuba e controlla continuamente le colture inoculate con isolati di M tuberculosis provenienti da svariati campioni sorgente Le spugne presenti nei flaconi VersaTREK Myco forniscono una matrice di supporto alla crescita e aumentano la superficie esposta all ossigeno dello spazio di testa La tecnologia del sistema VTI ESP si basa sul rilevamento delle variazioni di pressione dello spazio
57. n de la botella de control libre de f rmaco redondeado hasta el n mero entero m s cercano Para redondear hasta el n mero entero m s cercano si el tiempo es lt XX 49 se redondea a la baja y si el tiempo es gt XX 50 se redondea al alta NOTA e Ninguna botella deber marcar positiva antes del tercer d a Las botellas que marcan positivas antes de tres d as o est n contaminadas o bien el in culo es demasiado alto La prueba deber a ser repetida e Una botella puede se alizar antes que la botella de control ver el ejemplo D en la Tabla 3 Todos los resultados de resistencia deben confirmarse con un m todo alternativo antes de considerarlos definitivos Los frascos que den positivo deben te irse para AFB Acid Fast Bacilli y subcultivarse en una placa Middlebrook 7H10 6 7H11 agar as como en una placa agar no selectiva p ej agar sangre para asegurar la pureza de la muestra Los frascos de control del crecimiento que den se ales en menos de 2 5 d as pueden indicar la presencia de un contaminante no micobacteriano mientras que los frascos de control que no den se al en 10 d as despu s de ser inoculadas pueden ser indicio de una preparaci n incorrecta del frasco En ambos casos la muestra debe volver a analizarse Revise siempre la gr fica del aislamiento antes considerarla definitiva Si tiene dudas sobre los an lisis de gr ficas consulte el manual t cnico Si las gr ficas de las pruebas que han dado positivo pare
58. ne Nel test della streptomicina verranno utilizzati 3 flaconi per ciascun test Disinfettare i tappi del flacone di coltura con dell alcol Aggiungere asetticamente 1 0 ml di VersaTREK Myco GS a ciascun flacone di coltura iniettandolo attraverso il setto con un ago e una siringa Reidratare VersaTREK Myco Streptomycin liofilizzato aggiungendo asetticamente 25 ml di acqua distillata o deionizzata sterile Si otterr cos una concentrazione del farmaco pari a 120 ug ml Rimuovere asetticamente 5 ml della soluzione e trasferirli in un contenitore sterile Aggiungere 15 ml di acqua distillata o deionizzata sterile Si otterr cos una concentrazione del farmaco pari a 30 ug ml 17 10 11 12 13 14 15 Aggiungere asetticamente a ciascun flacone di coltura 1 0 ml della concentrazione del farmaco pari a 120 ug ml iniettando il farmaco attraverso il setto con un ago e una siringa La concentrazione finale di streptomicina presente nel flacone di coltura Myco sar di 8 ug ml Aggiungere asetticamente a un secondo flacone di coltura 1 0 ml della concentrazione del farmaco pari a 30 ug ml iniettando il farmaco attraverso il setto con un ago e una siringa La concentrazione finale di streptomicina presente nel flacone di coltura Myco sar di 2 ug ml TABELLA 1 Preparazione del farmaco antitubercolotico Quantit di Farmaco e a Concentrazione 7 concentrazione finale Gue Il dopo la Diluizioni CONTEA ga Numer
59. ne solution saline st rile ou d eau distill e inoculum pour le test Ajouter 0 5 ml chaque bouillon de contr le et de test Essuyer les flacons de cultures et leurs fermetures avec un d sinfectant Mycobact ricide Mixer tous les flacons en les retournant plusieurs fois 25 13 14 15 Enlever le joint du fond de VersaTREK Connector Appuyer sur le bout de l aiguille de Versa TREK connector a travers de la fermeture du flacon de culture NOTE ne pas retourner le flacon de culture quand le connecteur est attach sur le flacon Le fluide se trouvant dans l aiguille pourrait interf rer avec la lecture de la pression des flacons Placer le flacon de culture avec le VersaTREK connector dans l appareil Se r f rer au manuel d utilisation du syst me VersaTREK ESP pour les d tails des flacons entrer Suggestion de chargement si le num ro d acc s de l chantillon est lt 123 gt donner comme num ro d acc s du flacon test a la streptomycine 123PC pour le contr le positif et 12352 et 12358 pour les test de bouillon la streptomycine Dans ce cas tous les flacons associ s ce nombre d acc s sera capable d tre rechercher et situ comme une groupe Une m thode alternative pour ajouter des r actifs et inoculer les flacons de bouillon est d enlever le bouchon et la fermeture et faire les ajouts l aide d une pipette st rile Une fermeture attentionn e de la fermeture et du bouchon est exig e RE
60. o di in VersaTREK Myco aggiunto ala reidratazione aggiuntive ear Saco test per fiala streptomicina del test Bottles FEO liofilizzata Streptomicina 8 0 ug ml 25 ml 120 ug ml No 120 ug ml 20 Us 5 ml di Streptomicina 2 0 ug ml farmaco 30 ug ml 20 diluito pi 15 Nel flacone di controllo senza farmaco aggiungere 1 0 ml di acqua sterile al posto del farmaco Con ciascuna fiala possibile effettuare venti test Prima di effettuare il test di sensibilit alla streptomicina l inoculo di un campione da utilizzare per il test dovr essere confermato come coltura pura di M tuberculosis e preparato nel modo seguente a Sospensione cellulare equivalente McFarland Gli isolati puri non superiori a 4 5 settimane posti in coltura su un appropriato terreno agar micobatterico slant con Middlebrook 7H10 Middlebrook 7H11 o Lowenstein Jensen vengono prelevati tramite raschiamento con un ansa sterile e collocati in una provetta contenente circa 9 10 ml di acqua distillata o deionizzata sterile e microsfere di vetro La provetta viene centrifugata e lasciata depositare per 15 minuti Circa 5 ml dello strato superiore vengono rimossi collocati in una provetta sterile e regolati su un equivalente McFarland N 1 circa 3 0 x 10 CFU ml utilizzando acqua distillata o deionizzata sterile b Flacone di coltura VersaTREK Myco Preparare un equivalente McFarland N 1 da un terreno sorgente agar o liquido coltura in Middlebrook 7H9
61. omicina con la cantidad adecuada de agua est ril pueden generarse resultados err neos 6 Mezclar totalmente los frascos inoculados es importante Si no se mezclan adecuadamente pueden generarse resultados resistentes falsos 7 Sino se utiliza el suplemento VersaTREK Myco GS pueden generarse resultados susceptibles falsos CONTROL DE CALIDAD Un nuevo n mero o envio de lote de VersaTREK Myco Streptomycin debe analizarse con el organismo de control de calidad M tuberculosis ATCC 25618 susceptible a la estreptomicina Los resultados esperados se muestran en la tabla 4 El control de calidad debe realizarse una vez por semana cuando se lleven a cabo pruebas de susceptibilidad La observaci n de los resultados adecuados en 4 a 13 d as indican que los reactivos est n listos para usarse en las pruebas con aislamientos de pacientes Si no se observan resultados adecuados no informe de los resultados del paciente Repita el control de calidad y los aislamientos de pacientes afectados por el error inicial en el control de calidad Si la repetici n del control de calidad no sale como estaba previsto no informe de los resultados del paciente No utilice el producto hasta que haya contactado con el Servicio t cnico 1 A ada 1 ml de VersaTREK Myco GS a los frascos de cultivo VersaTREK Myco 2 Rehidrate el VersaTREK Myco Streptomycin liofilizado con agua est ril y prepare una diluci n de 5 ml a 15 ml seg n se describe en Inoculaci n de l
62. oncentration de 30ug ml Aseptiquement ajouter 1 0 ml de la solution a 120ug ml dans un flacon de culture en injectant a travers le septum a l aide d une seringue munie d une aiguille La concentration finale de la Streptomycine de la culture du flacon de Myco est de 8ug ml Aseptiquement ajouter 1 0 ml de la solution a 30ug ml dans un deuxi me flacon de culture en injectant a travers le septum l aide d une seringue munie d une aiguille La concentration finale de la Streptomycine de la culture du flacon de Myco est de 2ug ml TABLEAU 1 Pr paration de l antibiotique antituberculeux Antibiotique et Volume de diluant Concentration Concentration Nombre de concentration finale ajout a la apr s Additionnelles tre inject e or dans le flacon de streptomycine r hydratation Dilutions dans le flacon ETA VersaTREK Myco lyophilis e test Streptomycine 8 0 ug ml 25 ml 120 ug ml Non 120 ug ml 20 Streptomycine Si 5 ml de 20 p re l antibiotique dilu 30 ug ml 20 ES plus 15 ml d eau Pour le flacon sans antibiotique de contr le ajouter 1 0 ml d eau st rile la place de l antibiotique 20 tests peuvent tre ex cut s partir d une seule fiole L inoculum du sp cimen pour le test de sensibilit doit tre confirm comme une culture pure de M tuberculosis avant d effectuer le test de la streptomycine et doit tre pr par comme suit a Suspension cellulaire quivalant
63. ondir au nombre entier le plus proche si temps lt XX 49 il faut arrondir au chiffre inf rieur et si temps gt XX 50 il faut arrondir au chiffre sup rieur NOTE e Aucune boueille ne doit pas tre rep r e positive avant le troisi me jour Les bouteilles qui sont rep r es avant le troisi me jour sont soit contamin es soit l inoculum est trop lev L analyse doit tre r p t e e Une bouteille de test peut tre rep r e avant la bouteille t moin voir Tableau 3 exemple D Tous r sultats de r sistance devront tre confirm s par une m thode alternative avant d tre report Les flacons signales positifs devront tre color s pour AFB Acid Fast Bacilli et repiqu sur un milieu g los de Middlebrook 7H10 ou 7H11 et sur un milieu g lose non s lectif comme une g lose au sang pour tre sur de la puret du sp cimen Les flacons de contr le de croissance qui ont signal en moins de 2 jours et demi pourraient indiquer la pr sence d un contaminant non mycobact rien tandis que les flacons de contr le qui n ont pas mis de signal dans les 10 jours apr s avoir t inocul pourraient tre signe d une mauvaise pr paration du flacon Dans ces deux cas le sp cimen devra tre retest Toujours v rifier le graphique des isolats avant de reporter les r sultats Se r f rer au manuel d utilisation pour l analyse des graphes Si les graphes pour les tests qui ont mis un signal positif ne paraissent
64. one di coltura Myco sar di 2 ug ml 5 Aggiungere 1 0 ml di acqua distillata o deionizzata sterile al flacone del controllo di crescita 6 Aggiungere 0 5 ml della diluizione 1 10 della coltura presente in un flacone VersaTREK Myco positivo ai flaconi di coltura appropriati contenenti il farmaco e al flacone del controllo di crescita senza farmaco 7 Dopo aver riscontrato i risultati previsti utilizzare la parte rimanente del lotto per sottoporre a test gli altri campioni Qualora non si verificassero i risultati previsti contattare l Assistenza tecnica 8 Tabella 4 Risultati previsti per i ceppi CQ Microrganismo ATCC Streptomicina M tuberculosis 25618 Sensibile Le cause pi comuni di insuccesso del controllo qualit riguardano una sovra inoculazione dei set per il test della streptomicina e una contaminazione dei campioni Se vengono riscontrati ripetutamente dei risultati di falsa resistenza probabile che l antibiotico abbia perso potenza Si consiglia perci di effettuare il test con un nuovo stock di streptomicina RISULTATI PREVISTI stato effettuato un test iniziale su 109 ceppi clinici di Mycobacterium tuberculosis per verificarne la sensibilit alla streptomicina in 4 diversi siti utilizzando il metodo MAP Modified Agar Proportions e il VersaTREK Myco Streptomycin Test Entrambi i sistemi hanno rilevato 95 ceppi sensibili 87 2 Il metodo MAP ha rilevato 6 ceppi ad alta resistenza resistent
65. ong lelos a 20 C y utilicelos en 3 meses Una vez descongelados no los vuelva a congelar FECHA DE CADUCIDAD La fecha de caducidad se aplica al producto en su envase intacto sin abrir cuando se almacena Laprueba VersaTREK Streptomycin no debe utilizarse despu s de la fecha de caducidad indicada PROCEDIMIENTO PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD DE M tuberculosis USANDO VERSATREK ESP CUTLURE SYSTEM Il Materiales proporcionados VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 VersaTREK Myco Culture Bottles 7111 42 VersaTREK Myco GS 7112 42 VersaTREK Connectors 7150 44 Materiales necesarios pero no proporcionados Agua est ril destilada o desionizada Autoclave Middlebrook 7H10 u otro medio micobacteriano de agar o con base de huevo para controles de pureza Incubadora de CO 37 C Asas est riles Jeringas de tuberculina est riles con agujas permanentes Desinfectantes micobacterianos Ej Amphly OMNITM etc Hisopos con alcohol Mezclador de v rtice Gabinete de seguridad biol gica Microscopio Materiales para te ir muestras Organismo de control de calidad M tuberculosis ATCC 25618 Inoculacion de frascos de cultivo VersaTREK Myco para pruebas de susceptibilidad Myco 1 Etiquete cada frasco de cultivo VersaTREK Myco con informaci n que la identifique En las pruebas de estreptomicina se usaran 3 frascos por prueba 2 Desinfecte los tapones del frasco de cultivo con alcohol 3 Afiada as pticamente 1 0 ml de VersaTREK My
66. or resistant to the drug REAGENTS VersaTREK Myco Streptomycin contains one vial of lyophilized streptomycin The vial is to be rehydrated with 25 ml of sterile distilled or deionized water FORMULA UPON REHYDRATION H2O Processed Water 25 ml STR Streptomycin 0 012 w v SA Solubilizing Agent 1 25 wiv Adjusted to meet performance criteria PRECAUTIONS 1 For in vitro diagnostic use 2 Refer to Material Safety Data Sheets for complete hazard information 3 WARNING POTENTIAL INFECTIOUS TEST SPECIMEN Follow Universal Precautions and institutional policy in handling and disposing of infectious agents 4 When working with M tuberculosis grown in culture the recommendation is for Biosafety Level 3 practices containment equipment and facilities 5 The VersaTREK Connector contains a sharp recessed needle that is sterile upon first removing the seal but is potentially contaminated upon termination of use 6 Visually inspect all bottles for contamination cracks or other signs of deterioration Do not use bottles that appear turbid or cracked 7 Use only needle locking syringes 8 Autoclave all VersaTREK Myco bottles prior to disposal STORAGE Store at 2 8 C Protect from light Upon rehydration store at 2 8 C and use within 4 weeks or freeze at 20 C and use within 3 months Once thawed do not refreeze EXPIRATION DATE The expiration date applies to the product in its intact unopened container when st
67. ored as directed The VersaTREK Streptomycin Test should not be used beyond the indicated expiration date PROCEDURE SUSCEPTIBILITY TESTING OF M tuberculosis USING THE VERSATREK ESP CUTLURE SYSTEM Il Materials Provided VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 VersaTREK Myco Culture Bottles 7111 42 VersaTREK Myco GS 7112 42 VersaTREK Connectors 7150 44 Materials Required but Not Provided Sterile distilled or deionized Water Autoclave Middlebrook 7H10 or other mycobacterial agar or egg base medium for purity checks CO incubator 37 C Sterile loops Sterile tuberculin syringes with permanently attached needles Mycobacterial disinfectant e g Amphly OMNI etc Alcohol swabs Vortex mixer Biological safety cabinet Microscope Materials for staining slides Quality Control Organism M tuberculosis ATCC 25618 Inoculation of VersaTREK Myco Culture Bottles for Myco Susceptibility Testing 1 Label each VersaTREK Myco culture bottle with identifying information For streptomycin testing 3 bottles will be used per test Disinfect the culture bottle stoppers with alcohol Aseptically add 1 0 ml of VersaTREK Myco GS to each culture bottle by injecting through the septum with a needle and syringe Rehydrate lyophilized VersaTREK Myco Streptomycin by aseptically adding 25 ml of sterile distilled or deionized water This yields a drug concentration of 120 ug ml Aseptically remove 5 ml of the solution and transfer into
68. os frascos de cultivo VersaTREK Myco para pruebas de susceptibilidad 3 A ada 1 0 ml de la concentraci n de f rmaco de 120 ug ml a un frasco VersaTREK Myco La concentraci n final de estreptomicina en el frasco de cultivo Myco es 8 ug ml 4 A ada 1 0 ml de la concentraci n de f rmaco de 30 ug ml a un segundo frasco VersaTREK Myco La concentraci n final de estreptomicina en el frasco de cultivo Myco es 2 ug ml 5 A ada 1 0 ml de agua est ril destilada o desionizada al frasco de control del crecimiento 6 A ada 0 5 ml de la diluci n 1 10 de cultivo desde un frasco positivo VersaTREK Myco a los frascos de cultivo apropiados que contienen f rmaco y al frasco de control del crecimiento sin f rmaco 7 Despu s de observar los resultados esperados utilice el lote restante para analizar las muestras Si no se consiguen los resultados esperados contacte con el soporte t cnico 8 Tabla 4 resultados esperados del control de calidad Organismo ATCC Estreptomicina M tuberculosis 25618 Susceptible Las causas m s comunes de error en el control de calidad son la sobreinoculaci n de los conjuntos de pruebas de estreptomicina y la contaminaci n Si se vuelven a obtener resultados falsos de resistencia el antibi tico de estreptomicina probablemente haya perdido actividad Se recomienda hacer las pruebas con reservas nuevas del antibi tico RESULTADOS ESPERADOS Se realizaron pruebas iniciales de 109 cepas cl
69. pas normaux contacter le service du support technique de Trek au 1 216 351 8735 26 TABLEAU 2 Test d observation et Test d valuation Falcon Test R sultat obtenu Possible cause Action a i N Contamination possible ou Coole ds Sieur a panir de inoculum trop lourd v rifier la REPETER TEST croissance l inoculation 2 puret des plaques et les graphes Contr le de gt 1 0 jours partir de Pas d organismes viables REPETER TEST croissance l inoculation inoculum trop l ger Contr le de Croissance d tect e entre 3 et Essai valable valuer croissance 10 jours apr s inoculation l antibiotique du flacon V rification de puret Pas de contamination observ e au moins 18 Test valable heures d une g lose au sang Pas d organismes AFB La Culture n tait pas pure REPETER TEST observ s Pas de colonie vari e observ e sur g lose de Middlebrook Essai valable pas d action Colonies vari s observ s sur g lose de Middlebrook Plus d une esp ce de Mycobact rie sont pr sentes les r sultats pr venir le finaux sont en suspens REPETER TEST pour v rifier physicien que les r sultants La gamme sup rieure de 10 jours de temps de d tection pour le contr le de croissance a t tablie par des donn es cliniques et internes Soyer s r de contr ler que les r sultats des sous cultures du milieu g lose pour Mycobact ries pour v rifie
70. r que seulement une esp ce de Mycobact ries soit pr sentes pr cis ment dans le cas de r sultats r sistant TABLEAU 3 Exemples de r sultats pour le calcul de la susceptibilit de souches de M tuberculosis VersaTREK Myco Streptomycin Patient A B C D E F G Streptomycine T moin Positif 2 4 5 9 10 10 12 Jours Streptomycine M dicament 5 2 6 7 14 13 10 Positif Jours Contr le de la Contr le de la croissance Invalide croissance R sultat invalide Analyse R sistant R sistant Susceptible R sistant invalide Analyse r p t e Analyse r p t e r p t e Tous les r sultats R sistant doivent tre confirm s par une autre m thode avant d tre annonc s LIMITES D UTILISATION 1 Le test de sensibilit VersaTREK Myco Streptomycin n interpr te pas le degr de sensibilit d un isolat test C est un test uniquement qualitatif 2 Le test de sensibilit VersaTREK Myco peut tre seulement effectu dans les appareils VTI ou ESP Les tests ne peuvent pas s effectuer manuellement 3 Utiliser seulement des cultures pures de M tuberculosis L utilisateur doit confirmer la puret de la culture particuli rement si le r sultat est r sistant Les cultures contenant multiples esp ces de Mycobact ries peuvent donner des r sultats erron s 27 L chec de la pr paration des isolats en suivant les recommandations du fabricant peut mener des r sultats impr
71. rculosis 25618 Sens vel As causas mais comuns de falha de controlo de qualidade s o o excesso de in culo dos conjuntos de teste de estreptomicina e a contamina o Se forem obtidos resultados repetidos de falsa resist ncia o antibi tico estreptomicina dever ter perdido a sua actividade Recomenda se o teste com um novo stock de antibi ticos RESULTADOS ESPERADOS O teste inicial de 109 estirpes cl nicas de Mycobacterium tuberculosis foi efectuado para sensibilidade estreptomicina em 4 localiza es diversas utilizando o M todo Propor es Agar Modificado MAP e Teste VersaTREK Myco Streptomycin Ambos os sistemas detectaram 95 87 2 de estirpes sens veis O m todo MAP detectou 6 estirpes de resist ncia alta resistentes a 10 ug ml de estreptomicina e 14 estirpes de resist ncia baixa resistentes a concentra o de 2 ug ml de estreptomicina O teste VersaTREK Streptomycin detectou 5 estirpes de resist ncia elevada e 11 de resist ncia baixa O teste inicial foi efectuado com apenas uma concentra o 8 ug ml de estreptomicina considerada inconsistente na detec o de estirpes de resist ncia baixa estreptomicina Uma concentra o adicional de 2 ug ml foi adicionada ao teste e testada com 14 estirpes cl nicas de M tuberculosis e 30 estirpes padronizadas CDC em tr s localiza es Este teste mostrou uma boa correla o na detec o de resist ncia baixa estreptomicina 35 CARACTERISTIC
72. rsaTREK Myco Streptomycin utilizado com o VersaTREK Automated Microbial Detection System VTI e o ESP Culture System Il ESP RESUMO E EXPLICA O O diagn stico r pido da tuberculose importante para a dar in cio a uma terapia medicamentosa apropriada e para o estabelecimento de medidas de preven o da dissemina o desta doen a altamente contagiosa O tratamento retardado em particular da estirpe resistente a m ltiplos antibi ticos do M tuberculosis MDR TB pode resultar numa falha do tratamento e na morte do doente De forma a obviar estas quest es os microbiologistas cl nicos dever o utilizar os testes de diagn stico mais r pidos e sens veis que forne am resultados fi veis Os peritos dos Centros de Controlo de Doen a CDC efectuaram v rias recomenda es no que toca ao teste micobacteriano incluindo a utiliza o de meios l quidos e s lidos para cultura micobacteriana Para o teste de sensibilidade estreptomicina do M tuberculosis o sistema VTI ESP combina um meio de cultura l quido caldo VersaTREK Myco um suplemento de crescimento VersaTREK Myco GS e concentra es espec ficas de estreptomicina com um sistema de detec o que automaticamente incuba e continuamente monitoriza a cultura inoculada com isolados de M tuberculosis de amostra de diferentes origens Os tamp es nas garrafas VersaTREK Myco fornecem uma matriz de suporte de crescimento e aumento da rea de superf cie exposta ao oxig nio
73. s des microbiologistes cliniques sont pri s d utiliser des essais de diagnostiques les plus sensibles et rapides fournissant des r sultats fiables Les experts du CDC Centre for Desease Control ont mis plusieurs recommandations quant aux tests Mycobact riens y compris l utilisation d un milieu a la fois solide et liquide pour les cultures Mycobact rienne Pour la mise l preuve de la sensibilit de M tuberculosis la streptomycine le syst me VTI ESP combine un milieu de culture liquide VersaTREK Myco Broth un suppl ment de croissance VersaTREK Myco GS et des concentrations sp cifiques de Streptomycine avec un syst me ded tection qui incube automatiquement et contr le continuellement la culture inocul e avec des isolats de M tuberculosis d une vari t de sp cimens Les ponges des flacons de VersaTREK Myco fournissent une matrice de support de croissance et augmente la superficie expos e l oxyg ne de lt l espace de t te La technologie du syst me VTI ESP est bas e sur la d tection du changement de pression en raison de la croissance microbienne dans l espace de t te d un flacon scell e Un logarithme sp ciale a t d velopp pour la d tection de croissance tr s lente des Mycobact ries Avec le syst me de VTI ESP l antibiotique de la Streptomycine contre la tuberculose peut tre inject dans le flacon VersaTREK Myco compl t avec VersaTREK Myco GS Un inoculum d une culture confirm e d
74. s e ou consumo de g s dentro do espa o livre de uma garrafa de cultura processada Esta informa o utilizada para criar uma curva de press o para cada garrafa Um algoritmo interno analisa a informa o de forma a determinar o estado de cada amostra de teste Quando definido um conjunto de condi es uma garrafa assinalada positiva Existem aproximadamente 10 CFU ml de micobact rias na altura da detec o PRINC PIOS DO PROCEDIMENTO O teste de sensibilidade de amostras de M tuberculosis efectuado com o Sistema VTI ESP atrav s da inocula o de uma suspens o de microrganismos nas garrafas de caldo VersaTREK Myco suplementados com VersaTREK Myco GS e VersaTREK Myco Streptomycin Um VersaTREK Connector fixado a cada garrafa de forma a estabelecer um sistema fechado para monitoriza o da garrafa com o aparelho VTI ESP Uma membrana hidrof bica no VersaTREK Connector evita a produ o de aeross is A informa o de isolados introduzida no computador do sistema e as garrafas s o colocadas no aparelho para incuba o a 35 37 C em condi es est veis O Sistema VTI ESP detecta o crescimento Micobacteriano monitorizando continuamente a cada 24 minutos a taxa de consumo de oxig nio no espa o livre da garrafa de cultura e reportando essa resposta de crescimento com um sinal positivo No final do per odo de incuba o especificado tal como determinado pela garrafa de controlo isenta de antibi ticos de ca
75. sso da amostra for 123 atribua n meros de acesso a garrafas de teste de estreptomicina como 123PC para controlo positivo e 12352 e 12358 para caldos de teste de estreptomicina Desta forma todas as garrafas associadas a este n mero de acesso de amostra poder o ser pesquisados e localizados como um grupo Um m todo alternativo de adicionar reagentes e in culos s garrafas de caldo remover a tampa e a c psula e efectuar as adi es utilizando uma pipeta esterilizada O fecho cuidadoso da tampa e c psula necess rio 32 RESULTADOS Para o teste de sensibilidade utilizando o VersaTREK ESP Culture System Il um isolado interpretado como sensivel ou resistente a um antibi tico com base no seguinte arredondar todos os tempos de detec o para o dia inteiro mais pr ximo 1 Depois de a garrafa isenta de antibi ticos ser positiva registe o tempo de detec o indicado no gr fico da garrafa de teste 2 Pesquise e registe os resultados das outras garrafas de teste para o isolado tr s dias adicionais arredondados para o n mero inteiro mais pr ximo de incuba o depois do controlo de isen o de antibi ticos dar sinal positivo 3 Sens vel Um isolado numa garrafa que contenha antibi tico que n o d sinal dentro do per odo de detec o de tr s dias de controlo de isen o de antibi ticos determinado sens vel concentra o de antibi ticos O crescimento tr s dias arredondados para o n mero int
76. suitable gloves S53 Avoid exposure obtain special instructions before use REFERENCES 1 Stratton CW 1992 The resurgence of tuberculosis Inf Dis Newsl 11 73 80 2 Tenover F C J T Crawford R E Huebner L J Geiter C R Horsberg Jr and R C Good 1993 The resurgence of tuberculosis Is your laboratory ready J Clin Microbiol 31 767 770 3 CDC National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th Edition Atlanta US Department of Health and Human Services Public Health Service CDC and NIH 1999 DHHS publication no CDC 93 8395 4 Strong B E and G P Kubica 1981 Isolation and Identification of Mycobacterium tuberculosis A Guide for the Level Il Laboratory US Publication no 81 9390 Centers for Disease Control Atlanta GA ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection ESP and VersaTREK are trademarks of TREK Diagnostic Systems Inc For additional information call TREK Technical Support at 1 800 642 7029 or or 1 216 351 8735 TREK Diagnostic Systems 982 Keynote Circle Suite 6 Cleveland Ohio 44131 USA 800 871 8909 www trekds com LEC REP TREK Diagnostic Systems Units 17 19 Birches Industrial Estate East Grinstead West Sussex RH19 1XZ UK L TDST020 5 2010 07 Espa ol VersaTREK Myco Streptomycin 7120 30 USO La prueba VersaTREK Myco Streptomycin es un procedimiento rapido y cualitativo para las pruebas de susceptibili
77. tomycin contiene una fiala di streptomicina liofilizzata La fiala deve essere reidratata con 25 ml di acqua distillata o deionizzata sterile FORMULA DOPO LA REIDRATAZIONE H20 Acqua trattata 25 ml STR Streptomicina 0 012 w v SA Agente solubilizzante 1 25 w v Regolata per soddisfare i criteri delle prestazioni 16 PRECAUZIONI 1 Per uso diagnostico in vitro 2 Perinformazioni complete sui possibili rischi consultare le schede sulla sicurezza dei materiali 3 AVVERTENZA CAMPIONE DI PROVA POTENZIALMENTE INFETTIVO Seguire le precauzioni universali e le disposizioni della specifica struttura sanitaria in materia di manipolazione e smaltimento degli agenti infettivi 4 Durante l utilizzo delle colture di M tuberculosis si consiglia di seguire il Livello di biosicurezza 3 per le procedure di routine nonch per le strutture e le apparecchiature di contenimento 5 Il connettore VersaTREK Connector contiene un ago incassato e appuntito che sterile al momento della rimozione dall involucro sigillato ma che pu essere soggetto a contaminazione durante l uso 6 Ispezionare visivamente tutti i flaconi per individuare eventuali incrinature ed altri segni di deterioramento o contaminazione Non utilizzare flaconi che risultino torbidi o incrinati 7 Utilizzare esclusivamente siringhe con sistema di blocco dell ago 8 Sterilizzare in autoclave tutti i flaconi VersaTREK Myco prima dello smaltimento CONSERVAZIONE
78. ulo RIPETERE IL TEST crescita troppo leggero Controllo di Crescita rilevata tra i 3 e i 10 Test valido valutare i crescita giorni dall inoculazione flaconi del farmaco Nessun contaminante osservato per almeno 18h Test valido sulla piastra con agar sangue Osservati organismi non AFB La coltura si rivelata impura RIPETERE IL TEST Controllo di Nessuna variazione delle DISSI purezza Test valido nessuna azione Variazione delle colonie osservata sulle piastre con agar Middlebrook Presenza di pi specie di micobatteri RIPETERE IL TEST per verificare i risultati Notificare al medico che i risultati finali sono in attesa di elaborazione Il limite massimo di 10 giorni per il tempo di rilevamento del controllo di crescita stato stabilito in base a dati risultanti da test clinici e interni Assicurarsi di controllare i risultati delle sottocolture sull agar micobatterico per verificare che sia presente una sola specie di micobatterio specialmente nei casi di resistenza TABELLA 3 esempi dei risultati per il calcolo della suscettibilit dei ceppi di M tuberculosis a VersaTREK Myco Streptomycin Paziente A B C D E F G Controllo positivo streptomicina 2 4 5 9 10 10 12 giorni Farmaco positivo streptomicina 2 6 x 14 13 10 giorni Controllo Controllo Risultato della SES cita Non valido Resistente Resistente Sensibile Resistente della Fine cita non val
79. ulture bottle is 2 ug ml Add 1 0 ml of sterile distilled or deionized water to the growth control bottle Add 0 5 ml of the 1 10 dilution of culture from a positive VersaTREK Myco seed bottle to the appropriate culture bottles containing drug and to the drug free growth control bottle After observation of expected results use the remainder of the lot in testing specimens If expected results are not achieved contact Technical Support Table 4 QC Strain Expected Results Organism ATCC Streptomycin M tuberculosis 25618 Susceptible The most common causes of quality control failure are over inoculation of the streptomycin test sets and contamination If repeated false resistance results are obtained the streptomycin antibiotic most likely has lost activity The recommendation is to test with a new antibiotic stock EXPECTED RESULTS Initial testing of 109 clinical strains of Mycobacterium tuberculosis was performed for susceptibility to streptomycin at 4 diverse sites using the Modified Agar Proportions MAP Method and VersaTREK Myco Streptomycin Test Both systems detected 95 87 2 susceptible strains The MAP method detected 6 high resistant strains resistant to 10 ug ml streptomycin and 14 low resistant strains resistant to 2 ug ml concentration of streptomycin The VersaTREK Streptomycin test detected 5 high resistant and 11 low resistant strains The initial testing was performed with only one concentrat
80. umo de gas dentro del espacio de aire de un frasco de cultivo cerrado Esta informaci n se usa para generar una curva de presi n para cada frasco Con un algoritmo interno se analiza la informaci n para determinar el estado de cada muestra de la prueba Cuando se re ne un conjunto de condiciones el frasco se marca como positivo Hay aproximadamente 10 CFU ml de microbacterias en el momento de la detecci n PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO La prueba de susceptibilidad de las muestras de M tuberculosis se realiza con el sistema VTI ESP inoculando una suspension de organismos en frascos de VersaTREK Myco Broth complementados con VersaTREK Myco GS y VersaTREK Myco Streptomycin Se acompa a VersaTREK Connector a cada frasco para establecer un sistema cerrado de monitorizaci n del frasco con el instrumento VTI ESP Una membrana hidrof bica en el VersaTREK Connector previene la aerosolizaci n Se introduce la informaci n del aislamiento en el ordenador del sistema y los frascos se colocan en el instrumento para incubarse a 35 37 C bajo condiciones estacionarias El sistema VTI ESP detecta crecimiento microbacteriano al monitorizar continuamente cada 24 minutos el indice de consumo de oxigeno en el espacio de aire del frasco de cultivo e informa de la respuesta de crecimiento con una sefial positiva AI final del periodo de incubaci n especifico seg n determina el frasco de control sin farmaco para cada aislamiento que se analiza se determina
81. usceptible An isolate in a drug containing bottle that has not signaled within the three day detection period of the drug free control is determined to be susceptible at that drug concentration Growth after the three days rounded to the nearest whole number of the growth control bottle signaling positive should be disregarded because it is not considered to be an indication of resistance To round to the nearest whole number if time lt XX 49 is round down and if time gt XX 50 is round up Resistant Time to detection of drug bottle is three days rounded to the nearest whole number of the time to detection of the drug free control bottle rounded to the nearest whole number To round to the nearest whole number if time lt XX 49 is round down and if time gt XX 50 is round up NOTE e No bottle should flag positive before the third day Bottles that flag before three days are either contaminated or the inoculum is too high The test should be repeated e A test bottle may signal before the control bottle see Table 3 example D AII resistant results should be confirmed by an alternate method prior to reporting Bottles that signal positive should be stained for AFB Acid Fast Bacilli and subcultured to a Middlebrook 7H10 or 7H11 agar plate as well as a non selective agar plate e g Blood Agar to ensure purity of the specimen Growth control bottles that signal in less than 2 5 days may indicate the presence of a non Mycobacterial
82. yco Streptomycin 7120 30 VersaTREK Myco Culture Bottles 7111 42 VersaTREK Myco GS 7112 42 VersaTREK Connectors 7150 44 Mat riels n cessaires mais non fournis Autoclave Milieu Middlebrook 7H10 ou autre milieu pour la culture de Mycobact ries ou milieu base d ufs pour contr ler la puret tuve CO2 37 C Anse st rile Seringue st rile avec aiguille mont e D sinfectant mycobact rien ex Amphly OMNI etc Ecouvillon d alcool Agitateur Vortex Armoire biologique de s curit Microscope Mat riels pour coloration de lames Organisme de contr le qualit M tuberculosis ATCC 25618 24 Inoculation de VersaTREK Myco Culture Bottles pour tester la sensibilit Myco 1 10 11 12 Etiqueter chaque flacon de culture VersaTREK Myco avec les informations d identification Pour le test de Streptomycine 3 flacons vont tre utilis es par test D sinfecter les fermetures des flacons de cultures avec de l alcool Aseptiquement ajouter 1 0 ml de VersaTREK myco GS dans chaque flacon en injectant travers le septum l aide d une seringue munie d une aiguille R hydrater le VersaTREK Myco Streptomycin lyophilis en ajoutant aseptiquement 25 ml d eau st rile distill e ou d ionis e Ceci donne une concentration de 120ug ml Aseptiquement enlever 5 ml de la solution et la transf rer dans un conteneur st rile Ajouter 15 ml d eau st rile distill e ou d ionis e Ceci donne une c

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents

Micro chaîne avec Bluetooth  France - Unesco  T'nB UC11B mobile phone case  ALEX 3/4 - Cedtrade.co.uk  User Manual  

Copyright © All rights reserved. Failed to retrieve file