EVALUACIÓN DEL DAÑO EN EL ADN EN DOS
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1. hem tico estuvo dentro de los valores normales La revisi n de las encuestas aplicadas arroj datos importantes sobre las condiciones de cada grupo de estudio en la gr fica la se presenta el porcentaje de uso de los plaguicidas por categor a toxicol gica en los cultivos de papa y de cebolla En Colombia 80 70 60 50 40 Porcentaje 30 20 10 0 Insecticidas Fungicidas 100 90 80 70 60 50 Porcentaje 40 30 20 10 0 Fungicidas Insecticidas las cuatro categor as establecidas son categor a IA extremadamente t xico categor a IB altamente t xico categor a Il medianamente t xico y categor a III ligeramente t xico seg n Manual T cnico Andino y el Ministerio de Salud cabe resaltar el uso frecuente y en altas dosis de plaguicidas catalogados altamente y moderadamente t xicos entre las clases de sustancias m s utilizadas se destacan los organofosforados 16 22 carbamatos 6 76 y de piretroides 6 70 De la informaci n recolectada sobre los elementos de protecci n personal que utilizaban en el momento de la aplicaci n de plaguicidas como botas guantes overol delantal gafas y mascarilla entre los m s Toxicidad Ml Extrema Alta m Moderada E Ligera Herbicidas Total Toxicidad Ml Extrema Alta Moderada W Ligera Herbicidas Total Gr fica 1 Distribuci n de los plaguicidas util2. de trabajadores no se encontraron efectos acumulativos ante la exposici n puede ser que el efecto agudo que pueda llegar a generar es r pidamente reparado por los mecanismos de reparaci n de ADN y as dar un control eficiente de los da os producidos Los resultados no pueden ser extrapolados a los dem s cultivos de flores o de papa y de cebolla pues las condiciones aunque similares pueden variar tanto en plaguicidas utilizados como las normas e implementos Revista U D C A Actualidad amp Divulgaci n Cient fica 12 1 7 16 2009 de seguridad empleados a pesar de estas limitaciones con los resultados de esta investigaci n se podr n llevar a cabo estudios subsiguientes en la exposici n ocupacional a plaguicidas y evaluar otras variables que no fueron tenidas en cuenta Los hallazgos presentados en este estudio proporcionan adicionalmente evidencia para la validaci n del ensayo del cometa como una prueba aplicable en estudios de bio monitoreo de poblaciones humanas AGRADECIMIENTOS El autor le agradece a la Doctora Helena Groot y Myriam Guti rrez por su apoyo y colaboraci n en la realizaci n del trabajo a la Universidad de Los Andes por la ayuda econ mica otorgada para el desarrollo de este proyecto y al Doctor Meyid Antonio Velos Ruiz y a todo su grupo de investigadores de la Universidad Pedag gica y Tecnol gica de Colombia por la recolecci n de las muestras evaluaci n m dica y aplicaci n de la
3. Articulo Cientifico Mufioz Aristizabal A F Genotoxicidad de plaguicidas EVALUACION DEL DANO EN EL ADN EN DOS POBLACIONES COLOMBIANAS DE AGRICULTORES Y FLORICULTORES ASSESMENT OF DNA DAMAGE IN TWO COLOMBIAN POPULATIONS OF AGRICULTIRIST AND FLORICULTURIST RESUMEN Algunas investigaciones demuestran el potencial genot xico de ciertos plaguicidas sobre los seres humanos lo cual hace necesario el desarrollo de metodolog as que permitan evaluar el impacto de dichas sustancias para alterar el ADN El ensayo del cometa alcalino es un m todo econ mico r pido y sensible que detecta principalmente rompimientos de cadena sencilla y sitios l biles al lcali en c lulas individuales El objetivo del presente estudio fue evaluar el da o en el ADN en una poblaci n de floricultores y agricultores ocupacionalmente en contacto con plaguicidas y compararlo con un grupo control Se obtuvieron muestras de sangre perif rica de 101 personas entre trabajadores expuestos e individuos del grupo control El ensayo del cometa se realiz utilizando sangre total y linfocitos aislados con muestras embebidas en agarosa y puestas sobre una l mina portaobjetos luego expuestas a una soluci n de lisis con detergente y posteriormente sometidas a una corriente el ctrica con buffer alcalino El da o en el ADN fue evaluado por medici n del largo de la cola migraci n de ADN y por la morfolog a que presentaban los cometas En los agricultor
4. RETTI M MARCARELLI M VILLARINI M FATIGONI C SCASSELLATI SFORZOLINI G PASQUINI R 2002 In vitro testing for genotoxicity of the herbicide terbutryn cytogenetic and primary DNA damage Toxicol In Vitro 16 81 88 OLIVE PL CHAN A P CU C S 1988 Comparison between the DNA precipitation and alkali unwinding assays for detecting DNA strand breaks and cross links Cancer Res 48 6444 6449 15 Revista U D C A Actualidad amp Divulgaci n Cient fica 12 1 7 16 2009 ORSI L TROUSSARD X MONNEREAG A BERTHOU C FENAUX P MARIT G SOUBEYRAN P HUGUET Es MILPIED N LEPORRIER Mu HEMON D CLAVEL J 2007 Occupation and lymphoid malignancies results from a French case control study J Occup Environ Med 49 12 1339 50 OSTLING O JOHANSON K L 1984 Microelectrophoretic study of radiation induced DNA damages in individual mamalian cells Biochem Biophys Res Commun 123 291 298 PASTOR S GUTIERREZ S CREUS A CEBULSKA WASILEWSKA A MARCOS R 2001a Micronuclei in peripheral blood lymphocytes and buccal epithelial cells of Polish farmers exposed to pesticides Mutat Res 495 147 156 PASTOR S GUTIERREZ S CREUS A XAMENA N PIPERAKIS S MARCOS R 2001b Cytogenetic analysis of Greek farmers using the micronucleus assay in peripheral lymphocytes and buccal cells Mutagenesis 16 539 545 RAHMAN M F MAHBOOB M DANADEVI K BANU B S GROVER P 2002 A
5. ad sobre los niveles de da o en el ADN en las poblaciones estudiadas rango de edad 18 a 48 a os se puede deber a que el rango de edad no es muy grande lo cual no permite ver un efecto importante en los resultados con el ensayo del cometa de acuerdo con las investigaciones realizadas por Valverde et al 1997 y Villarini et al 2002 quienes no hallaron un efecto significativo de la edad sobre los resultados de la prueba de genotoxicidad Frente al tiempo de exposici n de los agricultores y floricultores no se observ un cambio en los resultados del cometa pues se debe tener en cuenta que la mayor a de los linfocitos en sangre perif rica tienen una vida media menor a dos semanas as pues nuevos linfocitos son producidos continuamente Weisenburger amp Harrington 1990 El hecho que la mayor a de los linfocitos tengan una vida media tan baja no permite ver un efecto acumulativo a trav s del tiempo del da o en el ADN sobre estas c lulas CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES El ensayo del cometa es una t cnica muy sensible que permite evaluar el da o sobre el ADN generado por cualquier factor interno o externo sin discriminaci n alguna los resultados presentados indican una posible relaci n con la exposici n ocupacional en los lugares de trabajo Desde que los trabajadores son frecuentemente expuestos a una mezcla de plaguicidas es dif cil atribuir el da o genot xico a una clase de qu mico o compuesto en particul
6. ar Los compuestos organoclorados usados en el pasado han sido remplazados por organofosforados y carbamatos y m s recientemente por piretrinas que representan las clases de pesticidas m s usados hoy en d a La evidencia experimental muestra que un amplio rango de estos compuestos induce efectos genot xicos en bacterias as como en sistemas animales Aunque la significancia del incremento de los efectos genot xico es dif cil predecir de forma individual los hallazgos positivos en este estudio de biomonitoreo sugiere un riego genot xico a nivel grupal La evidencia de un riesgo genot xico relacionado a la exposici n resulta del intensivo uso de plaguicidas y poco uso de elementos de protecci n una relaci n de dosis efecto puede ser una hip tesis lo que revela la necesidad de implementar programas para educar a los agricultores en la reducci n del uso de plaguicidas e implementar las medidas de protecci n Los resultados negativos son asociados con bajos niveles de exposici n por el uso adecuado de elementos de protecci n y acatamientos de normas de seguridad para el manejo de sustancias t xicas y el uso de plaguicidas levemente t xicos Tanto el g nero como la edad no revel ninguna diferencia en el efecto genot xico de los pesticidas en las poblaciones expuestas de igual forma el da o basal en personas no expuestas a sustancias t xicas parece ser igual en ambos g neros y entre edades As mismo en estas poblaciones
7. cytes of farmers measured using the alkaline comet assay modifications of DNA damage levels after a one day field spraying period with selected pesticides Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 7 10 929 940 LUCERO L PASTOR S SU REZ S DURBAN R G MEZ C PARRON T CREUS A MARCOS R 2000 Cytogenetic biomonitoring of Spanish greenhouse workers exposed to pesticides micronuclei analysis in peripheral blood lymphocytes and buccal epithelial cells Mutat Res 464 255 262 MCKELVEY M VALERIE J 1998 Emerging applications of the single cell gel electrophoresis Comet assay Mutagenesis 13 1 1 8 MERHI M RAYNAL H CAHUZAC E VINSON EF CRAVEDI J P GAMET PAYRASTRE L 2007 Occupational exposure to pesticides and risk of hematopoietic cancers meta analysis of case control studies Cancer Causes Control 18 10 1209 1226 MESTER B NIETERS A DEEG E ELSNER G BECKER N SEIDLER A 2006 Occupation and malignant lymphoma a population based case control study in Germany Occup Environ Med 63 17 26 MINISTERIO DE SALUD Decreto 1843 del 22 de julio de 1991 Disposiciones sanitarias sobre uso y manejo de plaguicidas Bogot Ministerio de Salud 1991 p 1 69 MOLLER P KNUDSEN L E LOFT S WALLIN H 2000 The comet assay as a rapid test in biomonitoring occupational exposure to DNA agents and effect of confounding factors Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 9 10 1005 1015 MO
8. des in Bogota flowers farms Biom dica 23 2 141 152 VARONA M TOLOSA J CARDENAS O TORRES C PARDI D CARRASQUILLA G FRUMKIN H 2005 Descripci n del uso y manejo de plaguicidas en las empresas de flores afiliadas a Asocolflores Biom dica 25 377 389 VIEL J F CHALLIER B PITARD A POBEL D 1998 Brain cancer mortality among French farmers the vineyard pesticide hypothesis Arch Environ Health 53 65 70 VILLARINI M SCASSELLATI SFORZOLINI G MORETTI M PASQUINI R 2002 In vitro genotoxicity of terbutryn evaluated by the alkaline single cell microgel electrophoresis comet assay Cell Biol Toxicol 16 5 285 292 WEISENBURGER D S HARRINGTON J O 1990 Armitage B cell neoplasia a conceptual understanding based on the normal humoral immune response Pathol Annu 25 99 115 ZELJEZIC D GARAJ VRHOVAC V 2001 Chromosomal aberration and single cell gel electrophoresis Comet assay in the longitudinal risk assessment of occupational exposure to pesticides Mutagenesis 16 4 359 363 Recibido Junio 10 de 2008 Aceptado Febrero 18 de 2009 16
9. el de da o que presenta el cometa as ninguno 0 5 de da o en el ADN bajo 5 10 medio 10 40 alto 40 95 y total 95 100 Fotograf a 2 Los reactivos utilizados fueron obtenidos de los laboratorios Sigma Analyticlas Gibco y Merk An lisis Estad stico Para analizar las posibles diferencias entre el largo de la cola del cometa entre las poblaciones estudiadas y la relaci n con otras variables como la edad los implementos de protecci n el tiempo de exposici n y el g nero se utilizaron las pruebas estad sticas de t student test pareado de Wilcoxon y Kruskal Wallis con el programa estad stico STATISTIX 7 0 Revista U D C A Actualidad amp Divulgaci n Cient fica 12 1 7 16 2009 Fotograf a 1 Medici n del largo de la cola del cometa medido en micras Nivel de da o lt 5 Ninguno Nivel de da o 5 10 Bajo Nivel de da o 10 40 Medio Nivel de da o 40 95 Alto Nivel de da o gt 95 Total Fotograf a 2 Clasificaci n de la morfolog a de los n cleos seg n el nivel de da o en el ADN Articulo Cientifico Mu oz Aristiz bal A F Genotoxicidad de plaguicidas RESULTADOS Y DISCUSION El examen m dico realizado a cada una de las personas participante en el estudio mostr que ninguno padec a de problemas de salud como des rdenes digestivos y respiratorios adicionalmente los resultados de la evaluaci n del nivel de acetil colina esterasa y el cuadro
10. enetic monitoring of croatian population occupationally exposed to a complex mixture of pesticides Toxicology 165 2 3 153 162 GARAJ VRHOVAC V ZELJEZIC D 2002 Assessment of genome damage in a population of Croatian workers employed in pesticides production by chromosomal aberration analysis micronucleus assay and comet assay J Appl Tox 22 248 255 G MEZ S NORIEGA N OSORIO A GALICIA F LING S VILLALOBOS R 1992 Sister chromatid exchanges in a rural population of Mexico exposed to pesticides Mutat Res 281 173 179 GOMEZ ARROYO S DIAZ SANCHEZ Y MENESES PEREZ M A VILLALOBOS PIETRINI R DELEON RODRIGUEZ J D 2000 Cytogenetic biomonitoring in a Mexican floriculture worker group exposed to pesticides Mutat Res 466 117 124 GROVER P DANADEVI K MAHBOOB M ROZATI R BANU S RAHMAN M 2003 Evaluation of genetic damage in workers employed in pesticide production utilizing the Comet assay Mutagenesis 18 2 201 205 IARC International Agency for Research on Cancer Monographs 1991 Occupational Exposures in Insecticide Application and Some Pesticides 53 45 93 KASSIE F PARZEFALL W KNASMULLER S 2000 Single cell gel electrophoresis assay a new technique for human biomonitoring studies Mutat Res 463 13 31 LEBAILLY P NIGREUX LECHEVREL LEDEMENEY D GODARD T SICHEL F LETALAER JY HENRY AMAR M GAUDUCHON P 1998 DNA damage in mononuclear leuko
11. er cada una de ellas ante la exposici n pero s permite evaluar todo tipo de da o estructural en la hebra de ADN convirti ndose en un excelente biomarcador de exposici n La t cnica se basa en la fijaci n de c lulas en un gel de agarosa exponerlas a detergentes que disuelvan la membrana citoplasm tica y limpiar residuos de organelos de esta manera se obtienen n cleos desnudos que se sumergen en un buffer alcalino que permite desenrollar el ADN posteriormente someter estos n cleos a una corriente el ctrica as los da os estructurales en la hebra de ADN generan peque os fragmentos que migran desde el interior del n cleo al exterior la cantidad de rompimientos en el ADN en las c lulas se ve reflejado en la formaci n de cola de migraci n y este da o en el ADN es directamente proporcional a la longitud de la cola o la cantidad de fragmentos que se encuentren fuera del n cleo Anderson et al 1994 Rojas et al 1999 McKelvey amp Valerie 1998 En el presente trabajo el ensayo del cometa fue usado para evaluar el da o en el ADN de agricultores y floricultores ocupacionalmente expuestos a diferentes clases de plaguicidas en su lugar de trabajo y compararlo con un grupo control Articulo Cientifico Mu oz Aristiz bal A F Genotoxicidad de plaguicidas MATERIALES Y METODOS Sujetos El ensayo del cometa fue realizado en 101 muestras de sangre perif rica pertenecientes a agricultores floricultores y un gru
12. es el ensayo mostr un incremento significativo p lt 0 001 del da o 1 Bi logo y Qu mico Magister en Biolog a con nfasis en Gen tica Humana Direcci n para correspondencia La boratorio de Biolog a Molecular Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U D C A Bogot Colombia Calle 222 N 54 37 Telefono 6684700 ext 154 Correo electr nico andremunoz udca edu co Andr s Felipe Mu oz Aristiz bal en el ADN comparado con los floricultores y el grupo control entre estos ltimos no se hallaron diferencias Los resultados sugieren que el ensayo de cometa puede ser un buen biomarcador de exposici n ocupacional a plaguicidas y que puede ser utilizado para este tipo de estudios Palabras clave Genotoxicidad ensayo del Cometa plaguicidas exposici n ocupacional SUMMARY Some research results prove the potential genotoxic activity of pesticides on human beings which makes the development of methodologies that allow the determination of capacity of these substances to damage the DNA necessary The comet assay is an economic rapid and sensitive method that allows to detect mainly single strand breaks and alkaly labil sites in individual cells The aim of the present study was to evaluate the DNA damage by means of the comet assay in populations engaged in floriculture and agriculture activities with variable exposure to pesticides compared with a control group Peripheral blood samples from a total
13. izados con respecto a su categor a toxicol gica en a cultivos de papa y cebolla y b cultivos de flores Revista U D C A Actualidad amp Divulgaci n Cient fica 12 1 7 16 2009 importantes el 85 de los individuos carec an de cuatro o m s elementos de protecci n al momento de las fumigaciones y el conocimiento de normas de seguridad para el uso de plaguicidas era muy bajo En los cultivos de flores el uso de plaguicidas de categor a moderada y ligeramente t xica son los m s utilizados 39 4 y 47 0 respectivamente Gr fica 1b el uso de organofosforados carbamatos y piretroides no supera el 10 de acuerdo con lo encontrado por Varona et al 2005 Se observ en esta poblaci n un correcto y frecuente uso de elementos de seguridad pues el 100 de los floricultores utilizaban todos sus elementos de seguridad durante la aplicaci n de plaguicidas as como un buen conocimiento y acatamiento de las normas de seguridad para el manejo y aplicaci n de plaguicidas y el respeto por los periodos de reentrada es importante resaltar que los programas implementados en estos cultivos de flores sobre el manejo y el control de plagas minimiza el riesgo y el uso de plaguicidas altamente t xicos La prueba del ensayo del cometa se pudo realizar en todos los sujetos del estudio en las fotograf as 1 y 2 se presentan algunos cometas obtenidos en las diferentes poblaciones de estudio Respecto a los resultados los agricu
14. l 1 se deposit una mezcla de 10uL de muestra suspendida en 90uL de agarosa de punto de fusi n bajo 0 5 despu s de polimerizar se adicion una nueva capa de 100uL agarosa de punto de fusi n bajo 0 5 durante la polimerizaci n del gel una l mina cubreobjeto se coloc para obtener una capa delgada y uniforme de cada individuo se realizaron tres r plicas Posteriormente las l minas fueron inmersas en soluci n de lisis NaCl 2 5M EDTA 100mM Tris HCl 10mM Lauryl sarcosinato de sodio 1 Triton 1 y DMSO 10 a 4 C Despu s de dos horas las l minas fueron puestas en reposo alcalino en buffer de electroforesis NaOH 10N y EDTA 200mM pH 13 1 por 30 minutos Luego del reposo alcalino la electroforesis es realizada en una c mara de electroforesis horizontal a baja temperatura por 30 minutos y 300 mA Las l minas fueron sacadas y lavadas con soluci n neutralizante Tris HCl pH 7 5 por 15 minutos Para la lectura de las l minas se colorearon con bromuro de etidio 10 y se observaron en un microscopio de fluorescencia Zeiss equipado con un filtro excitador de 515 560nm Para cada l mina fueron analizadas 50 c lulas determinando el largo de la cola del cometa Tice 2000 midiendo desde el centro del n cleo hasta el punto m s alejado de la cola del cometa este valor se da en micras Fotograf a 1 Tambi n se realizaron mediciones de la morfolog a del n cleo Anderson et al 1994 que los clasifica por el niv
15. ltores mostraron una longitud media de la cola de los cometas de D E 62 32 5 86um la poblaci n floricultores una media de D E 25 61 3 1um y el grupo control present una de D E 23 46 4 15um estos resultados se presentan resumidos en la tabla 1 Se evidenci un incremento significativo en los valores del largo de la cola de los cometas analizados en la poblaci n de agricultores respecto a las poblaciones de floricultores y el grupo control p lt 0 001 resultados tambi n observados en trabajos anteriores de Garaj Vrhovac amp Zeljezic 1999 2000 2001 y 2002 Moller et al 2000 Elhajouji 2001 y Moretti et al 2002 Estos resultados se deben a que en la poblaci n de agricultores la exposici n ocupacional a plaguicidas en el cultivo es alta ya que fue evidente la falta de implementos adecuados para su protecci n y el poco acatamiento de las medidas b sicas de seguridad para el manejo de plaguicidas Estos hallazgos se pueden sustentar con los trabajos de Fairbairn et al 1995 y Shah et al 1997 quienes demostraron que algunos plaguicidas pueden inducir diferentes tipos de da o en el ADN y pueden ser detectados por el ensayo del cometa as mismo otros autores demostraron un efecto genot xico de varios plaguicidas a trav s de la misma prueba Clements et al 1997 Zeljezic Garaj Vrhovac 2001 Entre la poblaci n de floricultores y el grupo control no se encontraron diferencias significativa
16. no entre otros con un riesgo aumentado a linfomas No Hodgkin leucemia y mieloma m ltiple Orsi et al 2007 Merhi et al 2007 Mester et al 2006 De Roos et al 2003 sin embargo estudios epidemiol gicos sobre el riesgo de c ncer en agricultores generan resultados confusos Viel et al 1998 Blair et al 1998 de ah los efectos indeseables sobre la salud causados por ciertos plaguicidas en la poblaci n son de inter s especial Entre estos son sus efectos como genotoxicos incluyendo el c ncer y varias otras enfermedades gen ticas IARC 1991 Lebailly et al 1998 El biomonitoreo de poblaciones expuestas a potenciales cancer genos es un sistema temprano de advertencia para enfermedades gen ticas o c ncer lo que permite identificar factores de riesgo y a la vez adaptar medidas de control Kassie et al 2000 Muchas t cnicas son desarrolladas para vigilar las poblaciones humanas expuestas a genot xicos ambientales por ejemplo el biomonitoreo en humanos puede ser realizado usando diferentes marcadores gen ticos los marcadores citogen ticas como aberraciones cromos micas CA micron cleos MN y el intercambio de crom tides hermana ICHs est n entre los m s ampliamente usados para evaluar los efectos genot xicos de los plaguicidas Varias investigaciones aplican pruebas citogen ticas para evaluar el potencial genot xico de la exposici n ocupacional a plaguicidas en poblaciones expuestas de varios pa ses Da
17. o a agentes qu micos o f sicos que pudiesen ser t xicos para los humanos Las condiciones socioecon micas de las poblaciones fueron similares Cada una de las personas participantes del estudio en el momento de la toma de la sangre firmaron un consentimiento informado en el cual se les daba a conocer los objetivos del estudio y permit an el uso de su sangre con fines investigativos as mismo se tom un cuadro hem tico y se evalu el nivel de acetil colina esterasa Se excluyeron del estudio personas que se encontraban ingiriendo alguna clase de medicamentos o hab an sido expuestos a alg n tipo de radiaci n terap utica o diagn stica en los ltimos doce meses antes de la toma de sangre El estado de salud de todas las personas participantes fue evaluado a trav s de un examen m dico todos en general presentaban buena condici n f sica Los plaguicidas utilizados los detalles de la historia cl nica los datos personales y la informaci n sobre el consumo de alcohol y cigarrillo fueron obtenidos por medio de la aplicaci n de un cuestionario est ndar por parte de personal entrenado Ensayo del cometa La muestra de sangre fue tomada en Vacutainer con Heparina y consecutivamente fue almacenada en hielo y llevada al laboratorio El ensayo del cometa fue realizado en condiciones alcalinas de pH de acuerdo a Tice 2000 para tal fin sobre una l mina portaobjeto con una capa delgada de agarosa de punto de fusi n norma
18. of 101 individuals were obtained The comet assay was performed using total peripheral blood as well as isolated lymphocytes For this procedure the samples were embedded in agarose and set on a microscope slide exposed to a lyses solution with detergent and finally to electrophoresis with alkaline buffer Measuring the length of the comet tail DNA migration and the morphology of the comets the DNA damage was estimated In the exposed farmers the comet assay revealed a statistically Revista U D C A Actualidad amp Divulgaci n Cient fica 12 1 7 16 2009 significant increase in DNA damage P lt 0 001 versus floriculturists and the control group but no difference between these later two groups were observed The results suggest that the comet assay could be a reliable biomarker for occupational exposure to pesticides and that it could also be useful for similar studies Key words Genotoxicity Comet assay pesticides occupational exposure INTRODUCCI N Los plaguicidas han sido un aliado sobre todo para los pa ses en v as de desarrollo en sus esfuerzos a erradicar enfermedades end micas llevadas por insectos producir alimentos y proteger bosques sin embargo algunos son una fuente de riesgo potencial al ambiente y organismos que no son su objetivo Son varios los estudios que relacionan la exposici n a ciertos plaguicidas solos y en mezclas organofosforados clordano dieldrin aldrin dicamba atrazina y linda
19. omet assay Environ Mol Mutagen 29 4 277 288 COMUNIDAD ANDINA CAN Decisi n 436 2002 Manual T cnico Andino para el registro y control de pesticidas qu micos de uso agr cola Lima Per CAN 296 de Junio de 2002 DAVIES H W KENNEDY S M TESCHKE K QUINTANA PJ 1998 Cytogenetic analysis of South Asian berry pickers in British Columbia using the micronucleus assay in peripheral lymphocytes Mutat Res 416 1 101 113 DE ROOS Ads ZAHM S H CANTOR K P WEISENBURGER D D HOLMES F F BURMEISTER L F BLAIR A 2003 Integrative assessment of multiple pesticides as risk factors for non Hodgkin s lymphoma among men Occup Environ Med 60 e11 ELHAJOUJI A 2001 Use of the alkaline comet assay for industrial genotoxicity screening Food Chemical Tox 39 8 843 858 FAIRBAIRN D OLIVE PL O NEILL K L 1995 The comet assay a comprehensive review Mutat Res 339 1 37 59 GARAJ VRHOVAG V ZELJEZIC D 1999 Chromosomal aberrations and frecuency of micronuclei in workers employed in pesticides production Biologia 54 707 712 GARAJ VRHOVAC V ZELJEZIC D 2000 Evaluation of DNA damage in workers occupationally exposed 14 Articulo Cientifico Mu oz Aristiz bal A F Genotoxicidad de plaguicidas to pesticides using single cell gel electrophoresis SCGE assay Pesticide genotoxicity revealed by comet assay Mutat Res 469 2 279 285 GARAJ VRHOVAC V ZELJEZIC D 2001 Cytog
20. po control El grupo de agricultores de papa y de cebolla de bulbo fue constituida por 33 trabajadores que laboraban en ambos cultivos realizando actividades de siembra cosecha y aplicaci n de plaguicidas entre las m s importantes Esta poblaci n estuvo formada por 18 hombres y 15 mujeres con promedios de edad de 28 1 a os y 34 4 a os respectivamente quienes tienen una media de 15 1 a os dedicados a esta actividad estos son cultivos abiertos y se encuentran ubicadas en las veredas de P ramo Centro Patagui Tibaquir y Valle en el municipio de Samac Boyac en el centro de Colombia La poblaci n de floricultores fue constituida por 35 trabajadores 18 hombres y 17 mujeres con promedios de edad de 32 4 y 35 a os respectivamente empleados en diferentes secciones de dos empresas floricultoras en la que se produce alstroemeria y pomp n y presentan una media de 7 6 a os trabajando en estas empresas Los cultivos se encuentran en el municipio de Madrid Cundinamarca y el proceso de cultivo se realiza bajo cubierta las principales actividades de estos trabajadores son el cuidado de los cultivos la aplicaci n de plaguicidas y el empaque de flores El grupo control estuvo compuesto por 33 personas 15 mujeres y 18 hombres residentes en las poblaciones donde se encuentran ubicados los cultivos quienes no presentaban ninguna exposici n ocupacional a plaguicidas adem s no ten an antecedentes de exposici n a plaguicidas
21. resaltar que el 80 46 de los n cleos de los agricultores present un nivel de da o alto contrastando con los floricultores y grupo control en quienes se observ niveles de da o medio 61 37 y bajo 56 74 respectivamente Es importante resaltar la diferencia entre los resultados de los floricultores y el grupo control pues al utilizar este par metro de medici n se muestra una diferencia m s marcada aunque no es altamente significativa su aumento es evidencia de exposici n constante que debe ser analizado m s cuidadosamente con otras herramientas m s espec ficas En este estudio no se encontraron diferencias significativas cuando fueron comparados los resultados del ensayo del cometa entre hombres y mujeres en cada poblaci n p gt 0 05 de acuerdo con lo publicado por G mez et al 1992 No se tiene evidencia que exista diferencia a nivel metab lico o de din mica de reparaci n de cidos nucle cos entre g neros adem s las condiciones en cada poblaci n para ambos g neros son similares y las diferentes actividades que se realizan al interior de los cultivos son ejecutadas independientemente del sexo Sin embargo respecto a otras t cnicas citogen ticas como micron cleos y aberraciones cromos micas algunos estudios han reportado diferencias significativas entre hombres y mujeres expuestos y no expuestos a plaguicidas Carbonell et al 1990 Los resultados en este estudio no detectaron efecto alguno de la ed
22. s encuestas As mismo al profesor Orlando Mart nez por la ayuda en el an lisis estad stico BIBLIOGRAF A LVAREZ MOYA C SANTERRE LUCAS A Z IGA GONZ LEZ G TORRES BUGAR N O PADILLA CAMBEROS E FERIA VELASCO A 2001 Evaluation of genotoxic activity of maleic hydrazide ethyl methane sulfonate and N nitroso diethylamine in Tradescantia Salud Publica Mex 43 563 569 ANDERSON D YU TW PHILLIPS B J SCHMEZER P 1994 The effect of various antioxidants and other modifying agents on oxygen radical generated DNA damage in human lymphocytes in the COMET assay Mutat Res 307 1 261 271 ANTONUCCI G A COLUS IM 2000 Chromosomal aberrations analysis in a Brazilian population exposed to pesticides Teratog Carcinog Mutag 20 2 265 272 BLAIR A CANTOR K P ZAHM S H 1998 Non Hodgkin s lymphoma and agricultural use of the insecticide lindane Am J Ind Med 33 82 87 BLASIAK J JALOSZYNSKI P TRZECIAK A SZYFTER K 1999 In vitro studies on the genotoxicity of the organophosphorus insecticide malathion and its two analogues Mutat Res 445 2 275 283 CARBONELL E PUIG M XAMENA N CREUS A MARCOS R 1990 Sister chromatid exchanges in lymphocytes of agricultural workers exposed to pesticides Mutagenesis 5 3 403 405 CLEMENTS C RALPH S PETRAS M 1997 Genotoxicity of selected herbicides in Rana catesbiana tadpoles using alkaline single cell electrophoresis c
23. s p 0 074 y los resultados muestran en general un nivel de da o en el ADN bajo lo cual es atribuible al uso adecuado de implementos de protecci n el acatamiento de las normas de seguridad y el uso de plaguicidas moderada y ligeramente t xicos en los cultivos de flores cabe resaltar que el peque o aumento de los resultados en el grupo de floricultores puede estar relacionado con cierta exposici n a sustancias t xicas y que debe ser tomada en cuenta en futuros estudios Los resultados de la morfolog a de los n cleos presentan igual tendencia que los obtenidos con la longitud de la cola del cometa el resumen de estos resultados se presentan en la tabla 1 Tabla 1 Valor promedio y desviaci n est ndar de la longitud del cometa medido en micras um y morfolog a del n cleo en los sujetos de las poblaci n en estudio Largo de la cola Porcentaje de n cleos en cada nivel de da o Agricultores 62 32 5 9 0 94 5 4 2 1149 4 16 38 9 6 80 46417 0 10 0 3 Floricultores 25 61NS 3 1 7 1742 1 25 3741 9 61 3741 9 6 09 1 2 Grupo Control 23 46NS 4 2 18 03 9 9 56 74 7 8 22 19413 9 3 05 2 Grado de da o Ninguno lt 5 Bajo 5 10 Medio 10 40 Alto 40 95 y Total gt 95 Diferencias estad sticamente significativas p lt 0 001 con respecto a las dem s poblaciones NS No presentan diferencias significativas p gt 0 074 Articulo Cientifico Mu oz Aristiz bal A F Genotoxicidad de plaguicidas Cabe
24. ssessment of genotoxic effects of chloropyriphos and acephate by the comet assay in mice leucocytes Mutat Res 516 1 139 147 ROJAS E L PEZ M C VALVERDE M 1999 Single cell gel electrophoresis assay methodology and applications J Chromatography 722 225 254 SHAH R G LAGUEUX J KAPUR S LEVALLOIS P AYOTTE P TREMBLAY M 1997 Determination of genotoxicity of the metabolites of pesticides guthion sencor lorox reglone daconil and admire by P32 postlabeling Mol Cell Biochem 169 177 184 SINGH N P COY M L TICE R SCHNEIDER E L 1988 A simple technique for quantification of low levels of DNA damage in individual cells Exp Cell Res 175 184 191 TICE R R 2000 Single Cell Gel Comet Assay Guidelines for In Vitro and In Vivo aspects of Genetic Toxicology Environ Mol Mutagen 35 206 221 TISCH M SCHMEZER P FAULDE M GROH A MAIER H 2002 Genotoxicity studies on permethrin DEET and diazinon in primary human nasal mucosal cells Eur Arch Otorhinolaryngol 259 3 150 153 VALVERDE M L PEZ A D L LOPEZ I SANCHEZ FORTOUL T I OSTROSKY REPETTO R BALIGA S S 1997 DNA damage in leukocytes and buccal and nasal epithelial cells of individuals exposed to air pollution in Mexico City Environ Mol Mutagen 30 2 147 152 VARONA M CARDENAS O CRANE C ROCHA S CUERVO G VARGAS J 2003 Cytogenetic alterations in field workers routinely exposed to pestici
25. vies et al 1998 Blasiak et al 1999 G mez Arroyo et al 2000 Zeljezic amp Garaj Vrhovac 2001 y en diferentes reportes de efectos genot xicos positivos en poblaciones expuestas a plaguicidas Garaj Vrhovac amp Zeljezic 1999 Antonucci amp Colus 2000 lvarez et al 2001 Tisch et al 2002 Rahman et al 2002 Varona et al 2003 asi como negativos Lucero et al 2000 Pastor et al 2001a b Este conflicto en los resultados de los biomonitoreos de plaguicidas prueba la heterogeneidad de la exposici n e g agricultores floricultores y trabajadores en la manufactura de plaguicidas los diferentes usos de los plaguicidas y las medidas de protecci n Durante los ltimos a os el ensayo del cometa tambi n llamado Electroforesis Alcalina en C lulas Individuales EACD increment su uso en estudios de biomonitoreo humano Esta t cnica descrita en primera instancia por Ostling amp Johanson 1984 y modificado por Singh et al 1988 y Olive et al 1988 es una t cnica sensible eficiente y f cil de hacer permitiendo observar el da o en el ADN de forma individual Este da o producido obedece a diferentes tipos de interacci n con los cidos nucleicos lo cual puede generar rupturas de cadena sencilla rupturas de cadena doble entrecruzamientos y sitios l biles al lcali La metodolog a permite evidenciar el efecto total de una o varias sustancias genot xicas sobre el ADN no discrimina en el efecto que puede ten
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