Evaluación de higiene por Bioluminiscencia - DePa
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1. 10 Hisopos de 3M pueden ser de superficie o para l quidos Clean Trace Equipo D E Lumin metro 3M _ UNI LITE Dise o general del experimento a Para hisopos de superficie Dado que contamos con un n mero limitado de hisopos se sugieren las siguientes pruebas por duplicado y llevando a cabo una prueba cada equipo Conviene hacerlas en orden para que todos vean cada resultado A Directamente de la mesa del laboratorio C Tabla de picar como est B De la mesa del laboratorio lavada D Tabla despu s de picar E Tabla lavada despu s de picar Picar el cilantro usando toda la superficie Conviene se alar que el muestreo de la tabla despu s de picar el cilantro se hace nicamente con fines did cticos ya que en la pr ctica no se hace la evaluaci n en una superficie que tiene residuos o suciedad visibles Lavar tabla Facultad de Qu mica UNAM 2 Semestre 2 de 2011 LABORATORIO DE MICROBIOLOG A DE ALIMENTOS Muestreo 0 Encender el Lumin metro y dejar que lleve a cabo su autocalibraci n el aparato indica cu ndo est listo 1 Colocar la plantilla en la superficie a muestrear abrir el hisopo y tomar la muestra mediante 10 trazos verticales y 10 horizontales en es espacio libre dentro de la plantilla como muestra la figura de la derecha 2 Introducir el hisopo a su estuche cerrar y presionar hacia abajo para liberar la soluci n de reactivos de la reacci n de bioluminiscencia2. agitar lateralmente 5 veces La muestra es estable hasta 30 min antes de activarla una vez activado el hisopo debe hacerse la lectura antes de 1 min 3 Introducir el hisopo al lumin metro cerrar la tapa presionar el bot n de lectura y registrar el dato El equipo puede almacenar una gran cantidad de lecturas cuando se ha dise ado un plan de muestreo y pueden descargarse a una PC Facultad de Qu mica UNAM 3 Semestre 2 de 2011 LABORATORIO DE MICROBIOLOG A DE ALIMENTOS 4 Una vez registrados todos los datos interprete los resultados utilizando la escala de la p gina 1 y comenten los resultados b Para hisopos de l quidos La diferencia radica en que este tipo de hisopos en vez de un recubrimiento fibroso en el extremo para recoger los residuos en la superficie muestreada tiene un dise o especial para que al sumergirlos en l quido se llenen con exactamente 500 uL En este caso se har n las siguientes determinaciones Enjuagar la mesa de trabajo sin lavar Enjuague de la mesa de trabajo despu s de lavar Enjuague de una tabla o utensilio sin lavar Enjuague del piso Enjuague de la tapa del bote de basura TOM Usualmente se aplican al agua de enjuague del equipo especialmente el que se sanitiza con m todo CIP cleaning in place Cuando se analizas superficies es necesario recolectar el agua de enjuague en un recipiente limpio por ejemplo un vaso de ppdos o bien muestrear con esponja est ril o torunda
3. de algod n impregnada en agua est ril se exprimen en un vaso limpio y luego se sumerge el hisopo en el l quido durante 3 4 seg Se regresa el hisopo a su estuche se activa se agita lateralmente 5 veces y se toma la lectura Otros objetos que se pueden muestrear con fines did cticos no se acostumbra hacerlo en la industria son el piso tel fonos celulares manijas de puertas directo y despu s de limpiar con toallitas desinfectantes etc Bibliograf a Felman P et al 2000 Bioluminiscencia Empresa Axonas Disponible en internet en www axonas com ar Hansen D Hilgenhoer M W Poop 2007 ATP bioluminescence for kitchen hygiene and Cleaning control of surgical instruments International Journal of Infection Control University Hospital Essen Germany 2007 Disponible a trav s de internet en http www i ic info article viewPDHInterstitial 3036 2220 3M Microbiology 2008 Technical Bulletin An overview of Rapid Hygiene Testing Using ATP Bioluminescence EUA 3M 2005 Manual t cnico del sistema de evaluaci n de higiene Biotrace UK Facultad de Qu mica UNAM 4 Semestre 2 de 2011
4. LABORATORIO DE MICROBIOLOG A DE ALIMENTOS EVALUACI N DE HIGIENE POR M TODOS R PIDOS O Vel zquez Madrazo K Rivera y J Alarc n Uno de los factores principales para asegurar la inocuidad de los alimentos es la higiene del equipo y superficies que est n en contacto con los productos en las plantas industriales Por ello se han desarrollado m todos r pidos para evaluar la higiene del equipo antes de iniciar la producci n de cada lote en la industria alimentaria Un grupo de estos m todos r pidos se basa en la determinaci n de ATP residual de microorganismos o alimentos mediante la reacci n de bioluminiscencia que ocurre en las luci rnagas Felman 2000 2 Luciferina ATP O Y gt Luciferasa Oxiluciferina AMP CO LUZ El m todo consiste en tomar una muestra de la superficie en evaluaci n mediante hisopo A continuaci n el hisopo se coloca en el recipiente de f brica y se activa la reacci n rompiendo la membrana que separaba el hisopo nuevo de los reactivos extractante luciferina y magnesio Al ponerse en contacto el ATP con los reactivos se genera luz que puede medirse en el aparato en este caso el 3M Clean Trace Tambi n se pueden usar esponjas para muestrear la superficie y en ese caso se emplea un hisopo para l quidos que absorbe una cantidad determinada del l quido exprimido de la esponja y luego se activa del mismo modo Este hisopo para l quidos tambi n pue
5. de usarse para muestrear directamente el agua del ltimo enjuague En todos los sistemas basados en esta reacci n la luz emitida por la muestra se mide mediante escalas arbitrarias que se estandarizan para que el usuario pueda tomar decisiones en cada industria particular a partir de los resultados El proceso de evaluaci n de higiene se ha estandarizado pr cticamente en todos los equipos para muestrear reas de 100 cm 10x10 cm con un hisopado de 10 trazos en un sentido y otros 10 trazos en sentido perpendicular En el sistema 3M Clean Trace la emisi n de luz se registra en unidades relativas de luz RLU por sus siglas en ingl s y se establecen los siguientes l mites generales de aceptaci n rechazo e Las superficies se consideran limpias si la lectura es lt 150 RLU e Se interpreta como precauci n de 150 a 299 RLU e Se considera no aceptable un resultado gt 300RLU 3M 2005 Facultad de Qu mica UNAM 1 Semestre 2 de 2011 LABORATORIO DE MICROBIOLOG A DE ALIMENTOS Objetivo Aplicar la detecci n de ATP por bioluminiscencia para evaluar la higiene de una superficie Material para el grupo Dos tablas para picar 2 manojos de cilantro Dos mesas del laboratorio 2 cuchillos con buen filo 10 Plantillas de opalina o cartulina Detergente lavatrastes de 12x12 cm con recuadro interno 4 esponjas de 10x10 cm previamente Desinfectante de uso en alimentos esterilizadas y recipiente para prepararlo
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