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SwabSolution Kit Manual Tecnico, TMD037 (Espanol)

1. Recomendaciones para Plexor HY System msonara nenia Ts PEOdUuctos TelacIONAOS 2 da 10 1 Descripci n El SwabSolution Kit se usa para un r pido procesamiento de hisopos antes de la amplificaci n al emplear PowerPlex Systems para determinar el genotipo STR humano El SwabSolution Kit contiene el SwabSolution Reagent que se usa para generar un extracto de hisopo bucal que se agrega a la reacci n del PowerPlex System Adem s el SwabSolution Kit contiene un 5X AmpSolution Reagent que se debe agregar a los PowerPlex Systems que no sean compatibles con la amplificaci n directa sin esta modificaci n a la mezcla de reacci n Tabla 1 Sistemas dependientes de AmpSolution Estos PowerPlex Systems no generar n un perfil completo de STR a partir de extractos de hisopos sin la adici n de este 5X AmpSolution Reagent PowerPlex Systems dependiente PowerPlex Systems independiente de AmpSolution de AmpSolution PowerPlex 16 System PowerPlex 18D System PowerPlex 16 HS System PowerPlex 21 System PowerPlex ESX Systems PowerPlex Y23 System PowerPlex ESI Systems PowerPlex CS7 System Custom Tabla 1 Compatibilidad de amplificacion directa de PowerPlex Systems 1 Otros PowerPlex Systems pueden ser compatibles pero no se han sometido a pruebas Los sistemas que no est n dise ados originalmente para amplificaci n directa requieren la incorporaci n del 5X AmpSolution Reagent a l
2. completamente al colocarlo en ba o Mar a a 37 C y mezclarlo al invertirlo suavemente El SwabSolution Reagent descongelado deber a almacenarse en el refrigerador a 2 10 C No almacene los reactivos en la puerta del refrigerador en donde puede fluctuar la temperatura No vuelva a refrigerar evite varios ciclos de congelamiento descongelamiento ya que esto puede reducir la actividad SwabSolution Reagent activo arrastrado desde los extractos de hisopo hacia la reacci n del PowerPlex System Aseg rese de que el calentador haya alcanzado 70 C 90 C si se usa una placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml y que las muestras se hayan incubado durante el periodo total de 30 minutos La incubaci n durante periodos m s cortos puede derivar en inactivaci n incompleta del SwabSolution Reagent No use una incubadora para incubar tubos o placas Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 www promega com Nro de pieza TMD037 Pagina 6 Impreso en Estados Unidos Revisado en 6 12 S ntomas Causas y comentarios O La transferencia de calor es ineficiente y derivar en un mal Y desempe o Use nicamente un calentador para mantener una Promega transferencia de calor eficaz Hemos sometido a pruebas los tiempos de incubaci n de 60 minutos y no observamos diferencia alguna en el
3. de ADN del Promega Manual t cnico apropiado del PowerPlex System para la configuraci n de la mezcla de amplificaci n El PowerPlex 18D System se muestra como un ejemplo 1 Prepare la PowerPlex 18D PCR Amplification Mix de la forma siguiente Componente Volumen por reacci n Agua grado de amplificaci n 13 ul PowerPlex D 5X Master Mix 5 ul PowerPlex 18D 5X Primer Pair Mix 5 ul Volumen total 23 ul Agregue agua grado de amplificaci n al primer tubo luego agregue la PowerPlex D 5X Master Mix y la PowerPlex 18D 5X Primer Pair Mix Agite por completo antes de agregar a la placa de amplificaci n 2 Por cada muestra agregue 2 ul del extracto de hisopo preparado en la Secci n 3 a 23 ul de PowerPlex 18D PCR Amplification Mix que se prepar en el Paso 1 para un volumen de reacci n final de 25 ul 3 Selle la placa procese con centrifugaci n r pidamente y realice un recorrido de ciclo t rmico por 27 ciclos vea la Tabla 2 al utilizar las condiciones que se describen en la secci n Ciclos t rmicos del Manual t cnico del PowerPlex 18D System Nro TMD031 4 B Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution Siga la secci n de amplificaci n directa de ADN desde hisopos de ADN del Manual t cnico apropiado del PowerPlex System para la configuraci n de la mezcla de amplificaci n El PowerPlex 16 System se muestra como un ejemplo 1 Prepare la mezcla
4. de amplificaci n PowerPlex 16 HS PCR de la manera siguiente Agregue agua grado de amplificaci n al primer tubo luego agregue la PowerPlex HS 5X Master Mix PowerPlex 16 HS 10X Primer Pair Mix y el 5X AmpSolution Componente Volumen por reacci n Agua grado de amplificaci n 10 5 ul PowerPlex HS 5X Master Mix 5 0 ul PowerPlex 16 HS 10X Primer Pair Mix 2 5 ul 5X AmpSolution Reagent 5 0 ul Volumen total 23 ul Reagent Agite por completo antes de agregar a la placa de amplificaci n Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 Www promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMD037 Revisado en 6 12 P gina 5 O Promega 4 B Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution continuaci n 2 Por cada muestra agregue 2 ul del extracto de hisopo preparado en la Secci n 3 a 23 ul de PowerPlex 16 HS PCR Amplification Mix que se prepar en el Paso 1 para un volumen de reacci n final de 25 pul 3 Selle la placa procese con centrifugaci n r pidamente y realice el recorrido de ciclo t rmico seg n se describe en la secci n Ciclo t rmico del Manual t cnico Nro TMD022 del PowerPlex 16 HS System pero al usar el n mero de ciclos indicado en la Tabla 2 4 C Electroforesis capilar Siga los protocolos de detecci n est nda
5. Technical Manual SwabSolution Kit INSTRUCCIONES PARA UTILIZAR EL PRODUCTO DC8271 IMPRESO EN ESTADOS UNIDOS Revisado en 6 12 Nro de pieza TMD037 SwabSolution Kit O Toda la bibliograf a t cnica est disponible en Internet en el sitio www promega com protocols Visite el sitio web para asegurarse de estar utilizando la versi n m s actualizada de este manual t cnico Comun quese con el servicio t cnico de Promega si tiene alguna pregunta acerca del uso de este sistema Correo electr nico genetic promega com 1 DOS CHP CLOM ecseri A E dc 1 2 Componentes y condiciones de almacenamiento del producto 2 3 Protocolo para procesamiento de hisopos bucales ooninidinnioninm 2 A Procesamiento de hisopos bucales en tubos i B Procesamiento de hisopos bucales en una placa para pocillo profundo 3 4 Protocolo para amplificaci n y detecci n de ADN por medio de PowerPlex Systems ccciionisiiiianitc tias 3 A Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems independientes de AmpSolution naciones 5 B Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution oo cece 5 E BNE CtrOroresis Caplan cian Re 6 5 Resoluci n de problemas cssssscssscsseessseessseecsneessnsecsnsessnsecsnseccnscesnsescescessssecnscessesecsnse 6 p ACTA CS acta oeiee aa a Aana A Recomendaciones para ensayo de cuantificaci n de dsADN fluorescente B
6. a mezcla de amplificaci n Se necesita optimizaci n y validaci n del laboratorio individual Comun quese con el servicio t cnico de Promega para obtener m s informaci n Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMD037 Revisado en 6 12 P gina 1 Componentes del producto y condiciones de almacenamiento Producto Tama o Nro de Cat SwabSolution Kit 100 preparaciones DC8271 No debe ser utilizado para diagn stico m dico Este sistema contiene los reactivos necesarios para procesar 100 muestras Incluye 100ml SwabSolution M Reagent 500 ul 5X AmpSolution Reagent Condiciones de almacenamiento A su arribo el SwabSolution Reagent debe descongelarse por completo al colocarlo en bafio Maria a 37 C y mezclarlo al invertirlo suavemente Luego de descongelarlo debe almacenarse a 2 10 C El 5X AmpSolution Reagent debe descongelarse por completo en ba o Mar a a 37 C o a temperatura ambiente y mezclarse mediante agitaci n antes de almacenarlo a 2 10 C El reactivo puede estar turbio despu s de su descongelamiento o almacenamiento a 4 C Si ocurre esto caliente el buffer brevemente a 37 C y luego ag telo hasta que est claro No almacene los reactivos en la puerta del refrigerador en donde puede fluctuar la temperatura Almac
7. ad Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Nro de pieza TMD037 Impreso en Estados Unidos P gina 10 Revisado en 6 12 2012 Promega Corporation All Rights Reserved PowerPlex and Plexor are registered trademarks of Promega Corporation AmpSolution PunchSolution SwabSolution and QuantiFluor are trademarks of Promega Corporation ABI PRISM and MicroAmp are registered trademarks of Applera Corporation GeneAmp is a registered trademark of Roche Molecular Systems Inc Hi Di and POP 4 are trademarks of Applera Corporation PicoGreen is a registered trademark of Molecular Probes Inc Quant iT is a trademark of Molecular Probes Inc Products may be covered by pending or issued patents or may have certain limitations Please visit our Web site for more information All prices and specifications are subject to change without prior notice Product claims are subject to change Please contact Promega Technical Services or access the Promega online catalog for the most up to date information on Promega products Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 www promega com Impreso en Estados Unidos Revisado en 6 12 Nro de pieza TMD037 Pagina 11
8. ado Incluya un reactivo vac o como control negativo cuando procese las muestras Artefactos de amplificaci n de STR La amplificaci n de extractos de hisopo con altas concentraciones de ADN puede causar picos de artefactos debido a exceso de amplificaci n lo que derivar a en saturaci n de la se al en el instrumento CE Utilice 2 ul del extracto del hisopo recomendado por cada reacci n de 25 ul El uso de m s de 2 ul en una reacci n de 25 ul o el uso de 2 ul con un volumen de reacci n menor puede derivar en exceso de amplificaci n y saturaci n de la se al Si se satura la se al repita la amplificaci n con menos extracto de hispo o un n mero menor de ciclos para reducir alturas de picos Artefactos de amplificaci n de STR Mucho ADN de plantilla puede ocasionar que los artefactos aparecen una base m s peque a que el alelo Esto se debe a la adici n incompleta del residuo 3 de terminal A Repita la amplificaci n con menos extracto de hispo o un n mero menor de ciclos Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 www promega com Impreso en Estados Unidos Revisado en 6 12 Nro de pieza TMD037 P gina 7 Pro S ntomas Resoluci n de problemas continuaci n Causas y comentarios La amplificaci n de la plantilla de exceso para un n mero determinado de ciclos deriv en sobrecarga del
9. de TE buffer m s 100 ul de una diluci n 1 200 del reactivo de tinte de fijaci n de ADN fluorescente El volumen del extracto del hisopo no deber a exceder 5 del volumen de reacci n total gt 5 del volumen de reacci n interferir con el total fluorescente de la cuantificaci n de dsDNA En este volumen de extracto de hisopo es probable que la concentraci n de ADN est dentro del rango lineal tanto del QuantiFluor dsDNA System como del Quant T M PicoGreen dsDNA Reagent 6 B Recomendaciones para Plexor HY System La cantidad de ADN gen mico humano en los extractos de hisopo bucal pueden cuantificarse al usar el Plexor HY System si se agrega 5X AmpSolution Reagent a la reacci n El SwabSolution Reagent inhibir la amplificaci n de qPCR si el 5X AmpSolution Reagent no se agrega a la reacci n Incluye el 5X AmpSolution Reagent en las reacciones de curva est ndar de ADN as como las amplificaciones de qPCR del extracto de hisopo bucal Modifique la mezcla de reacci n Plexor HY en la secci n de configuraci n de reacci n del Plexor HY System para el Manual t cnico Nro TM293 de Applied Biosystems 7500 y 7500 FAST Real Time PCR Systems de la manera siguiente Componente Volumen por 20 ul de reacci n Agua grado de amplificaci n 3 pl Plexor HY 2X Master Mix 10 ul Plexor HY 20X Primer IPC Mix 1 ul 5X AmpSolution Reagent 4ul Volumen total 18 ul Normalmente se agregan 2 ul de extracto a 18
10. desempe o en comparaci n con una incubaci n de 30 minutos Si usa un AmpSolution Dependent PowerPlex System consulte la Tabla 1 aseg rese de que la mezcla de amplificaci n de la PCR tambi n haya contenido AmpSolution Reagent La omisi n del AmpSolution Reagent de estas reacciones de amplificaci n del PowerPlex System derivar en una amplificaci n fallida Si el ADN de control positivo suministrado con el PowerPlex System fall en amplificar revise para comprobar que se haya agregado la cantidad correcta de ADN de control positivo a la reacci n de amplificaci n Debido a los n meros de ciclo menores utilizados con extractos de hisopos es necesario aumentar la masa de ADN de control positivo Con ayuda de las condiciones de ciclos ac suministradas recomendamos usar la cantidad de ADN de control 2800M que se muestran en la Tabla 2 Esta masa de ADN deber a reducirse si el n mero de ciclos utilizado se aumenta y disminuye si el n mero de ciclos se aumenta Aumente o disminuya al doble la masa de ADN de control 2800M para cada disminuci n o aumento de un ciclo respectivamente Vea tambi n la secci n Resoluci n de problemas del manual t cnico correspondiente al PowerPlex System que se est usando para enterarse de m s razones por las cuales fall en amplificarse el ADN de control positivo Picos adicionales visibles en un o todos los canales de color El extracto del hisopo estaba contamin
11. e un ciclo en el n mero de ciclos requerir un aumento del doble en la masa de la plantilla de ADN amplificada en tanto que un aumento de un ciclo requerir una reducci n del doble Coloque la placa de amplificaci n en el termociclador y comience el programa de ciclos t rmicos tan pronto como se agregue el extracto de hisopo a todos los pocillos que contengan la mezcla de amplificaci n PowerPlex System PCR El almacenamiento prolongado de reacciones acumuladas antes de los ciclos puede derivar en un mal rendimiento es decir alturas de bajo pico para amplicones mayores Tabla 2 N meros de ciclos y cantidades de ADN de control 2800M recomendados para reacciones de PowerPlex System N mero de Cantidad de ADN de PowerPlex System ciclos control 2800M ng PowerPlex 21 System 25 10 PowerPlex 16 System 10 18 5 PowerPlex 16 HS System 10 18 5 PowerPlex 18D Systems 27 5 PowerPlex ESX System 26 5 PowerPlex ESI System 26 5 PowerPlex CS7 System Custom 28 5 PowerPlex Y23 System 26 5 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 www promega com Nro de pieza TMD037 Impreso en Estados Unidos Pagina 4 Revisado en 6 12 4 A Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems independientes E de AmpSolution o Siga la secci n de amplificaci n directa de ADN desde hisopos
12. enar los reactivos en la puerta del refrigerador puede poner en riesgo la estabilidad TE AmpSolution Reagent se usa con PowerPlex Systems que no son compatibles con la amplificaci n directa vea la Tabla 1 No se requiere el reactivo para sistemas de amplificaci n directa tales como los sistemas PowerPlex 18D PowerPlex 21 y PowerPlex Y23 Protocolo para procesamiento de hisopos bucales Materiales que deber suministrar el usuario e ClickFit Microtube 1 5 ml Nro de cat V4741 u otro microtubo de 1 5 ml con tapa con cierre bajo llave o enroscable o Placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml Nro de cat V6781 e Calentador colocado a 70 C para tubos de 1 5 ml o a 90 C para placas rofundas para pocillo cuadrado de 2 2 ml e El procesamiento de hisopos bucales en una placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml requiere el Adaptador para calentador Nro de cat A2661 que se asienta en la parte superior del calentador y permite una eficiente transferencia de calor hacia la placa Cuando use el formato de tubo aseg rese de usar los microtubos de 1 5 ml con tapas con cierre bajo llave o enroscables tales como ClickFit Microtube de 1 5 ml Nro de cat V4741 para garantizar que las tapas no se abran por presi n acumulada durante la incubaci n de 70 C Cuando use el formato de Placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml coloque el calentador a 90 C para garantizar que el contenido de cada pocillo a
13. lcance 70 C No use una incubadora colocada a 70 C para incubar tubos o placas La transferencia de calor es ineficiente y derivar en un mal desempe o Use nicamente un calentador para mantener una transferencia de calor eficaz Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 www promega com Nro de pieza TMD037 Pagina 2 Impreso en Estados Unidos Revisado en 6 12 3 A Procesamiento de hisopos bucales en tubos O A 1 Coloque el calentador para que sea capaz de aceptar tubos de 1 5 ml a 70 C y perm tale que se caliente hasta esa temperatura Promega 2 Coloque la cabeza del hisopo bucal en un tubo de 1 5 ml 3 Agregue 1 ml de SwabSolution Reagent a cada cabeza de hisopo bucal 4 Coloque el tubo en un bloque de calor e incube la muestra a 70 C durante 30 minutos Notas 1 No hay necesidad de agitar despu s de agregar SwabSolution Reagent antes de la incubaci n o despu s de que la incubaci n de 30 minutos est completa 2 Los extractos de hisopo bucal pueden almacenarse a 4 C Las pruebas internas de estabilidad realizadas en Promega han comprobado que el ADN puede amplificarse a partir de extractos que se hayan almacenado durante seis meses a 4 C 3 B Procesamiento de hisopos bucales en una placa para pocillo profundo 1 Coloque el Heat Block Adapter en un calentador q
14. lcanzado 70 C 90 C si se usan placas profundas para pocillo cuadrado de 2 2 ml y que las muestras se hayan incubado durante el periodo total de 30 minutos La incubaci n durante periodos m s cortos puede derivar en inactivaci n incompleta del SwabSolution Reagent No use una incubadora para incubar tubos o placas La transferencia de calor es ineficiente y derivar en un mal desempe o Use nicamente un calentador para mantener una transferencia de calor eficaz SwabSolution Reagent inactivo El SwabSolution Reagent se debe descongelar completamente al colocarlo en ba o Mar a a 37 C y mezclarlo al invertirlo suavemente El SwabSolution Reagent descongelado deber a almacenarse en el refrigerador a 2 10 C No almacene los reactivos en la puerta del refrigerador en donde puede fluctuar la temperatura No vuelva a refrigerar evite varios ciclos de congelamiento descongelamiento ya que esto puede reducir la actividad Puede existir una variabilidad significativa de individuo a individuo en a muestra la acumulaci n de c lulas en hisopos bucales Esto aparecer como variabilidad en las alturas de picos entre extractos de muestras El proceso de extracci n maximiza la recuperaci n de ADN amplificable de hisopos bucales pero no normaliza la cantidad de ADN presente Si la variabilidad es extrema cuantifique el ADN de los extractos de hisopos al usar un m todo de cuantificaci n de ADN de doble cadena y base fluorescen
15. o en 6 12 P gina 3 E 4 Protocolo para amplificaci n y detecci n de ADN por medio de PowerPlex A Systems continuaci n Promega e calentador en seco de 95 C ba o de agua o termociclador e centrifugador compatible con placas de 96 pocillos e puntas para pipetas resistentes al aerosol e termociclador GeneAmp PCR System 9700 Applied Biosystems e 3100 3130 3130 1 3500 o 3500xL serie capilar e pol mero de rendimiento optimizado 4 POP 4 e Placa ptica de 96 pocillos MicroAmp de 0 2 ml y septa para electroforesis capilar e formamida Hi Di Applied Biosystems Nro de Cat 4311320 La Tabla 2 detalla los n meros de ciclos sugeridos como punto de partida para optimizaci n El n mero de ciclos debe optimizarse al inicio por ejemplo un ciclo m s o menos que los que se indican en la Tabla 2 ya que los distintos tipos de hisopos bucales pueden rendir diferentes rangos de concentraciones de ADN Esto es especialmente importante si las cantidades de ADN no est n normalizadas consulte la Secci n 6 Recomendamos incluir un control positivo por ejemplo ADN de control 2800M en la misma placa que las amplificaciones de perforaciones procesadas Sugerimos usar la cantidad de plantilla de ADN de control 2800M que se indica para cada PowerPlex System en la Tabla 2 Un cambio en el n mero de ciclos requerir cambiar la masa del ADN de control de 2800M para mantener alturas de picos comparables Una reducci n d
16. r en la secci n Configuraci n de instrumentos y Preparaci n de muestras del Manual t cnico apropiado del PowerPlex System para preparar muestras para inyecci n en el ABI PRISM 3100 o 3100 Avant o el 3130 3130x1 3500 o 3500xL Genetic Analyzer de Applied Biosystems Las sensibilidades del instrumento a la electroforesis capilar CE pueden variar Es posible que se deba ajustar el tiempo y el voltaje de inyecci n 5 Resoluci n de problemas La siguiente secci n de Resoluci n de problemas es espec fica para el SwabSolution Kit Para obtener informaci n adicional sobre resoluci n de problemas concerniente al PowerPlex System espec fico que est empleando consulte la secci n de resoluci n de problemas del Manual t cnico de ese PowerPlex System que se encuentra disponible en l nea en www promega com protocols Si tiene preguntas que no se hayan resuelto aqu ni en la secci n de resoluci n de problemas del Manual t cnico del PowerPlex System comun quese con su oficina local de Promega o con su distribuidor La informaci n de contacto est disponible en www promega com Correo electr nico genetic promega com Sintomas Causas y comentarios Picos de alelos d biles o ausentes Acumulaci n insuficiente de la muestra El desprendimiento y recolecci n de las c lulas del donante fue variable Aumente el n mero de ciclos SwabSolution Reagent inactivo El SwabSolution Reagent se debe descongelar
17. sistema capilar al recibir la inyecci n electrocin tica Exceso de ADN en el sistema capilar es dif cil de mantener en un estado desnaturalizado de cadena sencilla Alguna parte del ADN de cadena sencilla se renaturaliza y se vuelve de cadena doble El ADN de doble cadena migra m s r pido que el ADN de una cadena durante la electroforesis y aparece como picos de sombra que migran delante de los picos principales Si esto ocurre en un locus heterocigoso es posible observar la presencia de dos picos con sombra que difieren en tama o en aproximadamente la misma distancia que los alelos de una cadena Repita la amplificaci n con menos extracto de hispo o un n mero menor de ciclos Falta de equilibrio de la altura de picos Variabilidad extrema en alturas de picos de muestra El exceso de ADN en la reacci n de amplificaci n del PowerPlex System puede ocasionar una falta tal de equilibrio de locus a locus dentro de un canal de tinte que las alturas de picos en los locus m s peque os sean mayores que las de los locus m s grandes efecto de pendiente de esqu Use menos extracto de hisopo o reduzca el n mero de ciclos El SwabSolution Reagent activo arrastrado desde los extractos de hisopo hacia la reacci n del PowerPlex System Los locus m s grandes son los m s susceptibles al arrastre del SwabSolution Reagent yse dejar n fuera antes que los locus m s peque os Aseg rese de que el calentador haya a
18. te dsADN para determinar la cantidad de ADN total o un m todo de cuantificaci n con base qPCR para ADN humano consulte la Secci n 6 Los valores de cuantificaci n pueden usarse para normalizar las Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 www promega com Nro de pieza TMD037 Pagina 8 Impreso en Estados Unidos Revisado en 6 12 S ntomas Causas y comentarios E cantidades de plantilla de entrada con el fin de minimizar la 3 variaci n de la intensidad de la se al Promega 6 Ap ndice El extracto de hisopo bucal generado con el SwabSolution Reagent puede agregarse directamente a una reacci n del PowerPlex System Sin embargo es posible que algunos laboratorios deseen cuantificar el ADN para normalizar la masa de ADN de entrada Hemos evaluado la compatibilidad de estos extractos con ensayos de cuantificaci n total de ADN basado en fluorescencia por ejemplo el QuantiFluor dsDNA System y el Quant iT PicoGreen dsDNA Reagent y ensayos de qPCR especificos de ADN humano por ejemplo el Plexor HY System 6 A Recomendaciones para ensayo de cuantificaci n de dsADN fluorescente Hasta 10 ul de extracto de hisopo bucal generado con SwabSolution Reagent puede agregarse a un ensayo de cuantificaci n 200 ul de dsADN fluorescente normalmente 10 ul de muestra de ADN en 90 ul
19. ue est fijada a 90 C La temperatura del calentador debe alcanzar 90 C antes de que inicie el protocolo 2 Coloque cada cabeza de hisopo bucal en un pocillo vac o de una Placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml 3 Agregue 1 ml de SwabSolution Reagent a cada cabeza de hisopo bucal 4 Coloque la Placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml en el Heat Block Adapter precalentado No es necesario sellar la placa Nota No hay necesidad de agitar despu s de agregar SwabSolution Reagent antes de la incubaci n o despu s de que la incubaci n de 30 minutos est completa 5 Incube la placa profunda para pocillo cuadrado de 2 2 ml durante 30 minutos Nota Los extractos de hisopo bucal pueden almacenarse a 4 C Las pruebas internas de estabilidad realizadas en Promega han comprobado que el ADN puede amplificarse a partir de extractos que se hayan almacenado durante seis meses a 4 C 4 Protocolo para amplificaci n y detecci n de ADN por medio de PowerPlex Systems Materiales que deber suministrar el usuario e PowerPlex System e Placa ptica de reacci n de 96 pocillos MicroAmp de 0 2 ml Applied Biosystems para amplificaci n e hielo picado o ba o de hielo Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMD037 Revisad
20. ul de mezcla de reacci n Plexor HY para que resulte el volumen final de 20 ul de reacci n Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU Numero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMD037 Revisado en 6 12 P gina 9 O 7 Productos relacionados w Producto Tama o Nro de Cat Promega PunchSolution Kit 100 prep DC9271 5X AmpSolution Reagent 500 ul DM1231 PowerPlex 18D System 200 reactivos DC1802 800 reactivos DC1808 PowerPlex 16 HS System 100 reactivos DC2101 400 reactivos DC2100 PowerPlex 16 System 100 reactivos DC6531 400 reactivos DC6530 PowerPlex 21 System 200 reactivos DC8902 PowerPlex ESX 16 System 100 reactivos DC6711 400 reactivos DC6710 PowerPlex ESX 17 System 100 reactivos DC6721 400 reactivos DC6720 PowerPlex ESI 16 System 100 reactivos DC6771 400 reactivos DC6770 PowerPlex ESI 17 Pro System 100 reactivos DC7781 400 reactivos DC7780 PowerPlex CS7 System Custom 100 reactivos X6613 PowerPlex Y23 System 50 reactivos DC2305 200 reactivos DC2320 Plexor HY System 200 reactivos DC1001 800 reactivos DC1000 QuantiFluor dsDNA System 1 ml E2670 ClickFit Microtube 1 5 ml Paquete de 1000 V4741 No debe ser utilizado para diagn stico m dico Promega Corporation 2800 Woods Hollow Ro

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