Kit PunchSolution Manual Tecnico, TMD038
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1. Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Nro de pieza TMD038 P gina 6 Impreso en Estados Unidos 5 12 Sintomas Picos adicionales visibles en uno o todos los canales de color Causas y comentarios E protocolo suministrado ac recomendamos utilizar la o cantidad de ADN de control 2800M indicado en la Tabla 2 por cada reacci n de amplificaci n de 25 ul Esta masa de Promega ADN debe reducirse si el n mero de ciclos se aumenta y se debe disminuir si el n mero de ciclos aumenta Recomendamos aumentar o disminuir al doble la masa de ADN de control de 2800M para cada disminuci n o incremento de un ciclo respectivamente Vea tambi n la secci n Resoluci n de problemas del manual t cnico correspondiente al PowerPlex System que se est usando para enterarse de m s razones por las cuales fall en amplificarse el ADN de control positivo La perforaci n procesada de 1 2 mm result contaminada La amplificaci n de perforaciones procesadas con altas concentraciones de ADN puede causar picos de artefactos debido a exceso de amplificaci n lo que derivar a en saturaci n de la se al en el CE Recomendamos una perforaci n de 1 2 mm por cada reacci n de 25 ul de amplificaci n El uso de un tama o mayor de perforaci n o un volumen menor de reacci n puede derivar en exceso de amplificaci n y saturaci n de la se al Si la se al se satura repita la amplificaci n con una tarjeta de perforaci n2. m s peque a un volumen de reacci n mayor o un n mero de ciclos menor para reducir las alturas de los picos La amplificaci n de la plantilla de exceso para un n mero determinado de ciclos puede derivar en sobrecarga del sistema capilar al recibir la inyecci n electrocin tica La presencia de excesivo ADN en el sistema capilar dificulta mantener el ADN en un estado desnaturalizado de cadena sencilla Alguna parte del ADN de cadena sencila se renaturaliza y se vuelve de cadena doble El ADN de doble cadena migra m s r pido que el ADN de una cadena durante la electroforesis capilar y aparece como picos con sombra que migran delante de los picos principales Si esto ocurre en un locus heterocigoso a veces es posible ver dos picos con sombra que difieren en tama o entre s en aproximadamente la misma distancia que los alelos de una cadena Falta de equilibrio de la altura de picos El exceso de ADN en las reacciones del PowerPlex puede ocasionar una falta tal de equilibrio de locus a locus dentro de un canal de tinte que las alturas de picos en los locus m s peque os sean mayores que las de los locus m s grandes efecto de pendiente de esqu Use una perforaci n m s peque a un volumen de reacci n mayor o un n mero menor de ciclos PunchSolution Reagent activo arrastrado hacia la reacci n del PowerPlex System Los locus m s grandes son los m s susceptibles a arrastre del PunchSolution Reagent
3. termociclador GeneAmp PCR System 9700 Applied Biosystems 3100 3130 3130x1 3500 o 3500xL serie capilar Pol mero de rendimiento optimizado 4 POP 47M formamida Hi Di Applied Biosystems Nro de Cat 4311320 Nota Aunque los PowerPlex Systems de amplificaci n directa es decir los PowerPlex 18D 21 e Y23 Systems y los m s recientes PowerPlex Systems es decir los PowerPlex 16 HS ESX y ESI Systems son lo suficientemente resistentes para encargarse del arrastre de hemoglobina desde perforaciones de sangre las versiones anteriores de PowerPlex Systems tales como los PowerPlex 16 e Y Systems se ven inhibidos por la presencia de hemoglobina en las perforaciones de sangre aun cuando se use 5X AmpSolution M Reagent Por este motivo no recomendamos usar el PowerPlex 16 System para perforaciones a partir de tarjetas de sangre Recomendamos incluir un control positivo por ejemplo ADN de control 2800M en la misma placa que las amplificaciones de perforaciones procesadas Sugerimos agregar la cantidad de plantilla de ADN de control 2800M por cada reacci n de 25 ul que est indicada para cada PowerPlex System en la Tabla 2 en un volumen de 1 yl El aumento en el volumen de reacci n de 25 ul a 26 ul que se produce en las amplificaciones de control positivo no tiene efecto en la reacci n Un cambio en el n mero de ciclos requerir cambiar la masa de ADN de control 2800M para mantener las alturas de picos comparables Una reducc
4. Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Nro de pieza TMDO038 P gina 4 Impreso en Estados Unidos 5 12 3 Selle la placa procese con centrifugaci n r pidamente y realice un E recorrido de ciclo t rmico inmediatamente luego de la configuraci n de la S placa al emplear el programa recomendado pero para 27 ciclos consulte la secci n Ciclos t rmicos del Manual t cnico Nro TMDO31 del PowerPlex Promega 18D System 4 B Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution Siga la secci n de amplificaci n directa de ADN desde perforaciones no FTA del Manual t cnico apropiado del PowerPlex System para la configuraci n de la mezcla de amplificaci n Como ejemplo se muestra el PowerPlex 16 HS System 1 Prepare la mezcla de amplificaci n PowerPlex 16 HS de la manera siguiente Componente Volumen por reacci n Agua grado de amplificaci n 12 5 ul PowerPlex HS 5X Master Mix 5 0 ul PowerPlex 16 HS 10X Primer Pair Mix 2 5 ul 5X AmpSolution M Reagent 5 0 ul Volumen total 25 0 ul Agregue agua grado de amplificaci n al primer tubo luego agregue la PowerPlex9 HS 5X Master Mix PowerPlex 16 HS 10X Primer Pair Mix y el 5X AmpSolution M Reagent Agite por completo antes de agregar a las perforaciones tratadas 2 Por cada muestra agregue 25 ul de la mezcla de amplif
5. Technical Manual Kit PunchSolution INSTRUCCIONES PARA UTILIZAR EL PRODUCTO DC9271 IMPRESO EN ESTADOS UNIDOS 5 12 Nro de pieza TMD038 Kit PunchSolution O Toda la bibliograf a t cnica est disponible en Internet en el sitio www promega com resources protocols Visite el sitio web para asegurarse de estar utilizando la versi n m s actualizada de este manual t cnico Comun quese con el servicio t cnico de Promega si tiene alguna pregunta acerca del uso de este sistema Correo electr nico genetic promega com i Descrip na E al d t E AE 1 2 Componentes y condiciones de almacenamiento del producto ooicniicnnniinnim 2 3 Protocolo para procesamiento de perforaciones de 1 2 mm desde tarjetas de almacenamiento do ETA eseist ata aaa ce oaia s i aaa ia da nato aaa 2 4 Protocolo para amplificaci n y detecci n de ADN por medio de Power lor Syse Miesin R T nO ERR 3 A Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems independientes de AmpSolution acciones 4 B Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution X E Electroforesis capilar mission iio os 5 Resoluci n de problemas sie ceia sac ae coarne dada caca a a ada 6 6 Productosirelacionados iaa 9 1 Descripci n El kit PunchSolution est dise ado para procesar perforaciones a partir de tarjetas de almacenamiento no FTA antes de la amplificaci n por medio de PowerPlex Systems p
6. ara determinar el genotipo STR humano El kit PunchSolution Y es id neo para procesar preliminarmente perforaciones a partir de tarjetas de almacenamiento no FTA que se han usado para recolectar c lulas o sangre de la boca El kit PunchSolution contiene el PunchSolution M Reagent y el 5X AmpSolution M Reagent El PunchSolution Reagent se usa para tratar perforaciones antes de la amplificaci n en tanto que el 5X AmpSolution M Reagent debe agregarse a PowerPlex Systems que son dependientes de AmpSolution M vea la Tabla 1 Los PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution M enumerados en la Tabla 1 no generar n un perfil completo a partir de perforaciones tratadas con el PunchSolution M Reagent sin adici n del 5X AmpSolution M Reagent Para amplificaci n directa a partir de tarjetas de almacenamiento FTA R por medio de PowerPlex Systems dependientes de AmpSolution consulte el 5X AmpSolution M Reagent Nro de cat DM1231 Tabla 1 Compatibilidad de amplificaci n directa de PowerPlex Systems PowerPlex Systems dependientes PowerPlex Systems independientes de AmpSolution 1 de AmpSolution PowerPlex 16 System PowerPlex 18D System PowerPlex 16 HS System PowerPlex 21 System PowerPlex ESX Systems PowerPlex Y23 System PowerPlex ESI Systems PowerPlex CS7 Custom 1 Otros PowerPlex Systems pueden ser compatibles pero no se han sometido a pruebas Los sistemas que no est n dise ados originalmente para am
7. eacci n de 96 pocillos 2 Agregue 10 ul de PunchSolution M Reagent a cada perforaci n de 1 2 mm Nota No cubra la placa con una tapa ni con un sellador como tampoco coloque la placa en un termociclador con una tapa cerrada y sometida al calor Una tapa cerrada y caliente evitar la evaporaci n aun con una placa abierta Si utiliza una termociclador con una tapa sometida al calor deje la tapa abierta para permitir una evaporaci n eficaz Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Nro de pieza TMDO038 P gina 2 Impreso en Estados Unidos 5 12 3 Incube la placa a 70 C durante 30 minutos hasta que se seque O Voz Nota Recomendamos enf ticamente incubar durante el periodo total de 30 minutos Un tiempo menor de incubaci n puede originar un mal Promega desempe o 4 Protocolos para amplificaci n y detecci n de ADN por medio de PowerPlex Systems Materiales que deber suministrar el usuario e PowerPlex System e Placas de reacci n de 96 pocillos MicroAmpY de 0 2 ml Applied Biosystems o equivalente calentador en seco de 95 C ba o de agua o termociclador Hielo picado o ba o de hielo Centrifugador compatible con placas de 96 pocillos Puntas para pipetas resistentes al aerosol Placa ptica de 96 pocillos MicroAmp de 0 2 ml y septa para electroforesis capilar
8. i n de un ciclo en el n mero de ciclos requerir un aumento del doble en la masa de la plantilla de ADN amplificada en tanto que un aumento de un ciclo requerir una reducci n del doble Use el programa de ciclos recomendado en el Manual t cnico apropiado del PowerPlex System y los n meros de ciclos que se muestran en la Tabla 2 como punto de partida para la optimizaci n Coloque la placa de amplificaci n en el termociclador y comience el programa de ciclos t rmicos tan pronto como se agregue la mezcla de amplificaci n del PowerPlex System PCR a todos los pocillos El almacenamiento prolongado de reacciones acumuladas antes de los ciclos puede derivar en un mal rendimiento es decir alturas de bajo pico para amplicones mayores Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMDO038 5 12 P gina 3 Protocolos para amplificaci n y detecci n de ADN por medio de PowerPlex Systems continuaci n Los instrumentos de amplificaci n y detecci n pueden variar junto con la cantidad de material depositado en la perforaci n de 1 2 mm Estos factores pueden afectar las alturas de los picos de amplificaci n Es posible que deba optimizar el n mero de ciclos Inicie con los n meros de ciclos enumerados en la Tabla 2 y aumente o disminuya en un ciclo el n mer
9. icaci n PowerPlex 16 HS PCR que se prepar en el Paso 1 directamente a la perforaci n de 1 2 mm que se proces 3 Selle la placa procese con centrifugaci n r pidamente y realice el recorrido de ciclo t rmico recomendado inmediatamente luego de la configuraci n de la placa seg n se describe en la secci n Ciclo t rmico del Manual t cnico Nro TMDO22 del PowerPlex 16 HS System pero al usar el n mero de ciclos indicado en la Tabla 2 4 C Electroforesis capilar Siga los protocolos de detecci n est ndar en la secci n Configuraci n de instrumentos y Preparaci n de muestras del Manual t cnico apropiado del PowerPlex System correspondiente al sistema que est utilizando para preparar muestras para inyecci n en el ABI PRISME 3100 o 3100 Avant o el 3130 3130x1 3500 o 3500xL Genetic Analyzer de Applied Biosystems Las sensibilidades del instrumento a la electroforesis capilar CE pueden variar Es posible que se deba ajustar el tiempo y el voltaje de inyecci n Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMDO38 5 12 P gina 5 O Promega 5 Resoluci n de problemas La siguiente secci n de Resoluci n de problemas es espec fica para el PunchSolution Kit Para obtener informaci n adicional sobre resoluci n de problemas concerniente al P
10. o de ciclos Tabla 2 N meros de ciclos y cantidades de ADN de control 2800M recomendados para reacciones de PowerPlex System N mero de Cantidad de ADN de PowerPlex System ciclos control 2800M ng PowerPlex 16 System 10 17 10 PowerPlex2 16 HS System 10 17 10 PowerPlex ESX Systems 24 10 PowerPlex ESI Systems 24 10 PowerPlex 21 System 25 10 PowerPlex 18D System 2 5 PowerPlex CS7 System Custom 27 10 PowerPlex Y23 System 26 5 4 A Configuraci n de la amplificaci n para PowerPlex Systems independientes de AmpSolution Siga la secci n de amplificaci n directa de ADN desde perforaciones no FTA del Manual t cnico apropiado del PowerPlex System para la configuraci n de la mezcla de amplificaci n El PowerPlex 18D System se muestra como un ejemplo 1 Prepare la mezcla de amplificaci n de PowerPlex 18D de la forma siguiente Componente Volumen por reacci n Agua grado de amplificaci n 15 ul PowerPlex2 D 5X Master Mix 5 0 ul PowerPlex 18D 5X Primer Pair Mix 5 0 ul Volumen total 25 ul Agregue agua grado de amplificaci n al primer tubo luego agregue la PowerPlex D 5X Master Mix y la PowerPlex 18D 5X Primer Pair Mix Agite por completo antes de agregar a las perforaciones tratadas 2 Por cada muestra agregue 25 ul de la mezcla de amplificaci n PowerPlex2 18D que se prepar en el Paso 1 directamente a la perforaci n de 1 2 mm que se proces Promega Corporation 2800 Woods
11. or Se necesita optimizaci n y validaci n del laboratorio Variabilidad extrema en la muestra Puede existir una variabilidad significativa de individuo a individuo hacia las alturas de picos de muestras de la acumulaci n de c lulas en una perforaci n lo que deriva en variabilidad en la altura de picos entre muestras El PunchSolution M Kit aumenta la recuperaci n del ADN a partir de muestras pero no normaliza la cantidad de ADN presente Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Nro de pieza TMD038 P gina 8 Impreso en Estados Unidos 5 12 6 Productos relacionados Producto Tama o Nro de Cat SwabSolution M Kit 100 preparaciones DC6271 5X AmpSolution M Reagent 100 preparaciones DM1231 PowerPlex 18D System 200 reactivos DC1802 800 reactivos DC1808 PowerPlex9 21 System 200 reactivos DC8902 PowerPlex2 16 HS System 100 reactivos DC2101 400 reactivos DC2100 PowerPlex 16 System 100 reactivos DC6531 400 reactivos DC6530 PowerPlex ESX 16 System 100 reactivos DC6711 400 reactivos DC6710 PowerPlex2 ESX 17 System 100 reactivos DC6721 400 reactivos DC6720 PowerPlex ESI 16 System 100 reactivos DC6771 400 reactivos DC6770 PowerPlex ESI 17 Pro System 100 reactivos DC7781 400 reactivos DC7780 PowerPlex CS7 S
12. owerPlex9 System espec fico que est empleando consulte la secci n de resoluci n de problemas del Manual t cnico de ese PowerPlex System Si tiene preguntas que no se hayan resuelto aqu ni en la secci n de resoluci n de problemas del Manual t cnico del PowerPlex2 System comun quese con su oficina local de Promega o con su distribuidor La informaci n de contacto est disponible en www promega com Correo electr nico geneticOpromega com Sintomas Picos de alelos d biles o ausentes Causas y comentarios Acumulaci n insuficiente de la muestra El desprendimiento y recolecci n de las c lulas del donante fue variable Aumente el n mero de ciclos PunchSolution M Reagent activo arrastrado hacia la reacci n del PowerPlex System Aseg rese de que el calentador haya estad a 70 C y que las muestras se hayan incubado durante 30 minutos La incubaci n durante periodos m s cortos puede derivar en inactivaci n incompleta del PunchSolution M Reagent No hemos evaluado tiempos de incubaci n m s prolongados PunchSolution Reagent inactivo El PunchSolution M Reagent descongelado deber a almacenarse en el refrigerador a 2 10 C No almacene los reactivos en la puerta del refrigerador en donde puede fluctuar la temperatura No vuelva a refrigerar evite varios ciclos de congelamiento descongelamiento ya que esto puede reducir la actividad Si se usa un PowerPlex2 System que no est espec ficamente dise ado pa
13. plificaci n directa requieren la incorporaci n del 5X AmpSolution Reagent a la mezcla de amplificaci n Se necesita optimizaci n y validaci n del laboratorio individual Comun quese con el servicio t cnico de Promega para obtener m s informaci n 2 El kit PunchSolution M y el PowerPlex 16 System se debe usar nicamente con muestras bucales no con muestras de sangre Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWW promega com Impreso en Estados Unidos Nro de pieza TMDO38 5 12 P gina 1 Componentes del producto y condiciones de almacenamiento Producto Tama o Nro de Cat Kit PunchSolutionTM 100 preparaciones DC9271 No debe ser utilizado para diagn stico m dico Este sistema contiene los reactivos necesarios para procesar 100 muestras Incluye 1ml PunchSolution M Reagent 500 ul 5X AmpSolution M Reagent Condiciones de almacenamiento A su llegada el PunchSolution M Reagent debe descongelarse por completo mezclarse al invertirlo suavemente y almacenarse a 2 10 C El 5X AmpSolution M Reagent debe descongelarse por completo mezclarse mediante agitaci n y almacenarse a 2 10 C El reactivo puede estar turbio despu s de su descongelamiento o almacenamiento a 4 C Si ocurre esto caliente el buffer brevemente a 37 C y luego ag telo hasta que est claro No almacene los reactivos en la puer
14. ra amplificaci n directa consulte Tabla 1 aseg rese de que la mezcla de amplificaci n PowerPlex contiene el AmpSolution M Reagent La omisi n del AmpSolution M Reagent de estas reacciones del PowerPlex System derivar en una amplificaci n fallida Si se amplifica el ADN a partir de una perforaci n de 1 2 mm de una tarjeta de sangre no FTA aseg rese de estar usando un PowerPlex System compatible con amplificaci n directa es decir PowerPlex 18D 21 o Y23 Systems o bien uno de los PowerPlex Systems que no se ven inhibidos por la hemoglobina que se arrastra con la perforaci n consulte la Tabla 1 Las versiones anteriores de PowerPlex9 Systems tales como los PowerPlex 16 o Y Systems no son tan tolerantes del arrastre de hemoglobina y las amplificaciones pueden verse inhibidas aun ante la presencia del AmpSolution M Reagent Picos debiles o ausentes que observan para ADN de control positivo Si el ADN de control positivo suministrado con el ADN de se del PowerPlex System falla en la amplificaci n revise para comprobar que la cantidad correcta de ADN de control positivo se haya agregado a la reacci n de amplificaci n Debido a los n meros de ciclo menores utilizados con perforaciones procesadas es necesario aumentar la masa de ADN de control positivo para obtener un perfil Para el Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526
15. ta del refrigerador en donde puede fluctuar la temperatura Almacenar los reactivos en la puerta del refrigerador puede poner en riesgo la estabilidad El AmpSolution M Reagent se usa con PowerPlex Systems que no son compatibles con la amplificaci n directa vea la Tabla 1 No se requiere el reactivo para sistemas de amplificaci n directa tales como los sistemas PowerPlex 18D PowerPlex 21 y PowerPlex Y23 Protocolo para procesamiento de perforaciones de 1 2 mm desde tarjetas de almacenamiento no FTA Los tipos de muestras que no son ETA incluyen e Muestras bucales en dispositivos Bode Buccal DNA CollectorTM e Muestras de sangre o bucales en perforaciones de tarjetas de almacenamiento no FTA por ejemplo S amp S 903 Nota Aunque muchos sistemas son lo suficientemente s lidos para encargarse del arrastre de hemoglobina desde perforaciones de sangre los PowerPlex Systems que usan el Gold ST R Buffer tal como el sistema PowerPlex 16 y el sistema Y se ven inhibidos por la hemoglobina presente en las perforaciones de sangre aun cuando usen el 5X AmpSolution Reagent Materiales que deber suministrar el usuario e Placa de reacci n de 96 pocillos MicroAmp de 0 2 ml Nro de pieza N801 0560 de Applied Biosystems o equivalente e Calentador de 70 C con inserci n capaz de aceptar una placa de 96 pocillos o un termociclador fijado en 70 C 1 Coloque una perforaci n de 1 2 mm por muestra en un pocillo de la placa de r
16. y se dejar n fuera antes que los locus m s peque os Aseg rese de que el calentador haya estado a 70 C y que las muestras se hayan incubado durante 30 minutos La incubaci n durante periodos m s cortos puede derivar en inactivaci n incompleta del PunchSolution M Reagent Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWWw promega com Impreso en Estados Unidos 5 12 Nro de pieza TMDO038 P gina 7 O Promega 5 Resoluci n de problemas continuaci n S ntomas Causas y comentarios PunchSolution Reagent inactivo El PunchSolution M Reagent descongelado deber a almacenarse en el refrigerador a 2 10 C No almacene los reactivos en la puerta del refrigerador en donde puede fluctuar la temperatura No vuelva a refrigerar evite varios ciclos de congelamiento descongelamiento ya que esto puede reducir la actividad Arrastre de PunchSolution M Reagent en exceso hacia la reacci n de amplificaci n Recomendamos tratar una perforaci n de 1 2 mm con 10 ul de PunchSolution Reagent por cada reacci n de 25 ul de amplificaci n El uso de una reacci n de amplificaci n m s peque a puede poner en riesgo el rendimiento si se usan 10 ul de PunchSolution M Reagent La reducci n del volumen de PunchSolution Reagent puede mejorar los resultados para un volumen de reacci n de amplificaci n men
17. ystem Custom 100 reactivos X6613 PowerPlex9 Y 23 System 50 reactivos DC2305 200 reactivos DC2320 Plexor HY System 200 reactivos DC1001 800 reactivos DC1000 QuantiFluor M dsDNA System 1ml E2670 No debe ser utilizado para diagn stico m dico Unicamente para uso en investigaci n 2012 Promega Corporation All Rights Reserved PowerPlex and Plexor are registered trademarks of Promega Corporation AmpSolution PunchSolution QuantiFluor and SwabSolution are trademarks of Promega Corporation ABI PRISM and MicroAmp are registered trademarks of Life Technologies Inc Bode Buccal DNA Collector is a trademark of the Bode Technology Group Inc GeneAmp is a registered trademark of Roche Molecular Systems Inc Hi Di and POP 4 are trademarks of Life Technologies Inc Products may be covered by pending or issued patents or may have certain limitations Please visit our Web site for more information All prices and specifications are subject to change without prior notice Product claims are subject to change Please contact Promega Technical Services or access the Promega online catalog for the most up to date information on Promega products Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 EE UU N mero gratuito en EE UU 800 356 9526 Tel fono 608 274 4330 Fax 608 277 2516 WWWw promega com Impreso en Estados Unidos 5 12 Nro de pieza TMDO38 P gina 9
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