(LISTOS)ESManual de instrucciones ECSA
Contents
1. 00 POS 28 14 NEG 0 00 POS 30 91 Gr fica 2 Canal TxR S agalactiae Resultado obtenido al amplificar un control negativo un control positivo E coli un control positivo S agalactiae y un control positivo Listeria Control negativo A11 en azul ausencia de se al Control positivo E coli A12 en gris ausencia de se al Control positivo S agalactiae A13 en naranja se observa una se al con Ct 29 96 Control positivo Listeria A14 en verde ausencia de se al ECSALI C LISTE Q Fluorescence fa o N Bite ID Protocol SamplelD Sample Status FAM FAM Ct Alx532 Alx532 Ct TXR Std Res TXR Ct AlIx6B47 Alx647 Ct Type Std Res Std Res Std Res 11 ECSALI C UNKN NEG 0 00 POS 28 17 NEG 0 00 NEG 0 00 12 ECSALI C UNKN POS 30 22 POS 27 81 NEG 0 00 NEG 0 00 13 ECSALI C 5 AGAL UNKN NEG 0 00 POS 28 03 POS 29 96 NEG 0 00 C 14 ECSALI LISTERIA LUNKN NEG 0 00 POS 28 14 NEG 0 00 POS 30 91 Gr fica 3 Canal Alx647 Listeria Resultado obtenido al amplificar un control negativo un control positivo E coli un control positivo S agalactiae y un control positivo Listeria Control negativo A11 en azul ausencia de se al Control positivo E coli A12 en gris ausencia de se al Control positivo S agalactiae A13 en naranja ausencia de se al Control positivo Listeria A14 en verde se observa una se al con Ct 30 91 N 2 Fluorescence Sample Statu2. EXTIAGENIE CE MOLECULAR Progenie molecular Artes y Oficios 37 Valencia 46021 Espa a Tel 902 91 05 05 Fax 902 91 05 06 www progenie molecular com RealCycler ECSALI G v 1 1 Uso previsto RealCycler ECSALI G es un kit de reactivos que permite la detecci n cualitativa por PCR a tiempo real del ADN de Escherichia coli Streptococcus agalactiae y Listeria monocytogenes en muestras cl nicas El sistema incluye un control interno de amplificaci n para prevenir los falsos negativos debidos a la inhibici n de la reacci n 2 Especificaciones Sensibilidad 1 copia uL E coli 1 copia uL Streptococcus agalactiae y 10 copias uL Listeria monocytogenes Especificidad E coli gen N acetilgalactosamina 6 fosfato deacetilasa Streptococcus agalactiae gen Sip y Listeria monocytogenes gen hlyA 3 Estabilidad y almacenamiento Todos los componentes del kit RealCycler ECSALI G deben ser almacenados a 20 C El kit es estable a 20 C hasta la fecha de caducidad ver etiqueta externa del kit 4 Descripci n del m todo La reacci n en cadena de la polimerasa PCR est basada en la amplificaci n de una regi n espec fica del genoma del pat geno usando primers y sondas espec ficos En la PCR a tiempo real se utilizan sondas marcadas con fluorocromos Hay una emisi n de fluorescencia que es proporcional a la cantidad de ADN presente en la muestra El Cycle threshold Ct es el ciclo de la PCR en el que se detecta ini
3. cialmente un aumento en la se al de fluorescencia La amplificaci n de E coli se detecta en FAM la de Streptococcus agalactiae en TXR la de Listeria monocytogenes en Alx647 y la del control interno en Alx532 5 Composici n RealCycler ECSALI G incluye la mezcla de reacci n Amplimix un Control Positivo ADN E coli un Control Positivo ADN S agalactiae y un Control Positivo ADN Listeria Todos los reactivos est n listos para su uso sin a adir ni reconstituir ning n componente Componente Viales N m Volumen Conserv AmpliMix 1 970 uL 15 25 C Control Positivo ADN E coli 1 60 uL 15 259C Control Positivo E ADN 60 uL 15 250C S agalactiae Control Positivo ADN 1 60 uL 15 250C Listeria 6 Material y equipamiento adicional requerido y no suministrado Equipo de PCR a tiempo real Kit de extracci n de ADN Guantes desechables Pipetas calibradas Puntas de pipeta con filtro Congelador 20 C 7 Advertencias y precauciones Todos los componentes del kit deben mantenerse en fr o mientras se est n manipulando Despu s de a adir el ADN minimizar el tiempo necesario para iniciar el programa de amplificaci n Los tubos con la mezcla de amplificaci n no deben exponerse a la luz durante un periodo de tiempo prolongado Descongelar y congelar repetidas veces los reactivos puede disminuir la sensibilidad del kit Usar guantes desechables U
4. diferente S agalactiae y Listeria POSITIVO POS POS POS Indiferente ECO S agalactiae y Listeria ND ND ND POS NO SE DETECTA ND ND ND ND NO VALORABLE e Ejemplo de resultado Fluorescence Bite ID Protocol SamplelD Sample Status FAM FAM Ct Alx532 Alx532 Ct TXR Std Res TXR Ct AlIx647 Alx647 Ct Std Res Std Res L Std Res C NEG 0 00 POS 28 17 NEG 0 00 NEG 0 00 C POS 30 22 POS 27 81 NEG 0 00 NEG 0 00 13 ECSALI C 5 AGAL NEG 0 00 POS 28 03 POS 29 96 NEG 0 00 C 11 ECSALI 12 ECSALI 14 ECSALI LISTERIA UNKN NEG 0 00 POS 28 14 NEG 0 00 POS 30 91 Gr fica 1 Canal FAM E coli Resultado obtenido al amplificar un control negativo un control positivo E coli un control positivo S agalactiae y un control positivo Listeria Control negativo A1 1 en azul ausencia de se al Control positivo E coli A12 en gris se observa una se al con Ct 30 22 Control positivo S agalactiae A13 en naranja ausencia de se al Control positivo Listeria A14 en verde ausencia de se al Q gt t Q S 3 S 400 o S 3 Bite ID Protocol SamplelD Sample Status FAM FAM Ct Alx532 Alx532 Ct TXR Std Res TXR Ct AIx6B47 Alx647 Ct Type Std Res Std Res Std Res 11 ECSALI C UNKN NEG 0 00 POS 28 17 NEG 0 00 NEG 0 00 12 ECSALI C E COLI UNKN POS 30 22 POS 27 81 NEG 0 00 NEG 0 00 ECSALI C 5 AGAL UNKN NEG 0 00 POS 28 03 POS 29 96 NEG 0 00 ECSALI C LISTERIA UNKN NEG 0
5. s FAM FAM Ct Alx532 Alx532 Ct TXR Std Res TXR C t Alx647 Alx647 Ct Std Res Std Res Std Res oK NEG 0 00 POS 28 17 NEG 0 00 NEG E COLI OK POS 30 22 POS 27 81 NEG 0 00 NEG 5 AGAL OK NEG 0 00 POS 28 03 POS 29 96 NEG LISTERIA UNKN OK NEG 0 00 POS 28 14 NEG 0 00 POS Gr fica 4 Canal Alx532 control interno Resultado obtenido al amplificar un control negativo un control positivo E coli un control positivo S agalactiae y un control positivo Listeria Control negativo A11 en azul se observa una se al con Ct 28 17 Control positivo E coli A12 en gris se observa una se al con Ct 27 81 Control positivo S agalactiae A13 en naranja se observa una se al con Ct 28 03 Control positivo Listeria A14 en verde se observa una se al con Ct 28 14 10 Control de calidad Se recomienda que se lleven a cabo controles positivos y negativos cada vez que se realice un an lisis Cada lote del kit RealCycler ECSALI G ha sido testado seg n las especificaciones de la PCR a tiempo real utilizando el equipo SmartCycler Cepheid 11 Observaciones Tabla de compatibilidad de fluor foros Fluor foro Fluor foro alternativo FAM TET CAL Fluor Gold 540 HEX JOE VIC CAL Fluor Orange 560 Alexa 532 Texas Red ROX LC Red 610 CAL Fluor Red 610 Alx647 Cy5 Quasar 670 LC Red 670 ATTO 647N Fecha de publicaci n Julio 2012
6. sar pipetas calibradas y puntas de pipeta con filtro Los ensayos deben llevarse a cabo por personal cualificado y siguiendo las buenas pr cticas de laboratorio No usar el kit despu s de la fecha de caducidad Uso para diagn stico in vitro 8 Muestras cl nicas Recoger las muestras en tubos est riles Almacenarlas y transportarlas congeladas a 20 C hasta su uso Utilizar ADN bien purificado y libre de inhibidores de la PCR 9 Procedimiento a Extracci n de ADN b Protocolo Acwance to Next Stage Selecci n de fluor foros FAM detecta Escherichia coli TxR detecta Streptococcus agalactiae Alx647 detecta Listeria monocytogenes Alx532 detecta el control interno c Preparaci n de la reacci n Descongelar la AmpliMix y los Controles Positivos E coli agalactiae y Listeria Tomar una al cuota de 20 uL de Amplimix y a adir 5 uL del ADN de cada muestra o control a cada tubo Colocar los tubos en el equipo Seleccionar el protocolo ECSALI G Iniciar el programa de amplificaci n d Interpretaci n de los resultados FAM TXR Alx647 Alx532 Interpretaci n Std Res Std Res Std Res Std Res p POS ND ND Indiferente POSITIVO E coli ND POS ND Indiferente PO S agalactiae ND ND POS Indiferente POSITIVO Listeria POSITIVO POS POS ND Indiferente E coli y S agalactiae POSITIVO POS ND POS Indiferente E coli y Listeria POSITIVO ND POS POS In
Download Pdf Manuals
Related Search