Microtomía y preparación de la sección en parafina
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1. Comercial Hospitalaria ek Microtom a y preparaci n de la secci n en parafina Scientia Leica Microsystems Education Series Living up to Life MICROSYSTEMS toma R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria Introducci n La preparaci n de secciones de alta calidad para histopatolog a requiere aptitudes y experiencia pero todos tenemos que empezar de alg n modo Este folleto ha sido elaborado como un documento de formaci n para los principiantes en la microtom a y en la preparaci n de secciones en parafina y como un curso de actualizaci n para los hist logos m s experimentados Abarca los elementos esenciales para ajustar un microtomo rotatorio y operar con seguridad al preparar secciones en parafina Se ilustran algunos de los fallos m s habituales relacionados con las secciones y se proporcionan sugerencias para la localizaci n de problemas El microtomo representado a lo largo de este folleto es un microtomo manual Leica RM2235 pero las sugerencias y los comentarios que se facilitan se pueden aplicar a los microtomos rotatorios m s modernos En el manual de instrucciones propio del instrumento puede encontrar una descripci n de las caracter sticas mec nicas y de seguridad de otros modelos de microtomos e instrucciones para su uso a R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle2. 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Corr rel Hospiralaria Scientia Conocimiento Ciencia Aptitud Los documentos formativos Scientia education series de Leica Microsystems forman parte de nuestro compromiso de mejorar la teor a y la pr ctica de la histolog a a trav s de la educaci n la formaci n y el discurso cient fico Autor Han participado Geoffrey Rolls Claudia Dorenkamp Neville Farmer Jan Minshew Kerrie Scott Dowell Fiona Tarbet Ce as Ss A MA md O 11 12 13 14 15 16 17 18 Fije las muestras de manera adecuada 3 Procese el tejido de forma aproplada 4 Realice la inclusi n de las muestras con cuidado 5 Coloque el microtomo de manera adecuada 6 Utilice las caracter sticas de seguridad de forma apropiada 1 Establezca el ngulo de incidencia de la cuchilla de forma ptima 9 Maximice la vida til de la cuchilla 10 Oriente la muestra de manera adecuada 11 Estudie las caracter sticas del dise o de su microtomo y aprenda a utilizarlas o ee ee ee 13 Tenga cuidado al efectuar un recorte un refrentado Oun desbastado 0 0 ce 14 Tenga en cuenta los factores que afectan al grosor de la secci n 16 Aseg rese de que los bloques est n fr os 17 Estudie la t cnica para cortar secciones fina
3. Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 ngulo de la faceta ngulo de incidencia 9 m e consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 1 Maximice la vida til de la cuchilla Hay algunas estrategias simples para obtener la vida m xima de cada cuchilla Al limpiar la cuchilla evite arrastrar cualquier cosa a lo largo del filo incluso las fibras de celulosa pueden da arla Evite tocar el borde con cualquier objeto duro como un pincel o unas pinzas Use la cuchilla sistem ticamente trabajando desde un extremo al otro Esto le proporcionar la m xima vida til a cada parte de la cuchilla Utilice un lado de la cuchilla para desbastar y otro para la obtenci n del corte o alternativamente use cuchillas diferentes Un microtomo de retracci n prolonga la vida de la cuchilla porque retrae ligeramente la muestra despu s del corte y reduce la formaci n de residuos en la parte posterior de la cuchilla A m e cea R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria O Oriente la muestra de manera adecuada La orientaci n de la muestra puede afectar a la facilidad con la que se puede obtener una cinta e influye directamente sobre la calidad de la secci n e En la mayor a de los laboratorios t
4. situada en la base del dispensador de cuchillas El freno del volante del Leica RM2235 se muestra aqu en su posici n de bloqueo El freno puede activarse con el volante en cualquier posici n hacia arriba Si por casualidad se cae una cuchilla d jela caer no intente cogerla Ni el bloqueo del volante ni el freno del volante se pueden utilizar para inmovilizar el microtomo No deje nunca una cuchilla en el lugar de trabajo o en una caja con el filo mirando en ning n caso ste es un reflejo natural contra el que tiene que luchar Ajuste el ngulo de inclinaci n de la cuchilla El ngulo de inclinaci n de la cuchilla se puede ajustar y debe ser configurado para un Hospiralaria de forma ptima rendimiento ptimo El ngulo de incidencia previene el contacto entre la faceta de la cuchilla y la cara del bloque El ngulo de la faceta es el ngulo creado entre las dos facetas que forman el filo Para el uso rutinario las cuchillas desechables est n hechas con un ngulo de la faceta de 35 aproximadamente pero este ngulo puede variar en funci n del tipo de cuchilla y su fabricante Por eso hay que ajustar de forma ptima el ngulo de inclinaci na en funci n del tipo de cuchilla Siga las instrucciones del fabricante del microtomo para el ajuste del ngulo recomendado Para los portacuchillas Leica se recomienda un ajuste de entre 1 y D cea R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp
5. del bloque cortando suavemente unas pocas secciones finas Esto evitar el problema ilustrado en el punto 18B de la p gina 24 fome R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospitalaria La base del soporte de la cuchilla abrazadera A el desplazamiento lateral abrazadera B y la orientaci n x y abrazadera C deber an estar bloqueadas firmemente antes de recortar el bloque Sino se hace as se pueden provocar da os tanto en el bloque como en la cuchilla El dispositivo de recorte mec nico deber a ser utilizado con cuidado al realizar el desbastado particularmente el ajuste bajo que produce un avance de 30 um cuando est activado Al realizar el desbastado es preciso utilizar la rueda de avance de desbaste con cuidado para evitar cortartrozos gruesos de la superficie de la muestra involuntariamente y ocasionar da os 15 e a R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Corr rci Hospirala ria Ll Tenga en cuenta los factores que afectan al grosor de la seccion Configure el microtomo con el ajuste deseado pero observe que hay varios factores que determinan el grosor de la secci n real e Una secci n cohesiva de 4 um puede proporcionar mas informaci n que una seccion de 2 um interrumpida severamente e El grosor real del primer
6. puede ser posible reprocesarlo consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Este bloque de p ncreas no tiene una fijaci n suficiente y ha sido procesado utilizando un protocolo que era demasiado breve Muestra los efectos t picos del procesamiento insuficiente que ha ocasionado una considerable reducci n de la muestra dentro de laf parafina que tiene alrededor El tejido estaba suave y blando y era imposible de cortar Es preciso volver a reprocesarlo e consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 3 Realice la inclusi n de las muestras con cuidado La inclusi n es un paso importante que precisa una aproximaci n cuidadosa Una inclusi n poco cuidadosa puede hacer la microtom a mucho m s dif cil e No llenar lo suficiente el molde de inclusi n puede dar lugar a una sujeci n inestable en el microtomo y originar cortes de distinto espesor uno grueso y despu s otro fino y otros problemas e Evitar llenar excesivamente los moldes de inclusi n porque esto puede interferir Ejemplos de moldes de inclusi n llenados de forma insuficiente izquierda llenados de forma excesiva con la alineaci n correcta de la cara del bloque durante el corte derecha y llenados correctamente central Los e Cualquier exceso de parafi
7. L tae o Mad bea tory dee Mo e Se utilizan cuchillas da adas g ry 31 f i 1 ES ar z na ati See Pehl oe ES ERS gp oe tea Pe e Procesamiento pobre a A E AA er A 3 io E PEI E Ed eo ce AT e Material duro como el calcio en un i k 5 E A E do Lig Sh a ps 1 J ABA CIAS ARA Coder e bloque a PA eed OR A e Residuos en la parafina sin filtrar tiga E ape rest tances e Sales tampon precipitadas en las te ej te Pra tl 7 es RE muestras Ea PA e To aos T it Tratamiento basto de la muestra durante la expansi n Procesamiento pobre infiltraci n compensaci n o deshidrataci n incompleta e Tratamiento vigoroso para quitar las arrugas durante la flotaci n Dejarla flotando demasiado tiempo o utilizar agua que est demasiado D Disgregaci n ares caliente 25 R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Grupo 3 5 L Tejido excesivamente procesado Bloque demasiado fr o Corte demasiado r pido El mecanismo de abrazadera no est bloqueado de forma segura Es necesario ajustar el ngulo de incidencia El mecanismo de abrazadera no est bloqueado de forma segura Muestra grande o muy dura RX ee A e OA ES e Procesamiento pobre gt e ngulo de incidencia insuficiente e Seccionamiento demasiado r pido a e Micr tomo desgastado F Rugosidad basta 26 Rua do Arroncal 9
8. Portaobjetos sucio e Ba o de flotaci n sin quitar la espuma o ba o contaminado e Portaobjetos drenados secos o almacenados en un entorno polvoriento e Fragmentos de mina de l piz del etiquetado e L Presencia de polvo 29 m e ou R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Corrmrci Hospiralaria Referencias 1 Leica Microsystems Instruction Manual Leica RM2235 V1 3 Nussloch Leica Microsystems 2008 Rolls GO Farmer NJ Hall JB Artifacts in Histological and Cytological Preparations Melbourne Leica Microsystems 2008 106 Rolls G 101 Steps to Better Histology Melbourne Leica Microsystems 2008 Culling CFA Allison RT Barr WT Cellular Pathology Technique 4th ed London Butterworths 1985 Santoianni RA Hammami A Nuclear Bubbling an Overlooked Artifact The Journal of Histotechnology 1990 13 135 136 Si oe e ES Con el usuario para el usuario Leica Microsystems Comercial Hospitalaria feica MICROSYSTEMS
9. Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Grupo 3 5 L e T cnica de flotaci n inadecuada e Procesamiento y o fijaci n inadecuados soporte insuficiente e Bloque caliente e Secci n demasiado fina e ngulo de incidencia demasiado grande e Ba o de agua demasiado caliente Procesamiento pobre soporte insuficiente Bloque caliente Corte demasiado r pido Filo desafilado e ngulo de incidencia demasiado grande e Parafina de mala calidad H Excesiva compresi n 21 R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 e Burbujas que se adhieren a la base y alos lados del ba o de flotaci n e Mala t cnica de flotaci n que acumula burbujas debajo de la secci n e Temperatura del ba o demasiado elevada e Se ha dejado la secci n demasiado tiempo en agua e Procesamiento y o fijaci n pobre disolvente residual 28 R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Secci n de mala calidad arrugas burbujas Ba o de flotaci n demasiado fr o Uso de un portaobjetos sin recubrimiento e Secci n no drenada por completo despu s de la flotaci n Y E 1 4 r 7 E S u AAA VO e Tiempo de secado insuficiente e Temperatura de secado demasiado baja e
10. a protecci n tambi n debe ser utilizada cuando el microtomo se deja sin supervisi n e Elfreno del volante bloquear el microtomo en cualquier posici n del mango se utiliza al realinear la cara del bloque o al ajustar el avance de desbaste consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 L A AA En esta ilustraci n se ha colocado la protecci n de seguridad roja en el microtomo Leica RM2235 en su posici n Cubre por completo el filo de la cuchilla El bloqueo del volante se muestra aqu con el volante en la posici n de las 12 del reloj y el bloqueo activado Dicho bloqueo s lo se activar en esta posici n en la parte superior de la carrera de corte comercia R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hosperalar ia La cuchilla deber a ser extra das del microtomo cuando se limpia el equipo o se deja sin supervision La mejor manera de hacerlo es quitar la sujecion y utilizar el expulsor de la cuchilla situado en la parte izquierda de la protecci n para comenzar a extraerla lateralmente Se puede utilizar unas pinzas no con los dedos o elevar con el im n al final del pincel Leica y extraerlo de forma segura Las cuchillas utilizadas deber an desecharse de manera adecuada en un contenedor de objetos afilados o en la ranura de cuchillas usadas
11. aci n precisa para evitar una p rdida innecesaria de tejido Para usarlo de manera rutinaria al cortar varios bloques es R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 importante que este portamuestras est ajustado a la posici n cero en ambos ejes antes de empezar a cortar Esto se consigue f cilmente utilizando los indicadores rojos puntos de las muescas paradas de clic y las marcas de indicadores B C rvix C Piel 12 Comercial l Hosperalar ia Rua do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 O Estudie las caracter sticas del dise o de su microtomo y aprenda a utilizarlas Los microtomos con retracci n est n dise ados para que la muestra se retire de la cuchilla en la carrera ascendente Es importante saber si su microtomo tiene esta prestaci n e La posici n retra da es una caracter stica de dise o que proporciona distintas ventajas durante el corte y prolonga la vida de la cuchilla e Alusarun microtomo de retracci n el alineamiento de la cara del bloque al borde de la cuchilla debe ser efectuado con el bloque en la carrera descendente en la posici n avanzada no retra da e Siunbloque est alineado cerca del borde de la cuchilla mientras el brazo de la muestra est en la posici n retra da en la siguiente vuelta completa del vo
12. ctivos alcalinos tambi n pueden hacer que las secciones se eleven despeg ndose Los portaobjetos siempre deben estar etiquetados de manera adecuada y con precisi n de forma que cumplan las regulaciones locales m e consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 15 Deje flotar las secciones con cuidado La flotaci n deber a expandir la secci n a sus dimensiones originales y garantizar que es completamente plana e Supervise la temperatura con cuidado La temperatura deber oscilar entre 5 9 C por debajo del punto de fusi n de la parafina e Aseg rese de que el agua est limpia y de que no tenga burbujas ni residuos de la secci n para evitar una contaminaci n entre s e Coloque las secciones con el lado liso brillante hacia abajo e Coloque las secciones en la superficie del agua con un movimiento de barrido suave e Las secciones se pueden da ar con mucha facilidad al quitar las arrugas o burbujas con un cepillo o pinzas e Examine cada secci n mientras flota en la superficie del agua ya que las imperfecciones se pueden ver f cilmente e Deje la muestra seccionada en la superficie del agua el tiempo suficiente para que se alise Una expansi n excesiva puede estropear la morfolog a en secciones sensibles e Para propiciar un drenaje eficiente y para prevenir que la secci n se caiga del portaobjeto
13. erentes grosores a lo largo de la secci n e La pr ctica de soplar suavemente sobre la cara de un bloque enfriado justo antes de cortar cada secci n es una pr ctica com n en algunos laboratorios La aplicaci n de un aliento c lido y h medo tiende a hacer las secciones m s cohesivas pero tambi n ocasiona la dilataci n a causa del calor por eso la secci n se hace m s gruesa e Los residuos que se adhieren al borde superior o inferior del bloque o a la parte trasera de la cuchilla pueden dificultar la obtenci n de cintas cohesivas y ocasionar que la cinta se separe de la cuchilla en la carrera ascendente Si hay residuos elim nelos vuelva a enfriar el bloque y comience de nuevo A m e consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 14 Elija el portaobjetos y el adhesivo correctamente La elecci n del portaobjetos y del adhesivo depende de los m todos de tinci n que se aplicar n inmediatamente despu s Los portaobjetos siempre deben estar limpios sin grasa ni polvo y deben guardarse y manipularse correctamente Si la tinci n se realiza para incluir la recuperaci n antig nica IHC el pretratamiento enzim tico ISH o los prolongados pasos de incubaci n se deben utilizar portaobjetos cargados o un adhesivo como el amino alquil silano AAS Algunos tintes especiales particularmente aquellos que emplean rea
14. lante el bloque avanzar en funci n del valor de la posici n retra da m s el grosor de la secci n seleccionada Esto provocar a que se cortara un trozo grueso que podr a da artanto la muestra como la cuchilla e Los microtomos tambi n pueden ser manuales semimotorizados o completamente motorizados e Los equipos motorizados reducen los movimientos repetitivos que pueden contribuir a desarrollar enfermedades m sculo esquel ticas R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Comercial l Hosperalar ia 10 Tenga cuidado al efectuar un recorte un refrentado o un desbastado En la microtom a esta etapa requiere un excelente cuidado ya que tejido importante para el diagn stico se puede perder f cilmente o la superficie del bloque puede ser da ada e Antes de iniciar el recorte aseg rese siempre de que todos los mecanismos de sujeci n est n apretados con seguridad e El objetivo de recortar un bloque de forma adecuada es exponer el tejido con cautela en el nivel en el que se pueda obtener una secci n representativa e Elrecorte normalmente se efect a con unos grosores de entre 10 y 30 um e Alefectuar un recorte basto y r pido de tejidos quebradizos se corre el riesgo de da ar la superficie de la muestra Tenga especial precauci n al utilizar el dispositivo de recorte mec nico a 30 um e Como paso final pula la cara
15. n secos y planos sobre una placa caliente e Los portaobjetos pueden ser almacenados en estantes en posici n vertical y despu s secados en un horno e Generalmente las temperaturas de secado no deber an superar los 65 C e Un calor excesivo puede ocasionar gotas de agua debajo de una secci n que se va a hervir y esto provocar a da os e Seque las secciones durante un tiempo de entre 10 y 30 minutos e Algunas muestras delicadas obtendr n los mejores resultados al secarlas a 37 C durante m s tiempo varias horas hasta por la noche A a e cea R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 17 Realice una limpieza y un mantenimiento profundo del microtomo Es importante eliminar la parafina y los residuos de tejido acumulados despu s de su uso Es importante efectuar un mantenimiento preventivo de forma regular e Limpie el equipo diariamente e Antes de limpiarlo quite siempre la cuchilla e El portacuchillas se puede retirar sencillamente para facilitar el acceso para limpiarlo e Los desperdicios de la secci n se quitan mejor con un pincel seco e No limpie las superficies exteriores con alcohol o xileno ya que no son resistentes a estos disolventes y se debe evitar una exposici n al xileno Se recomiendan una soluci n para eliminar la parafina detergentes comerciales suaves o jab n y agua e Durante la limpieza n
16. na en la parte exterior del molde de inclusi n deber a moldes de inclusi n llenados de forma insuficiente a o excesiva pueden ocasionar problemas durante la ser eliminado antes de sujetarlo para asegurarse de que el bloque est sujeto con microtom a firmeza durante el seccionamiento e La orientaci n de la muestra es muy importante consulte el punto 8 de la p gina 11 5 m e consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 4 Coloque el microtomo de manera adecuada La posici n del microtomo en el laboratorio es importante e Coloque el microtomo en un lugar estable lejos de r fagas de aire puertas y puntos de paso Cualquier movimiento del aire debido a los equipos de aire acondicionado u otras causas puede hacer que el tratamiento de la secci n sea muy dif cil e Es preferible utilizar un banco ajustable en altura y una silla ergon mica e Es muy importante que el personal no est distra do al usar el microtomo por los riesgos de lesionarse con cuchillas extremadamente afiladas Al colocar los microtomos en un laboratorio deber a considerarse el potencial para interactuar con otros miembros del personal e Es preferible tener un suelo antideslizante en las inmediaciones de los microtomos porque inevitablemente los fragmentos de parafina caer n al suelo y pueden originar una superficie resbaladiza Muchos laborato
17. o debe penetrar ning n fluido en el interior del instrumento e Como m nimo una vez al a o el instrumento debe pasar una inspecci n realizada por un t cnico de servicio cualificado e Siga las instrucciones de lubricaci n facilitadas en el manual de instrucciones y utilice los lubricantes recomendados Comer Rua do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 19 Aprenda a reconocer y a corregir los fallos comunes Alguno de los fallos m s comunes que se ven en las secciones de parafina son mer Mgr a EA ma po y ad i de Ta ie F maj j es TE aF a i el ELE oa t ii A ME OU E PA E a a le AR B Oquedades debido a un recorte basto 24 e Ajuste err neo del micr metro e Aplicaci n de aliento caliente a un bloque fr o para facilitar el seccionamiento Elecci n de la primera secci n en la cinta Seccionamiento a demasiada velocidad Procesamiento pobre El microtomo precisa una recalibraci n Bloque cortado con demasiada rapidez Superficie del bloque sin pulir al recortar algunas secciones finas despu s del desbastado Grosor inapropiado de la secci n utilizado al recortar Bloque quebradizo demasiado procesado o demasiado fr o al cortarlo Comercial Hospiralaria R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Grupo 3 S
18. odos los moldes de inclusi n est n colocados en la pinza portaobjetos con la misma orientaci n p ej la etiqueta hacia la izquierda para la orientaci n este oeste o la etigueta boca arriba para la orientaci n norte sur Esto se hace para facilitar el desbastado de m ltiples bloques antes de preparar las secciones de alta calidad y de permitir cortes m s profundos o recortes sin una p rdida excesiva del tejido Por eso debe tener en cuenta la orientaci n de la muestra hacia la cuchilla en el estado de inclusi n Este requisito a menudo se pasa por alto e La ilustraci n de la p gina 12 muestra la orientaci n preferida para algunas muestras t picas Las opiniones difieren en lo que se refiere a qu orientaci n es la mejor para determinados tipos de muestra pero la orientaci n es importante y se debe tomar en consideraci n e Ejemplo A Intestino la cuchilla pasa a trav s de la mucosa al final e Ejemplo B C rvix es mejor presentar un punto de tejido denso en la cuchilla mas que un borde recto e Ejemplo C Piel la cuchilla pasa a trav s de la epidermis al final e Los microtomos como el Leica RM2235 tambi n tienen un instrumento de precisi n de la orientaci n con controles calibrados que facilita el hecho de encontrar una posici n cero o una variable medida en los ejes x y Tener esta capacidad es muy til cuando se recortan los bloques preparados en otros laboratorios o en otros microtomos donde se requiere una aline
19. opiada Un bloque de parafina ser dif cil de seccionar a no ser que una muestra bien fijada sea procesada de la manera adecuada utilizando un programa apropiado 4 Las muestras pueden estar poco procesadas muestra demasiado grande programa demasiado breve o demasiado procesadas programa demasiado largo para el tama o y la naturaleza de la muestra En ambos casos puede ser dificil o imposible realizar un corte Existen varias tecnicas que se pueden utilizar para obtener secciones de bloques dificiles Si es dificil seccionar el bloque porque el tejido es duro la superficie expuesta puede empaparse en agua fr a o en un agente reblandecedor como una soluci n de detergente blando suavizante o Mollifexrm Para muestras calcificadas puede aplicar un agente decalcificador durante 10 minutos o m s en el tejido expuesto ello le permitir obtener varias secciones Enjuague bien los bloques antes de montarlos en el portamuestras del microtomo y de volver a cortarlos ya que los rastros del agente de descalcificaci n da ar n la placa de presi n del portacuchillas El sistema Leica Paraffin Tape Transfer est recomendado para obtener secciones de bloques dif ciles en los que la fijaci n el procesamiento o la infiltraci n puede ser err nea y los m todos de corte normales no se realizan con xito Cuando es imposible obtener secciones de un bloque porque la muestra ha sido incorrectamente procesada en primera instancia
20. par de secciones de una cinta puede ser mayor de lo indicado debido a la dilataci n por calor al cortar un bloque fr o como se ha descrito en las secciones 1 2 amp 3 abajo e Otros factores como la velocidad de rotaci n el ajuste del ngulo de incidencia y las condiciones del filo pueden influir sobre el grosor real alcanzado Hosperalar ia 12 Asegurese de que los bloques estan frios El corte normalmente mejora cuando la muestra esta bien incluida en parafina dura Por esta razon la mayoria de los bloques de parafina deben estar frios cuando se cortan las secciones El m todo exacto utilizado para enfriar el bloque es importante e La parafina fr a proporciona un mejor soporte para los elementos duros en una muestra permitiendo que se obtengan secciones mas delgadas e Coloque los bloques sobre una placa fr a o sobre una superficie fr a y h meda durante unos minutos como la superficie de hielo derriti ndose e El agua penetra un poco en la cara del bloque hinchando los tejidos y haci ndolos m s adecuados para cortarlos Esto tiene particular importancia en el caso de tejidos excesivamente deshidratados secos o que se desmigajan e Elhecho de colocar los bloques en el congelador puede ocasionar la ruptura de la superficie cuando el tejido se separa de la parafina que tiene alrededor Esto puede hacer que sea m s complicado obtener secciones cohesivas consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Pa
21. rios usan esterillas antideslizantes para que el entorno sea m s seguro Hosperalar ia D Utilice las caracteristicas de seguridad de forma apropiada Debe estar familiarizado con las caracter sticas de seguridad del microtomo que est utilizando y observar algunas normas b sicas durante el corte e Las cuchillas reutilizables y desechables del microtomo est n extremadamente afiladas y pueden causar lesiones de car cter grave a no ser que se act e con el cuidado pertinente al trabajar con ellas Los accidentes se producen cuando un usuario est distra do o no est completamente concentrado e Use pinzas o pincel en lugar de los dedos para coger las secciones o los fragmentos de parafina de la cuchilla o de la cara del bloque e Los microtomos de rotaci n Leica est n equipados con una protecci n de seguridad protecci n de la cuchilla o protecci n del dedo un bloqueo del volante y un freno del volante para garantizar que se trabaja con seguridad e La protecci n de seguridad puede estar colocada para cubrir toda la longitud del filo e El bloqueo del volante inmovilizar el portamuestras en la parte superior de la carrera de corte se debe utilizar al cambiar los bloques e La protecci n debe estar colocada y el bloqueo del volante activado cuando un bloque est siendo colocado o elimindo de la pinza portabloques o cuando se est realizando cualquier manipulaci n del bloque mientras la cuchilla est colocada L
22. rq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Las secciones de la izquierda fueron cortadas de un bloque relativamente caliente sin enfriar Las secciones de la derecha fueron cortadas del mismo bloque despu s de que se enfriara sobre la superficie de hielo derriti ndose 17 DL o consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 13 Estudie la t cnica para cortar secciones finas de elevada calidad y consistentes No existe ning n sustituto para la experiencia pero hay algunos pasos fundamentales que har n la tarea m s f cil e Use una secci n de cuchilla que no haya sido utilizada para el desbastado e Alutilizar el avance de desbaste evite cortar secciones gruesas involuntariamente ya que esto podr a da ar su cuchilla y posiblemente la cara del bloque e Sila cara del bloque se calienta o si se requieren niveles m s profundos puede ser necesario volver a enfriarlo Esta cinta ha sido cortada con una carrera lenta y e Generalmente los mejores resultados y la menor compresi n se obtienen con una constante a partir de un bloque bien procesado y completamente fr o Las secciones muestran muy carrera de corte uniforme y lenta a 5 poca compresi n incluso antes de la flotaci n e No pare ni reinicie durante una carrera de corte ya que esto producir a franjas de dif
23. s de elevada calidad VCONSISTONTOS ica a rra ee ewe 18 Elija el portaobjetos y el adhesivo correctamente 19 Deje flotar las secciones con cuidado 20 Seque los portaobjetos de manera adecuada 22 Realice una limpieza y un mantenimiento profundo del microtomo 23 Aprenda a reconocer y a corregirlos fallos m s comunes 24 R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 2 Hospitalaria R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 m e a R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Corr rci Hospirala ria l Fije las muestras de manera adecuada La fijaci n es el paso m s importante al llevar a cabo las t cnicas de preparaci n de muestras histol gicas No importa el cuidado con el que procese y seccione las muestras de tejido los detalles morfol gicos esenciales s lo se mostrar n si el tejido se fija de manera adecuada y r pida e Casi siempre es m s dif cil seccionar las muestras mal fijadas que aquellas que est n bien fijadas e Lostejidos mal fijados siempre mostrar n menos caracter sticas morfol gicas aunque se hayan procesado de manera ptima y con cuidado Hosperalar ia 2 Procese el tejido de forma apr
24. s extraiga los portaobjetos del agua en posici n vertical comercia R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria e Antes de colocarlos portaobjetos en un horno o secador de portaobjetos esc rralos en posici n vertical brevemente para quitar el exceso de agua e Elimine la espuma de la superficie del agua con un tejido sin pelusas entre los bloques para evitar cualquier posibilidad de una contaminaci n entre s e Para evitar cualquier posibilidad de mezcla haga flotar las secciones de un bloque simult neamente Las secciones de dos bloques diferentes no deben flotar en el agua simult neamente Incluso aunque las muestras sean de un tipo diferente existe la posibilidad de una contaminaci n entre s y de confusi n lo que provocar a una identificaci n incorrecta Por eso este procedimiento deber a evitarse en todas las Ocasiones IN m e consu R a do Arroncal 9 Vial C NAVE 4C Parq Emp Porto do Molle 36350 Nigr n Tel 986 493 253 Fax 986 425 165 Hospiralaria 16 Seque los portaobjetos de manera adecuada Unsecado adecuado garantiza que las secciones est n completamente deshidratadas libres de da os por calor planas y que sea improbable que se despeguen durante la tinci n e Drene el agua excedente de debajo de la secci n antes de secarla Esto es vital si los portaobjetos est
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