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CAPILLARYS / MINICAP URINE

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1. CAPILLARYS MINICAP URINE Ref 2013 2014 06 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 UTILIZACI N El kit CAPILLARYS MINICAP URINE permite la preparaci n de las muestras de orina para el an lisis en medio alcalino pH 9 9 de las prote nas urinarias humanas mediante electroforesis capilar en los instrumentos CAPILLARYS y MINICAP Los instrumentos CAPILLARYS y MINICAP permiten realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil proteico urinario para el an lisis cualitativo o cuantitativo en el caso del CAPILLARYS con una versi n de PHORESIS gt 8 61 Las prote nas separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar por espectrofotometr a de absorbancia a 200 nm Los perfiles electrofor ticos son analizados visualmente para detectar las anomal as Para uso en diagn stico In Vitro PRINCIPIO DEL TEST La electroforesis de las prote nas de un l quido biol gico humano es un an lisis muy til en el laboratorio de an lisis cl nicos para investigar las modificaciones del perfil proteico Paralelamente a las t cnicas de electroforesis en diferentes soportes entre los que est el gel de agarosa se ha desarrollado la t cnica de la electroforesis capilar que ofrece las ventajas de una automatizaci n completa del an lisis separaciones r pidas y una buena resoluci n Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica real
2. Las tablas siguientes presentan las gamas de CV obtenidos para la repetibilidad intraserial y la reproducibilidad interlotes interpreparaciones y otal de los porcentajes y concentraciones de componente monoclonal seg n los 2 modos de integraci n hasta la l nea de base y de valle a valle Integraci n hasta la l nea de base Integraci n de valle a valle Porcentajes de componente monoclonal gt e CV m n CV m x CV m n CV m x Repetibilidad intraserial CV 0 2 2 1 0 5 3 8 Reproducibilidad interlotes CV 0 5 3 5 1 0 4 5 Reproducibilidad interpreparaciones CV 0 6 3 9 1 1 4 4 Total CV 0 7 3 8 1 2 4 3 Integraci n hasta la l nea de base Integraci n de valle a valle Concentraciones de componente monoclonal g L CV min CV m x CV m n CV m x Repetibilidad intraserial CV 0 0 2 6 0 0 45 Reproducibilidad interlotes CV 0 5 3 9 1 0 5 2 Reproducibilidad interpreparaciones CV 0 6 4 1 1 1 4 6 Total CV 0 7 4 0 1 2 4 7 Exactitud Cincuenta y seis 56 muestras de orina diferentes con proteinurias comprendidas entre 0 09 y 20 69 g L de las que 9 muestras no presentan componente monoclonal y 47 si han sido analizadas en paralelo mediante electroforesis capilar con la t cnica CAPILLARYS URINE con cuantificaci n y con una t cnica comercial de electroforesis en gel de agarosa con lectura densitom trica que no necesita concentrar la muestra L
3. Ver las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE Despu s de la limpieza de la c nula de muestras no reutilice el segmento de diluci n Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO CONGELAR Puede observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial de CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante 4 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Ver el manual de instrucciones del CAPILLARYS SEBIA Use el cargador espec fico para el mantenimiento n 100 Coloque en este cargador en la posici n 1 un tubo de hem lisis con 2 mL de la soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente Introduzca el cargador n 100 de mantenimiento en el CAPILLARYS En el men d
4. tapas destinadas a cerrar las cajas para cubetas usadas 6 Sistema de di lisis SEBIA referencia n 9200 24 tubos de 20 mL con membrana PES 10 000 MWCO peso molecular de corte de 10 KDa para la di lisis y concentraci n de las muestras o cualquier otro sistema de funcionamiento equivalente homologado para su uso en an lisis cl nicos que permita obtener un volumen final de muestra dializada y concentrada de 500 pL volumen necesario para realizar los an lisis con las t cnicas MINICAP URINE y MINICAP IMMUNOTYPING URINE IMPORTANTE Lea detenidamente las instrucciones de cada dispositivo de di lisis y concentraci n 7 Centr fuga con rotor basculante equipada con soportes para tubos de 30 mm de di metro y 116 mm de longitud para la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA 8 Pipetas de 200 uL 1 mL y 5 mL 9 Microtubos de 1 5 mL 10 Tubos de hem lisis de 75 mm de altura y 13 mm de di metro 122 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se realiza preferentemente con orinas frescas de 24 horas Las orinas deben ser obtenidas seg n los procedimientos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las muestras pueden conservarse una semana en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones prolongadas se recomienda congelar las muestras a 70 C las muestras congeladas son estables un m nimo de 1 mes IMPORTANTE No congele
5. CARACTER STICAS T CNICAS Exactitud Cuarenta y seis muestras de orina diferentes con concentraciones de prote nas totales comprendidas entre 0 05 y 11 96 g L de las que 1 es normal y 45 patol gicas han sido analizadas mediante electroforesis capilar en el sistema MINICAP con la t cnica MINICAP URINE y otro sistema comercial de an lisis de las prote nas urinarias por electroforesis capilar Los resultados obtenidos muestran una correlaci n perfecta entre los dos sistemas de an lisis en la detecci n de anomal as del perfil proteico con una sensibilidad del 100 y una especificidad del 100 respecto a la t cnica comparada calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 En la muestra de orina normal correlaci n perfecta En las 45 muestras de orina patol gicas correlaci n perfecta 126 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY Cameron JS 1987 The nephrotic syndrome Am J Kidney Dis 10 157 171 Chopin N 1991 tude de la prot inurie Inf Tech Biol 1 23 28 Henskens Y et al Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis Clin Chem 44 1184 1190 1998 Jellum E et al Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis J Chromatogr B 689 155 164 1997 Joachim GR Cameron JS Chwartz M Belker EL 1964 Selectivity of protein excretion in patients with the nephrotic syndrome J Clin Invest 43 2332 2346
6. CNICAS An lisis cualitativo Los resultados obtenidos mediante an lisis cualitativo indican una muy buena repetibilidad y reproducibilidad de la t cnica CAPILLARYS URINE en todos los aspectos probados Reproducibilidad intraserial Dos muestras de orina patol gicas una con cinco fracciones proteicas y la otra con prote na de Bence Jones y una orina normal ninguna fracci n detectada han sido preparadas usando dos lotes diferentes de tamp n de di lisis Cada muestra dispensada en todos los pocillos de un segmento de diluci n ha sido analizada con la t cnica CAPILLARYS URINE con un tamp n de an lisis del mismo lote a raz n de una secuencia de an lisis para cada lote de tamp n de di lisis Las tres muestras analizadas proporcionan los mismos resultados con los dos lotes de tamp n de di lisis probados y los perfiles obtenidos son los caracter sticos de cada una de las muestras En la t cnica CAPILLARYS URINE la electroforesis de prote nas no detecta ning n pico en la orina normal y muestra en las 2 orinas patol gicas un perfil con todas las fracciones esperadas Reproducibilidad interserial e interlotes Seis muestras de orina patol gicas que presentan de una a siete fracciones proteicas y dos orinas normales ninguna fracci n anormal detectada han sido preparadas usando tres lotes diferentes de tamp n de di lisis Cada muestra ha sido analizada con la t cnica CAPILLARYS URINE con un tamp n de an lisis del mismo
7. Landers JP Clinical Capillary Electrophoresis Clin Chem 41 495 509 1995 Le Bricon T 2002 Identification et dosage des proteines urinaires au laboratoire d analyses Ann Biol Clin 60 525 540 Le Carrer D 1990 Prot inuries Mise au point sur leur exploration biologique en 1990 L Eurobiologiste 190 395 405 Le Carrer D Nicolas A Ducasse L 1992 L analyse des prot inuries au laboratoire de biologie en 1992 Revue fran aise des laboratoires 225 41 47 10 Le Carrer D Chopin N 1994 Profil prot ique urinaire Proposition d un protocole d exploration biologique des prot inuries Revue fran aise des laboratoires 269 29 37 11 Philipon C 1989 Prot ines urinaires Int r t clinique et interpr tation Technique et Biologie 6 239 249 12 Oda RP et al Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids Electrophoresis 18 1715 1723 1997 13 Waller KV Ward KM Mahan JD Wismatt DK 1989 Current concepts in proteinuria Clin Chem 35 755 765 14 Westermeier R Electrophoresis in Practice A Guide to Theory and Practice VCH Publishers New York NY 1993 15 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat 1986 Sept 93 97 16 JB Oudart et al 2014 Place des explorations urinaires dans le diagnostic et le suivi des gammapathies
8. MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS 1 Lectura del c digo de barras del cargador que contiene el segmento de diluci n con las muestras de orina a analizar Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura controlada por efecto Peltier durante unos 4 minutos Lectura a 200 nm y aparici n simult nea del perfil proteico en la pantalla del ordenador NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para el primer cargador introducido los perfiles correspondientes se obtienen al cabo de 10 minutos Para el cargador siguiente la fase 1 lectura del c digo de barras del cargador se realiza durante la fase 4 migraci n del cargador anterior maoy II AN LISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis los perfiles electrofor ticos pueden ser analizados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones de las diferentes zonas proteicas Alb mina Alfa 1 Alfa 2 Beta y Gamma aparecen en la ventana de edici n y en el informe de resultados NOTA En cada uno de los 3 protocolos de preparaci n de la muestra la amplitud de la curva mostrada en la pantalla refleja la concentraci n de prote nas totales de la muestra analizada LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS III FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en c
9. Manipule con precauci n los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas 8 Saque del cargador los microtubos que contienen las muestras de orina analizadas y cons rvelos en nevera entre 2 y 8 C para un an lisis posterior con la t cnica CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE si es necesario 116 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras del cargador y de las muestras de orina a analizar Distribuci n de las muestras en el segmento de diluci n con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura controlada por efecto Peltier durante unos 4 minutos Lectura a 200 nm y aparici n simult nea del perfil proteico en la pantalla del ordenador DAD NS NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para el primer cargador introducido los perfiles correspondientes a las muestras analizadas se obtienen al cabo de 10 minutos Para el cargador siguiente las fases 1 y 2 lectura de los c digos de barras y distribuci n de las muestras se realizan durante la fase 5 migraci n del cargador anterior Il AN LISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis los perfiles electrofor ticos pueden ser examinados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones de las diferentes zonas proteicas Alb mina A
10. Para una recuperaci n ptima de las prote nas urinarias lo m s recomendable es usar un concentrador de centr fuga para las etapas de di lisis concentraci n IMPORTANTE La t cnica de an lisis de las orinas mediante electroforesis capilar requiere la di lisis y concentraci n de las muestras con sistemas de di lisis SEBIA tubos de 20 mL 6 con concentradores Vivaspin 6 ml Use un tubo por muestra Los par metros indicados conciernen a la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA o de los concentradores Vivaspin 6 ml en centr fugas de rotor basculante Lea detenidamente las instrucciones de los diferentes dispositivos de di lisis y concentraci n para su uso en centr fugas de rotor angular Antes del an lisis prepare cada muestra seg n uno de los dos modos operatorios siguientes NOTA Diluya previamente a Ye v v el tamp n de di lisis concentrado con agua destilada o desionizada 1 volumen de tamp n 1 volumen de agua destilada o desionizada Preparaci n de las muestras con el sistema de di lisis SEBIA debe usarse con los segmentos de diluci n transparentes del kit CAPILLARYS PROTEIN E 6 1 Mida la concentraci n de prote nas totales de la muestra de orina a analizar 2 Centrifugue 5 mL de orina neta durante 10 minutos a 4 300 g 3 Recupere el sobrenadante 109 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 4 Prepare cada muestra en un sistema de di lisis nuevo seg n su concentraci n de pro
11. Presentaci n conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Ver las instrucciones del kit IMPORTANTE Los reactivos contenidos en el kit MINICAP PROTEIN E 6 son necesarios para la realizaci n de la t cnica MINICAP URINE 2 SUERO CONTROL NORMAL Composici n El Suero Control Normal SEBIA referencia n 4785 se obtiene a partir de una mezcla de sueros humanos normales Un procedimiento de estabilizaci n permite conservar el Suero Control Normal en forma liofilizada Aplicaci n El Suero Control Normal est destinado antes de iniciar una nueva serie de an lisis a la normalizaci n de los capilares y al control de migraci n de las prote nas urinarias separadas con la t cnica electrofor tica MINICAP URINE Reconstituya cada vial liofilizado del Suero Control Normal con 1 mL de agua destilada o desionizada Deje reposar 30 minutos y agite suavemente evite la formaci n de espuma El Suero Control Normal reconstituido debe ser usado como un suero humano normal Ver el p rrafo Preparaci n del an lisis electrofor tico para la normalizaci n de los capilares Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Antes de la reconstituci n el Suero Control Normal debe conservarse en nevera hasta la fecha de caducidad indicada en los viales o la caja El Suero Control Normal reconstituido debe conservarse en nevera y usarse en el plazo de una semana para evitar que se contamine o desnaturalice P E uede congelarse en al
12. cuotas y conservarse un m ximo de 6 meses a 18 30 C Suero Control Normal descongelado debe conservarse en nevera y usarse ese mismo d a NOTA Para un uso ptimo del Suero Control Normal en el MINICAP se recomienda alicuotarlo en microtubos antes de congelarlo NOTA Durante el transporte el Suero Control liofilizado puede permanecer a temperatura ambiente entre 15 y 30 C durante 15 d as sin que la calidad del test se vea afectada Como ning n test puede proporcionar una garant a absoluta de la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Suero Control Normal debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Este suero control analizado usando t cnicas aceptadas por una autoridad competente FDA ANSM es negativo para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 3 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para la diluci n de las muestras de orina si es necesario y la primera di lisis ver Preparaci n de las muestras Para lavar los capilares del sistema autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um y con una resistividad superior a 10 Megaohmios x cm Renueve el agua cada
13. lisis CAPILLARYS PROTEIN E 6 Para seleccionar el programa de an lisis URINE y conectar el contenedor de tamp n CAPILLARYS PROTEIN E 6 al aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del CAPILLARYS 4 Normalice los capilares con el Suero Control Normal ver el p rrafo Reactivos necesarios no suministrados IMPORTANTE Es necesario normalizar los capilares antes de analizar muestras de orina en el sistema CAPILLARYS para poder analizarlas despu s con la t cnica CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE En un tubo de hem lisis identificado con la etiqueta con el c digo de barras del Suero Control Normal dispense 25 LL de Suero Control Normal reconstituido y 2 mL de tamp n de di lisis diluido luego homogene ce bien la mezcla Ponga este tubo de hem lisis en la posici n 1 del cargador espec fico n O del CAPILLARYS previsto a este efecto equipado con un segmento de diluci n verde nuevo en caso de ausencia del segmento aparecer un mensaje de advertencia Inicie la normalizaci n de los capilares Introduzca el cargador n 0 en el CAPILLARYS seleccione en la ventana que aparecer en pantalla Normal Control y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los datos 5 Analice las muestras preparadas con el kit CAPILLARYS MINICAP URINE Cada cargador posee 8 posiciones para tubos Coloque hasta 8 tubos de hem lisis vac os que servir n
14. nas totales del orden de 3 g L Luego mezcle 0 5 mL de orina diluida con 19 5 mL de agua destilada o desionizada 5 Homogene ce la orina diluida 6 Equilibre los tubos con agua destilada o desionizada y centrifugue durante 40 minutos a 4 000 g ATENCI N El volumen obtenido tras la concentraci n por centrifugaci n debe ser inferior o igual a 0 5 mL 7 Para la di lisis complete el sistema de di lisis hasta 20 mL con tamp n de di lisis diluido 8 Equilibre los tubos con tamp n de di lisis diluido y centrifugue de nuevo durante 40 minutos a 4 000 g 9 Despu s de la centrifugaci n una parte de la muestra puede permanecer retenida en la zona plana superior del sistema de di lisis ver el esquema adjunto Con una micropipeta transfiera esta parte de la muestra al pocillo inferior del sistema de di lisis Si el volumen obtenido es inferior a 0 5 mL ajuste el contenido del tubo hasta 0 5 mL cuando la parte inferior del menisco se haya equilibrado con tamp n de di lisis diluido e 10 Homogene ce el contenido del tubo 11 Tome el contenido del tubo orina dializada y disp nselo en un microtubo de 1 5 mL 12 Deseche el sistema de di lisis IMPORTANTE Las muestras deben ser analizadas como mucho el d a siguiente a su preparaci n Para limitar la adsorci n de las prote nas urinarias a la membrana del dispositivo de di lisis y concentraci n sistema de di lisis SEBIA se recomienda no conservar la
15. si es necesario y la primera di lisis ver Preparaci n de las muestras Para lavar los capilares del sistema autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um y con una resistividad superior a 10 Megaohmios x cm Renueve el agua cada d a para evitar contaminaciones microbianas Para un funcionamiento ptimo se recomienda a adir 350 HL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 3 CAPICLEAN Presentaci n El vial de soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteol ticos surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del instrumento de electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Cuando se realicen menos de 500 an lisis a la semana haga un ciclo de limpieza con CAPICLEAN al menos una vez por semana Cuando se realicen menos de 500 an lisis al d a pero m s de 500 an lisis a la semana haga un ciclo de limpieza con CAPICLEAN cada 500 an lisis Cuando se realicen m s de 500 an lisis al d a haga un ciclo de limpieza con CAPICLEAN una vez al d a
16. de 10 KDa VIVASCIENCE o cualquier otro sistema de funcionamiento equivalente homologado para su uso en an lisis cl nicos IMPORTANTE Lea detenidamente las instrucciones de cada dispositivo de di lisis y concentraci n 5 Centr fuga con rotor basculante equipada con soportes para tubos de 17 mm de di metro y 122 mm de longitud para la utilizaci n de tubos Vivaspin 6 ml 6 para tubos de 30 mm de di metro y 116 mm de longitud para la utilizaci n de sistemas de di lisis SEBIA 6 Segmentos de diluci n verdes para CAPILLARYS SEBIA referencia n 2081 para el an lisis de muestras preparadas en concentradores Vivaspin 6 ml 7 Pipetas de 200 pL 1 mL y 5 mL MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se realiza preferentemente con orinas frescas de 24 horas Las orinas deben ser obtenidas seg n los m todos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las muestras pueden conservarse una semana en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones prolongadas se recomienda congelar las muestras a 70 C las muestras congeladas son estables un m nimo de 1 mes IMPORTANTE No congele las muestras a 20 C Las muestras degradadas o descongeladas pueden presentar fracciones deformadas con aparici n de peque os picos adicionales debido a la degradaci n de las prote nas NOTA No conserve las muestras de orina a temperatura ambiente Preparaci n de las muestras
17. de soporte para los microtubos en cada cargador y luego los microtubos que contengan las muestras dializadas cortando antes el tap n de cada microtubo Conserve los tapones de cada microtubo para la conservaci n posterior de las muestras si es necesario IMPORTANTE Se recomienda identificar los tubos de hem lisis que servir n de soporte de los microtubos que contengan las muestras a analizar con las etiquetas con c digo de barras de identificaci n correspondientes a las muestras Esta identificaci n permitir seleccionar el modo de diluci n necesario para la t cnica CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE Ponga los c digos de barras de cada tubo orientados hacia la ventana de lectura NOTA Si el n mero de muestras a analizar es inferior a 8 complete el cargador con tubos que contengan agua destilada o desionizada Coloque en cada cargador un segmento de diluci n verde nuevo en caso de ausencia del segmento el cargador ser expulsado Introduzca el o los cargador es completo s en el sistema CAPILLARYS por el orificio de entrada situado en medio del aparato Se pueden introducir hasta trece cargadores sucesivamente pudi ndose introducir nuevos cargadores de forma continua a medida que se vaya completando el an lisis de los cargadores ya introducidos 6 Saque de la cinta de salida situada a la izquierda del aparato los cargadores ya analizados 7 Coja con precauci n el segmento de diluci n usado y tirelo ATENCI N
18. etiqueta del vial NO CONGELAR Puede observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial de CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante 5 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Ver el manual de instrucciones del CAPILLARYS SEBIA Use el cargador espec fico para el mantenimiento n 100 Coloque en este cargador en la posici n 1 un tubo de hem lisis con 2 mL de la soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente Introduzca el cargador n 100 de mantenimiento en el CAPILLARYS En el men de la ventana MANTENIMIENTO que aparecer en pantalla seleccione la opci n Iniciar la limpieza de la c nula soluci n de hipoclorito de sodio y luego valide Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipi
19. hasta la l nea de base y de valle a valle Los resultados han mostrado que el porcentaje y la concentraci n del componente monoclonal est n perfectamente correlacionados con la proporci n de las 2 orinas en la mezcla y que toda variaci n es detectada de forma lineal con la t cnica CAPILLARYS URINE con los 2 modos de integraci n La t cnica CAPILLARYS URINE es por tanto perfectamente lineal para el componente monoclonal en la gama de concentraciones estudiadas entre 0 00 y 5 98 g L con el modo de integraci n hasta la l nea de base y entre 0 00 y 5 65 g L con el modo de integraci n de valle a valle Sensibilidad La sensibilidad de la t cnica CAPILLARYS URINE con cuantificaci n obtenida por diluci n serial en una orina normal de una orina con prote na de Bence Jones con una concentraci n inicial del orden de 1 44 g L por integraci n hasta la l nea de base y de 1 39 g L por integraci n de valle a valle es tal que el l mite de cuantificaci n de una prote na de Bence Jones es del orden de 150 mg L para los dos modos de integraci n NOTA El l mite de cuantificaci n de un pico monoclonal puede variar en funci n de la posici n del pico monoclonal y del fondo policlonal de la zona de las gamma y betaglobulinas 120 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 T CNICA MINICAP URINE REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 KIT MINICAP PROTEIN E 6 SEBIA REFERENCIA 2203
20. las muestras a 20 C Las muestras degradadas o descongeladas pueden presentar fracciones deformadas con aparici n de peque os picos adicionales debido a la degradaci n de las prote nas NOTA No conserve las muestras de orina a temperatura ambiente Preparaci n de las muestras con los sistemas de di lisis SEBIA Para una recuperaci n ptima de las prote nas urinarias lo m s recomendable es usar un concentrador de centr fuga para las etapas de di lisis concentraci n IMPORTANTE La t cnica de an lisis de las orinas mediante electroforesis capilar requiere la di lisis y concentraci n de las muestras con sistemas de di lisis SEBIA tubos de 20 mL Use un tubo por muestra Los par metros indicados son aplicables a la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA en centr fugas de rotor basculante Lea detenidamente las instrucciones de los diferentes dispositivos de di lisis y concentraci n para su uso en centr fugas de rotor angular Antes del an lisis prepare cada muestra seg n el modo operatorio siguiente NOTA Diluya previamente a Ye v v el tamp n de di lisis concentrado con agua destilada o desionizada 1 volumen de tamp n 1 volumen de agua destilada o desionizada 1 Mida la concentraci n de prote nas totales de la muestra de orina a analizar 2 Centrifugue 5 mL de orina neta durante 10 minutos a 4 300 g 3 Recupere el sobrenadante 4 Prepare cada muestra en un sistema de di l
21. los niveles de los reactivos mediante los cursores El carrusel tiene 28 posiciones para tubos Para analizar las muestras preparadas con el kit CAPILLARYS MINICAP URINE Ponga hasta 26 tubos de hem lisis vac os que servir n de soporte para los microtubos en el carrusel posiciones 1 a 26 comenzando por la posici n n 1 y luego los microtubos que contengan las muestras dializadas cortando antes el tap n de cada microtubo y colocando el c digo de barras de cada tubo orientado hacia la ventana de lectura IMPORTANTE Se recomienda identificar los tubos de hem lisis que servir n de soporte a los microtubos que contengan las muestras a analizar con las etiquetas con c digo de barras de identificaci n correspondientes a las muestras Esta identificaci n permitir seleccionar el modo de diluci n necesario para la t cnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE En caso de ausencia del c digo de barras utilice la funci n del programa que permite asociar la posici n del tubo en el carrusel al modo de diluci n deseado para la t cnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE Conserve los tapones de cada microtubo para la conservaci n posterior de las muestras si es necesario Si el n mero de muestras a analizar es impar a ada un tubo con agua destilada o desionizada Para normalizar los capilares con el Suero Control Normal ver el p rrafo Reactivos necesarios no suministrados dispense en un tubo de hem lisis 25 uL de Suero Control Normal reco
22. monoclonales en pratique quotidienne Ann Biol Clin 72 2 147 152 TAS Lo 505 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 SCHEMAS FIGURES Figure 1 Urine normale Normal Zones prot iques Protein zones Figure 2 Urine pathologique avec 5 zones prot iques Pathological urine sample with 5 protein zones Zones prot iques Protein zones 506 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 SCHEMAS FIGURES Figure 3 Urine pathologique avec prot ine de Bence Jones Pathological urine sample with Bence Jones protein prot ine de Bence Jones Bence Jones protein Alpha 1 Albumin e Zones prot iques Protein zones Figure 4 Urine pathologique avec 2 prot ines de Bence Jones Pathological urine sample with 2 Bence Jones proteins 2 prot ines de Bence Jones 2 Bence Jones proteins Zones prot iques Protein zones 507 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 SCHEMAS FIGURES Figure 5 Profil de r f rence S rum de Contr le Normal dilu au 1 40 Reference pattern Normal Control Serum diluted 40 times Zones prot iques Protein zones 508
23. n de las muestras con los concentradores Vivaspin 6 ml debe usarse solamente con los segmentos de diluci n verdes 1 Mida la concentraci n de prote nas totales de la muestra de orina a analizar 2 Centrifugue 5 mL de orina neta durante 10 minutos a 4 300 g 3 Recupere el sobrenadante 4 Prepare cada muestra en un concentrador Vivaspin 6 ml nuevo seg n su concentraci n de prote nas totales Concentraci n de prote nas totales inferior a 1 g L Mezcle 0 5 mL de orina con 5 5 mL de agua destilada o desionizada Concentraci n de prote nas totales comprendida entre 1 y 3 g L Mezcle 0 125 mL de orina con 6 mL de agua destilada o desionizada Concentraci n de prote nas totales superior a 3 g L Diluya primero la orina con agua destilada o desionizada para obtener una concentraci n de prote nas totales del orden de 3 g L Luego mezcle 0 125 mL de orina diluida con 6 mL de agua destilada o desionizada 5 Homogene ce la orina diluida 6 Equilibre los tubos con agua destilada o desionizada y centrifugue durante 30 minutos a 3 500 g ATENCI N El volumen obtenido tras la concentraci n por centrifugaci n debe ser inferior o igual a 0 1 mL 7 Vacie la parte inferior del concentrador Vivaspin 8 Para la di lisis a ada 6 mL de tamp n de di lisis diluido a cada concentrador Vivaspin 9 Equilibre los tubos con tamp n de di lisis diluido y centrifugue de nuevo durante 30 minutos a 3 500 g 10 Despu
24. part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial de CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante Para un uso diferido coloque el tubo que contenga la soluci n diluida en nevera Debe usarse durante el d a 121 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 5 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Ver el manual de instrucciones del MINICAP SEBIA Dispense 500 pL de soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte identificado con una etiqueta con el c digo de barras espec fico de la soluci n de hipoclorito de sodio en la posici n 1 del carrusel del MINICAP Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a este efecto en caso de ausencia de cubetas aparecer un mensaje de a
25. ximo de 6 meses a 18 30 C El Suero Control Normal descongelado debe conservarse en nevera y usarse ese mismo d a NOTA Para un uso ptimo del Suero Control Normal en el CAPILLARYS se recomienda alicuotarlo en microtubos antes de congelarlo o NOTA Durante el transporte el Suero Control liofilizado puede permanecer a temperatura ambiente entre 15 y 30 C durante 15 d as sin que la calidad del test se vea afectada Como ning n test puede proporcionar una garant a absoluta de la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Suero Control Normal debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Este suero control analizado usando t cnicas aceptadas por una autoridad competente FDA ANSM es negativo para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 3 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para la diluci n de las muestras de orina si es necesario y la primera di lisis ver Preparaci n de las muestras Para lavar los capilares del sistema autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 jm y con una resistividad superior a 10 Megaohmios x cm Renueve el agua cada d a para evita
26. 6 son necesarios para la realizaci n de la t cnica CAPILLARYS URINE ATENCI N No use los segmentos de diluci n transparentes contenidos en el kit CAPILLARYS PROTEIN E 6 para la t cnica CAPILLARYS URINE 2 SUERO CONTROL NORMAL Composici n El Suero Control Normal SEBIA referencia n 4785 se obtiene a partir de una mezcla de sueros humanos normales Un procedimiento de stabilizaci n permite conservar el Suero Control Normal en forma liofilizada Aplicaci n El Suero Control Normal est destinado antes de iniciar una nueva serie de an lisis a la normalizaci n de los capilares y al control de migraci n de las prote nas urinarias separadas con la t cnica electrofor tica CAPILLARYS URINE Reconstituya cada vial liofilizado de Suero Control Normal con 1 mL de agua destilada o desionizada Deje reposar 30 minutos y agite suavemente evite la formaci n de espuma El Suero Control Normal reconstituido debe ser usado como un suero humano normal Ver el p rrafo Preparaci n del an lisis electrofor tico para la normalizaci n de los capilares Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Antes de la reconstituci n el Suero Control Normal debe conservarse en nevera hasta la fecha de caducidad indicada en los viales o la caja El Suero Control Normal reconstituido debe conservarse en nevera y usarse en el plazo de una semana para evitar que se contamine o desnaturalice Puede congelarse en al cuotas y conservarse un m
27. UCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras de las muestras de orina a analizar y del carrusel Distribuci n de las muestras en las cubetas de reactivo con limpieza de la c nula de muestras entre cada muestra Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura regulada por efecto Peltier durante unos 4 minutos Lectura a 200 nm y aparici n simult nea del perfil proteico en la pantalla del ordenador DAPR NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para los 2 primeros tubos analizados los perfiles correspondientes a las muestras analizadas se obtienen al cabo de unos 10 minutos Para los tubos siguientes las fases 1 y 2 lectura de los c digos de barras y distribuci n de las muestras se realizan durante el an lisis migraci n de los 2 tubos anteriores Il AN LISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis los perfiles electrofor ticos pueden ser examinados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones de las diferentes zonas proteicas Alb mina Alfa 1 Alfa 2 Beta y Gamma aparecen en la ventana de edici n y en el informe de resultados NOTA En cada uno de los 3 protocolos de preparaci n de la muestra la amplitud de la curva mostrada en la pantalla refleja la concentraci n de prote nas totales de la muestra analizada Para el inmunotipado los picos anormales deben ser integrados con la
28. VO El aparato autom tico CAPILLARYS permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores si no se hace correctamente los contenedores puede despresurizarse y los an lisis pueden verse afectados y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de contenedor La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo VER EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS RESULTADOS Interpretaci n La interpretaci n es cualitativa Para facilitar la interpretaci n de los perfiles se recomienda superponer un perfil obtenido en la normalizaci n de los capilares con el Suero Control Normal para obtener un perfil de referencia 117 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 partir de
29. a correlaci n entre estas dos t cnicas en el porcentaje y la concentraci n de los componentes monoclonales ha sido determinada usando herramientas estad sticas de regresi n lineal Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre las dos t cnicas en la cuantificaci n de componentes monoclonales presentes en cada muestra Los par metros de correlaci n entre los 2 sistemas de an lisis y CAPILLARYS URINE se presentan en las tablas siguientes para cada modo de integraci n Integraci n hasta la l nea de base del Coeficiente de i L mites de los valores componente monoclonal correlaci n Euntode conte en y Pendiente CAPILLARYS URINE Porcentaje 0 987 3 580 0 976 2 0 91 8 Concentraci n g L 0 999 0 033 0 981 0 01 17 65 119 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Integraci n de valle a valle del Coeficiente de L mites de los valores componente monoclonal correlaci n Funto de corte en y Pendiente CAPILLARYS URINE Porcentaje 0 990 1 525 0 952 0 6 87 7 Concentraci n g L 0 999 0 019 0 971 0 00 15 58 Linealidad Una orina con una proteinuria de 7 49 g L con proteina de Bence Jones y una orina con una proteinuria de 6 03 g L sin proteina de Bence Jones han sido mezcladas en proporciones variables y las mezclas han sido analizadas con la t cnica CAPILLARYS URINE con cuantificaci n mediante integraci n del componente monoclonal
30. alente homologado para su uso en diagn stico cl nico Una di lisis insuficiente de la muestra puede provocar la aparici n de picos residuales no proteicos En caso de sospechar una interferencia se recomienda realizar una di lisis adicional de la muestra Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las prote nas urinarias En el caso de la cuantificaci n de un componente monoclonal para el seguimiento de un paciente es necesario utilizar siempre la misma t cnica de determinaci n de las prote nas urinarias Los resultados obtenidos en la cuantificaci n de los picos monoclonales dependen completamente del valor de proteinuria introducido en el programa PHORESIS si el usuario comete un error al introducir el valor de proteinuria este error repercutir en el informe de resultados Asistencia t cnica Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como la informaci n relativa a la limpieza y eliminaci n de residuos a las reglas de etiquetado y seguridad aplicadas por SEBIA al embalaje para el transporte de muestras biol gicas y a la descontaminaci n de los aparatos est n disponibles en el DVD INSTRUCTIONS amp SAFETY DATA SHEETS CARACTER STICAS T
31. casos cl nicos Todos los perfiles de aspecto monoclonal u oligoclonal deben ser confirmados usando el kit de inmunotipado de SEBIA CAPILLARYS IMMUNOTYPING los kits de inmunofijaci n de SEBIA HYDRAGEL BENCE JONES HYDRAGEL IF HYDRAGEL URINE PROFIL E con los antisueros espec ficos anti cadenas ligeras libres kappa o lambda Es necesario realizar an lisis complementarios mediante electroforesis con las t cnicas de SEBIA HYDRAGEL PROTEINURIE 6 HYDRAGEL URINE PROFIL E o mediante determinaciones nefelom tricas para caracterizar las nefropatias tubulares glomerulares o mixtas sospechadas despu s del an lisis por electroforesis capilar Para obtener informaci n complementaria sobre la interpretaci n de los perfiles obtenidos ver la BIBLIOGRAF A Casos especiales Las orinas con una concentraci n inicial de prote nas totales inferior a 0 15 g L pueden presentar un fondo proteico arrastre en todo el perfil Cualquier anomal a sospechada en las zonas Beta o Gamma requiere la investigaci n posterior de la presencia de la prote na de Bence Jones sea cual sea la concentraci n de prote nas totales de la muestra Interferencias y limitaciones Ver MUESTRAS PARA EL AN LISIS Analice nicamente muestras preparadas usando los dispositivos de di lisis y concentraci n recomendados en el p rrafo EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS como los sistemas de di lisis SEBIA o cualquier sistema de funcionamiento equiv
32. centrifugaci n 10 minutos a 4 300 g por si hay hem lisis o turbidez No use muestras que hayan sido conservadas en un dispositivo de di lisis y concentraci n ya que algunas prote nas podr an haberse adsorbido a la membrana No reutilice una muestra de orina que haya sido dispensada en la cubeta de reactivo PROCEDIMIENTO El MINICAP es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las prote nas urinarias en 2 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de las muestras a analizar hasta 26 y del carrusel dispensaci n de las muestras en las cubetas de reactivo a partir de los microtubos que contienen las muestras dializadas lavado de los capilares inyecci n de las muestras separaci n y detecci n directa de las prote nas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes preparaci n di lisis y concentraci n de las muestras colocaci n de los microtubos sin tapones que contienen las muestras a analizar en los tubos de hem lisis que les servir n de soporte en el carrusel en las posiciones 1 a 26 cada tubo debe estar identificado con el c digo de barras de identificaci n espec fico correspondiente a la muestra a analizar colocaci n del Suero Control Normal en la posici n n 28 del carrusel introducci n en el sistema MINICAP recuperaci n del carrusel despu s del an lisis y de los microtubos para su ev
33. cerca de una ventana o de una fuente de calor El tamp n de di lisis diluido es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del contenedor de tamp n a temperatura ambiente o en nevera NOTA Si el tamp n de di lisis ha sido conservado en nevera conviene atemperarlo antes de usarlo NO CONGELAR Deseche el tamp n diluido si aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana precipitados o part culas en suspensi n NOTA Durante la conservaci n el tamp n concentrado puede adquirir un tono amarillento sin ning n efecto adverso en su funcionamiento 107 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 T CNICA CAPILLARYS URINE CAPILLARYS 1 y 2 versi n 5 4x ATENCI N Esta versi n no permite realizar el inmunotipado de las orinas REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 KIT CAPILLARYS PROTEIN E 6 SEBIA REFERENCIA 2003 Presentaci n conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Ver las instrucciones del kit IMPORTANTE Los reactivos contenidos en el kit CAPILLARYS PROTEIN E 6 son necesarios para la realizaci n de la t cnica CAPILLARYS URINE Los segmentos de diluci n transparentes contenidos en el kit CAPILLARYS PROTEIN E 6 no pueden ser usados para el an lisis de muestras preparadas con los tubos Vivaspin 6 ml 2 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para la diluci n de las muestras de orina
34. ci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro lt 0 45 ym y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar MINICAP SEBIA referencia n 1230 2 Carrusel suministrado con el sistema MINICAP 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema MINICAP contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada y contenedor de desechos 4 Cubetas de reactivo MINICAP SEBIA por 250 referencia n 2280 5 Tapas para las cajas de cubetas de reactivo MINICAP usadas por 12 referencia n 2286
35. d a para evitar contaminaciones microbianas Para un funcionamiento ptimo se recomienda a adir 350 L L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de limpieza se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 4 CAPICLEAN Presentaci n El vial de soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteol ticos surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del instrumento de electroforesis capilar MINICAP SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN al menos una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se hayan realizado en menos de una semana Ver las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE Para un uso ptimo del CAPICLEAN en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n CAPICLEAN diluida corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO CONGELAR Puede observarse un precipitado o
36. diluido d 10 Homogene ce el contenido del tubo 11 Tome el contenido del tubo orina dializada y disp nselo en un microtubo de 1 5 mL 12 Deseche el sistema de di lisis IMPORTANTE Las muestras deben ser analizadas como mucho el d a siguiente a su preparaci n Para limitar la adsorci n de las prote nas urinarias en la membrana del dispositivo de di lisis y concentraci n sistema de di lisis SEBIA se recomienda no conservar la muestra en el sistema de di lisis despu s de la centrifugaci n sino en un microtubo conservado en nevera entre 2 y 8 C Consulte las instrucciones de la centr fuga para calcular el n mero de revoluciones por minuto correspondiente al tipo de rotor usado Las condiciones de utilizaci n de los dispositivos de di lisis y concentraci n son diferentes en las centr fugas de rotor basculante y en las de rotor angular Los par metros indicados anteriormente son aplicables a la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA en centr fugas de rotor basculante Lea detenidamente las instrucciones de los diferentes dispositivos de di lisis y concentraci n para su uso en centr fugas de rotor angular 123 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Muestras a descartar No use muestras de orina antiguas o mal conservadas ya que las fracciones estar an muy modificadas debido a la degradaci n de las prote nas urinarias Se recomienda observar el aspecto de la orina despu s de la primera
37. dor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP RESULTADOS Interpretaci n La interpretaci n es cualitativa Para facilitar la interpretaci n de los perfiles se recomienda superponer un perfil obtenido en la normalizaci n de los capilares con el Suero Control Normal para obtener un perfil de referencia Proteinuria fisiol gica Es d bil en general inferior a 120 mg 24 horas No hay diferencias significativas entre los perfiles obtenidos en hombres y mujeres La prote na predominante es la alb mina asociada eventualmente a la transferrina y a trazas de inmunoglobulinas Toda proteinuria superior a 120 mg 24 horas debe ser considerada patol gica Una proteinuria positiva gt 120 mg 24 horas deber an ser examinada con m s detalle mediante un an lisis cualitativo de las prote nas eliminadas La electroforesis de orina se realiza para investigar la presencia de componentes monoclonales en particular las prote nas de Bence Jones o cadenas ligeras libres monoclonales o de otras
38. dvertencia Introduzca el carrusel en el MINICAP Cierre las puertas del MINICAP el ciclo de limpieza comenzar autom ticamente IMPORTANTE Para un uso ptimo de la soluci n de hipoclorito de sodio en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de la luz solar y de cualquier fuente de calor o de ignici n y alejado de cidos y amoniaco 6 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n Cada vial de soluci n de lavado concentrada CAPILLARYS MINICAP SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Para el MINICAP se recomienda diluir s lo 25 mL de la soluci n concentrada hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares del MINICAP IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conserva
39. e la ventana MANTENIMIENTO que aparecer en pantalla seleccione la opci n Iniciar la limpieza de la c nula soluci n de hipoclorito de sodio o soluci n de lavado CDT y luego valide Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de la luz solar y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de cidos y amoniaco 5 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n Cada vial de soluci n de lavado concentrada CAPILLARYS MINICAP SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina de pH 12 108 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Uso Para el lavado de los capilares del CAPILLARYS Reactivo adicional necesario en caso de realizar series inferiores a 40 an lisis IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es e
40. echada en las zonas Beta o Gamma requiere la investigaci n posterior de la presencia de la prote na de Bence Jones sea cual sea la concentraci n de prote nas totales de la muestra Interferencias y limitaciones Ver MUESTRAS PARA EL AN LISIS Analice nicamente muestras preparadas usando los dispositivos de di lisis y concentraci n recomendados en el p rrafo EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS como los sistemas de di lisis SEBIA o cualquier sistema de funcionamiento equivalente homologado para su uso en diagn stico cl nico Una di lisis insuficiente de la muestra puede provocar la aparici n de picos residuales no proteicos En caso de sospechar una interferencia se recomienda realizar una di lisis adicional de la muestra Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las prote nas urinarias Asistencia t cnica Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como la informaci n relativa a la limpieza y eliminaci n de residuos a las reglas de etiquetado y seguridad aplicadas por SEBIA al embalaje para el transporte de muestras biol gicas y a la descontaminaci n de los aparatos est n disponibles en el DVD INSTRUCTIONS amp SAFETY DATA SHEETS
41. econstituir una variaci n del volumen final del 5 no afecta a la calidad del an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro lt 0 45 nm y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA CAPILLARYS referencia n 1220 CAPILLARYS 2 referencia n 1222 6 CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING referencia n 1227 2 Cargadores suministrados con el sistema CAPILLARYS 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema CAPILLARYS contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada contenedor de soluci n de lavado y contenedor de desechos 4 Sistema de di lisis SEBIA referencia n 9200 24 tubos de 20 mL con membrana PES 10 000 MWCO peso molecular de corte de 10 KDa para la di lisis y concentraci n de las muestras o cualquier otro sistema de funcionamiento equivalente homologado para su uso en an lisis cl nicos que permita obtener un volumen final de muestra dializada y concentrada de 500 pL volumen necesario para realizar los an lisis con las t cnicas CAPILLARYS URINE e IMMUNOTYPING URINE IMPORTANTE Lea detenidamente las instrucciones de cada dispositivo de di lisis y concentraci n 5 Centr fuga con rotor basculante equipada con soportes para tubos de 30 mm de di me
42. ente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de la luz solar y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de cidos y amoniaco 6 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n Cada vial de soluci n de lavado concentrada CAPILLARYS MINICAP SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina de pH 12 Uso Para el lavado de los capilares del CAPILLARYS Reactivo adicional necesario en caso de realizar series inferiores a 40 an lisis IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a r
43. entual an lisis mediante inmunotipado recuperaci n y cierre de las cajas para cubetas usadas LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 2 3 D 10 dl 12 Encienda el MINICAP y el ordenador de control Para la inicializaci n del aparato coloque al menos una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas aparecer un mensaje de advertencia Abra el programa de gesti n Phoresis y valide el nivel de los reactivos y los desechos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente Las muestras preparadas deben ser analizadas con el programa de an lisis URINE y el tamp n de an lisis MINICAP PROTEIN E 6 Para seleccionar el programa de an lisis URINE y conectar el contenedor de tamp n MINICAP PROTEIN E 6 en la posici n B1 del aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del MINICAP y siga las indicaciones que aparecer n en pantalla Ponga cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP previsto a este efecto en caso de ausencia de cubetas aparecer un mensaje de advertencia Ponga una caja para cubetas usadas en el MINICAP en el lugar previsto a este efecto Compruebe el nivel de llenado de los diferentes contenedores de reactivo complete los vol menes si es necesario y vac e el contenedor de desechos En la ventana Verificar el nivel de los contenedores actualice
44. erencia Para ello reconstituya el suero control liofilizado con agua destilada o desionizada dil yalo a 1 40 con el tamp n de di lisis diluido y luego analice directamente el suero diluido como una muestra de orina Proteinuria fisiol gica Es d bil en general inferior a 120 mg 24 horas No hay diferencias significativas entre los perfiles obtenidos en hombres y mujeres La prote na predominante es la alb mina asociada eventualmente a la transferrina y a trazas de inmunoglobulinas Toda proteinuria superior a 120 mg 24 horas debe ser considerada como patol gica Una proteinuria positiva gt 120 mg 24 horas deber a ser examinada con m s detalle mediante un an lisis cualitativo de las prote nas eliminadas La electroforesis de orina se realiza para investigar la presencia de componentes monoclonales en particular las prote nas de Bence Jones o cadenas ligeras libres monoclonales o de otras prote nas urinarias Una deformaci n del perfil respecto al normal es indicadora de una anomal a especialmente la aparici n de un pico adicional en la zona de las gammaglobulinas o de las betaglobulinas La tecnolog a de la electroforesis de orina permite alcanzar un l mite de detecci n de las bandas monoclonales inmunoglobulinas monoclonales o cadenas ligeras libres monoclonales de unos 20 mg L satisfactorio para la mayor a de casos cl nicos Todos los perfiles de aspecto monoclonal u oligoclonal deben ser confirmados con los kit
45. herramienta de integraci n de picos del programa y el Ratio orina definido por la proporci n de la superficie del pico anormal respecto a la superficie total de las prote nas del Suero Control Normal es entonces calculado autom ticamente aparecer en la ventana de edici n de las curvas Este ratio ser usado en la t cnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE para determinar el modo de diluci n de la muestra que se aplicar HIPOGAMMA EST NDAR o HIPERGAMMA LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP Ill FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar un procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IMPORTANTE Coloque una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a este efecto en caso de ausencia de cubetas aparecer un mensaje de advertencia IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El sistema autom tico MINICAP permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de reactivos La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contene
46. is o turbidez No use una muestra que haya sido conservada en un dispositivo de di lisis y concentraci n ya que algunas prote nas podr an haberse adsorbido a la membrana No use una muestra que haya sido conservada m s de 30 minutos en el segmento de diluci n despu s de la preparaci n PROCEDIMIENTO El sistema CAPILLARYS es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las prote nas urinarias en 8 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura del c digo de barras del cargador lavado de los capilares inyecci n de las muestras separaci n y detecci n directa de las prote nas en los capilares 110 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Las etapas manuales son las siguientes preparaci n di lisis y concentraci n de las muestras dispensaci n de las muestras preparadas en los pocillos del segmento de diluci n transparente o verde seg n el dispositivo de di lisis y concentraci n usado colocaci n del segmento de diluci n que contiene las muestras en el cargador con identificaci n manual de las muestras introducci n en el sistema CAPILLARYS recuperaci n de los cargadores despu s del an lisis LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS I PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el CAPILLARYS y el ordenador de control 2 Abra el programa de gesti n PHORESIS y valide el nivel de l
47. isis nuevo seg n su concentraci n de prote nas totales Concentraci n de prote nas totales inferior a 1 g L Mezcle 2 mL de orina con 18 mL de agua destilada o desionizada Concentraci n de prote nas totales comprendida entre 1 y 3 g L Mezcle 0 5 mL de orina con 19 5 mL de agua destilada o desionizada Concentraci n de prote nas totales superior a 3 g L Diluya primero la orina con agua destilada o desionizada para obtener una concentraci n de prote nas totales del orden de 3 g L Luego mezcle 0 5 mL de orina diluida con 19 5 mL de agua destilada o desionizada 5 Homogene ce la orina diluida 6 Equilibre los tubos con agua destilada o desionizada y centrifugue durante 40 minutos a 4 000 g ATENCI N El volumen obtenido tras la concentraci n por centrifugaci n debe ser inferior o igual a 0 5 mL 7 Para la di lisis complete el sistema de di lisis hasta 20 mL con tamp n de di lisis diluido Equilibre los tubos con tamp n de di lisis diluido y centrifugue de nuevo durante 40 minutos a 4 000 g 9 Despu s de la centrifugaci n una parte de la muestra puede permanecer retenida en la zona plana superior del sistema de di lisis ver el esquema adjunto Con una micropipeta transfiera esta parte de la muestra al pocillo inferior del sistema de di lisis Si el volumen obtenido es inferior a 0 5 mL ajuste el contenido del tubo hasta 0 5 mL cuando la parte inferior del menisco se haya equilibrado con tamp n de di lisis
48. izada en un tubo de di metro interno inferior a 100 nm lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida Los instrumentos CAPILLARYS y MINICAP usan el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de un pH dado y seg n el pH del electrolito de un flujo electroendosm tico m s o menos importante El CAPILLARYS posee 8 capilares en paralelo permitiendo realizar 8 an lisis simult neos El MINICAP posee 2 capilares en paralelo permitiendo realizar 2 an lisis simult neos En estos instrumentos la inyecci n en los capilares de la muestra previamente dializada y concentrada se realiza en el nodo por aspiraci n La separaci n se lleva a cabo a continuaci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las prote nas se efect a a 200 nm en el lado cat dico Los capilares se lavan despu s con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n usado de pH alcalino las prote nas urinarias son separadas en cinco zonas sucesivas en el orden siguiente zona gamma zona beta zona alfa 2 zona alfa 1 y alb mina Cada fracci n contiene una o varias prote na
49. la versi n de PHORESIS gt 8 61 la t cnica CAPILLARYS URINE tambi n es cuantitativa En el caso de un perfil electrofor tico anormal realice el inmunotipado de la muestra y despu s si se detecta y caracteriza un componente monoclonal cuantifiquelo seg n el protocolo descrito anteriormente Proteinuria fisiol gica Es d bil en general inferior a 120 mg 24 horas No hay diferencias significativas entre los perfiles obtenidos en hombres y mujeres La prote na predominante es la alb mina asociada eventualmente a la transferrina y a trazas de inmunoglobulinas Toda proteinuria superior a 120 mg 24 horas debe ser considerada patol gica Una proteinuria positiva gt 120 mg 24 horas deber a ser examinada con m s detalle mediante un an lisis cualitativo de las prote nas eliminadas La electroforesis de orina se realiza para investigar la presencia de componentes monoclonales en particular las prote nas de Bence Jones o cadenas ligeras libres monoclonales o de otras prote nas urinarias Una deformaci n del perfil respecto al normal es indicadora de una anomal a especialmente la aparici n de un pico adicional en la zona de las gammaglobulinas o de las betaglobulinas La tecnolog a de la electroforesis de orina permite alcanzar un l mite de detecci n de las bandas monoclonales inmunoglobulinas monoclonales o cadenas ligeras libres monoclonales en el an lisis cualitativo de unos 20 mg L satisfactorio para la mayor a de
50. lfa 1 Alfa 2 Beta y Gamma aparecen en la ventana de edici n y en el informe de resultados NOTA En cada uno de los 3 protocolos de preparaci n de la muestra la amplitud de la curva mostrada en la pantalla refleja la concentraci n de prote nas totales de la muestra analizada Para el inmunotipado los picos anormales deben ser integrados con la herramienta de integraci n de picos del programa y el Ratio orina definido por la proporci n de la superficie del pico anormal respecto a la superficie total de las prote nas del Suero Control Normal es entonces calculado autom ticamente aparecer en la ventana de edici n de las curvas Este ratio ser usado en la t cnica CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE para determinar el modo de diluci n de la muestra que se aplicar HIPOGAMMA EST NDAR o HIPERGAMMA En caso de que el inmunotipado permita detectar un componente monoclonal puede ser cuantificado a partir de la versi n de PHORESIS gt 8 61 Para la cuantificaci n los picos anormales deben ser integrados manualmente con la herramienta de integraci n de picos y la funci n Cuantificar picos del programa Se proponen dos modos de integraci n al usuario integraci n de valle a valle o integraci n hasta la l nea de base La elecci n del modo de integraci n se realiza en funci n del aspecto del perfil electrofor tico posici n del o de los picos de inter s respecto a la l nea de base y de los procedimientos usad
51. lote a raz n de 10 secuencias de an lisis para cada lote de tamp n de di lisis Todas las muestras analizadas proporcionan los mismos resultados con los 3 lotes de tamp n de di lisis probados y los perfiles obtenidos son los caracter sticos de cada una de las muestras En la t cnica CAPILLARYS URINE la electroforesis de prote nas no detecta ning n pico anormal en las orinas normales y detecta todas las fracciones esperadas en las 6 muestras patol gicas 118 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Exactitud Cien muestras de orina diferentes con concentraciones de proteinas totales comprendidas entre 0 07 y 19 83 g L de las que 19 son normales y 81 patol gicas han sido analizadas mediante electroforesis capilar en el sistema CAPILLARYS con la t cnica CAPILLARYS URINE y otro sistema comercial en gel de agarosa que no necesita concentrar la muestra Los resultados obtenidos muestran una correlaci n perfecta entre los dos sistemas de an lisis en la detecci n de anomal as del perfil proteico con una sensibilidad del 100 y una especificidad del 100 respecto a la t cnica comparada calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 En las 19 muestras de orina normales correlaci n perfecta En las 81 muestras de orina patol gicas correlaci n perfecta Sensibilidad La sensibilidad de la t cnica CAPILLARYS URINE obtenida por diluci n serial de una orina con prote na de Bence Jones con una concentraci n i
52. muestra en el sistema de di lisis despu s de la centrifugaci n sino en un microtubo conservado en nevera entre 2 y 8 C Consulte las instrucciones de la centr fuga para calcular el n mero de revoluciones por minuto correspondiente al tipo de rotor usado 115 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Las condiciones de utilizaci n de los dispositivos de di lisis y concentraci n son diferentes en las centr fugas de rotor basculante y en las de rotor angular Los par metros indicados anteriormente son aplicables a la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA en centr fugas de rotor basculante Lea detenidamente las instrucciones de los diferentes dispositivos de di lisis y concentraci n para su uso en centr fugas de rotor angular Muestras a descartar No use muestras de orina antiguas o mal conservadas ya que las fracciones estar an muy modificadas debido a la degradaci n de las prote nas urinarias Se recomienda observar el aspecto de la orina despu s de la primera centrifugaci n 10 minutos a 4 300 g por si hay hem lisis o turbidez No use muestras que hayan sido conservadas en un dispositivo de di lisis y concentraci n ya que algunas prote nas podr an haberse adsorbido a la membrana No reutilice una muestra de orina que haya sido dispensada en el segmento de diluci n PROCEDIMIENTO El sistema CAPILLARYS es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las pro
53. nicial del orden de 0 34 g L es tal que el l mite de detecci n de una prote na de Bence Jones es del orden de 20 mg L NOTA El l mite de detecci n de un pico monoclonal puede variar en funci n de la posici n del pico monoclonal y del fondo policlonal de la zona de las gamma y betaglobulinas An lisis cuantitativo NOTA El an lisis cuantitativo puede realizarse en los instrumentos CAPILLARYS 2 y CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING y los resultados de la cuantificaci n de los componentes monoclonales son equivalentes entre los 2 instrumentos en los 2 modos de integraci n propuestos integraci n hasta la l nea de base e integraci n de valle a valle Repetibilidad intraserial y reproducibilidad interlotes interpreparaciones e interinstrumentos Tres 3 muestras diferentes de orinas patol gicas con prote na de Bence Jones orina n 1 con cadena ligera libre monoclonal Kappa y una proteinuria de 0 28 g L orina n 2 con cadena ligera libre monoclonal Kappa y una proteinuria de 2 90 g L y orina n 3 con cadena ligera libre monoclonal Lambda y una proteinuria de 5 49 g L han sido preparadas 3 veces sucesivas usando dos lotes de tamp n de di lisis en cada preparaci n A continuaci n se ha evaluado la repetibilidad de cada muestra dializada con la t cnica CAPILLARYS URINE en 2 instrumentos diferentes con un mismo lote de tamp n de an lisis a raz n de una secuencia de an lisis por preparaci n
54. nstituido y 2 mL de tamp n de di lisis diluido homogene ce bien la mezcla y coloque este tubo en la posici n 28 del carrusel posici n Control IMPORTANTE Es necesario normalizar los capilares antes de analizar muestras de orina en el sistema MINICAP para poder analizarlas despu s con la t cnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los datos IMPORTANTE En caso de ausencia de tubos en las posiciones n 1 muestra y 28 Suero Control Normal el an lisis no puede comenzar y aparece un mensaje de advertencia NOTA Al usar el Suero Control Normal es indispensable usar la etiqueta con el c digo de barras espec fico prevista a este efecto Introduzca el carrusel en el MINICAP Cierre las puertas del MINICAP e inicie el an lisis Despu s del an lisis saque el carrusel y los microtubos que contengan las muestras de orina analizadas y cons rvelas en nevera entre 2 y 8 C para un an lisis posterior con la t cnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE si es necesario Si es necesario quite con precauci n la caja que contiene las cubetas de reactivo usadas ci rrela herm ticamente usando una de las tapas destinadas a este efecto y des chela ATENCI N Manipule con precauci n las cajas que contengan las cubetas de reactivo usadas ya que pueden contener muestras biol gicas 124 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 DIL
55. ondiciones ptimas IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico CAPILLARYS permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores si no se hace correctamente los contenedores pueden despresurizarse y los an lisis pueden verse afectados y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de contenedor La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo VER EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS sii CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 RESULTADOS Interpretaci n La interpretaci n es cualitativa Para facilitar la interpretaci n de los perfiles es posible superponer el Suero Control Normal SEBIA referencia n 4785 para obtener un perfil de ref
56. os en el laboratorio Para un pico cuantificado los resultados pueden ser obtenidos en porcentaje en concentraci n en g L 6 en g 24 horas en este caso la concentraci n de prote nas urinarias de la muestra debe haber sido introducida previamente en la lista de trabajo NOTA Los resultados obtenidos en la cuantificaci n de los picos monoclonales dependen completamente del valor de proteinuria introducido en el programa PHORESIS si el usuario comete un error al introducir el valor de proteinuria este error repercutir en el informe de resultados Si el pico monoclonal es peque o el uso del modo de integraci n hasta la l nea de base puede dar lugar a una sobrestimaci n importante del mismo Para el seguimiento del paciente el modo de integraci n de los picos monoclonales en el perfil electrofor tico debe ser el mismo en los diferentes an lisis y los an lisis anteriores deben ser consultados para integrar siempre de la misma forma los picos monoclonales de inter s Adem s cuando se observe una nueva modificaci n del perfil electrofor tico fuera de la zona alb mina se recomienda volver a realizar el inmunotipado de la muestra LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS III FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar un procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTI
57. os reactivos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 3 Analice las muestras preparadas con el kit CAPILLARYS MINICAP URINE con el programa de an lisis URINE y el tamp n de an lisis CAPILLARYS PROTEIN E 6 Para seleccionar el programa de an lisis URINE y conectar el contenedor de tamp n CAPILLARYS PROTEIN E 6 al aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del CAPILLARYS 4 Coloque en cada cargador un segmento de diluci n nuevo que contenga las muestras preparadas anteriormente a raz n de 100 uL de muestra por pocillo de un segmento de diluci n verde 6 200 uL por pocillo de un segmento de diluci n transparente En caso de ausencia del segmento el cargador ser expulsado IMPORTANTE Si el n mero de muestras a analizar es inferior a 8 ponga agua destilada o desionizada en los pocillos que no contengan muestra 5 Introduzca el o los cargador es completo s en el sistema CAPILLARYS por el orificio de entrada situado en medio del aparato Se pueden introducir hasta cuatro cargadores sucesivamente pudi ndose introducir nuevos cargadores de forma continua a medida que se vaya completando el an lisis de los cargadores ya introducidos 6 Saque de la cinta de salida situada a la izquierda del aparato los cargadores ya analizados 7 Coja con precauci n el segmento de diluci n usado y tirelo ATENCI N Manipule con precauci n los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas DILUCI N
58. prote nas urinarias Una deformaci n del perfil respecto al normal es indicadora de una anomal a especialmente la aparici n de un pico adicional en la zona de las gammaglobulinas o de las betaglobulinas La tecnolog a de la electroforesis de orina permite obtener un l mite de detecci n de las bandas monoclonales inmunoglobulinas monoclonales o cadenas ligeras libres monoclonales de unos 20 mg L satisfactorio para la mayor a de casos cl nicos Todos los perfiles de aspecto monoclonal u oligoclonal deben ser confirmados usando el kit de inmunotipado de SEBIA MINICAP IMMUNOTYPING URINE los kits inmunofijaci n de SEBIA HYDRAGEL BENCE JONES HYDRAGEL IF HYDRAGEL URINE PROFIL E con los antisueros espec ficos anti cadenas ligeras libres kappa o lambda 125 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 Es necesario realizar an lisis complementarios mediante electroforesis con las t cnicas de SEBIA HYDRAGEL PROTEINURIE 6 HYDRAGEL URINE PROFIL E o mediante determinaciones nefelom tricas para caracterizar las nefropatias tubulares glomerulares o mixtas sospechadas despu s del an lisis por electroforesis capilar Para obtener informaci n complementaria sobre la interpretaci n de los perfiles obtenidos ver la BIBLIOGRAF A Casos especiales Las orinas con una concentraci n inicial de prote nas totales inferior a 0 15 g L pueden presentar un fondo proteico arrastre en todo el perfil Cualquier anomal a sosp
59. r contaminaciones microbianas Para un funcionamiento ptimo se recomienda a adir 350 L L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de limpieza se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 4 CAPICLEAN Presentaci n El vial de soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteol ticos surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del instrumento de electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Cuando se realicen menos de 500 an lisis a la semana haga un ciclo de limpieza con CAPICLEAN al menos una vez por semana Cuando se realicen menos de 500 an lisis al d a pero m s de 500 an lisis a la semana haga un ciclo de limpieza con CAPICLEAN cada 500 an lisis Cuando se realicen m s de 500 an lisis al d a haga un ciclo de limpieza con CAPICLEAN una vez al d a Ver las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA 113 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 IMPORTANTE Despu s de la limpieza de la c nula de muestras no reutilice el segmento de diluci n Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la
60. s REACTIVO SUMINISTRADO EN EL KIT CAPILLARYS MINICAP URINE ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad COMPONENTE REF N 2013 Tamp n de di lisis soluci n concentrada 1 vial de 480 mL PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente y seg n las instrucciones suministradas LEA DETENIDAMENTE LAS INSTRUCCIONES ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n TAMP N DE DI LISIS Preparaci n El contenedor del tamp n de di lisis concentrado debe ser diluido 2 veces v v con agua destilada o desionizada 1 volumen de tamp n 1 volumen de agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n contiene tamp n pH 9 9 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Tamp n de di lisis de las orinas para el an lisis mediante electroforesis capilar de las prote nas urinarias ver Preparaci n de las muestras Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El tamp n de di lisis concentrado puede conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C o en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del contenedor de tamp n No conserve el tamp n
61. s de inmunofijaci n de SEBIA HYDRAGEL BENCE JONES HYDRAGEL IF 6 HYDRAGEL URINE PROFIL E con los antisueros espec ficos anti cadenas ligeras libres kappa o lambda Es necesario realizar an lisis complementarios mediante electroforesis con las t cnicas de SEBIA HYDRAGEL PROTEINURIE HYDRAGEL URINE PROFIL E o mediante determinaciones nefelom tricas para caracterizar las nefropatias tubulares glomerulares o mixtas sospechadas despu s del an lisis mediante electroforesis capilar Para obtener informaci n complementaria sobre la interpretaci n de los perfiles obtenidos ver la BIBLIOGRAF A Casos especiales Las orinas con una concentraci n inicial de prote nas totales inferior a 0 15 g L pueden presentar un fondo proteico arrastre en todo el perfil Cualquier anomal a sospechada en las zonas Beta o Gamma requiere la investigaci n posterior de la presencia de la prote na de Bence Jones sea cual sea la concentraci n de prote nas totales de la muestra Interferencias y limitaciones Ver MUESTRAS PARA EL AN LISIS Analice nicamente muestras preparadas usando los dispositivos de di lisis y concentraci n recomendados en el p rrafo EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS como los concentradores Vivaspin 6 ml los sistemas de di lisis SEBIA o cualquier sistema de funcionamiento equivalente homologado para su uso en diagn stico cl nico Una di lisis insuficiente de la muestra puede provocar la aparici n de picos resid
62. s de la centrifugaci n si el volumen obtenido es inferior a 0 1 mL ajuste el contenido del tubo a 0 1 mL cuando la parte inferior del menisco se haya equilibrado con tamp n de di lisis diluido 11 Homogene ce el contenido del tubo 12 Tome 100 yL de orina dializada y disp nselos directamente en el pocillo de un segmento de diluci n verde nuevo 13 Deseche el concentrador Vivaspin IMPORTANTE Las muestras deben ser analizadas como mucho el d a siguiente a su preparaci n Para limitar la adsorci n de las prote nas urinarias en la membrana del dispositivo de di lisis y concentraci n tubo Vivaspin 6 ml 6 sistema de di lisis SEBIA se recomienda no conservar la muestra en el tubo despu s de la centrifugaci n sino en un microtubo conservado en nevera entre 2 y 8 C Consulte las instrucciones de la centr fuga para calcular el n mero de revoluciones por minuto correspondiente al tipo de rotor usado Las condiciones de utilizaci n de los dispositivos de di lisis y concentraci n son diferentes en las centr fugas de rotor basculante y en las de rotor angular lea detenidamente las instrucciones correspondientes Muestras a descartar No use muestras de orina antiguas o mal conservadas ya que las fracciones estar an muy modificadas debido a la degradaci n de las prote nas urinarias Se recomienda observar el aspecto de la orina despu s de la primera centrifugaci n 10 minutos a 4 300 g por si hay hem lis
63. sis SEBIA tubos de 20 mL Use un tubo por muestra Los par metros indicados son aplicables a la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA en centr fugas de rotor basculante Lea detenidamente las instrucciones de los diferentes dispositivos de di lisis y concentraci n para su uso en centr fugas de rotor angular Antes del an lisis prepare cada muestra seg n el modo operatorio siguiente NOTA Diluya previamente a Ye v v el tamp n de di lisis concentrado con agua destilada o desionizada 1 volumen de tamp n 1 volumen de agua destilada o desionizada 1 Mida la concentraci n de prote nas totales de la muestra de orina a analizar ATENCI N En el caso de la cuantificaci n de un componente monoclonal para el seguimiento de un paciente es necesario usar siempre la misma t cnica de determinaci n de las prote nas urinarias 2 Centrifugue 5 mL de orina neta durante 10 minutos a 4 300 g Recupere el sobrenadante 4 Prepare cada muestra en un sistema de di lisis nuevo seg n su concentraci n de prote nas totales Concentraci n de prote nas totales inferior a 1 g L Mezcle 2 mL de orina con 18 mL de agua destilada o desionizada Concentraci n de prote nas totales comprendida entre 1 y 3 g L Mezcle 0 5 mL de orina con 19 5 mL de agua destilada o desionizada Concentraci n de prote nas totales superior a 3 g L Diluya primero la orina con agua destilada o desionizada para obtener una concentraci n de prote
64. stable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final del 5 no afecta a la calidad del an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro lt 0 45 nm y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA CAPILLARYS referencia n 1220 6 CAPILLARYS 2 referencia n 1222 2 Cargadores suministrados con el sistema CAPILLARYS 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema CAPILLARYS contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada contenedor de soluci n de lavado y contenedor de desechos 4 Para la di lisis y concentraci n de las muestras Sistema de di lisis SEBIA referencia n 9200 24 tubos de 20 mL con membrana PES 10 000 MWCO peso molecular de corte de 10 KDa o Sistema de di lisis y concentraci n tipo Vivaspin 6 ml con membrana PES 10 000 MWCO peso molecular de corte
65. te nas totales Concentraci n de prote nas totales inferior a 1 g L Mezcle 1 mL de orina con 9 mL de agua destilada o desionizada en el concentrador Concentraci n de prote nas totales comprendida entre 1 y 3 g L Mezcle 0 25 mL de orina con 10 mL de agua destilada o desionizada en el concentrador Concentraci n de prote nas totales superior a 3 g L Diluya primero la orina con agua destilada o desionizada para obtener una concentraci n de prote nas totales del orden de 3 g L Luego mezcle 0 25 mL de orina diluida con 10 mL de agua destilada o desionizada 5 Homogene ce la orina diluida 6 Equilibre los tubos con agua destilada o desionizada y centrifugue durante 30 minutos a 4 000 g ATENCI N El volumen obtenido tras la concentraci n por centrifugaci n debe ser inferior o igual a 0 2 mL 7 Para la di lisis a ada 10 mL de tamp n de di lisis diluido a cada sistema de di lisis 8 Equilibre los tubos con tamp n de di lisis diluido y centrifugue de nuevo durante 30 minutos a 4 000 g 9 Despu s de la centrifugaci n si el volumen obtenido es inferior a 0 2 mL ajuste el contenido del tubo a 0 2 mL cuando la parte inferior del menisco se haya equilibrado con tamp n de di lisis diluido 10 Homogene ce el contenido del tubo 11 Tome 200 yL de orina dializada y disp nselos directamente en el pocillo de un segmento de diluci n transparente nuevo 12 Deseche el sistema de di lisis Preparaci
66. te nas urinarias en 8 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras del cargador y de las muestras a analizar dispensaci n de las muestras en los pocillos del segmento de diluci n a partir de los microtubos que contienen las muestras dializadas lavado de los capilares inyecci n de las muestras separaci n y detecci n directa de las prote nas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes preparaci n di lisis y concentraci n de las muestras colocaci n de los microtubos sin tapones que contienen las muestras a analizar en los tubos de hem lisis que les servir n de soporte en el cargador cada tubo debe estar identificado con el c digo de barras de identificaci n espec fico correspondiente a la muestra a analizar colocaci n en el cargador de un segmento de diluci n verde nuevo de 100 yL introducci n en el sistema CAPILLARYS recuperaci n de los cargadores despu s del an lisis y de los microtubos para su eventual an lisis mediante inmunotipado LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS I PREPARACI N EL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el CAPILLARYS y el ordenador de control 2 Abra el programa de gesti n PHORESIS y valide el nivel de los reactivos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 3 Las muestras preparadas deben ser analizadas con el programa de an lisis URINE y el tamp n de an
67. tro y 116 mm de longitud para la utilizaci n de los sistemas de di lisis SEBIA Segmentos de diluci n verdes para CAPILLARYS SEBIA referencia n 2081 Pipetas de 200 LL 1 mL y 5 mL Microtubos de 1 5 mL Tubos de hem lisis de 75 mm de altura y 13 mm de di metro sI 114 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se realiza preferentemente con orinas frescas de 24 horas Las orinas deben ser obtenidas seg n los m todos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las muestras pueden conservarse una semana en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones prolongadas se recomienda congelar las muestras a 70 C las muestras congeladas son estables un m nimo de 1 mes IMPORTANTE No congele las muestras a 20 C Las muestras degradadas o descongeladas pueden presentar fracciones deformadas con aparici n de peque os picos adicionales debido a la degradaci n de las prote nas NOTA No conserve las muestras de orina a temperatura ambiente Preparaci n de las muestras con los sistemas de di lisis SEBIA Para una recuperaci n ptima de las prote nas urinarias lo m s recomendable es usar un concentrador de centr fuga para las etapas de di lisis concentraci n IMPORTANTE La t cnica de an lisis de las orinas mediante electroforesis capilar requiere la di lisis y concentraci n de las muestras con sistemas de di li
68. uales no proteicos En caso de sospechar una interferencia se recomienda realizar una di lisis adicional de la muestra Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las prote nas urinarias Asistencia t cnica Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como la informaci n relativa a la limpieza y eliminaci n de residuos a las reglas de etiquetado y seguridad aplicadas por SEBIA al embalaje para el transporte de muestras biol gicas y a la descontaminaci n de los aparatos est n disponibles en el DVD INSTRUCTIONS amp SAFETY DATA SHEETS 112 CAPILLARYS MINICAP URINE 2014 06 CAPILLARYS 1 4 2 versi n PHORESIS 2 6 x CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING versi n PHORESIS gt 8 60 NOTA En estas instrucciones el nombre CAPILLARYS es usado para designar los instrumentos CAPILLARYS CAPILLARYS 2 y CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING SEBIA REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 KIT CAPILLARYS PROTEIN E 6 SEBIA REFERENCIA 2003 Presentaci n conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Ver las instrucciones del kit IMPORTANTE Los reactivos contenidos en el kit CAPILLARYS PROTEIN E

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