Uso previsto - Savyon Diagnostics
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1. C 10 11 12 D 13 14 15 16 Deje la soluci n dentro del pocillo durante unos dos minutos y luego eliminela de las tiras Repita este paso 5 veces Seque la parte superior de las tiras y la estructura soporte volcandolas cuidadosamente sobre papel adsorbente Complete el lavado de los pocillos tras la incubaci n para obtener mejores resultados No deje restos de la soluci n de lavado en los pocillos Incubaci n de las muestras s ricas y los controles Diluya cada muestra de paciente a 1 256 con el diluyente de muestras siguiendo el siguiente esquema 1 16 A ada 10 pl de suero de paciente a 150 pl de diluyente de muestras 1 256 A ada 10 ul de la diluci n a 1 16 a 150 ul de diluyente de muestras Los controles se suministran listos para usar por lo que no deben ser dilu dos Pipetee 50 pl del control positivo del control bajo positivo del control negativo y de la diluci n 1 256 del suero de paciente y disp nselo en los diferentes pocillos Pipetee 50 ul del diluyente de muestras en uno de los pocillos y disp nselo en el que vaya a considerar el blanco El pipeteo de los controles y de las muestras s ricas no debe exceder los 10 minutos Cubra las tiras con una tapa para la placa e inc belas durante 30 minutos a 37 C en una c mara humidificadora Deseche el liquido de los pocillos Lave los pocillos 5 veces y s quelos seg n el procedimiento indicado en los pasos A 3 5 Incub2. debe usarse como nico criterio diagn stico Todos los datos cl nicos y de laboratorio deben tenerse en cuenta El test de ELISA usa una nica serovariedad L L contiene determinantes antig nicos existentes en serovariedades de Chlamydia trachomatis as como en el grupo antig nico Los anticuerpos anti Chlamydia psitacci Chlamydia pneumoniae TWAR y M111 01S 04 10 13 Los pacientes hospitalizados infectados por Neisseria gonorrea Staphylococcus aureus y Peptostreptococcus anaerobius que fueron diagnosticados mediante kits serol gicos comerciales fueron tambi n testados con el kit de Chlamydia SeroELISA No se detect ninguna reacci n cruzada Bibliografia 10 Yuan Y Zhang Y X Watkins N G and Caldwell H D 1989 Nucleotide and Deduced Amino Acid Sequences for the Four Variable Domains of the Major Outer Membrane Proteins of the 15 Chlamydia trachomatis Serovars Infection and Immunity 57 1040 1049 Copyright 1989 American Society for Microbiology Treharne J D 1985 The community epidemiology of trachoma Rev Infect Dis 7 760 763 Piura B Sarov l Sarov B Kleinman D Chaim W and Insler V 1985 Serum IgG and IgG Antibodies specific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by the immunoperoxidase assay Eur J Epidemiol 1 110 116 Wang S P Grayston J T Kuo C C Alexander E R and Holmes K K 1977 SeroDiagnosis of Chlamydia tracho
3. deber ser repetido C lculo del valor de Cut Off COV El valor de cut off se calcula siguiendo la siguiente f rmula COV 0 154 x Pc Nc Nc Pc Absorbancia del control positivo a 450 nm Nc Absorbancia del control negativo a 450 nm Acinetobacter calcoaceticus deben detectarse por este ELISA La significancia de las titulaciones de la muestra debe ser considerada en relaci n a las caracter sticas de la poblaci n que est siendo testada Estas caracter sticas incluyen edad rea geogr fica y comportamiento sexual entre otros factores Este test no indicar a la ubicaci n de la infecci n por Chlamydia No pretende reemplazar el aislamiento de c lulas de cultivo si ste est disponible La ausencia de anticuerpos medibles en suero no excluye de la posibilidad de infecci n por Chlamydia Los sueros contaminados por bacterias o hiperlip micos podr an causar resultados err neos Interpretaci n de los resultados del test Caracter sticas del proceso Absorbancia Interpretaci n Titulaci n a 450 nm de los estimada de IgG resultados anti Chlamydia Entre COV 0 03 Negativo lt 256 COV 0 03 Equ voco 256 Entre por encima del Bajo positivo 256 512 valor de COV 0 03 y el control positivo bajo Entre por encima del Positivo 1024 2048 valor del control positivo bajo y el control positivo Por encima del valor Alto positivo gt 2048 del con
4. C 0483 SeroELISA Chlamydia IgG Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas ELISA para la detecci n de anticuerpos espec ficos IgG de Chlamydia en suero humano Manual de instrucciones Kit de 96 deteminaciones N de cat logo 111 01 Para uso exclusivo de diagn stico in vitro Exclusivamente para uso professional Guardar a 2 8 C No congelar aal Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com Uso previsto El kit de SeroELISA IgG Chlamydia se usa para la determinaci n de anticuerpos espec ficos IgG contra Chlamydia en muestras humanas de suero por ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas ELISA S lo para uso en diagn stico in vitro Introducci n Chlamydia es una bacteria intracelular Gram negativa que causa enfermedades agudas y cr nicas en mam feros y aves El g nero Chlamydia comprende cuatro especies C trachomatis C pneumoniae C psittaci y C pecorum C trachomatis se divide en 15 serovariedades 1 Las serovariedades A B Ba y C causan tracoma 2 causa predominante de la ceguera prevenible en pa ses end micos del tercer mundo Las serovariedades L L3 son agentes del linfogranuloma ven reo Las serovariedades D K son la causa m s com n de enfermedades genitales transmitidas sexualmente en todo el mundo cervicitis endometritis salpingitis 3 en mujeres y uretritis 4 en
5. E MATERIAL POTENCIALMENTE INFECCIOSO Precauciones este kit contiene suero humano testado seg n las t cnicas aprobadas de la FDA y confirmado negativo para el ant geno de HBV y los anticuerpos de HCV HIV 1 y HIV 2 Ning n m todo puede asegurar que los productos derivados de sangre humana no transmitan infecciones todos los componentes derivados de sangre humana suministrados con este kit deben ser manejados como suero o sangre potencialmente infecciosos de acuerdo con las recomendaciones publicadas en el manual de CDC NIH Bioseguridad en Laboratorios Microbiol gicos y Biom dicos 1988 La soluci n crom geno sustrato es un material irritante para la piel y las mucosas membranosas Evite el contacto directo Uso para diagn stico in vitro exclusivamente 1 Tubos perfectamente limpios para la diluci n del suero de los pacientes 2 Micropipetas ajustables o pipetas multicanal rangos de 5 50 50 200 y 200 1000 ul y puntas desechables 3 Pipetas de pl stico desechables diferentes tama os y dispositivos de seguridad para pipetear 4 Frasco volum trico de un litro 5 Cilindro volum trico de 50 ml 6 Lavador de la placa de ELISA o botella de lavado 7 Toallas de papel o papel adsorbente 8 Mezclador V rtex 9 Ba o de agua a 37 C con tapa o c mara h meda metida dentro de un incubador a 37 1 C 10 Lector de ELISA con filtro de 450 nm 11 Agua destilada o doblemente desionizada para la solu
6. aci n con el conjugado Dispense 50 ul de soluci n de conjugado de anti lgG humana con HRP ya diluida sobre cada pocillo Cubra las tiras con una tapa para la placa e inc belas durante 30 minutos a 37 C en una c mara humidificadora Deseche el l quido de los pocillos Lave los pocillos 5 veces y s quelos seg n el procedimiento indicado en los pasos A 3 5 Incubaci n con el sustrato TMB Dispense 100 ul de sustrato TMB en cada pocillo Cubra las tiras con una tapa para la placa e inc belas durante 15 minutos a temperatura ambiente Pare la reacci n a adiendo 100 ul de soluci n de parada en cada pocillo Dispense la soluci n de parada siguiendo la misma secuencia y los mismos intervalos de tiempo que como lo hizo al dispensar el sustrato TMB en el paso D 14 Calibre el espectrofot metro sobre el pocillo blanco Determine la absorbancia a 450 nm y guarde los resultados Se recomendar a realizar una determinaci n de la absorbancia inmediatamente pero no es obligatorio La determinaci n de la absorbancia no debe exceder los 30 minutos ya que es lo que dura la reacci n cromog nica Criterios de aceptabilidad Un test realizado es v lido si La absorbancia del control positivo es gt 0 8 a 450 nm La absorbancia del control positivo bajo es 2 0 4 a 450 nm La absorbancia del control negativo es lt 0 15 a 450 nm Si no se cumplen estas condiciones el test llevado a cabo no se considera v lido y
7. ambos sexos La endometritis salpingitis puede conducir a una oclusi n tubal que conlleva un riesgo mayor de embarazos extrauterinos e infertilidad La infecci n genital puede causar infecci n aguda o persistente sin s ntomas cl nicos Generalmente estas infecciones son tratables una vez diagnosticadas Sin tratamiento estas infecciones progresar an a inflamaci n cr nica severa que conducir a infertilidad embarazos ect picos aborto inducido o parto precoz Los beb s infectados durante el parto podr an desarrollar conjuntivitis y neumon a 5 M111 01S 04 10 13 C pneumoniae es un importante pat geno respiratorio en humanos causante de mas del 10 de casos de neumonia Se asocia con numerosas patologias respiratorias agudas como neumonia asma bronquitis faringitis sindrome respiratorio agudo con anemia falciforme enfermedad coronaria cardiaca y sindrome de Guillain Barr 6 C psittaci puede infectar a diversos tipos de especies hospedadoras moluscos aves o mam feros y tambi n causa neumon a severa Los tests serodiagn sticos basados en marcadores inmunol gicos espec ficos sirven como herramienta diagn stica no invasiva en la identificaci n de infecciones distales y profundas 7 Se ha encontrado que t tulos elevados de anticuerpo IgG contra Chlamydia son indicativos de infecci n chlamydial activa 3 8 Altos valores de anticuerpo IgG contra Chlamydia tienen valor diagn stico en infecciones cr nica
8. ci n de lavado tamponada concentrada Almacenamiento y estabilidad de los reactivos Todos los materiales suministrados deben ser guardados a 2 8 C Si se guardan a una temperatura entre 2 y 8 C los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit La exposici n de componentes sellados a temperatura ambiente durante unas horas no causa da o a los reactivos NO CONGELE Una vez el kit est siendo usado su estabilidad es de 60 d as desde el d a de apertura por primera vez Una vez abierto la envoltura de aluminio que contiene las tiras debe cerrarse con celo No debe tirarse la bolsa con agente desecante Contenido del kit Recogida de muestras 1 Microplaca recubierta 96 pocillos por placa Cada envase contiene una microplaca con 12 tiras que se pueden quitar sobre la estructura pl stica soporte de la placa Cada tira est recubierta con ant genos de Chlamydia 1 Unidad 2 Control positivo suero humano positivo para anticuerpo IgG de Chlamydia Listo para usar 1 Vial 2 0 ml 3 Control positivo bajo suero humano levemente positivo para anticuerpo IgG de Chlamydia Listo para usar 1 Vial 2 0 ml M111 01S 04 10 13 Las muestras s ricas deben tomarse en condiciones as pticas y almacenarse a 2 8 C usando azida s dica NaNz al 0 05 como conservante si se van a usar a los pocos d as Para per odos prolongados las al cuotas de muestras s ricas debe
9. e Esculapio Bologna p 170 Obelis s a European Authorized Representative Center Boulevard G n ral Wahis 53 1030 Brussels Belgium Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 e mail mail obelis net REP M111 01S 04 10 13
10. e adici n de soluci n cida se mide la absorbancia en los pocillos usando un espectofot metro a 450 nm La absorbancia a 450 nm es indicativa de la concentraci n de anticuerpos IgG anti Chlamydia en el suero de los pacientes Procedimiento del ensayo 1 Antigeno de Suero positivo para IgG anti Chlamydia unido a la Chlamydia Acs fase s lida Ag Complejo AgAc 2 Complejo AgAc Conjugado de anticuerpo anti IgG humana con HRP Ace Complejo AgAc Ac 3 Complejo Sustrato TMB AgAc Ac gt y Soluci n azul Y Soluci n de parada Crom geno Soluci n amarilla Determinaci n de la absorbancia a 450 nm 4 Control negativo suero humano negativo para anticuerpo IgG de Chlamydia Listo para usar 1Vial 2 0 ml 5 Conjugado de anti lgG humana cadena y espec fica con HRP Listo para usar 1Vial 10 ml 6 Diluyente de muestras Listo para usar 1 Botella 40 ml 7 Soluci n de lavado concentrada x20 1 Botella 100 ml 8 Sustrato TMB Listo para usar 1 Vial 14 ml 9 Soluci n de parada H SO 1M Listo para usar 1 Botella 15 ml 10 Tapa para placa 1 Unidad 11 Manual de instrucciones 1 Materiales requeridos no suministrados Advertencias y precauciones Advertencia EL MATERIAL ANTIG NICO CHLAMIDIAL HAS SIDO INACTIVADO POR LO QUE NO CONTIENE ORGANISMOS VIVOS DETECTABLES EN CUALQUIER CASO LAS TIRAS DEBEN SER TRATADAS E ELIMINADAS COMO SI SE TRATARA D
11. matis infection with the microimmunofluorescence test In Nongonoccolcal urethritis and related infection D Hobson and K K Holmes Eds P American Society for Microbiology Washington DC p 237 248 Thompson Ill S E and Dretler R H 1982 Epidemiology and Treatment of Chlamydial Infections in Pregnant Women and Infants Review of Infectious Diseases 4 S747 Saikku P Mattila K Nieminen M S Huttunen K Leinonen M Ekman M R Makela P H and Valtonen V 1988 Serological evidence of an association of a novel Chlamydia TWAR with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection Lancet Il 983 986 Sarov l Kleinman D Cevenini R Holcber G Potashnik G Sarov B and Insler V 1986 Specific IgG and IgA Antibodies to Chlamydia trachomatis in Infertile Women Int J Fertil 31 193 197 Csango P A Sarov B Schiotz H Sarov I 1988 Comparison Between Cell Culture and Serology for Detecting Chlamydia trachomatis in women seeking abortion J Clin Pathol 41 89 92 Tsunekawa t and Kumamoto Y 1989 A Study of IgA and IgG Titers of C trachomatis in Serum and Prostatic Secretion in Chronic Prostatitis J J A Inf Dis 63 130 137 Kletter Y Caspi D Yarom M Sarov B Sarov I And Tanay A 1988 Serum IgA and IgG Antibodies Specific to Chlamydia in Patients with Reiters Syndrome RS In Proceedings of the European Society for Chlamydia Research Societa Editric
12. n almacenarse a 20 C Debido a que las muestras s ricas turbias o hemol ticas dan resultados menos reproducibles se recomienda usar muestras cristalinas y sin restos de componentes sangu neos Procedimiento del ensayo Notas a Los componentes se testan especificamente para cada test No mezcle componentes de diferentes lotes o de otros manufacturadores b Todos los reactivos deben atemperarse a temperatura ambiente antes de usarlos El diluyente de muestras y el diluyente del conjugado gelatinizan al ser refrigerados Si fuera necesario acelerar la liquefacci n calentar estos componentes a 37 C durante unos minutos Puede darse la formaci n de cristales de sal en la soluci n de lavado tamponada concentrada cuando se guarde a 2 8 C Estos cristales deben disolverse completamente calentando a 37 C antes de usar la soluci n c No realice el test en presencia de vapores reactivos por ejemplo sustancias alcalinas cidas o aldeh dicas o polvo ya que la actividad enzim tica de la HRP conjugada a anti IgG humana puede verse afectada d No toque la parte superior de las tiras No toque las paredes de los pocillos con las puntas cuando dispense los reactivos e Use puntas de pipeta desechables Evite la contaminaci n cruzada entre reactivos f Golpee el vial suavemente sobre una superficie dura para que no quede l quido adherido a la tapa g Evite la formaci n de burbujas en los pocillos h Dispen
13. s o sist micas como salpingitis infertilidad mec nica perihepatitis epidedimitis s ndrome de Reiter y neumonitis 3 9 10 Savyon Diagnostics ha desarrollado un ensayo inmunoabsorbente ligado a enziams para la detecci n de la IgG espec fica anti Chlamydia El test SeroELISA de Chlamydia usa la serovariedad L que reacciona con el ant geno de C trachomatis Este test detectar anticuerpos de C trachomatis C psittaci y C pneumoniae TWAR Principio del ensayo El suero humano a testar se podr en contacto con material antig nico recubriendo los pocillos En caso de que los anticuerpos est n presentes en el suero del paciente stos se unir n a los ant genos en fase s lida formando un complejo y el resto de los componentes ser n eliminados durante la fase de lavado La peroxidasa de r bano picante HRP conjugada con anticuerpo anti IgG humana cadena y espec fica se adiciona a los pocillos Si en el paso previo se form un complejo ant geno anticuerpo la peroxidasa conjugada con el anticuerpo anti lgG se unir al anticuerpo del complejo Si no se form ning n complejo ant geno anticuerpo en el paso previo el conjugado ser eliminado durante la fase de lavado Se adiciona sustrato TMB Si la reacci n es positiva se origina un color azul en los pocillos al que sigue una reacci n enzim tica entre la peroxidasa el per xido y el crom geno Una vez se ha detenido la reacci n enzim tica mediant
14. se los l quidos despacio para evitar que salgan como espray i El control positivo el control positivo bajo y el control negativo deben pasarse conjuntamente con el suero a testar cada vez que el test se lleve a cabo j Se debe dejar un pocillo en cada test como blanco cada vez que se lleve a cabo el test k Todos los procedimientos del ensayo deben llevarse a cabo secuencialmente sin interrupciones Procedimiento del ensayo Manual Protocolo de automatizacion disponible bajo peticion A Lavado de las tiras Se recomienda prelavar las tiras aunque no es obligatorio En cualquier caso las tiras deben ser humidificadas con soluci n de lavado antes de aplicar las muestras y deben ser secadas volc ndolas sobre papel adsorbente antes de realizar el test Si el proceso autom tico de lavado de la placa de ELISA no puede realizarse debe seguirse el siguiente procedimiento 1 Saque el n mero de tiras que necesite de su envoltura de aluminio y col quelos en la estructura soporte de la placa 2 Diluya la soluci n de lavado tamponada concentrada a 1 20 con agua destilada Por ejemplo para una tira prepare 100 ml de soluci n de lavado 5 ml de soluci n concentrada con 95 ml de agua destilada Mezcle cuidadosamente durante 20 minutos La soluci n de lavado debe preparase antes de ser usada y lo que sobre debe tirarse 3 Tras la incubaci n rellena cada pocillo hasta la mitad con soluci n de lavado M111 01S 04 10 13
15. trol positivo El test Chlamydia SeroELISA se compar con el test Chlamydia IgG IgA IPAzyme producto de Savyon Diagnostics Cat No 011 01 que es un test serol gico aceptado para la detecci n del anticuerpo IgG de Chlamydia El estudio poblacional incluye pacientes sospechosos de infecci n por Chlamydia as como individuos sanos n 328 Los resultados se resumen como sigue Comparaci n de SeroELISA con IPAzyme eroELISA Positivo Negativo Total IPAzyme Positivo 116 8 124 Negativo 10 194 204 Total 126 202 328 Vuelva a testar las muestras s ricas clasificadas como equivocas Si se repite el resultado equivoco se recomienda repetir el test Acuerdo general 810 328 x 100 94 5 Reaccion cruzada Significancia de los resultados La experiencia clinica indica que los anticuerpos IgG contra Chlamydia sirven para confirmar una infecci n activa o cr nica por Chlamydia Determinaci n del ndice de titulaci n Para monitorizar el perfil inmunol gico de un paciente deben ser comparadas las muestras s ricas obtenidas durante la convalecencia y durante la fase aguda El ndice de titulaci n de la pareja de sueros debe realizarse con ambas muestras s ricas testadas en el mismo run El valor de diluci n mayor por encima del valor de cut off es el ndice de titulaci n Limitaciones del ensayo Ning n test serol gico
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