Instructivo Anti D ALFA BETA
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1. MANUAL DE INSTRUCCIONES REDIAR SUERO HEMOAGRUPADOR Monoclonal REDIAR Anti D Optimum AGLUTININA DIRECTA Para uso diagn stico in vitro INTRODUCCION Descripto por primera vez en 1939 el antigeno RhD solamente es superado en impor tancia por los antigenos del grupo ABO La transfusion de sangre RhD positiva a un receptor RhD negativo o la omisi n de administrar anti D profil ctico a una madre RhD negativa puede resultar en una producci n de anti D Por lo tanto determinar el grupo Rh correcto es fundamental para una practica trans fusional segura Ciertos individuos presentan una disminuci n cuantitativa en la expre si n de su ant geno RhD siendo clasificados como D d biles o weak Du Otros presentan una variaci n cualitativa en la expresi n de su ant geno D siendo conocidos como D parcial Los individuos D d bil tambi n pueden ser D parcial La reciente disponibilidad de reactivos anti D monoclonales lgM potentes de alta calidad y un mayor conocimiento de la importancia cl nica de los fenotipos D parciales han producido cambios en las pol ticas de determinaci n del factor Rh en varios pa ses Un breve resumen de estas pol ticas se puede ver en la secci n Notas T cnicas de este manual REACTIVO Este reactivo anti D de uso in vitro sirve para la detecci n e identificaci n del grupo sangu neo RhD humano en muestras de donantes y neonatos por medio de aglutinaci n directa Este reactivo anti D Opti2. i n de alg n reactivo de prueba y ciertas enfermedades infecciosas BIBLIOGRAF A 1 Levine P Stetson RE An unusual case of intragroup agglutination J Amer Med Assoc 1939 113 126 127 2 Mollison PL Blood transfusion in clinical medicine 7th edition Oxford Blackwell Scientific 1983 3 Moore BPL Serological and immunological methods of the Canadian Red Cross Blood Transfusion Service 8th edition Toronto Hunter Rose 1980 4 Vengelen V ed Technical manual 13 th edition Bethesda American Association of Blood Banks 1999 5 Race RR and Sanger R Blood groups in man 6th edition Oxford Blackwell Scientific 1975 6 White WD Issitt CH McGuire D Evaluation of the use of albumin controls in Rh phe notyping Transfusion 1974 14 67 71 ELABORADO POR Diagnostics Scotland Ellens Glen Road ES Y a ES Edinburgh EH 17 7QT Escocia H Q TS IMPORTADO Y FRACCIONADO POR FELSAN S R L Palpa 3811 JINN E 4 C1427EBF Ciudad Aut de Bs As Argentina Saanaa Dir T cnico Roque Luis Espinosa o scorand FELSAN Consultas T cnicas 011 4554 799 laboratorio felsan com ar PRODUCTO DE DIAGN STICO DE USO IN VITRO AUTORIZADO POR LA ADMINISTRACI N NACIONAL DE MEDICAMENTOS ALIMENTOS Y TECNOLOG A MEDICA Certificado N 5438 Disposici n N 5038 05
3. mum aglutinara de forma directa con la mayor a de los gl bulos rojos que presenten ant genos D incluyendo DVI El componente principal de este reactivo se obtiene del cultivo in vitro de los hetero hibridomas humano murinos LDM1 y ESD1M que secretan IgM contra el ant geno RhD La formulaci n incluye EDTA y 1 g l de azida s dica El volumen dispensado por el gotero del envase es de aproximadamente 40 ul Teniendo esto en cuenta se deben tomar los recaudos necesarios para asegurar que se mantenga la relaci n suero c lulas en todos los sistemas de ensayo Este reactivo cumple con las Especificaciones T cnicas Comunes de la Directiva de la Comunidad Europea para Dispositivos M dicos de Diagn stico In Vitro PRECAUCI N La azida s dica es t xica si se ingiere y tambi n puede reaccionar con las ca er as de plomo y cobre para formar compuestos explosivos Este reactivo es para uso diagn stico in vitro EL MATERIAL DE ORIGEN DEL CUAL SE DERIVA ESTE PRODUCTO HA SIDO ENSAYADO Y ENCONTRADO NO REACTIVO PARA HBsAg ANTI HIV 1 amp 2 Y ANTI HCV NINGUN METODO CONOCIDO PUEDE OFRECER SEGURIDAD COMPLETA DE QUE LOS PRODUCTOS DERIVA DOS DE SANGRE HUMANA NO PUEDAN TRANSMITIR ENFERMEDADES INFECCIOSAS SE DEBEN TOMAR LOS RECAUDOS APROPIADOS PARA EL USO Y ELIMINACI N DE ESTE PRODUCTO CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Este reactivo debe ser conservado entre 2 8 C No debe utilizarse si estuviera turbio y no debe diluirse No utilizar m s all de s
4. s de grupo Rh y con pruebas individuales p ej un test de compatibilidad de urgencia Como minimo se deberian emplear gl bulos rojos Rir como control positivo gl bulos rojos rr como control negativo y un reactivo control para esta prueba Otros tipos de gl bulos rojos pueden llegar a ser utilizados pero deben ser selecciona dos con precauci n Notas T cnicas Las gu as para los servicios transfusionales de sangre del Reino Unido y el comit brit nico de standard en hematolog a para bancos de sangre recomiendan los siguientes procedimientos para pruebas del grupo RhD Para pruebas de grupo RhD en pacientes dos reactivos anti D diferentes deben ser utilizados Ninguno de estos dos reactivos debe aglutinar gl bulos rojos DVI por los m todos recomendados para su uso Las pruebas de antiglobulina indirecta en mues tras que han resultado negativas con la prueba directa no deben ser utilizadas en pacientes con el prop sito de transfusi n Pruebas en dadores Para pruebas de grupo RhD en donantes aunque no es esencial ni tampoco posible poder detectar todos los fenotipos D d biles y D parciales seria deseable que las prue bas utilizando dos reactivos diferentes anti D permitan diferenciar entre aquellos donantes que expresan D d bil o D parcial de importancia cl nica como por ejemplo aquellos DVI para que sean clasificados como RhD positivos e La t cnica en portaobjeto no es recomendada para la detecci n de D d bile
5. s o D parciales e Ciertas pruebas realizadas con muestras no lavadas o muestras que fueron almace nadas y testeadas a 20 C o menos pueden exhibir reacci n falsa positiva debido a los potenciadores utilizados en la formulaci n de este reactivo e Los bloques secos y los ba os de agua proporcionan una mejor transferencia t rmi ca y son recomendables para las pruebas a 37 C especialmente cuando el periodo de incubaci n es de 30 minutos o menos e Algunas muestras D d biles o D parciales puede que no reaccionen con este reacti vo monoclonal anti D as como tampoco con otra marca de reactivo anti D monoclonal e La expresi n de ciertos ant genos puede verse disminuida cuando se almacenan las muestras especialmente en EDTA o coaguladas Siempre se obtienen mejores resulta dos en muestras frescas e Las pruebas deben ser le das utilizando la t cnica tip and roll Una agitaci n exce siva puede disgregar una aglutinaci n d bil formada dando resultados falsos negativos e Es muy importante utilizar la velocidad de centrifugaci n recomendada ya que una velocidad mayor puede ocasionar una gran dificultad al intentar resuspender el bot n celular mientras que una velocidad menor puede ocasionar una aglutinaci n f cilmente dispersable e Resultados falsos negativos y falsos positivos pueden deberse a contaminaci n de las muestras temperatura de reacci n inapropiada almacenamiento inapropiado de los materiales utilizados omis
6. u fecha de vencimiento RECOLECCI N Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS Las muestras deben ser obtenidas por una t cnica as ptica con o sin anticoagulante Las muestras deben ser analizadas lo antes posible una vez obtenidas Si el an lisis se va a demorar las muestras deber an conservarse entre 2 8 C Las muestras de san gre que presenten contaminaci n o hem lisis grosera no deber an ser utilizadas Las muestras coaguladas u obtenidas con EDTA deben ser analizadas dentro de los siete d as de su recolecci n La sangre de donantes puede ser analizada hasta su fecha de vencimiento PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO INFORMACI N GENERAL Este reactivo ha sido estandarizado para el uso mediante las t cnicas descriptas a continuaci n por lo tanto su desempe o en el uso mediante otras t cnicas no puede ser garantizado Se recomienda especialmente al usuario confirmar si este reactivo es adecuado antes de utilizarlo en t cnicas alternativas MATERIALES Y REACTIVOS ADICIONALES NECESARIOS PBS pH 7 0 0 2 LISS Gl bulos rojos reactivos para la determinaci n del grupo Rh Tubos de ensayos de vidrio 10 0 12 x 75 mm Laminas de vidrio Reactivo control RhD Micropipeta Centrifuga TECNICAS RECOMENDADAS T cnica en tubo Centrifugaci n inmediata 1 Colocar 1 volumen de reactivo hemoagrupador a un tubo de ensayo 2 Agregar 1 volumen de gl bulos rojos suspendidos al 2 3 en PBS pH 7 0 0 2 o al 1 5 2 en LISS 3 Homogenei
7. zar bien la mezcla de reacci n 4 Centrifugar a 1000 g por 10 segundos o a otra combinaci n adecuada de g y tiempo 5 Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el bot n celular en el fondo del mismo y observar macrosc picamente si hay aglutinaci n T cnica en tubo LISS 1 Colocar 1 volumen de reactivo hemoagrupador a un tubo de ensayo 2 Agregar 1 volumen de gl bulos rojos suspendidos al 1 5 2 en LISS 3 Homogeneizar bien la mezcla de reacci n e incubar por 15 20 minutos a aproxi madamente 37 C 4 Centrifugar a 1000 g por 10 segundos o a otra combinaci n adecuada de g y tiempo 5 Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el boton celular en el fondo del mismo y observar macrosc picamente si hay aglutinaci n T cnica en lamina 1 Colocar 1 volumen de reactivo hemoagrupador a un area apropiadamente preparada en una lamina de vidrio 2 Agregar 1 volumen de gl bulos rojos suspendidos al 30 45 en PBS pH 7 0 0 2 o en plasma suero hom logo 3 Homogeneizar bien la mezcla de reacci n rotando e inclinando la lamina por aproxi madamente 30 segundos e incubar la prueba 5 minutos a temperatura ambiente con agitaci n espor dica 4 Observar macrosc picamente si hay aglutinaci n Esto puede facilitarse observando por sobre una fuente de luz difusa CONTROL DE CALIDAD El control de calidad de los reactivos es esencial y debe ser llevado a cabo al comien zo de cada jornada de trabajo con cada serie de determinacione
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