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MINICAP PROTEIN(E) 6

1. MINICAP PROTEIN E 6 Ref 2203 Ref 2223 2014 06 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 UTILIZACION El kit MINICAP PROTEIN E 6 permite la separaci n en medio alcalino pH 9 9 de las prote nas del suero humano mediante electroforesis capilar en el sistema autom tico MINICAP Las prote nas del suero humano normal se separan en seis fracciones principales El sistema MINICAP permite realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil proteico para el an lisis cualitativo o cuantitativo Las prote nas separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante espectrofotometr a de absorbancia a 200 nm Los perfiles electrofor ticos son analizados visualmente para detectar las anomal as La detecci n directa proporciona autom ticamente una cuantificaci n relativa precisa de cada fracci n Para uso en diagn stico In Vitro NOTA En estas instrucciones el nombre MINICAP es usado para designar los sistemas autom ticos MINICAP y MINICAP FLEX PIERCING SEBIA PRINCIPIO DEL TEST La electroforesis de las prote nas del suero humano es un an lisis muy til en el laboratorio de an lisis cl nicos para investigar las modificaciones del perfil proteico Paralelamente a las t cnicas de electroforesis realizadas en diferentes soportes entre los que est el gel de agarosa se ha desarrollado la t cnica de la electroforesis capilar que
2. VEA EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP CONTROL DE CALIDAD Se recomienda incluir una serie de an lisis con un suero control al iniciar la sesi n de trabajo RESULTADOS Valores La detecci n directa en el capilar a 200 nm proporciona las concentraciones relativas porcentajes de cada fracci n Los valores normales media 2 desviaciones t picas de cada fracci n s rica han sido establecidos a partir de una poblaci n de 246 adultos normolip micos hombres y mujeres en buen estado de salud MINICAP PROTEIN E 6 Alb mina 55 8 66 1 Alfa 1 globulinas 2 9 4 9 Alfa 2 globulinas 7 1 11 8 Beta globulinas 8 4 13 1 Beta 1 globulinas 4 7 7 2 Beta 2 globulinas 3 2 6 5 Gamma globulinas 11 1 18 8 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores normales NOTA Los valores normales han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 2 y deriva autom tica Interpretaci n Una deformaci n del perfil comparado con el perfil normal es signo de anomal a especialmente la aparici n de un pico suplementario en la zona de las gammaglobulinas El complemento C4 migra entre las zonas beta 1 y beta 2 la PCR migra en la parte de beta 2 cercana a gamma ver PERFILES ELECTROFOR TICOS El aumento relativo de la fracci n beta 2 respecto a la fracci n beta 1 en un contexto cl nico en el que no hay enfermedad inflamat
3. ETAPAS AUTOMATICAS Lectura de los c digos de barras de los tubos primarios de muestra y del carrusel Diluci n de los sueros con el tamp n de an lisis con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura controlada por efecto Peltier durante unos 4 minutos Lectura a 200 nm y aparici n simult nea del perfil proteico en la pantalla del ordenador NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para los 2 primeros tubos analizados los perfiles correspondientes a los tubos analizados se obtienen al cabo de 10 minutos Para los tubos siguientes las fases 1 y 2 lectura de los c digos de barras y diluci n de los sueros se realizan durante el an lisis migraci n de los 2 tubos anteriores DIRA 41 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 AN LISIS DE LOS RESULTADOS Desde el final del an lisis se realiza autom ticamente la cuantificaci n relativa de las fracciones y se pueden examinar los perfiles obtenidos A partir de la concentraci n de prote nas totales de la muestra se pueden calcular las concentraciones de cada fracci n Los perfiles electrofor ticos se analizan visualmente para detectar las anomal as Los perfiles se presentan por defecto en modo redibujado este modo acerca la fracci n alfa 1 al pico de la alb mina Opcionalmente el modo est ndar permite visualizar la curva inic
4. ofrece las ventajas de una automatizaci n completa del an lisis separaciones r pidas y una buena resoluci n Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica realizada en un tubo de di metro interno inferior a 100 um lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida El sistema MINICAP usa el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de un pH dado y seg n el pH del electrolito de un flujo electroendosm tico m s o menos importante El sistema MINICAP posee 2 capilares en paralelo permitiendo realizar 2 an lisis simult neos En este sistema la inyecci n de las muestras en los capilares diluidas con el tamp n de an lisis se realiza por aspiraci n en el nodo La separaci n se lleva a cabo a continuaci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las prote nas se efect a a 200 nm en el lado cat dico Los capilares se lavan a continuaci n con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n usado de pH alcalino el orden de migraci n de las prote nas s ricas es el siguiente gamma globulinas beta 2 globulinas beta 1 gl
5. 8 C se degradan en particular el complemento C3 Un suero conservado unos 10 d as entre 2 y 8 C presenta una fracci n beta 2 que disminuye progresivamente y puede aparecer deformada con aparici n de peque os picos suplementarios en la zona gamma y o beta 1 debido a la degradaci n del complemento C3 y una fracci n alfa 2 cuya forma puede estar ligeramente modificada A partir de los 10 d as de conservaci n la fracci n beta 1 se deforma ensanch ndose y la fracci n beta 2 desaparece casi totalmente NOTA Para su transporte las muestras pueden permanecer a temperatura ambiente durante un m ximo de 5 d as Por tanto se recomienda transportarlas en nevera 2 8 C 40 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 Preparacion de las muestras Use directamente las muestras de suero sin diluir Despu s de conservarlos en nevera entre 2 y 8 C o congelarlos algunos sueros en especial aquellos que contienen una crioglobulina o un criogel se vuelven viscosos o turbios Una vez que hayan alcanzado el estado l quido estos sueros pueden analizarse directamente Igualmente los sueros que contengan una inmunoglobulina polimerizada pueden analizarse directamente sin ning n tratamiento previo Se recomienda observar el aspecto del suero antes del an lisis por si hay hem lisis presencia de crioglobulinas o de turbidez Muestras a descartar No use muestras hemolizadas La hem lisis puede provocar un desdoblamiento de la fracci n alf
6. a 2 No use muestras de suero antiguas o mal conservadas ya que las fracciones beta estar n muy modificadas No use plasma El fibrin geno migra en posici n beta 2 pico adicional en beta 2 o superpuesto con la fracci n beta 2 con aumento eventual del porcentaje de esta fracci n Su presencia en algunas muestras plasma suero mal defibrinado o suero de paciente bajo tratamiento anticoagulante puede falsear la interpretaci n del an lisis confusi n con una banda monoclonal que migre en posici n beta 2 o aumento del porcentaje de esta fracci n En el caso de analizar una muestra de plasma antigua no se recomienda el complemento C3 que es l bil se degrada parcialmente a lo largo del tiempo y la fracci n beta 2 contiene esencialmente fibrin geno NOTA Los tubos de extracci n de muestras biol gicas est n descritos en la documentaci n disponible sobre la fase preanal tica de los an lisis cl nicos datos suministrados por los fabricantes de tubos gu as y recomendaciones sobre la obtenci n de muestras biol gicas En ausencia de indicaciones en las instrucciones sobre el tipo de tubo a usar consulte esta documentaci n y para las dimensiones del tubo a usar consulte el documento de SEBIA Caracter sticas de los tubos a usar seg n el instrumento La fase preanal tica debe realizarse con la tecnolog a m s avanzada y siguiendo las diferentes recomendaciones incluyendo las suministradas por los fabricantes de tubos cu
7. ca MINICAP PROTEIN E 6 es por tanto perfectamente lineal para las fracciones alb mina y gammaglobulinas en la gama de concentraciones estudiadas entre 0 0 y 52 0 g L de alb mina y entre 0 0 y 31 0 g L de gammaglobulinas ld MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY 1 Clark R et al Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins qualitative comparison with high throughput agarose gel electrophoresis J Chromatogr A 744 205 213 1996 Henskens Y et al Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis Clin Chem 44 1184 1190 1998 Jellum E et al Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis J Chromatogr B 689 155 164 1997 Jenkins MA and Guerin MD Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis Ann Clin Biochem 32 493 497 1995 Jenkins MA et al Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis prospective analysis of 1000 specimens J Chromatogr B 672 241 251 1995 6 Jenkins MA and Guerin MD Capillary electrophoresis procedures for serum protein analysis comparison with established techniques J Chromatogr B 699 257 268 1997 7 Jenkins MA and Ratnaike S Five unusual serum protein presentations found by capillary electrophoresis in the clinical laboratory J Biochem Biophys Methods 41 31 47 1999 8 Katzmann JA et al Identification of monoclonal protein
8. ctroforesis capilar MINICAP SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN como m nimo una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se realicen en menos de una semana Vea las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE Para un uso ptimo del CAPICLEAN en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n CAPICLEAN diluida corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO LO CONGELE Pueden observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante Para un uso diferido ponga el tubo que contenga la soluci n diluida en nevera Debe usarse ese mismo d a 39 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 3 SOLUCION DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparacion Prepare una solucion de hipoclorito de sodio lejia con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volum
9. de variaci n CV n 30 de cada suero para cada fracci n y para el conjunto de los 3 sistemas La tabla siguiente presenta los l mites de los valores medios SD y CV obtenidos para las 5 muestras analizadas en los 3 sistemas y un coeficiente de variaci n medio calculado a partir de todos los coeficientes de variaci n n 5 FRACCI N MEDIA SD CV CV MEDIO Albumina 52 6 60 5 0 39 1 00 0 7 1 7 1 2 Alfa 1 3 5 4 8 0 13 0 31 2 9 7 0 4 4 Alfa 2 9 5 12 2 0 12 0 36 1 0 3 8 27 Beta 1 5 4 6 5 0 10 0 31 1 8 4 9 3 1 Beta 2 3 7 6 8 0 13 0 21 1 9 5 6 3 7 Gamma 14 2 18 2 0 15 0 45 1 0 3 0 2 0 Exactitud El analisis de 60 muestras diferentes normales y patologicas mediante electroforesis capilar en el sistema MINICAP con el kit MINICAP PROTEIN E 6 y con otro sistema comercial de electroforesis capilar muestra una buena correlacion entre los dos sistemas de an lisis para el conjunto de las seis fracciones proteicas con una sensibilidad media del 92 1 y una especificidad media del 94 2 respecto al otro sistema usado calculadas segun el m todo recomendado Wendling 1986 La tabla siguiente presenta los resultados del an lisis de regresi n lineal y MINICAP PROTEIN E 6 Fracci n Coeficiente de correlaci n Punto de corte en y Pendiente MEA PHOTEINIE 6 Albumina 0 996 0 046 0 985 37 4 74 0 A
10. e caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del contenedor de tamp n No almacene el tamp n cerca de una ventana o de una fuente de calor NOTA Si el tamp n de an lisis ha sido conservado a 2 8 C conviene dejar que alcance la temperatura ambiente antes de usarlo NO LO CONGELE Un vial de tamp n empezado instalado en el instrumento MINICAP es estable un m ximo de 2 meses acumulados Si se prev que se va a utilizar un vial de tamp n durante m s de 2 meses debe retirarse del instrumento despu s de cada uso y conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C o en nevera entre 2 y 8 C siendo entonces estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial de tamp n Deseche el tamp n si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado o a part culas en suspensi n 38 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 2 SOLUCION DE LAVADO Preparacion El vial de soluci n de lavado concentrada debe completarse hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares despu s de la separaci n electrofor tica de las prote nas IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de
11. ectar el contenedor de tamp n MINICAP PROTEIN E 6 al aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del MINICAP 5 El carrusel puede contener 28 tubos Ponga hasta 28 tubos primarios en el carrusel comenzando por la posici n n 1 procurando que el c digo de barras de cada tubo est orientado hacia la ventana de lectura IMPORTANTE Si el primer tubo a analizar no est en la posici n n 1 el an lisis no puede comenzar en caso de ausencia de tubo a analizar en la posici n n 1 aparecer un mensaje de advertencia NOTA Al usar un suero control es indispensable usar la etiqueta con c digo de barras especifica prevista a este efecto Ponga cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP correspondiente en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia Ponga una caja para cubetas usadas nueva en el MINICAP en el lugar previsto a este efecto Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP tras lo cual el an lisis empezar autom ticamente 0 Despu s del an lisis saque el carrusel para extraer los tubos ya analizados 1 Quite con precauci n la caja que contiene las cubetas de reactivo usadas ci rrela herm ticamente usando una de las tapas suministradas y des chela ATENCI N Manipule con precauci n las cajas que contengan las cubetas de reactivos usadas ya que contienen muestras biol gicas gt ON DILUCION MIGRACION DESCRIPCION DE LAS
12. en final con agua destilada o desionizada fria Uso Para limpiar la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Vea el manual de instrucciones del MINICAP SEBIA Dispense 500 pL de soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte identificado con una etiqueta con un c digo de barras espec fico de la soluci n de hipoclorito de sodio en la posici n 1 del carrusel del MINICAP Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas aparece un mensaje Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP y el ciclo de limpieza comenzar autom ticamente IMPORTANTE Para un uso ptimo de la soluci n de hipoclorito de sodio en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de
13. ial o curva no tratada LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP III FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IMPORTANTE Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP correspondiente en caso de ausencia de cubeta aparecer un mensaje de advertencia IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico MINICAP permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores de reactivo y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de contenedor La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultrapura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo
14. lfa 1 0 987 0 032 1 012 3 1 13 0 Alfa 2 0 993 0 347 1 024 7 8 23 5 Beta 1 0 944 0 686 0 911 3 1 10 2 Beta 2 0 986 0 232 1 035 1 9 14 4 Gamma 0 999 0 222 0 986 3 5 34 7 Sensibilidad Se diluy serialmente un suero patol gico con una proteina monoclonal de 1 03 g L y luego se realiz la migraci n de las diluciones en el sistema MINICAP con el kit MINICAP PROTEIN E 6 La mayor diluci n que permit a ver la banda monoclonal fue la de 1 4 La menor concentraci n de la banda monoclonal detectada fue por tanto de 0 26 g L para esta muestra NOTA El l mite de detecci n de una paraprote na puede variar en funci n de la posici n de la banda monoclonal y del fondo policlonal de la zona de las gammaglobulinas Linealidad Una soluci n de alb mina de 52 0 g L y una soluci n de gammaglobulinas de 31 0 g L concentraciones proteicas determinadas por nefelometr a a 280 nm han sido mezcladas en proporciones variables de 10 en 10 100 de soluci n de alb mina 0 de soluci n de gammaglobulinas 90 10 etc tera 0 de soluci n de alb mina 100 de soluci n de gammaglobulinas y las mezclas han sido analizadas con la t cnica MINICAP PROTEIN E 6 Los resultados han mostrado que el porcentaje obtenido de cada fracci n est perfectamente correlacionado con el porcentaje te rico de cada una de las fracciones en la mezcla y que toda variaci n es detectada de forma lineal con la t cnica MINICAP PROTEIN E 6 La t cni
15. los rayos solares y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de los cidos y del amoniaco 4 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n El vial de la soluci n de lavado concentrada SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Para el MINICAP se recomienda diluir s lo 25 mL de la soluci n concentrada hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares del MINICAP IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del v
16. mpliendo la reglamentaci n aplicable PROCEDIMIENTO El sistema MINICAP es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las prote nas s ricas en 2 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de los tubos primarios hasta 28 y del carrusel diluci n de las muestras en las cubetas de reactivo desechables a partir de los tubos primarios lavado de los capilares inyecci n de las muestras diluidas separaci n y detecci n directa de las prote nas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes colocaci n de los tubos primarios en el carrusel introducci n en el sistema MINICAP recuperaci n de los tubos despu s del an lisis recuperaci n y cierre de las cajas para cubetas usadas LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el MINICAP y el ordenador de control 2 Para la inicializaci n del aparato coloque al menos una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubeta de reactivo aparecer un mensaje de advertencia 3 Abra el programa de gesti n PHORESIS y valide el nivel de los reactivos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 4 Use el kit MINICAP PROTEIN E 6 con el programa de an lisis PROTEIN E 6 Para seleccionar el programa de an lisis PROTEIN E 6 y con
17. o monoclonal u oligoclonal debe ser confirmada usando el kit de inmunotipado SEBIA MINICAP IMMUNOTYPING los kits de inmunofijaci n SEBIA HYDRAGEL IF Para obtener informaci n complementaria sobre la interpretaci n de los perfiles obtenidos vea la BIBLIOGRAF A Zona alfa 2 Algunas muestras pueden presentar un desdoblamiento de esta fracci n dependiendo del fenotipo de haptoglobina vea PERFILES ELECTROFOR TICOS Interferencias y Limitaciones Vea MUESTRAS PARA EL AN LISIS La presencia en la muestra de una concentraci n importante de lipoprote nas triglic ridos o de pigmentos biliares con una coloraci n del suero amarilla verde caracter stica puede dar lugar a la aparici n de una bisalbuminemia en el perfil electrofor tico Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todos los componentes monoclonales La presencia de una inmunoglobulina monoclonal puede no ser detectada por ejemplo si hay una inmunoglobulina polimerizada diseminada u oculta en el fondo policlonal a la inversa una ligera deformaci n del perfil puede indicar la presencia de una inmunoglobulina monoclonal En todos los casos debe analizarse el contexto cl nico y si permite sospechar una gammapat a se recomienda realizar un inmunotipado Si persiste la duda el resultado obtenido deber confi
18. obulinas alfa 2 globulinas alfa 1 globulinas y alb mina Cada fracci n contiene uno o varios constituyentes s ricos REACTIVOS SUMINISTRADOS EN LOS KITS MINICAP PROTEIN E 6 ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad COMPONENTES REF N 2203 REF N 2223 Tamp n listo para usar 2 viales de 250 mL 6 viales de 250 mL Soluci n de lavado soluci n concentrada 1 vial de 25 mL 3 viales de 25 mL Cubetas desechables 1 bolsa de 125 3 bolsas de 125 Filtros 3 filtros 3 filtros Cajas para cubetas usadas 4 cajas 12 cajas MINICAP PROTEIN E 6 MAXI KIT PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente y seg n las instrucciones suministradas LEA DETENIDAMENTE LAS HOJAS DE INSTRUCCIONES ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultrapura como el agua para inyecci n 1 TAMP N Preparaci n El tamp n est listo para usar Contiene tamp n pH 9 9 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Tamp n para el an lisis de las prote nas s ricas mediante electroforesis capilar Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El tamp n debe conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C o en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha d
19. olumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro lt 0 45 um y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar MINICAP SEBIA referencia n 1230 MINICAP FLEX PIERCING SEBIA referencia n 1232 2 Carruseles suministrados con el sistema MINICAP 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema MINICAP Contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada y contenedor de desechos 4 Cubetas de reactivo desechables MINICAP SEBIA 250 unidades referencia n 2280 5 Tapas para cubetas desechables de MINICAP usadas 12 ud referencia n 2286 tapas destinadas a cerrar las cajas para cubetas usadas MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se hace con sueros frescos Los sueros deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las muestras pueden conservarse un m ximo de 10 d as en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones m s prolongadas congele las muestras r pidamente como m ximo durante las 8 horas siguientes a su obtenci n Los sueros congelados son estables durante 1 mes Las prote nas de las muestras conservadas entre 2 y
20. omplementario de la repetibilidad de sueros control realizado en una serie de instrumentos Son independientes de los valores presentados en la tabla de resultados de arriba 43 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 Reproducibilidad interserial Se analizaron cinco sueros diferentes en el sistema MINICAP con el kit MINICAP PROTEIN E 6 Estos sueros se analizaron 10 veces sucesivamente en 3 sistemas MINICAP con el mismo lote de tampon de an lisis Se calcularon las medias desviaciones tipicas SD y coeficientes de variacion CV n 10 de cada suero para cada fraccion y sistema La tabla siguiente presenta los limites de los valores medios SD y CV obtenidos para las 5 muestras analizadas y un coeficiente de variacidn medio calculado a partir de todos los coeficientes de variacion n 15 FRACCION MEDIA SD CV CV MEDIO Albumina 52 4 61 1 0 21 0 60 0 4 1 0 0 7 Alfa 1 3 4 4 9 0 06 0 28 1 8 6 6 3 1 Alfa 2 9 1 12 5 0 09 0 29 0 8 3 0 1 4 Beta 1 5 4 6 7 0 05 0 17 1 0 2 7 1 9 Beta 2 3 5 6 8 0 04 0 16 1 3 3 7 2 4 Gamma 14 1 18 5 0 06 0 44 0 4 2 4 1 4 Reproducibilidad intersistema Se analizaron cinco sueros diferentes en el sistema MINICAP con el kit MINICAP PROTEIN E 6 Estos sueros se analizaron 10 veces sucesivamente en 3 sistemas MINICAP con el mismo lote de tamp n de an lisis Se calcularon las medias desviaciones t picas SD y coeficientes
21. oria debe constituir una se al de alerta que indica que hay que realizar investigaciones complementarias En caso de duda en la interpretaci n del perfil y o en la colocaci n de los m nimos especialmente durante el an lisis de un control externo es necesario superponer al perfil obtenido el del Suero Control Normal SEBIA referencia n 4785 Puede sospecharse la presencia de un componente monoclonal en el suero si en la ventana de edici n de las curvas aparece el mensaje de alerta Warning Migration centering is out of range o si el perfil proteico est retrasado o deformado En estos casos ser necesario repetir el an lisis de la muestra tras realizar un tratamiento reductor con beta mercaptoetanol para confirmar la presencia de una paraprote na prepare una soluci n reductora a adiendo un 1 de beta mercaptoetanol en Fluidil SEBIA referencia n 4587 1 vial de 5 mL Antes de volver a analizarla trate la muestra con esta soluci n a adiendo 100 HL de soluci n reductora a 300 pL de suero puro Agite en el vortex y deje incubar durante 15 minutos despu s analice la muestra seg n el procedimiento habitual 42 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 IMPORTANTE Despu s del tratamiento reductor con beta mercaptoetanol la muestra debe ser analizada inmediatamente por tanto no debe haber tubos en espera de an lisis en el sistema MINICAP que puedan retrasar el an lisis de la muestra tratada Cualquier anomalia de aspect
22. rmarse con una t cnica de inmunofijaci n en gel de agarosa Resoluci n de problemas Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA CARACTER STICAS T CNICAS Los resultados siguientes obtenidos con el kit MINICAP PROTEIN E 6 en el sistema MINICAP mediante an lisis cuantitativo indican una muy buena repetibilidad y reproducibilidad del kit MINICAP PROTEIN E 6 en todos los aspectos probados con un coeficiente de variaci n medio del orden del 2 1 en los porcentajes de cada fracci n Los porcentajes de las diferentes fracciones proteicas se obtuvieron con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 2 y deriva autom tica Repetibilidad intrasecuencia e interserial Se analizaron cuatro sueros diferentes en paralelo en dos sistemas MINICAP con el kit MINICAP PROTEIN E 6 y con el mismo lote de tamp n de an lisis Cada suero se analiz 5 veces simult neamente en los 2 capilares del sistema MINICAP Se calcularon las medias desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV n 10 de cada muestra en cada sistema MINICAP La tabla siguiente presenta los valores medios en desviacione
23. s in serum A quantitative comparison of acetate agarose gel and capillary electrophoresis Electrophoresis 18 1775 1780 1997 Landers JP Clinical Capillary Electrophoresis Clin Chem 41 495 509 1995 10 Oda RP et al Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids Electrophoresis 18 1715 1723 1997 11 Wijnen PA and van Dieijen Visser M Capillary Electrophoresis of serum proteins Reproducibility comparison with agarose gel electrophoresis and a review of the literature Eur J Clin Chem Clin Biochem 34 535 545 1996 12 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat 1986 Sept 93 97 13 Le Carrer Bach Ngohou K L lectrophor se capillaire automatis e en biologie clinique Spectra Biologie 146 47 52 2005 14 Blancher A Boulestin A Abbal M 2007 Diagnostic biologique des gammapathies monoclonales en 2007 et leur identification immunologique Feuillets de biologie 48 N 279 29 36 15 Blessum C Jeppsson J O Aguzzi F Bernon H Bienvenu J 1999 L lectrophor se capillaire principe et applications au laboratoire de biologie clinique Annales de Biologie Clinique Volume 57 Num ro 6 643 57 Novembre D cembre 1999 16 Chartier C et al 2011 Evaluation of two automated capillary electrophoresi
24. s systems for human serum protein analysis Clin Biochem DOI 10 1016 j clinbiochem 2011 05 022 NAO 179 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 1 Albumin ES y E eye Sf Malt a zi A s i Prealbumin Gammaglobulins 1 1 1 C3 Complement i Albumin i orlipoproteins C4 Complement L__ preB lipoproteins Transferrin i 1 B lipoproteins Hemopexin i 2 2 Haptoglobin phenotype i po Alpha 1 acid glycoprotein Alpha 2 macroglobulin Alpha 1 antitrypsin Figure 2 1 1 Haptoglobin phenotype ALIA 180 MINICAP PROTEIN E 6 2014 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 3 1 2 Haptoglobin phenotype 181
25. s t picas SD y coeficientes de variaci n CV obtenidos para cada fracci n proteica de los 4 sueros analizados en los 2 sistemas MINICAP Fracci n Alb mina Alfa 1 Alfa 2 Beta 1 Beta 2 Gamma Suero A sistema n 1 sistema n 2 MEDIA 59 2 58 6 5 0 5 2 8 6 8 6 4 9 5 1 4 5 4 5 17 8 18 0 sD 0 53 0 74 0 14 0 16 0 28 0 16 021 0 15 0 11 0 13 0 29 0 30 CV 0 9 1 3 2 8 3 0 3 2 1 9 4 3 3 0 2 5 2 9 1 6 1 7 Suero B sistema n 1 sistema n 2 MEDIA 60 7 59 7 3 5 3 6 8 9 9 2 6 7 7 1 5 2 5 0 15 0 15 5 SD 0 55 0 45 0 09 0 10 0 23 0 15 0 18 0 11 0 17 0 15 0 20 0 24 CV 0 9 0 8 2 7 2 7 2 5 1 6 2 7 1 5 3 3 3 0 1 3 1 6 Suero C sistema n 1 sistema n 2 MEDIA 9 55 4 54 1 3 6 3 7 10 1 10 5 5 7 5 8 38 3 9 21 3 22 1 50 0 73 0 49 0 14 0 14 0 27 0 16 0 13 0 05 0 11 0 13 0 45 0 25 CV 1 3 0 9 3 8 3 8 2 7 1 5 2 3 0 9 2 8 3 3 2 1 1 1 Suero F sistema n 1 sistema n 2 MEDIA 60 9 60 9 4 7 4 2 9 0 9 6 6 3 6 2 4 5 4 5 14 6 14 7 SD 0 38 0 46 0 10 0 10 0 21 0 18 0 18 0 13 0 14 0 12 0 20 0 20 CV 0 6 0 7 2 2 2 5 2 3 1 9 2 9 2 1 3 0 2 7 1 4 1 4 SD MAX 1 2 0 4 0 7 0 7 0 5 0 5 CV MAX 2 0 7 0 7 0 7 0 7 0 4 0 NOTA Los valores m ximos de las desviaciones t picas y los coeficientes de variaci n SD M X y CV M X han sido determinados mediante el an lisis c
26. sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de soluci n de lavado La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia su aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 3 CUBETAS DE REACTIVO DESECHABLES Uso Cubetas de un solo uso para la diluci n y migraci n de las muestras de suero en el aparato autom tico Deben colocarse en el cargador espec fico del MINICAP Una cubeta est destinada al an lisis de 2 muestras ATENCI N Manipule con precauci n las cubetas de reactivo que contengan muestras biol gicas 4 FILTROS Uso Filtros de un solo uso para el filtrado del tamp n de la soluci n de lavado reconstituida y del agua destilada o desionizada usada para la limpieza de los capilares IMPORTANTE Cambie sistem ticamente los filtros al empezar un nuevo kit Enrosque un filtro al final de cada tubo que cuelga de los tapones de los contenedores de tamp n de soluci n de lavado y de agua destilada o desionizada Al cambiar los filtros lave los conectores y los tubos con agua destilada o desionizada Conservaci n Antes de usarlos los filtros deben conservarse en su embalaje original herm
27. ticamente cerrado en un lugar seco y a temperatura ambiente o en nevera 5 CAJAS PARA CUBETAS USADAS Uso Cajas destinadas a la recuperaci n autom tica de las cubetas de reactivo usadas en el MINICAP Deben colocarse en el MINICAP en el emplazamiento previsto a tal efecto ATENCI N Manipule con precauci n las cajas que contengan cubetas de reactivo usadas ya que contienen muestras biol gicas REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para la limpieza de los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um y con una resistividad superior a 10 Megaohmios x cm Renueve el agua cada d a para evitar contaminaciones microbianas Para un funcionamiento ptimo se recomienda a adir 350 uL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 2 CAPICLEAN Presentaci n El vial de la soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteol ticos surfactantes y aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para ele

MINICAP PROTEIN(E) 6

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