(LISTOS)ESManual de instrucciones SARA
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1. A16 SARA C UNKN OK POS 37 61 POS 28 66 NEG 0 00 NEG 0 00 Gr fica 1 Canal FAM Virus del Sarampi n Resultado obtenido al amplificar un control negativo y un control positivo SARA Control negativo A15 en azul ausencia de se al Control positivo SARA A16 en gris se observa se al con Ct 37 61 Site ID Protocol Sample ID SARA C SARA C Fluorescence Site ID Protocol Sample ID Sample Status FAM Std Res FAM Ct Alx532 Alx532 Ct TXR TXR Ct Alx647 Alx647 Ct Type Std Res Std Res Std Res A15 SARA C UNKN OK _ NEG 0 00 POS 28 40 NEG 0 00 NEG A16 SARA C UNKN oK POS 37 61 POS 28 66 NEG 0 00 NEG Gr fica 2 Canal Alx532 control interno Resultado obtenido al amplificar un control negativo y un control positivo SARA Control negativo A15 en azul se observa se al con Ct 28 40 Control positivo SARA A16 en gris se observa se al con Ct 28 66 10 Control de calidad Se recomienda que se lleven a cabo controles positivos y negativos cada vez que se realice un an lisis Cada lote del kit RealCycler SARA G ha sido testado seg n las especificaciones de la PCR a tiempo real utilizando el equipo SmartCycler Cepheid2. EXRIAGENIE CE MOLECULAR Progenie molecular Artes y Oficios 37 Valencia 46021 Espa a Tel 902 91 05 05 Fax 902 91 05 06 RealCycler SARA G v 1 1 Uso previsto RealCycler SARA G es un kit de reactivos que permite la detecci n cualitativa por PCR a tiempo real del ARN del virus del sarampi n en muestras cl nicas El sistema incluye un control interno de amplificaci n para prevenir los falsos negativos debidos a la inhibici n de la reacci n 2 Especificaciones Sensibilidad 100 copias uL Especificidad Virus del sarampi n gen Nucleoprote na 3 Estabilidad y almacenamiento Todos los componentes del kit RealCycler SARA G deben ser almacenados a 20 C El kit es estable a 20 C hasta la fecha de caducidad ver etiqueta externa del kit 4 Descripci n del m todo La reacci n en cadena de la polimerasa PCR est basada en la amplificaci n de una regi n espec fica del genoma del pat geno usando primers y sondas espec ficos En la PCR a tiempo real se utilizan sondas marcadas con fluorocromos Hay una emisi n de fluorescencia que es proporcional a la cantidad de ARN presente en la muestra El Cycle threshold Ct es el ciclo de la PCR en el que se detecta inicialmente un aumento en la se al de fluorescencia La amplificaci n del virus del sarampi n se detecta en FAM y la del control interno en Alx532 5 Composici n RealCycler SARA G incluye la mezcla de reacci n Amplimix una retrotranscrip
3. libre de inhibidores de la PCR 9 Procedimiento a Extracci n de ARN b Protocolo Stage 3 Repeat l45 times 3 Temperature Cycle Bl 95 0 115 60 0 30 720 30 Advance to Next Stage Selecci n de fluor foros FAM detecta el virus del sarampi n Alx532 detecta el control interno c Preparaci n de la reacci n Descongelar la AmpliMix y el Control Positivo ARN SARA Tomar una al cuota de 18 25 uL de Amplimix a adir 0 25 uL de retrotranscriptasa tap n azul y a adir 6 5 uL del ARN de cada muestra o control a cada tubo Colocar los tubos en el equipo Seleccionar el protocolo SARA G Iniciar el programa de amplificaci n d Interpretaci n de los resultados 11 Observaciones FAM Alx532 3 Tabla de compatibilidad de fluor foros Std Res Std Res nterpretacion l POSITIVO no Ineinerenitg Virus del Sarampi n Fluor foro Fluor foro alternativo ND POS NO SE DETECTA FAM ND ND NO VALORABLE TET CAL Fluor Gold 540 HEX JOE VIC CAL Fluor Orange 560 Alexa 532 Texas Red ROX LC Red 610 CAL Fluor Red 610 e Ejemplo de resultado Site ID Protocol Sample ID SARA C SARA C Fecha de publicaci n Marzo 2012 Fluorescence Site ID Protocol Sample ID Sample Status FAM Std Res FAM Ct Alx532 Alx532 Ct TXR TXR Ct Alx647 Alx647 Ct Type Std Res Std Res Std Res A15 SARA C UNKN OK _ NEG 0 00 POS 28 40 NEG 0 00 NEG 0 00
4. tasa y un Control Positivo ARN SARA Todos los reactivos est n listos para su uso sin a adir ni reconstituir ning n componente Componente Viales N m Volumen Conserv AmpliMix 1 890 uL 15 25 OC ld 1 135pL 15 25 criptasa Control Positivo O ARN ERA 1 120 uL 15 250C 6 Material y equipamiento adicional requerido y no suministrado Equipo de PCR a tiempo real Kit de extracci n de ARN Guantes desechables Pipetas calibradas Puntas de pipeta con filtro Congelador 20 C www progenie molecular com 7 Advertencias y precauciones Todos los componentes del kit deben mantenerse en fr o mientras se est n manipulando Despu s de a adir el ARN minimizar el tiempo necesario para iniciar el programa de amplificaci n Los tubos con la mezcla de amplificaci n no deben exponerse a la luz durante un periodo de tiempo prolongado Descongelar y congelar repetidas veces los reactivos puede disminuir la sensibilidad del kit Usar guantes desechables Usar pipetas calibradas y puntas de pipeta con filtro Los ensayos deben llevarse a cabo por personal cualificado y siguiendo las buenas pr cticas de laboratorio No usar el kit despu s de la fecha de caducidad Uso para diagn stico in vitro 8 Muestras cl nicas Recoger las muestras en tubos est riles Almacenarlas y transportarlas congeladas a 20 C hasta su uso Utilizar ARN bien purificado y
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