MINICAP CDT - Annar Diagnóstica Import
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1. Solution de traitement des chantillons exemples Samples treatment solution examples S rum N 3 avec interf rent avant traitement Serum No 3 with interferent before treatment A A i h i i i Pentasialotransferrin i SE A i i i 1 i i i i i i i 1 i i Disialotransferri Tetrasialotransferrin Trisialotransferrin S rum N 3 avec interf rent apr s traitement Serum No 3 with interferent after treatment A H i i i Pentasialotransferrin POSERE EEE I ZEN S Tetrasialotransferrin x 7 Disialotransferri Trisialotransferrin 225 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 9 Solution de traitement des chantillons exemples Samples treatment solution examples S rum N 4 avec interf rent avant traitement Serum No 4 with interferent before treatment S rum N 4 avec interf rent apr s traitement Serum No 4 with interferent after treatment al fi A A i 4 if toot po Pentasialotransferrin i j n Disialotransferri Tetrasialotransferrin Trisialotransferrin 226 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES Figure 10 PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Profil avec bloc Disialo Trisialotransferrine Pattern with Disialo Trisialotransfe2. Le Goff A Bourdin C Weill J Evaluation of carbohydate deficient transferrin compared with Tf index and other markers of alcohol abuse Alcohol Clin Exp Res 13 605 610 1989 15 Sillanaukee P Olsson U Improved diagnostic classification of alcohol abusers by combining carbohydrate deficient transferrrin and y glutamyltransferase Clin Chem 47 4 681 685 2001 16 Stibler H Borg S Joustra M Hultcrantz Carbohydrate deficient transferrin CDT in serum as a marker of high alcohol consumption Advances in the Biosciences Eds Nordmann Ribiere Rouach Pergamon Press 71 353 357 1988 17 Stibler H Carbohydrate deficient transferrin in serum a new marker of pottentially harmful alcohol consumption reviewed Clin Chem 37 12 2029 2037 1991 18 Wuyts B Delanghe JR Carbohydrate deficient transferrin as a marker for chronic alcohol consumption LabMedica International July August 10 12 2001 19 Yersin B Nicolet JF Decrey H Burnier M van Melle G Pecoud A Screening of excessive alcohol drinking Comparative value of carbohydrate deficient transferrin gamma glutamyltransferase and mean corpuscular volume Arch Intern Med 155 17 1907 1911 1995 20 Arndt T Erkens M Holtkamp K Keller T and Gressner AM High prevalence of increased trisialotransferrin concentrations in patients with anorexia nervosa Implications for determination of carbohydrate deficient transferrin Clinica Chimica Acta
3. MINICAP CDT Ref 2208 2012 06 MINICAP CDT 2012 06 UTILIZACION El kit MINICAP CDT permite separar en medio alcalino pH 8 8 las isoformas de la transferrina del suero humano mediante electroforesis capilar en el sistema autom tico MINICAP Las isoformas de la transferrina se separan en cinco fracciones seg n su grado de sializaci n asialotransferrina forma no sializada disialotransferrina trisialotransferrina tetrasialotransferrina y pentasialotransterrina Las formas d bilmente sializadas disialotransferrina asociada en ciertos casos a la asialotransferrina representan las formas de la transferrina denominadas CDT Carbohydrate Deficient Transferrin que son marcadores bioqu micos del consumo de alcohol cr nico El sistema MINICAP permite realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil de la transferrina para el an lisis cuantitativo de la CDT Las isoformas de la transferrina separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante espectrofotometr a de absorbancia a 200 nm La detecci n directa proporciona autom ticamente el porcentaje de CDT calculado respecto a la cantidad total de transferrina detectada Para uso en diagn stico In Vitro NOTA En estas instrucciones el nombre MINICAP es usado para designar los sistemas autom ticos MINICAP y MINICAP FLEX PIERCING SEBIA PRINCIPIO DEL TEST La cuantificaci n
4. No se ha detectado ninguna discordancia en ninguna muestra Muestras con valores normales de CDT todos los valores son normales Muestras con valores aumentados de CDT todos los valores est n aumentados CDT Suero A Sistema n 1 y lote n 1 Sistema n 2 y lote n 2 Sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 0 7 0 6 0 7 SD 0 00 0 05 0 03 CV 0 0 7 3 4 3 Suero B Sistema n 1 y lote n 1 Sistema n 2 y lote n 2 Sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 1 8 1 7 1 9 SD 0 05 0 05 0 05 CV 2 7 3 1 2 8 Suero C Sistema n 1 y lote n 1 Sistema n 2 y lote n 2 Sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 5 3 5 2 5 4 SD 0 05 0 09 0 08 CV 0 9 1 8 1 5 Suero E Sistema n 1 y lote n 1 Sistema n 2 y lote n 2 Sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 0 6 0 5 0 6 SD 0 05 0 05 0 05 CV 8 0 9 1 9 1 Suero F Sistema n 1 y lote n 1 Sistema n 2 y lote n 2 Sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 8 0 8 0 7 9 SD 0 18 0 29 0 20 CV 2 2 3 6 2 5 Reproducibilidad interan lisis Se han analizado seis 6 muestras de suero diferentes con la t cnica MINICAP CDT 10 veces sucesivamente en 3 sistemas MINICAP y con 2 lotes diferentes de kits MINICAP CDT Entre las muestras analizadas se encuentran 3 muestras con un valor de CDT normal y 3 muestras con un valor de CDT aumentado Se
5. 379 150 153 2007 21 Delanghe JR De Buyzere ML Carbohydrate Deficient Transferrin in forensic medicine Clin Chim Acta 2009 406 1 7 22 Schellenberg F Wielders JP Evaluation of capillary electrophoresis assay for CDT on SEBIA s CAPILLARYS System Intra and inter laboratory precision reference interval and cut off Clin Chim Acta 2010 23 Helander A Husa A Jeppsson JO Improved HPLC method for Carbohydrate Deficient Transferrin in serum Clin Chem 2003 49 1881 1890 24 Kenan N et al Importance of HPLC confirmation of problematic carbohydrate deficient transferrin CDT results from a multicapillary electrophoresis routine method Clin Chim Acta 2010 doi 10 1016 j cca 2010 08 006 25 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat Sept 93 97 1986 218 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 1 Profil normal Normal pattern ii A Pentasialotransferrin Disialotransferrin Tetrasialotransferrin Trisialotransferrin Figure 2 Profil CDT augment e Pattern with increased CDT A I A A i i i Asialotransferrin i n Disialotransferri De sense A 1 H i i Pentasialotransferrin Tetrasialotransferrin Trisi
6. Solution de traitement des chantillons exemples Samples treatment solution examples S rum N 1 avec interf rent avant traitement Normal No 1 with interferent before treatment a A i A i i Pentasialotransferrin Tetrasialotransferrin In Trisialotransferrin S rum N 1 avec interf rent apr s traitement Serum No 1 with interferent after treatment An AA l DOi po 1 1 4 H H H i i Pentasialotransferrin De Disialotransferri Tetrasialotransferrin do to S Trisialotransferrin 223 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 7 Solution de traitement des chantillons exemples Samples treatment solution examples S rum N 2 avec interf rent avant traitement Serum No 2 with interferent before treatment A Pentasialotransferrin ER ere A i i i f i n Disialotransferri h i i Tetrasialotransferrin Trisialotransferrin S rum N 2 avec interf rent apr s traitement Serum No 2 with interferent after treatment Lo 4 Pentasialotransferrin Dire cases sl Disialotransferri Tetrasialotransferrin See Soa ag Trisialotransferrin 224 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 8
7. alcanzado el estado l quido se pueden analizar directamente Se recomienda observar el aspecto del suero antes del an lisis por si hay hem lisis presencia de crioglobulinas o turbidez Preparaci n de las muestras que presentan interferencias vea Perfiles electrofor ticos donde hay algunos ejemplos de muestras con interferencias Dispense 200 pL del suero a tratar en un microtubo A ada 50 pL de soluci n de tratamiento de muestras CAPILLARYS MINICAP CDT Agite en el vortex durante 5 segundos Centrifugue el microtubo durante 10 minutos a 3000 rpm Tome el sobrenadante y p ngalo en un microtubo nuevo para realizar el an lisis Corte el tap n de este microtubo Ponga el microtubo que contiene el sobrenadante de la muestra tratada en el carrusel del MINICAP dentro de un tubo de hem lisis nuevo que le servir de soporte Realice el an lisis a continuaci n de la misma forma que una muestra no tratada Muestras a descartar No use muestras hemolizadas La hem lisis provoca una deformaci n del perfil de las isoformas de la transferrina que hace imposible la cuantificaci n de la CDT No use muestras de suero antiguas o mal conservadas No use plasma El fibrin geno migra delante de la forma asialotransferrina lo que produce una deformaci n del perfil electrofor tico Si el pico de fibrin geno es demasiado grande puede interferir en el an lisis de las isoformas de la transferrina y pertur
8. de la CDT mediante electroforesis de las isoformas de la transferrina a partir de suero humano es un an lisis que permite detectar el consumo cr nico de alcohol 4 5 131819 La t cnica de electroforesis capilar ofrece la ventaja de una automatizaci n completa del an lisis separaciones r pidas y una buena resoluci n Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica efectuada en un tubo de di metro interno inferior a 100 um lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida El sistema MINICAP usa el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de pH dado seg n el pH del electrolito y el flujo electroendosm tico El sistema MINICAP posee 2 capilares en paralelo permitiendo 2 an lisis simult neos para la cuantificaci n de la CDT En este sistema la inyecci n en los capilares de la muestra diluida con un diluyente espec fico se realiza en el nodo por aspiraci n La separaci n se realiza a continuaci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las prote nas se realiza a 200 nm en la parte cat dica Los capilares son lavados a continuaci n
9. usadas necesarios para un funcionamiento ptimo ATENCI N Vea la ficha de datos de seguridad Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN como m nimo una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se realicen en menos de una semana Vea las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE Para un uso ptimo del CAPICLEAN en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n CAPICLEAN diluida corte el tap n del microtubo antes de usarlo Compruebe la presencia de cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO LO CONGELE Pueden observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante Para un uso diferido ponga el tubo que contenga la sol
10. DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras de los tubos primarios de muestra y del carrusel Diluci n de los sueros con el diluyente de muestras con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura regulada por efecto Peltier durante unos 8 minutos Lectura a 200 nm y aparici n simult nea del perfil de las isotormas de la transferrina en la pantalla del ordenador NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para los 2 primeros tubos analizados los perfiles correspondientes a los tubos analizados se obtienen al cabo de unos 18 minutos Para los tubos siguientes las fases 1 y 2 lectura de los c digos de barras y diluci n de los sueros se realizan durante el an lisis migraci n de los 2 tubos anteriores ES ll AN LISIS DE LOS RESULTADOS Desde el final del an lisis los porcentajes relativos de las diferentes fracciones de la transferrina son calculados autom ticamente y aparecen en el orden siguiente pentasialotransferrina asociada a la tetrasialotransferrina trisialotransferrina disialotransferrina y asialotransferrina Las fracciones pentasialotransferrina y tetrasialotransferrina son integradas por separado identific ndose la fracci n pentasialotransferrina con un color espec fico En el perfil electrofor tico obtenido todas l
11. NO LO CONGELE Deseche el diluyente de muestras si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana precipitados o part culas en suspensi n 3 SOLUCI N DE LAVADO Preparaci n El vial de soluci n de lavado concentrada debe completarse hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares despu s de la separaci n electrofor tica de las isoformas de la transferrina IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de soluci n de lavado La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 4 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP CDT 4 1 Para la limpieza diaria de la c nula de muestras con las versiones lt 7 42 Preparaci n El vial de soluci n de lavado CAPILLARYS MINICAP CDT est listo para usar Contie
12. a observar atentamente el perfil electrofor tico obtenido para detectar una distorsi n del perfil una fracci n adicional o cualquier otra alteraci n respecto a un perfil normal o un perfil con la CDT aumentada vea PERFILES ELECTROFOR TICOS Figuras n 1 y 2 Si hay anomal as en el perfil electrofor tico el valor de la CDT eventualmente indicado no debe ser tenido en cuenta Defectos Cong nitos de la Glicosilaci n Algunos casos de variantes gen ticas de la transferrina Prote nas monoclonales o presencia de un fondo policlonal importante Fibrin geno y muestras hemolizadas Anticoagulantes citrato EDTA Muestras antiguas o mal conservadas Lesiones hep ticas graves fase final de la enfermedad Vea MUESTRAS PARA EL AN LISIS La CDT puede cuantificarse al analizar sueros que presenten variantes de las isoformas de la transferrina En este caso la cuantificaci n de la CDT es obtenida mediante un c lculo en pantalla aparece la menci n CDT y en el informe de resultados se imprime el comentario CDT calculada cerca de la menci n CDT Si el valor de CDT obtenido es cercano al valor de corte se recomienda estudiar los datos cl nicos del paciente Las alteraciones hep ticas pueden afectar a la cuantificaci n de la CDT Puede observarse un bloque disialotransferrina trisialotransferrina al analizar muestras de pacientes con alteraciones hep ticas por ejemplo cirrosis alcoh lica vea Perf
13. alotransferrin 219 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 3 Profil avec compl ment C3 d grad Pattern with degradated C3 complement C3d Pentasialotransferrin gt Sie ee Tetrasialotransferrin A i i Disialotransferri i Trisialotransferrin 220 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 4 Variants de la CDT CDT variants 221 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 5 Solution de traitement des chantillons exemples Samples treatment solution examples S rum normal avant traitement Normal serum before treatment E Pentasialotransferrin esp gt Si iscugrisi side Disialotransferri Tetrasialotransferrin pa eh E A Trisialotransferrin S rum normal apr s traitement Normal serum after treatment N 4 P e A i i i i entasialotransferrin i Disialotransferri Tetrasialotransferrin Stee nee ide ee UR ak Trisialotransferrin 222 MINICAP CDT 2012 06 SCH MAS FIGURES Figure 6 PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS
14. as curvas de las fracciones de la transferrina excepto la asialotransferrina son calculadas y redibujadas o ajustadas y se superponen a la curva nativa Es posible modificar la integraci n autom tica de las fracciones realizando una integraci n manual Para ello suprima la integraci n fracci n a fracci n y o integre manualmente una o varias fracciones NOTA Al analizar el Control CDT Normal identificado por su etiqueta con c digo de barras aparecer un s mbolo de alerta violeta en caso de que la densidad ptica DO sea insuficiente Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP Ill FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IMPORTANTE Compruebe si hay cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP correspondiente en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico MINICAP permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de reactivos La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un
15. bar la determinaci n de la CDT No analice muestras que contengan EDTA o citrato La deformaci n del perfil electrofor tico hace imposible la cuantificaci n de la CDT PROCEDIMIENTO El sistema MINICAP es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las isoformas de la transferrina en 2 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de los tubos primarios hasta 26 del diluyente de muestras y del carrusel diluci n de las muestras en las cubetas de reactivo desechables a partir de los tubos primarios lavado de los capilares inyecci n de las muestras diluidas separaci n y detecci n directa de las prote nas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes colocaci n de los tubos primarios destapados en el carrusel en las posiciones 1 a 26 colocaci n del tubo del diluyente de muestras en la posici n 27 del carrusel introducci n del carrusel cargado en el sistema MINICAP recuperaci n de los tubos despu s del an lisis recuperaci n y cierre de las cajas para cubetas usadas LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el MINICAP y el ordenador de control 2 Para la inicializaci n del aparato coloque al menos una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas de reactiv
16. cajas que contengan cubetas de reactivo usadas ya que pueden contener muestras biol gicas 8 ETIQUETAS CON C DIGOS DE BARRAS PARA EL DILUYENTE DE MUESTRAS Uso Etiquetas destinadas a identificar el tubo del diluyente de muestras con el texto CDT SAMPLE DILUENT 9 ETIQUETAS CON C DIGOS DE BARRAS PARA LA SOLUCI N DE LAVADO CDT Uso Etiquetas destinadas a identificar el tubo de la soluci n de lavado CDT con el texto CDT WASH SOLUTION REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 CONTROL CDT NORMAL IMPORTANTE El Diluyente del Control CDT SEBIA 1 vial de 5 mL es necesario para reconstituir el Control CDT Normal Composici n El Control CDT Normal SEBIA referencia n 4795 se obtiene a partir de una mezcla de sueros humanos normales Un procedimiento de estabilizaci n permite conservar el Control CDT Normal en forma liofilizada El Diluyente del Control CDT necesario para reconstituir el Control CDT Normal est listo para usar Contiene aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Aplicaci n El Control CDT Normal est destinado a la normalizaci n de los capilares antes de realizar por primera vez en el instrumento MINICAP la t cnica para la determinaci n de las isoformas de la transferrina humana mediante la t cnica electrofor tica MINICAP CDT Tambi n debe ser usado tras una parada prolongada del instrumento m s de una se
17. carrusel posiciones 1 a 26 destapando cada tubo y de forma que el c digo de barras de cada tubo quede orientado hacia la ventana de lectura del mismo IMPORTANTE Si el n mero de tubos que va a analizar es impar a ada un tubo con agua destilada o desionizada Dispense el diluyente de muestras en un tubo de hem lisis identificado con la etiqueta con el c digo de barras del diluyente de muestras sin que se formen burbujas de aire a raz n de 0 5 mL para el an lisis de 1 6 2 muestras o de 1 mL para el an lisis de 8 muestras Ponga el tubo en la posici n 27 del carrusel del aparato autom tico posici n Diluyente Soluci n IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de diluyente antes de colocarlo en el carrusel IMPORTANTE En caso de ausencia de tubos en las posiciones 1 a 26 muestras y 27 diluyente de muestras el an lisis no puede comenzar y aparece un mensaje de advertencia 9 Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP 10 Cierre las puertas del MINICAP tras lo cual el an lisis comenzar autom ticamente 11 Despu s del an lisis saque el carrusel para extraer los tubos ya analizados 12 Si es necesario quite con precauci n la caja que contiene las cubetas de reactivo usadas ci rrela herm ticamente usando una de las tapas suministradas y des chela ATENCI N Manipule con precauci n las cajas que contengan las cubetas de reactivo usadas ya que pueden contener muestras biol gicas
18. con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n usado de pH alcalino el orden de migraci n de las isoformas de la transferrina es el siguiente asialotransferrina disialotransferrina trisialotransferrina tetrasialotransferrina y pentasialotransferrina REACTIVOS SUMINISTRADOS EN EL KIT MINICAP CDT ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad COMPONENTES REF N 2208 Tamp n listo para usar 2 viales de 250 mL Diluyente de muestras listo para usar 1 vial de 75 mL Soluci n de lavado soluci n concentrada 1 vial de 25 mL Soluci n de lavado CDT lista para usar 1 vial de 75 mL Cubetas desechables 1 bolsa de 125 Filtros 3 filtros Cajas para cubetas usadas 4 cajas Etiquetas c digo de barras Diluyente de muestras 5 l minas con 4 etiquetas Etiquetas c digo de barras Soluci n de lavado CDT 5 l minas con 4 etiquetas PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente y seg n las instrucciones suministradas LEA DETENIDAMENTE LAS INSTRUCCIOES DE USO ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n 1 TAMP N Preparaci n El tamp n est listo para usar Contiene tamp n pH 8 8 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usada
19. cte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA CARACTER STICAS T CNICAS Los resultados siguientes obtenidos con el kit MINICAP CDT en el sistema MINICAP mediante an lisis cuantitativo indican una muy buena repetibilidad y reproducibilidad de la t cnica MINICAP CDT en todos los aspectos probados con un coeficiente de variaci n medio del orden del 4 3 en los porcentajes de la CDT Los porcentajes de la CDT han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 2 e integraci n autom tica Repetibilidad intraserial e interan lisis Se han analizado cinco 5 sueros diferentes sueros normales A y E y sueros patol gicos B C y F con CDT aumentada en paralelo en tres sistemas MINICAP y con 2 lotes diferentes de kits MINICAP CDT Cada suero ha sido analizado 5 veces simult neamente en los 2 capilares de cada sistema MINICAP Se han calculado las medias desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV n 10 de cada muestra y cada sistema MINICAP La tabla siguiente presenta los valores medios en desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV obtenidos para la CDT de los 5 sueros analizados en los 3 sistemas MINICAP NOTA
20. de 15 a 30 C en un contenedor cerrado para evitar la evaporaci n Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial NO LA CONGELE NOTA La soluci n de lavado puede volverse turbia o precipitar a temperatura ambiente Se redisuelve f cilmente a 37 C Homogen cela mediante agitaci n suave antes de usarla Deseche la soluci n de lavado si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado o a part culas en suspensi n 4 2 Para la limpieza diaria de la c nula de muestras y de los capilares con las versiones 7 42 Preparaci n El vial de soluci n de lavado CAPILLARYS MINICAP CDT est listo para usar Contiene aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza DIARIA de la c nula de muestras y de los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA que debe realizarse al final de cada sesi n de trabajo y obligatoriamente antes de usar otra t cnica de an lisis en el MINICAP Vea el manual de instrucciones del MINICAP SEBIA Dispense 1 mL de soluci n de lavado CAPILLARYS MINICAP CDT en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte e identificado con la etiqueta con el c digo de barras espec fico de la soluci n de lavado CDT en el carrusel del MINICAP a continuaci n d
21. e las muestras ya analizadas Ponga una cubeta de reactivo desechable nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia 51 MINICAP CDT 2012 06 Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP y el ciclo de limpieza comenzar autom ticamente IMPORTANTE Para un uso ptimo de la soluci n de lavado CDT en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de lavado debe conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C en un contenedor cerrado para evitar la evaporaci n Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial NO LA CONGELE NOTA La soluci n de lavado puede volverse turbia o precipitar a temperatura ambiente Se redisuelve f cilmente a 37 C Homogen cela mediante agitaci n suave antes de usarla Deseche la soluci n de lavado si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado o a part culas en suspensi n 5 CUBETAS DE REACTIVO DESECHABLES Uso Cubetas de un solo uso para la diluci n y la migraci n de las muestras de suero en el aparato autom tico Deben colocarse en el ca
22. el n mero de an lisis del Control CDT Normal que quiera realizar y valide NOTA Un solo an lisis del Control CDT Normal permite normalizar los 2 capilares del sistema MINICAP Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados Los valores obtenidos deben estar comprendidos entre los valores espec ficos de cada lote IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control CDT Normal es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contiene el Control CDT corte el tap n del microtubo antes de usarlo Control de calidad El Control CDT Normal debe ser usado como un suero humano normal Despu s de la reconstituci n use directamente el Control CDT Normal como una muestra de suero a analizar en la posici n 28 del carrusel vea el p rrafo anterior Ser tratado autom ticamente con el diluyente de muestras Se recomienda incluir el Control CDT Normal en cada serie de an lisis Los valores obtenidos deben estar comprendidos entre los valores espec ficos de cada lote IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control CDT Normal colocado en una posici n cualquiera del carrusel posiciones 1 a 26 es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contenga el Control CDT corte el tap n del micro
23. funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de los rayos solares y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de los cidos y del amoniaco 5 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n Cada vial de soluci n de lavado concentrada CAPILLARYS MINICAP SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Para el MINICAP se recomienda diluir s lo 25 mL de la soluci n concentrada hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares del MINICAP IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar el cuello del contenedor el conector y el tubo con agua en abundancia para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del
24. han calculado las medias desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV n 10 de la CDT de cada muestra y cada sistema MINICAP La tabla siguiente presenta los l mites de los valores medios SD y CV obtenidos para la CDT de las 6 muestras analizadas en los 3 sistemas con los 2 lotes de kits y un coeficiente de variaci n medio calculado a partir de todos los coeficientes de variaci n n 15 MEDIA SD CV CV MEDIO CDT 0 5 7 7 0 00 0 28 0 0 10 1 4 0 Reproducibilidad intersistemas e interlotes Se han analizado seis 6 muestras de suero diferentes id nticas a las del estudio de reproducibilidad interan lisis con la t cnica MINICAP CDT 10 veces sucesivamente en 3 sistemas MINICAP y con 2 lotes diferentes de kits MINICAP CDT Se han calculado las medias desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV n 30 de la CDT de cada muestra y del conjunto de los 3 sistemas MINICAP La tabla siguiente presenta los l mites de los valores medios SD y CV obtenidos para la CDT de las 6 muestras analizadas en los 3 sistemas con los 2 lotes de kits y un coeficiente de variaci n medio calculado a partir de todos los coeficientes de variaci n n 6 NOTA No se ha detectado ninguna discordancia en ninguna de las muestras analizadas para el estudio de la reproducibilidad interan lisis intersistemas e interlotes Muestras con valores normales de CDT todos los va
25. iles electrofor ticos En este caso generalmente se observa una disminuci n de la transferrina asociada a un aumento de la fracci n trisialotransferrina IMPORTANTE Es necesario analizar los datos cl nicos del paciente como informaci n complementaria Teniendo en cuenta la variabilidad de las interferencias no se puede dar ninguna garant a en cuanto a la eficacia total de la soluci n de tratamiento de las muestras para la cuantificaci n de la CDT Si el an lisis revela una variante de la CDT es importante comprobar lo siguiente si la muestra ha sido conservada a temperatura ambiente y durante cu nto tiempo si la concentraci n de C3 est aumentada y cu l es la concentraci n de la transferrina Cuando la concentraci n de C3 est aumentada y si la muestra ha sido conservada varios d as a temperatura ambiente el pico de C3 degradado C3d aumenta y puede alcanzar una densidad ptica DO similar a la de un pico de tetrasialotransferrina 4 sialo En caso de que la concentraci n de transferrina sea baja como consecuencia de una alteraci n hep tica el pico de tetrasialotransferrina 4 sialo puede disminuir de forma significativa PE y MINICAP CDT 2012 06 La combinaci n de estos par metros puede conducir a la obtenci n de un perfil de tipo variante En este caso se recomienda repetir el an lisis con un suero fresco o con un suero conservado a 2 8 C o congelado Resoluci n de problemas Conta
26. isis de la CDT pueden por tanto ser clasificados de la manera siguiente CDT lt 1 3 resultado normal CDT gt 1 3 y lt 1 6 resultado no concluyente CDT gt 1 6 resultado patol gico Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores nornales NOTA Los valores han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 2 e integraci n autom tica de las isoformas de la transferrina con el modo CDT Interpretaci n Las muestras cuyo valor de CDT es gt al 1 6 se consideran positivas y debidas a un consumo cr nico de alcohol ATENCI N La graduaci n del eje de abscisas no puede en ning n caso permitir la identificaci n de una fracci n no identificada autom ticamente por el programa Interpretaci n En ausencia de factores interferentes las muestras cuyo valor de CDT es gt a 1 3 se consideran positivas debido a un consumo cr nico de alcohol En caso de que el porcentaje de CDT de las muestras est comprendido entre 1 3 y 1 6 se recomienda realizar un nuevo an lisis con suero fresco 3 6 4 semanas despu s ATENCI N La graduaci n del eje de abscisas no puede en ning n caso permitir la identificaci n de una fracci n no identificada autom ticamente por el programa Interferencias y limitaciones Los factores enumerados debajo pueden interferir en el an lisis de las isoformas de la transferrina y perturbar o impedir la medida de la CDT Se recomiend
27. ison of serum carbohydrate deficient transferrin with other biological markers of excessive drinking Scand J Clin Lab Invest 48 1 6 1988 7 Hackler R et al Investigation by isoelectric focusing of the initial carbohydrate deficient transferrin CDT and non CDT transferrin isoform fractionation step involved in determination of CDT by the ChronAlcol D Assay Clin Chem 46 4 483 492 2000 8 Huseby NE Nilssen O Erfurth A Wetterling T Kanitz RD Carbohydrate deficient transferrin and alcohol intake dependency Variations in response to alcohol intake among different groups of patients Alcohol Clin Exp Res 21 2 201 205 1997 9 Landers JP Clinical Capillary Electrophoresis Clin Chem 41 495 509 1995 10 Lesch OM et al Alcohol dependance is carbohydrate deficient transferrin a marker for alcohol intake Alcohol Alcohol 31 257 264 1996 11 Lesch OM et al Carbohydrate deficient transferrin as a screening marker for drinking in a general hospital population Alcohol Alcohol 31 249 256 1996 12 Oda RP et al Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids Electrophoresis 18 1715 1723 1997 13 Oslin DW Pettinati HM Luck G Semwanga A Cnaan A O Brien C Clinical correlation with carbohydrate deficient transferrin levels in women with alcoholism Alcohol Clin Exp Res 22 9 1981 1985 1998 14 Schellenberg F B nard J
28. lores son normales Muestras con valores aumentados de CDT todos los valores est n aumentados 58 MINICAP CDT 2012 06 MEDIA SD CV CV MEDIO CDT 0 5 7 6 0 04 0 22 2 9 9 8 5 9 Exactitud Se han analizado sesenta y ocho 68 muestras de suero que presentan valores de CDT normales o elevados en paralelo con la t cnica MINICAP CDT y con un sistema comercial de cuantificaci n de la CDT mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas con para la cuantificaci n de la CDT una sensibilidad del 100 0 y una especificidad del 100 0 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de CDT ha sido determinada usando herramientas estad si icas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP CDT se muestran en la tabla siguiente os E L mites de los valores en Coeficiente de correlaci n Punto de corte en y Pendiente CDT MINICAP CDT CDT 0 997 0 052 1 002 0 4 13 5 Linealidad Los an lisis de 2 mezclas con proporciones variables de 2 muestras de suero diferentes mezcla n 1 de muestras con un 0 3 y un 14 8 de CDT y mezcla n 2 de muestras con un 0 5 y un 16 3 de CDT han mostrad
29. mana o despu s de un cambio y activaci n de capilares Reconstituya con precisi n cada vial liofilizado de Control CDT Normal con el volumen de Diluyente del Control CDT indicado en las instrucciones del Control CDT Normal Deje reposar durante 30 minutos y agite suavemente evite la formaci n de espuma El Control CDT Normal reconstituido debe usarse como un suero humano normal Dispense el Control CDT Normal reconstituido en un microtubo Corte el tap n de ese microtubo 52 MINICAP CDT 2012 06 Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte e identificado con la etiqueta con el c digo de barras del Control CDT Normal en la posici n 28 de un carrusel de MINICAP prevista a este efecto posici n Control Dispense 1 mL de diluyente de muestras CAPILLARYS MINICAP CDT en un tubo de hem lisis identificado con la etiqueta con el c digo de barras del diluyente de muestras sin que se formen burbujas de aire y coloque este tubo en la posici n 27 del carrusel posici n Diluyente Soluci n en caso de ausencia de tubo o de diluyente de muestras aparecer un mensaje de advertencia IMPORTANTE Compruebe la ausencia de espuma en el tubo de diluyente antes de colocarlo en el carrusel Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP tras lo cual el an lisis comenzar autom ticamente Seleccione en la ventana que aparecer en pantalla
30. ne aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza DIARIA de la c nula de muestras del aparato para electroforesis capilar MINICAP SEBIA que debe realizarse al final de cada sesi n de trabajo o antes de usar otra t cnica de an lisis MINICAP Vea el manual de instrucciones del MINICAP SEBIA Dispense 500 LL de soluci n de lavado CAPILLARYS MINICAP CDT en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte e identificado con la etiqueta con el c digo de barras espec fico de la soluci n de lavado CDT en el carrusel del MINICAP a continuaci n de las muestras ya analizadas Ponga una cubeta de reactivo desechable nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP y el ciclo de limpieza comenzar autom ticamente IMPORTANTE Para un uso ptimo de la soluci n de lavado CDT en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de lavado debe conservarse a temperatura ambiente
31. nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n 56 MINICAP CDT 2012 06 IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP CONTROL DE CALIDAD Se recomienda incluir un suero normal Control CDT Normal SEBIA referencia n 4795 en cada serie de an lisis RESULTADOS Valores La detecci n directa en los capilares a 200 nm proporciona los porcentajes relativos de cada isoforma de la transferrina Un estudio reciente realizado con una poblaci n de 225 individuos control ha establecido que el l mite superior de los valores de referencia de la CDT es del 1 3 F Schellenberg JPM Wielders 2010 El umbral de decisi n basado en el l mite superior de los valores de referencia al que se le ha a adido la incertidumbre de la medida ha sido establecido en el 1 6 Este valor de corte ha sido confirmado por un segundo estudio interno realizado con 104 muestras Los resultados del an l
32. o aparecer un mensaje de advertencia 3 Abra el programa de gesti n Phoresis y valide el nivel de reactivos y desechos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 55 MINICAP CDT 2012 06 4 Use el kit MINICAP CDT con el programa de an lisis CDT Para seleccionar el programa de an lisis CDT y conectar el contenedor de tamp n MINICAP CDT en la posici n B2 del aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del MINICAP y siga las instrucciones que aparecer n en pantalla IMPORTANTE Siempre hay que asociar e identificar el tap n conector el tubo que cuelga del tap n y el filtro al tamp n usado Si este procedimiento no se realiza el tamp n de migraci n puede contaminarse con otro tamp n que se haya usado anteriormente lo que puede producir artefactos en la migraci n que alterar n el an lisis 5 Ponga cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP correspondiente en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia 6 Ponga una caja para cubetas usadas nueva en el MINICAP en el lugar previsto a este efecto 7 Compruebe el nivel de llenado de los diferentes contenedores de reactivo complete los vol menes si es necesario y vac e el contenedor de desechos En la ventana Verificar el nivel de los contenedores actualice los niveles de los reactivos mediante los cursores 8 El carrusel tiene 28 posiciones para tubos Ponga hasta 26 tubos primarios en el
33. o que el porcentaje de la CDT est perfeci proporci n de cada suero en la mezcla y que cualquier variaci n de la CDT se detecta de forma lineal con la t cnica amente correlacionado con la MINICAP CDT La t cnica MINICAP CDT es por tanto perfectamente lineal en el intervalo de concentraciones de CDT estudiado entre un 0 3 y un 16 3 en el conjunto de las muestras analizadas 59 MINICAP CDT 2012 06 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY 1 Anton RF Carbohydrate deficient transferrin for detection and monitoring of sustained heavy drinking What have we learned Where do we go from here Alcohol 25 185 188 2001 2 Anton RF Moah DH Carbohydrate deficient transferrin and gamma glutamyltransferase as markers of heavy alcohol consumption gender differences Alcohol Clin Exp Res 18 3 747 754 1994 3 Arndt T Carbohydrate deficient transferrin as a marker of chronic alcohol abuse A critical review of preanalysis analysis and interpretation Clin Chem 47 1 13 27 2001 4 Behrens U Womer T Braly L Schaffner F Lieber C Carbohydrate deficient transferrin CDT a marker for chronic alcohol consumption in different ethnic population Alcohol Clin Exp Res 12 427 432 1988 5 Conigrave K et al CDT GGT and AST as markers of alcohol use The WHO ISBRA Collaborative Project Alcol Clin Exp Res 26 3 332 339 2002 6 Gjerde H Johnsen J Bj rneboe A Bj rneboe GE Morland J A compar
34. rgador del MINICAP Una cubeta est destinada al an lisis de 2 muestras ATENCI N Manipule con precauci n las cubetas de reactivo que contengan muestras biol gicas 6 FILTROS Uso Filtros de un solo uso para el filtrado del tamp n de la soluci n de lavado reconstituida y del agua destilada o desionizada usada para la limpieza de los capilares IMPORTANTE Cambie sistem ticamente los tres filtros al empezar un kit nuevo Enrosque un filtro al final del tubo que cuelga de los tapones de los contenedores de tamp n de soluci n de lavado y de agua destilada o desionizada Al cambiar los filtros lave los conectores y los tubos con agua destilada o desionizada Los filtros usados tambi n deben lavarse con agua antes de desecharlos El filtro destinado al tamp n de an lisis debe usarse para la filtraci n de la totalidad de los dos contenedores de tamp n listo para usar los otros dos filtros est n destinados a la filtraci n de la soluci n de lavado reconstituida y del agua destilada o desionizada soluci n de limpieza Conservaci n Antes de usarlos los filtros deben conservarse en su embalaje original herm ticamente cerrado en un lugar seco y a temperatura ambiente o en nevera 7 CAJAS PARA CUBETAS USADAS Uso Cajas destinadas a la recuperaci n autom tica de las cubetas de reactivo usadas en el MINICAP Deben colocarse en el MINICAP en el emplazamiento previsto a tal efecto ATENCI N Manipule con precauci n las
35. rrin block A i I Pentasialotransferrin gt 5 gt Disialotransferri Tetrasialotransferrin PAET gt Trisialotransferrin 227
36. s necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Tamp n para el an lisis de las isoformas de la transferrina mediante electroforesis capilar Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El tamp n debe conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C o en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de tamp n No almacene el tamp n cerca de una ventana o de una fuente de calor NOTA Si el tamp n de an lisis ha sido conservado a 2 8 C conviene dejar que alcance la temperatura ambiente antes de usarlo NO LO CONGELE Deseche el tamp n si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana precipitados o part culas en suspensi n 50 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol MINICAP CDT 2012 06 2 DILUYENTE DE MUESTRAS Preparaci n El diluyente de muestras est listo para usar Contiene aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la diluci n autom tica de las muestras de suero Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El diluyente de muestras debe conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial NOTA El diluyente de muestras puede volverse turbio o precipitar a temperatura ambiente Se redisuelve f cilmente a 37 C Homogen celo mediante agitaci n suave antes de usarlo
37. tamiento de muestras si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana o a part culas en suspensi n NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 ym y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar MINICAP SEBIA referencia n 1230 MINICAP FLEX PIERCING SEBIA referencia n 1232 2 Carrusel suministrado con el sistema MINICAP 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema MINICAP contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada y contenedor de desechos 4 Cubetas de reactivo desechables MINICAP SEBIA 250 unidades referencia n 2280 Tapas para cubetas desechables de MINICAP usadas 12 ud referencia n 2286 tapas destinadas a cerrar las cajas para cubetas usadas 6 Tubos de hem lisis di metro de 8 a 16 mm y altura de 50 a 100 mm a 54 MINICAP CDT 2012 06 Para el tratamiento de las muestras si es necesario Microtubo de 1 5 mL Tubo de hem lisis de 75 mm de al
38. tubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Vea las instrucciones de uso del Control CDT Normal Como ninguna prueba de an lisis puede probar la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Control CDT Normal debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Este suero de control analizado usando las t cnicas aceptadas por las autoridades competentes FDA ANSM es negativo para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 2 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para la limpieza de los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um Renueve el agua cada dia para evitar contaminaciones microbianas En caso de conservaci n prolongada a ada al agua 350 pL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 3 CAPICLEAN Presentaci n El vial de la soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteoliticos surfactantes y aditivos inocuos a las concentraciones
39. tura y 13 mm de di metro Centr fuga 3000 5000 rpm MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis debe hacerse con sueros frescos Los sueros deben obtenerse seg n los procedimientos establecidos en el laboratorio de an lisis cl nicos Las muestras no deben ser conservadas a temperatura ambiente Pueden conservarse un m ximo de 10 d as en nevera entre 2 y 8 C NOTA Durante su transporte las muestras pueden permanecer a temperatura ambiente durante un m ximo de 48 horas Sin embargo es muy recomendable transportarlas a 2 8 C Para conservaciones prolongadas congele las muestras r pidamente como m ximo durante las 8 horas siguientes a su obtenci n Los sueros congelados son estables 1 mes Las prote nas de las muestras conservadas entre 2 y 8 C se degradan en particular el complemento C3 Se observa entonces la aparici n de un pico suplementario de C3d en el perfil de las isoformas de la transferrina Este pico es visible despu s de la forma pentasialotransferrina y no interfiere con las diferentes isotormas de la transferrina separadas mediante electroforesis Su intensidad aumenta al envejecer el suero Preparaci n de las muestras Use directamente muestras de suero sin diluir Despu s de conservarlos en nevera entre 2 y 8 C o congelarlos algunos sueros especialmente aquellos que contienen una crioglobulina o un criogel se vuelven viscosos o turbios Una vez que hayan
40. uci n diluida en nevera Debe usarse el mismo d a 4 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a 53 MINICAP CDT 2012 06 Uso Para limpiar la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Vea el manual de instrucciones del MINICAP SEBIA Dispense 500 pL de soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte identificado con una etiqueta con el c digo de barras espec fico de la soluci n de hipoclorito de sodio en el carrusel del MINICAP Compruebe si hay bastantes cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparece un mensaje de advertencia Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP y el ciclo de limpieza comenzar autom ticamente IMPORTANTE Para un uso ptimo de la soluci n de hipoclorito de sodio en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya
41. vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 6 SOLUCI N DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS CAPILLARYS MINICAP CDT Preparaci n La soluci n de tratamiento de muestras CAPILLARYS MINICAP CDT SEBIA referencia n 2054 vial de 50 mL est lista para usar Contiene aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para su funcionamiento ptimo Uso Para el tratamiento si es necesario de muestras que presenten alguna de las interferencias mostradas e el apartado Perfiles electrofor ticos La soluci n de tratamiento de las muestras tiene una acci n precipitante sobre algunas inmunoglobulinas que pueden perturbar el perfil electrofor tico NOTA La soluci n de tratamiento de muestras act a especialmente en las interferencias siguientes aparici n de uno o m s picos finos suplementarios en el perfil o de una fracci n ancha antes de la fracci n disialotransferrina desplazamiento del perfil que no permite la cuantificaci n de la CDT Vea el p rrafo Preparaci n de las muestras para la utilizaci n de la soluci n de tratamiento Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de tratamiento de muestras debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja o en la etiqueta del vial NO LA CONGELE Deseche la soluci n de tra
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