MANUAL DE INSTRUCCIONES
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1. Wiii MANUAL DE INSTRUCCIONES REDIAR REDIAR Slide amp Tube Anti D blend Suero Hemoagrupador Monoclonal Humano IgM IgG Para uso diagn stico in vitro INTRODUCCI N Descripto por primera vez en 1939 el ant geno RhD solamente es superado en importancia por los ant genos del grupo ABO La transfusi n de sangre RhD positiva a un receptor RhD negativo o la omisi n de administrar anti D profil ctico a una madre RhD negativa puede resultar en una producci n de anti D Por lo tanto determinar el grupo Rh correcto es fundamental para una pr ctica transfusional segura Ciertos individuos presentan una disminuci n cuantitativa en la expresi n de su ant geno RhD siendo clasificados como D d biles o weak Du Otros presentan una variaci n cualitativa en la expresi n de su ant geno RhD siendo conocidos como D parcial Los individuos D d bil tambi n pueden ser D parcial La reciente disponibilidad de reactivos anti D monoclonales IgM potentes y de alta calidad y junto con la gran importancia adquirida cl nicamente por los fenotipos D parciales especialmente por los DVI ha dado como resultado un cambio en las pol ticas de pruebas para grupo RhD que hasta el momento reg an Las Normas T cnicas y Administrativas de Hemoterapia de la Republica Argentina recomiendan los siguientes procedimientos para pruebas del grupo RhD Para pruebas de grupo RhD en pacientes y embarazadas se deben utilizar reactivos anti D que no dete2. geno RhD d bil y o RhDVI Tubos de ensayo Incubador a 37 C Reactivo Anti globulina Humana Centr fuga Soluci n Salina Isot nica Cron metro Pipeta Pasteur e Micropipeta Tips Gl bulos rojos sensibilizados IgG Control de Coombs T CNICAS RECOMENDADAS T cnica en L mina Colocar una gota del reactivo anti D en una l mina de vidrio limpia A 1 cm de distancia colocar una gota de sangre entera o una gota de suspensi n globular al 35 50 en soluci n salina isot nica Mezclar la muestra y el reactivo empleando una varilla en un rea de 2 cm de di metro Balancear la l mina sobre una fuente de luz difusa y observar macrosc picamente si existe aglutinaci n La aglutinaci n en la mayor a de las muestras ocurre dentro de unos pocos segundos Interpretar los resultados al cabo de 2 minutos T cnica en Tubo Preparar una suspensi n globular al 3 5 en soluci n salina isot nica Colocar una gota del reactivo anti D en tubos limpios previamente identificados Agregar una gota de suspensi n globular Mezclar mediante una suave agitaci n e Centrifugar a 1000 g durante 20 segundos o a otra combinaci n adecuada de g y tiempo Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el bot n celular y observar macrosc picamente si existe aglutinaci n Los resultados deben ser le dos inmediatamente Los tubos con reacciones negativas o positivas d biles pueden ser incubados du
3. N DE LAS MUESTRAS No se requiere una preparaci n especial del paciente donante antes de la recolecci n de la muestra de sangre Las muestras deben ser obtenidas por una t cnica as ptica recogida en un tubo con anticoagulante EDTA heparina o citrato y conservada entre 2 8 C por un plazo no mayor a 7 d as Los mejores resultados se obtienen al procesar muestras frescas Las muestras de sangre que presenten contaminaci n o hem lisis grosera no deber an ser utilizadas Las muestras obtenidas de unidades de donaci n de sangre podr n ser ensayadas hasta la fecha de vencimiento de dicha unidad PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO INFORMACI N GENERAL Este reactivo ha sido estandarizado para el uso mediante las t cnicas recomendadas descriptas a continuaci n por lo tanto su desempe o en el uso mediante otras t cnicas no puede ser garantizado Se recomienda especialmente al usuario confirmar si este reactivo es adecuado antes de utilizarlo en t cnicas alternativas Materiales y reactivos requeridos no provistos T cnica en L mina e Soluci n Salina Isot nica e L minas de vidrio e Cron metro Materiales y reactivos requeridos no provistos T cnica en Tubo e Tubos de ensayo e Centr fuga e Soluci n Salina Isot nica e Cron metro Pipeta Pasteur Incubador a 37 C e Micropipeta e Tips Materiales y reactivos requeridos no provistos T cnica en Tubo Prueba Anti globul nica Indirecta para la detecci n del ant
4. S DE ALMACENAMIENTO Este reactivo debe ser conservado entre 2 8 C No debe utilizarse si se observa turbidez y no debe diluirse No utilizar m s all de su fecha de vencimiento El almacenamiento del producto a temperaturas incorrectas por ejemplo almacenar a altas temperaturas o congelaciones y descongelaciones repetidas pueden llevar a la p rdida acelerada de la actividad del reactivo PRECAUCIONES DE USO Y DESCARTE Los donantes humanos de las c lulas empleadas para producir los hibridomas han sido ensayados y encontrados no reactivos para Anti HIV Anti HCV HBsAg EBV y MAP Ning n m todo conocido puede garantizar que todos los productos derivados de sangre humana est n libres de agentes infecciosos Se debe tener cuidado en el uso y descarte del envase y su contenido Este reactivo contiene 0 1 w v de azida s dica La azida s dica puede ser t xica si se ingiere y puede reaccionar con las ca er as de plomo y cobre para formar sales altamente explosivas Si se descarta por el desagote enjuagar con grandes vol menes de agua para prevenir la acumulaci n de azidas en las ca er as Este reactivo es para uso profesional in vitro solamente Este reactivo contiene material bovino obtenido de fuentes aprobadas por la USDA libre de Encefalopat a Espongiforme Transmisible TSEs Este producto debe ser descartado por inmersi n en desinfectantes overnight a una concentraci n adecuada o por autoclavado RECOLECCI N Y PREPARACI
5. categor as Si se utiliza sangre entera con bajo hematocrito se recomienda ajustar la concentraci n de gl bulos rojos 35 50 antes de realizar la prueba en l mina La t cnica en l mina no es recomendada para la detecci n de D d biles o D parciales No es indispensable utilizar un reactivo control paralelo a los ensayos usando este reactivo Se recomienda el uso de un reactivo control durante el agrupamiento de gl bulos rojos de pacientes que posean autoanticuerpos gl bulos rojos que poseen una prueba anti globul nica positiva niveles anormales de prote nas y gl bulos rojos de cord n En la t cnica en tubo se debe tener cuidado cuando se resuspende el bot n celular ya que una agitaci n excesiva puede disgregar las aglutinaciones d biles y producir resultados falso negativos Es importante emplear la fuerza G y tiempo recomendados durante la centrifugaci n ya que una excesiva centrifugaci n puede conducir a dificultades para resuspender el bot n celular mientras que una centrifugaci n insuficiente puede resultar en aglutinaciones que se disgregan con demasiada facilidad La expresi n de algunos ant genos eritrocitarios puede disminuir en intensidad durante el almacenamiento especialmente en aquellas muestras coaguladas o anticoaguladas con EDTA Los mejores resultados se obtienen cuando se ensayan muestras frescas Pueden obtenerse resultados falso negativos o falso positivos debido a la contaminaci n de los materiales emp
6. cten parcialidad DVI por la t cnica recomendada Para pruebas de grupo RhD en donantes se deben utilizar reactivos anti D que permitan evidenciar aquellos donantes que expresan D d bil o D parcial de importancia cl nica como por ejemplo DVI para que sean clasificados como RhD positivos USO AL CUAL EST DESTINADO REDIAR Slide amp Tube Anti D blend est destinado a la detecci n del ant geno RhD en la superficie de los gl bulos rojos humanos por aglutinaci n directa mediante las t cnicas en l mina y tubo salvo la parcialidad DVI y algunas variantes D d biles que son detectadas mediante la Prueba Anti globul nica Indirecta Este reactivo detecta la mayor a de las muestras de gl bulos rojos D d biles y D parciales incluyendo la categor a DVI Estos reactivos han sido dise ados para ser utilizados por personal entrenado en t cnicas serol gicas en inmunohematolog a REACTIVO El componente principal de este reactivo se obtiene del cultivo in vitro de hibridomas humanos secretores de anticuerpos lgM IgG contra el ant geno RhD Nombre del producto L nea s celular es REDIAR Slide amp Tube Anti D blend TH 28 MS 26 Este reactivo est formulado con anticuerpos monoclonales humanos tipo IgM e IgG en una soluci n buffer que contiene potenciadores qu micos la formulaci n incluye adem s azida de sodio 0 1 w v y material bovino Este producto se provee esterilizado por filtraci n a 0 22 um CONDICIONE
7. leados en la prueba temperatura incorrecta de incubaci n almacenamiento inadecuado de los materiales omisi n del reactivo de prueba o cualquier desviaci n de la t cnica recomendada S MBOLOS ha Establecimiento Elaborador CE Consultar el Manual de Instrucciones S Fecha de Vencimiento IVD Producto para diagn stico de uso in vitro eS El Almacenar entre 2 8 C LOT N mero de Lote BIBLIOGRAF A 1 Widmann F K ed Technical Manual 10th Ed Washington DC American Association of Blood Banks 1990 Chapter 11 2 Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United Kingdom 5th Edition 2001 The Stationary Box 3 Race RR and Sanger R Blood groups in man 6th edition Oxford Blackwell Scientific 1975 178 4 Issit P D and Anstee D J Aplied Blood Group Serology 4th Edition Montgomery Scientific Publications Miami Florida USA 1998 PRODUCTO DE DIAGN STICO DE USO IN VITRO AUTORIZADO POR LA ADMINISTRACI N NACIONAL DE MEDICAMENTOS ALIMENTOS Y TECNOLOG A M DICA Certificado N 6229 07 TH ELABORADO POR FELSAN S R L Palpa 3811 C1427EBG C A B A Argentina Director T cnico Roque Luis Espinosa FELSAN Consultas T cnicas 4554 7990 8557 Mail laboratorioOfelsan com ar REV 01 08
8. rante 5 minutos a 37 C luego centrifugar y volver a leer T cnica en Tubo Prueba Anti globul nica Indirecta para la detecci n del ant geno RhD d bil y o RhDVI Re incubar a 37 C por otros 10 minutos los tubos que no presenten aglutinaci n Lavar las pruebas 3 4 veces con soluci n salina isot nica pH 7 0 0 2 asegurando en el ltimo lavado la eliminaci n de la mayor parte de soluci n salina residual para obtener un bot n celular seco Agregar dos gotas de reactivo anti globulina humana Homogeneizar e Centrifugar a 1000 g por 20 segundos o a otra combinaci n adecuada de g y tiempo Agitar suavemente el tubo a fin de deshacer el bot n celular en el fondo del mismo y observar macrosc picamente si hay aglutinaci n e Para confirmar que los resultados negativos son v lidos agregar gl bulos rojos sensibilizados IgG repetir la centrifugaci n y examinar en busca de aglutinaci n Si no se observa aglutinaci n la prueba es invalida y deber repetirse INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS Si se ha producido una aglutinaci n la reacci n es positiva y el ant geno correspondiente al reactivo utilizado est presente en la membrana de los hemat es analizados Si no ha habido aglutinaci n la reacci n es negativa y el ant geno no est presente en estos hemat es LIMITACIONES Y RECOMENDACIONES La cantidad de ant geno RhD expresada por los individuos D d biles var a considerablemente entre las distintas
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