MALARIA Ag CELISA
Contents
1. Durante os ltimos dez minutos da incuba o preparar o SUBSTRATE Adicionar 50uL de Substrato Cromog nio MASC a 950uL de Tamp o de Substrato MASB misturando bem 1mL por cada tira de 8 po os A solu o mant m se est vel durante 30 minutos 9 Repetir a lavagem Consultar o passo 6 10 Adicionar 100uL de SUBSTRATE preparado no momento e incubar no escuro coberto temperatura ambiente durante 15 minutos 11 Adicionar 50uL da Solu o de Paragem MASS Bater de leve na microplaca para misturar 12 Ler os resultados visualmente ou atrav s de um espectrofotometro a 450nm ou 450nm 620nm ler o branco contra o ar LEITURAS E INTERPRETA O DOS RESULTADOS E DIAGN STICO Visualmente Observar a intensidade da cor nos po os que cont m os controlos e a amostra respectivamente O Controlo Positivo deve aparecer azul antes da paragem da reac o e amarelo ap s a sua paragem Leitura Fotom trica Ler a microplaca a 450nm ou 450nm 620nm utilizando um leitor de ELISA Ler o fbranco contra o ar Para os resultados aparecerem o Controlo Negativo deve apresentar os seguintes valores Valor D O 450nm 450 620nm Controlo Negativo lt 0 2 Cut Off Controlo Negativo DO 0 2 As amostras de sangue negativas devem apresentar leituras das densidades pticas inferiores a 0 2 OD unidades Recomendamos que cada laborat rio analise as suas p2. Execu o do Teste Conduzir os reagentes temperatura ambiente 18 25 C antes de usar Preparar WASH BUFFER ver em Prepara o do Tamp o de Lavagem Retirar o n mero necess rio de tiras MAMW Voltar a selar o inv lucro de alum nio de onde estas foram retiradas asili OC ES Pipetar 100uL da SAMPLE controlo positivo Lero ou um positivo conhecido e do controlo negativo Lc lou IMACD em po os individuais Pipetando em duplicado os controlos positivos e negativos em cada s rie Cobrir e incubar durante uma 1 hora temperatura ambiente 18 C i 25 C em c mara h mida 5 Durante os ltimos 10 minutos do per odo de incuba o preparar o CONJUGATE Adicionar 5uL de Conjugado Enzim tico MAPO a 995uL de diluente do conjugado MACD misturar bem 1 mL por cada tira de 8 po os 6 Lavar os po os de prefer ncia com um lavador autom tico de microplacas ou manualmente da seguinte forma Aspirar os conte dos dos po os Voltar a encher com WASH BUFFER Repetir esta opera o quatro 4 vezes Inverter a placa e bater contra papel absorvente no fim da quarta lavagem NB Segurar bem na placa ao inverter evitando destacar as tiras Adicionar 100uL de CONJUGATE a cada po o Incubar durante uma 1 hora temperatura ambiente em c mara h mida
3. Conserver tous les composants 2 8 C Les dates de p remption sont clairement marqu es sur chaque composant et sur le coffret de la trousse L uverture n lt re pas les dates de p remption MATERIELS REQUIS NON FOURNIS Echantillon sanguin positif pour la malaria micropipettes et embouts eau distill e verrerie propre ou r cipients plastiques pour solutions chambre humide laveur ELISA ou bouteille de ringage Spectrophotom tre plaques ELISA capable de lire 450 nm ou 450 620 nm PRECAUTIONS Produit usage uniquement in vitro Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette Si I amp mballage est abim contactez votre fournisseur local pour un remplacement Ne pas m langer les r actifs de coffrets diff rents Certains r actifs contiennent du Thimerosal comme pr servatif qui est un poison Manipulez ces r actifs avec soin La solution d rr t est corrosive Evitez tout contact avec la peau les yeux ou les membranes muqueuses Ajouter les r actifs en vitant tout risque de contamination crois e des puits Eviter d xposer le substrat la lumi re Les chantillons cliniques et les contr les doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux et jet s selon les proc dures en vigueur Consultez la fiche de s curit du produit notice MSDS pour plus amples informations INSTRUCTIONS D EMPLOI Pr paration du tampon de lavage Si des cristaux apparaissent dans le concentr
4. Nullwert gegen Luft abgleichen INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Visuel Die Farbintensit ten der Kontrollen und Patienten begutachten Die Positivkontrolle sollte erst blau sein und nach Zugabe der Stoppl sung zu Gelb wechseln Photometrisch OD Werte in den Microtittervertiefungen bei 450nm oder 450nm 620nm mit einem geeigneten ELISA MeBger t ablesen Nullwert gegen Luft abgleichen F r valide MeBergebnisse muB die Negativkontrolle wie folgt aussehen O D Value 450nm 450 620nm Negativkontrolle 0 2 Cut Off level OD Negativkontrolle 0 2 Negative Blutproben sollten einen MeBwert OD 0 2 haben Unter Ber cksichtigung der Inter Laborvarianz empfehlen wir jedoch daB jedes Labor einige bekannt negative Blutproben mifit um eine laborinterne Standardisierung des CELISA positiven negativen Cut off i Levels zu erhalten Alle Proben die einen h heren MeBwert als der Cut off haben sollten als P falciparum Antigen positive Proben betrachtet werden Ein positives Ergebnis deutet auf eine aktuelle oder erst k rzlich erfolgte Infektion hin Die Testgenauigkeit hat gezeigt dass P falciparum Infektionen bei Parasitaemien mit einer Empfindlichkeit bis zu 0 00196 entdeckt werden Die Intensit t der Farbe ist nicht proportional zu der Menge der Parasitaemien P vivax P ovale und P malariae Infektionen werden mit diesem Test nicht nachgewiesen Es ist zu beachten daB der Test auch noch einige Tage sp ter positiv
5. r chauffer le r actif pour les dissoudre Pour chaque plaque de micropuits ajouter 50mL de concentr PBS Tween MAPT 950mL d au distill e Libeller la bouteille WASH BUFFER Conserver 2 8 C Pr paration des chantillons Collecter I amp chantillon patient par ponction veineuse normal sous anticoagulant Congeler le sang pour produire un lysat et utiliser ce lysat comme sp cimen doser SAMPLE Le s rum ou le plasma peuvent tre utilis s au lieu du sang total mais I mploi de ces chantillons risque de r sulter en une sensibilit amoindrie du dosage Le sang doit tre conserv 10 C si le dosage est retard Contr les positifs et n gatifs Chaque kit est fourni avec le Loro suffisant pour faire fonctionner une plaque de 96 puits Il est fourni propre et peut tre dilu de 1 sur 5 avant d utiliser en tant que contr le Pour construire une courbe standard en s rie diluer double le r 4 utiliser le Lconro en tant que diluant Reportez vous une courbe typique standardis e ci dessous sous la rubrique LECTURE INTERPRETATION DES RESULTATS ET DIAGNOSTIQUE Mode D emploi Ramener tous les r actifs temp rature ambiante 18 25 C avant l mploi Pr parer le WASH BUFFER voir Pr paration du Tampon de Lavage Retirer le nombre requis de micropuits MAMW Imm diatement refermer le sac contenan
6. 0mL MAPOJ Enzyme Conjugate 200x 1x0 12mL 1x0 7mL MACD Conjugate Diluent 1x24mL 1x120mL MAPT PBS Tween 20x 1x125mL 1x 500mL MASC Substrate Chromogen TMB 20x 1x1 2mL 1x7mL MASB Substrate Buffer 1x24mL 1x125mL MASS Stopping Solution 1x12mL 2x30mL Store all components at 2 89 C Expiry dates are clearly marked on each kit component and on the box Expiry dates do not change once opened MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Malaria positive blood samples distilled water micropipettes and tips clean glassware or plastic containers for solutions humid chamber ELISA washer spectrophotometer to read absorbances at a single wavelength of 450nm or at dual wavelengths of 450nm and 620nm PRECAUTIONS For in vitro diagnostic use only Reagents should not be used after the expiry date shown on the label If protective packaging is damaged contact your local distributor and ask for a replacement Do not mix reagents from different kits Thimerosal preservative added to some components is a poison Exercise caution when handling these components The stopping solution is corrosive Avoid contact with skin eyes and mucous membranes Dispense all reagents with care to avoid cross contamination of wells Avoid exposure of the substrate to light Treat all clinical and control material as though potentially infectious and dispose of in accordance with local operating regulations For further information please refer to the Material Safety Da
7. diagnostic conventionnel la goutte paisse Le test est un ELISA en sandwich Les micropuits sont couverts d i anticorps monoclonal de capture anti P falciparum Un second anticorps monoclonal anti P falciparum conjugu la peroxydase fourni dans la trousse est ensuite pr par L tilisateur ajoute une goutte de sang dans le micropuits et si l ntig ne de la malaria falciparum est pr sent il se lie la paroi du micropuits Une tape de lavage permet d liminer tout composant sanguin restant On ajoute alors un anticorps monoclonal de d tection conjugu la peroxydase de raifort Il se lie l ntigene de la malaria falciparum immobilis sur la paroi du micropuits Les puits sont lav s et une solution substrat enzymatique est ajout e au puits et incub e La production de couleur indique la pr sence d ntigene de la malaria falciparum dans I amp chantillon test COMPOSITION DU COFFRET La trousse Malaria Ag CELISA est disponible en 2 formats Standard Recherche IMAMW Plaque CELISA 1x96 puits usage unique 2 plaques 10 plaques coma Contr le positif 1x0 5L 1x1 0mL mai Contr le n gatif 1x2 5mL 1x5 0mL MAPOJ Conjugu enzymatique 200x 1x0 12mL 1x0 7mL MACD Diluant pour conjugu 1x24mL 1x120mL MAPT PBS Tween 20x 1x125mL 1x500mL MASCI Substrat chromog ne TMB 20x 1x 1 2mL 1x7mL MASB Tampon de substrat 1x24mL 1x125mL MASS Solution d rr t 1x 12mL 2x30mL
8. for several days after parasites are no longer detectable in blood films Typical standard curve and equivalent parasite load Cellabs Malaria Ag CELISA Positive Calibrator Expected Curve Per 15 BE liu Neat 110ng 1 2 55n9 1 4 27 509 1 8 13 75ng 1 16 6 8ng 1 32 8 44ng 1 64 1 72ng 1 128 0 86n9 Absorbance 4 N Positive Calibrator Dilution and Respective Parasite Load WASTE DISPOSAL Dispose of any unused components as biohazardous waste For more information please refer to the MSDS SENSITIVITY SPECIFICITY amp OTHER DATA ON THE MALARIA AG CELISA Refer to summary table at end of insert All data on the Malaria Ag CELISA can be obtained in the product information sheet Please ask your local distributor or contact Cellabs INDEMNITY NOTICE Modifications or changes made in the recommended procedure may affect the stated or implied claims A positive or negative result does not preclude the presence of other underlying causative agents Cellabs and its agents and distributors shall not be liable for damages under these circumstances CelLabs MALARIA Ag CELISA PRINCIPE DU TEST ET INDICATIONS D EMPLOI La trousse Malaria Ag CELISA est un test de confirmation de la malaria paludisme falciparum lorsque les m thodes traditionnelles sont peu concluantes en transfusion sanguine ou pour confirmer des cas d nfection de voyageur Ce test n st pas con u pour remplacer le
9. forma visual o con un espectrofot metro a 450nm o 450nm 620nm calibrando el instrumento utilizando como blanco un pocillo vac o LECTURA E INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS Y DIAGNOSTICO Visualmente Observar la intensidad del color de los pocillos de control y de la muestra El control positivo deber a ser azul antes y amarillo despu s de parar la reacci n Por fotometr a Leer la microplaca a 450nm o 450nm 620nm en un lector compatible con placas de ELISA calibrado con un pocillo vac o como blanco Para aceptar los resultados del test el control negativo tiene que mostrar los siguientes valores Valor O D 450nm 450 620nm control negativo 0 2 nivel Cut Off OD control negativo 0 2 Las muestras de sangre negativas deber an dar una densidad ptica por debajo de 0 2 unidades OD Sin embargo para dar un margen a la variaci n entre distintos laboratorios creemos muy aconsejable que cada laboratorio realice el ensayo de una serie de muestras de sangre negativas conocidas que permita la estandarizaci n del valor cut off positivo negativo para el CELISA Todas las muestras con un valor de absorbancia por encima del valor del cut off tienen que considerarse como positivas para el antigeno del P falciparum Un resultado positivo indica la presencia del ant geno del P falciparum Esto sugiere una infecci n actual o muy reciente Se ha demostrado que este ensayo detecta la infecci n por P falciparum en paras
10. il numero richiesto di strisce MAMW Sigillare immediatamente la confezione di strisce dei micropozzetti non utilizzati con nastro adesivo P AUN Pipettare 100uL del SAMPLE controllo positivo Lero o positivo noto e controllo negativo J o IMACD in ciascun pozzetto Includere due positivi e due negativi in ciascuna seduta analitica Coprire ed incubare per un 1 ora a temperature ambiente in camera umida 5 Durante i primi 10 minuti di incubazione preparare la soluzione di lavoro di CONJUGATE Aggiungere 5uL di coniugato concentrato MAPO a 995uL di diluente del coniugato MACD e mescolare con attenzione usare 1mL per strip da 8 pozzetti 6 Lavare pozzetti usando preferibilmente un lavatore automatico di piastre strisce o manualmente come segue Svuotare i pozzetti Riempire con WASH BUFFER Ripetere questa procedura per altre quattro 4 volte Dopo il quinto lavaggio battere la piastra rovesciata su tessuto assorbente Nota fare attenzione durante l perazione a mantenere saldamente il supporto della piastra per tenere le strisce in posizione Aggiungere 100uL di CONJUGATE a ciascun pozzetto Incubare per un 1 ora a temperatura ambiente in camera umida Durante gli ultimi 10 minuti di incubazione preparare la soluzione di lavoro SUBSTRATE Aggiungere 50uL di substrato cromogeno
11. monoklonalen anti P falciparum Malaria Indikator Antik rper hinzu Er bindet jegliche P falciparum Malaria Antigene die sich auf der Oberflache der Vertiefungen befinden AnschlieBend werden die Streifen gewaschen Danach gibt man das Enzymsubstrat zu und inkubiert Eine Farbentwicklung zeigt an dass P falciparum Malaria Antigene in der Probe vorhanden sind PACKUNGSINHALT Der Malaria Ag CELISA ist in 2 verschiedenen Gr Ben erh ltlich Standard Bulk IMAMW Celisa Platte i 1x96 Vertiefungen nur zum einmaligen Gebrauch 2 Platten 10 Platten em Positive Kontrolle 1x0 5mL 1x1 0mL EE Negative Kontrolle 1x2 5mL 1x5 0mL MAPOJ Enzymkonjugat 200x 1x0 12mL 1x0 7mL MACD Konjugat Verd nnungsmedium 1x24mL 1x120mL MAPT Waschpuffer PBS Tween 20x 1x125mL 1 x500mL MASC Substrat Chromogen TMB 20x 1x1 2mL 1x7mL MASB Substratpuffer 1x24mL 1x125mL MASS Stoppl sung 1x12mL 2x30mL Alle Reagenzien sollten bei 2 8 C gelagert werden Das Verfalldatum ist auf allen Reagenzien und der Verpackung deutlich gekennzeichnet Das Verfalldatum ndert sich nicht nach dem Offnen ZUSATZLICH BEN TIGTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Patientenserum Mikropipetten mit Einwegspitzen feuchte Kammer saubere Glasbeh lter oder Plastikbeh lter f r L sungen dest Wasser ELISA Waschgerat Spektrophotometer zum Ablesen der OD Werte bei einzelner Wellenl nge von 450 nm oder bei doppelter Wellen
12. CIONES Para utilizaci n exclusiva en el diagn stico in vitro No utilizar despu s de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta Si se observase que el envase exterior est da ado contactar con su distribuidor local y solicitar un kit nuevo El conservante timerosal afiadido a algunos componentes es un veneno La manipulaci n de estos componentes debe realizarse con precauci n La soluci n de parada es corrosiva Evitar el contacto con la piel ojos y mucosas Afiadir todos los reactivos con cuidado para evitar la contaminaci n cruzada entre unos pocillos y otros Evitar exponer el substrato a la luz Tratar todas las muestras cl nicas y los controles como material potencialmente infeccioso y eliminar de acuerdo con la normativa local Para m s informaci n al respecto consultar la ficha de seguridad FDS INSTRUCCIONES DE USO Preparaci n de la soluci n de lavado Si se observa cristalizaci n en el concentrado disolverpor calentamiento Para cada microplaca a adir 50mL de PBS Tween 20 concentrado MAPT a 950mL de agua destilada Etiquetar el frasco como WASH BUFFER y almacenar de 2 a 8 C Preparaci n de las Muestras Recoger la muestra de sangre del paciente por el procedimiento est ndar de venopunci n empleando un anticoagulante Lisar la sangre congel ndola y usar la sangre lisada como muestra para el ensayo Puede emplearse suero o plasma como alternativa a la sangre completa pero el uso de estas mue
13. CelLabs MALARIA Ag CELISA INTENDED USE AND PRINCIPLE OF THE TEST The Malaria Ag CELISA kit has been designed as a confirmatory test for falciparum malaria in situations where traditional diagnosis is unclear for screening blood transfusion products or to confirm cases of travel related infection It is not intended to replace the conventional blood film diagnosis The sandwich ELISA principle is employed The microwells are pre coated with anti P falciparum monoclonal capture antibody A conjugate of enzyme labelled anti P falciparum monoclonal antibody is prepared and incorporated into the kit The user adds a blood sample to the coated wells and if P falciparum malaria antigen is present it binds to the coated well All other blood components are removed by a washing step The horse radish peroxidase enzyme labelled anti malaria monoclonal indicator antibody conjugate is then added It binds to any falciparum malaria antigen that has been captured on the well surface The strip is then washed and the enzyme substrate solution is then added to the test wells and incubated Colour generated indicates that P falciparum malarial antigen in the test sample CONTENTS OF THE KIT The Malaria Ag CELISA is available in 2 different formats Standard Bulk IMAMW Celisa Plate i 1x96 wells single use only 2 plates 10 plates coro y Positive Control 1x0 5mL 1x1 0mL CE Negative Control 1x2 5mL 1x5
14. MASC a 950uL di tampone del substrato IMASB e mescolare con attenzione usare 1mL per strip da 8 pozzetti La stabilit della soluzione di 30 minuti 9 Ripetere i lavaggi del passaggio 6 10 Aggiungere 100uL di substrato fresco SUBSTRATE e incubare al buio coprire a temperatura ambiente per 15 minuti 11 Aggiungere 50uL di Soluzione Bloccante MASS Picchiettare la piastra per mescolare 12 Leggere il risultato visualmente o con lo spettrofotometro a 450nm o a 450nm 620nm usando l ria come bianco LETTURA INTERPRETAZIONE E DIAGNOSI Visivamente Osservare l ntensit del colore nei pozzetti di controllo e dei campioni Il Controllo Positivo deve essere blu prima dell ggiunta della soluzione di bloccaggio e giallo dopo I ggiunta Fotometricamente Leggere i micropozzetti a 450nm o a 450nm 620nm in un lettore di piastra ELISA usando l ria come bianco Per accettare i risultati il Controllo Negativo deve fornire i seguenti risultati Controllo Negativo lt 0 2 Livello Cut Off D O Controllo Negativo 0 2 campioni di sangue negativi devono fornire letture di densit ottica inferiori a 0 2 unit di DO Tuttavia per tenere conto delle variabilit inter i laboratorio fortemente raccomandato che ciascun laboratorio esegua un certo numero di campioni negativi noti per standardizzare il livello di cut off positivo negativo del kit CELISA Tutti i campioni con u
15. Tap the plate to mix 12 Read the results visually or in a spectrophotometer at 450nm or 450nm 620nm blanking the machine on air READING AND INTERPRETATION OF RESULTS AND DIAGNOSIS Visually Observe the colour intensity of the control and specimen wells The Positive Control should be blue before and yellow after stopping Photometrically Read the microwell plate at 450nm or 450nm 620nm in a compatible ELISA plate reader blanked against air For the test results to be accepted the Negative Control must read as follows O D Value 450nm 450 620nm Negative Control lt 0 2 Cut Off level Negative control 0 2 Negative blood samples should give optical density readings below 0 2 OD units However to allow for inter laboratory variation we strongly recommend that each laboratory run a number of known negative blood samples to allow standardisation of the CELISA positive negative cut off level All specimens with an absorbance value above the cut off level should be considered positive for P falciparum antigen A positive result indicates the presence of P falciparum antigen This is suggestive of current or very recent infection The assay has been shown to detect P falciparum infection at parasitaemias as low as 0 001 The intensity of colour is not proportional to the level of parasitaemia P vivax P ovale and P malariae infections are not detected Please note that the test may remain positive
16. as Material zum SAMPLE Testen verwenden Als alternatives Material k nnen auch Serum oder Plasma verwenden werden jedoch k nnen die Ergebnisse im Vergleich zum Vollblut einen Sensitivitatsverlust beinhalten Bei nicht sofortiger Testung Blut unter i 10 C lagern Positiv und Negativkontrollen Jedes Kit wird mit gen gend Lero vorgesehen um eine 96 Well Platte laufen Es wird geliefert ordentlich und kann verd nnt 1 in 5 vor der Verwendung als Kontrolle werden Um eine Standardkurve zu erstellen seriell zweifach verd nnt die ic verwenden Sie die Lero als Verd nnungsmittel Beziehen sich auf eine typische standardisierte Kurve unten unter INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Testdurchf hrung Vor Gebrauch alle Reagenzien auf Raumtemperatur bringen W ASH BUFFER vorbereiten siehe oben Die entsprechende Anzahl an MAMW Streifen herausnehmen Danach die Verpackung mit unben tzten Mikrotiter Streifen sofort wieder mit Klebeband verschlie en 100uL der SAMPLE Positivkontrolle Lero und Negativkontrolle LRL oder MACD in die einzelnen Vertiefungen pipettieren Es sollten bei jedem Testansatz je 2 Kontrollen verwendet werden AnschlieBend die Sreifen abdecken und in der feuchten Kammer f r 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubieren Bou zt 5 In den letzten 10 Minuten der Inkubat
17. atability Reproducibility Essai Sensibilit Sp cificit R p tabilit Reproductibilit Versuch Sensitivitat Spezifit t Wiederholpr zision Reproduzierbarkeit Prova Sensibilita Specificita Ripetibilita Riproducibilita Prueba Sensibilidad Especificidad Repetibilidad Reproducibilidad Teste Sensibilidade Especificidade Repeti o Reprodutibilidade A 98 1 96 2 i B 98 96 c E Positive CV 5 65 Positive CV 9 72 EXPLANATION OF SYMBOLS Lil IVD I 2 C LOT corar Consult Instructions for Use In Vitro Diagnostic Medical Device Temperature Limitation Batch Control Positive Control Negative Use By Expiration Date i Cellabs Pty Ltd Brookvale NSW 2100 Australia Web http www cellabs com au Email sales cellabs com au WMDE es er Bergerweg 18 6085 AT Horn The Netherlands len fin ae lid es pt insert LM2 17 Version 6 July 2012 C 0843 Do Not Re use Unit 7 27 Dale Street PO Box 421 Tel 61 2 9905 0133 Fax 61 2 9905 6426
18. di emoderivati per trasfusione sanguigna o per confermare i casi di infezione correlata a viaggi in zone endemiche Il test non intende sostituire la diagnosi convenzionale su striscio di sangue Il test sfrutta il principio ELISA a fsandwich pozzetti della micropiastra sono sensibilizzati con anticorpi monoclonali di cattura anti P falciparum Nel kit incluso un coniugato anticorpo monoclonale anti P falciparum marcato con enzima Il campione di sangue va aggiunto nei pozzetti sensibilizzati e se presente l ntigene di P falciparum si lega alla parete del pozzetto Tutti gli altri componenti del campione sono rimossi dal lavaggio Si aggiunge quindi l nticorpo rilevatore anti malaria marcato con perossidasi di rafano Questo si lega ad ogni antigene di malaria falciparum catturato sulla superficie del pozzetto La striscia viene lavata si aggiunge a ciascun pozzetto la soluzione substrato e si procede all ncubazione La formazione di colore indica la presenza nel campione dell ntigene malarico P falciparum CONTENUTO DEL KIT Il kit Malaria Ag CELISA disponibile in diversi formati Standard Bulk MAMW Celisa Plate 1x96 pozzetti solo uso singolo 2 piastre 10 piastre CINE Controllo Positivo 1x0 5mL 1x1 0mL EM Controllo Negativo 1x2 5mL 1x5 0mL MAPOJ Enzima Coniugato 200x 1x0 12mL 1x0 7mL MACD Diluente Coniugato 1x24mL 1x120mL MAPT PBS Tween 20x 1x125mL 1 x500
19. do de incubaci n preparar el CONJUGATE a la diluci n de trabajo A adir 5uL de conjugado concentrado MAPO a 995uL de diluyente de conjugado MACD y mezclar completamente preparar 1mL para cada tira de 8 pocillos 6 Lavar los pocillos preferentemente con un lavador de placas autom tico o bien de forma manual como sigue Vaciar el contenido de los pocillos Rellenar con WASH BUFFER Repetir este proceso otras cuatro 4 veces Sacudir para eliminar los contenidos de los pocillos al final del ltimo lavado NB Al voltear las placas tener la precauci n de sujetar firmemente el lado del soporte para mantener las tiras en su lugar A adir 100uL de CONJUGATE a cada pocillo Incubar durante una 1 hora a temperatura ambiente TA en una c mara h meda En los ltimos 10 minutos del periodo de incubaci n preparar el SUBSTRATE a la diluci n de trabajo A adir 50uL de crom geno de substrato MASC a 950uL de soluci n de substrato MASB y mezclar bien preparar 1mL para cada tira de 8 pocillos La estabilidad de la soluci n es de 30 minutos 9 Repetir lavado como en el paso 6 10 A adir 100uL de SUBSTRATE fresco e incubar en la oscuridad tapado a t ambiente durante 15 minutos 11 A adir 50uL de soluci n de parada MASS Golpear suavemente la placa para mezclar 12 Leer los resultados de
20. ionszeit das CONJUGATE vorbereiten 5uL des Konjugat Konzentrat MAPO zu 995uL des Konjugat Verd nnungsmediums MACD geben und gut mischen pro Streifen mit 8 Vertiefungen 1mL L sung herstellen 6 Die Streifen bevorzugt mit einem Waschautomaten waschen ansonsten per Hand Den Inhalt der Vertiefungen ausleeren und WASH BUFFER hinzugeben Das Ganze 4 mal wiederholen Nach dem f nften Mal restliche Tropfen durch Klopfen der umgekehrten Platte auf einem Papierhandtuch entfernen Vorsicht Streifen k nnen aus der Halterung herausfallen 100uL CONJUGATE in jede Vertiefung pipettieren Anschlie end die Sreifen abdecken und in der feuchten Kammer f r 1 Stunden bei Raumtemperatur inkubieren In den letzten 10 Minuten der Inkubationszeit das SUBSTRATE vorbereiten 50uL des Substrat Chromogens IMASC zu 950uL des Substratpuffers MASB geben und gut mischen pro Streifen mit 8 Vertiefungen 1mL L sung herstellen Die L sung ist bis zu 30 Minuten stabil 9 Waschschritte wie unter Punkt 6 10 100uL SUBSTRATE in jede Vertiefung pipettieren dann im Dunkeln zugedeckt 15 Minuten bei Ramtemperatur inkubieren 11 50uL Stoppl sung MASS in jede Vertiefung pipettieren Platte vorsichtig bewegen so dass sich die L sungen vermischen 12 Die Ergebnisse entweder mit dem Auge ablesen oder mit dem Spektrophotometer bei 450nm oder 450nm 620nm
21. itemias tan pequefias como del 0 001 La intensidad del color no es proporcional al nivel de parasitemia El test no detecta las infecciones por P vivax P ovale and P malariae Debe tenerse en cuenta que el test puede seguir dando resultado positivo durante varios dias aun despu s de que los parasitos ya no sean detectables en los ensayos clasicos en sangre Curva t pica est ndar y equivalente a la carga parasitaria Cellabs Malaria Ag CELISA Positive Calibrator Expected Curve 35 UL 25 cm 1 5 1 E a Neat 110ng 1 2 55n9 1 4 27 509 1 8 13 75ng 1 16 6 8ng 1 32 8 44ng 1 64 1 72ng 1 128 0 86n9 Positive Calibrator Dilution and Respective Parasite Load Absorbance 4 ELIMINACION DE LOS RESIDUOS Los componentes sin usar deben eliminarse como material de riesgo biol gico Para m s informaci n consultar la ficha de seguridad FDS SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD Y OTROS DATOS DEL THE MALARIA AG CELISA Consultar la tabla resumen al final de este manual de instrucciones Todos los datos del Malaria Ag CELISA pueden obtenerse en la ficha t cnica del producto Para m s informaci n consultar con su distribuidor local o contactar con Cellabs INFORMACION SOBRE POSIBLES INDEMNIZACIONES Las modificaciones o cambios realizados sobre el procedimiento recomendado pueden afectar a las posibles reclamaciones tanto directa como indirectamente Un resultado positivo o negativo no excl
22. lange von 450 und 620 nm VORKEHRUNGEN Nur f r die in vitro Diagnostik Reagenzien d rfen nicht nach dem Verfalldatum benutzt werden Falls die Verpackung besch digt wurde bitte bei unserem Vertreiber Ersatz anfordern Reagenzien von unterschiedlichen Kits sollten nicht zusammen verwendet werden Das Thimerosal Konservierungsmittel das bei manchen Bestandteilen hinzugef gt wurde ist giftig Die Reagenzien sollten daher mit Vorsicht verwendet werden Die Stoppl sung ist tzend Kontakt mit der Haut den Augen und Schleimh uten vermeiden Alle Reagenzien sorgf ltig pipettieren um Kreuzkontamination der Mikrotiterplattenvertiefungen zu vermeiden Das Substrat sollte nicht dem Licht ausgesetzt werden Alle klinischen und Kontrollmaterialien sollten behandelt werden als w ren sie potentiell infekti s und nach den jeweils labor blichen Vorschriften entsorgt werden F r weitere Informationen siehe die Sicherheitsdatenbl tter GEBRAUCHSANLEITUNG Ansetzen des Waschpuffers Falls sich Kristalle im Konzentrat befinden sollte es erw rmt werden bis sich alles gel st hat F r je eine Microtitterplatte 50mL PBS Tween Konzentrat MAPT verwenden und mit 950mL dest Wasser mischen In eine Flasche geben mit W ASH BUFFER beschriften und bei 2 8 C lagern Probenvorbereitung Vollblut durch die Standard Venenpunktionsmethode unter Zusatz von gerinnungshemmendem Mittel gewinnen Blut durch Einfrieren lysieren anschlieBend d
23. mL MASC Substrato Cromogeno TMB 20x 1x1 2mL 1x7mL MASB Tampone Substrato 1x24mL 1x125mL MASS Soluzione Bloccante 1x12mL 2x30mL Conservare tutti componenti a 2 8 C Le date di scadenza sono chiaramente marcate su ogni componente del kit e sulla confezione Le date di scadenza non cambiano una volta aperte le confezioni MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Campioni di sangue positivi acqua distillata micropipette e puntali contenitori puliti di vetro o plastica per le soluzioni camera umida lavatore ELISA spettrofotometro in grado di leggere I ssorbanza alla singola lunghezza d nda di 450nm o alla doppia lunghezza d nda di 450nm e 620nm PRECAUZIONI Solo per uso diagnostico in vitro Non usare dopo la data di scadenza mostrata sull tichetta Se l mballo protettivo danneggiato contattare il distributore di zona e chiedere una sostituzione Non mischiare i componenti provenienti da kit diversi Il Thimerosal aggiunto come conservante ad alcuni componenti velenoso Prestare attenzione quando si maneggiano questi componenti La soluzione bloccante corrosiva Evitare il contatto con la pelle gli occhi e le membrane mucose Distribuire tutti i reagenti con attenzione per evitare contaminazioni crociate dei pozzetti Evitare di esporre il substrato alla luce si raccomanda di maneggiare tutto il materiale clinico e di controllo come potenzialmente infettivo e di eliminarlo in accordo alla regolamentazione locale Per maggio
24. n valore di assorbanza superiore al livello di cut off devono essere considerati positivi per l ntigene P falciparum Un risultato positivo indica la presenza dell ntigene P falciparum Questo risultato suggerisce un nfezione in corso o molto recente Il test ha dimostrato di rilevare l nfezioni da P falciparum in parassitemie dello 0 001 L ntensit del colore non proporzionale al livello di parassitemia Le infezioni sostenute da P vivax P ovale e P malariae non sono rilevate dal kit Tenere presente inoltre che il test pu rimanere positivo per molti giorni anche dopo che il parassita non pi rilevabile negli strisci di sangue Tipica curva standard e carico parassita equivalente Cellabs Malaria Ag CELISA Positive Calibrator Expected Curve 35 i iu cm 1 Go ee Neat 110ng 1 2 55n9 1 4 27 509 1 8 13 75ng 1 16 6 8ng 1 32 8 44ng 1 64 1 72ng 1 128 0 86n9 Fositive Calibrator Dilution and Respective Parasite Load Absorbance 4 N SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Eliminare qualsiasi componente non utilizzato come rifiuto potenzialmente infettivo Per maggiori informazioni consultare la scheda di sicurezza MSDS SENSIBILITA SPECIFICITA ED ALTRI DATI SU MALARIA AG CELISA Fare riferimento alle tabelle riassuntive alla fine del foglio istruzione Tutti i dati su Malaria Ag CELISA sono disponibili sul foglio di istruzioni che possibile richiedere al dist
25. nal tico e de controlo deve ser tratado como potencialmente infeccioso e dever ser descartado segundo as normas em vigor Consultar a ficha de seguran a do produto MSDS para mais informa es INSTRU ES DE USO Prepara o do Tamp o de Lavagem Se surgirem cristais nas solu es concentradas aquecer para dissolv los Por cada microplaca adicionar 50mL de PBS Tween concentrado IMAPT a 950mL de gua destilada Colocar r tulo WASH BUFFER para identificar o frasco e conservar a 2 8 C Prepara o das Amostras Colher as amostras atrav s de venipunctura com a utiliza o de um anti coagulante Provocar a lise do sangue atrav s do seu congelamento utilizar o sangue como amostra depois de efectuada a lise SAMPLE Podem ser utilizadas amostras de soro ou plasma em alternativa ao sangue total Contudo a utiliza o destas amostras poder provocar a perda de sensibilidade O sangue deve ser conservado abaixo dos 10 C caso haja um atraso na execu o da an lise Controlos Positivo e Negativo Cada kit fornecido com o ml suficiente para executar uma placa de 96 po os fornecido puro e pode ser dilu do em 1 5 antes de utilizar como um controlo Para construir uma curva padr o em s rie diluir duas vezes como utilizar o Lero como um diluente Consulte a uma t pica curva padronizada abaixo em Leitura e Interpreta o dos Resultados e Diagn stico
26. ol LR or known positive and negative control 1 or MACD into individual microwells Include two positive and two negatives in each assay run Cover and incubate for one 1 hour at room temperature in a humid chamber 5 In the last 10 minutes of the incubation period prepare the working strength ONJUGATE Add 5uL of conjugate concentrate MAPO to 995uL of conjugate diluent MACD and mix thoroughly allow 1mL per strip of 8 wells 6 Wash the wells preferably using an automatic plate strip washer or manually as follows Empty contents from the wells Refill with the WASH BUFFER Repeat this process a further four 4 times After the fifth wash bang inverted wells dry on absorbent tissue NB take care when flicking out plates hold side of frame firmly to hold strips in place Add 100uL of CONJUGATE to each well Incubate for one 1 hour at room temperature in a humid chamber In the last 10 minutes of the incubation period prepare the working strength SUBSTRATE Add 50uL of substrate chromogen MASC to 950uL of substrate buffer MASB and mix thoroughly allow 1mL per strip of 8 wells The stability of the solution is 30 minutes 9 Repeat washing as in step 6 10 Add 100uL of fresh SUBSTRATE and incubate in the dark covered at room temperature for 15 minutes 11 Add 50uL of Stopping Solution MASS
27. r prias amostras de sangue negativas conhecidas de modo a determinar o seu pr prio cut off positivo negativo CELISA As amostras com valores de absorv ncias superiores ao valor cut off acima mencionado s o consideradas positivas para antig nios P falciparum Um resultado positivo indica a presen a do antig nio P falciparum o que sugere a presen a de infec o ou que esta existiu recentemente Este teste detecta a infec o a P falciparum em parasit mias at 0 001 A intensidade da cor n o proporcional ao n vel de parasit mia As infec es a P vivax P ovale e P malariae n o s o detectadas O teste poder dar resultados positivos durante v rios dias mesmo depois dos parasitas j n o serem detect veis no sangue Curva padr o t pica e carga parasit ria equivalente Cellabs Malaria Ag CELISA Positive Calibrator Expected Curve 35 i 15 a 1 E a m Neat 110ng 1 2 SSng 1 4 27 5ng 1 8 18 75ng 1 16 6 8ng 1 32 3 44ng 1 64 1 72ng 1 128 0 86n9 Positive Calibrator Dilution and Respective Parasite Load Absorbance 4 N ELIMINA O DOS RESIDUOS Deitar fora qualquer componente que tenha sido utilizado como material de risco biol gico Para mais informa es consulte a MSDS SENSIBILIDADE ESPECIFICIDADE amp OUTROS DADOS DO MALARIA AG CELISA Consultar o sum rio no final do folheto de instru es Todos os dados sobre o Malaria Ag CELISA podem ser cons
28. r 50uL de substrat chromog ne MASC 950uL de tampon de substrat MASB et m langer vigoureusement pr voir 1mL de solution de travail par barrette de 8 micropuits Cette solution de travail est stable pendant 30 minutes 9 R p ter le lavage comme l tape 6 10 Ajouter 100uL de SUBSTRATE frais et incuber couvert l bscurit pendant 15 minutes temp rature ambiante 11 Ajouter 50uL de solution d rr t MASS Taper la plaque pour m langer 12 Lire les r sultats visuellement ou au spectrophotom tre 450 nm ou 450nm 620 nm calibr l ir LECTURE INTERPRETATION DES RESULTATS ET DIAGNOSTIQUE Lecture visuelle Observer l ntensit couleur des chantillons et des contr les Les contr les positifs doivent tre bleu avant l tape de solution d rr t et jaune apr s Lecture spectrophotom trique Lire les r sultats dans un spectrophotom tre microplaque ELISA calibr I ir 450 nm ou 450 nm 620 nm Pour tre valides les valeurs de contr les n gatifs doivent tre comme suit OD Value 450nm 450 620nm Contr le n gatif 0 2 Seuil discriminant cut off D O du Contr le N gatif 0 2 Les chantillons de sang n gatifs doivent donner une densit optique inf rieure 0 2 unit s de D O N anmoins afin de compenser pour les variations inter laboratoires nous recommandons chaque laboratoire d nclure un ce
29. ri informazioni consultare la scheda di sicurezza del prodotto MSDS ISTRUZIONI PER L USO Preparazione del tampone di lavaggio Se sono presenti cristalli scaldare il concentrato per discioglierli Per ciascuna micropiastra aggiungere 50mL si PBS Tween concentrato MAPT a 950mL di acqua distillata Etichettare il flacone WASH BUFFER Conservare a 2 8 C Preparazione del campione Raccogliere il sangue del paziente mediante prelievo venoso standard usando un anticoagulante Lisare il sangue per congelamento usare il sangue lisato come campione SAMPLE In alternativa possono essere usati il siero o il plasma sebbene questo possa causare una perdita di sensibilit Se l nalisi viene eseguita in ritardo il sangue deve essere conservato al di sotto dei 10 C Controlli positivi e negativi Ogni kit fornito con abbastanza 9 per eseguire una piastra a 96 pozzetti Viene fornito ordinato e possono essere diluito 1 a 5 prima di usare come controllo Per costruire una curva standard diluire serialmente due volte il LR utilizzare il 11 come diluente Fare riferimento a una tipica curva standard di seguito nella sezione LETTURA INTERPRETAZIONE E DIAGNOSI Procedura del Saggio Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente 18 25 C prima dell iso Preparare WASH BUFFER vedere Preparazione del tampone di lavaggio Rimuovere
30. ributore di zona o contattando Cellabs AVVERTENZE SULL INDENNIZZO Modifiche o cambiamenti apportati alla procedura raccomandata possono modificare lo stato o causare reclami Un risultato positivo o negativo non preclude la presenza di altri importanti agenti eziologici Cellabs ed i suoi distributori non sono legalmente responsabili dei danni nel caso di tali circostanze CelLabs MALARIA Ag CELISA APLICACIONES Y PRINCIPIO DEL TEST El kit Malaria Ag Celisa se ha disefiado para utilizarse como un test de confirmaci n para malaria falciparum en situaciones en las que el diagn stico tradicional es incierto para el an lisis del material para transfusiones de sangre o para confirmar casos de infecciones relacionadas con viajes No se pretende que reemplaze a los diagn sticos convencionales en sangre El principio empleado es el fsandwich ELISA Los micropocillos estan recubiertos con el anticuerpo monoclonal de captura anti P falciparum En el kit viene incluido un conjugado preparado de anticuerpo monoclonal anti P falciparum conjugado con el enzima El usuario afade una muestra de sangre a los pocillos recubiertos y si el ant geno de la malaria P falciparum se halla presente se une al micropocillo El resto de componentes de la sangre sin unir se eliminan con un paso de lavado Se afiade posteriormente el conjugado formado por el anticuerpo monoclonal anti malaria conjugado con peroxidasa Este se une a cualquier ant geno de malaria falcipa
31. rtain nombre d amp chantillons n gatifs confirm s afin d talonner le seuil discriminant entre positif et n gatif Tout sp cimen avec une absorbance sup rieure au seuil discriminant doit tre consid r comme positif pour l ntig ne de P falciparum Un r sultat positif indique la pr sence d ntig ne de P falciparum Ceci sugg re une infection en cours ou tr s r cente Il a t d montr que le dosage permet de d tecter une infection P falciparum dans des parasit mies aussi faibles que 0 001 L ntensit couleur n st pas proportionnelle au niveau de parasit mie Les infections P vivax P ovale et P malariae ne sont pas d tect es Notez que le test peut demeurer positif plusieurs jours apr s que le parasites ait disparu des examens la goutte paisse Courbe standard type et la charge parasitaire quivalente Cellabs Malaria Ag CELISA Fositive Calibrator Expected Curve 35 i a 15 a 1 nn Neat 110ng 1 2 55n9 1 4 27 509 1 8 13 75ng 1 16 6 8ng 1 32 8 44ng 1 64 1 72ng 1 128 0 86n9 Fositive Calibrator Dilution and Respective Parasite Load Absorbance 4 N DECHETS Jetez tout composant inutilis dans la poubelle aux d chets biologiques Consultez la fiche de s curit du produit notice MSDS pour plus amples informations SENSIBILITE SPECIFICITE ET AUTRES DONNEES DU TEST Referez vous au tableau r capitulatif en fin de notice Toutes le
32. rum que haya sido capturado en la superficie del pocillo La tira se lava y se afiade a los pocillos la soluci n de substrato del enzima y se deja incubar El color generado indica que el ant geno de la malaria P falciparum est presente en la muestra CONTENIDO DEL KIT El Malaria Ag CELISA esta disponible en 2 formatos diferentes Estandar Bulk MAMW Placa Celisa i 1 x 96 pocillos un Unico uso 2 placas 10 placas soma Control Positivo 1x0 5mL 1x1 0mL ES Control Negativo 1x2 5mL 1x5 0mL MAPO Conjugado del enzima 200x 1x0 12mL 1x0 7mL MACD Diluyente del conjugado 1x24mL 1x120mL MAPT PBS Tween 20x 1x125mL 1x500mL MASC Crom geno del Substrato TMB 20x 1x1 2mL 1x7mL MASB Soluci n de substrato 1x24mL 1x125mL MASS Soluci n de parada 1x12mL 2x30mL Almacenar todos los componentes a 2 8 C Las fechas de caducidad est n indicadas espec ficamente en cada uno de los componentes del kit y en el envase externo del mismo Las fechas de caducidad no cambian tras la apertura de los viales MATERIALES REQUERIDOS QUE NO SE PROPORCIONAN Muestras de sangre positivas para la malaria acqua distillata micropipetas y puntas limpios de vidrio o pl stico para las soluciones recipientes c mara humeda lavador de ELISA Espectrofot metro para leer absorbancias a una nica longitud de onda nica de 450nm o a longitudes de onda duales de 450nm y 620nm agua destilada PRECAU
33. s donn es sur le test Malaria Ag CELISA sont sur la fiche technique du produit Contactez Cellabs ou votre distributeur pour l btenir NOTICE D INDEMNITE Toute modification ou variation du protocole d mploi recommand peut affecter les performances annonc es du produit Un r sultat positif ou n gatif n amp xclue pas la pr sence d utres agents causatifs sous jacents Cellabs et ses agents et distributeurs ne sont l galement responsables d ucun dommage dans de telles circonstances CelLabs MALARIA Ag CELISA VERWENDUNGSZWECK UND TESTPRINZIP Der Malaria Ag Celisa Kit dient als Best tigungstest f r Plasmodium falciparum in den Fallen in denen die herk mmliche Diagnostik unklar ist zur berpr fung von Bluttransfusionsprodukten oder als Best tigungstest bei reisebedingten Infektionen Der Test ist nicht geeignet die konventionelle mikroskopische Diagnostik zu ersetzen Der Test arbeitet nach dem Sandwich ELISA Prinzip Die Vertiefungen der Mikrotiterplatte sind mit monoklonalem anti P falciparum Capture Antik rper beschichtet Ein monoklonaler Enzym konjugierter anti P falciparum Antik rper ist im Kit integriert Es werden Blutproben in die jeweiligen beschichteten Vertiefungen gegeben und falls P falciparum Malariaantigene vorhanden sind werden sie in den beschichteten Vertiefungen gebunden Alle anderen Blutbestandteile werden durch einen Waschschritt entfernt AnschlieBend gibt man einen mit Meerrettichperoxidase konjugierten
34. sein kann obwohl man unter dem Mikroskop keine Parasiten mehr entdecken kann Typische Standardkurve und gleichwertige Parasitenbelastung Cellabs Malaria Ag CELISA Fositive Calibrator Expected Curve 35 inc bcm 1 B A Neat 110ng 1 2 55n9 1 4 27 5ng 1 8 13 75ng 1 16 6 8ng 1 32 3 44ng 1 64 1 72ng 1 128 0 86n9 Absorbance 4 N Positive Calibrator Dilution and Respective Parasite Load ENTSORGUNG Alle nicht ben tigten Komponenten m ssen als biogefahrdender M ll entsorgt werden F r weitere Informationen siehe Sicherheitsdatenblatter MSDS SENSITIVITAT SPEZIFITAT UND ANDERE DATEN ZU DEM MALARIA AG CELISA Siehe zusammenfassende Tabelle am Ende dieser Anleitung Alle Daten zu dem Malaria Ag CELISA k nnen aus der Produktinformation entnommen werden Bitte fragen sie ihren Vertreiber oder kontaktieren sie Cellabs HAFTUNGSAUSSCHLUSS Anderungen oder Modifikationen der empfohlenen Durchf hrung k nnen die gemachten oder gefolgerten Angaben beeinflussen Ein positives oder negatives Ergebnis schlieBt nicht andere zugrunde liegende Krankheiten aus Cellabs und seine Vertreiber sind f r Folgen derartiger Konstellation nicht haftbar CelLabs MALARIA Ag CELISA FINALITA D USO E PRINCIPIO DEL TEST Malaria Ag CELISA kit stato ideato quale test di conferma per la malaria causata da P falciparum da usare in situazione di diagnosi dubbia per lo screening
35. stras puede tener como resultado una p rdida de sensibilidad Hay que almacenar la sangre a menos de 10 C si no se realiza el an lisis de inmediato Controles Positivos y Negativos Cada kit se suministra con el ic suficiente para hacer funcionar una placa de 96 pocillos Se suministra limpio y se puede diluir 1 en 5 antes de usar como un control Para construir una curva est ndar en serie diluir dos veces el Leo ro utiliza el 9 como un diluyente Consulte a una curva t pica normalizada m s adelante en Lectura e interpretaci n de los resultados y diagn stico Procedimiento del ensayo Permitir que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiente de 18 a 25 C antes de su uso Preparar la soluci n de lavado WASH BUFFER ver preparaci n de soluci n de lavado Retirar el n mero necesario de tiras MAMW Volver a sellar la bolsa de aluminio con las tiras de los micropocillos sin usar inmediatamente con el autocierre E pa os jov ice Pipetear 100uL de la muestra SAMPLE el control positivo Lc o muestra conocida positiva y control negativo 9 o IMACD a sus micropocillos individuales Incluir dos controles positivos y dos controles negativos en cada fase del ensayo Tapar e incubar durante una 1 hora a temperatura ambiente TA en una c mara h meda 5 En los ltimos 10 minutos del perio
36. t les micropuits restants avec du ruban adh sif mp qe um Ajouter 100uL de SAMPLE de contr le positif Lowro ou chantillon patient positif et de contr le n gatif MACD ou coro dans chaque micropuits Inclure deux contr les positifs et deux contr les n gatifs dans chaque s rie de dosage Couvrir et incuber une 1 heure temp rature ambiante TA 5 Dans les 10 derni res minutes de l ncubation pr parer la solution de travail de CONJUGATE Ajouter 5uL de conjugu concentr MAPO 995uL de diluant de conjugu MACD et m langer vigoureusement pr voir 1 mL de solution de travail par barrette de 8 micropuits 6 Laverles micropuits au laveur automatique ou manuellement comme suit Vider le contenu des micropuits Remplir les micropuits de WASH BUFFER R p ter l p ration quatre 4 fois Apres le cinqui me lavage rabattre vigoureusement la plaque de micropuits invers e sur une serviette absorbante jusqu ce qu amp ucun liquide n n sorte NB op rez cette tape avec pr caution en serrant le cadre de la plaque micropuits pour viter qu ls ne s n d logent Ajouter 100uL de CONJUGATE dans chaque puits Incuber une 1 heure temp rature ambiante TA en chambre humide Dans les 10 derni res minutes de l ncubation pr parer la solution de travail de SUBSTRATE Ajoute
37. ta Sheet INSTRUCTIONS FOR USE Preparation of Wash Buffer If crystals are present warm the concentrate to dissolve For each microplate add 50mL PBS Tween concentrate MAPT to 950mL of distilled water Label the bottle WASH BUFFER Store at 2 8 C Preparation of Samples Collect patient blood by standard venipuncture procedure using an anticoagulant Lyse blood by freezing use the lysed blood as the test specimen SAMPLE Serum or plasma may be used as an alternative to whole blood but the use of these samples may result in the loss of sensitivity The blood should be stored below 10 C if the analysis is delayed Positive and Negative Controls Each kit is provided with enough Lero to run a 96 well plate It is supplied neat and can be diluted 1 in 5 before using as a control To construct a standard curve serially dilute two fold the LME use the ARE RPMI as a diluent Refer to a typical standardised curve below under Reading and Interpretation of Results and Diagnosis Assay Procedure Bring all reagents to room temperature 18 25 C before use Prepare WASH BUFFER see Preparation of Wash Buffer Remove required number of MAMW strips Reseal the foil bag containing unused microwell strips immediately with tape oS E Pipette 100uL of the SAMPLE positive contr
38. tandard Bulk MAMW Placas Celisai 1x96 po os para uma utiliza o 2 Placas 10 Placas Ex Controlo Positivo 1x0 5mL 1x1 0mL crag Controlo Negativo 1x2 5mL 1x5 0mL MAPOJ Conjugado Enzim tico 200x 1x0 12mL 1x0 7mL MACD Diluente do Conjugado 1x24mL 1x120mL MAPT Tamp o PBS Tween 20x 1x125mL 1 x500mL MASC Substrato Cromog nio TMB 20x 1x1 2mL 1x7mL MASB Tamp o Substrato 1x24mL 1x125mL MASS Solu o de Paragem 1x12mL 2x30mL Conservar a 2 8 C As datas de validade est o referidas em cada componente do kit e na embalagem Os prazos de validade n o se alteram com a abertura dos componentes MATERIAL NECESS RIO MAS NAO FORNECIDO Amostras de sangue positivas para mal ria gua destilada micropipetas com pontas descart veis recipientes para as solu es c mara h mida Lavador ELISA Espectrofot metro capaz de ler absorv ncias a 450 nm ou 450 620 nm PRECAU ES Apenas para diagn stico in vitro N o utilizar ap s ter terminado o prazo de validade Se a embalagem estiver danificada contactar o representante local e pedir a substitui o por uma nova N o misturar componentes de kits diferentes O conservante de Timerosal adicionado a determinados componentes t xico Cuidado ao manusear estes componentes A solu o de paragem corrosiva Evitar o contacto com a pele olhos e mucosas Pipetar os reagentes com cuidado para evitar contamina o dos po os Evitar exposi o do substrato luz Todo o material a
39. ultados na folha de informa o do produto Contacte o distribuidor ou contacte a Cellabs NOTA SOBRE POSSIVEIS INDEMINIZA ES As modifica es realizadas aparte do protocolo recomendado podem afectar os resultados Um resultado positivo ou negativo n o exclui a presen a de outros agentes causadores subjacentes A Cellabs e os seus distribuidores n o ser o legalmente respons veis por qualquer dano nestas circunst ncias FIGURE 1 MALARIA Ag CELISA DIAGRAM FOR USE SAMPLE Add 100uL to individual MAMW wells Incubate for 1 hour in a humid chamber at RT Wash 5x with WASH BUFFER Add 100uL CONJUGATE to each well Incubate for 1 hour in a humid chamber at RT Wash 5x with WASH BUFFER Add 100uL of SUBSTRATE to each well Incubate for 15 minutes in the dark at RT Add 50uL MASS to each well Read visually at 450nm or 450 620nm ooo TABLE 1 SENSITIVITY SPECIFICITY amp OTHER DATA ON THE MALARIA Ag CELISA TABLEAU 1 SENSIBILITE SPECIFICITE ET AUTRES DONNEES DU TEST MALARIA Ag CELISA TABELLE 1 SENSITIVITAT SPEZIFITAT UND ANDERE DATEN ZUM MALARIA Ag CELISA TABELLA 1 SENSIBILITA SPECIFICITA ED ALTRI DATI SULLA MALARIA Ag CELISA TABLA 1 SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD Y OTROS DATOS DEL MALARIA Ag CELISA TABELA 1 SENSIBILIDADE ESPECIFICIDADE E OUTROS DADOS DO MALARIA Ag CELISA Trial Sensitivity Specificity Repe
40. uye la presencia de otros agentes etiol gicos subyacentes Ni Cellabs ni sus agentes o distribuidores ser n legalmente responsables por dafios producidos bajo estas circunstancias CelLabs MALARIA Ag CELISA UTILIZA O E PRINC PIO DO TESTE O Malaria Ag CELISA destina se confirma o do teste de falciparum malaria em casos onde o diagn stico tradicional se apresenta duvidoso no rastreio de sangue proveniente de transfus es ou para a confirma o de casos de infec es relacionadas com viagens N o pretende substituir o diagn stico de sangue convencional utilizado o princ pio de sandwich ELISA Os micropo os est o revestidos com anticorpos monoclonais de captura contra P falciparum O conjugado enzim tico marcado com anticorpos monoclonais anti P falciparum est inclu do no kit Ao pipetar as amostras de sangue nos po os revestidos o antig nio P falciparum malaria que estiver presente na amostra ir ligar se ao revestimento dos po os Os restantes componentes do soro s o removidos atrav s de lavagem O conjugado adicionado ligando se ao antig nio falciparum malaria fixado no po o Lavar os po os e adicionar a solu o de substrato e incubar A cor que gerada indica a presen a do antig nio de mal ria P falciparum presente nos soros que est o a ser testados CONTE DO DO KIT O kit Malaria Ag CELISA est dispon vel em 2 formatos S
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