MANUAL DE INSTRUCCIONES
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1. MANUAL DE INSTRUCCIONES REHAR Alb mina S rica Bovina Soluci n al 22 Para ser usada en pruebas de compatibilidad y de detecci n identificaci n y titulaci n de anticuerpos Para uso diagn stico in vitro RESUMEN En 1945 Cameron y Diamond observaron que algunos sueros anti D que no aglutinaban a los eritrocitos suspendidos en salina si aglutinaban a los eritroci tos suspendidos en alb mina humana Esta observaci n se aplic en el uso de la alb mina bovina como potenciador de las reacciones con anticuerpos en prue bas de compatibilidad screening de anticuerpos identificaci n de anticuerpos y titulaci n de anticuerpos PRINCIPIO Los anticuerpos incompletos tienen la habilidad de combinarse con su ant geno espec fico en la primera fase de la aglutinaci n pero sin producir aglutinaci n vi sible sin el uso de t cnicas especiales El agregado de alb mina bovina a la sus pensi n celular permite a algunos de estos anticuerpos completar la segunda fase de aglutinaci n Tambi n se sabe que la alb mina aumenta la sensibilidad de la prueba antiglobul nica indirecta para algunas especies de anticuerpos REACTIVO La alb mina bovina al 22 de Diagnostics Scotland est preparada con seroal b mina bovina Este reactivo no contiene Caprilato de sodio Se le ha agregado azida s dica al 0 1 final como conservador Este reactivo deber utilizarse tal como se ha provisto por los m todos descriptos Para uso diagn stico2. R LA ADMINIS TRACION NACIONAL DE MEDICAMENTOS ALIMENTOS Y TECNOLOGIA MEDICA Certificado N2 4880 Disposici n N2 3882
3. a buscar hem lisis resuspender el bot n celular por agitaci n suave y examinar inmediatamente si hay aglutinaci n Registrar los resultados 4 Agregar dos gotas de Alb mina S rica Bovina al 22 Mezclar Si se desea centrifugar a 3400 rpm 900 1000 rcf por 30 segundos y leer si hay aglutinaci n antes de la incubaci n Incubar a 37 C por 15 60 minutos 5 Centrifugar inmediatamente por 30 segundos a 3400 rpm 900 1000 rcf Examinar el sobrenadante para buscar hem lisis agitar suavemente para resus pender el bot n celular y examinar la aglutinaci n Registrar los resultados 6 Lavar exhaustivamente 3 4 veces con salina isot nica cuidando de decantar la salina completamente luego de cada lavado 7 Agregar una o dos gotas de antiglobulina humana seg n las indicaciones del fabricante Mezclar bien Centrifugar a 3400 rpm 900 1000 rcf por 15 20 segun dos Resuspender las c lulas y examinar inmediatamente la aglutinaci n Las reacciones negativas pueden examinarse con una ayuda ptica 8 Confirmar la validez de las reacciones negativas con c lulas sensibilizadas con IgG siguiendo las instrucciones del fabricante Resultados La hem lisis o aglutinaci n representan una prueba positiva e indi can la presencia de una reacci n ant geno anticuerpo Los resultados negativos deben verificarse por el agregado de c lulas sensibilizadas con IgG Si las c lu las sensibilizadas no son aglutinadas las pruebas deben ser considera
4. das inv lidas y el test deber ser repetido Procedimiento para la titulaci n de anticuerpos 1 Rotular 10 tubos de ensayo del 1 al 10 2 Agregar 0 1 ml de una soluci n 6 de alb mina bovina a los tubos 2 a 10 3 Agregar 0 1 ml del suero a ensayar en los tubos 1 y 2 Mezclar bien los con tenidos del tubo 2 4 Con una pipeta limpia transferir 0 1 ml del tubo 2 al tubo 3 Mezclar bien los contenidos del tubo 3 Continuar con el mismo procedimiento para los tubos 4 al remover 0 1 ml del tubo 10 y reservar para futuras diluciones en caso de ser necesario 5 Agregar 0 1 ml de una suspensi n al 2 de gl bulos rojos lavados y suspendi dos en alb mina bovina al 22 a los tubos 1 al 10 6 Mezclar bien Incubar a 37 C por 15 60 minutos 7 Centrifugar cada tubo a 3400 rpm 900 1000 rcf por 30 segundos Resuspender suavemente las c lulas y examinar la aglutinaci n Registrar los resultados 8 Se puede realizar una prueba antiglobul nica en aquellas c lulas que presen ten reacciones d biles o negativas Resultados El t tulo ser la reciproca de la mayor diluci n del suero capaz de dar una aglutinaci n de 1 o mayor LIMITACIONES La alb mina bovina no potencia la reactividad de todos los anticuerpos IgG Los resultados falso positivos o falso negativos pueden ser causados por el uso de una t cnica incorrecta o materiales contaminados La alb mina bovina no debe ser utilizada como un control negativo para antisue
5. in vitro Conservar a 2 8 C cuando no est en uso Una tur bidez marcada puede indicar contaminaci n bacteriana o deterioro del reactivo No utilizar luego de su vencimiento OBTENCI N Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS Obtener sangre por una t cnica as ptica Se debe utilizar suero o plasma fresco para las pruebas de compatibilidad o los procedimientos de detecci n de anti cuerpos Si la prueba se demorara la muestra se conservar a 2 8 C o se se parar el suero o plasma de las c lulas y se lo congelar Los eritrocitos a emplear en la prueba podr n ser gl bulos rojos reactivos comerciales muestras obtenidas con anticoagulante o muestras coaguladas PROCEDIMIENTO Materiales Provistos Alb mina S rica Bovina al 22 Materiales Adicionales Requeridos Tubos de ensayo 12x75 mm o 10 x75 mm salina isot nica pipetas incubador o ba o termostatizado a 37 C ayuda ptica centr fuga timer pipetas serol gicas de 0 2 ml para titulaci n gl bulos rojos reactivos anti globulina humana y c lulas sensibilizadas con IgG Procedimiento para la detecci n identificaci n de anticuerpos o pruebas de com patibilidad 1 Colocar dos gotas de suero o plasma en un tubo de ensayo limpio e identifi cado 2 Agregar una gota de suspensi n de c lulas al 3 5 de donante o de gl bulos rojos reactivos Mezclar bien los contenidos del tubo 3 Centrifugar a 3400 rpm 900 1000 rcf por 15 30 segundos Examinar el sobrenadante par
6. ros de alto contenido pro teico como Anti D para el uso en l mina o test r pido en tubo Caracter sticas Espec ficas de Desempe o Alb mina S rica Bovina 22 ha demostrado potenciar la aglutinaci n del Rh y otros anticuerpos cuando se utiliza seg n los m todos descriptos Cada lote es probado para asegurar su especificidad cuando se los prueba contra anticuerpos dirigidos contra los ant genos de grupo m s frecuentemente heredados BIBLIOGRAF A 1 Cameron JW and Diamond LK Chemical Clinical and Immunological Studies on the Products of Human Plasma Fractionation Serum Albumin as a Diluent for Rh Typing Reagents J Clin Invest 1945 24 793 2 Widmann FK Ed Technical Manual 9th Arlington VA American Association of Blood Banks 1985 204 3 Steane EA Red Blood Cell Agglutination A Current Prspective in Seminar on Antigen Antibody Reactions Revisited Washington DC American Association of Blood Banks 1982 67 4 Case J Potentiators of agglutination in Antigen antibody reactions revisited Washington DC American Association of Blood Banks 1982 124 e ELABORADO POR Diagnostics Scotland Ellens Glen Road N 3 Edinburgh EH 17 7QT Escocia NS IMPORTADO Y FRACCIONADO POR FELSAN S R L Palpa 3811 Pucorrano FELSAN Luis Espinosa Consultas T cnicas laboratorioGfelsan com ar SUN Brasno C1427EBF Ciudad Aut de Bs As Argentina Dir T cnico Roque PRODUCTO DE DIAGN STICO DE USO IN VITRO AUTORIZADO PO
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