Home

capillarys hemoglobin(e) capillarys 2

1. Sang avec variant delta 2 Sang avec variant Hb D Punjab Blood sample with delta Hb A 2 variant Blood sample with Hb D Punjab variant Figure 12 Figure 11 Hb C Hb E Hb F D Sang avec variant homozygote Hb E et fraction Hb F lev e Hb S Hb A2 Hb F Sang avec variants h t rozygotes Hb S et Hb C Blood sample with Hb S amp Hb C heterozygote variants Blood sample with homozygote Hb E variant and elevated Hb F 421 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCHEMAS FIGURES CAPILLARYS HEMOGLOBIN E PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 14 Figure 13 215 Hb S Sang avec Hb A d grad e Hb A3 et Hb F faible Sang avec variant homozygote Hb S et Hb F Blood sample with degradated Hb A Hb A3 and faint Hb F Blood sample with Hb S homozygote variant and Hb F Figure 15 215 Sang avec variant Hb Lepore Bood sample with Hb Lepore variant 422 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCH MAS FIGURES CAPILLARYS HEMOGLOBIN E CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 16 Fraction suppl mentaire en zone de migration Z2 prot ines plasmatiques Additional fraction in Z2 migration zone plasmatic proteins
2. 418 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCHEMAS FIGURES CAPILLARYS HEMOGLOBIN E PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 2 Figure 1 215 215 Sang b ta thalass mique Sang normal Blood sample with beta thalassemia Normal blood sample Figure 4 Figure 3 715 215 Sang avec variant h t rozygote Hb S Sang avec variant Hb C Blood sample with Hb S heterozygote variant Blood sample with Hb C variant 419 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCHEMAS FIGURES CAPILLARYS HEMOGLOBIN E PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 6 Figure 5 715 19 Sang de b b avec Hb Bart s Sang de b b ag de 3 semaines Baby blood sample 3 weeks old Baby blood sample with Hb Bart s Figure 8 Figure 7 2715 Hb H w N Sang avec Hb H Sang avec Hb F jeune enfant Blood sample with Hb H Blood sample with Hb F young child 420 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCHEMAS FIGURES CAPILLARYS HEMOGLOBIN E PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 10 Figure 9 215 SS ES SS 215
3. 195 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO CONGELAR Pueden observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante 4 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 a 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Ver el manual de instrucciones del CAPILLARYS 2 SEBIA Use el cargador de muestras espec fico para el mantenimiento n 100 Coloque en este cargador en la posici n 1 un tubo de hem lisis que contenga 2 mL de la soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente Introduzca el cargador n 100 de mantenimiento en el sistema CAPILLARYS 2 En el men de la ventana MANTENIMIENTO que aparecer en pantalla seleccione la
4. Hemoglobina A2 comprendida entre 2 2 y 3 2 Vea Interferencias y limitaciones Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores normales NOTA Los valores normales han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 0 e integraci n autom tica de las fracciones de la hemoglobina con la t cnica HEMOGLOBIN E ATENCI N Los valores normales valores de referencia s lo deben ser tenidos en cuenta en ausencia de variantes de la hemoglobina 175 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Interpretaci n Vea PERFILES ELECTROFOR TICOS figuras 1 15 Las diferentes zonas de migraci n de las variantes identificadas como Z1 a Z15 aparecen en la ventana de edici n de las curvas y en el informe de resultados Al pasar el cursor del rat n sobre el nombre de una zona aparece una burbuja informativa que indica las variantes posibles de la hemoglobina que migran en esa zona Para cada fracci n la posici n del m ximo define la zona de migraci n Vea la tabla que muestra las variantes potenciales presentes en cada zona ATENCI N La graduaci n del eje de abscisas no puede en ning n caso usarse para la identificaci n de una variante de la hemoglobina 1 Anomal as cualitativas Hemoglobinopat as La mayor a son anomal as estructurales debidas a una sustituci n por mutaci n de un amino cido por otro en una de las cadenas Las consecuencias de la mutaci n var an en f
5. x ids Analyse du sang total Analyse des globules rouges correspondants Whole blood analysis Analysis of corresponding red blood cells Figure 17 Fraction suppl mentaire en zone de migration Z2 Hb Constant spring Additional fraction in Z2 migration zone Hb Constant spring Hb Constant Spring M Analyse des globules rouges correspondants Analysis of corresponding red blood cells Analyse du sang total Whole blood analysis 423 2012 06 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E SCH MAS FIGURES CAPILLARYS HEMOGLOBIN E CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 18 Fraction suppl mentaire en zone de migration Z15 Additional fraction in Z15 migration zone lE i E AAA E El la E gr E x eg _ H Ne JR _ ss gr SSS S y A SS AR Y p P lo El EE Y A SA QU E 424 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 TABLEAU TABLE CAPILLARYS SANGS DE CORDONS VARIANTS POTENTIELS PR SENTS DANS CHAQUE ZONE CAPILLARYS CORD BLOOD POTENTIAL VARIANTS LOCATED IN EACH ZONE Zone H moglobines Hemoglobins Hb Hb C C1 Hb C Hb A2 Hb O
6. CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Ref 2007 CAPILLARYS 2 2012 06 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 TECNICA CAPILLARYS HEMOGLOBIN E EN EL SISTEMA CAPILLARYS 2 USO El kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E permite la separaci n en medio alcalino pH 9 4 de las hemoglobinas normales de la sangre humana A F y A2 y la detecci n de las principales hemoglobinas anormales especialmente las hemoglobinas S C E y D mediante electroforesis capilar en el sistema automatico CAPILLARYS 2 El sistema CAPILLARYS 2 permite realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil de las hemoglobinas para el an lisis cualitativo o cuantitativo El an lisis puede realizarse usando el hemolizado de gl bulos rojos sedimentados centrifugados o lavados el lavado de los gl bulos rojos no es indispensable Las hemoglobinas separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante espectrofotometr a de absorbancia a 415 nm que es la longitud de onda de absorci n espec fica de las hemoglobinas Los perfiles electrofor ticos son analizados visualmente para detectar las anomal as La detecci n directa proporciona autom ticamente una cuantificaci n relativa precisa de cada fracci n individual de las hemoglobinas que presenta un inter s particular como la hemoglobina A2 en el diagn stico de las B talasemias Adem s la buena separaci n de las difer
7. 426 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCH MAS FIGURES CAPILLARYS SANGS DE CORDONS CAPILLARYS CORD BLOOD PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS D f E Sang de cordon avec variant Hb E Cord blood sample with Hb E variant eo Sang de cordon avec Hb F d grad e en zone C9 et Hb A d grad e en zone C11 Cord blood sample with degraded Hb F C9 zone and degraded Hb A C11 zone 427 Figure 5 Figure 6 E Em co cs 7 cs cs c4 ca ct ct E oe cs oe c2 T HOF EA EA H J H 33 CTE ze zs ue xm 5 738 588 3e Sang de cordon avec variant Hb Bart Sang de cordon avec variant Hb C Cord blood sample with Hb Bart s variant Cord blood sample with Hb C variant Figure 7 Figure 8 Em oe cs cs ce c2 ct cR Em Em ejeg e ala c c jer FeAl FA f WB us ES CE sh a 10 do ub EE CNE xe
8. CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 RESULTADOS Valores La detecci n directa en el capilar a 415 nm permite definir las concentraciones relativas porcentajes de cada fracci n Los valores normales de cada fracci n de hemoglobina han sido establecidos a partir de una poblaci n de 113 adultos hombres y mujeres en buen estado de salud que presentan valores normales en HPLC Hemoglobina A comprendida entre 96 7 y 97 8 Hemoglobina F lt 0 5 Hemoglobina A2 comprendida entre 2 2 y 3 2 Ver interferencias y limitaciones Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores normales NOTA Los valores normales han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 0 e integraci n autom tica de las fracciones de la hemoglobina con la t cnica HEMOGLOBIN E ATENCI N Los valores normales valores de referencia s lo deben ser tenidos en cuenta en ausencia de variantes de la hemoglobina Interpretaci n Ver PERFILES ELECTROFOR TICOS figuras 1 18 Las diferentes zonas de migraci n de las variantes identificadas como Z1 a 215 aparecen en la ventana de edici n de las curvas y en el informe de resultados Al pasar el cursor de rat n sobre el nombre de una zona aparece una burbuja informativa que indica las variantes posibles de la hemoglobina que migran en esa zona Para cada fracci n la posici n del m ximo define la zona de migraci n Ver la tabla que mu
9. Hb Santa Ana chaine libre alpha Hb Mizuho pic mineur Hb 3A 2 Hb A2 Hb F Hull Hb T Cambodia variants de Hb A2 Arya de Hb A2 Hasharon de Hb A2 Fort de France de Hb A2 Ottawa de Hb A2 Chad de Hb A2 G Norfolk de Hb A2 Matsue Oki de Hb A2 Stanleyville II de Hb A2 Montgomery de Hb A2 Winnipeg de Hb A2 Q India de Hb A2 lt G Pest de Hb A2 Memphis de Hb A2 Inkster de Hb A2 Chapel Hill et de Hb A2 Q Thailand Hb Santa Ana free alpha chain Hb Mizuho minor peak Hb 8A 2 Hb A2 Hb F Hull Hb T Cambodia Arya Hb A2 variant Hasharon Hb A2 variant Fort de France Hb A2 variant Ottawa Hb A2 variant Chad Hb A2 variant G Norfolk Hb A2 variant Matsue Oki Hb A2 variant Stanleyville II Hb A2 variant Montgomery Hb A2 variant Winnipeg Hb A2 variant Q India Hb A2 variant G Pest Hb A2 variant Memphis Hb A2 variant Inkster Hb A2 variant Chapel Hill Hb A2 variant Q Thailand Hb A2 variant Z2 b C Hb F Texas Hb Constant Spring Hb C Harlem C Georgetown variant de Hb A2 Setif variant de Hb A2 Bassett variant de H Hb 2 Swan River variant de Hb A2 Manitoba I variant de Hb A2 Manitoba II Hb C Hb F Texas Hb Constant Spring Hb C Harlem C Georgetown Setif Hb A2 variant Bassett Hb A2 variant Swan River Hb A2 variant Manitoba I Hb A2 variant Manitoba II Hb A2 variant Z3 Hb A2 Hb O Arab Hb Chad E Keelung Hb E Saskat
10. puede sospecharse la presencia de la hemoglobina O Arab Esta ltima no puede ser confundida con las hemoglobinas C y E ya que stas est n separadas de la fracci n A2 Hemoglobina D Los Angeles Un cido glut mico de la cadena B n 121 est sustituido por una glutamina En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E la hemoglobina D denominada D Punjab D Los Angeles D Chicago D Portugal migra en posici n an dica respecto a la hemoglobina S lo que permite distinguirla de sta 2 Anomal as cuantitativas Talasemias Constituyen un grupo bastante heterog neo de afecciones gen ticas caracterizadas por la reducci n de la tasa de s ntesis de una o varias cadenas de la hemoglobina El mecanismo de esta reducci n a escala molecular todav a no es bien conocido Existen diferentes s ndromes talas micos 188 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Alfa talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas ot afectando por consiguiente a la s ntesis de las hemoglobinas fisiol gicas El exceso de s ntesis de las cadenas B y y respecto a las cadenas a provoca la formaci n de tetr meros sin cadena a Hemoglobina Bart y4 Hemoglobina B4 La hemoglobina H posee un punto isoel ctrico relativamente bajo En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E migra en una posici n mucho m s an dica que la hemoglobina A y puede estar presente en forma de una o varias fracciones Beta talasem
11. Inicie el an lisis Introduzca el cargador n 0 en el sistema CAPILLARYS 2 seleccione lt diluci n autom tica gt en la ventana que aparecer en pantalla y valide Despu s de cada cambio del contenedor del tamp n de an lisis incluso si el lote no cambia o de modo de trabajo despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con CAPICLEAN o despu s de una activaci n de los capilares realice una segunda serie de an lisis con este control volviendo a introducir inmediatamente el cargador n 0 con el mismo segmento de diluci n que contiene el Control Hb AF diluido en el primer an lisis saque el microtubo que contiene el Control Hb AF y deje el tubo de soporte identificado con la etiqueta con el c digo de barras en la ventana que aparecer en pantalla denominada Control Hb AF seleccione diluci n manual y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb AF en el CAPILLARYS 2 es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contenga el Control Hb AF corte el tap n del microtubo antes de usarlo NOTA Al usar por primera vez el programa de an lisis SANGRE DE CORD N en el autom tico para electroforesis CAPILLARYS 2 despu s de un paro prolongado m s de una semana se recomiend
12. Muestras a descartar No use muestras en las que haya comenzado la coagulaci n No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la hem lisis autom tica de las muestras puede ser perturbada por la presencia de aglomerados viscosos entre los gl bulos rojos el perfil electrofor tico tambi n puede ser afectado por lo productos de degradaci n de las hemoglobinas o por artefactos En estos 2 casos la presencia de aglomerados de gl bulos rojos puede impedir la toma de la muestra No use directamente un tubo que contenga menos de 1 mL de muestra de sangre a analizar ya que el an lisis puede verse afectado ver casos especiales PROCEDIMIENTO El sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las hemoglobinas en 8 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de los tubos primarios hasta 8 y del cargador agitaci n de las muestras antes del an lisis hem lisis y diluci n de las muestras a partir de los tubos primarios lavado de los capilares inyecci n de las muestras hemolisadas separaci n y detecci n directa de las hemoglobinas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes colocaci n de los tubos primarios tapados en los cargadores en las posiciones 1 a 8 colocaci n de un segmento de diluci n nuevo en el cargador introducci n en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIE
13. 7 different blood samples were run using the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure in all capillaries of the same CAPILLARYS 2 instrument and with 1 lot of CAPILLARYS HEMOGLOBIN E kit The analyzed blood samples included 2 samples with normal Hb A2 level No 1 and 5 2 samples with increased Hb A2 level No 2 and 6 1 sample with low Hb A2 level No 3 1 pathological sample with Hb F and Hb S No 4 and 1 sample with increased Hb F level No 7 In this study each blood sample was analyzed on all capillaries from the same instrument including 40 runs over 20 working days at 2 different times of the day Within each run samples were analyzed in duplicate The results for Hb A Hb A2 Hb F and Hb S percentages are summarized in the following tables Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb A 97 5 96 1 98 2 49 0 97 3 93 5 33 7 Within run reproducibility CV 96 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 1 0 5 Between run reproducibility CV 96 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 14 Between day reproducibility CV 96 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 2 0 Total CV 96 0 0 0 1 0 1 0 2 0 1 0 1 2 8 Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb A2 96 25 3 9 1 8 2 8 2 7 6 5 Within run reproducibility CV 1 5 1 0 2 8 1 5 1 7 0 9 Between run reproducibility CV 1 0 0 3 1 5 0 0 1 6 0 7 Betwe
14. en el pH de an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que la hemoglobina A En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en tamp n alcalino la hemoglobina S migra entre las fracciones A y A2 a m s o menos 1 3 de la distancia A A2 desde la A2 Hemoglobina C La mutaci n es debida a la sustituci n de un cido glut mico de la cadena B por una lisina amino cido alcalino n 6 presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH de an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que las hemoglobinas A y A2 de la que est parcialmente separada lo que mejora netamente el diagn stico m dico Adem s las hemoglobinas C E O Arab no se superponen en el perfil electrofor tico y pueden por tanto ser distinguidas f cilmente Hemoglobina E Un cido glut mico de la cadena D n 26 est sustituido por una lisina En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E la hemoglobina E migra justo despu s de la hemoglobina A2 de la que est totalmente separada En presencia de hemoglobina E la fracci n A2 puede por tanto ser cuantificada para detectar una B talasemia Hemoglobina O Arab Un cido glut mico de la cadena B n 121 est sustituido por una lisina En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E la hemoglobina O Arab migra con la fracci n A2 En este caso la cuantificaci n de la hemoglobina A2 es imposible Cuando esta fracci n es superior al 9
15. with a maximum of about 10 3 g dL for Hb E in the analyzed sample between 0 0 and 95 4 of Hb E Accuracy Internal correlation The internal concordance study of the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 instrument was evaluated in a study based on the Clinical Laboratory Standards Institute CLSI USA EP09 A2 guideline Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples Approved Guideline Second Edition Interim Revision The results for percentages of hemoglobin fractions were analyzed using statistical tools recommended by CLSI 179 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 NOTE The results presented below have been obtained from 1 internal accuracy study that has been performed in SEBIA facility The analyzed blood samples and their diagnostic assessment were provided by 11 hospital laboratories in France and USA The diagnosis was based on a routine HPLC procedure The levels of hemoglobin fractions were measured in 56 blood samples including 20 samples with hemoglobin variants such as hemoglobins S C D and E both by electrophoretic separations obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure with the CAPILLARYS 2 instrument and a commercially available HPLC system for hemoglobins analysis The measured values of hemoglobin fractions from both procedures were analyzed by a linear regression statistical procedure The results of linear regressi
16. 20 minutos Para el cargador de muestras siguiente las fases 1 y 2 lectura de los c digos de barras y hem lisis de las sangres se realizan durante la etapa 5 migraci n del cargador anterior EEN II AN LISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis se realiza autom ticamente la cuantificaci n relativa de las fracciones y los perfiles pueden ser interpretados Los picos de hemoglobina A Hb A F Hb F y A2 Hb A2 son identificados de forma autom tica y el pico de Hb A es situado en el centro de la ventana de edici n de las curvas Los perfiles electrofor ticos obtenidos deben ser analizados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones potenciales de las diferentes variantes de la hemoglobina identificadas por las zonas Z1 a Z15 se muestran en la ventana de edici n y aparecen en el informe de resultados La tabla del p rrafo Interpretaci n presenta las variantes conocidas que pueden estar presentes en cada zona Cuando el programa identifica una fracci n de hemoglobina en una zona determinada el nombre de esa zona es enmarcado 174 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Los perfiles son centrados automaticamente respecto al pico de Hb A para facilitar su interpretaci n en caso de ausencia de detecci n de los picos de Hb A y o Hb A2 en un perfil aparece un s mbolo de alerta amarillo y el centrado del perfil se realiza entonces usando la posici n del pico de Hb A de los dos ltimos perfiles obtenidos an
17. 8 g dL total hemoglobin with 87 8 Hb F was mixed with a normal blood sample containing 10 8 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb F within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument gave a good linearity for Hb A and Hb F within the entire range studied with a maximum of about 14 7 g dL for Hb F in the analyzed sample between 0 0 and 87 8 of Hb F Hb S linearity One blood sample with Hb S containing 8 9 g dL total hemoglobin with 71 3 Hb S and 0 0 Hb A was mixed with a normal blood sample containing 14 4 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb S and 97 4 Hb A within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument gave a good linearity for Hb S within the entire range studied with a maximum of about 6 3 g dL for Hb S in the analyzed sample between 0 0 and 71 3 of Hb S and a good linearity for Hb A within the entire range studied with a maximum of about 14 0 g dL for Hb A in the analyzed sample between 0 0 and 97 4 of Hb A Hb C linearity One blood sample with Hb C containing 27 8 g dL total hemoglobin with 30 0 Hb C was mixed with a normal blood sample containing 25 4 g dL total hem
18. IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING CONTROL DE CALIDAD Despu s de cada cambio de lote del tamp n de an lisis o de modo de trabajo o despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con CAPICLEAN y antes de iniciar una nueva serie de an lisis es necesario realizar dos series de an lisis con el Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 usando el cargador n 0 espec fico previsto a este efecto ver el capitulo REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Tambi n se recomienda incluir una sangre control en cada serie de an lisis por ejemplo una muestra de control que contenga las hemoglobinas A F Sy C como el Control Hb AFSC SEBIA referencia n 4792 o una sangre normal el Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 o el Control Hb A2 Patol gico SEBIA referencia n 4779 IMPORTANTE Para un uso ptimo de las sangres control en el CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING es indispensable usar los tubos c nicos espec ficos previstos a este efecto sus tapones correspondientes y los adaptadores para los tubos de control ver EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS e identificar cada uno de esos tubos con una etiqueta con el c digo de barras de la sangre control analizada ver el p rrafo Control Hb A2 Normal para el uso de un adaptador para los tubos de controles 187
19. Manitoba II J Paris I Hb A2 variant denatured Hb S Z8 Hb F ac tyl e Hb Hinsdale Hb Alberta Hb Kempsey Hb Atlanta Hb Athens GA Waco Acetylated Hb F Hb Hinsdale Hb Alberta Hb Kempsey Hb Atlanta Hb Athens GA Waco 29 Hb A Hb Gorwihl Hinchingbrooke Hb Phnom Penh Hb Silver Springs Hb La Coruna Bougardirey Mali Hb Austin Hb Buenos Aires pic majeur Hb Chicago Hb Toulon Hb Okayama Hb Fontainebleau Hb Raleigh Hb Hekinan Hb Mosella Hb Dallas Hb Aztec Hb Little Rock Hb Frankfurt Hb Bethesda Hb M Boston M Osaka Hb Brisbane Great Lakes Hb Mizuho Hb Grange Blanche Hb San Diego Hb M Saskatoon pic majeur Hb Malm Hb Minneapolis Laos Hb Syracuse Hb Camperdown Hb A Hb Gorwihl Hinchingbrooke Hb Phnom Penh Hb Silver Springs Hb La Coruna Hb Bougardirey Mali Hb Austin Hb Buenos Aires major peak Hb Chicago Hb Toulon Hb Okayama Hb Fontainebleau Hb Raleigh Hb Hekinan Hb Mosella Hb Dallas Hb Aztec Hb Little Rock Hb Frankfurt Hb Bethesda Hb M Boston M Osaka Hb Brisbane Great Lakes Hb Mizuho Hb Grange Blanche Hb San Diego Hb M Saskatoon major peak Hb Malm Hb Minneapolis Laos Hb Syracuse Hb Camperdown 210 Hb Hope Hb M Iwate Hb Camden Tokuchi Hb Hope Hb M Iwate M Kankakee Hb Camden Tokuchi 417 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 TABLEAU TABLE CAPILLARYS HEMOGLOBIN E VARI
20. Porto Alegre y Hb S degradada migran muy cerca de la Hb F y pueden ser confundidas con esta ltima Las fracciones d biles que migran en la zona Z12 son a veces mal integradas Hb Bart demasiado asim tricas por ejemplo Es necesario entonces suprimir la integraci n autom tica e integrarlas manualmente Pueden observarse algunas fracciones d biles en las zonas de migraci n Z14 y Z15 Es indispensable confrontar estos resultados con el an lisis hematol gico del paciente y realizar an lisis complementarios para determinar la naturaleza de estas fracciones artefactos o anomal as de la hemoglobina Al analizar sangres de reci n nacidos las muestras que contengan Hb F en concentraci n elevada pueden presentar una fracci n Hb A alterada especialmente a causa de la migraci n de Hb F degradada en esa zona El porcentaje de Hb A indicado por el programa puede estar entonces sobreestimado Adem s en caso de presencia de variantes de la hemoglobina gt 4 S C E D Punjab por ejemplo en una sangre que contenga una concentraci n elevada de Hb F gt 60 96 es necesario realizar an lisis complementarios para confirmar la presencia de Hb A En los reci n nacidos hasta la edad de 6 9 meses se recomienda analizar varias muestras por ejemplo obtenidas mensualmente para controlar la concentraci n de Hb F Esto permitir comprobar la disminuci n de Hb F y la eventual presencia de una variante En caso de duda se aconseja con
21. S Hb C and Hb D are tabulated below y CAPILLARYS HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 instrument Range of Hb values Hb fraction Number of samples pea one y Intercept Slope HENOG DENIE CAPILLARYS 2 instrument Hb A 180 0 991 1 75 1 13 0 0 98 2 Hb A2 113 0 925 0 14 1 02 0 4 6 0 Hb F 181 0 991 0 13 1 06 0 0 98 0 Hb S 67 0 994 2 49 0 97 7 4 93 6 Hb C 13 0 985 1 29 0 92 12 8 45 3 Hb D 3 0 984 0 72 1 07 34 5 41 1 All abnormal hemoglobins or abnormal levels of normal hemoglobins detected with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 instrument were in agreement with the comparative HPLC system There was no case observed of false positive i e detection of an abnormal band or abnormal level of a normal band where no such abnormality existed 180 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Ref 2007 CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING 2012 06 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 TECNICA CAPILLARYS HEMOGLOBIN E EN EL SISTEMA CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING UTILIZACION La t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E realizada con el sistema autom tico CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING permite la separaci n en medio alcalino pH 9 4 de las hemoglobinas normales de la sangre humana A F y A2 y la detecci n de las principales hemoglobinas anormales especialmente las hemoglobinas S C E y D mediante electroforesis capilar a partir de sangre total o
22. SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Puede solicitar al Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como la informaci n relativa a la eliminaci n de los desechos PERFORMANCE DATA NOTE New CAPILLARYS HEMOGLOBIN E performance data have not yet been translated into each language of the instructions for use They are only available in French and English Each translation will be added in the instructions in the next version of the INSTRUCTIONS amp SAFETY DATA SHEETS DVD Precision The precision of the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument was evaluated in a study based on the Clinical Laboratory Standards Institute CLSI USA EP5 A2 guideline Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurements Methods The means standard deviations and coefficients of variation CV s n 80 were calculated for percentages of hemoglobin fractions for each sample using statistical tools recommended by CLSI The results obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure indicate a very good reproducibility for quantitative analysis for each hemoglobin component All electrophoregrams were also interpreted visually The results presented below have been obtained using the standard parameters of the CAPILLARYS software smoothing O and hemoglobin fractions automatic quantification with HEMOGLOBIN E
23. adicional necesario en caso de realizar series inferiores a 40 an lisis IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 6 SALINA Preparaci n Soluci n de NaCl 0 15 M 9 g L en agua destilada o desionizada Uso Para lavar los gl bulos rojos antes de conservarlos a 80 C si es necesario Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n salina puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera Deseche la soluci n al cabo de 3 meses o si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana Para una conservaci n prolongada a ada 1 g L de azida s dica NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de
24. colores contenedor conector en cada cambio de contenedor La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar e contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 CONTROL DE CALIDAD Despu s de cada cambio del contenedor del tamp n de an lisis incluso si el lote no cambia o de modo de trabajo despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con CAPICLEAN o despu s de activar los capilares y antes de iniciar una nueva serie de an lisis es necesario realizar dos series de an lisis con el Control Hb AF SEBIA referencia n 4777 usando el cargador n 0 espec fico previsto a este efecto ver el cap tulo REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Tambi n se recomienda incluir una sangre de control en cada serie de an lisis por ejemplo una muestra de control que contenga las hem
25. culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante 4 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 a 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Ver el manual de instrucciones del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING SEBIA Use el cargador de muestras espec fico para el mantenimiento n 100 Coloque en este cargador en la posici n 1 un tubo de hem lisis que contenga 2 mL de la soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente Introduzca el cargador n 100 de mantenimiento en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING En el men de la ventana MANTENIMIENTO que aparecer en pantalla seleccione la opci n Iniciar la limpieza de la c nula soluci n de hipoclorito de sodio y luego valide Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de la luz solar y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de cidos y de amo
26. electroforesis de las hemoglobinas de la sangre humana es un an lisis muy til en el laboratorio de an lisis cl nicos para investigar las anomal as cualitativas y cuantitativas de la hemoglobina Paralelamente a las t cnicas de electroforesis en diferentes soportes entre los que est el gel de agarosa se ha desarrollado la t cnica de electroforesis capilar que ofrece las ventajas de una automatizaci n completa del an lisis separaciones r pidas y una resoluci n excelente Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica realizada en un tubo de di metro interno inferior a 100 um lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida El sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING usa el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de pH dado y seg n el pH del electrolito de un flujo electroendosm tico m s o menos importante El sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING posee una serie de capilares en paralelo permitiendo realizar 8 an lisis simult neos a partir de sangre total En este sistema la inyecci n en los capilares de las muestras diluidas con la soluci n hemolisante se realiza en el nodo por aspiraci n La separaci n se realiza a continua
27. etiqueta con c digo de barras y analizado con el cargador n O usando el adaptador ver el p rrafo anterior Ser tratado autom ticamente con la soluci n hemolisante Se recomienda incluir el Control Hb A2 Normal en cada serie de an lisis Los valores obtenidos deben estar comprendidos entre los valores espec ficos de cada lote IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal colocado en un cargador cualquiera es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo para control que contenga el Control Hb A2 cierre el tubo con su tap n espec fico al usarlo y col quelo en el adaptador situado en el cargador Uso de un adaptador de tubos c nicos para los controles Este adaptador sirve para sostener los tubos c nicos para sangres de control en un cargador n 0 en un cargador para muestras del sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Tiene 2 marcas que permiten estimar el volumen de sangre de control disponible para realizar el an lisis cuando el tubo est insertado en el adaptador la marca superior est situada a la altura de la parte superior del adaptador y corresponde a un volumen de unos 250 pL de sangre de control en el tubo Si el volumen de la sangre de control alcanza este nivel lo supera es suficiente para realizar el an lisis completo de esa sangre de control con el cargador n 0 cuando el tubo est insertado en el adaptador la marca inferior est situada a la altura
28. gl bulos rojos con 10 vol menes de salina centrifugue despu s de cada lavado y elimine el exceso de salina de la superficie del co gulo globular lavado agite en el v rtex antes de congelarlo Las sangres congeladas a 80 C son estables un m ximo de 3 meses IMPORTANTE Para una conservaci n ptima de las muestras no las conserve a 20 C sino a 80 C vea la BIBLIOGRAF A J Bardakdjian Michau et al 2003 NOTA No conserve las sangres a temperatura ambiente Las hemoglobinas Hb de las muestras conservadas entre 2 y 8 C se degradan progresivamente En una muestra conservada m s de 7 d as en nevera como consecuencia de la degradaci n de la muestra aparece una fracci n d bil correspondiente a metahemoglobina en la zona de migraci n de la Hb S en presencia de Hb C aparece una fracci n correspondiente a la Hb C degradada en posici n an dica respecto a la Hb A2 pero sin ninguna interferencia con sta zona Z4 vea la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb O Arab aparece una fracci n correspondiente a Hb O Arab degradada en la zona de migraci n de la Hb S zona Z5 vea la tabla p rrafo Interpretaci n 1 en presencia de Hb E aparece una fracci n correspondiente a Hb E degradada en la zona Z6 vea la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb S aparece una fracci n correspondiente a Hb S degradada en la zona de migraci n de la Hb F zona Z7 vea la tabla del p rr
29. humana normal Despu s de la reconstituci n use directamente el Control Hb AFSC como una muestra de sangre a analizar o como control de migraci n con el cargador n 0 ver el p rrafo anterior Ser tratado autom ticamente con la soluci n hemolisante Se recomienda incluir el Control Hb AFSC en cada serie de an lisis IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb AFSC en el CAPILLARYS 2 es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contenga el Control Hb AFSC corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Ver las instrucciones del Control Hb AFSC Como ninguna prueba de an lisis puede probar la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Control Hb AFSC debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Este control analizado usando t cnicas autorizadas por una autoridad competente FDA ANSM es negativo para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final d
30. la formaci n de espuma Control de calidad con el cargador n 0 El Control Hb AFSC debe ser usado de la forma siguiente Dispense el Control Hb AFSC reconstituido en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte en la posici n 1 del cargador espec fico n O del CAPILLARYS 2 previsto a este efecto equipado con un segmento de diluci n nuevo 196 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb AFSC es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contenga el Control Hb AFSC corte el tap n del microtubo antes de usarlo Dispense 4 mL de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis sin que se formen burbujas de aire coloque este tubo en la posici n 8 del cargador n 0 IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de soluci n hemolisante antes de colocarlo en el cargador Inicie el an lisis Introduzca el cargador n 0 en el sistema CAPILLARYS 2 seleccione lt diluci n autom tica gt en la ventana que aparecer en pantalla y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados Control de calidad entre una serie de muestras El Control Hb AFSC debe ser usado como una sangre
31. la hemoglobina adulta Las primeras hemoglobinas anormales estudiadas y las m s numerosas son debidas a una modificaci n de la carga el ctrica global de la mol cula lo que permite detectarlas claramente por electroforesis Cinco hemoglobinas anormales principales presentan un inter s particular desde un punto de vista antropol gico y m dico S C E O Arab y D La t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N est destinada a la detecci n de las hemoglobinopat as y las alfa talasemias Hemoglobina S Es la variante m s frecuente y es debida a una sustituci n por mutaci n de un cido glut mico de la cadena B amino cido cido n 6 por una valina amino cido neutro presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH de an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que las hemoglobinas A y F En la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N en tamp n alcalino la hemoglobina S migra antes de las fracciones A y F Hemoglobina C La mutaci n es debida a la sustituci n de un cido glut mico de la cadena B por una lisina amino cido alcalino n 6 presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH de an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que las hemoglobinas A F y S Las hemoglobinas C E y O Arab no se superponen en el perfil electrofor tico
32. moglobinopathies Techniques et Biologie 3 174 178 JM Hempe JN Granger and RD Craver 1997 Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants Electrophoresis 18 1785 1795 T H J Huisman and J H P Jonxis 1977 The hemoglobinopathies techniques of identification Marcel Dekker New York Jellum E et al Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis J Chromatogr B 689 155 164 1997 Joutovsky A Hadzi Nesic J and Nardi MA 2004 HPLC retention time as a diagnostic tool for hemoglobin variants and hemoglobinopathies a study of 60 000 samples in a clinical diagnostic laboratories Clin Chem 50 10 1736 1747 8 J S Krauss PA Drew Jonah M Trinh S Shell L Black and Baisden 1986 Densitometry and microchromatography compared for determination of the hemoglobin C and A2 proportions in hemoglobin C and hemoglobin SC disease and in hemoglobin C trait Clin Chem 32 5 860 863 9 Landers JP Clinical Capillary Electrophoresis Clin Chem 41 495 509 1995 10 C Livingstone 1986 The hemoglobinopathies Edit London 11 M Maier Redelsberger Girot 1989 Diagnostic biologique des maladies de l h moglobine Feuillets de biologie 170 12 Oda RP et al Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids Electrophoresis 18 1715 1723 1997 13 R G Schneider 1978 Methods for detection of hemoglobin variants and he
33. proteol ticos surfactantes y aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo ATENCI N La soluci n CAPICLEAN puede causar irritaci n o quemaduras cut neas oculares o de las mucosas Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN como m nimo una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se realicen en menos de una semana Consulte las instrucciones de uso del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE Despu s de la limpieza de la c nula de muestras no reutilice el segmento de diluci n Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO LO CONGELE Pueden observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante 4 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con a
34. separaci n de las diferentes fracciones facilita el diagn stico de la drepanocitosis ya que permite diferenciar la fracci n S de otras variantes de la hemoglobina Para uso en diagn stico In Vitro PRINCIPIO DEL TEST La hemoglobina es una mol cula compleja compuesta por cuatro cadenas polipept dicas id nticas dos a dos estando cada cadena ligada al hemo que es un n cleo tetrapirr lico porfirina ligado a un tomo de hierro El hemo es com n a todas las hemoglobinas La parte proteica responsable del tipo de hemoglobina se denomina globina Se conocen principalmente las cadenas polipept dicas a B y y En humanos podemos encontrar las hemoglobinas normales siguientes Hemoglobina A 02 B2 Hemoglobina A2 a2 52 Hemoglobina fetal F a2 y2 La cadena o es com n a estas tres hemoglobinas La estructura espacial de la hemoglobina como la del resto de prote nas depende de la naturaleza y la secuencia de los amino cidos que forman las cadenas Las uniones que se forman entre los diferentes amino cidos son responsables de la forma de la mol cula de su estabilidad y de sus propiedades Situadas en un campo el ctrico las hemoglobinas se desplazan en funci n de su carga del tama o de la mol cula de la fuerza i nica del pH del tamp n y de la naturaleza del soporte Las variantes de la hemoglobina son debidas a mutaciones de algunos amino cidos que implican cargas de superficie diferentes en la hemoglob
35. soluci n de lavado reconstituida y el agua destilada o desionizada usada para la limpieza de los capilares IMPORTANTE Cambie sistem ticamente los filtros al empezar un nuevo kit Enrosque un filtro al final de cada tubo que cuelga de los tapones de los contenedores de tamp n soluci n hemolizante soluci n de lavado y agua destilada o desionizada Al cambiar los filtros lave los conectores y los tubos con agua destilada o desionizada Los filtros usados tambi n deben lavarse con agua antes de desecharlos Conservaci n Antes de usarlos los filtros deben conservarse en su embalaje original herm ticamente cerrado en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera 170 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCION Ver las fichas de datos de seguridad 1 CONTROL Hb A2 NORMAL Composici n El Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 se obtiene a partir de una mezcla de sangres humanas normales Un procedimiento de estabilizaci n permite conservar el Control Hb A2 Normal en forma liofilizada Aplicaci n El Control Hb A2 Normal est destinado al control de migraci n antes de iniciar una nueva serie de an lisis despu s del an lisis de 10 cargadores sucesivos y al final de una serie de an lisis asi como al control de calidad del m todo de determinaci n de la hemoglobina humana A2 mediante la t cnica electrofor tica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en el CAPILLARYS 2 Reconstitu
36. un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm 172 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA referencia n 1222 2 Cargadores de muestras suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada contenedor de soluci n de lavado y contenedor de desechos MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se realiza con sangres frescas recogidas en anticoagulante EDTA citrato o heparina No use anticoagulantes que contengan yodoacetato Las sangres deben ser obtenidas seg n los m todos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las sangres pueden conservarse un m ximo de siete d as en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones prolongadas congele r pidamente las muestras a 80 C como m ximo durante las 8 horas siguientes a su obtenci n despu s de haber lavado los gl bulos rojos seg n el procedimiento siguiente centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m elimine el plasma lave 2 veces los
37. 1 0 15 1 6 2 6 1 8 Between run reproducibility CV 0 4 0 0 12 0 4 0 0 0 6 f Between day reproducibility CV 0 1 0 7 0 0 0 6 0 7 0 6 Total CV 1 6 12 1 9 1 7 26 1 6 Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb F 1 1 83 65 2 Within run reproducibility CV 0 7 I 0 3 Between run reproducibility CV 0 8 0 4 Between day reproducibility CV d 0 3 0 5 Total CV f 14 0 7 190 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb S 33 9 f Within run reproducibility CV 0 4 Between run reproducibility CV 0 4 f Between day reproducibility CV 0 1 Total CV 1 0 6 In addition none of the repeats showed false positive or false negative values Reproducibility between lots and instruments The reproducibility study was conducted using 7 different blood samples that were tested on 3 CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instruments with 3 lots of CAPILLARYS HEMOGLOBIN E kits The analyzed blood samples included 2 samples with normal Hb A2 level No 1 and 5 2 samples with increased Hb A2 level No 2 and 6 1 sample with low Hb A2 level No 3 1 pathological sample with Hb F and Hb S No 4 and 1 sample with incre
38. 2 en presencia de Hb C ATENCI N En algunos casos de hemoglobina C homozigosis o debido a un problema t cnico las fracciones de Hb A2 y Hb C no son ajustadas lo que implica una infravaloraci n de estas fracciones Se recomienda entonces cuantificar la fracci n Hb A2 usando otra t cnica LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico CAPILLARYS 2 permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores de reactivo si no se hace correctamente los contenedores pueden despresurizarse y los an lisis pueden verse afectados y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de contenedor La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contendor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro import
39. 26 working days at 2 different times of the day Within each run samples were analyzed in duplicate The following table summarizes the total instrument reagent C V range for the individual hemoglobin Hb A Hb A2 Hb F and Hb S fractions tested Hemoglobin Total CV range HbA 0 0 3 1 Hb A2 0 0 3 7 Hb F 0 3 1 5 Hb S 0 3 0 6 Linearity The linearity of the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 instrument was evaluated in a study based on the Clinical Laboratory Standards Institute CLSI USA EP6 A guideline Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A statistical Approach The results for percentages of hemoglobin fractions were analyzed using statistical tools recommended by CLSI Hb A2 linearity One Hb A2 enriched blood sample containing 13 2 g dL total hemoglobin with 9 9 Hb A2 was mixed with a Hb A2 depleted blood sample containing 13 4 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb A2 within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument gave a good linearity for Hb A and Hb A2 within the entire range studied with a maximum of about 1 3 g dL for Hb A2 in the analyzed sample between 0 0 and 9 9 of Hb A2 Hb F linearity One umbilical cord blood sample containing 16
40. ANTS POTENTIELS PR SENTS DANS CHAQUE ZONE POTENTIAL VARIANTS LOCATED IN EACH ZONE Zone H moglobines Hemoglobins Hb Hb A d grad e Hb Providence pic X Asn Hb K Woolwich Hb Lombard Hb Kaohsiung New York Hb Fannin Lubbock Hb Andrew zi Minneapolis Hb Jackson Hb Himeji variant de Hb A2 I I Texas Denatured Hb A Hb Providence X Asn peak Hb K Woolwich Hb Lombard Hb Kaohsiung New York Hb Fannin Lubbock Hb Andrew Minneapolis Hb Jackson Hb Himeji I I Texas Hb A2 variant Hb Bart Hb Cemenelum Hb J Calabria J Bari Hb Providence pic X Asp Hb J Rajappen Hb Grady Hb J Anatolia Hb J Broussais Tagawa l Hb J Chicago Hb J Oxford I Interlaken Hb J Toronto Hb J Meinung J Bangkok Hb Ube 2 Hb Mexico J Paris Il 212 Hb J Habana Hb J Baltimore N New Haven Hb J Paris I J Aljezur Hb Bart s Hb Cemenelum Hb J Calabria J Bari Hb Providence X Asp peak Hb J Rajappen Hb Grady Hb J Anatolia Hb J Broussais Tagawa l Hb J Chicago Hb J Oxford I Interlaken Hb J Toronto Hb J Meinung J Bangkok Hb Ube 2 Hb Mexico J Paris Il Hb J Habana Hb J Baltimore N New Haven Hb J Paris I J Aljezur Hb J Rovigo Hb N Baltimore Hopkins l Hb J Norfolk Kagoshima Hb J Kaohsiung J Honolulu Z13 Hb J Rovigo Hb N Baltimore Hopkins l Hb J Norfolk Kagoshima Hb J Kaohsiung J Honolulu Hb N Seattle Z14 Hb N Seattle Hb H Hb I Texas Z15 Hb H Hb I Texas
41. Arab c2 Hb A2 Hb O Arab Hb E meth mogobine Hb C d grad e c3 Hb E methemoglobin denatured Hb C Hb S CA Hb S Hb D Punjab D Los Angeles Hb G Philadelphie Hb Korle Bu G Accra Hb E d grad e C5 Hb D Punjab D Los Angeles Hb G Philadelphia Hb Korle Bu G Accra denatured Hb E Hb S d grad e C6 Denatured Hb S HbF C7 Hb F Hb F d grad e c9 Denatured Hb F HbA C10 Hb A Hb A d grad e Hb Hope CH Denatured Hb A Hb Hope Hb Bart C12 Hb Bart s 425 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SCHEMAS FIGURES CAPILLARYS SANGS DE CORDONS CAPILLARYS CORD BLOOD PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 1 Figure 2 mane cs cre c12 cn ce sen ce cs c4 E o L KE H A EA H wies m E EC 7 SE UE cms o E 39 E e TOR Sang de cordon normal avec Hb A2 Normal cord blood sample with Hb A2 Sang de cordon normal Normal cord blood sample Figure 3 Figure 4 on on Em oe cs cs c4 c2 ct c12 Er ce cs io c2 ke HOF ES e 80 100 1 140 LJ 180 220 240 260 280 spo 4 20 40 60 80 400 420 140 160 180 200 220 240 Sang de cordon avec variant Hb S Cord blood sample with Hb S variant Sang de cordon avec Hb A faible Cord blood sample with faint Hb A
42. HEMOGLOBIN E en el instrumento para electroforesis CAPILLARYS 2 o despu s de una parada prolongada m s de una semana se recomienda realizar 3 series de an lisis sucesivas con el Control Hb A2 Normal Despu s de instalar el instrumento autom tico CAPILLARYS 2 al realizar la primera serie de an lisis de sangres aparecer un s mbolo de alerta rojo en caso de ausencia de hemoglobina A en una de las muestras que indica que no es posible centrar el perfil vea el p rrafo An lisis de los resultados Se aconseja entonces analizar una muestra que contenga hemoglobina A en el capilar afectado y volver a analizar la muestra sin hemoglobina A coloc ndola en un capilar que ya haya detectado la presencia de hemoglobina A Control de calidad El Control Hb A2 Normal debe ser usado como una sangre humana normal Despu s de la reconstituci n use directamente el Control Hb A2 Normal como una muestra de sangre a analizar o como control de la migraci n con el cargador n 0 vea el p rrafo anterior Ser tratado autom ticamente con la soluci n hemolisante Se recomienda incluir el Control Hb A2 Normal en cada serie de an lisis Los valores obtenidos deben estar comprendidos entre los valores espec ficos de cada lote IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal colocado en un cargador cualquiera es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtu
43. RCING recuperaci n de los cargadores despu s del an lisis LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING 1 PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFORETICO 1 Encienda el CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING y el ordenador de control 2 Abra el programa de gesti n PHORESIS y valide el nivel de los reactivos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 3 Use el kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E con el programa de an lisis HEMOGLOBIN E Para seleccionar el programa de an lisis HEMOGLOBIN E y conectar los contenedores de tamp n y de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E al aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING 4 El cargador de muestras posee 8 posiciones para tubos Coloque hasta 8 tubos primarios de sangre total tapados en cada cargador posiciones 1 a 8 de forma que el c digo de barras de cada tubo quede encarado hacia la ventana de lectura IMPORTANTE Si el n mero de tubos a analizar es inferior a 8 complete el cargador con tubos tapados que contengan agua destilada o desionizada 5 Ponga un segmento de diluci n nuevo en cada cargador En caso de ausencia del segmento el cargador ser expulsado 6 Introduzca el o los cargador es completo s en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING por el orificio de entrada situado en medio del aparato Se pueden introducir hasta trece cargadores a la vez pudi ndose introducir nuevos cargadores de fo
44. Z2 zona de migraci n de la Hb C Z3 zona de migraci n de la Hb A2 La presencia de la variante Hb Constant Spring puede sospecharse en caso de analizar una muestra que presente una fracci n de la hemoglobina que migre en las zonas de migraci n Z2 Z3 Esta fracci n tambi n puede ser debida a la presencia de prote nas plasm ticas en la muestra por ejemplo en una muestra de paciente an mico con un cociente gl bulos rojos plasma disminuido El an lisis de los gl bulos rojos de la muestra sin prote nas plasm ticas permitir confirmar la presencia de esta variante Para ello prepare esta muestra seg n el m todo siguiente Centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m y deseche el plasma En un microtubo mezcle un volumen 50 pL de gl bulos rojos y 8 vol menes 400 ul de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Agite en el vortex durante 5 segundos Dispense 100 pL del hemolisado preparado en los pocillos de un segmento de diluci n verde nuevo Ponga este segmento es el cargador n 0 del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Introduzca el cargador en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING seleccione en la ventana que aparecer en pantalla Sample en diluci n manual y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados An lisis de muestras conservadas a 80 C Para analizar una mues
45. a activaci n de los capilares realice una segunda serie de an lisis con el control volviendo a introducir inmediatamente el mismo cargador n 0 con el mismo segmento de diluci n que contiene el Control Hb A2 Normal diluido en el primer an lisis y con el tubo de hem lisis vac o identificado con el c digo de barras del Control Hb A2 Normal en la posici n 1 En la ventana que aparece en pantalla con el t tulo lt Control Hb A2 Normal gt seleccione lt Diluci n manual gt y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados IMPORTANTE El pico de hemoglobina A del Control Hb A2 Normal debe presentar una densidad ptica DO m nima de 0 10 Por debajo de este valor el centrado del perfil electrofor tico no se puede hacer correctamente Durante el an lisis de las muestras la identificaci n de las fracciones de la hemoglobina Hb A Hb F Hb A2 y Hb C as como la determinaci n de la zona de migraci n de otras variantes corren el riesgo de ser imposibles o err neas vea el p rrafo ANALISIS DE LOS RESULTADOS IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal es indispensable usar las etiquetas con c digos de barras destinadas a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contiene el Control Hb A2 corte el tap n del microtubo antes de usarlo NOTAS Antes de usar por primera vez el programa de an lisis
46. a identificar las fracciones de la hemoglobina presentes en una muestra sin hemoglobina A o hemoglobina A2 se recomienda preparar la muestra seg n el m todo siguiente Agite en el vortex el tubo de sangre total durante 5 segundos un tubo c nico para control mezcle un volumen 50 pL de la sangre total a analizar y un volumen 50 LL del Control Hb A2 Normal y tape el tubo Agite en el vortex durante 5 segundos Coloque el tubo con un adaptador para los tubos de controles en un cargador del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Introduzca el cargador en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Realice el an lisis de la muestra seg n el procedimiento habitual Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados IMPORTANTE En una muestra sin Hb A Hb A2 preparada seg n este m todo la cuantificaci n de las fracciones indicada en el perfil electrofor tico no tiene ning n significado y los valores obtenidos no deben ser tenidos en cuenta este procedimiento s lo permite la identificaci n de la o las variantes de la hemoglobina presentes en la muestra mediante las zonas de identificaci n gracias a que migrar n en la zona correcta La cuantificaci n de las fracciones se obtiene en este caso analizando la muestra inicial no mezclada antes de diluirla con la sangre control An lisis de una muestra con una fracci n adicional en las zonas de migraci n
47. a realizar 3 series de an lisis sucesivos con el Control Hb AF Control de calidad El Control Hb AF debe ser usado como una sangre humana normal Despu s de la reconstituci n use directamente el Control Hb AF como una muestra de sangre a analizar o como control de la migraci n con el cargador n 0 ver el p rrafo anterior Ser tratado autom ticamente con la soluci n hemolisante Se recomienda incluir el Control Hb AF en cada serie de an lisis IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb AF en el CAPILLARYS 2 es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contenga el Control Hb AF corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Ver las instrucciones del Control Hb AF NOTA El segmento de diluci n que contenga el Control Hb AF hemolisado puede congelarse entre 18 C y 22 C No congele y descongele el segmento que contenga el control hemolisado m s de 3 veces Como ninguna prueba de an lisis puede probar la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Control Hb AF debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Este control analizado usando t cnicas autorizadas por una autoridad competente FDA ANSM es negativo para la presencia del ant geno de superficie d
48. aci n de la Hb F degradada en esta zona El porcentaje de Hb A indicado por el programa puede estar entonces sobreestimado Adem s en caso de presencia de variantes de la hemoglobina gt 4 S C E D Punjab por ejemplo en una sangre que contenga una concentraci n elevada de Hb F gt 60 es necesario realizar an lisis complementarios para confirmar la presencia Hb A En los reci n nacidos hasta la edad de 6 9 meses se recomienda analizar varias muestras por ejemplo obtenidas mensualmente para controlar la concentraci n de Hb F Esto permitir comprobar la disminuci n de Hb F y la eventual presencia de una variante En caso de duda se aconseja confirmar el resultado con una t cnica complementaria y realizar un an lisis a los padres Caso en que la hemoglobina F Hb F puede estar aumentada excepto en los reci n nacidos encaso de embarazo pacientes con drepanocitosis con mas de 2 a os de edad tratados con Hydrea hidroxicarbamida y o transfusionados y o que presenten naturalmente una cantidad incrementada de Hb F debido a un fen meno de compensaci n pacientes con m s de 2 a os de edad con el desorden PHHF persistencia hereditaria de Hb F hay entre un 20 y un 40 de Hb F en los heterocigotos pacientes con m s de 2 a os de edad que presenten leucemia de cualquier tipo anemia hemol tica hereditaria diabetes enfermedad tiroidea hiperactividad de la m dula sea mieloma m ltiple o un c ncer en
49. afo Interpretaci n en presencia de Hb A aparece una fracci n correspondiente a Hb A degradada en posici n an dica respecto a la Hb A zona Z11 vea la tabla del p rrafo Interpretaci n En presencia de Hb F en el caso de sangres de reci n nacidos aparece una fracci n en la zona de migraci n de la Hb A zona 29 vea la tabla del p rrato Interpretaci n como consecuencia de una degradaci n de la muestra Si la muestra se ha conservado m s de 10 d as en nevera se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Preparaci n de las muestras Deje sedimentar los gl bulos rojos de la sangre total durante varias horas en nevera 2 8 C o centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m Elimine con cuidado el m ximo de plasma en las muestras recogidas en heparina elimine los aglomerados viscosos presentes en la interfase plasma gl bulos rojos Agite en el vortex durante 5 segundos IMPORTANTE No use muestras que contengan una altura m xima de plasma residual superior a 3 mm si hay m s de 3 mm de plasma el an lisis puede verse afectado Casos especiales An lisis de muestras sin Hb A Hb A2 estas muestras pueden ser cuantificadas pero no caracterizadas mediante las zonas de identificaci n Para identificar las fracciones de hemoglobina presentes en una muestra sin hemoglobina A o hemoglobina A2 se recom
50. an lisis despu s de analizar 10 cargadores sucesivos y al final de la serie de an lisis asi como al control de calidad del m todo de determinaci n de la hemoglobina humana A2 mediante la t cnica electrofor tica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Reconstituya con precisi n cada vial liofilizado de Control Hb A2 Normal con el volumen de agua destilada o desionizada indicado en las instrucciones del Control Hb A2 Normal D jelo en reposo 30 minutos y despu s ag telo suavemente evite la formaci n de espuma Control de migraci n IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal en el CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING es indispensable usar un tubo espec fico previsto a este efecto y su tap n correspondiente ver EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS Tubos y tapones para Controles e identificar ese tubo con una etiqueta con el c digo de barras del Control Hb A2 Normal El Control Hb A2 Normal debe ser usado de la forma siguiente Dispense el Control Hb A2 Normal reconstituido en un tubo para control previsto a este efecto Cierre el tubo con su tap n Coloque un adaptador para el tubo de control en la posici n 1 del cargador espec fico n 0 del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING previsto a este efecto equipado con un segmento de diluci n verde nuevo Ponga el tubo con el Control Hb A2 Normal identificado con la etiqueta con el c digo de barras del Control Hb A2 Normal en el adaptador sit
51. analysis program Reproducibility between capillaries from the same instrument Seven 7 different blood samples were run using the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure in all capillaries of the same CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument and with 1 lot of CAPILLARYS HEMOGLOBIN E kit The analyzed blood samples included 2 samples with normal Hb A2 level No 1 and 5 2 samples with increased Hb A2 level No 2 and 6 1 sample with low Hb A2 level No 3 1 pathological sample with Hb F and Hb S No 4 and 1 sample with increased Hb F level No 7 In this study each blood sample was analyzed on all capillaries from the same instrument including 40 runs over 20 working days at 2 different times of the day Within each run samples were analyzed in duplicate The results for Hb A Hb A2 Hb F and Hb S percentages are summarized in the following tables Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb A 96 97 2 95 4 98 1 54 9 97 4 93 8 343 Within run reproducibility CV 96 0 0 0 0 0 0 0 2 0 1 0 1 0 5 Between run reproducibility CV 96 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 6 Between day reproducibility CV 96 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 9 Total CV 95 0 0 0 1 0 0 0 4 0 1 0 1 1 2 Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb A2 96 2 8 4 7 1 9 2 8 2 6 6 2 1 Within run reproducibility CV 96 1 6
52. ante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultrapura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo Consulte el manual de instrucciones del CAPILLARYS 2 CONTROL DE CALIDAD Despu s de cada cambio de lote del tamp n de an lisis o de modo de trabajo o despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con CAPICLEAN y antes de iniciar una nueva serie de an lisis es necesario realizar dos series de an lisis con el Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 usando el cargador n 0 espec fico previsto a este efecto vea el cap tulo REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Tambi n se recomienda incluir una sangre de control en cada serie de an lisis por ejemplo una muestra de control que contenga las hemoglobinas A F Sy C como el Control Hb AFSC SEBIA referencia n 4792 o una sangre normal el Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 o el Control Hb A2 Patol gico SEBIA referencia n 4779 RESULTADOS Valores La detecci n directa en el capilar a 415 nm permite definir las concentraciones relativas porcentajes de cada fracci n Los valores normales de cada fracci n de hemoglobina han sido establecidos a partir de una poblaci n de 113 adultos hombres y mujeres en buen estado de salud que presentan valores normales en HPLC Hemoglobina A comprendida entre 96 7 y 97 8 Hemoglobina F 0 5
53. ar contaminaciones microbianas En caso de conservaci n prolongada a ada 350 uL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 3 CAPICLEAN Presentaci n El vial de soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteoliticos surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo ATENCI N Ver la ficha de datos de seguridad Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN al menos una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se hayan realizado en menos de una semana Ver las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE No reutilice el segmento de diluci n tras la limpieza de la c nula Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO CONGELAR Pueden observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part
54. ariantes pueden ser entonces imposibles o err neas ver el p rrafo AN LISIS DE LOS RESULTADOS IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo para control que contenga el Control Hb A2 cierre el tubo con su tap n espec fico al usarlo NOTAS Al usar por primera vez el programa de an lisis HEMOGLOBIN E en el autom tico para electroforesis CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING o despu s de un paro prolongado m s de una semana se recomienda realizar 3 series de an lisis sucesivas con el Control Hb A2 Normal Despu s de instalar el instrumento autom tico CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING al realizar la primera serie de an lisis de sangres aparecer un s mbolo de alerta rojo en caso de ausencia de hemoglobina A en una de las muestras que indica que no es posible centrar el perfil ver el p rrafo An lisis de los resultados Se aconseja entonces analizar una muestra que contenga hemoglobina A en el capilar afectado y volver a analizar la muestra sin hemoglobina A coloc ndola en un capilar que ya haya detectado la presencia de hemoglobina A Control de calidad El Control Hb A2 Normal debe ser usado como una sangre humana normal Despu s de la reconstituci n use directamente el Control Hb A2 Normal como una muestra de sangre a analizar o como control de la migraci n dispensado en un tubo para control con tap n identificado con una
55. as informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA 177 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 PERFORMANCE DATA NOTE New CAPILLARYS HEMOGLOBIN E performance data have not yet been translated into each language of the instructions for use They are only available in French and English Each translation will be added in the instructions in the next version of the INSTRUCTIONS amp SAFETY DATA SHEETS DVD Precision The precision of the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 instrument was evaluated in a study based on the Clinical Laboratory Standards Institute CLSI USA EP5 A2 guideline Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurements Methods The means standard deviations and coefficients of variation CV s n 80 were calculated for percentages of hemoglobin fractions for each sample using statistical tools recommended by CLSI The results obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure indicate a very good reproducibility for quantitative analysis for each hemoglobin component All electrophoregrams were also interpreted visually The results presented below have been obtained using the standard parameters of the CAPILLARYS software smoothing 0 and hemoglobin fractions automatic quantification with HEMOGLOBIN E analysis program Reproducibility between capillaries from the same instrument Seven
56. ased Hb F level No 7 In this study each blood sample was analyzed on all capillaries from the 3 CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instruments including 60 runs over 27 working days at 2 different times of the day Within each run samples were analyzed in duplicate The following table summarizes the total instrument reagent C V range for the individual hemoglobin Hb A Hb A2 Hb F and Hb S fractions tested Hemoglobin Total CV range Hb A 0 0 2 0 Hb A2 0 0 5 5 Hb F 0 2 1 3 Hb S 0 4 0 7 Linearity The linearity of the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument was evaluated in a study based on the Clinical Laboratory Standards Institute CLSI USA EP6 A guideline Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A statistical Approach The results for percentages of hemoglobin fractions were analyzed using statistical tools recommended by CLSI Hb A2 linearity One Hb A2 enriched blood sample containing 13 2 g dL total hemoglobin with 9 9 Hb A2 was mixed with a Hb A2 depleted blood sample containing 13 4 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb A2 within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument gave a good linearity for Hb A and H
57. avaloraci n de estas fracciones En este caso se recomienda cuantificar la fracci n Hb A2 con otra t cnica LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores de reactivo si no se hace correctamente los contenedores pueden despresurizarse y los an lisis pueden verse afectados y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de contenedor La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o colocar un nuevo contenedor de soluci n hemolisante y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n
58. b A2 within the entire range studied with a maximum of about 1 3 g dL for Hb A2 between 0 0 and 9 9 of Hb A2 Hb F linearity One umbilical cord blood sample containing 12 7 g dL total hemoglobin with 75 5 Hb F was mixed with a normal blood sample containing 8 8 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb F within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument gave a good linearity for Hb A and Hb F within the entire range studied with a maximum of about 9 6 g dL for Hb F between 0 0 and 75 5 of Hb F Hb S linearity One blood sample with Hb S containing 6 0 g dL total hemoglobin with 90 7 Hb S and 0 0 Hb A was mixed with a normal blood sample containing 9 1 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb S and 97 5 Hb A within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument gave a good linearity for Hb S within the entire range studied with a maximum of about 5 4 g dL for Hb S between 0 0 and 90 7 of Hb S and a good linearity for Hb A within the entire range studied with a maximum of about 8 9 g dL for Hb A between 0 0 and 97 5 of Hb A Hb C l
59. bo que contenga el Control Hb A2 corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Vea las instrucciones de uso del Control Hb A2 Normal Como ninguna prueba de an lisis puede probar la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Control Hb A2 Normal debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Esta sangre control analizada usando t cnicas aceptadas por una autoridad competente FDA ANSM es negativa para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 2 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para lavar los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um Renueve el agua cada dia para evitar contaminaciones microbianas En caso de conservaci n prolongada a ada 350 uL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada 171 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 3 CAPICLEAN Presentaci n El vial de la soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas
60. btenida con anticoagulante que contenga EDTA El sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING permite realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil de las hemoglobinas para el an lisis cualitativo o cuantitativo El an lisis se realiza en el hemolisado de gl bulos rojos de sangre total Las hemoglobinas separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante espectrofotometr a de absorbancia a 415 nm que es la longitud de onda de absorci n espec fica de las hemoglobinas Los perfiles electrofor ticos son analizados visualmente para detectar las anomal as La detecci n directa proporciona autom ticamente una cuantificaci n relativa precisa de cada fracci n individual de las hemoglobinas que presenta un inter s particular como la hemoglobina A2 para el diagn stico de las B talasemias Adem s la buena separaci n de las diferentes fracciones permite confirmar la identificaci n de las variantes de la hemoglobina y en particular diferenciar la hemoglobina S de la hemoglobina D y la hemoglobina E de la hemoglobina C La cuantificaci n de la hemoglobina A2 tambi n se puede realizar en presencia de hemoglobina E Para uso en diagn stico In Vitro Esta t cnica debe realizarse con los reactivos del kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E PRINCIPIO DEL TEST La hemoglobina es una mol cula compleja compuesta por cuatro cadenas polipept dicas id nticas dos a d
61. ci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las hemoglobinas se efect a a 415 nm en el lado cat dico Los capilares se lavan antes de cada an lisis con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n de pH alcalino usado el orden de migraci n de las principales hemoglobinas normales y anormales es el siguiente del c todo al nodo 5A 2 variante de A2 C A2 0 Arab E S D G Filadelfia F A Hope Bart J N Baltimore y H Hay que tener en cuenta que la anhidrasa carb nica no se detecta en el perfil electrofor tico de las hemoglobinas en la electroforesis capilar lo que permite identificar algunas variantes de la hemoglobina A2 en su zona de migraci n REACTIVOS SUMINISTRADOS EN EL KIT CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Ver la parte anterior T CNICA CAPILLARYS HEMOGLOBIN E EN EL SISTEMA CAPILLARYS 2 181 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCION Ver las fichas de datos de seguridad 1 CONTROL Hb A2 NORMAL Composici n El Control Hb A2 Normal SEBIA referencia N 4778 se obtiene a partir de una mezcla de sangres humanas normales Un procedimiento de estabilizaci n permite conservar el Control Hb A2 Normal en forma liofilizada Aplicaci n El Control Hb A2 Normal est destinado al control de la migraci n antes de realizar una nueva serie de
62. de Hb A2 J Rajappen variant de Hb A2 J Anatolia variant de Hb A2 J Oxford variant de Hb A2 J Broussais variant de Hb A2 J Toronto variant de Hb A2 Mexico variant de Hb A2 J Habana variant de Hb A2 J Rovigo Hb E d grad e Hb D Punjab D Los Angeles Hb Stanleyville Il Hb Osu Christiansborg Hb Leiden Hb G Philadelphia Hb Muravera Hb D Bushman Hb G Norfolk Hb Matsue Oki Hb D Ouled Rabah Hb Lepore Lepore BW Hb Muskegen Hb D Ibadan Hb Buenos Aires minor peak Hb Summer Hill Hb Q India Hb Q Iran Hb Korle Bu G Accra Hb K ln Hb Fort Worth Hb G Taipei Hb Winnipeg Hb G Siriraj Hb G Pest Hb D lran Hb G Coushatta G Saskatoon Hb Inkster Hb Setif Hb Memphis Hb P Nilotic Hb Willamette J Rajappen Hb A2 variant J Anatolia Hb A2 variant J Oxford Hb A2 variant J Broussais Hb A2 variant J Toronto Hb A2 variant Mexico Hb A2 variant J Habana Hb A2 variant J Rovigo Hb A2 variant denatured Hb E Z7 Hb F Hb Q Thailand G Taichung Hb Alabama Hb Chapel Hill Hb Bassett Hb G San Jos Hb Richmond Hb Barcelona Hb Geldrop Santa Anna Hb Porto Alegre Hb Swan River Hb Presbyterian Hb Burke Hb Manitoba Hb Manitoba Il variant de Hb A2 J Paris I Hb S d grad e Hb F Hb Q Thailand G Taichung Hb Alabama Hb Chapel Hill Hb Bassett Hb G San Jose Hb Richmond Hb Barcelona Hb Geldrop Santa Anna Hb Porto Alegre Hb Swan River Hb Presbyterian Hb Burke Hb Manitoba Hb
63. de diluci n 1 bolsa de 90 Filtros 4 filtros PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente y seg n las instrucciones suministradas LEA DETENIDAMENTE LAS INSTRUCCIONES 169 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 ATENCION No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultrapura como el agua para inyeccion 1 TAMPON Preparaci n El tamp n est listo para usar Contiene tamp n pH 9 4 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Tamp n para el an lisis de las hemoglobinas mediante electroforesis capilar Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El tamp n debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de tamp n No almacene el tamp n a temperatura ambiente cerca de una ventana o de una fuente de calor NO LO CONGELE IMPORTANTE Despu s de conservarlo a 2 8 C y antes de usarlo conviene dejar que el tamp n se atempere lo que requiere unas 3 horas si el contenedor de tamp n est lleno Si esta indicaci n no se respeta el funcionamiento de la t cnica puede verse afectado ATENCI N No caliente el tamp n al ba o mar a Un contenedor de tamp n em
64. de la parte baja del hueco y corresponde a un volumen de unos 100 pL de sangre de control en el tubo Si le volumen de la sangre de control alcanza este nivel o est comprendido entre las 2 marcas del adaptador es suficiente para realizar un an lisis de esa sangre de control en un cargador para muestras 182 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Vea las instrucciones de uso del Control Hb A2 Normal NOTA Para un uso ptimo en el CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING se recomienda repartir el Control en 4 al cuotas de 400 uL en microtubos antes de congelarlo Como ninguna prueba de an lisis puede probar la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Control Hb A2 Normal debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Esta sangre de control analizada usando t cnicas autorizadas por una autoridad competente FDA ANSM es negativa para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 2 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para lavar los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um Renueve el agua cada dia para evit
65. dentificaci n por ejemplo electroforesis de las cadenas de globina o consultar a un laboratorio especializado para un tipaje preciso de la variante IMPORTANTE Es indispensable realizar el an lisis hematol gico como resultado complementario La migraci n de una variante de la hemoglobina con una movilidad muy cercana a la fracci n Hb A implica una subestimaci n de la fracci n Hb A y de la variante por lo que se produce una sobrestimaci n de la fracci n Hb A2 Para obtener una cuantificaci n correcta de la fracci n Hb A2 es necesario eliminar la integraci n de los picos de la variante y de la Hb A para integrar conjuntamente esos 2 picos a continuaci n Las muestras de algunos pacientes que presentan una hemoglobina S homozigota y son tratados con Hydrea hidroxicarbamida pueden presentar una hemoglobina F cuya s ntesis ha sido inducida por el tratamiento En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E no se han observado diferencias netas de movilidad entre esta hemoglobina F inducida y la hemoglobina F nativa Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las variantes de la hemoglobina Resoluci n de problemas Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como l
66. e hasta 7 tubos primarios sin plasma en cada cargador posiciones 1 a 7 destapando cada tubo y de forma que el c digo de barras de cada tubo quede encarado hacia la ventana de lectura del mismo IMPORTANTE Si el n mero de tubos que va a analizar es inferior a 7 complete el cargador poniendo tubos con agua destilada o desionizada 5 Dispense 4 mL de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis sin que se formen burbujas de aire y coloque este tubo en la posici n 8 del cargador de muestras IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de soluci n hemolisante antes de colocarlo en el cargador 6 Ponga un segmento de diluci n nuevo en cada cargador En caso de ausencia del segmento el cargador ser expulsado 7 Introduzca el cargador n 0 con el Control Hb AF Ver el p rrafo anterior lt Control Hb AF gt para su uso en la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORDON en la parte Control de migraci n 8 Introduzca el los cargador es completo s en el sistema CAPILLARYS 2 por el orificio de entrada situado en medio del aparato Se pueden introducir hasta trece cargadores a la vez incluido el cargador n 0 para la sangre de control pudi ndose a adir nuevos cargadores de forma continua a medida que se vaya completando el an lisis de los cargadores ya introducidos 9 Saque de la cinta de salida situada a la izquierda del aparato los cargadores ya analizados 10 Coja con precauci n el segme
67. e la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpos anti VIH 1 y anti VIH 2 2 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para lavar los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um Renueve el agua cada dia para evitar contaminaciones microbianas En caso de conservaci n prolongada a ada 350 uL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 3 CAPICLEAN Presentaci n El vial de soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteoliticos surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo ATENCI N Ver la ficha de datos de seguridad Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN al menos una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se hayan realizado en menos de una semana Ver las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE No reutilice el segmento de diluci n tras la limpieza de la c nula
68. e un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA referencia n 1222 2 Cargadores suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada contenedor de soluci n de lavado y contenedor de desechos MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se realiza con muestras frescas de sangre de cord n umbilical de reci n nacidos recogidas con anticoagulante que contenga EDTA No use anticoagulantes que contengan yodoacetato Las sangres deben ser obtenidas seg n los m todos establecidos de uso en el laboratorio cl nico IMPORTANTE El volumen de sangre recogido no debe superar el volumen recomendado para el tubo usado En caso contrario el volumen de anticoagulante ser insuficiente para el volumen de sangre recogido y podr a observarse la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos Es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Las muestras sangres o gl bulos rojos sedimentados o centrifugados p
69. ectrolito de un flujo electroendosm tico m s o menos importante El sistema CAPILLARYS 2 posee una serie de capilares en paralelo permitiendo realizar 7 an lisis simult neos En este sistema la inyecci n en los capilares de las muestras diluidas con soluci n hemolizante se realiza en el nodo por aspiraci n La separaci n se realiza a continuaci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las hemoglobinas se efect a a 415 nm en el lado cat dico Los capilares se lavan antes de cada an lisis con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n de pH alcalino usado el orden de migraci n de las principales hemoglobinas normales y anormales es el siguiente del c todo al nodo amp 2 variante de A2 C A2 O Arab E S D G Filadelfia F A Hope Bart J N Baltimore y H Hay que tener en cuenta que la anhidrasa carb nica no se detecta en el perfil electrofor tico de las hemoglobinas en la electroforesis capilar lo que permite identificar algunas variantes de la hemoglobina A2 en su zona de migraci n REACTIVOS SUMINISTRADOS EN EL KIT CAPILLARYS HEMOGLOBIN E ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad COMPONENTES REF N 2007 Tampon listo para usar 2 viales de 700 mL Soluci n hemolizante lista para usar 1 vial de 700 mL Soluci n de lavado soluci n concentrada 1 vial de 75 mL Segmentos
70. elo permitiendo realizar 7 an lisis simult neos En este sistema la inyecci n en los capilares de las muestras diluidas con la soluci n hemolisante se realiza en el nodo por aspiraci n La separaci n se realiza a continuaci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las hemoglobinas se efect a a 415 nm en el lado cat dico Los capilares se lavan antes de cada an lisis con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n de pH alcalino usado el orden de migraci n de las principales hemoglobinas normales y anormales es el siguiente del c todo al nodo C A2 O Arab F Ouled Rabah E S D G Filadelfia Korle Bu F F degradada A A degradada y Bart Las variantes debidas a la mutaci n de la cadena gamma pueden aparecer en algunas zonas del perfil Hay que tener en cuenta que la anhidrasa carb nica no se detecta en el perfil electrofor tico de las hemoglobinas en la electroforesis capilar REACTIVOS SUMINISTRADOS EN EL KIT CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Ver la parte anterior T CNICA CAPILLARYS HEMOGLOBIN E EN EL SISTEMA CAPILLARYS 2 REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 CONTROL Hb AF Composici n El Control Hb AF SEBIA referencia n 4777 se obtiene a partir de una mezcla de sangres humanas normales de adultos y de sangres de cord n de reci n nacidos Un procedi
71. en day reproducibility CV 0 0 0 6 0 0 0 4 1 3 0 8 Total CV 1 8 13 27 1 6 2 7 1 5 Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb F 1 12 0 65 8 Within run reproducibility CV 0 5 0 2 Between run reproducibility CV 0 0 f 0 6 Between day reproducibility CV 0 4 1 0 Total CV 1 0 6 f 44 Sample Sample Sample Sample Sample Sample Sample No 1 No 2 No 3 No 4 No 5 No 6 No 7 Mean Hb S i 36 2 Within run reproducibility CV i 0 2 Between run reproducibility CV 0 1 Between day reproducibility CV 0 2 Total CV 1 1 0 3 In addition none of the repeats showed false positive or false negative values 178 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Reproducibility between lots and instruments The reproducibility study was conducted using 7 different blood samples that were tested on 3 CAPILLARYS 2 instruments with 3 lots of CAPILLARYS HEMOGLOBIN E kits The analyzed blood samples included 2 samples with normal Hb A2 level No 1 and 5 2 samples with increased Hb A2 level No 2 and 6 1 sample with low Hb A2 level No 3 1 pathological sample with Hb F and Hb S No 4 and 1 sample with increased Hb F level No 7 In this study each blood sample was analyzed on all capillaries from the 3 CAPILLARYS 2 instruments including 60 runs over
72. en los an lisis de un mismo paciente debido a la falta de homogeneidad de este tipo de muestra Se recomienda homogenizar bien este tipo de muestra de sangre antes de analizarla Interferencias y limitaciones Ver MUESTRAS PARA EL AN LISIS Analice nicamente muestras contenidas en los tubos de extracci n recomendados en el p rrafo EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS o en cualquier tubo de dimensiones equivalentes homologado para realizar an lisis cl nicos Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA para obtener informaci n relativa a estos dispositivos No use directamente muestras cuyo volumen sea inferior a 1 mL No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la presencia de hemoglobinas degradadas puede observarse en el perfil electrofor tico en forma de artefactos m s o menos numerosos despu s de 7 d as de conservaci n Si las muestras se han conservado m s de 10 d as se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Al analizar una muestra de sangre cuyo cociente gl bulos rojos plasma est disminuido caso de un paciente an mico puede sospecharse la presencia de una variante Hb Constant Spring cuando se observa una fracci n en las zonas de migraci n Z2 Z3 Esta fracci n puede ser debida a la presencia de prote nas plasm ticas en la muestra ver el p rrafo Preparaci n de las muestras Casos especial
73. entes fracciones permite confirmar la identificaci n de las variantes de la hemoglobina y en particular diferenciar la hemoglobina S de la hemoglobina D y la hemoglobina E de la hemoglobina C La cuantificaci n de la hemoglobina A2 tambi n se puede realizar en presencia de hemoglobina E Para uso en diagn stico In Vitro PRINCIPIO DEL TEST La hemoglobina es una mol cula compleja compuesta por cuatro cadenas polipept dicas id nticas dos a dos estando cada cadena ligada al hemo que es un n cleo tetrapirr lico porfirina ligado a un tomo de hierro El hemo es com n a todas las hemoglobinas La parte proteica responsable del tipo de hemoglobina se denomina globina Se conocen principalmente las cadenas polipept dicas a B y y En humanos podemos encontrar las hemoglobinas normales siguientes Hemoglobina A a2B2 Hemoglobina A2 a262 Hemoglobina fetal F a2y2 La cadena o es com n a estas tres hemoglobinas La estructura espacial de la hemoglobina como la del resto de las prote nas depende de la naturaleza y de la secuencia de amino cidos que forman las cadenas Las uniones que se forman entre los diferentes amino cidos son responsables de la forma de la mol cula de su estabilidad y de sus propiedades Situadas en un campo el ctrico las hemoglobinas se desplazan en funci n de su carga del tama o de la mol cula de la fuerza i nica del pH del tamp n y de la naturaleza del soporte empleado Las varian
74. es Cuando se detecte la presencia de una hemoglobina anormal se recomienda usar otras t cnicas de identificaci n por ejemplo electroforesis de las cadenas de globina o consultar a un laboratorio especializado para un tipado preciso de la variante IMPORTANTE Es indispensable realizar el an lisis hematol gico como resultado complementario La migraci n de una variante de la hemoglobina con una movilidad muy cercana a la fracci n Hb A implica una subestimaci n de la fracci n Hb A y de la variante por lo que se produce una sobrestimaci n de la fracci n Hb A2 Para obtener una cuantificaci n correcta de la fracci n Hb A2 es necesario eliminar la integraci n de los picos de la variante y de la Hb A para integrar conjuntamente esos 2 picos a continuaci n 189 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Las muestras de algunos pacientes con una hemoglobina S homocigota y tratados con Hydrea hidroxicarbamida pueden presentar una hemoglobina F cuya sintesis ha sido inducida por el tratamiento En la tecnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E no se han observado diferencias netas de movilidad entre esta hemoglobina F inducida y la hemoglobina F nativa Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las variantes de la hemoglobina Asistencia t cnica Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de
75. estra las variantes potenciales presentes en cada zona ATENCI N La graduaci n del eje de abscisas no puede en ning n caso usarse para la identificaci n de una variante de la hemoglobina 1 Anomal as cualitativas Hemoglobinopat as La mayor a son anomal as estructurales debidas a una sustituci n por mutaci n de un amino cido por otro en una de las cadenas Las consecuencias de la mutaci n var an en funci n de la posici n del amino cido mutado y del que le remplaza siendo particularmente necesaria la integridad de algunas partes de la mol cula para que sea viable y funcione correctamente Se han definido y descrito m s de 900 variantes de la hemoglobina adulta Las primeras hemoglobinas anormales estudiadas y las m s numerosas son debidas a una modificaci n de la carga el ctrica global de la mol cula lo que permite detectarlas claramente por electroforesis Cinco hemoglobinas anormales principales presentan un inter s particular desde un punto de vista antropol gico y m dico S C E O Arab y D El kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E est destinado a la detecci n de las hemoglobinopat as y las talasemias Hemoglobina S Es la variante m s frecuente y es debida a una sustituci n por mutaci n de un cido glut mico de la cadena B amino cido cido n 6 por una valina amino cido neutro presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida
76. fase de met stasis Si desea obtener m s informaci n visite la p gina web http Avww answers com topic fetal hemoglobin test Al analizar sangres de pacientes con drepanocitosis anemia falciforme que hayan recibido transfusiones y que presenten un porcentaje bajo de Hb A lt 10 la fracci n Hb S puede aparecer desplazada de la zona Z5 hacia la zona Z6 Es indispensable confrontar este resultado con el an lisis hematol gico y realizar an lisis complementarios para confirmar la presencia de Hb S Al analizar sangres de pacientes con drepanocitosis antes de una transfusi n puede observarse una variaci n del porcentaje de la fracci n Hb S en los an lisis de un mismo paciente debido a la falta de homogeneidad de este tipo de muestra Se recomienda homogenizar bien este tipo de muestra de sangre antes de analizarla Interferencias y limitaciones Vea MUESTRAS PARA EL AN LISIS No use muestras de sangre total no sedimentada No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la presencia de hemoglobinas degradadas puede observarse en el perfil electrofor tico en forma de artefactos m s o menos numerosos despu s de 7 d as de conservaci n Si las muestras se han conservado m s de 10 d as se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Cuando se detecta la presencia de una hemoglobina anormal se recomienda usar otras t cnicas de i
77. firmar el resultado con una t cnica complementaria y realizar un an lisis a los padres Casos en los que la hemoglobina F Hb F puede estar aumentada excepto en los reci n nacidos en caso de embarazo pacientes con drepanocitosis con m s de 2 a os de edad tratados con Hydrea hidroxicarbamida y o transfusionados y o que presenten naturalmente una cantidad incrementada de Hb F debido a un fen meno de compensaci n pacientes con m s de 2 a os de edad con el desorden PHHF persistencia hereditaria de Hb F hay entre un 20 y un 40 de Hb F en los heterocigotos pacientes con m s de 2 a os de edad que presenten leucemia de cualquier tipo anemia hemol tica hereditaria diabetes enfermedad tiroidea hiperactividad de la m dula sea mieloma multiple o un c ncer en fase de metastasis Si desea obtener m s informaci n visite la p gina web http Avww answers com topic fetal hemoglobin test Al analizar sangres de pacientes con drepanocitosis anemia falciforme que hayan recibido transfusiones y que presenten un porcentaje bajo de Hb A lt 10 96 la fracci n Hb S puede aparecer desplazada de la zona Z5 hacia la zona Z6 Es indispensable confrontar este resultado con el an lisis hematol gico y realizar an lisis complementarios para confirmar la presencia de Hb S Al analizar sangres de pacientes con drepanocitosis antes de una transfusi n puede observarse una variaci n del porcentaje de la fracci n Hb S
78. gador En caso de ausencia del segmento el cargador ser expulsado 7 Introduzca el o los cargador es completo s en el sistema CAPILLARYS 2 por el orificio de entrada situado en medio del aparato Se pueden introducir hasta trece cargadores a la vez pudi ndose a adir nuevos cargadores de forma continua a medida que se vaya completando el an lisis de los cargadores ya introducidos Cuando quiera analizar una sangre control use el cargador espec fico n 0 previsto a este efecto 8 Saque de la cinta de salida situada a la izquierda del aparato los cargadores ya analizados 9 Coja con precauci n el segmento de diluci n usado y des chelo ATENCI N Manipule con cuidado los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras de los tubos primarios de muestra y del cargador Diluci n de las sangres con la soluci n hemolizante con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura controlada por efecto Peltier durante unos 8 minutos Lectura a 415 nm y aparici n simult nea del perfil de las hemoglobinas en la pantalla del ordenador NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para el primer cargador introducido los perfiles correspondientes a los tubos analizados se obtienen al cabo de unos
79. gre normal de reci n nacido presenta pues una hemoglobina F mayoritaria una hemoglobina A minoritaria y una hemoglobina A2 ausente o presente en muy baja cantidad Si aparece un pico m s grande en la zona de migraci n de la Hb A2 hay que sospechar la presencia de una variante En ese caso el pico que aparezca en la zona de migraci n de la Hb A2 ser detectado por el sistema CAPILLARYS 2 pero deber n realizarse an lisis complementarios para confirmar la naturaleza de la variante En caso de ausencia de la hemoglobina A o de que est presente en baja cantidad sangre de beb prematuro deficiencia de s ntesis de la cadena beta etc tera o en caso de analizar muestras antiguas puede observarse una fracci n en la zona de migraci n C9 que precede a la zona de migraci n C10 de la Hb A Esta fracci n contiene hemoglobina F acetilada y hemoglobina F degradada El sistema CAPILLARYS 2 est programado para evitar confundir esta fracci n con la hemoglobina A Al analizar sangres de reci n nacidos las muestras que contengan Hb F en concentraci n elevada pueden presentar una fracci n Hb A alterada especialmente a causa de la migraci n de Hb F degradada en esa zona El porcentaje de Hb A indicado por el programa puede estar entonces sobreestimado Adem s en caso de presencia de variantes de la hemoglobina gt 4 S C E D Punjab por ejemplo en una sangre que contenga una concentraci n elevada de Hb F gt 60 es necesario realiza
80. gua destilada o desionizada fr a Uso Para limpiar la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS 2 SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Consulte las instrucciones de uso del CAPILLARYS 2 SEBIA Use el cargador de muestras espec fico para el mantenimiento n 100 Coloque en este cargador en la posici n 1 un tubo de hem lisis que contenga 2 mL de soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente Introduzca el cargador n 100 de mantenimiento en el sistema CAPILLARYS 2 En el men de la ventana MANTENIMIENTO que aparecer en pantalla seleccione la opci n Iniciar la limpieza de la c nula soluci n de hipoclorito de sodio y luego valide Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de los rayos solares y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de los cidos y del amoniaco 5 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n El vial de la soluci n de lavado concentrada SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares del CAPILLARYS 2 Reactivo
81. ias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas B S lo se ve afectada la s ntesis de la hemoglobina A Los porcentajes de las hemoglobinas F y A2 est n por tanto aumentados respecto a la hemoglobina A En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E los valores de las diferentes hemoglobinas normales obtenidos permiten detectar los casos de beta talasemias 3 Notas En caso de ausencia de la hemoglobina A se puede observar una fracci n d bil en la zona de migraci n de esta ltima Se trata de una hemoglobina F acetilada que representa de un 15 a un 25 de la hemoglobina F El sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING est programado para evitar confundir esta fracci n acetilada con la hemoglobina A Puede sospecharse la presencia de una variante de la hemoglobina A2 si una fracci n que presenta un porcentaje d bil de 0 5 a 3 es observada en una zona de migraci n comprendida entre la hemoglobina F y la hemoglobina 5A 2 variante de la A2 incluso dentro de las zonas habituales de migraci n de las hemoglobinas En caso de presencia de una variante de la hemoglobina A2 3A 2 o cualquier otra variante de la A2 se recomienda sumar el porcentaje de esta variante al de la hemoglobina A2 para un mejor diagn stico de las beta talasemias Algunas variantes de la hemoglobina Hb Camperdown y Hb Okayama por ejemplo migran muy cerca de la Hb A y pueden ser confundidas con esta ltima Algunas variantes de la hemoglobina Hb
82. ienda preparar la muestra siguiendo uno de los dos m todos siguientes Diluci n autom tica En un microtubo mezcle un volumen 80 pL de gl bulos rojos de la muestra a analizar un volumen de Control Hb A2 Normal 80 pL Agite en el v rtex durante 5 segundos Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte y despu s col quelo en un cargador de muestras del CAPILLARYS 2 Realice el an lisis de la muestra siguiendo el procedimiento habitual Diluci n manual Mezcle directamente en los pocillos de un segmento de diluci n verde nuevo 9 uL de Control Hb A2 Normal reconstituido con 9 uL de la muestra analizar y 90 pL de soluci n hemolizante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Agite la mezcla mediante pipeteos sucesivos Ponga este segmento en el cargador n 0 del CAPILLARYS 2 Introduzca el cargador en el sistema CAPILLARYS 2 y luego seleccione en la ventana que aparece en pantalla la opci n Sample en diluci n manual y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el tratamiento de los datos IMPORTANTE En una muestra sin Hb A Hb A2 preparada seg n estos dos m todos la cuantificaci n de las fracciones indicada en el perfil electrofor tico no tiene ning n significado y los valores obtenidos no deben ser tenidos en cuenta este procedimiento s lo permite la identificaci n de la o las variantes
83. iles obtenidos anteriormente en el mismo capilar en caso de imposibilidad de centrado del perfil aparece un s mbolo rojo de alerta y los picos de Hb A Hb F y Hb A2 no son identificados Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de densidad ptica insuficiente en un perfil electrofor tico del control de migraci n obtenido con el Control Hb AF identificado con su etiqueta con c digo de barras y analizado en un cargador n 0 aparece un mensaje de advertencia que permite usar o descartar este an lisis para la determinaci n de la posici n del pico de Hb F Despu s aparece un s mbolo violeta de alerta en la ventana de edici n y los picos de Hb A Hb A2 y Hb F no son identificados En todos estos casos las diferentes zonas de migraci n C1 a C12 no aparecen ni en la ventana de edici n ni en el informe de resultados LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico CAPILLARYS 2 permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores si no se hace correctamente los contenedores pueden despresurizarse y los an lisis pueden verse afectados y respetar el c digo de
84. ina y por consiguiente movilidades diferentes en la electroforesis Las anomal as de la hemoglobina son de dos tipos anomal as cualitativas o estructurales que se denominan hemoglobinopat as anomal as cuantitativas o de regulaci n que se denominan talasemias La electroforesis de las hemoglobinas de la sangre humana es un an lisis muy til en el laboratorio de an lisis cl nicos para investigar las anomal as cualitativas y cuantitativas de la hemoglobina Paralelamente a las t cnicas de electroforesis en diferentes soportes entre los que est el gel de agarosa se ha desarrollado la t cnica de electroforesis capilar que ofrece las ventajas de una automatizaci n completa del an lisis separaciones r pidas y una resoluci n excelente Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica realizada en un tubo de di metro interno inferior a 100 um lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida El sistema CAPILLARYS 2 usa el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de pH dado y seg n el pH del electrolito de un flujo electroendosm tico m s o menos importante El sistema CAPILLARYS 2 posee una serie de capilares en paral
85. inearity One blood sample with Hb C containing 11 5 g dL total hemoglobin with 33 2 Hb C was mixed with a normal blood sample containing 13 8 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb C within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument gave a good linearity for Hb C within the entire range studied with a maximum of about 3 8 g dL for Hb C in the analyzed sample between 0 0 and 33 2 of Hb C Hb D linearity One blood sample with Hb D containing 14 3 g dL total hemoglobin with 40 9 Hb D was mixed with a normal blood sample containing 14 0 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb D within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument gave a good linearity for Hb D within the entire range studied with a maximum of about 5 8 g dL for Hb D in the analyzed sample between 0 0 and 40 9 of Hb D 191 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Hb E linearity One blood sample with Hb E containing 10 8 g dL total hemoglobin with 96 1 Hb E was mixed with a normal blood sample containing 12 3 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb E within different proport
86. instrument and a commercially available HPLC system for hemoglobins analysis The measured values of hemoglobin fractions from both procedures were analyzed by a linear regression statistical procedure The results of linear regression analysis for Hb A Hb A2 Hb F and Hb S are tabulated below y CAPILLARYS HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument Range of Hb values T CAPILLARYS Hb fraction Number of samples E y Intercept Slope HEMOGLOBIN E with ous CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument Hb A 56 0 996 11 42 1 33 21 0 98 2 Hb A2 44 0 978 0 08 1 13 01 69 Hb F 56 1 000 0 38 0 93 0 0 79 0 Hb S 8 0 998 0 06 1 07 6 8 41 2 All abnormal hemoglobins or abnormal levels of normal hemoglobins detected with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument were in agreement with the comparative HPLC system There was no case observed of false positive i e detection of an abnormal band or abnormal level of a normal band where no such abnormality existed Accuracy External correlations NOTE The results presented below have been obtained from 2 external accuracy studies that have been performed in 2 hospital laboratories located in the USA The diagnosis was based on a routine HPLC procedure In study No 1 the levels of hemoglobin fractions were measured in 123 blood samples including 33 samples with hemoglobin variants such as he
87. ions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument gave a good linearity for Hb E within the entire range studied with a maximum of about 10 4 g dL for Hb E in the analyzed sample between 0 0 and 96 1 of Hb E Accuracy Internal correlation The internal concordance study of the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument was evaluated in a study based on the Clinical Laboratory Standards Institute CLSI USA EPO9 A2 guideline Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples Approved Guideline Second Edition Interim Revision The results for percentages of hemoglobin fractions were analyzed using statistical tools recommended by CLSI NOTE The results presented below have been obtained from 1 internal accuracy study that has been performed in SEBIA facility The analyzed blood samples and their diagnostic assessment were provided by 11 hospital laboratories in France and USA The diagnosis was based on a routine HPLC procedure The levels of hemoglobin fractions were measured in 56 blood samples including 20 samples with hemoglobin variants such as hemoglobins S C D and E both by electrophoretic separations obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING
88. la variante IMPORTANTE Es indispensable realizar el an lisis hematol gico como resultado complementario En la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N la presencia en la muestra de sangre de concentraciones elevadas de triglic ridos hasta 32 mmol L o de bilirrubina hasta 161 mg L no interfiere en el an lisis de las hemoglobinas y la detecci n de hemoglobinas anormales Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las variantes de la hemoglobina Asistencia t cnica Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Puede solicitar al Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como la informaci n relativa a la eliminaci n de los desechos 201 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY 1 J Bardakdjian Michau J L Dhondt R Ducrocq F Galact ros A Guyard F X Huchet A Lahary D Lena Russo P Maboudou M L North C Prehu A M Soummer M Verschelde Wajcman 2003 Bonnes pratiques de l tude de l h moglobine Ann Biol Clin 61 401 409 V F Fairbanks ed 1980 Hemoglobinopathies and thalassemia Laboratory methods and case studies Brian C Decker New York F Galacteros 1986 Thalass mie dr panocytose et autres h
89. la zona de migraci n de esta Ultima Se trata de una hemoglobina F acetilada que representa de un 15 a un 25 de la hemoglobina F El sistema CAPILLARYS 2 est programado autom ticamente para evitar confundir esta fracci n acetilada con la hemoglobina A Puede sospecharse la presencia de una variante de la hemoglobina A2 si una fracci n que presenta un porcentaje d bil de 0 5 a 3 es observada en una zona de migraci n comprendida entre la hemoglobina F y la hemoglobina 8A variante de la A2 incluso dentro de las zonas de migraci n habituales de las hemoglobinas Si est presente una variante de la hemoglobina A2 3A 2 o cualquier otra variante de la A2 se recomienda sumar el porcentaje de esta variante al de la hemoglobina A2 para un mejor diagn stico de las beta talasemias Algunas variantes de la hemoglobina Hb Camperdown y Hb Okayama por ejemplo migran muy cerca de la Hb A y pueden ser confundidas con esta ltima Algunas variantes de la hemoglobina Hb Porto Alegre y Hb S degradada migran muy cerca de la Hb F y pueden ser confundidas con esta ltima Las fracciones d biles que migran en la zona Z12 son a veces mal integradas Hb Bart demasiado asim tricas por ejemplo Es necesario entonces suprimir la integraci n autom tica e integrarlas manualmente Al analizar sangres de reci n nacidos las muestras que contengan Hb F en concentraciones elevadas pueden presentar una fracci n Hb A perturbada especialmente a causa de la migr
90. lar todav a no es bien conocido Existen diferentes s ndromes talas micos Alfa talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas afectando por consiguiente a la s ntesis de las hemoglobinas fisiol gicas El exceso de s ntesis de las cadenas y y respecto a las cadenas a provoca la formaci n de tetr meros sin cadena o Hemoglobina Bart y 4 Hemoglobina 4 La hemoglobina Bart que posee un punto isoel ctrico relativamente bajo est presente en reci n nacidos aunque tambi n aparece menos frecuentemente en adultos La hemoglobina H no es visible en el reci n nacido En la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N la hemoglobina Bart migra en una posici n mucho m s an dica que la hemoglobina F y s lo est presente en forma de una fracci n ancha poco focalizada Beta talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas B S lo se ve afectada la s ntesis de la hemoglobina A Como el an lisis se realiza en sangre de cord n la cantidad de hemoglobina A2 presente en la muestra es insuficiente para permitir el diagn stico de una beta talasemia La t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N no permite por tanto diagnosticar la beta talasemia en reci n nacidos 3 Notas La hemoglobina A2 est generalmente ausente o presente en muy baja cantidad en las muestras de sangre de cord n umbilical de reci n nacidos en funci n del t rmino del embarazo Una san
91. lina puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera Deseche la soluci n al cabo de 3 meses o si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana Para una conservaci n prolongada a ada 1 g L de azida s dica NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS Onn ze Sistema de electroforesis capilar CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING SEBIA referencia n 1227 Cargadores suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Cargadores CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING para tubos de 11 mm SEBIA referencia n 1360 5 unidades Contenedores de plastico suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada contenedor de soluci n de lavado y contenedor de desechos Tubos de extracci n de 13 mm de di metro con los tapones correspondientes altura m xima del tubo tapado 90 mm di metro maximo del tap n 17 mm por ejemplo tubos de 13 x 75 mm BD Vac
92. lisis 184 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Para conservaciones prolongadas congele r pidamente las muestras a 80 C como m ximo durante las 8 horas siguientes a su obtenci n despu s de haber lavado los gl bulos rojos seg n el procedimiento siguiente Centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m deseche el plasma lave 2 veces los gl bulos rojos con 10 vol menes de salina centrifugue despu s de cada lavado y elimine el exceso de salina de la superficie del co gulo globular lavado agite en el vortex antes de congelarlo Las sangres congeladas a 80 C son estables un m ximo de 3 meses IMPORTANTE Para una conservaci n ptima de las muestras no las conserve a 20 C sino a 80 C ver la BIBLIOGRAF A J Bardakdjian Michau et al 2003 Preparaci n de las muestras Use directamente las muestras de sangre total Compruebe que todos los tubos contengan al menos 1 mL de sangre y que est n bien tapados Agite en el vortex durante 5 segundos las sangres que hayan sido conservadas en nevera 2 8 C durante 1 semana ATENCI N Los tubos deben estar tapados con sus tapones correspondientes adaptados a la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en el CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING ver EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS Casos especiales An lisis de muestras sin Hb A Hb A2 estas muestras pueden ser cuantificadas pero no caracterizadas mediante las zonas de identificaci n Par
93. miento de estabilizaci n permite conservar el Control Hb AF en forma liofilizada 194 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Aplicaci n El Control Hb AF est destinado antes de realizar una nueva serie de an lisis al control de la migraci n as como al control de calidad del m todo de detecci n de la hemoglobina humana F mediante electroforesis con la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N Reconstituya con precisi n el vial liofilizado del Control Hb AF con el volumen de agua destilada o desionizada indicado en las instrucciones del Control Hb AF D jelo en reposo 30 minutos y despu s ag telo suavemente evite la formaci n de espuma Control de migraci n El Control Hb AF debe ser usado de la forma siguiente Dispense el Control Hb AF reconstituido en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte identificado con la etiqueta con el c digo de barras espec fico del Control Hb AF en la posici n 1 del cargador espec fico n O del CAPILLARYS 2 previsto a este efecto equipado con un segmento de diluci n nuevo Dispense 4 mL de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis sin que se formen burbujas de aire y coloque este tubo en la posici n 8 del cargador n 0 IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de soluci n hemolisante antes de colocarlo en el cargador
94. moglobinopathies in the routine clinical laboratory CRC Crit Rev Clin Lab Sci 9 243 271 14 L Vovan D Lara Russo A Orsini 1985 Diagnostic biologique des h moglobinoses Ann P diat 32 9 780 789 15 http globin cse psu edu hbvar menu html Hbvar A Database of Human Hemoglobin Variants and Thalassemias 16 http www isns neoscreening org agenda htm 17 Boemer O Ketelslegers JM Minon V Bours R Schoops 2008 Newborn screening for sickle cell disease using tandem mass spectrometry Clin Chem 54 12 2036 2041 18 Lubin BH Witkowska HE Kleman K 1991 Laboratory diagnosis of hemoglobinopathies Clin Biochem 24 363 374 19 B Gulbis B Fontaine F Vertongen F Cotton 2003 The place of capillary electrophoresis techniques in screening for haemoglobinopathies Ann Clin Biochem 40 659 662 20 Aguilar Martinez P et al 2010 Arbres d cisionnels pour le diagnostic et la caract risation mol culaire des h moglobinopathies Ann Biol Clin 68 4 455 464 21 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat 1986 Sept 93 97 NQa pop 416 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 TABLEAU TABLE CAPILLARYS HEMOGLOBIN E VARIANTS POTENTIELS PRESENTS DANS CHAQUE ZONE POTENTIAL VARIANTS LOCATED IN EACH ZONE Zone H moglobines Hemoglobins Hb zi
95. moglobins S C and E both by electrophoretic separations obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument and a commercially available HPLC system for hemoglobins analysis The measured values of hemoglobin fractions from both procedures were analyzed by a linear regression statistical procedure The results of linear regression analysis for Hb A Hb A2 Hb F Hb S and Hb C are tabulated below y CAPILLARYS HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument Range of Hb values i CAPILLARYS Hb fraction Number of samples petu y Intercept Slope HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument HbA 121 0 999 1 71 1 14 0 0 98 8 Hb A2 93 0 986 0 31 1 16 0 9 6 5 Hb F 103 0 997 0 65 0 97 0 0 90 3 Hb S 26 0 998 0 10 1 05 14 2 54 8 Hb C 5 0 999 1 08 1 02 9 7 44 7 All abnormal hemoglobins or abnormal levels of normal hemoglobins detected with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument were in agreement with the comparative HPLC system There was no case observed of false positive i e detection of an abnormal band or abnormal level of a normal band where no such abnormality existed In study No 2 the levels of hemoglobin fractions were measured in 183 blood samples including 83 samples with hemoglobin variants such as hemoglobins S C and D both by electrophoretic
96. n el perfil electrofor tico El an lisis de sangres de cord n de reci n nacidos transfusionados puede dar lugar a un perfil con una fracci n Hb A elevada alterando as el diagnostico Una drepanocitosis homocigota puede ser enmascarada y confundida con un diagn stico de heterocigosis A S Es indispensable confrontar este resultado con el an lisis hematol gico y realizar an lisis complementarios para confirmar el diagn stico Las mutaciones de la cadena gamma implican la aparici n de hemoglobinas anormales en diferentes zonas de migraci n del perfil electrofor tico Estas hemoglobinas han sido mucho menos estudiadas que las hemoglobinas resultantes de la mutaci n del resto de cadenas Interferencias y limitaciones Ver MUESTRAS PARA EL AN LISIS No use muestras de sangre total no sedimentada No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la presencia de hemoglobinas degradadas puede observarse en el perfil electrofor tico en forma de artefactos m s o menos numerosos despu s de 7 d as de conservaci n Si las muestras se han conservado m s de 10 d as se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Cuando se detecte la presencia de una hemoglobina anormal se recomienda usar otras t cnicas de identificaci n por ejemplo electroforesis de las cadenas de globina o consultar a un laboratorio especializado para un tipado preciso de
97. nalizados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones potenciales de las diferentes variantes de la hemoglobina identificadas por las zonas C1 a C12 se muestran en la ventana de edici n y aparecen en el informe de resultados La tabla del p rrafo Interpretaci n presenta las variantes conocidas que pueden estar presentes en cada zona Cuando el programa detecta una fracci n de la hemoglobina en una zona dada el t tulo de esa zona es enmarcado La identificaci n de las sangres normales y de las sangres patol gicas se realiza autom ticamente y los perfiles pueden ser distinguidos en el mosaico de curvas como normales en azul o patol gicos en rojo Esta identificaci n est basada en la detecci n de las fracciones anormales de la hemoglobina en un perfil dado o en la ausencia de detecci n de las fracciones Hb F Hb A El programa de gesti n ha sido optimizado para limitar la interferencia de las formas degradadas de la hemoglobina en el an lisis Sin embargo el programa permite por ejemplo distinguir valores muy bajos de hemoglobina Bart alertando as al usuario de un posible diagn stico de alfa talasemia Los perfiles son centrados autom ticamente respecto al pico de Hb F para facilitar su interpretaci n en caso de ausencia de detecci n del pico de Hb F en un perfil aparece un s mbolo amarillo de alerta y el centrado del perfil se realiza entonces respecto a la posici n del pico de Hb F de los dos ltimos perf
98. ncentrada debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares despu s de la separaci n electrofor tica de las hemoglobinas IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de soluci n de lavado La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 4 SEGMENTOS DE DILUCI N Uso Segmentos de diluci n coloreados de un solo uso espec ficos de la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E para que el aparato realice la diluci n de las muestras de sangre Deben colocarse en el cargador de muestras ATENCI N Manipule con precauci n los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas 5 FILTROS Uso Filtros de un solo uso para el filtrado del tamp n la soluci n hemolizante en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING la
99. niaco 5 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n El vial de la soluci n de lavado concentrada SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para el lavado de los capilares del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Reactivo adicional necesario en caso de realizar series inferiores a 40 an lisis IMPORTANTE Antes de llenar el vial de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el tap n conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 183 6 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 SALINA Preparacion Soluci n de NaCl 0 15 M 9 g L en agua destilada o desionizada Uso Para lavar los gl bulos rojos antes de conservarlos a 80 C si es necesario Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n sa
100. nto de diluci n usado y des chelo ATENCI N Manipule con cuidado los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras de los tubos primarios de muestra y del cargador Diluci n de las sangres con la soluci n hemolisante con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura controlada por efecto Peltier durante unos 8 minutos Lectura a 415 nm y aparici n simult nea del perfil de las hemoglobinas en la pantalla del ordenador e oso NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para el primer cargador introducido los perfiles correspondientes a los tubos analizados se obtienen al cabo de unos 20 minutos Para el cargador de muestras siguiente las etapas 1 y 2 lectura de los c digos de barras y hem lisis de las sangres se realizan durante la etapa 5 del cargador anterior 198 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 II AN LISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis se realiza autom ticamente la cuantificaci n relativa de las fracciones y los perfiles pueden ser interpretados Los picos de hemoglobina A Hb A F Hb F y A2 Hb A2 son identificados de forma autom tica y el pico de Hb F es situado en una posici n determinada Los perfiles electrofor ticos obtenidos deben ser a
101. o en el cargador introducci n en el sistema CAPILLARYS 2 recuperaci n de los cargadores despu s del an lisis LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 1 PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el CAPILLARYS 2 y el ordenador de control 2 Abrael programa de gesti n PHORESIS CAPILLARYS 2 y valide el nivel de los reactivos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 3 Use el kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E con el programa de an lisis HEMOGLOBIN E Para seleccionar el programa de an lisis HEMOGLOBIN E y conectar el contenedor de tamp n CAPILLARYS HEMOGLOBIN E al aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del CAPILLARYS 2 4 El cargador de muestras posee 8 posiciones para tubos Coloque hasta 7 tubos primarios sin plasma cada cargador posiciones 1 a 7 destapando cada tubo y de forma que el c digo de barras de cada tubo quede encarado hacia la ventana de lectura del mismo IMPORTANTE Si el n mero de tubos que va a analizar es inferior a 7 complete el cargador poniendo tubos con agua destilada o desionizada 5 Dispense 4 mL de soluci n hemolizante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis sin que se formen burbujas de aire y coloque este tubo en la posici n 8 del cargador de muestras IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de soluci n hemolizante antes de colocarlo en el cargador 6 Ponga un segmento de diluci n nuevo en cada car
102. obinas en 7 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de los tubos primarios hasta 7 y del cargador hem lisis y diluci n de las muestras a partir de los tubos primarios sin plasma lavado de los capilares inyecci n de las muestras hemolisadas separaci n y detecci n directa de las hemoglobinas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes colocaci n de los tubos primarios destapados en los cargadores en las posiciones 1 a 7 colocaci n del tubo de la soluci n hemolisante en la posici n 8 de los cargadores colocaci n de un segmento de diluci n nuevo en el cargador introducci n en el sistema CAPILLARYS 2 recuperaci n de los cargadores despu s del an lisis LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 2 1 PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el CAPILLARYS 2 y el ordenador de control 2 Abra el programa de gesti n PHORESIS y valide el nivel de los reactivos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 3 Parala t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N use el kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E con el programa de an lisis SANGRE DE CORDON Para seleccionar el programa de an lisis SANGRE DE CORDON y conectar el contenedor de tamp n CAPILLARYS HEMOGLOBIN E al aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del CAPILLARYS 2 4 El cargador de muestras posee 8 posiciones para tubos Coloqu
103. oglobin with 0 0 Hb C within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument gave a good linearity for Hb C within the entire range studied with a maximum of about 8 3 g dL for Hb C in the analyzed sample between 0 0 and 30 0 of Hb C Hb D linearity One blood sample with Hb D containing 24 6 g dL total hemoglobin with 39 4 Hb D was mixed with a normal blood sample containing 30 5 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb D within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument gave a good linearity for Hb D within the entire range studied with a maximum of about 9 7 g dL for Hb D in the analyzed sample between 0 0 and 39 4 of Hb D Hb E linearit One blood sample with Hb E containing 10 8 g dL total hemoglobin with 95 4 Hb E was mixed with a normal blood sample containing 12 3 g dL total hemoglobin with 0 0 Hb E within different proportions and the dilutions were electrophoresed with CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument The CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with CAPILLARYS 2 instrument gave a good linearity for Hb E within the entire range studied
104. oglobinas A F Sy C como el Control Hb AFSC SEBIA referencia n 4792 o el Control Hb AF SEBIA referencia n 4777 RESULTADOS Valores La detecci n directa en el capilar a 415 nm permite definir las concentraciones relativas porcentajes de cada fracci n Interpretaci n Ver PERFILES ELECTROFOR TICOS figuras 1 8 Las diferentes zonas de migraci n de las variantes identificadas como C1 a C12 aparecen en la ventana de edici n de las curvas y en el informe de resultados Al pasar el cursor del rat n sobre el nombre de una zona aparece una burbuja informativa que indica las variantes posibles de la hemoglobina que migran en esa zona Para cada fracci n la posici n del m ximo define la zona de migraci n Ver la tabla que muestra las variantes potenciales presentes en cada zona ATENCI N La graduaci n del eje de abscisas no puede en ning n caso usarse para la identificaci n de una variante de la hemoglobina 199 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 1 Anomal as cualitativas Hemoglobinopatias La mayor a son anomal as estructurales debidas a la sustituci n por mutaci n de un amino cido por otro en una de las cadenas Las consecuencias de la mutaci n var an en funci n de la posici n del amino cido mutado y del que le remplaza siendo particularmente necesaria la integridad de algunas partes de la mol cula para que sea viable y funcione correctamente Se han definido y descrito m s de 900 variantes de
105. on analysis for Hb A Hb A2 Hb F and Hb S are tabulated below y CAPILLARYS HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 instrument Range of Hb values Correlation CAPILLARYS Hb fraction Number of samples Goetficient y Intercept Slope HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 instrument HbA 56 0 995 11 24 1 32 20 9 98 1 Hb A2 44 0 977 0 07 1 13 0 1 6 2 Hb F 56 1 000 0 35 0 93 0 0 79 0 Hb S 8 0 997 0 39 1 07 6 5 40 9 All abnormal hemoglobins or abnormal levels of normal hemoglobins detected with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 instrument were in agreement with the comparative HPLC system There was no case observed of false positive i e detection of an abnormal band or abnormal level of a normal band where no such abnormality existed Accuracy External correlations NOTE The results presented below have been obtained from 2 external accuracy studies that have been performed in 2 hospital laboratories located in the USA The diagnosis was based on a routine HPLC procedure In study No 1 the levels of hemoglobin fractions were measured in 123 blood samples including 33 samples with hemoglobin variants such as hemoglobins S C and E both by electrophoretic separations obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure with the CAPILLARYS 2 instrument and a commercially available HPLC system for hemoglobins analysis The measured values of hemoglobin fractions from both procedures were analy
106. oon Hb A2 Hb O Arab Hb Chad E Keelung Hb E Saskatoon Z4 Hb E Hb K ln Ube 1 Hb Buenos Aires pic mineur Hb Agenogi Hb G Siriraj Hb Santa Ana Hb A2 Babinga Hb M Saskatoon pic mineur variant de Hb A2 M Iwate Hb C d grad e Hb E Hb K ln Ube 1 Hb Buenos Aires minor peak Hb Agenogi Hb G Siriraj Hb Santa Ana Hb A2 Babinga Hb M Saskatoon minor peak M Iwate Hb A2 variant denatured Hb C 75 Hb S Hb Dhofar Yukuhashi Hb Arya Hb Hasharon Sinai Hb Handsworth Hb Ottawa Siam Hb S Antilles Hb Fort de France Hb Hamadan Hb Montgomery variant de Hb A2 Lombard variant de Hb A2 Cemenelum variant de Hb A2 Jackson Hb O Arab d grad e Hb S Hb Dhofar Yukuhashi Hb Arya Hb Hasharon Sinai Hb Handsworth Hb Ottawa Siam Hb S Antilles Hb Fort de France Hb Hamadan Hb Montgomery Lombard Hb A2 variant Cemenelum Hb A2 variant Jackson Hb A2 variant denatured Hb O Arab Z6 Hb D Punjab D Los Angeles Hb Stanleyville Il Hb Osu Christiansborg Hb Leiden Hb G Philadelphie Hb Muravera Hb D Bushman Hb G Norfolk Hb Matsue Oki Hb D Ouled Rabah Hb Lepore Lepore BW Hb Muskegen Hb D Ibadan Hb Buenos Aires pic mineur Hb Summer Hill Hb Q India Hb Q Iran Hb Korle Bu G Accra Hb K ln Hb Fort Worth Hb G Taipei Hb Winnipeg Hb G Siriraj Hb G Pest Hb D Iran Hb G Coushatta G Saskatoon Hb Inkster Hb Setif Hb Memphis Hb P Nilotic Hb Willamette variant
107. opci n Iniciar la limpieza de la c nula soluci n de hipoclorito de sodio y luego valide Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de la luz solar y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de cidos y amoniaco 5 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n El vial de la soluci n de lavado concentrada SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para el lavado de los capilares del CAPILLARYS 2 Reactivo adicional necesario en caso de realizar series inferiores a 40 an lisis IMPORTANTE Antes de llenar el vial de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el tap n conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado dil
108. os estando cada cadena ligada al hemo que es un n cleo tetrapirr lico porfirina ligado a un tomo de hierro El hemo es com n a todas las hemoglobinas La parte proteica responsable del tipo de hemoglobina se denomina globina Se conocen principalmente las cadenas polipept dicas a B 6 y y En humanos podemos encontrar las hemoglobinas normales siguientes Hemoglobina Hemoglobina A2 Hemoglobina fetal La cadena es com n a estas tres hemoglobinas La estructura espacial de la hemoglobina como la del resto de prote nas depende de la naturaleza y la secuencia de los amino cidos que forman las cadenas Las uniones que se forman entre los diferentes amino cidos son responsables de la forma de la mol cula de su estabilidad y de sus propiedades Situadas en un campo el ctrico las hemoglobinas se desplazan en funci n de su carga del tama o de la mol cula de la fuerza i nica del pH del tamp n y de la naturaleza del soporte empleado Las variantes de la hemoglobina son debidas a mutaciones de algunos amino cidos que implican cargas de superficie diferentes en la hemoglobina y por consiguiente movilidades diferentes en la electroforesis Las anomal as de la hemoglobina son de dos tipos anomal as cualitativas o estructurales denominadas hemoglobinopat as anomal as cuantitativas o de regulaci n denominadas talasemias La
109. permite distinguirla de sta 2 Anomal as cuantitativas Talasemias Constituyen un grupo bastante heterog neo de afecciones gen ticas caracterizadas por la reducci n de la tasa de s ntesis de una o varias cadenas de la hemoglobina El mecanismo de esta reducci n a escala molecular todav a no es bien conocido Existen diferentes sindromes talas micos Alfa talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas a afectando por consiguiente a la s ntesis de las hemoglobinas fisiol gicas El exceso de s ntesis de las cadenas B y y respecto a las cadenas a provoca la formaci n de tetr meros sin cadenas a Hemoglobina Bart y 4 Hemoglobina H B 4 La hemoglobina H posee un punto isoel ctrico relativamente bajo En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E migra en una posici n mucho m s an dica que la hemoglobina A y puede estar presente en forma de una o varias fracciones Beta talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas S lo se ve afectada la s ntesis de la hemoglobina A Les porcentajes de las hemoglobinas F y A2 est n por tanto aumentados respecto a la hemoglobina A En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E los valores de las diferentes hemoglobinas normales obtenidos permiten detectar los casos de beta talasemias 176 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 3 Notas En caso de ausencia de la hemoglobina A se puede observar una fracci n d bil en
110. pezado instalado en el CAPILLARYS 2 es estable un m ximo de 1 mes acumulado a temperatura ambiente de 15 a 30 C Despu s de cada uso el tamp n debe conservarse imperativamente en nevera 2 8 C lo antes posible siendo entonces estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial de tamp n IMPORTANTE El tiempo total acumulado que el tamp n puede estar a temperatura ambiente no debe exceder 1 mes Esta duraci n de conservaci n de 1 mes tiene en cuenta la duraci n de los tiempos de atemperamiento del tamp n Deseche el tamp n si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado o a part culas en suspensi n 2 SOLUCI N HEMOLIZANTE Preparaci n La soluci n hemolizante est lista para usar Contiene tamp n pH 8 5 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la diluci n y la hem lisis de los gl bulos rojos Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Almacenar la Soluci n Hemolizante a temperatura ambiente de 15 a 30 C o refrigerada entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial NO LA CONGELE Deseche la soluci n hemolizante si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado a part culas en suspensi n 3 SOLUCI N DE LAVADO Preparaci n El vial de soluci n de lavado co
111. presentes en la muestra mediante las zonas de identificaci n gracias a que migrar n en la zona correcta La cuantificaci n de las fracciones se obtiene en este caso analizando la muestra inicial no mezclada antes de diluirla con la sangre control 173 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Muestras a descartar No use muestras de sangre total no sedimentadas No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la hem lisis autom tica de las muestras puede ser perturbada por la presencia de aglomerados viscosos entre los gl bulos rojos el perfil electrofor tico puede tambi n ser afectado por los productos de degradaci n de las hemoglobinas o por artefactos PROCEDIMIENTO El sistema CAPILLARYS 2 es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las hemoglobinas en 7 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de los tubos primarios hasta 7 y del cargador hem lisis y diluci n de las muestras a partir de tubos primarios sin plasma lavado de los capilares inyecci n de las muestras hemolizadas separaci n y detecci n directa de las hemoglobinas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes colocaci n de los tubos primarios destapados en los cargadores en las posiciones 1 a 7 colocaci n del tubo de soluci n hemolizante en la posici n 8 del cargador colocaci n de un segmento de diluci n nuev
112. procedure 2012 06 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 TECNICA CAPILLARYS SANGRE DE CORDON EN EL SISTEMA CAPILLARYS 2 UTILIZACION La t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORDON permite la separaci n en medio alcalino pH 9 4 de las hemoglobinas normales de la sangre humana a partir de cord n umbilical de reci n nacido F y A y la detecci n de las principales hemoglobinas anormales especialmente S C E D y Bart mediante electroforesis capilar en el sistema autom tico CAPILLARYS 2 El sistema CAPILLARYS 2 permite realizar todas las secuencias de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil de las hemoglobinas para el an lisis cualitativo o cuantitativo El an lisis puede realizarse usando el hemolisado de gl bulos rojos sedimentados centrifugados o lavados el lavado de los gl bulos rojos no es indispensable Esta t cnica debe realizarse con los reactivos del kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Las hemoglobinas separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante espectrofotometr a de absorbancia a 415 nm que es la longitud de onda de absorci n espec fica de las hemoglobinas Los perfiles electrofor ticos son analizados autom ticamente para detectar las anomal as con identificaci n de los perfiles normales y patol gicos La detecci n directa proporciona una cuantificaci n relativa precisa de cada fracci n individual de las hemoglobinas Adem s la buena
113. r an lisis complementarios para confirmar la presencia de Hb A 200 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 IMPORTANTE En caso de ausencia de hemoglobina A y presencia de una o varias variantes anormales X de la hemoglobina es posible tener en cuenta la intensidad de los picos de las fracciones anormales X y de la hemoglobina que se situa en la zona de la Hb F degradada para analizar el perfil una fracci n d bil presente en las zonas de migraci n C9 y C10 no puede ser considerada como Hb A si la o las fracciones anormales estan presentes en gran cantidad La mayor a de casos de heterocigosis A X muestran picos de Hb A y de variante X casi equivalentes en altura siendo a veces m s elevado el pico de Hb A que el pico de la variante X y raramente al rev s Algunas variantes de la hemoglobina Hb Porto Alegre Hb Q Tailandia por ejemplo migran muy cerca de la hemoglobina F y pueden migrar alrededor de su zona de migraci n siendo entonces ocultadas por esta ltima No es posible ninguna confusi n ya que la fracci n Hb F siempre es la fracci n ampliamente mayoritaria en sangre de reci n nacido Una alfa talasemia deleci n de una a tres cadenas o puede ser detectada en el perfil electrofor tico por la presencia de la hemoglobina Bart La deleci n de una sola cadena induce una alfa talasemia denominada lt silenciosa gt porque es asintom tica La deleci n de 2 3 cadenas conduce a la presencia de Hb Bart en mayor cantidad e
114. r anterior 186 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 II AN LISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis se realiza autom ticamente la cuantificaci n relativa de las fracciones y los perfiles pueden ser interpretados Los picos de hemoglobina A Hb A F Hb F y A2 Hb A2 son identificados de forma autom tica y el pico de Hb A es situado en el centro de la ventana de edici n de las curvas Los perfiles electrofor ticos obtenidos deben ser analizados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones potenciales de las diferentes variantes de la hemoglobina identificadas por las zonas Z1 a 215 se muestran en la ventana de edici n y aparecen en el informe de resultados La tabla del p rrafo Interpretaci n presenta las variantes conocidas que pueden estar presentes en cada zona Cuando el programa detecta una fracci n de la hemoglobina en una zona dada el t tulo de esa zona es enmarcado Los perfiles son centrados autom ticamente respecto a los picos de Hb A y de Hb A2 para facilitar su interpretaci n en caso de ausencia de detecci n de los picos de Hb A y o Hb A2 en un perfil aparece un s mbolo amarillo de alerta y el centrado del perfil se realiza entonces respecto a la posici n del pico de Hb A de los dos ltimos perfiles obtenidos anteriormente en el mismo capilar y ning n pico es identificado excepto en caso de detecci n de Hb C en el que los picos de Hb A2 y Hb C son identificados en caso de pre
115. rma continua a medida que se vaya completando el an lisis de los cargadores ya introducidos Cuando quiera analizar una sangre control use el cargador espec fico n 0 los tubos y tapones previstos a este efecto y el adaptador para tubos de controles 7 Saque de la cinta de salida situada a la izquierda del aparato los cargadores ya analizados 8 Coja con precauci n el segmento de diluci n usado y des chelo ATENCI N Manipule con cuidado los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras de los tubos primarios de muestra y del cargador Agitaci n de los tubos Diluci n de las sangres con la soluci n hemolisante con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura controlada por efecto Peltier durante unos 8 minutos Lectura a 415 nm y aparici n simult nea del perfil de las hemoglobinas en la pantalla del ordenador DOY 1160 IN es NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para el primer cargador introducido los perfiles correspondientes a los tubos analizados se obtienen al cabo de unos 20 minutos Para el cargador siguiente las etapas 1 2 y 3 lectura de los c digos de barras agitaci n y hem lisis de las sangres se realizan durante la etapa 6 migraci n del cargado
116. sencia de Hb F en un perfil sin detecci n de Hb A el s mbolo amarillo de alerta no aparece y el centrado del perfil se realiza entonces respecto a la posici n del pico de Hb F y los picos de Hb F y o Hb A y o Hb A2 son identificados en caso de imposibilidad de centrado del perfil aparece un s mbolo rojo de alerta y los picos de Hb F y Hb A2 no son identificados en este caso contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de densidad ptica insuficiente en un perfil electrofor tico del control de migraci n obtenido con el Control Hb A2 Normal identificado con su etiqueta con c digo de barras y analizado en un cargador n 0 aparece un mensaje de advertencia que permite usar o descartar este an lisis para la determinaci n de la posici n del pico de Hb A Despu s aparece un s mbolo violeta de alerta en la ventana de edici n y los picos de Hb A y de Hb A2 no son identificados En todos estos casos las diferentes zonas de migraci n Z1 a Z15 no aparecen ni en la ventana de edici n ni en el informe de resultados En el perfil electrofor tico las curvas de las fracciones de las hemoglobinas A2 y C son calculadas y redibujadas o ajustadas y se superponen a la curva nativa Esta representaci n permite cuantificar la fracci n Hb A2 en presencia de Hb C ATENCI N En algunos casos de hemoglobina C homocigoto o debido a un problema t cnico las fracciones Hb A2 y Hb C no son ajustadas lo que implica una infr
117. separations obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument and a commercially available HPLC system for hemoglobins analysis The measured values of hemoglobin fractions from both procedures were analyzed by a linear regression statistical procedure The results of linear regression analysis for Hb A Hb A2 Hb F Hb S Hb C and Hb D are tabulated below y CAPILLARYS HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument 192 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Range of Hb values Hb fraction Number of samples y Intercept Slope CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument HbA 180 0 991 1 75 1 13 0 0 98 2 Hb A2 113 0 926 0 18 1 04 0 4 6 0 Hb F 181 0 991 0 11 1 06 0 0 98 2 Hb S 67 0 996 0 66 1 00 5 0 93 9 Hb C 13 0 996 0 81 0 94 12 5 45 7 Hb D 3 0 980 3 04 1 01 34 7 40 9 All abnormal hemoglobins or abnormal levels of normal hemoglobins detected with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING instrument were in agreement with the comparative HPLC system There was no case observed of false positive i e detection of an abnormal band or abnormal level of a normal band where no such abnormality existed 193 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Ref 2007 CAPILLARYS 2 Technique CAPILLARYS Sangs de cordons CAPILLARYS Cord blood
118. tabla del p rrafo Interpretaci n Como consecuencia de la degradaci n de la muestra aparece una fracci n d bil correspondiente a metahemoglobina en la zona de migraci n de la Hb E zona C3 ver la tabla del p rrafo lt Interpretaci n gt Si la muestra se ha conservado m s de 10 d as en nevera se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis 197 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06 Preparaci n de las muestras Deje sedimentar los gl bulos rojos de la sangre total durante varias horas en nevera 2 8 C o centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m Elimine con cuidado el m ximo de plasma Agite en el vortex durante 5 segundos IMPORTANTE No use muestras que contengan una altura m xima de plasma residual superior a 3 mm si hay m s de 3 mm de plasma el an lisis puede verse afectado Muestras a descartar No use muestras de sangre total no sedimentadas No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la hem lisis autom tica de las muestras puede ser perturbada por la presencia de aglomerados viscosos entre los gl bulos rojos el perfil electrofor tico tambi n puede ser afectado por productos de degradaci n de las hemoglobinas o artefactos PROCEDIMIENTO El sistema CAPILLARYS 2 es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las hemogl
119. teriormente en el mismo capilar y ning n pico es identificado excepto cuando se detecta Hb C en este caso los picos de Hb A2 y de Hb C son identificados en caso de presencia de Hb F en un perfil sin detecci n de Hb A el s mbolo amarillo de alerta no aparece y el centrado del perfil se realiza entonces respecto a la posici n del pico de Hb F y los picos de Hb F y o Hb A y o Hb A2 son identificados en caso de imposibilidad de centrado del perfil aparece un s mbolo rojo de alerta y los picos de Hb F y de Hb A2 no son identificados en este caso contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de densidad ptica insuficiente en un perfil electrofor tico del control de migraci n obtenido con el Control Hb A2 Normal identificado con su etiqueta con c digo de barras y analizado en un cargador n 0 aparece un mensaje de advertencia que permite usar o descartar este an lisis para la determinaci n de la posici n del pico de Hb A Despu s aparece un s mbolo de advertencia violeta en la ventana de edici n y los picos de Hb A y Hb A2 no son identificados En todos los casos las diferentes zonas de migraci n Z1 a Z15 no aparecer n ni en pantalla ni en el informe de resultados En el perfil electrofor tico las curvas de las hemoglobinas A2 y C calculadas por triangulaci n son redibujadas o ajustadas y superpuestas a la curva nativa Esta representaci n permite la cuantificaci n de la fracci n Hb A
120. tes de la hemoglobina son debidas a mutaciones de algunos amino cidos que implican cargas de superficie diferentes en la hemoglobina y por consiguiente movilidades diferentes en la electroforesis Las anomal as de la hemoglobina son de dos tipos anomal as cualitativas o de estructura que se denominan hemoglobinopat as anomal as cuantitativas o de regulaci n que se denominan talasemias La electroforesis de las hemoglobinas de la sangre humana es un an lisis muy til en el laboratorio de an lisis cl nicos para investigar las anomal as cualitativas y cuantitativas de la hemoglobina Paralelamente a las t cnicas de electroforesis en diferentes soportes entre los que est el gel de agarosa se ha desarrollado la t cnica de electroforesis capilar que ofrece las ventajas de una automatizaci n competa del an lisis separaciones r pidas y una excelente resoluci n Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica realizada en un tubo de di metro interno inferior a 100 um lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida El sistema CAPILLARYS 2 usa el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de pH dado y seg n el pH del el
121. tra conservada a 80 C prepare esa muestra seg n el m todo siguiente Agite en el vortex el tubo de gl bulos rojos descongelados durante 5 segundos En un microtubo mezcle un volumen 50 pL de gl bulos rojos y 8 vol menes 400 pL de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E Agite en el vortex durante 5 segundos Dispense 100 pL del hemolisado preparado en un pocillo de un segmento de diluci n verde nuevo Ponga este segmento en el cargador n 0 del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Introduzca el cargador en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING seleccione en la ventana que aparecer en pantalla Sample en diluci n manual y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados An lisis de muestras cuyo volumen es inferior a 1 mL Agite en el vortex el tubo de sangre total durante 5 segundos Dispense 100 pL de la sangre total a analizar en un tubo c nico para control y tape el tubo Coloque el tubo con un adaptador para los tubos de controles en un cargador del CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Introduzca el cargador en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING al principio de una serie de an lisis Realice el an lisis de la muestra seg n el procedimiento habitual NOTA En ausencia de c digo de barras en el tubo c nico la muestra no es identificada autom ticamente 185 CAPILLARYS HEMOGLOBIN E 2012 06
122. uado en el cargador n 0 Inicie el an lisis Introduzca el cargador n 0 en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING seleccione lt Diluci n autom tica gt en la ventana que aparecer en pantalla y valide Despu s de cada cambio del contenedor del tamp n de an lisis incluso si el lote no cambia o de modo de trabajo despu s de un ciclo de limpieza con CAPICLEAN despu s de una actualizaci n del programa o de una activaci n de los capilares realice una segunda serie de an lisis con este control volviendo a introducir inmediatamente el mismo cargador n 0 con el mismo segmento de diluci n que contiene el Control Hb A2 Normal diluido en el primer an lisis y un tubo para control vac o identificado con la etiqueta con el c digo de barras del Control Hb A2 Normal en la posici n 1 En la ventana que aparecer en pantalla denominada lt Control Hb A2 Normal gt seleccione lt Diluci n manual gt y valide Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados IMPORTANTE El pico de la hemoglobina A del Control Hb A2 Normal debe presentar una densidad ptica DO minima de 0 10 Por debajo de este valor el centrado del perfil electrofor tico no puede realizarse correctamente Durante el an lisis de las muestras la identificaci n de las fracciones de la hemoglobina Hb A Hb F Hb A2 y Hb C as como la determinaci n de la zona de migraci n del resto de v
123. ueden conservarse un m ximo de siete dias en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones prolongadas congele r pidamente las muestras a 80 C como m ximo durante las 8 horas siguientes a su obtenci n despu s de haber lavado los gl bulos rojos seg n el procedimiento siguiente Centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m deseche el plasma lave 2 veces los gl bulos rojos con 10 vol menes de salina centrifugue despu s de cada lavado y elimine el exceso de salina de de la superficie del co gulo globular lavado agite en el vortex antes de congelarlo Las sangres congeladas a 80 C son estables un m ximo de 3 meses IMPORTANTE Para una conservaci n ptima de las muestras no las conserve a 20 C sino a 80 C ver la BIBLIOGRAF A J Bardakdjian Michau et al 2003 NOTA No conserve las sangres a temperatura ambiente Las hemoglobinas Hb de las muestras conservadas en nevera entre 2 y 8 C se degradan progresivamente En una muestra conservada m s de 7 d as en nevera La fracci n Hb F degradada se vuelve m s visible y aparece formando una ondulaci n en la pendiente en la parte cat dica del pico de la Hb A zona C9 ver la tabla del p rrafo lt Interpretaci n gt Esto implica una sobreestimaci n del valor de la fracci n Hb A En presencia de Hb A aparece una fracci n d bil plana correspondiente a la Hb A degradada en una posici n an dica respecto a la Hb A zona C11 ver la
124. uencia de la degradaci n de la muestra aparece una fracci n d bil correspondiente a metahemoglobina en la zona de migraci n de la Hb S en presencia de Hb C aparece una fracci n correspondiente a la Hb C degradada en posici n an dica respecto a la Hb A2 pero sin ninguna interferencia con sta zona Z4 ver la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb O Arab aparece una fracci n correspondiente a la Hb O Arab degradada en la zona de migraci n de la Hb S zona Z5 ver la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb E aparece una fracci n correspondiente a la Hb E degradada en la zona Z6 ver la tabla del p rrato Interpretaci n en presencia de Hb S aparece una fracci n correspondiente a la Hb S degradada en la zona de migraci n de la Hb F zona Z7 ver la tabla del p rrafo lt Interpretaci n en presencia de Hb A aparece una fracci n correspondiente a la Hb A degradada en posici n an dica respecto a la Hb A zona Z11 ver la tabla del p rrafo lt Interpretaci n gt En presencia de Hb F en el caso de sangres de reci n nacidos aparece una fracci n en la zona de migraci n de la Hb A zona Z9 ver la tabla del p rrafo lt Interpretaci n gt como consecuencia de la degradaci n de la muestra Si la muestra se ha conservado m s de 10 d as en nevera se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an
125. uida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 6 SALINA Preparaci n Soluci n de NaCl 0 15 M 9 g L en agua destilada o desionizada Uso Para lavar los gl bulos rojos antes de conservarlos a 80 C si es necesario Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n salina puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera Deseche la soluci n al cabo de 3 meses o si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana Para una conservaci n prolongada a ada 1 g L de azida s dica REACTIVO OPCIONAL NO SUMINISTRADO ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad CONTROL Hb AFSC Composici n El Control Hb AFSC SEBIA referencia n 4792 se obtiene a partir de una mezcla de sangres humanas enriquecida con hemoglobina F y con las variantes S y C Un procedimiento de estabilizaci n permite conservar el Control Hb AFSC en forma liofilizada Aplicaci n El Control Hb AFSC est destinado al control de calidad de las separaciones electrofor ticas de las hemoglobinas humanas realizadas con la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N Debe ser usado como una sangre humana normal Se recomienda incluir el Control Hb AFSC en cada serie de an lisis Reconstituya con precisi n el vial liofilizado del Control Hb AFSC con el volumen de agua destilada o desionizada indicado en las instrucciones del Control Hb AFSC Deje reposar 30 minutos y agite suavemente evite
126. umentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH del an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que las hemoglobinas A y A2 de las que est parcialmente separada lo que mejora netamente el diagn stico m dico Adem s las hemoglobinas C E y O Arab no se superponen en el perfil electrofor tico y pueden por tanto ser distinguidas f cilmente Hemoglobina E Un cido glutamico de la cadena B est sustituido por una lisina En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E la hemoglobina E migra justo despu s de la hemoglobina A2 de la que est totalmente separada En presencia de la hemoglobina E la fracci n A2 puede por tanto ser cuantificada para detectar una b talasemia Hemoglobina O Arab Un cido glut mico de la cadena B est sustituido por una lisina En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E la hemoglobina O Arab migra con la fracci n A2 En este caso la cuantificaci n de la hemoglobina A2 es imposible Cuando esta fracci n es superior a un 9 puede sospecharse la presencia de la hemoglobina O Arab Esta ltima no puede ser confundida con las hemoglobinas C y E ya que stas est n separadas de la fracci n A2 Hemoglobina D Un cido glut mico de la cadena B est sustituido por una glutamina En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E la hemoglobina D denominada D Punjab D Los Angeles D Chicago D Portugal migra en posici n an dica respecto a la hemoglobina S lo que
127. unci n de la posici n del amino cido mutado y del que le remplaza siendo particularmente necesaria la integridad de algunas partes de la mol cula para que sea viable y funcione correctamente Se han definido y descrito m s de 900 variantes de la hemoglobina adulta Las primeras hemoglobinas anormales estudiadas y las m s numerosas son debidas a una modificaci n de la carga el ctrica global de la mol cula lo que permite detectarlas f cilmente por electroforesis Cinco hemoglobinas anormales principales presentan un inter s particular desde un punto de vista antropol gico y m dico S C E O Arab y D El kit CAPILLARYS HEMOGLOBIN E est destinado a la detecci n de las hemoglobinopat as y las talasemias Hemoglobina S Es la variante m s frecuente y es debida a una sustituci n por mutaci n de un cido glut mico de la cadena B amino cido cido por una valina amino cido neutro presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH de an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que la hemoglobina A En la t cnica CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en tamp n alcalino la hemoglobina S migra entre las fracciones A y A2 a m s o menos 1 3 de la distancia A A2 de lado de la A2 Hemoglobina C La mutaci n es debida a un cido glut mico de la cadena B sustituido por una lisina amino cido alcalino presenta pues un punto isoel ctrico a
128. utainer Terumo Venosafe 5 mL Greiner Bio one Vacuette 1 2 3 4 mL Sarstedt S Monovette 4 mL tubos de extracci n de 11 mm de di metro con los tapones correspondientes altura m xima del tubo tapado 90 mm di metro m ximo del tap n 17 mm por ejemplo tubos de 11 x 66 mm Sarstedt S Monovette 2 7 mL Kabe Labortechnik Primavette S 2 6 mL o cualquier tubo de extracci n de dimensiones equivalentes homologado para su uso en an lisis cl nicos Tubos y tapones para Controles SEBIA referencia n 9205 500 tubos c nicos y tapones para el uso de sangres control en el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING Adaptadores para los tubos de los controles SEBIA referencia n 9203 10 unidades o suministrados con el sistema CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se realiza con muestras frescas de sangre total recogidas con anticoagulante que contenga EDTA No use anticoagulantes que contengan yodoacetato Las sangres deben ser obtenidas seg n los m todos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las sangres pueden conservarse un m ximo de siete d as en nevera entre 2 y 8 C NOTA No conserve las sangres a temperatura ambiente No las congele directamente a 80 C Las hemoglobinas Hb de las muestras conservadas en nevera entre 2 y 8 C se degradan progresivamente En una muestra conservada m s de 7 d as en nevera como consec
129. y pueden por tanto ser distinguidas f cilmente Hemoglobina E Un cido glutamico de la cadena B n 26 est sustituido por una lisina En la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORDON la hemoglobina E migra en posici n an dica respecto a la hemoglobina C de la que est totalmente separada Es por tanto posible distinguir un paciente heterocigoto C E Hemoglobina O Arab Un cido glut mico de la cadena B n 121 est sustituido por una lisina En la t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORD N la hemoglobina O Arab migra entre las fracciones E y C de las que est totalmente separada Cuando la sangre presenta una hemoglobina A2 la hemoglobina O Arab migra en la misma posici n Como el an lisis se realiza en sangre de reci n nacidos que presentan una cantidad de hemoglobina 2 muy baja esta ltima no interfiere en la detecci n de la hemoglobina O Arab Hemoglobina D Los Angeles Un cido glut mico de cadena n 121 est sustituido por una glutamina En t cnica CAPILLARYS SANGRE DE CORDON hemoglobina D denominada D Punjab D Los Angeles D Chicago D Portugal migra en posici n an dica respecto a la hemoglobina S que permite distinguirla de sta 2 Anomal as cuantitativas Talasemias Constituyen un grupo bastante heterog neo de afecciones gen ticas caracterizadas por la reducci n de la tasa de s ntesis de una o varias cadenas de la hemoglobina El mecanismo de esta reducci n a escala molecu
130. ya con precisi n cada vial liofilizado de Control Hb A2 Normal con el volumen de agua destilada o desionizada indicado en las instrucciones del Control Hb A2 Normal D jelo en reposo 30 minutos y despu s ag telo suavemente evite la formaci n de espuma Control de migraci n El Control Hb A2 Normal debe ser usado de la forma siguiente Dispense el Control Hb A2 Normal reconstituido en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte e identificado con la etiqueta de c digos de barras del Control Hb A2 Normal en la posici n 1 del cargador espec fico n 0 del CAPILLARYS 2 previsto a tal efecto y coloque un segmento de diluci n verde nuevo en el cargador Dispense 4 mL de soluci n hemolisante CAPILLARYS HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis sin que se formen burbujas de aire y coloque este tubo en la posici n 8 del cargador n 0 IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de soluci n hemolisante antes de colocarlo en el cargador Inicio del an lisis Introduzca el cargador n 0 en el sistema CAPILLARYS 2 seleccione en la ventana que aparece en pantalla Diluci n autom tica y valide Despu s de cada cambio del contenedor del tamp n de an lisis incluso si el lote es el mismo o del modo de trabajo despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con el CAPICLEAN despu s de una actualizaci n del programa o despu s de un
131. zed by a linear regression statistical procedure The results of linear regression analysis for Hb A Hb A2 Hb F Hb S and Hb C are tabulated below y CAPILLARYS HEMOGLOBIN E with CAPILLARYS 2 instrument Range of Hb values Hb fraction Number of samples poto y Intercept Slope HEMOGLOBINE CAPILLARYS 2 Instrument HbA 121 0 999 1 72 1 14 0 0 98 8 Hb A2 93 0 983 0 21 1 12 1 0 6 6 Hb F 103 0 995 0 62 0 99 0 0 90 0 Hb S 26 0 988 1 57 0 99 14 7 54 9 Hb C 5 0 999 0 42 0 99 10 0 43 7 All abnormal hemoglobins or abnormal levels of normal hemoglobins detected with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure performed with the CAPILLARYS 2 instrument were in agreement with the comparative HPLC system There was no case observed of false positive i e detection of an abnormal band or abnormal level of a normal band where no such abnormality existed In study No 2 the levels of hemoglobin fractions were measured in 183 blood samples including 83 samples with hemoglobin variants such as hemoglobins S C and D both by electrophoretic separations obtained with the CAPILLARYS HEMOGLOBIN E procedure with the CAPILLARYS 2 instrument and a commercially available HPLC system for hemoglobins analysis The measured values of hemoglobin fractions from both procedures were analyzed by a linear regression statistical procedure The results of linear regression analysis for Hb A Hb A2 Hb F Hb

capillarys hemoglobin(e) capillarys 2

Contents

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents