Quantikine® IVD® ELISA
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1. YS 004 ES 09 ZS S MU HUO G UO g MU LLOL 6 8 Z 9 G p Ec H 3 J J ad O g y CALCULO DE LOS RESULTADOS Leer la absorbancia de cada pocillo en un lector de microplacas utilizando 450 nm como longitud de onda primaria y a 600 nm como longitud de onda de referencia tambi n puede aceptarse 540 570 o 650 nm Calcular el promedio de las lecturas de los duplicados para cada uno de los est ndares controles y muestras y restar a cada uno de esos valores el promedio de la densidad ptica del est ndar de concentraci n 0 mIU mL Crear una curva standar por reducci n de los datos utilizando un software capaz de generar un ajuste log stico de curva cuatro par metros 4PL Como alternativa construir una curva standar representando los valores de la media de la absorbancia para cada est ndar en el eje x frente su concentraci n en el eje y dibujar la curva que mejor se ajuste a lo largo de los puntos de la gr fica Los datos pueden linealizarse representando el log de las concentraciones de Epo frente al log de las D O y puede calcularse la l nea que mejor se ajuste por un an lisis de regresi n Este procedimiento generar un ajuste de los datos adecuado pero menos preciso Crear un informe con los valores de cada muestra que se haya le do dentro del rango del ensayo 2 5 200 mIU mL Para los valores de las muestras desconocidas que se encuentren por encima del rango anterior ver la secci2. n de Diluci n de Muestras con Concentraciones de Epo Elevadas Los valores inferiores a este rango deben informarse como no detectables o lt a 2 5 mIU mL DATOS TIPICOS Estas curvas standar se proporcionan nicamente como una demostraci n Se deber a realizar una curva standar para cada grupo de muestras que se ensayen tii Protocolo de Mesa mIU mL D 0 Promedio Corregido 10 7 0 0 072 0 0 074 0 073 2 5 0 106 S 2 5 0 108 0 107 0 034 a 1 5 0 144 5 0 146 0 145 0 072 3 20 0 342 aad 20 0 353 0 348 0 275 a 50 0 743 50 0 746 0 744 0 671 100 1 298 0 01 r r 100 1 340 1 319 1 246 1 10 100 1000 200 2 366 Eritropoyetina mIU mL 200 2 463 2 414 2 341 Protocolo con Agitador Protocolo con Agitador mIU mL D 0 Promedio Corregido 10 4 0 0 045 0 0 047 0 046 15 0 070 S 2 5 0 076 0 073 0 027 a 1 5 0 107 2 5 0 108 0 108 0 062 3 20 0 263 Peg 20 0 263 0 263 0 217 50 0 597 50 0 608 0 602 0 556 100 1 081 0 01 r r 100 1 098 1 090 1 044 1 10 100 1000 200 2 008 Eritropoyetina mIU mL 200 2 136 2 072 2 026 DILUCION DE LAS MUESTRAS CON CONCENTRACION DE EPO ELEVADA Si una muestra de suero o plasma se encuentra por encima de 200 mIU mL diluirla con Diluyente de la Muestra Por ejemplo e Para las muestras con concentraciones de Epo entre 200 mIU mL y 2000 mlU mL diluir la misma 10 veces Diluir 25 uL de la muestra co
3. 0 uL del est ndar control o muestra a cada pocillo Agitar la placa suavemente durante 1 minuto aproximadamente para mezclar bien los componentes Cubrir la placa con el papel adhesivo que se proporciona En la p gina 32 se muestra un esquema de la placa que contiene un diagrama de los est ndares los controles y las muestras Para protocolo de mesa Incubar durante 2 horas 5 minutos a temperatura ambiente Para protocolo con agitador Incubar durante 1 hora 5 minutos a temperatura ambiente en un agitador de microplacas orbital horizontal 0 12 rbita a 500 50 rpm 5 Aspirar completamente o decantar el contenido de cada pocillo Con la placa invertida escurrir sobre papel secante No lavar 6 A adir 200 uL del Conjugado Epo a cada pocillo Cubrir la placa con un nuevo papel adhesivo Para el protocolo de mesa Incubar durante 2 horas 5 minutos a temperatura ambiente Para el protocolo con agitador Incubar durante 1 hora 5 minutos a temperatura ambiente en un agitador de microplacas orbital horizontal 7 Aspirar cada uno de los pocillos y lavar repitiendo el proceso 3 veces hasta un total de 4 lavados Lavar rellenando cada pocillo con Buffer de Lavado 400 uL utilizando un frasco lavador dispensador manual o lavador autom tico Para la realizaci n de un procedimiento correcto es esencial eliminar completamente el l quido residual en cada paso Tras el ltimo lavado eliminar cualquier resto de buffer de lavado por aspir
4. Buffer de Lavado 1X Si se formasen cristales en el concentrado permitir alcanzar una temperatura ambiente y mezclar con cuidado hasta que los cristales se hayan disuelto completamente Diluir 100 mL de Buffer de Lavado Concentrado en agua destilada o desionizada para preparar 2500 mL de Buffer de Lavado 1X Soluci n de Substrato Los Reactivos de Color A y B deber n mezclarse en vol menes iguales dentro de los 15 minutos previos a su utilizaci n Se requieren 200 uL por pocillo de esta mezcla Eliminar la Soluci n de Substrato preparada que no se haya utilizado PREPARATION DE LA SOLUCI N DE SUBSTRATO SEG N EL TAMA O DE ENSAYO No Total de Pocillos Volumen de Reactivo Volumen de Reactivo por Ensayo de Color A de Color B 96 11 mL 11 mL 48 6 mL 6 mL 32 4mL 4mL PROTOCOL DE ENSAYO Permitir que todos los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente 20 257 C antes de su utilizaci n Se recomienda que cada uno de las muestras los est ndares y los controles se ensayen por duplicado Se proporciona protocolo de mesa y protocolo con agitador Deber utilizarse el mismo protocolo a lo largo de todo el ensayo 1 Preparar todos los reactivos como se indica en la secci n anterior 2 Extraer del soporte las filas de la microplaca que no vayan a utilizarse y devolverlas a la bolsa de aluminio con el desecante y cerrarla 3 Pipetear 100 uL del Diluyente del Ensayo Epo a cada pocillo 4 A adir 10
5. L a 4 0 l 1 l AN AN 12 14 0o 2 4 6 8 10 16 18 20 22 24 Concentraci n de Eritropoyetina mIU mL Rangos en situaciones de enfermedad Los pacientes que sufren una policitemia rubra vera pueden tener concentraciones de Epo dentro de los rangos normales mientras que los que sufren de policitemia secundaria pueden tener concentraciones de Epo en suero elevadas Los pacientes de policitemia rubra vera que han sido sometidos a flebotomia pueden presentar concentraciones s ricas de Epo elevadas Los pacientes que sufren de anemias presentar n concentraciones de Epo en el suero mucho m s elevadas de lo normal mientras que aquellos que padecen anemias asociadas con un fallo renal cr nico podr an tener concentraciones s ricas de Epo dentro del rango de normalidad de este ensayo Los pacientes con anemia que reciben transfusiones pueden exhibir concentraciones s ricas de Epo mucho m s bajas de lo esperado Concentraciones extremadamente elevadas de Epo en suero pueden ser observadas en situaciones patol gicas incluyendo neoplasias renales tumores benignos enfermedad poliqu stica renal quistes renales e hidronefrosis Los resultados de este ensayo deber an valorarse en conjunto con el resto de informaciones disponibles procedentes de las evaluaciones cl nicas y de otros m todos diagn sticos 2011 R amp D Systems Inc 08 11 749158 0 8 11 11
6. MUESTRAS CON CONCENTRACI N DE EPO ELEVADA uciciiciinoaicicnniaccajacass 9 CONTROL DE CALIDA Discunstunidaniaa di id 9 GUIA DE PROBLEMA Sisiranects iii as 10 VALORES ESPERADOS sustrato 11 APLICACIONES Enzimoinmunoensayo ELISA para la determinaci n cuantitativa de la concentraci n de eritropoyetina Epo en suero y plasma humano como una ayuda en el diagn stico de la anemia y de la policitemia PRINCIPIO DEL ENSAYO Quantikine IVD Epo ELISA se basa en un ensayo de doble anticuerpo de tipo sandwich Los pocillos de la microplaca recubiertos con un anticuerpo monoclonal murino espec fico para Epo se incuban con la muestra o con el est ndar La eritropoyetina se une al anticuerpo inmovilizado en la placa Tras eliminar el exceso de muestra o de est ndar los pocillos se incuban con un anticuerpo policlonal conejo anti Epo conjugado con peroxidasa de r bano Durante la segunda incubaci n el anticuerpo conjugado con la enzima se une a la Epo inmovilizada El exceso de conjugado se elimina tras el lavado Se a ade el crom geno a los pocillos el cual se oxida tras la reacci n enzim tica para formar un complejo azulado La reacci n se para con el a adido del cido el cual produce un cambio en el color de azul a amarillo La cantidad de color generada es directamente proporcional a la cantidad de conjugado unido al complejo anticuerpo Epo el cual a su vez es directamente proporcional a la cantidad de Epo en la muestra o en
7. Quantikine IVD ELISA Inmunoensayo Epo Humano Manual de Instrucciones suplementario Referencia DEPOO Este manual de instrucciones incluye el protocolo del ensayo y debe leerse en su totalidad antes de comenzar con el ensayo Para las caracter sticas del ensayo y referencias as como para el protocolo en Ingl s consulte a manual de instrucciones principal CE E gt IVD PARA USO EN DIAGNOSTICO IN VITRO aal FABRICADO Y DISTRIBUIDO POR USA amp Canada R amp D Systems Inc 614 McKinley Place NE Minneapolis MN 55413 USA TEL 612 379 2956 FAX 612 656 4400 E MAIL info RnDSystems com EC REP DISTRIBUIDO POR UK amp Europe R amp D Systems Europe Ltd 19 Barton Lane Abingdon Science Park Abingdon OX14 3NB UK TEL 44 0 1235 529449 FAX 44 0 1235 533420 E MAIL info RnDSystems co uk Y INDICE CONTENIDO P GINA REACTIVOS INCRUID Sssicanitasaasi oir 2 ALMACENAMIENTO a d 2 PELIGROS PRECAUCIONES ias 3 INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO sunrise odios 3 OIROSMATERIALES REQUERIDO S nmen nannaa REN 4 EQUIPOS lt a A E AEE EE A E 4 ETAO a coria E E A 4 EXTRACCION Y ALMACENAMIENTO DELAS MUESTRAS cosisinastidaaia dis 5 PREPARACION DE LOS REACTIVOS sssaaa eaea eisiea eneeier ieina i aneiens 5 PROTOCOL DE ENSAYO aidacin baranda 6 ESQUEMA DE LA PLACA ssccissimisitce isidro inercia ac daa dieta iiid 7 CALCULO DE LOS RESULTADOS scans 8 DATOS TIA Osses 8 DILUCI N DE LAS
8. a piel enjuagar con abundante cantidad de agua y solicitar atenci n m dica Usar todos los sueros y materiales en contacto con sueros de acuerdo con las recomendaciones CLSI para la prevenci n de la transmisi n de pat genos sangu neos durante los protocolos del laboratorio La utilizaci n de otros tiempos de incubaci n y temperaturas diferentes a los indicados pueden conducir a resultados err neos La contaminaci n de los reactivos del kit puede conducir a resultados err neos En la medida que sea posible utilizar pipetas puntas y contenedores para la preparaci n y almacenamiento de los reactivos de pl stico desechable Los recipientes de cristal que se utilizan deben enjuagarse completamente con cido sulf rico 1N o cido hidrocl rico 1N continuado de al menos tres lavados con agua desionizada No deber an permanecer residuos de cido o detergente en los recipientes de cristal Utilizar tubos de polipropileno o de polietileno de alta densidad HDPE para la diluci n de las muestras NO UTILIZAR TUBOS DE CRISTAL Algunos de los componentes del kit contienen azida s dica la cual puede reaccionar con las tuber as de cobre o de plomo formando compuestos de azida explosivos Aclarar con abundante cantidad de agua durante su eliminaci n INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO Las soluciones de substrato deben ser incoloras tanto aisladas como en combinaci n Una precipitaci n en las soluciones de los reactivos se
9. aci n o decantaci n Invertir la placa y escurrirla nuevamente sobre papel secante 8 A adir 200 uL de Soluci n de Substrato a cada pocillo Advertencia La soluci n de substrato debe utilizarse dentro de los 15 minutos siguientes a su preparaci n Incubar durante 20 25 minutos a temperatura ambiente sobre la mesa de trabajo 9 A adir 100 uL de Soluci n de Parada a cada pocillo Si no se observa un cambio de color uniforme agitar la placa suavemente para asegurar una mezcla completa 10 Determinar la densidad ptica D O de cada pocillo antes de los siguientes 15 minutos utilizando un lector de microplacas con un filtro para 450 nm Si se dispone de correcci n de la longitud de onda leer a 600 nm Si no se dispone de correcci n de la longitud de onda restar las lecturas de 600 nm a las lecturas de 450 nm Con esta sustracci n se corregir n las variaciones pticas en la placa Las lecturas realizadas a 450 nm directamente sin realizar correcci n pueden ser m s elevadas y menos precisas ESQUEMA DE LA PLACA Se muestra a continuaci n un diagrama de los est ndares controles y de las muestras LES 9ES Ses YES ees GES LES 628 805 os 96S gS VAS eZs 6c S 8dsS zS 92S GS vos EdS LoS ocs 61S 81sS ES 91S SIS LoS ocs 61S SIS IS 915 SIS qe 8S S 9S m S es ZS 18 MU p UO SS 00
10. considera como un indicio de inestabilidad o deterioro Si se observa cualquiera de estos indicios de inestabilidad o deterioro o si el coeficiente de correlaci n de la curva est ndar es inferior a 0 95 mantener el los reactivos dudosos a 2 8 C y contactar con R amp D Systems Europe en el n mero 44 0 1235 529449 OTROS MATERIALES REQUERIDOS e Pipetas y puntas e Agitador de microplacas orbital horizontal 0 12 orbita que sea capaz de mantener una velocidad de 500 50 rpm necesaria para el protocolo con agitaci n e Probetas graduadas de 100 mL y de 4 litros e Frasco lavador dispensador manual o lavador autom tico de microplacas e Papel absorbente o toallitas de papel para el secado de los pocillos e Lector de microplacas dicrom tico capaz de realizar una medida de la absorbancia a 450 nm y a 600 nm como medida de referencia e Gradillas para los reactivos del inmunoensayo e Agua destilada o desionizada e Para la reducci n de los datos se recomienda la utilizaci n de un equipo con capacidad de realizar un ajuste log stico de la curva a 4 par metros e Control es s ricos de eritropoyetina ej Quantikine IVD Human Serum Control 1 y 2 y control 3 disponibles en el cat logo de R amp D con las referencias CEPO1 y CEPO3 respectivamente o equivalente EQUIPOS Los resultados del ensayo se cuantifican por espectofotometr a a 450 nm utilizando un lector de microplacas Para optimi
11. el est ndar Se mide la absorbancia de este complejo y se realiza una curva est ndar representando las concentraciones de los est ndares de Epo frente a los valores de las absorbancias La concentraci n de Epo de una muestra desconocida se determina comparando los valores de la densidad ptica de la muestra a partir de la curva standar Los est ndares utilizados en este ensayo son Epo humano recombinante calibrados seg n la Second International Reference Preparation 67 343 una forma de eritropoyetina humano derivada de la orina REACTIVOS INCLUIDOS SORB Microplaca de Eritropoyetina Part 890126 Microplaca de poliestireno de 96 poes 12 tiras de 8 pocillos recubierta con un anticuerpo monoclonal murino rente a Epo humano recombinante CONJ Conjugado Eritropoyetina Part 890127 21 5 mL de un anticuerpo policlonal de conejo frente a Epo humano recombinante conjugado con peroxidasa con conservante CAL 0 Est ndar Eritropoyetina 0 0 mIU mL part 890128 2 1 mL de buffer proteico con conservante CAL 25 Est ndar Eritropoyetina 2 5 mlU mL part 890129 2 1 mL de Epo humano recombinante en buffer proteico con conservante CAL 5 Est ndar Eritropoyetina 5 mlU mL part 890130 2 1 mL de Epo humano recombinante en buffer proteico con conservante Est ndar Eritropoyetina 20 mIU mL part 890131 2 1 mL de Epo humano CAL 20 recombinante en buf
12. ente de la Muestra Abierto Diluyente del Ensayo BUF WASH 25X SUBS A SUBS B Reactivos Almacenar de 2 8 C hasta la fecha de caducidad del kit X ds a Devolver los pocillos sin usar a la bolsa de aluminio con desecante cerrar completamente Pocillos de la Microplaca ponie l p Almacenar de 2 8 C hasta la fecha de caducidad del kit PELIGROS PRECAUCIONES Para uso en el Diagn stico In Vitro No utilizar los reactivos del kit despu s de la fecha de caducidad Para optimizar los resultados cada laboratorio deber a validar un m todo de ensayo espec fico de mesa o con agitaci n y realizar todos los ensayos con el mismo m todo Con objeto de minimizar las variaciones intra ensayo se recomienda que el pipeteo de los reactivos se realice en no m s de 15 minutos No sustituir los reactivos del kit por otros de diferentes lotes o procedencias No exponer el kit a fuertes de luz durante el almacenamiento o incubaci n Evitar el contacto de los reactivos del kit con agentes oxidantes y metales La exposici n a azida s dica inactivar el conjugado No pipetear con la boca No fumar o comer en las zonas donde se manipulan los reactivos del kit o las muestras Evitar el contacto de los reactivos del kit y de las muestras con la piel y con las superficies mucosas Si alguna de las reactivos del kit entra en contacto con los ojos o con l
13. fer proteico con conservante Est ndar Eritropoyetina 50 mIU mL part 890132 2 1 mL de Epo humano CAL 50 recombinante en buffer proteico con conservante CAL TA Est ndar Eritropoyetina 100 mlU mL part 890133 2 1 mL de Epo humano 00 recombinante en buffer proteico con conservante Est ndar Eritropoyetina 200 mIU mL part 890134 2 1 mL de Epo humano CAL 200 recombinante en buffer proteico con conservante Diluyente para el Ensayo de Eritropoyetina part 895057 11 mL de buffer DIL AS proteico con conservante Contiene azida s dica Diluyente de la Muestra part 895058 26 mL de un buffer estabilizador de DIL SPE prote nas con conservante Soluci n de Lavado Concentrada de Eritropoyetina Part 895059 100 mL de un concentrado 25X con conservante Reactivo de Color A Part 895549 12 mL de Reactivo de Color A 0 01 N de per xido de hidr geno amortiguador Reactivo de Color B Part 895550 12 mL de Reactivo de Color B 0 35 g L tetrametilbenzidina Soluci n de Parada Part 895060 11 mL de cido sulf rico 2N Precauci n SOLN STOP Material c ustico Cubrirse los ojos las manos y la cara y utilizar ropa de protecci n Cubre placas 4 tiras adhesivas ALMACENAMIENTO 8 C Almacenar de 2 8 C No utilizar despu s de la fecha de caducidad A P o Almacenar a temperatura ambiente 20 25 C hasta la fecha T Soluci n de Lavado diluida de caducidad del kit a Soluci n de Parada Diluy
14. ifugar a 760x g durante 15 minutos a temperatura ambiente dentro de los 30 minutos siguientes a la extracci n para evitar la hemolisis Alicuotar y almacenar en tubos est riles a 2 8 C hasta 7 d as o durante un tiempo indefinido a lt 10 C en un congelador sin ciclos de autodescongelaci n Evitar repetir los ciclos de congelaci n y descongelaci n Plasma Recoger el plasma utilizando EDTA como anticoagulante Centrifugar a 760 x g durante 15 minutos a temperatura ambiente dentro de los 30 minutos siguientes a la extracci n Alicuotar y almacenar en tubos est riles a 2 8 C hasta 7 d as o durante un tiempo indefinido a lt 10 C en un congelador sin ciclos de autodescongelaci n Evitar repetir los ciclos de congelaci n y descongelaci n Se recomienda que cada laboratorio estandarice su ensayo utilizando muestras de suero o de plasma EDTA Muestras con un elevado contenido en l pidos extremadamente hemolizadas o contaminadas podr an contribuir a resultados inexactos y no deber an analizarse utilizando esta t cnica La interferencia de f rmacos no ha sido investigada en este ensayo Consultar recomendaciones de la CLSI Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens Documento CLSI H18 el revisi n corriente g 1 118 X 10 radius i cm o min PREPARACION DE LOS REACTIVOS Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente 20 25 C antes de su utilizaci n
15. n 225 uL del Diluyente de la Muestra e Para las muestras con concentraciones de Epo por encima de 2000 mIU mL realizar una diluci n m s elevada de la misma para que caiga dentro del rango de la curva est ndar ej diluci n 1 20 1 40 etc Advertencia Utilizar tubos de polipropileno o de polietileno de elevada densidad HDPE para las diluciones de la muestra NO UTILIZAR TUBOS DE CRISTAL La utilizaci n de tubos de cristal puede originar resultados err neos debido a la adsorci n de Epo al cristal Para calcular la concentraci n de Epo en la muestra de suero o de plasma multiplicar el resultado obtenido por el factor de diluci n CONTROL DE CALIDAD Cada laboratorio en el cual se realizen estos ensayos deber a establecer un programa de control de calidad para verificar el funcionamiento del inmunoensayo Quantikine IVD Epo Como una parte de este programa deber an incluirse en cada ensayo controles con concentraciones de Epo conocidas disponibles en R amp D Systems R amp D Systems recomienda que para verificar el funcionamiento correcto del m todo de este ensayo deber an incluirse al menos dos controles Un control en la mitad superior del rango normal y un control en la regi n intermedia de la curva del ensayo son una buena elecci n para realizar la evaluaci n diaria del ensayo Tambi n puede utilizarse un control situado en la mitad superior de la curva para evaluar el funcionamiento en valores elevados Si los valo
16. ocedimientos de cada laboratorio en particular Los pocillos deber an estar secos tras la aspiraci n Asegurarse que las pipetas est n calibradas y est n trabajando correctamente Ajustarse a los periodos de incubaci n y temperaturas recomendadas Mezclar vol menes iguales el 100 ul de cada de Reactivo de Color A Reactivo de Color B y Conjugado Epo Deber a desarrollarse color inmediatamente Calibrar el agitador a 500 50 rpm 10 VALORES ESPERADOS Rango de normalidad Los rangos de normalidad para suero y plasma EDTA han sido determinados utilizando el kit de ELISA Quantikine IVD Epo Las concentraciones de eritropoyetina se obtuvieron de una poblaci n de 123 individuos normales procedentes de Minne polis St Paul en Minnesota Utilizando el m todo no param trico para el an lisis de los valores de referencia los cuales est n indicados en la publicaci n del NCCLS How to Define Determine and Utilize Reference Intervals in the Clinical Laboratory NCCLS Document C28 P Vol 12 No 2 se establecieron los siguientes rangos de referencia para la Epo en suero y plasma percentiles 2 5 97 5 Sin embargo cada laboratorio deber a establecer sus propios rangos de normalidad Distribuci n de los Valores Normales de Epo n 123 24 20 MIN Suero Plasma 16 Rangos de Normalidad de Epo g Suero EDTA plasma y bi 3 3 16 6 mIU mL 3 1 14 9 mIU m
17. os incompleto Aspiraci n de los pocillos inadecuada Mezcla incompleta del Reactivo de Color A y el Reactivo de Color B Agitar el contenido de los pocillos salpicando el adhesivo que cubre la placa Adici n de vol menes diferentes a los pocillos Lavado de los pocillos incompleto Aspiraci n de los pocillos inadecuada Adici n de vol menes diferentes a los pocillos La mezcla del Reactivo de Color A y el Reactivo de Color B se ha realizado con mucha antelaci n Error en el pipeteo Aspiraci n de los pocillos inadecuada Adici n de vol menes diferentes a los pocillos Tiempos o temperaturas de incubaci n incorrectos Fallo en el conjugado o reactivo de color El agitador de placas est trabajando demasiado r pido COMPROBACI N O ACTUATION Asegurarse que el proceso de lavado se realiza adecuadamente Los pocillos deber an estar secos tras la aspiraci n Comprobar que la Soluci n de Substrato se ha mezclado adecuadamente Calibrar el agitador a 500 50 rpm Asegurarse que las pipetas est n calibradas y est n trabajando correctamente Asegurarse que el proceso de lavado se est realizando adecuadamente Los pocillos deber an estar secos tras la aspiraci n Asegurarse que las pipetas est n calibradas y est n trabajando correctamente La Soluci n de Substrato deber a utilizarse dentro de los siguientes 15 minutos tras su preparaci n Examinar la edici n de los datos de acuerdo con los pr
18. res obtenidos no se encuentran dentro de los rangos establecidos los resultados del ensayo no deber an considerarse como v lidos Los resultados de cada ensayo individual se consideran como v lidos si los valores obtenidos en los controles se encuentran dentro de los valores publicados de un control disponible comercialmente o del rango establecido para un control del laboratorio El coeficiente de correlaci n para la curva est ndar establecida deber a ser gt 0 95 GUIA DE PROBLEMAS En general un fallo en el ensayo se debe a un error t cnico a la instrumentacion o a un fallo de los reactivos Cuando un ensayo no funciona comprobar las fechas de caducidad de los reactivos individuales y asegurarse de que todos los reactivos se han almacenado como se indica en la etiqueta del producto Para m s informaci n consultar la secci n de Indicios de Inestabilidad o Deterioro Si existen dudas sobre la calidad del ensayo o si ocurre alg n problema durante su realizaci n se podr a localizar el problema consultando la siguiente tabla PROBLEMA C V elevados Variabilidad de los duplicados elevada comparada con los requerimientos de precisi n para el laboratorio Delta bajo reducido D 0 lt 0 015 o fondo elevado Mala correlaci n de la curva est ndar r lt 0 95 Desarrollo de color inadecuado El contenido de los pocillos salpica el adhesivo que la cubre POSIBLE ORIGEN Lavado de los pocill
19. zar los resultados deber a incluirse una lectura a una longitud de onda de referencia de 600 nm pueden tambi n utilizarse 540 nm 570 nm y 650 nm para corregir las variaciones pticas en la microplaca de poliestireno Pueden utilizarse aparatos sin filtros de referencia pero esto puede disminuir la precisi n del ensayo Se recomienda utilizar un lector de microplacas con un rango de densidades pticas de 0 3 D O y una precisi n de 0 005 D O Pueden utilizarse lectores de microplacas con un rango de densidad ptica inferior a 0 3 D O pero se reducir el rango del ensayo LIMITACIONES e Los resultados de este ensayo deber an tenerse en cuenta con la informaci n disponible procedente de otras evaluaciones cl nicas y de otros procedimientos diagn sticos e No se han analizado las interferencias de f rmacos en este ensayo e Si las muestran presentan valores superiores al del est ndar m s elevado diluir la muestra en Diluyente de la Muestra y repetir el ensayo e Cualquier variaci n en el t cnico que manipula el ensayo la t cnica de pipeteo la t cnica de lavado la temperatura o el tiempo de incubaci n as como el tiempo transcurrido desde la fabricaci n del kit pueden originar variaciones en la reacci n EXTRACCION Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS Suero Utilizar un separador de suero o un tubo para coagulaci n y permitir que las muestras coagulen a temperatura ambiente 20 25 C Centr
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