aB2GPI-IgG Inserto - Medica-Tec
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1. arriba IgM Sensibilidad 86 Especificidad Acuerdo 0 Figura 2 a Isotipo IgM Correlaci n entre los niveles de anti P2GPI LAPL af GPI HRP ELISA Kit calibraci n de punto simple con anticuerpos anticardiolipina aCL curva est ndar en espec menes de 100 pacientes con manifestaciones del s ndrome antifosfol pido y 2 365 x r 0 761 p lt 0 001 1000 100 MB2GP1 units ml 1 10 100 1000 10000 7 MpL units ml Fig 2a 15 Tabla 3 Distribuci n de isotipos simples y combinaci n de isotipos en 148 espec menes de pacientes 100 con s ndrome antifosfol pido y 48 con SLE Isotipo de anticuerpos No positivo para P2GPI identificado con gt 2 x l mite normal IgM sola IgG sola IgA sola IgM IgG IgM IgA TeG IgA IgM IgG IgA N A no aplicable Tabla 4 Relaci n entre resultados positivos y negativos de prueba con anticardiolipina y anti P2GPI para isotipos IgM IgG IgA separados y para cualquier isotipo IgM IgG y o IgA en 140 espec menes pacientes con APS y normales IgM LAPL af GPI Positivo 45 f HRP ELISA Kit CL IgA LAPL af GPI Positivo 21 17 HRP ELISA Kit IgG LAPL af3 GPI Positivo HRP ELISA Kit LAPL aP GPI Positivo 67 3 HRP ELISA Kit Negativo 53 14 Cualquier isotipo B Material requerido pero no suministrado e Micropipetas de precisi n que descarguen 10 ul 100 ul y 1 ml 2 con puntas2. 7 M G A Cualquier b 7 sotipo dos cualquier y o juntas P isotipos isotipo col 9 xA 55 67 75 37 Especificidad BBDy 99 99 99 100 Especificidad g5 o5 92 76 96 94 93 98 Dis Cont N A N A N A NA Es considerado nivel alto gt 10 MB2GPIU ml gt 40 de GP2GPI U ml o gt 10 de AP2GPI U ml Arriba de los niveles normales de anticuerpos IgM IgG e IgA anti B2GPI Blood Bank Donors Donadores de Bancos de Sangre Los anticuerpos contra B2 GPI pueden encontrarse en otros pacientes con enfermedad vascular del col geno Tabla 2 Tambi n se encuentran en pacientes con s filis aunque con menor frecuencia que anticardiolipina Por lo tanto en estos pacientes tambi n se debe de conocer la serolog a para s filis Se pueden encontrar como con un solo isotipo o como combinaciones de dos o tres isotipos Tabla 3 La mayor a de pacientes probados tuvo ambos anticuerpos anticardiolipina y anti P2 GPI Tabla 4 Tabla 2 Porcentajes de muestras positivas para anticuerpos IgM IgG e IgA anti P2GPI Ver Tabla 1 para sensibilidad y especificidad de la enfermedad N mero i Diagn stico de o pruebas o positivo IgM IgG IgA pa EE sn Cualquier isotipo sangre 86 9 Ro o 18 gt 50 4 6 44 AA ES l 100 48 59 48 27 25 SLE con historial de APS F 7 SLE con historial de APS severo 17 29 35 sl 94 APS s ndrome antifosfol pido la sensibilidad de la prueba de anticuerpo anticardiolipina para el mism
3. S Molina J Uribe O Richards S DeCeulaer C Garcia C Wilson WA Gharavi AE and Espinoza LR Variability of anticardiolipin antibody isotype distribution in 3 geographic populations of patients with systemic lupus erythematosus J Rheumatol 24 291 296 1997 16 Juby A Davis P Genge T McElhaney J Anticardiolipin antibodies in two elderly populations Lupus 4 482 485 1995 19 12 BIBLIOGRAFIA 1 Schousboe I f2 Glycoprotein 1 a plasma inhibitor of the contact activation of the intrinsic blood coagulation pathway Blood 1985 vol 66 n 5 1086 91 2 Harris E N Hughes G R V Thrombosis and miscarriages the antiphospholipid antibody story ISI Atlas of Science 1 155 160 1988 3 Loizou S Byron M A Engelhart H J David J Hughes G R V Walport M S Association of quantitativo anticardiolipin antibody levels with fetal loss and time of loss in systemic lupus erythematosus Q J Med 68 525 532 1988 4 Roubey R A S Immunology of the antiphospholipid antibody sydrome Arthr and Rheum 39 1444 1454 1996 5 Galli M Cornfurius P Maassen C Hemker H C DeBaets M H van Breda Vriesman P J C Barbui T Zwaal R F A and Bevers E M Anticardiolipin antibodies directed not to cardiolipin but to a plasma protein cofactor Lancet 335 1544 1547 1990 6 McNeil H P Simpson R J Chesterman C N and Krilis S A Antiphospholipid antibodies are directed against a complex antigen
4. antes de utilizarse Utilice pipetas de alta precisi n Por ejemplo pipetee 10 ul de suero en 990 ul o 1 ml de tamp n de lavado diluido diluci n 1 100 Deseche cualquier muestra diluida que no se utiliz despu s de que el procedimiento de la prueba se ha completado 4 Calibrador f GPI El Calibrador debe diluirse 1 100 para pruebas con un punto de calibraci n D Procedimiento Del Ensayo Referirse al ejemplo sugerido en Fig 1 1 2 10 11 12 Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente 18 25 C antes de utilizarse El Calibrador y los Controles Positivo y Negativo deben incluirse en todos los ensayos Marque las posiciones de las muestras por ejemplo Calibrador Control Positivo Control Negativo y Espec menes en la hoja de trabajo Determine el n mero de tiras necesarias Las tiras no utilizadas deben guardarse en la bolsa y sta sellarse para su uso posterior Diluya todas las muestras calibrador y controles 1 100 por ejemplo 10 ul en 990 ul o 1 ml en tamp n de lavado diluido y mezcle bien Pipetee 100 ul del calibrador y los controles diluidos en cada par de pocillo pocillo recubierto con ant geno y blanco de muestra Pipetee 100 ul de cada muestra diluida en cada par de pocillo pocillo recubierto con ant geno y blanco de muestra Para mejores resultados pipetee todos los materiales en un plazo no mayor de 5 minutos del inicio del ensayo Este paso se facilita utilizando pipetas
5. de pl stico desechables e Pipetas multicanal ajustables 8 or 12 canales Puntas de pipeta tips Tubos de ensayo Cron metro e Pipetas 1ml 5ml y 10ml e Reservorio para pipetear reactivos con pipeta Espectrofot metro para placas de microtitulaci n de 96 pocillos de longitud de onda simple o doble lectora de ELISA e Dispositivo de vac o con trampa ajustado con una pipeta Pasteur para la aspiraci n de los pocillos opcional Agua Desionizada Utilice agua CAP Tipol o grado USP C Preparaci n de Reactivos 1 Soluci n de Lavado Cuando el Concentrado de Lavado 10X se almacena en fr o puede ocurrir cristalizaci n Para mejores resultados diluya 1 10 la botella entera y revise que no haya cristales antes de utilizarse Si se almacena a 2 8 C la Soluci n de Lavado es estable hasta la fecha de expiraci n del kit El tamp n de lavado diluido tambi n se utiliza como diluyente de espec menes 2 Crom geno Para manejar la soluci n de crom geno se debe utilizar cristaler a o material de pl stico desechables Alternativamente todo el material no desechable empleado debe ser lavado copiosamente de acuerdo a las pr cticas generales de laboratorio Evite la contaminaci n y vuelva a poner el crom geno sobrante en su botella original No utilice crom geno que ha cambiado de color a azul 3 Espec menes Control Positivo y Control Negativo Los Espec menes y Controles deben de ser diluidos 1 100
6. multicanal o pipeteadores repetitivos Incube la placa por 30 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Aspire o decante la Muestra de todos los pocillos y lave la placa tres veces con 200 400u1l de soluci n de lavado Se puede utilizar en estre paso una lavadora autom tica de placas Pipetee 100 ul de los Conjugados Enzim ticos apropiados en cada pocillo Complete este paso dentro de 5 minutos para la corrida entera Incube por 30 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Aspire o decante los Conjugados Enzim ticos de todos los pocillos y lave la placa como se indica en el paso 6 arriba Dispense 100 ul de crom geno en cada pocillo Incube la placa por 15 1 min a temperatura ambiente 18 30 C Los pocillos recubiertos con B2 GPL incubados con el Control Positivo y el Calibrador van a desarrollar un color azul Pipetee 100 ul de Reactivo de Parada en cada pocillo y mezcle golpeando levemente el lado de la placa El color azul cambia a amarillo Determine la absorbancia de cada pocillo a 450 nm utilizando un espectrofot metro de longitud de onda simple o doble lectora de ELISA Los valores de absorbancia deber n medirse dentro los 30 minutos siguientes al t rmino del ensayo Para lecturas dobles ajuste el blanco a 630nm Siga las instrucciones provistas con su instrumento Tabla 1 Sensibilidad especificidad y acuerdo para APS de la prueba anti P2GPI 6 7 8 9 gt Cualquier Nivel alto col
7. neta se debe de considerar como cero B C lculo de la actividad de anticuerpo anti f GPI El c lculo de X unidades de anticuerpo en la muestra se basa en el principio siguiente Unidades en el Calibrator X Unidades de la muestra Valor neto de Absorbancia Valor neto de Absorbancia del Calibrator de la muestra Con esta f rmula se calcula un Factor de Conversi n 1 Factor de Conversi n __ N mero unidades anti B GPI en calibrador Valor neto de absorbancia del calibrador D O 2 Factor de Conversi n X absorbancia de la muestra n mero de unidades de la muestra El desempe o de los calibradores y controles se provee en la hoja de datos dentro del kit en uso Si el valor de absorbancia de una muestra es igual o mayor de 2 0 sta deber ser diluida al menos 1 10 adicional y deber volverse a probar De otra manera el resultado deber reportarse como gt n 7 CONTROL DE CALIDAD Y ACEPTABILIDAD DE RESULTADOS Los Controles Positivo y Negativo deben correrse cada vez que se realice el 10 ensayo El rango de valores de absorbancia de los Calibradores y el rango de unidades para los Controles deben estar dentro del rango determinado en la hoja de datos adjunta Si los valores obtenidos est n fuera de este rango la corrida entera se debe descartar y la prueba se debe repetir 8 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 1 El diagn stico no deber basarse exclusivamente en el resultado positivo del ensayo Los resul
8. su almacenamiento No permita que el crom geno tenga contacto con metales o agentes oxidantes Los sueros utilizados para preparar el Calibrador y los Controles Positivo y Negativo fueron obtenidos de sangre humana Cuando fueron probados por m todos aprobados por la FDA se determin que no son reactivos a la presencia de HIV Virus de Inmunodeficiencia Humana al ant geno de la Hepatitis C y al ant geno de superficie de la Hepatitis B HBsAg Aun as estos m todos no pueden ofrecer completa seguridad que el HIV el virus de la hepatitis u otros agentes infecciosos est n ausentes Estos materiales y todos los espec menes de pacientes se deber n manejar como si fueran capaces de transmitir enfermedades infecciosas Utilice cristaler a descartable o material pl stico desechable o lave todos los materiales de acuerdo a las pr cticas de laboratorio aceptadas como normales 4 3 Almacenado y consevacion del kit 1 Al recibirse almacene todos los reactivos a 2 8 C No congelar los reactivos 2 Antes de utilizarse llevar los reactivos a temperatura ambiente 18 30 C por 30 minutos 3 Evite la luz solar directa 4 La Soluci n de Lavado cuando se almacena a 2 8 C es estable hasta la fecha de expiraci n del kit 4 4 Recolecci n y almacenaje de las muestras No se requiere una preparaci n especial del paciente Para evitar la hem lisis obtenga una muestra de sangre entera utilizando t cnicas v lidas o acept
9. 20 Louisville APL Diagnostics Inc Revisi n 1 Mayo 1 2009 REF LAPL K HRP af2GPI 1G LOUISVILLE APL DIAGNOSTICS INC 2622 NASA Pkwy Ste G2 Seabrook TX 77586 USA LAPL a GPI HRP IgG ELISA Kit REF LAPL K HRP aB2GPI 1G Una prueba de Enzimo Inmunoensayo Para la detecci n de Anticuerpos Anti f gt Glicoprote na I IgG IVD Para uso Diagn stico In Vitro Asistencia T cnica Tel 770 455 7129 Fax 770 455 6499 Atenci n al Cliente 800 624 3192 USA amp Canada solamente Email support louisvilleapl com Comentarios feedback Olouisvilleapl com Website www louisvilleapl com Fabricado por TheraTest Laboratories Inc 1111 North Main Street Lombard IL 60148 ES MANUAL DE INSTRUCCIONES LAPL a GPI HRP IgG ELISA Kit INDICE P gina 1 Uso al que est destinado ooooonncnnncnincnocnconnoonconnconoconnco nono non ncnnnonnnonnos 3 2 Explicaci n del ensayo sesesesesesessesereseseesersrererseseesseserereseesersereereese 3 3 Principio del m todo enone n iia 4 A gt COMPONEN ES ironion iieii e i E EE A O O i dci siii 4 4 1 Contenido del Kit LAPL a GPI HRP IgG ELISA 4 4 2 Precauciones sanna e a n aea iaar 5 4 3 Almacenado y conservaci n del kit oooononnonnnnnnnncninonncocos 6 4 4 Recolecci n y almacenaje de las MUestraS ooooncnnccinonmm 6 5 Procedimiento de la prueba oooonncnnncnnnnononoonnonnnonnonncnononn nono nronoco neon oros 6 A Material
10. acientes que ten an manifestaciones cl nicas de s ndrome antifosfol pido y por lo menos uno de los dos anticuerpos espec ficos anticardiolipina o anti B2 GPI N 105 La mejor sensibilidad y acuerdo se obtuvo cuando la muestra era positiva para por lo menos un isotipo cualquier isotipo 88 y 85 respectivamente La mejor especificidad se observ cuando la muestra era positiva para los tres isotipos y los pacientes fueron comparados con donadores normales 100 o controles con enfermedades 98 El nivel de anticuerpo tambi n fue importante al mostrar una especificidad relativamente alta Tabla 1 col 7 12 E Notas al Procedimiento Almacenaje Guarde las tiras no utilizadas en la bolsa con desecante y selle la bolsa Almacene a 2 8 C Lavado Cada fila de pocillos puede ser lavada con un pipeteador multicanal Los pocillos pueden ser aspirados utilizando un aparato apropiado de vac o ajustado con una pipeta Pasteur Alternativamente se pueden utilizar sistemas de lavado semiautom ticos comerciales Independientemente del m todo deje secar los pocillos sobre papel absorbente despu s del lavado final Solamente utilice agua grado reactivo CAP tipo 1 o grado USP Conjugado Enzim tico Calibrador Control Positivo Control Negativo Muestra 1 Muestra 4 2 Muestra 3 Muestra 4 Muestra 5 Fig 1 Ejemplo ubicaci n del Calibrador Control Positivo y Control Negativo Pipeteo Para evitar la contaminaci n en
11. adas Deje que la sangre se coagule y separe el suero por centrifugaci n dentro de las 24 horas despu s de la obtenci n La hem lisis y la lipemia no afectan el desempe o de la prueba Si se evita la contaminaci n microbiana las muestras se pueden almacenar a 2 8 C hasta diez d as NO CONGELE la sangre que no est separada Si el ensayo no se va a realizar dentro de los diez d as despu s de la obtenci n de la muestra el suero debe ser separado del co gulo y almacenado a 20 C No utilice suero que ha sido descongelado m s de una vez o que ha sido inactivado por calor Las muestras de suero han sido probadas para mostrar su estabilidad a temperatura ambiente y se observ que son estables por cinco d as sin p rdida aparente de la actividad de los anticuerpos 5 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA A Material suministrado Item Componente No Vol 1 Placas 12 tiras de 8 pocillos cada una 2 x 96 pocillos 2 Concentrado de Lavado 10X 1 x 100 ml 3 Conjugado Enzim tico anti IgG 1x27ml 4 Crom geno 1x27 ml 5 Reactivo de Parada 1x27ml 6 Control Positivo IgG 1x0 1 ml 7 Control Negativo 1x0 1 ml 8 Calibrador IgG 1x0 1 ml Tabla 5 Sensibilidad especificidad y acuerdo relativos entre anti P2GPI y anticardiolipina TheraTest EL ACA calculado en 140 espec menes probados en paralelo para los dos anticuerpos Los resultados obtenidos con la prueba de anticardiolipina fueron considerados como 100 Datos calculados de la Tabla 4
12. erpos marcados no unidos se remueven por aspiraci n y lavado Se agrega un crom geno y la presencia de anticuerpos es detectada por un cambio de color le do en un lector de ELISA El valor de absorbancia en el pocillo control blanco se sustrae del valor obtenido del pocillo recubierto con P2GPL 4 COMPONENTES 4 1 Contenido del Kit LAPL a GPI HRP IgG ELISA Pocillos Recubiertos de Ant geno para la medici n isotipo espec fica para cada isotipo Cada unidad de prueba consiste de un par de pocillos La tira a la izquierda L est recubierta con B2GPI y la tira a la derecha R sirve como control blanco que va a ser sustra do para obtener una densidad ptica neta Fig 1 Una tira se define como una columna vertical de ocho pocillos En cada marco placa hay seis tiras de blancos y seis tiras de pocillos recubiertos con P2GPI Las tiras est n organizadas verticalmente en el marco con las orillas orientadas hacia abajo Se pueden guardar las tiras no utilizadas y el marco para ser utilizadas posteriormente Se deben colocar en su bolsa con el paquete de desecante se sella y se almacenan a 2 8 C Concentrado de Lavado 10X Tamp n concentrado con Tween 20 Conjugado Enzim tico Anti IgG IgG anti humana Fcy espec fica conjugada con peroxidasa de r bano color verde y 0 2 ProClin 300 Crom geno 3 3 5 5 tetrametilbenzidina en tamp n con per xido de hidr geno Reactivo de Parada cido fosf rico 2M Control Positi
13. manifestaciones del APS 12 Ver Valores Esperados La distribuci n de los isotipos en los pacientes puede variar con el grupo tnico y la manifestaci n de la enfermedad Se ha observado que la anticardiolipina IgG y la anti B2GPI tienen relativamente alta especificidad para el APS 13 Para los anticuerpos anticardiolipina se mostr que la IgG se encuentra como el isotipo dominante en las poblaciones hispana y frico americana y la IgA en la frico caribe a Se encontr que la anticardiolipina IgM est asociada a la anemia hemol tica en pacientes espa oles 14 y mexicanos 15 Se mostr que el isotipo IgA es el prevalente en pacientes de SLE con manifestaciones del APS 12 La presencia de los tres isotipos de anti B2GPI tiene una mayor especificidad para APS que cualquier isotipo aislado Ver Gu a de Interpretaci n 3 PRINCIPIOS DEL METODO El Kit LAPL ap GPI HRP IgG ELISA es un inmunoensayo enzim tico de fase s lida Para la medici n de anticuerpos anti B2GPL los pocillos blanco y recubierto de B2GPI se incuban en paralelo con muestras de sueros diluidos calibrador control positivo y control negativo Durante la incubaci n los anticuerpos presentes en la muestra se unen a la fase s lida Luego los pocillos son lavados y se agregan anticuerpos anti inmunoglobulina humana espec ficos a un isotipo marcados con peroxidasa de r bano Despu s de la incubaci n con el conjugado enzim tico los anticu
14. nticardiolipina Louisville APL Diagnostics Inc Seabrook Texas referirse a la hoja de datos adjunta para los valores sugeridos actualmente Los mismos est ndares se han utilizado para calibrar las unidades de anticuerpo anti B2GPI Para cada isotipo 1U ml de anticardiolipina es considerada igual a 1 U ml de anti P2GPL Los espec menes se deben considerar en el rea gris del rango positivo como sigue IgG de 25 40 unidades Estos resultados se deben informar como positivos l mite y se recomienda al m dico considerar la repetici n de la prueba en 4 8 semanas Es considerado nivel alto gt 40 de GB2GPI U ml 11
15. o grupo fue de 78 para detalles refi rase tambi n a la Fig 3 adjunta subgrupo de 1 grupo de 28 pacientes en la l nea superior con SLE e historial de APS 13 10 GUIA DE INTERPRETACION La sensibilidad cl nica esperada en esta prueba para pacientes con APS se muestra en las Tablas 1 2 Estudios previos han mostrado sensibilidades para IgM e IgG dentro del mismo rango con especificidades de gt 80 para APS 13 La sensibilidad para APS en pacientes de SLE con manifestaciones severas del s ndrome es gt 90 cuando la IgA es tambi n considerada junto con la IgM e IgG 12 En 100 espec menes de pacientes que se esperaba tuvieran el s ndrome de anti fosfol pido hubo una alta correlaci n y una gran concordancia entre los niveles de anticardiolipina y anti P2GPI Figs 2 y 3 p lt 0 001 para los tres isotipos Para calcular la sensibilidad de la enfermedad todos los pacientes en el estudio que cumplieron con la definici n de s ndrome antifosfol pido N 87 por ejemplo manifestaci n es cl nicas m s la presencia de anticuerpos anti cardiolipina 11 se consideraron como el 100 La especificidad para APS se calcul con dos sets de controles a donadores de banco de sangre N 100 y b pacientes con enfermedades vasculares del col geno 50 con artritis reumatoidea 44 con escleroderma 20 con SLE sin manifestaciones de APS total N 114 La concordancia se calcul considerando como 100 todos los p
16. onnonnnonnononcnnncnnnconocnnnnn noo 15 Figura 2 b Isotipo IgG ooooconnccnncniococononononnnonnnnnncnnnonnnconocnonnnnos 16 Figura 2 c Isotipo IgA oooooconccnncnnncnconooononononnnnonononcnnocanocnnnnnnno 16 Figura 3 Relaci n entre anti B2GPI y aCL cococionionicnioninninnicniinonss 17 1 Caracteristicas coin ia E 17 11 1 Presici n dentro del ensayo ooonconnocincninonoonnonnnonoconocnonnnnos 17 11 2 Presici n entre ensayos ocoooooonconconoonnonnnonncnoncnnnc noc nono nncnnnos 17 12 Bibliografia ninnan is A io E Sos 18 2 binding J Immunol 154 954 960 1995 11 Alarcon Segovia D and Cabral A R The antiphospholipid cofactor syndromes J Rheumatol 23 1319 1322 1996 12 Fanopoulos D Teodorescu M R Varga J and Teodorescu M High frequency of abnormal levels of IgA anti P2GPI antibody in SLE patients with antiphospholipid antibody syndrome data on file and J Rheumatology 25 675 680 1998 13 Tsutsumi A Matsuura E Ichikawa K Fujisaku A Mukai M Kobayashi S and Igarashi Y Koike T Antibodies to 2 Glycoprotein 1 and clinical manifestations in patients with systemic lupus erythematosus Arthritis Rheum 39 1466 1474 1996 14 Cervera R Font J Lopez Soto A Casals F Palares L Bove A Ingelmo M and Urbano Marquez A Isotype distribution in systemic lupus erythematosus prospectivo analysis of a series of 100 patients Ann Rheum Dis 49 109 113 1990 15 Molina JF Gutierrez Urena
17. ptido de cadena simple con un peso molecular aproximado de 50 kD no reducido y 70 kD reducido Est presente en el plasma en una concentraci n de alrededor de 200 ug ml Se ha demostrado que la B2GPI inhibe la v a intr nseca de la coagulaci n sangu nea la agregaci n de plaquetas mediada por ADP y la actividad protrombinasa de las plaquetas activadas 1 En general los autoanticuerpos contra fosfol pidos en particular la cardiolipina est n asociados con trombosis p rdida fetal recurrente inflamaci n del sistema nervioso central trombocitopenia y otras manifestaciones Generalmente se encuentran agrupadas en el denominado s ndrome de anticuerpos antifosfol pidos APS 2 3 4 La evidencia ha puesto de manifiesto que algunas mol culas de anticuerpo antifosfol pido reconocen la cardiolipina mientras que otras reconocen un complejo formado por cardiolipina y una prote na portadora PB2GPI 5 8 Otros estudios han demostrado que gran parte de los anticuerpos reconocen mol culas de B2GPI a una densidad alta 9 bloqueadas a una fase s lida irradiada con rayos X 10 En estudios recientes se ha demostrado que la medici n de anticuerpos IgM e IgG anti P2GPI puede ser m s espec fica para el diagn stico de pacientes con APS que la medici n de anticuerpos anticardiolipina rev en 4 y 11 Adem s se mostr que un gran n mero de pacientes con SLE tienen IgA anti P2GPL lo que est en correlaci n con su presencia en
18. suministrado oonccocnccnocinocononnonanononncononncononononcrnnonnos 6 B Material requerido pero no suministrado oooocccocnnonoccnoniccnnnons 7 C Preparaci n de Reactivos cooococonocnnocononcoononnnonnncononnonnornonnnnnos 7 D Procedimiento del ensayo oooooconoconoconononononnconnono nono nonnronnonnnonos 8 E Notas al procedimiento ooocooococononnnoncoonconconncon nono nonn nono nonnnnnnnnos 9 6 C lculo de Resultados oncncnnnnnnonononncnonocononconncnnonncnnconorononccnninno 10 A Determinaci n de los valores de absorbancia 10 B C lculo de la actividad de anticuerpo anti B2GPl oocococ 10 7 Control de calidad y aceptabilidad de los resultados 10 8 Limitaciones del procedimiento oooconncnicnnoonconnconconncnonono nono ronnnnnnonos 11 9 Valores esperados oocooccnoonnonnconnconconnconnconon nooo ccoo nono nonnronn nn n rra rra 11 10 Gu a de intrerpretaci n ooooocnnononononononnnonnnonoconocn nono non nono nono nnnnncnn nono 12 Tabla 1 Sensibilidad especificidad y acuerdo ooonoccoonoo 13 Tabla 2 Porcentaje de muesras positivas oonooonccocnnnconccnnaconnnnnon 13 Tabla 3 Distribuci n de isotipos simples ooonoononnccionmommmmm o 14 Tabla 4 Relacion entre resultados positivos y negativos 14 Tabla 5 Sensibilidad especificidad y acuerdo ooonoocioo o 15 Figura 2 a Isotipo IgM ooonoconccnnnonococonc
19. tados deben interpretarse en conjunci n con toda la informaci n cl nica a disposici n del m dico historial del paciente ex men f sico y otros procedimientos de diagn stico 2 El tratamiento del paciente no se debe iniciar solamente sobre la base en una prueba positiva para B2GPI La informaci n cl nica de apoyo deber estar disponible 3 Los pacientes con serolog a positiva para S filis incluyendo la prueba de fluorescencia tambi n pueden ser positivos para anticuerpos anti P2 GPI Se debe conocer la serolog a para S filis si una muestra es anormal 4 Como para cualquier inmunoensayo indirecto de fase s lida el factor reumatoide de cualquier isotipo puede reaccionar con IgG unida a la fase s lida en la forma de anticuerpo anti P2GPI Sin embargo si la IgG anti B2GPI no est presente el factor reumatoideo no reacciona con los pocillos recubiertos de ant geno 5 Individualmente cada laboratorio debe verificar los valores normales de los diferentes isotipo ya que estos pueden variar con la edad y los grupos tnicos Sin embargo los valores anormales en personas mayores no se deben atribuir solamente a la edad 16 9 VALORES ESPERADOS Se probaron sueros de 100 donadores de sangre al azar y se determinaron los siguientes l mites superiores para normales para un corte a 98 99 percentil para cada isotipo IgG anti B2GPI 25 GB2GPI unidades ml Las unidades son las mismas que las utilizadas para anticuerpos a
20. that includes a lipid binding inhibitor of coagulation 2 Glycoprotein I apolipoprotien H Proc Natl Acad Sci USA 87 4120 4124 1990 7 Matsuura E Igarashi Y Fujimoto M Ichikawa K Koike T Anticardiolipin cofactor s and differential diagnosis of autoimmune disease Lancet 336 177 178 1990 8 Matsuura E Igarashi Y Fujimoto M Ichikawa K Suzuki T Sumida T Yasuda T and Koike T Heterogeneity of anticardiolipin antibodies defined by the anticardiolipin cofactor J Immunol 148 3885 3891 1992 9 Matsuura E Igarashi Y Yasuda T Triplett D A and Koike T Anticardiolipin antibodies recognize P2 Glycoprotein 1 structure altered by interacting with an oxygen modified solid phase surface J Exp Med 179 457 462 1994 10 Roubey R A S Eisenberg R A Harper M F and Winfield J B Anticardiolipin autoantibodies recognize PB2 Glycoprotein 1 in the absence of phospholipid importance of antigen density and bivalent 18 1 USO AL QUE ESTA DESTINADO El Kit LAPL ap GPI HRP IgG ELISA es un test de diagn stico in vitro para la medici n de autoanticuerpos IgG en suero humano dirigidos contra la B2glicoprote na I B2GPI s rica Esta medici n ayuda en el diagn stico del s ndrome de anticuerpos antifosfol pidos APS o de ciertos des rdenes tromb ticos autoinmunes secundarios al lupus eritematoso sist mico SLE 2 EXPLICACION DEL ENSAYO La P2GPI es un polip
21. tre muestras es esencial pipetear el control positivo el control negativo el calibrador y los espec menes de prueba con puntas de pipeta diferentes Utilice un pipeteador multicanal calibrado para pipetear el conjugado enzim tico la soluci n de lavado el crom geno y el reactivo de parada Arreglo de Placas Para minimizar la confusi n que resulta del desajuste de las tiras del marco escriba un s mbolo que identifique la naturaleza de las tiras en la orilla texturizada antes de empezar el ensayo 6 CALCULO DE RESULTADOS La mayor a de lectoras de ELISA son compatibles con computadoras y los datos se pueden calcular con la ayuda de programas para computadora Revise peri dicamente que el programa escogido muestre los mismos resultados que los obtenidos por c lculos manuales validaci n A Determinaci n de los valores de absorbancia La absorbancia neta para cada muestra es calculada sustrayendo el valor de absorbancia del pocillo blanco R del valor de absorbancia del pocillo recubierto con ant geno L Para pruebas espec ficas de clase cada muestra tiene un blanco por separado y es sustra do para obtener la absorbancia neta Ejemplo Absorbancia para el pocillo blanco 0 150 Absorbancia de la Muestra en el pocillo recubierto con B2GPI 1 150 Absorbancia neta de la anti P2GPI es 1 150 0 150 1 000 Nota Si la absorbancia en el pocillo blanco es mayor que en el pocillo recubierto con P2GPI la absorbancia
22. unto simple con anticuerpos anticardiolipina aCL curva est ndar en espec menes de 100 pacientes con manifestaciones del s ndrome antifosfol pido y 1 738 x r 0 869 p lt 0 001 10000 1000 100 Gp2GP1 units ml 1 10 100 1000 10000 GpL units ml Fig 2b Figura 2 c Isotipo IgA Correlaci n entre los niveles de anti P2GPI LAPL aB GPI HRP ELISA Kit calibraci n de punto simple con anticuerpos anticardiolipina aCL curva est ndar en espec menes de 100 pacientes con manifestaciones del s ndrome antifosfol pido y 4 378x 2 1 0 682 p lt 0 001 AB2GP1 units ml ApL units ml Fig 2c 16 de su desempe o Control Negativo Suero humano conteniendo 0 2 ProClin 300 Referirse a la hoja de datos adjunta para las caracter sticas de su desempe o Calibrador El Calibrador contiene suero humano con anticuerpos IgG anti P2GPI y 0 2 ProClin 300 Referirse a la hoja de datos adjunta para las caracter sticas de su desempe o 4 2 Precauciones IR ES DN 10 11 Solamente para el uso de diagn stico in vitro No pipetear con la boca No coma beba o fume en las reas se trabajo L vese las manos copiosamente despu s de utilizar espec menes y reactivos del kit No usar componentes despu s de la fecha de expiraci n No mezclar los reactivos de diferentes lotes Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos Evite la exposici n de los reactivos a excesivo calor o luz durante
23. vo Suero humano conteniendo anticuerpos IgG anti B2GPI y 0 2 ProClin 300 Referirse a la hoja de datos adjunta para las caracter sticas Figure 3 Relaci n entre 100 espec menes con niveles anormales de anticuerpos anticardiolipina y o anti P2GPI Notar la gran similaridad entre los resultados obtenidos entre los dos ensayos como asi tambi n la existencia de espec menes que aparecen como normales en solamente uno de los dos ensayos 0 50 100 L A O E E E aS S SAS Mp2GP1 MpL Gf2GP1 GpL AP2GP1 ApL anti P2GP1 anticardiolipin ooo o 0 020 AMA gt 2 51 0 50 100 Fig 3 11 CARACTERISTICAS 11 1 Precisi n Dentro del Ensayo La precisi n dentro de la corrida se determin ensayando en 42 pares de pocillos una muestra que conten a autoanticuerpos para cada clase de anticuerpo Se encontr que el coeficiente de variaci n para IgM IgG e IgA anti B2GPI fue de 6 11 y 11 respectivamente 11 2 Precisi n Entre Ensayos La precisi n entre corridas se determin ensayando en 20 corridas muestras que conten an niveles altos y bajos de autoanticuerpos Se encontr que el coeficiente de variaci n fue de IgM 5 IgG lt 9 e IgA lt 11 17 Figura 2 b Isotipo IgG Correlaci n entre los niveles de anti 2GPI LAPL aB GPI HRP ELISA Kit calibraci n de p
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