HYDRAGEL 7 ß1-ß2 HYDRAGEL 15 ß1-ß2
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1. HYDRAGEL 7 61 62 Ref 4101 HYDRAGEL 15 81 82 Ref 4121 HYDRAGEL 30 81 82 Ref 4141 2012 03 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 ESPECIFICACIONES DE USO Los geles HYDRAGEL 7 81 82 y HYDRAGEL 81 82 15 30 estan dise ados para la separaci n de las prote nas del suero y orina humanas mediante electroforesis en geles de agarosa alcalinos pH 8 6 Las prote nas del suero humano normal se separan en seis fracciones principales Los kits se utilizan junto con el instrumento semiautom tico HYDRASYS Las prote nas separadas se ti en con negro amido Las separaciones electrofor ticas son evaluadas visualmente para la detecci n de anormalidades en el patr n de migraci n La densitometr a proporciona una cuantificaci n relativa exacta de las fracciones individuales Cada gel de agarosa est dise ado para procesar 7 muestras en el kit HYDRAGEL 7 81 82 15 muestras en el kit HYDRAGEL 15 B1 B2 30 muestras en el kit HYDRAGEL 30 B1 B2 Para Uso Diagn stico In Vitro NOTA En estas instrucciones el nombre HYDRASYS es usado para designar los sistemas semiautom ticos HYDRASYS e HYDRASYS 2 SEBIA PRINCIPIO DEL TEST 16 La electroforesis de prote nas es una t cnica arraigada que se utiliza rutinariamente en los laboratorios cl nicos para investigar la presencia de anormalidades proteicas en el suero y en otros fluidos corporales Est basada en los principios de la electroforesis de zona realizada en2. lisis cuantitativo y cualitativo Veintiocho 28 muestras diferentes orinas patol gicas y normales fueron analizadas en geles HYDRAGEL 81 82 15 30 y en otro sistema comercial de geles de agarosa No hubo diferencias detectables visualmente entre los dos sistemas La sensibilidad de detecci n se determin a partir de la mayor diluci n serial de una prote na monoclonal urinaria que proporcion una banda distinguible a 0 024 g dL PATRON DE MIGRACION Ce Orosomucoide Pre a1 Antitripsina DT UN a1 Antiquimotripsina Ceruloplasmina Globulina GC a2 Macroglobulina Haptoglobina E NE Lipoprote nas B Transferrina Hemopexina Plasminogeno Fibronectina Complemento C3 y Globulinas G A M D E Detalle de la fracci n alfa 2 gt 2 5 EA 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 3 4 5 A B Cc 1 2 Macroglobulina 2 Haptoglobina 3 Ceruloplasmina 4 Globulina GC 5 Lipoprote nas a1 43 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY 10 Tk 12 13 14 15 16 Brouet J C Les cryoglobulin mies La Presse M dicale 1983 12 p 2991 2996 Brouet J C Orientation diagnostiqu e en cas d anomalies des immunoglobulines plasmatiques lg E exclues La Revue du Praticien n 9 21 03 91 p 782 785 Garnier J P Laurent D Clauvel J P Danon F Bousquet B Dreux C Dosages des prot ines s riques cause d erreur en cas d
3. s de la diluci n la soluci n decolorante contiene una soluci n cida pH 2 Uso Para la destinci n sto es la eliminaci n del exceso de tinci n y la coloraci n de fondo de los geles Para el lavado del compartimento de coloraci n Para neutralizar la acidez del decolorante introduzca dentro del contenedor de desechos vac o 15 ml de sosa al 50 soluci n comercial 38 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar la soluci n decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada La soluci n stock de decolorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial NO CONGELAR La soluci n decolorante de trabajo es estable una semana a temperatura ambiente en un contenedor cerrado No a adir azida s dica Desechar la soluci n decolorante de trabajo si cambia su apariencia p ej si se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana Para evitar la proliferaci n microbiana en la soluci n decolorante diluida que se vaya a almacenar durante m s de una semana a ada 5 uL dL de ProClin 300 El decolorante diluido al que se ha a adido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante 2 SOLUCI N DE LAVADO HYDRASYS Preparaci n Cada vial de la Soluci n stock de lavado HYDRASYS SEBIA PN 4541
4. 10 viales 80 ml cada uno se diluye hasta 5 litros con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene tamp n pH 8 7 0 5 Uso Sirve para limpiar el Compartimento de Tinci n del HYDRASYS Usar peri dicamente p ej si el instrumento se usa a diario lavar el compartimento de tinci n semanalmente Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar ambas soluciones de lavado stock y de trabajo a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados La soluci n stock de lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial Desechar la soluci n de trabajo de lavado si cambia su apariencia p ej si se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana 3 FLUIDIL Preparaci n El Fluidil SEBIA PN 4587 5 ml est listo para su uso Uso Para la diluci n de las muestras que no difunden bien en los dientes del aplicador por ejemplo muestras viscosas o turbias cuya turbidez es debida a la presencia de una crioglobulina o un criogel muestras con Ig M polimerizada o que presentan un perfil electrofor tico de baja intensidad Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar a temperatura ambiente Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial de Fluidil El Fluidil debe estar exento de precipitados NOTAS Las pruebas realizadas dura
5. alfa 2 y o de la zona beta 1 Los porcentajes de las fracciones alfa 2 y beta permanecen inalterados a pesar del leve desdoblamiento debido a la variaci n de la movilidad electrofor tica 2 La forma caracter stica de la fracci n de beta lipoproteina con una focalizaci n importante y una forma irregular no puede en ning n caso provocar un error de interpretaci n s lo cambia su aspecto Vea MUESTRAS PARA ANILISIS Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no puede darse ninguna garant a respecto a la detecci n de la totalidad de todos los componente monoclonales Resoluci n de problemas Lamar al Servicio de Asistencia T cnica del distribuidor cuando falle el funcionamiento de la prueba pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la preparaci n y conservaci n de los materiales y para el procedimiento de la t cnica Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de su distribuidor CARACTERISTICAS TECNICAS Todas la densitometr a se realiz utilizando el densit metro HYRYS con el filtro amarillo Reproducibilidad Intra geles Tres 3 muestras de suero diferentes fueron analizadas cada una en 28 pistas de un gel HYDRAGEL B1 B2 15 30 de cada uno de los dos lotes controla
6. immunoglobuline monoclonale Act Pharm Biol Clin 1987 4 p 275 278 Guinan J E C Kenny D F Gatengy P A Detection and typing of paraproteins comparison of different methods in a routine diagnostic laboratory Pathology 1989 21 p 35 41 Keren D F High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation Butterworth Heinemann Woburn MA USA 2nd ed 1994 397 pp Le Carrer D Gammapathies monoclonales mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 Premi re partie Les techniques de diagnostic prot inologique principes et limites L Eurobiologiste 1991 Tome XXV n 194 p 203 212 Le Carrer D Gammapathies monoclonales mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 Seconde partie Diagnostic prot inologique du my lome de la maladie de Waldenstr m et des autres gammapathies monoclonales L Eurobiologiste 1991 Tome XXV n 195 p 283 285 Le Carrer D Int r t du profil prot ique cible immunitaire en biologie clinique Revue Frangaise des Laboratoires 1993 Le Carrer D lectrophor se et Immunofixation des Prot ines S riques Interpr tations illustr es Laboratoires SEBIA 1994 120 pp Le Carrer D L interpr tation de l lectrophor se des prot ines L Eurobiologiste 1989 Tome XXIII n 182 p 27 33 North M L D tection et caract risation d une immunoglobuline monoclonale Revue Fran aise des Laboratoires Mars 1990 n 203
7. la puerta cuando los soportes est n elevados 4 Seleccionar el programa de migraci n 7 B1 B2 para el HYDRAGEL 7 B1 B2 o el programa de migraci n 15 30 B1 B2 para el HYDRAGEL 81 82 15 30 en el men del instrumento mitad izquierda del teclado 5 Sacar las esponjas tamponadas de su envoltorio asirlas por los extremos de pl stico Engarzar los extremos de pl stico agujereados con las puntas met licas del soporte de los electrodos los extremos de pl stico deben quedar encarados al soporte Fig 2 6 Abrir el contenedor del HYDRAGEL Extienda un papel de filtro fino de manera r pida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de l quido Retire el papel inmediatamente ADVERTENCIA No deje que el papel de filtro contacte demasiado rato con el gel para evitar que se deshidrate Dispensar 120 ul de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 7 81 82 6 200 pl para el HYDRAGEL 81 82 15 30 en el tercio inferior del marco serigrafiado en la Superficie de Control de Temperatura del m dulo de migraci n Colocar el gel la cara de agarosa hacia arriba con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado Fig 3 Aplicar el gel en la superficie haci ndolo contactar con el agua Fig 3 Asegurarse que no queden burbujas que el agua est extendida bajo toda la superficie del gel y que ste est alineado con el marco serigrafiado 7 Devolver ambos soportes a su posici n original Las espo
8. orina deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en los laboratorios cl nicos Refrigere las muestras 2 a 8 C tan pronto como sea posible despu s de su obtenci n durante una semana NOTA la fracci n beta 2 el complemento C3 desaparece al cabo de 3 d as Para per odos de almacenamiento m s prolongados almacene las muestras congeladas son estables durante un mes al menos Congelar los sueros con azida s dica 0 2 g l mejora la estabilidad del almacenaje Congelar orina con HEPES 0 1 M pH 6 75 y azida s dica 0 2 g l mejora la estabilidad del almacenaje IMPORTANTE No utilizar cido b rico como conservante Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicaci n debidas a la desnaturalizaci n de prote nas o lipoprote nas El almacenamiento entre 2 y 8 C y la congelaci n causan un desplazamiento an dico de las beta lipoprote nas del suero desde la fracci n beta 1 hasta las fracciones alfa 2 o alfa 1 cuanto m s antiguo sea el suero mayor ser el desplazamiento 39 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 Preparaci n de las muestras 1 Suero Use muestras de suero no diluidas Tratamiento de los sueros con Fluidil El tratamiento de los sueros con Fluidil debe ser aplicado en los casos siguientes Sueros que no difunden bien en los dientes del aplicador por ejemplo sueros viscosos o turbios tras la conservaci n en nevera entre 2 y 8 C o la congelaci n e
9. un medio de soporte adecuado La agarosa se ha convertido en un medio de soporte vers til y efectivo Para aplicaciones diagn sticas de rutina las prote nas s ricas se separan en cinco fracciones principales por ejemplo en los kits HYDRAGEL PROTEIN E Cuando es necesaria una mayor resoluci n las proteinas pueden separarse en seis fracciones principales utilizando los kits HYDRAGEL 81 82 15 30 alb mina alfa 1 globulinas alfa 2 globulinas beta 1 globulinas beta 2 globulinas y gamma globulinas Cada fracci n contiene una o m s prote nas s ricas Los patrones proteicos de la orina se parecen a los del suero Sin embargo las intensidades relativas de las fracciones o su presencia pueden variar enormemente en funci n de la capacidad de filtraci n del ri n REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL 7 15 Y 30 81 82 ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad ART CULO PN 4101 PN 4121 PN 4141 Geles de agarosa listos para su uso 10 geles 10 geles 10 geles Esponjas tamponadas listas para su uso 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 Diluyente del colorante soluci n stock 1 frasco 60 ml 1 frasco 60 ml 1 frasco 60 ml Colorante Negro Amido soluci n stock 1 frasco 20 ml 1 frasco 20 ml 1 frasco 20 ml Aplicadores listos para su uso 1 caja de 10 1 caja de 10 2 cajas de 10 Papeles de filtro 1 bolsa de 10 1 bolsa de 10 1 bolsa de 10 PARA OBTENER RESULTA
10. 1 2 9 9 6 5 2 42 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 Exactitud Se analizaron muestras de suero patol gicas y normales n 112 en geles HYDRAGEL 81 82 15 30 y en geles HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 Los par metros de correlaci n calculados para fracciones individuales a partir del conjunto de datos de los geles HYDRAGEL PROTEIN E 15 30 respecto a los sistemas de geles comparados y HYDRAGEL 81 82 15 30 fueron Fracci n Coeficiente Punto de corte en y Pendiente Rango de Valores en de correlaci n HYDRAGEL 81 82 15 30 Alb mina 0 989 0 318 1 010 36 1 70 8 Alfa 1 0 967 0 009 0 952 1 0 10 4 Alfa 2 0 981 0 002 0 985 5 6 22 9 Beta 1 Beta 2 0 950 0 475 0 950 9 5 22 3 Gamma 0 988 0 134 0 988 5 1 28 1 Sensibilidad Se sometieron a electroforesis en geles HYDRAGEL B1 B2 15 30 diluciones seriadas de dos muestras de suero cada una con una prote na monoclonal La mayor diluci n con una banda monoclonal discernible correspond a a 0 44 y 0 21 g l de la prote na monoclonal para las dos muestras respectivamente NOTA El l mite de detecci n puede variar en funci n de la posici n de la banda monoclonal y el fondo policlonal de la fracci n de las gammaglobulinas An lisis de orinas concentradas Los resultados obtenidos con los geles HYDRAGEL 81 82 15 30 indican una muy buena reproducibilidad intra e interseriales para muestras de orina concentradas despu s de un an
11. DOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y seg n las instrucciones incluidas LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES 1 GELES DE AGAROSA Preparaci n Los geles de agarosa est n listos para usar Cada gel contiene agarosa tamp n pH 8 6 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Medio de soporte para la electroforesis de prote nas Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente 15 a 30 C o refrigerados 2 a 8 C Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores La flecha situada en la cara frontal de la caja del kit debe apuntar hacia arriba Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor Evitar variaciones importantes de temperatura durante su almacenamiento NO CONGELAR Desechar cuando i haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda consecuencias de la congelaci n del gel ii se observe crecimiento bacteriano o f ngico iii se evidencie una cantidad excesiva de l quido en el recipiente del gel consecuencia de la exudaci n del tamp n debida a un almacenamiento inadecuado 2 ESPONJAS TAMPONADAS Preparaci n Las esponjas tamponadas est n listas para usar Cada esponja tamponada contiene tam
12. IMIENTO El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautom tico multiparam trico Las etapas autom ticas incluyen el procesado de los geles de agarosa HYDRAGEL en la siguiente secuencia aplicaci n de la muestra migraci n electrofor tica secado tinci n destinci n y secado final Las etapas manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles y la puesta en marcha del instrumento para la operaci n LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS HYDRASYS 2 I PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACI N 1 Encender el HYDRASYS 2 Colocar un aplicador para el HYDRAGEL 7 81 82 7 muestras y HYDRAGEL 81 82 15 30 15 muestras o dos aplicadores para el HYDRAGEL 81 82 15 30 30 muestras en una superficie plana con los n meros de los pocillos en la cara superior Fig 1 Aplique 10 pl de muestra de suero sin diluir o de orina concentrada en cada pocillo Cargar cada aplicador en el plazo m ximo de 2 minutos Colocar el los aplicador es en la c mara h meda con el peine hacia arriba asirlos por el pl stico protector del peine Dejar difundir las muestras a trav s de los papeles del peine durante 5 minutos despu s de la aplicaci n de la ltima muestra Para uso posterior hasta 8 horas guardar todo el conjunto en refrigeraci n Ver la hoja de instrucciones de la c mara h meda para m s detalles 3 Abrir la puerta del M dulo de migraci n y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador ATENCI N Nunca cerrar
13. ad de sus componentes proteicos consulte el PATR N DE MIGRACI N Algunos sueros tienen fenotipos diferentes de Haptoglobina o de Globulina GC La posici n de la lipoproteina alfa 1 depende de su concentraci n y de la conservaci n de la muestra En ciertas muestras una banda fina m s o menos focalizada correspondiente a una parte del complemento C3 puede observarse en la zona Beta 2 ver PATR N DE MIGRACI N Para consultas sobre la interpretaci n de las separaciones electrofor ticas de prote nas s ricas y urinarias vea la BIBLIOGRAF A Interferencias y Limitaciones Las lipoprote nas LDL y HDL son mol culas complejas con una movilidad electrofor tica natural muy variable desde la zona beta a la zona alfa 2 Para evitar dificultades de integraci n e interpretaci n los geles HYDRAGEL tienen una composici n particular que coloca generalmente las HDL en la zona alfa 2 y las LDL en la zona beta Sin embargo esta migraci n es muy sensible a los siguientes factores tiempo de almacenamiento de la muestra concentraci n de lipoprote nas tratamientos con medicamentos por ejemplo con heparina estado de hidrataci n del gel conservaci n del gel variaciones incluso muy leves de las materias primas Por estas razones puede observarse un ligero desplazamiento an dico de estas lipoprote nas que se vuelven m s aparentes o que implica un ensanchamiento de la fracci n incluso un desdoblamiento de la zona
14. ciones de colorante concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de colorante La soluci n diluida es estable durante 1 mes El per odo de estabilidad puede prolongarse a 3 meses si la soluci n diluida se conserva en nevera Es imperativo colocar el contenedor cerrado en nevera inmediatamente despu s de cada uso No almacene la soluci n de colorante diluida cerca de una fuente de calor 5 APLICADORES Uso Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicaci n de la muestra Almacenamiento Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados 6 PAPELES DE FILTRO Uso Papeles finos absorbentes precortados de un solo uso para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicaci n de la muestra Conservaci n Conserve los papeles de filtro finos en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 SOLUCI N DECOLORANTE Preparaci n Cada vial de Soluci n Decolorante stock SEBIA PN 4540 10 viales de 100 ml se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada Es conveniente diluir s lo 5 ml de la soluci n stock hasta 5 litros volumen del contenedor de la soluci n decolorante Despu
15. dad Se aconseja incluir un suero control Suero Control SEBIA PN 4785 en cada an lisis de muestras Valores La lectura del gel mediante densitometr a permite definir las concentraciones relativas porcentajes de cada fracci n Los valores normales media 2 SD para las fracciones proteicas electrofor ticas principales en los geles HYDRAGEL B1 B2 15 30 en el sistema HYDRASYS han sido establecidos a partir de una poblaci n sana de 136 adultos hombres y mujeres La cuantificaci n de las prote nas en UV en el CAPILLARYS proporciona valores similares a los de la nefelometr a en especial para la alb mina SEBIA propone una estandarizaci n de los valores obtenidos en HYDRAGEL realizando una calibraci n de los sistemas de lectura Valores sin estandarizaci n Valores estandarizados en el CAPILLARYS FRACCI N HYRYS GELSCAN DVSE PHORESIS HYRYS GELSCAN DVSE PHORESIS Alb mina 60 3 72 8 54 3 65 5 Alfa 1 globulinas 10 26 1 2 3 3 Alfa 2 globulinas 7 2 11 8 8 3 15 0 Beta 1 globulinas 5 6 9 1 6 5 11 5 Beta 2 globulinas 2 2 5 7 2 5 7 2 Gamma globulinas 6 2 15 4 7 1 19 5 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de normalidad 41 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 Interpretaci n 18 En algunas muestras de suero la fracci n alfa 2 puede presentar un ligero desdoblamiento que depende de la concentraci n y la movilid
16. de ning n modo a la calidad de la soluci n final y su capacidad de coloraci n Para obtener una perfecta reconstituci n del colorante siempre hay que prepararlo como se indica a continuaci n 1 A ada unos 15 mL de diluyente del colorante en el vial de negro amido concentrado Cierre el vial con cuidado Agite el vial intensamente durante un m nimo de 5 segundos Vierta la soluci n obtenida en el recipiente de preparaci n de la soluci n de coloraci n Repita esta operaci n dos veces o tres veces si es necesario Vierta el resto de diluyente en el recipiente de preparaci n de la soluci n de coloraci n Complete hasta 300 mL con agua destilada o desionizada 8 Agite esta soluci n de 5 a 10 minutos El colorante est listo para usar NOTA Una reconstituci n incompleta del colorante puede implicar una mala coloraci n de la fracci n alb mina disminuci n de su porcentaje o aparici n de un agujero blanco en el centro de la fracci n NBC Despu s de la diluci n la soluci n colorante contiene soluci n cida pH 2 negro amido etil n glicol componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la coloraci n de los geles despu s de la separaci n electrofor tica de las prote nas IMPORTANTE El colorante est destinado para colorear s lo 10 geles Cambie el colorante despu s de 10 usos Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las solu
17. dos Se calcularon las medias DS y CV n 28 para cada muestra cada zona y cada gel lote La tabla muestra los valores correspondientes a la muestra A obtenidos a partir de los dos geles lotes controlados Se obtuvieron resultados similares para las muestras B y C FRACCI N MEDIA DS CV Alb mina 50 8 51 5 0 8 1 3 16 2 5 Alfa 1 29 2 9 0 1 0 1 32 37 Alfa 2 8 8 8 7 0 1 0 2 1 2 2 8 Beta 1 8 6 8 2 0 3 0 2 4 0 2 2 Beta 2 5 3 5 4 0 2 0 5 4 4 8 5 Gamma 24 1 23 3 0 4 0 6 17 24 Reproducibilidad Inter geles e Inter an lisis Quince 15 muestras de suero diferentes fueron analizadas en un gel cada uno de dos lotes de geles HYDRAGEL 81 82 15 30 durante cinco dias consecutivos Cada muestra fue aplicada en dos pistas de cada gel filas superior e inferior Se calcularon las medias DS y CV diarios y totales para cada muestra y fracci n Los resultados fueron esencialmente los mismos para todas las muestras y para ambos lotes El ejemplo siguiente muestra los rangos de DS y CV calculados para muestras individuales durante el per odo de 5 d as y el CV medio calculado a partir de los CV agrupados de todas las muestras y d as y un lote n 150 FRACCI N DS CV CV MEDIO Alb mina 0 3 2 1 0 5 3 2 1 4 Alfa 1 0 1 0 2 3 3 10 2 4 8 Alfa 2 0 1 0 3 1 2 6 0 2 8 Beta 1 0 1 0 7 2 7 8 2 4 3 Beta 2 0 2 0 7 6 1 517 8 11 0 Gamma 0 5 1
18. e Temperatura se enfr a cuando alcanza los 50 C un pitido audible indica que la puerta del m dulo de migraci n queda desbloqueada La temperatura permanece a 50 C hasta que se abre la puerta Luego la temperatura desciende hasta 20 C en menos de 5 minutos despu s de lo cual puede iniciarse una nueva migraci n NOTA La puerta del m dulo de migraci n permanece bloqueada durante todas las etapas de la migraci n II PUESTA EN MARCHA DEL PROCESADO DEL GEL 1 Abrir la puerta del m dulo de migraci n Extraer el los aplicador es y desechar Elevar ambos soportes extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de pl stico y desechar Extraer el gel seco para el procesamiento posterior Despu s de cada uso limpiar los electrodos y la Superficie de Control de Temperatura con un pa o suave humedecido Extraer el Soporte del Gel Dejarlo en una superficie plana y encajar el gel seco con la superficie de agarosa de cara arriba en las muescas de los dos cilindros Cerrar el Soporte del Gel Asegurarse que el gel est posicionado correctamente en su soporte Fig 5 7 Colocar el soporte del gel en el M dulo de Tinci n y Procesamiento IMPORTANTE Antes de iniciar el programa de tinci n y procesamiento del gel controlar el contenedor de colorante tiene 300 ml de soluci n de tinci n el contenedor de decolorante tiene al menos 1 litro de soluci n decolorante el contenedor de desechos est vac o Para la conexi n de lo
19. n particular aquellos que contiene una crioglobulina o un criogel Sueros con una lg M polimerizada Sueros con un perfil electrofor tico de baja intensidad Trate previamente estos sueros con el Fluidil a ada 25 HL de Fluidil a 75 HL de suero agite 15 segundos en el vortex y luego siga con el procedimiento habitual 2 Orinas concentradas El an lisis se lleva a cabo con orinas concentradas hasta 15 20 g l con un mecanismo adaptado IMPORTANTE Algunas orinas presentan un alto contenido de sales Esto puede provocar que el gel se deforme durante la migraci n y por lo tanto distorsi n de los perfiles electrofor ticos Para evitar este problema es necesario eliminar las sales con una di lisis En caso de orinas turbias concentradas o no se recomienda eliminar las part culas centrifugando las muestras durante 10 minutos a 3000 rpm o por filtraci n en un filtro de 0 45 um para obtener una buena difusi n en los aplicadores Muestras a descartar No utilice muestras de suero hemolizadas La hem lisis incrementa las fracciones alfa 2 y beta No utilice muestras de plasma El fibrin geno da lugar a una banda cerca del punto de aplicaci n que puede ser confundida con una inmunoglobulina monoclonal y afectar a al porcentaje de la fracci n beta correspondiente No utilice muestras de orina muy antiguas o almacenadas incorrectamente en las que pueda haber tenido lugar degradaci n enzim tica de las prote nas PROCED
20. njas tamponadas no deben tocar el gel NO FORZAR LOS SOPORTES HACIA ABAJO 8 Extraer el los aplicador es de la c mara h meda Asirlo s por el pl stico protector Romper el pl stico protector precortado del peine Con 7 y 15 muestras colocar el aplicador en la posici n No 6 del soporte Con 30 muestras colocar los dos aplicadores en las posiciones No 3 y 9 IMPORTANTE Los n meros impresos en el los aplicador es deben quedar de cara al usuario Fig 4 Cerrar la puerta del m dulo de migraci n 10 Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla START flecha verde en el lado izquierdo del teclado IMPORTANTE Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no est bloqueada 40 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Los dos soportes descienden con lo cual esponjas tamponadas y aplicador es entran en contacto con la superficie del gel El soporte del aplicador se eleva La migraci n se realiza a una corriente constante de 10 W en el caso del HYDRAGEL 7 81 82 20 W en el caso de HYDRAGEL B1 B2 15 30 a una temperatura controlada por efecto Peltier de 20 C con un acumulado de 36 Vh para 7 minutos El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos La temperatura de la Superficie de Control de Temperatura se eleva a 65 C durante 10 minutos para el secado de el gel La Superficie de Control d
21. nte la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 um y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema HYDRASYS SEBIA HYDRASYS 2 SCAN PN 1200 HYDRASYS 2 PN 1201 HYDRASYS 2 SCAN FOCUSING PN 1202 HYDRASYS 2 FOCUSING PN 1203 HYDRASYS PN 1210 o PN 1211 o HYDRASYS FOCUSING PN 1212 2 Micropipeteador manual o automatico como el HYDRAPLUS SEBIA PN 1216 HYDRAPLUS 2 SEBIA PN 1217 o ASSIST SEBIA PN 1218 para cargar los aplicadores de muestra de una forma alternativa C mara h meda PN 1270 suministrada con el HYDRASYS Kit de Contenedores suministrado con el HYDRASYS Pipetas 10 pl y 200 ul Densit metro esc ner capaz de leer geles de 82 x 51 mm 82 x 102 mm HYRYS SEBIA GELSCAN SEBIA DVSE SEBIA o esc ner equipado con el programa PHORESIS SEBIA Consultar las instrucciones de cada aparato para obtener los procedimientos de utilizaci n y calibraci n 7 Soporte del Gel para medios geles SEBIA PN 1278 DAIRY MUESTRAS PARA ANALISIS Extracci n y almacenamiento de las muestras Se recomienda analizar muestras frescas El suero y la
22. p 54 58 Peltre G lectrophor se les trois principes de base Technique et Biologie 1990 1 p 16 23 Sicard D Du bon usage de l lectrophor se des prot ines Le Concours M dical 05 05 90 1990 112 16 p 1513 1515 Van Den Abelle lectrophor se des prot ines s riques Int r t limites apport du profil prot ique Larc Medical 1987 n 7 Vol VI p 348 351 Wicher J T Spence C E Serum protein electrophoresis An out moded test Ann Clin Biochem 1987 24 p 133 139 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat Septembre 1986 166 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 SCH MAS FIGURES Figure 2 Figure 4 Figure 1 Figure 3 Figure 5 HYDRASYS 167 HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 SCH MAS FIGURES HYDRASYS 2 168
23. p n pH 8 5 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio de tamp n de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos 37 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol HYDRAGEL 7 15 amp 30 B1 B2 2012 03 Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora NO LAS CONGELE Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa est abierta o si las esponjas est n secas 3 DILUYENTE DEL COLORANTE Preparaci n El diluyente del colorante concentrado debe ser usado como se indica en el p rrafo COLORANTE NEGRO AMIDO Contiene una soluci n cida pH 2 Uso Para la preparaci n del colorante negro amido Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El diluyente del colorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en la nevera Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente NO LO CONGELE No le a ada azida s dica 4 COLORANTE NEGRO AMIDO Preparaci n El colorante negro amido concentrado es una soluci n viscosa que puede gelificarse lo que no afecta
24. s reactivos consultar la informaci n mostrada en la pantalla del instrumento seleccionar la tecla VER CANALES IMPORTANTE No olvidar bloquear los canales no utilizados DARAN 8 Seleccionar el programa de tinci n PROTEIN E B1 B2 en el men del instrumento e iniciar el ciclo presionando la tecla START flecha verde de la parte derecha del teclado Durante todas las secuencias de coloraci n decoloraci n y secado el sistema permanece bloqueado Despu s del enfriamiento de la cubeta una se al sonora bip suena y el sistema se desbloquea la ventilaci n se mantiene hasta la recuperaci n del porta films III FINALIZACI N DEL PROCESADO DEL GEL 1 Extraer el Soporte del Gel de su compartimento abrirlo y extraer el gel seco NOTA Si se observan manchas azules residuales en los geles despu s de la coloraci n decoloraci n una etapa de lavado suplementario con el programa LAV ISOENZ GEL LAVADO ISOENZ GEL permite eliminarlas o atenuarlas seg n su intensidad antes de su lectura en densit metro o esc ner 2 Sies necesario limpiar la superficie trasera la cara del soporte pl stico del gel seco con un pa o suave humedecido 3 Lea el gel con un densit metro esc ner seleccionando el programa de lectura apropiado NOTA En los geles con varias filas de muestras 2 6 3 las longitudes de migraci n pueden ser ligeramente diferentes sin ninguna repercusi n en los resultados RESULTADOS Control de cali
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